柱前衍生化高效液相色谱法测定百合中的氨基酸含量

第31章 氨基酸及其重要衍生物的转化

第31章氨基酸及其重要衍生物的转化 一、判断题 （）1. 芳香族氨基酸都是通过莽草酸途径合成的。 （）2．丝氨酸能用乙醛酸为原料来合成。 （）3．限制性内切酶的催化活性比非限制性内切酶的催化活性低。 （）4．莽草酸途径是所有生物所共有的氨基酸代谢方式。 （）5．肝细胞浆中的氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ是合成尿素的关键酶。 （）6．嘧啶核苷酸的合成伴随着脱氢和脱羧反应。 （）7．脱氧核糖核苷酸的合成是在核糖核苷三磷酸水平上完成的。 （）8. 合成芳香氨基酸的前体物质是糖酵解和三羧酸循环的中间产物。 （）9. Ser和Thr的分解代谢有相似的地方，他们脱氨后都产生酮酸，都是生糖氨基酸。 （）10. 微生物对Phe和Tyr的分解代谢作用，与动物对这两种氨基酸的分解作用完全相同。 二、选择题 1．转氨酶的辅酶是： A．NAD+ B．NADP+ C．FAD D．磷酸吡哆醛 2．下列哪种酶对有多肽链中赖氨酸和精氨酸的羧基参与形成的肽键有专一性：A．羧肽酶B．胰蛋白酶 C．胃蛋白酶D．胰凝乳蛋白酶 3．参与尿素循环的氨基酸是： A．组氨酸B．鸟氨酸C．蛋氨酸D．赖氨酸 4．γ-氨基丁酸由哪种氨基酸脱羧而来: A．Gln B．His C．Glu D．Phe 5．经脱羧后能生成吲哚乙酸的氨基酸是： A．Glu B．His C．Tyr D．Trp 6．L-谷氨酸脱氢酶的辅酶含有哪种维生素： A．VB1 B．VB2 C．VB3 D．VB5 7．磷脂合成中甲基的直接供体是： A．半胱氨酸B．S-腺苷蛋氨酸C．蛋氨酸D．胆碱 8．在尿素循环中，尿素由下列哪种物质产生： A．鸟氨酸B．精氨酸C．瓜氨酸D．半胱氨酸 9．需要硫酸还原作用合成的氨基酸是： A．Cys B．Leu C．Pro D．Val 10．下列哪种氨基酸是其前体参入多肽后生成的： A．脯氨酸B．羟脯氨酸C．天冬氨酸D．异亮氨酸 11．组氨酸经过下列哪种作用生成组胺的： A．还原作用B．羟化作用 C．转氨基作用D．脱羧基作用 12．氨基酸脱下的氨基通常以哪种化合物的形式暂存和运输： A．尿素B．氨甲酰磷酸C．谷氨酰胺D．天冬酰胺 13．丙氨酸族氨基酸不包括下列哪种氨基酸： A．Ala B．Cys C．Val D．Leu

高效液相色谱习题和答案解析

高效液相色谱法习题 一、思考题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理 14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？ 18．试述CZE的基本原理 19．试述CGE的基本原理 20．试述MECC的基本原理 二、选择题 1．液相色谱适宜的分析对象是（）。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相钻度较小 D 柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL －1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（）。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（）。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（）最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）。 A 异构体 B 沸点相近，官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样 10．在高效液相色谱中，采用254 nm紫外控制器，下述溶剂的使用极限为（）。 A 甲醇210 nm B 乙酸乙醋260 nm C 丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用（）。 A 液一液色谱法 B 液一固色谱法 C 键合相色谱法 D 离子交换法 12．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为（）。

9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)

9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生 法） 2013-09-05 方法： HPLC 基质： 标准溶液 应用编号： 103087 化合物： Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘 氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙 氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋 氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸) Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖 氨酸) 固定相： Endeavorsil C18 色谱柱/前处理小柱： Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm 样品前处理： 1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准 品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标 浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨 基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量 取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰 酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙 腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三 乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得 到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量 取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准 溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于 1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙 胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈 溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μ l，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μ

柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立_徐瑾

柱前衍生化高效液相色谱等 度洗脱分析单糖的方法建立 徐瑾1 常州工程职业技术学院 摘要以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为柱前衍生化试剂,建立了高效液相色谱等度洗脱分离分析5种单糖的方法。采用简化的衍生化方法,在流动相:乙腈-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,p H=5.5,V/V=22B78)的色谱分离条件下,5种单糖衍生物可以达到基线分离,检测限分别为0.54~0.90ng,也对方法的线性范围、精密度、稳定性进行了系统的考察。关键词单糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化高效液相色谱等度洗脱 1.前言 近年来,糖类物质在生物学领域的作用已越来越被重视,人们将研究的重点放在糖类物质的定量、定性以及结构分析上,并对此做了大量的研究。因为糖的种类较多,且结构近似,所以无论对哪种糖进行分析,首先必须将分析的对象与其它糖分离开来。另一方面糖类物质几乎没有光学活性,对分离后的物质进行直接光学检测比较困难,结合灵敏度、选择性等方面的问题,人们多采用通过化学标记将糖类物质转变为具有光学活性的物质,然后再进行分离分析的方法。衍生方法与高效液相色谱(HPLC)结合使用不但能提高检测的灵敏度,而且可以改善分离特性。迄今为止,文献报道的用于糖类物质衍生的紫外衍生试剂种类很多[1-3],它们都各有优缺点。近年来出现的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)是一种具有强紫外吸收的衍生试剂,Honda等[4]发现该试剂可以与还原性的糖在温和条件下反应,无需酸催化,不会引起脱甲硅基的作用,产物无立体异构体,在紫外245nm处有强烈的吸收。该方法自应用以来,已得到了不断的完善[3-6]。马定远等[7]在前人的基础上简化了其衍生化方法,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立的方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。鉴于该物质的这些优点,本文采用它对单糖进行柱前衍生,结合HPLC技术,建立了5种常见单糖的等度洗脱分离模式,通过外标法对这5种单糖进行了定量研究。 2.实验部分 2.1仪器 UV200ò紫外可变波长检测器;P200ò高压恒流泵;Echrom98工作站(大连依利特科学仪器有限公司);真空过滤器(天津市腾达过滤器件厂);H19321pH计(HANNA);DZF-150型数显小型恒温真空干燥箱(郑州长城科工贸有限公司) 2.2试剂 乙腈、甲醇(色谱纯);三氯甲烷、乙酸铵、氢氧化钠(分析纯);PMP(99%,AC ROS);D-半乳糖、D-木糖、鼠李糖(生化试剂);葡萄糖、D -甘露糖(分析纯) 2.3单糖-PMP衍生产物的制备 以葡萄糖(Glucose)为例,将1mol的Glucose 溶于1.5mL的Na OH溶液(0.3mol/L)中,取该溶液150L L与100L L的PMP/甲醇溶液(0. 2006年第2期总第四十八期 常州工程职业技术学院学报 J OUR NAL OF CHANGZ HOU INSTI TUTE OF ENGINEERING TECHNO LOGY Vol.22006 Jun No148 1作者简介:徐瑾,硕士。

高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量

河北医科大学学报 JOURNAL OF HEBEI MEDICAL UNIVERSITY 1999年第20卷第4期Vol 20No.41999 高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量 颜京霞　宋秀君　卞小芸　勾凌燕　王仁杰　张亚超 摘　要　目的　探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法　采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm。Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果　该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %～96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %。结论　高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。 主题词　牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠 中图号　R493.2;R776.1 DETERMINATION OF TAURINE CONTENT BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Yan Jingxia　Song Xiujun　Bian Xiaoyun Department of Ophthalmology,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051) Gou Lingyan　Wang Renjie　Zhang Yachao Shijiazhuang Medical College of PLA ABSTRACT　Objective　To explore the method for determination of taurine in plasma, aqueous and lenses of rate by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods　Two mobile phase were used:0.05 mol/L sodium acetate buffer (pH=6.5)-methanolfourhydrofuran(80∶20∶0.8) and 0.05 mol/L sodium citrate butter (pH=6.5)-methanol(20∶80);the analytical column was Φ4.6 nm×150 mm necleos ODS.The Wistar rat's plasma,aqueous and lenses samples were determined after derivation.Results　Using this method,the minimum detected limit was 10 μm/ml;the mean related coefficient between concentration of amino acids and reaction valus was 0.998±0.002;the rate of recovery were 97.07 %～96.79 %;the coefficient of variation of taurine's peak area was 10.75 % when the analysed sample was 3 μl and was 3.12 % when the analysed sample was

HPLC柱前衍生和柱后衍生

HPLC柱前衍生和柱后衍生 1、为什么要衍生？ 衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。 2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。 3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。 4、衍生化要求？ 1）衍生剂必须过量且稳定；不过量反应不完全，检测不充分。不稳定，重现性差。 2）衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。当然如果只能检测到衍生产物最好。3）衍生反快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。 5、两种衍生比较 柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。 柱后衍生优点是，重现性好，认为因素少，引入物质比较少。缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。 仪器管路的清洗 Agilent的液相，反相柱，想用异丙醇清洗下系统.用纯异丙醇,流速一般在0.2~0.4ml/min 先用甲醇-水，甲醇洗，再用异丙醇洗，流速低一点，根据你的压力决定，不要超过平时使用压力就可以了,洗完了，再用甲醇洗 把流通池拿掉，看基线，基本可以确定，问题在哪个方向，如果基线稳定，那就是流通池或者流动相或者泵什么的问题了.再有，检测器光路透镜老化什么的也会有这个情况，光电倍增管是否老化等 基线走不平一般是1.流动相脏，2.灯能量不够（流通池），3.系统有气泡，4.泵压力不稳。5.系统有杂质等。 10%异丙醇作用 冲洗泵头的，防止含盐流动相中的盐分结晶损毁宝石杆 开机就要用，控制一定的流速，不能太快也不能太慢 带缓冲盐的流动相一定要用,每分钟2-3滴的速度，虹吸，保持泵的宝石杆湿润，起保护作用的 安捷伦1200，灯使用时间大概半年，今晚把紫外灯关闭后冲洗柱子，两小时候开灯老显示紫外灯打开失败。怎么回事啊？ 1.如果只是关2小时的话实际上就是浪费灯能量了 关一次一般就是8小时的能量损失

高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.wendangku.net/doc/8412894768.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂 (Carbamate Pesticide)方面的分析分析 1． 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱 Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。 杀虫剂分析的柱后条件： 衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130 衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测： 荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm 氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ） , C18, 5um

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.wendangku.net/doc/8412894768.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ） 8. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ） , C18, 5um 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ）

高效液相色谱仪LC2000-技术标书(全检测器+自动进样器+柱后衍生)

液相色谱仪 技术标书 1. 总则： 1.1 提供相应货物的技术规格文件，在应答的品目标题下，表明货物的型号、商标名称及生产厂家。 1.2 货物的制造和检验，必须是按照现行的中国国家标准，或通用国际标准。 1.3 仪器设备如需特殊工作条件（如：水、电源、磁场强度、特殊温度、湿度、振动强度等），应在相关文件中加以说明。 1.4 所提供的货物的技术规格应与响应品目所要求相符。应根据产品的正式出版样本（原本）和说明书如实逐项填写技术规格响应表。 1.5 在价目表上应分别列出每台（套）设备的单价及每台（套）设备的配置清单，每个包的总价应是该包中各设备单价的总和，如在统计上有差错，则以单价为准，总价由买方更正。 2. 工作条件 除该品目在技术要求中另有说明外，所有仪器、设备和装置，均应适合以下条件： 能在电源电压220V（±10%），50Hz，5~35℃。 3．技术参数 3.1 输液泵 3.1.1 液体输送原理：双柱塞串联往复式，自动脉冲抑制系统； 3.1.2 流速范围：0.001mL/min～9.999mL/min； 3.1.3 最大输出压力：39MPa； 3.1.4 *流速准确度：±2μL/min(0.01～0.1mL/min); ±2%(0.101～8.01mL/min); ±4%(8.01～9.999mL/min)； 3.1.5 *流速精密度：SD＜0.02min 或RSD＜0.075%(流速为1.0mL/min时的保留时间)； 3.1.6 润湿部分材料：SUS 316,陶瓷，氟树脂。 3.2 梯度系统 3.2.1 混合液体数：4种液体；

3.2.2 *混合原理：用比例阀的开关时间编程进行梯度比例控制，流动相只在泵前合流，泵后直接混合； 3.2.3 *混合准确度：±1%； 3.2.4 *混合精密度：0.2%； 3.2.5 四元连续在线脱气（选配）。 3.3 紫外检测器 3.3.1 光源：进口氘灯； 3.3.2 光学系统：比例双光束，凹面光栅，1200线/mm； 3.3.3 波长范围：190～600nm； 3.3.4 波长精度：≤±2nm； 3.3.5 波长重复性：≤0.2nm； 3.3.6 光谱带宽：≤8nm； 3.3.7 *噪音水平：不超过±0.00001AU (254nm,流通池充满空气，时间常数2.0秒)； 3.3.8 *漂移水平：不超过0.00025AU/hr (254nm,室温恒定，稳定的工作状态)； 3.3.9 自动调零范围：－0.3～2 AU； 3.3.10 补偿范围：0～2AU,每步0.001ＡＵ； 3.3.11 响应时间：0.1 , 0.5 , 2.0 , 4.0 秒； 3.3.12 波长时间程序：有。 3.4柱温箱 3.4.1 操作简便； 3.4.2 控温精度：≤±0.1℃； 3.4.3 控温范围：室温+5℃～80℃。 3.5 Primaide自动进样器 3.5.1 *进样方法：全部体积直接进样方式（高压进样）； 3.5.2 *样品数：≥200个（标准1.5ml样品瓶）； 3.5.3 *扩展样品数： 4mL×128； 3.5.4 标准进样体积：0.1－50μL（100μL标准注射器）；

柱前衍生化_高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化

68 柱前衍生化—高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化 黄晓杰1，李京华2，王俊德2* 1.辽宁医学院 食品学院 （锦州 121001）； 2.大连化物所 （大连 116023） 摘要采用自行制备的反相高效液相色谱柱，以2，4-二硝基氟苯为衍生化试剂，色谱条件为：流动相醋酸钠缓冲溶液-乙腈（体积比875∶125），检测波长360 nm，外标法定量。得到最佳衍生条件为4.36 μmol牛磺酸和0.4% DNFB 0.1 mL，pH=7。对鲍鱼样品进行了测定，测得鲍鱼中牛磺酸含量1.12 g/100 g，此方法回收率与精密度试验结果较好。 关键词反相高效液相色谱法；柱前衍生化；2,4-二硝基氟苯；牛磺酸；鲍鱼 Precolumn Derivatization—Optimization on Determining Taurine by High Performance Liquid Chromatogramphy Huang Xiao-jie 1, Li Jing-hua 2，Wang Jun-de 2 1.Liaoning Medical university (jinzhou 121001； 2.Dalian Institute Of Chemical Physics (Dalian 116023) Abstract Taurine was determined by reverse phase high performance liquid chromatographic method. Derivatized with 2,4-dinitro-? uorobenzene, NaAc-Methanol(V:V=875:125) as mobile phase, with wavelength 360 nm. The external standard method was used. Get the best derivatized condition: 4.36 μmol taurine and 0.4% DNFB 0.1 mL, pH=7. This method was used for abalone, the content of taurine in abalone was 1.12 g/100 g. This method has better recovery and precision. Keywords reversed-phase high performance liquid chromatography ；pre-column derivatization ；2,4-dinitro-? uorobenzene ；taurine ；abalone 牛磺酸又称牛胆碱（taurine），化学名为2-氨基乙磺酸，是人体条件性必需氨基酸，以游离形式存在，不参与蛋白质代谢。常见的牛磺酸检测方法有氨基酸分析仪法和高效液相色谱法[1]。氨基酸分析仪法需要通过泵和反应器以保证洗脱液与柱后衍生试剂均匀混合，使仪器局限于一类分析。柱前衍生反相高效液相色谱法常用的衍生剂有OPA和DNFB等。OPA衍生法具有样品制备简单、衍生反应迅速等特点，但其衍生物不够稳定[2]；DNFB可以克服衍生物不稳定的缺点，但会产生衍生干扰物。 试验对高效液相色谱柱前DNFB衍生法的衍生条件进行优化，以克服衍生干扰物的影响，获得最优衍生条件。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 法国吉尔森GAD-LN007 型高效液相色谱仪、305型高压输液泵、Gilson715色谱软件、116型可编程序紫外吸收检测器。色谱柱：本实验室自行研制的KF-AA05型反相氨基酸专用分析柱，(4.6×250) mm。飞利浦搅拌机（型号HR 2860/60/A）。 牛磺酸标样：生化试剂，北京奥博星生物技术责任有限公司，纯度98%；衍生剂2,4-二硝基氟苯（DNFB）：德国Merck公司；离子对试剂N,N-二甲 基甲酰胺（N,N-DMF）：沈阳市联邦试剂厂，分析纯；乙腈为色谱纯(TEDIA)，鲍鱼样品为市售鲜样。1.2 色谱条件 流动相：30 mM NaAc缓冲溶液-乙腈(体积比85∶15)，含1%N,N-二甲基甲酰胺，pH=6.20。经0.45 μm滤膜过滤，超声脱气待用。流速1.0 mL/min；检测波长360 nm；进样量10 μL。1.3 溶液的配制 NaAc缓冲溶液：称取NaAc 2.46 g，加5 mL N,N-二甲基甲酰胺，重蒸馏水825 mL，乙腈175 mL，稀醋酸调pH至6.2。 标准溶液：称取牛磺酸标准品10.9 mg，置10 mL 量瓶中，加重蒸馏水至刻度，即得到1.09 mg/mL的标准溶液。 衍生缓冲溶液：配制不同p H 值的N a H C O 3和KH 2PO 4缓冲溶液（均为0.5 mol/L）。 衍生溶液：准确称取2,4-二硝基氟苯(0.2~1) g置于100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得到0.2%~1%浓度的衍生溶液。 平衡溶液：配制0.1 mol/L pH=7.0的KH 2PO 4缓冲溶液。 1.4 牛磺酸标准的衍生化 准确吸取标准溶液0.1 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 分析检测

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述

柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述 美瑞泰克有限公司中国代表处整理 柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述 以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离 氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法 优点：能同时检测一级二级氨基酸，检出现1pmole 缺点：pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC（异硫氰酸苯酯）法 缺点：PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化，柱子寿命降低，因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉，为此，仪器要附设衍生及真空干燥装置。（主要用在生物饲料及食品分析中应用） 1.3 OPA （邻苯二甲醛-巯基乙醇） 缺点：OPA只能与伯氨反应，使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解，致使OPA-氨基酸的稳定性很差，尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快，灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl（丹磺酰氯）法 优点：同时可以检测1，2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。 缺点：衍生物在紫外光下不稳定，特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感，收率很低，因此衍生反应必须避光进行，而且反应最好要在室温下进行40min左右，如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl（芴甲氧羟基氯）法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA（邻苯二甲醛-巯基乙醇）法 优点：程序化柱后衍生，OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质，又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测，消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素，该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin（茚三酮）法 优点：程序化衍生，衍生反应速度快（60S），衍生物稳定性好，衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。 缺点：衍生物只能用紫外检测器检测，使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定；衍生反应条件要求较高，需要附设加温衍生装置，仪器造价高；流动相与衍生液同时泵入体系，体系平和时间较长长。 综上所述：经过改进和完善的柱后衍生，离子交换色谱法，仪器已具备很高的自动化水平，被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测，消除了个样品由于衍生时间，衍生温度等因素的差异带来的测试误差，实践证明该方法是继稳定性分辨率，分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法，而衍生试剂不直接计入色谱柱，使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。 柱前——柱后衍生对照表 自动化程度衍生物的稳 定性柱子的损害前处理氨基 酸 分析的种类一次性设备 投入 柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大

氨基酸分类

氨基酸分类一、总表

20种氨基酸密码子表 二、分类 1. 根据氨基酸分子中所含氨基和羧基数目的不同，将氨基酸分为中性氨基酸、酸性氨基酸和碱性氨基酸： 2. 根据氨基酸的极性分类：

其中，属于芳香族氨基酸的是：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸 属于亚氨基酸的是：脯氨酸 含硫氨基酸包括：半胱氨酸、蛋氨酸 3. 按其亲水性、疏水性可分为： 4. 其它的分类方法 天然的氨基酸现已经发现的有300多种，其中人体所需的氨基酸约有22种，分非必需氨基酸和必需氨基酸（人体无法自身合成）。另有酸性、碱性、中性、杂环分类，是根据其化学性质分类的。 1、必需氨基酸（essential amino acid）：指人体（或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。共有8种其作用分别是： ①赖氨酸（Lysine ）：促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化； ②色氨酸（Tryptophane）：促进胃液及胰液的产生； ③苯丙氨酸（Phenylalanine）：参与消除肾及膀胱功能的损耗； ④蛋氨酸（又叫甲硫氨酸）（Methionine）；参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能； ⑤苏氨酸（Threonine）：有转变某些氨基酸达到平衡的功能； ⑥异亮氨酸（Isoleucine ）：参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺； ⑦亮氨酸（Leucine ）：作用平衡异亮氨酸； ⑧缬氨酸（Viline）：作用于黄体、乳腺及卵巢。 其理化特性大致有： 1）都是无色结晶。熔点约在230°C以上，大多没有确切的熔点，熔融时分解并放出CO2；都能溶于强酸和强碱溶液中，除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外，均溶于水；除脯氨酸和羟脯氨酸外，均难溶于乙醇和乙醚。 2）有碱性[二元氨基一元羧酸，例如赖氨酸（lysine）]；酸性[一元氨基二元羧酸，例如谷氨酸（Glutamic acid）]；中性[一元氨基一元羧酸，例如丙氨酸（Alanine）]三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性，呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐，也能与碱结合成盐。

PITC柱前衍生HPLC氨基酸比值测定

PITC柱前衍生高效液相法测定缩宫素氨基酸比值 一．前言 目前，氨基酸检测主要应用氨基酸自动分析仪和HPLC。随着HPLC的发展，使用HPLC技术分析氨基酸获得迅速发展。HPLC已成为一种较为理想的检测氨基酸的方法。HPLC检测氨基酸时，使用不同衍生剂反应后产生不同的衍生物，不同的衍生物所需色谱条件也有差别。查阅相关的研究报告，所使用的衍生剂及色谱条件也不尽相同。每种方法各有自己的优缺点，应根据所测样品的特性和仪器、试剂条件作出选择，最后选择异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生法测定缩宫素氨基酸比值。 二．准备工作 主要设备和试剂 1.氨基酸分析专用柱（4.6×250，5um）1支 Agela公司 2.高效液相检测仪 1台安捷伦 3.十八种氨基酸 1套中检所 4.异硫氰酸苯酯 10瓶 Agela公司 5.三乙胺 2瓶 Agela公司 试剂配制 1.三乙胺乙腈溶液：取三乙胺1瓶，加乙腈8.6ml，混匀。 2.异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取异硫氰酸苯酯1瓶，加乙腈2ml，混匀。 4℃ 3天 3.流动相A：称取三水醋酸钠25.3g（或无水醋酸钠15.2g），加水1400ml，用冰醋酸调节 pH6.5，用水使成1860ml，再加乙腈140ml，使成2000ml，0.45um醋酸纤维膜过滤。 4.流动相B：80%乙腈，0.45um有机膜过滤。 5.氨基酸标准贮备液 中检所十八种氨基酸，105℃3小时。使用十万分子一天平。 半胱氨酸是以胱氨酸折算成两份半胱氨酸进行计算。用0.1mol/L盐酸溶解至250ml。

衍生方法 取标准品（样品）0.2ml，加100mmol/L异硫氰酸苯酯乙睛溶液0.1ml，加1mol/L三乙胺乙睛溶液0.1ml，混匀，室温放置1小时，加入0.4ml正己烷，振摇，放置10分钟，取下层清液过滤后进样。 三．实验部分 1.色谱条件选择 1.1精密量取2ml氨基酸标准储备液，至20ml容量瓶，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度。用以下3个方法进行检测。从而确定最佳洗脱条件。 方法1 流速：1ml/min 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：2ul 洗脱梯度： 方法2 流速：1ml/min 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：2ul 洗脱梯度：

UltiMate3000DGLC双三元液相色谱的在线柱后衍生技术_

selectivity could be achieved by this method according to the selective complementarity of the two columns．In the experiment ，ACN-H 2O was used as the SPE mobile phase with a flow rate of 1mL /min and ACN-10mmol /L NH 4Ac was used as the analytical mobile phase with a flow rate of 1mL /min．Serum samples were injected directly into the SPE column and the biological matrix was washed out with the loading solvent．By rotation of the switching valve ，Clozapine ，Quetiapine and Ｒisperidone were eluted from the SPE cartridge in the back-flush mode and transferred to the analytical column by the chromatographic mobile phase．The whole time of the online SPE purification and chromatographic separation of the analytes was 18min．Calibration curve of Clozapine with good linearity （r =0．9996）was obtained in the range of 10－1800μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 118．4%，105．0%and 105．4%．Calibration curve of Quetiapine with good linearity （r =0．9997）was obtained in the range of 3．6－640μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 112．8%，101．1%and 101．5%．Calibration curve of Ｒisperidone with good linearity （r =0．9995）was obtained in the range of 0．71－128μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 100．7%，97．2%and 98．8%．In conclusion ，the established automated online SPE-HPLC-UV method demonstrated good performance in terms of linearity ，specificity ，limits of quantification ，and was successfully utilized to quantify Clozapine ，Quetiapine and Ｒisperidone in human serum． Keywords High performance liquid chromatography ；Online solid phase extraction ；Clozapine ；Quetiapine ； Ｒisperidone ；Serum （Ｒeceived 18July 2014；accepted 14October 2014）櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫 UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱的在线柱后衍生技术 衍生化是指被测物质与相应的试剂发生化学反应，改变被测物质的化学和物理性质，提高被测物质的检测灵敏度，改善被测物质混合物的分离度，从而达到利于分析的目的。衍生化在HPLC 分析中应用广泛，其中在线柱后衍生使用居多。传统的在线柱后衍生需要一个独立的泵来输送衍生试剂以实现衍生的目的，但这些额外的独立装置有时由于与液相色谱系统本身不能进行很好的联用，往往导致运行不甚理想。赛默飞UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱由于具有两个独立的泵和流路，一个泵进行分析，另外一个泵可以完成如输送衍生试剂等的辅助功能，可以很好地实现在线柱后衍生应用，而且这些功能很多情况只需要一个简单的柱后三通或反应管的连接就可以实现。此外，在HPLC 和MS 联用时，为了增强离子化效率，需要另外的流路泵入甲酸或乙腈，使用UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱也可以简单方便地实现这样的功能。例如食品中黄曲霉毒素的检测，使用UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱的右泵作为分析泵，左泵做衍生泵，以0.05%碘溶液作为衍生反应试剂，一套系统即可方便自动化地实现在线柱后衍生，提高黄曲霉毒素的检测灵敏度，以满足法规的检测要求。7281第12期沈广虎等：在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定人血清中氯氮平、奎硫平和利培酮的含量

PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版

糖组成分析（PMP-HPLC） 混合单糖标准品的准备： 称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。 多糖的水解 称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。 单糖的PMP衍生化 取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。 HPLC分析糖组成 Agilent 1260高效液相色谱系统 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm； 流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液 Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液 磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7） KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中； 乙腈（HPLC级）； 时间（min）Buffer A Buffer B 0 100 0 10 90 10 30 80 20 35 80 20 45 80 20 45.01 100 0 55 100 0 柱温：20℃； 紫外检测波长：254nm； 流速：1ml/min； 进样体积：20μl。