线粒体詹姆斯绿染色

线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60

JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究

Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。密封干燥保存。S24/25

小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察

1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。

2. 实验用品：

（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双

（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠 3. 实验原理：

（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。这种染色方法常用的是化学染料。

目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。

应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。

（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。

（3）选择活体染料的原则：① 性质：有电化学特性② 低毒、无毒③ 低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④ 专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤ 常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。4. 实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。

（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。

（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。

（4）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。10*40显微镜下

6. 分析与讨论

（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色

（2）注意事项① 取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比分剪碎组织制成悬液。

（3）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。10*40显微镜下观察：6. 分析与讨论

GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。技术背景

线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。

詹纳斯绿B（Janus green B），是一种毒性较小的碱性染料。它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。产品内容

GENMED保存液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）毫升GENMED清理液（Reagent C）毫升保存方式

保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，避免光照；有效保证6月用户自备

毫升离心管：用于线粒体染色的容器

光学显微镜：用于线粒体染色观察分析

实验步骤

实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置于冰槽里融化，并放在暗室里。然后进行下列操作。

一、纯化线粒体染色

1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）。

2．加入等量微升的GENMED染色液（Reagent B），轻柔混匀。

3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟。4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片。

5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）。

6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。

二、活体细胞染色

1．将待测细胞（X 细胞）移入到1.5毫升离心管

2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）3．小心抽去上清液

4．加入微升GENMED清理液（Reagent C）或GENMED保存液（Reagent A）5．加入微升GENMED染色液（Reagent B），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片

8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体。

9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。

注意事项

1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行

3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套

5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照

7．本公司提供系列线粒体试剂产品

兔肝细胞线粒体的活体染色

（一）原理

线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

（二）方法

用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

(三)结果

显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

线粒体的光镜切片观察

用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

线粒体的电镜照片观察

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。

这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长轴垂

直排列，肾小管上皮细胞重吸收作用需要能量，线粒体数目多。第二张是恒河猴脊髓突触内线粒体。可见线粒体体积小、数目多，脊与线粒体呈同心圆排列。第三张是小鼠睾丸间质细胞线粒体，线粒体的脊为分支的管，在照片上呈单层膜泡状。

詹钠斯绿B(Janu\'s green B)酒精饱和溶液

取125毫升詹钠斯绿B，加入到62.5毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。

(2)取詹钠斯绿酒精饱和液，按1：10000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项 货号：G2540 规格：100ml 有效期：12个月有效 产品简介： 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。 番红0软骨染色的原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。 自备材料： 10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、Weigert铁苏木素、系列乙醇等。 操作步骤（仅供参考）： 1.标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2.常规脱蜡至水。 3.入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min。 4.酸性乙醇分化液分化15s。 5.蒸馏水洗10min。 6.（可选）在固绿染色液内浸染5min，蒸馏水洗1min。 7.入Safranin O stain内浸染1-2min，蒸馏水洗1min。 8.分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

9.二甲苯透明，光学树脂封固。 染色结果： 软骨基质深红色 软骨细胞核蓝色 软骨细胞浆红色 细胞核灰黑色 注意事项： 1.需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2.Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3.切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4.Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 5.95%乙醇脱水时间不宜过长。 6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

刚果红染色PDCA

病理技术组特殊染色PDCA 循环 问题描述： 2018年4月诊断医师反应科室刚果红染色效果不佳影响疾病诊断，主要表现在淀粉样着色和纤维组织的着色不易区别，质控小组统计了上半年连续四个月特染结果数据（表一及图一 ），1-3月特染切片优良率统计均符合三级甲等医院要求（优秀率≥90%；优良率≥98%），而4月份统计数据显示该月特染质量明显下降且低于规范要求（优秀率84%；优良率90%），已经严重影响病理诊断的及时性和准确性。 表一 图一 75 80 85 90 95 100 一月 二月 三月 四月 优秀率 优良率

原因分析： 对2018年4月所有特染切片染色项目构成和评分结果为乙、丙、丁的染色项目进行统计，数据显示影响特染优良率的主要因素是刚果红染色和MASSON 染色（表二，图二），其中又主要是刚果红染色结果对优良率影响最大（表三，图三），因此最快时间内使优良率达到相关规范要求，可通过改进刚果红染色来实现。 表二. 图二 表三 图三 质控小组组织阅片医师及病理技师集体讨论和分析刚果红染色不合格的可能原因： 1.试剂原因：科室刚果红染色为手工染色法，所有试剂均为手工配制，由于标本量较小，染液用量不大且周期较长，很可能是刚果红染液近效期或过期导致试剂失效； 2.人员原因：该岗位人员是否依据SOP 操作；责任心；实践及理论培训是否合格； 3.方法学：本科室刚果红染色项目开展时间不长（2年），目前的方法学选择在当时并未经过严密的论证，且因为标本量很少，在阅片和染色两方面均没有积累太多经验，所以

不排除方法学本身的不足导致染色失败。 图四 预期改进目标： 制定改进计划措施并实施，在本年度5月底使特殊染色优良率≥98%，优秀率≥90。改进计划（PLAN）： 专业组全体人员就解决方案进行分析和讨论，针对不同的原因给出针对性的解决方案并明确责任人和实施时间表： 1.制度和规范因素排查：5月3-4日，实验室主任和专业组长一起核查刚果红染色所涉及的方法学及仪器设备SOP的书写和操作步骤规定是否存在错误和不当，如有不当和错误则进行全员讨论并进行更正（XX、XX、XX）。 2.试剂因素排查：5月3-11日由XX、XX、XX通过查阅试剂配制记录表及现场查看对刚果红染色所涉及的试剂有效期进行确认； 3.环境及仪器因素排查：5月7-9日，XX、XX、XX通过查阅室内温湿度记录表排除环境因素；对试剂配制中用到的玻璃器皿，试管等按规范进行彻底清洗。 4.人员因素排查：5月14-18日由XX替代当班特染操作者XX进行刚果红染色；如结果无变化则重新更换所有液体两人同时对标本进行染色。 5.方法学因素排查：如以上各因素均排查完毕但染色结果无改进则应该考虑方法学本身的问题，5月14-18日，XX、XX、XX分别通过查阅电子文献、纸质版文献书籍及同行求教等方式确定新的刚果红染色方法并进行方法学验证。 计划实施(DO)： 1.人员因素：XX代替XX对标本进行刚果红染色，染色结果与之前相比没有改进，因

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告

【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3.材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。

活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到 重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。 另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。 【实验步骤】 一、大体流程 剪下合适大小的肝组织小块洗净 用詹纳斯绿B 染色20-30min 取着色部分加 Ringer 溶液制成悬 液 制片，高倍镜观察 断头法处死小 白鼠取肝组织

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 实验报告

姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验题目】 小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3. 材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。

姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。 活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线

线粒体的活体染色

实验四线粒体的活体染色 实验目的： 1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。 2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。 3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 实验原理： 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 实验用品： 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。 三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。 实验内容和方法： 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）方法 1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。 2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。 3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。染色期间翻动组织块几次，使其各表面均有机会接触空气和染液。 4. 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，去除大组织块，就会

番红固绿切片染色快速法不使用石蜡

番红固绿染色简化法 ----------仅限观察植物苗期主根部导管1目的要求： 由于专业的番红固绿需要使用超薄切片机，其功能繁琐，并十分耗时，其主要包括染色，包埋，切片，脱蜡，复染等多个步骤，这里不再赘述。若没有切片机，我们往往要四处奔走求人并支付高昂的费用。经本人亲自实验和总结，采用传统常规染色法，在不使用切片机和钞票的条件下，整理如下流程。若只作为一般实验的验证，样品的容量不大并不需要长期保存的情况下，不需要超薄切片机，只需使用双层刮胡刀片，显微镜可以观察1毫米左右的切片。直径最好大于1mm，肉眼可分辨，一般只用于观察主根。为切片方便，可稍微将根晾干，再进行横切或纵切。 根据对刊用插图(照片)总的要求得出，文稿插图(含照片)的应用以少而精为原则。凡是能用文字说明的,应尽量不用插图,能用线条图表示的,就不用照片图;能用单色图表示的,就不用彩色图。即使是线条图也尽量避免搞成大幅的插页图,以便于编排和印刷。插图的线条必须准确,主次分明,清晰可辨,便于读者理解文字的内容。若切片够均匀，线条够清晰，也可作为论文插图。 2实验步骤： 2.1实验准备： 2.2材料：目的植物新鲜根部，刮胡刀刀片两片，越锋利越好，但注意安全。常规染色用品。 2.3试剂：无水酒精，95%酒精，蒸馏水，预先备制的苯胺番红试剂和苯胺固绿试剂（最好放置一段时间，可提前一月配置，效果更好，但不必要），二甲苯和50%体积无水乙醇和50%体积二甲苯混合液。 3实验步骤： 3.1切片： 按照前文介绍方法切片，若视力好，手法稳，可用单个刀片细细切下，要求，横切厚度在1mm左右，并呈透明圆形，确保中心完好。 3.2染色： 1）滴1-2滴无水酒精； 2）吸去无水酒精用95%酒精冲洗，使其平铺于玻片，酒精分散均匀； 3）第1滴蒸馏水与材料上，是材料包裹于水滴中； 4）滴1-2滴苯胺番红试剂，染色1-3min； 5）使用95%酒精冲去浮色并脱水，处理至透明状态，韧皮部分由于富集细胞壁，颜色可以偏红，其余部分为粉色透明状； 6）少量（一小滴）苯胺固绿复染，并迅速吸去，并滴入无水酒精，操作在2s内完成； 7）继续用无水乙醇洗脱至半透明状，以为无集中色斑为佳； 8）各50%体积的无水酒精和二甲苯混合物，1-2滴； 9）滴1-2滴二甲苯透明； 10）擦去材料以外药剂，使玻片清洁，可不使用盖玻片，一定不能使材料山的二甲苯干掉； 11）镜检。

高中生物 线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一 ...

线粒体(Mitochondrion)的活体染色 及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 【实验用品】 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。 三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。 【实验内容】 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）原理 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 （二）方法 用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。 将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 (三)结果 显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。 二、线粒体的光镜切片观察 用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 三．线粒体的电镜照片观察 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长

染色方法总结

mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

液泡系和线粒体的活体染色

实验三 1实验目的与原理 1.1实验目的： 观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；掌握一些细胞活体染色的原理和技术。 1.2实验原理： 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 2实验材料与方法 2.1实验材料： 洋葱鳞茎内表皮 2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色： 撕取洋葱鳞茎内表皮→中性红溶液染色5~10min→吸去染液，滴加Ringer液→盖上载玻片，显微镜观察。 2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：

撕取洋葱鳞茎内表皮→詹纳斯绿B溶液染色10min→吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。 3实验结果 图1中性红染色洋葱内表皮细胞图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮(X100) (X100) 在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边 图2是经詹纳斯绿B染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。

植物制片的染色及显微化学鉴定方法

植物制片的染色及显微化学鉴定方法 一、目的与要求 1、学习植物制片的一般染色方法。 2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。 二、材料和用品 1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。 2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。 三、实验内容 1、植物制片的染色方法 2、常用显微化学鉴定法 四、实验方法 1、植物制片的染色方法 用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二： 方法一： （1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。 （2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。 （3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。 （4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。 （5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。 注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。 （6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。 （7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。 （8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。 染色结果：木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现蓝色或淡绿色。 方法二： （1）将切得的薄片移入盛有FAA固定液的小容器中，盖上盖固定半小时到1小时，24小时以上也可。材料经固定如不及时制片可移入70%酒精中长期保存。 （2）材料从固定液中移入盛有蒸馏水的小培养皿中，漂洗半小时到1小时，换水一次。 （3）将材料移入载玻片上，用吸水纸吸去多余水分，加一滴苯胺番红染色约10分钟。 （4）吸去染液，滴入95%酒精洗两次，去浮色及脱水。 （5）加一滴苯胺固绿复染约2～5秒钟，并轻轻晃动玻片，使染色均匀。（注意：此步骤要迅速，若染色时间过长会使红色全部褪去。） （6）吸去染液，滴入无水酒精洗两次，去浮色及脱水。 （7）滴入等量无水酒精与二甲苯溶液约1分钟后吸去，再滴入纯二甲苯冲洗2次，使材料透明。 （8）擦去材料以外的残存药剂，使玻片清洁，但不使材料上的二甲苯干掉，并及时镜检。 （9）镜检后，如材料的构造清晰，红绿对比鲜明，立即加一滴中性树胶封片。 染色结果同样是木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现淡绿色。这种方法更节省时间一些。 2、常用显微化学鉴定法 显微化学鉴定法即将材料经化学试剂处理后，在显微镜下检查、判定细胞壁的化学组成及细胞内含物性质的方

改良番红O-固绿软骨染色液说明书

改良番红O-固绿软骨染色液说明书 货号：G1371 规格：5×50ml/5×100ml 有效期：6个月有效 产品简介： 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。 改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 产品组成： 名称规格5×50ml5×100ml Storage 试剂(A)A1:Weigert A液25ml50ml RT避光 A2:Weigert B液25ml50ml RT避光临用时，取A1、A2等量混合为Weigert染液，24h后失去染色力，不宜预先配制。 试剂(B):酸性分化液50ml100ml RT 试剂(C):固绿染色液50ml100ml RT避光 试剂(D):Safranin O stain50ml100ml RT避光 试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT 自备材料： 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。 第1页，共2页

线粒体詹姆斯绿染色

线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60 JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究 Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。密封干燥保存。S24/25 小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双

改良番红O-固绿软骨染色液

改良番红O-固绿软骨染色液 简介： 软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。 组成： 编号名称DB0082 5×50ml DB0082 5×100ml Storage 试剂(A) A1: Weigert A液25ml 50ml RT 避光A2: Weigert B液25ml 50ml RT 试剂(B): 酸性乙醇分化液50ml 100ml RT 试剂(C): 固绿染色液50ml 100ml RT 避光试剂(D): Safranin O stain 50ml 100ml RT 避光试剂(E): 乙酸溶液50ml 100ml RT 使用说明书1份 操作步骤(仅供参考)： 1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、常规脱蜡至水。 3、入新鲜配制的Weigert染液染色。 4、酸性乙醇分化液分化。 5、蒸馏水洗1min。 6、在固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。 7、入Safranin O stain内浸染色，蒸馏水洗1min。 8、用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。 染色结果： 软骨基质深红色 软骨细胞核蓝色

细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色 注意事项： 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h后失去染色力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 有效期：6个月有效。

淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法)

淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法) 简介： 淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。 Leagene 淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。该染色法性能稳定，是非常经典的淀粉样物质染色的方法。 组成： 自备材料： 1、10%中性福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、常规固定，常采用中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度，常规脱蜡至水。 3、入Bennhold 苏木素，浸染。 4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗后镜下控制至恰当程度。 编号 名称 DG0021 5×50ml Storage 试剂(A): Bennhold 苏木素染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT 试剂(C): Scott 蓝化液 50ml RT 试剂(D): 刚果红染色液 50ml RT 避光 使用说明书 1份

实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察

实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察 学时数：3 一、实验目的和要求: 1.观察动、植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布。 2.学习一些细胞器的超活染色技术。 二、实验原理 超活染色又称体外染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 詹娜斯绿B是一种弱碱性染料，可以被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化成蓝绿色，而细胞的其他部位因为不含有细胞色素氧化酶，无法将詹纳斯绿B氧化，呈现无色。 中性红是一种毒性最低的活体染色剂，是液泡系的专一染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。（在pH发生变化的条件下，中性红还具有转变颜色的特性：pH7.0~7.2 红色；pH7.2~7.6 橙色；pH7.6~8.0 黄色。PH不同表明液泡中酶原颗粒的成熟度的不同，完全成熟的酶原颗粒为乳白色，不再为中性红着色）。 三、实验材料：小麦根尖 四、实验步骤 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 1.取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。 2.实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色30min（注意不可使染液干燥，必要时可加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 3.在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 1.用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，

改良番红 O-固绿软骨染色液

第1页，共2页 改良番红G1371 5×50ml/5×100ml 6个月有效 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O 法等。 改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O 结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O 是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O 着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O 淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O 染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。 1、 标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、 常规脱蜡至水。 3、 入新鲜配制的Weigert 染液染色3-5min ，水洗。 4、 酸性分化液分化15s 。 5、 蒸馏水洗10min 。

6、在固绿染色液内浸染5min。 7、快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿。 8、入Safranin O stain内浸染5min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。 5、 Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 6、95%乙醇脱水时间不宜过长。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 第2页，共2页

新版线粒体染色实验报告詹纳斯绿B课件.doc

细胞生物学实验报告 小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿 B 给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴 管、双凹载玻片 （2）实验药品：蒸馏水、Ringer 液、詹纳斯绿 B 染液 （3）实验材料：小鼠 3. 实验原理： （1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。这种染色方法常用的是化学染料。 目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化 学变化以致细胞的死亡。 应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。 （2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料 被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内 某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离 子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论 上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一 般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质( 如卵磷脂、 胆固醇等) 的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B) 和中性红(neutral red) 两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别 具有专一性。 （3）选择活体染料的原则： ①性质：有电化学特性 ②低毒、无毒 ③低浓度：如实验中使用的是1/5000 的詹纳斯绿 B 染液 ④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色 ⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。 4. 实验步骤： （1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄 2 的肝组织0.5cm 放入小烧杯中，用Ringer 液冲洗去血污。 （2）滴加1/5000 的詹纳斯绿 B 染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。 （3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer 液约0.5mL，用剪刀充

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)

结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则

1.2. Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表B 1.2 Mssson三色法 图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌

1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图表D 4.Weigert间苯二酚法

二、胶原纤维染色法 2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。

2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他

3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维 红色：胞核（核固红复染） 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 3.2 Gomori氏银氨液配制法 图表G Gomori氏银氨液配制法

实验一 线粒体的超活染色

实验一线粒体的活体染色与观察 一、实验目的 1．观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2．学习一些细胞器的活体染色技术。 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。 詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。 三、实验仪器、材料和试剂 1．仪器：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、