肝细胞氧化应激的实验研究

肝细胞氧化应激的实验研究

叶煦亭沙继宏杨勇骥胡以平

（上海第二军医大学细胞生物学教研室，上海!""#$$）

肝细胞损伤是临床常见现象，其损伤机理的研究具有重要意义。氧化应激是肝细胞损伤的可能机制之一。缺血再灌注、药物代谢、金属中毒等使体内促氧化剂：过氧化氢（%!&!）、超氧阴离

子（&?!）

、羟自由基（&%?）等自由基的大量形成，使机体氧化与抗氧化系统失去平衡，引发肝细胞氧化应激，导致蛋白、脂质的过氧化，使肝细胞膜通透性、流动性降低，脆性增加，以及影响线粒体、内质网等的钙调节功能、减弱’(!)—*+,酶、钙通道的活性，造成肝细胞钙超载，激活’(!)依

赖蛋白酶、活化磷脂酶及核酸内切酶，降解骨架蛋白等［-.$］。我们应用镉离子（’/）诱导过氧化氢

的大量产生［#］，复制肝细胞氧化应激模型并应用细胞化学的方法进行%!&!、’(!)的亚细胞定位，

研究氧化应激时肝细胞损伤及钙离子分布的特点。

材料与方法

选用!"".!0"12345(6大鼠7只分实验组及对照组。腹腔注射氯化镉"8!9:（-"91;<1）生理盐水稀释，="93>及?"93>后，分别进行%!&!、’(!)细胞化学反应。-）%!&!的定位：心脏插管，生理盐水灌注!93>，冲净血液后，灌注铈（’@）生理溶液-99A:;B 093>C 随后!D 多聚甲醛E "8-D 戊二醛灌注固定093>。!）’(!)的定位：!80D 戊二醛E ?"99A:;B 磷酸钾浸泡固定#F （#G ）。

?"99A:;B 磷酸钾漂洗，-D 锇酸E !D 焦锑酸钾后固定!F 。上述标本经电镜制样，

超薄切片，铅、铀染色，日立%7""型电镜观察。

结果

实验组肝细胞均不同程度观察到%!&!—’@反应沉淀物沿肝细胞接触面分布，线粒体肿胀，内质网扩张（图-）。血窦内皮细胞及肝细胞血窦面%!&!—’@沉淀物明显（图!）。肝细胞质膜表面有大小膜泡形成。肝细胞核、胞浆内钙离子细胞化学反应为强阳性。线粒体、内质网周围可见大量钙离子阳性复合物定位（图$）。正常对照组未见%!&!—’@反应沉淀物，钙离子细胞化学阳性率较实验组弱。

讨论

目前认为肝细胞损伤可能的机制：-）细胞膜泡的形成，早期为可逆阶段后期膜泡破裂细胞屏障丧失，导致肝细胞坏死。!）氧化应激损伤，蛋白、脂质过氧化导致膜通透性、流动性丧失等，影响’(!)E *+,酶活性及细胞内钙稳态的调节，造成肝细胞钙超载，激活’(!)依赖蛋白酶，活化磷脂酶及核酸内切酶等，损伤膜磷脂和HI*。$）线粒体功能异常和*+,耗竭导致不可逆细胞损伤和死亡过程等。#）线粒体功能异常和*+,耗竭导致不可逆性细胞损伤和死亡过程。实验结果提示：氧化应激可导致肝细胞大小膜泡的形成，以及’(!)超载、分布的异常，造成肝细胞的损伤。

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