增强免疫力功能评价方法(征求意见稿)及修订说明

增强免疫力功能评价方法（征求意见稿）

附件1：

增强免疫力功能评价方法（征求意见稿）

保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定

Items, Principles and Result Assessment

1 试验项目

1.1 动物实验

1.1.1 体重

1.1.2脏器/体重比值测定：胸腺/体重比值，脾脏/体重比值

1.1.3细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验

1.1.4体液免疫功能测定：抗体生成细胞检测，血清溶血素测定

1.1.5单核—巨噬细胞功能测定：小鼠碳廓清实验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光

微球实验

1.1.6 NK细胞活性测定

2 试验原则

2.1 所列的指标均为必做项目

2.2分为正常动物实验方案和免疫功能低下模型动物实验两种方案, 可任选其一进行实验.

2.3采用免疫功能低下动物模型实验方案时需做外周血白细胞总数测定

3 结果判定

3.1采用正常动物实验，受试样品具有增强免疫力作用。

在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及NK细胞活性四个方面测定中，任两个方面试验结果为阳性，可以判定该受试样品具有增强免疫力作用。

其中细胞免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，判定细胞免疫功能试验结果阳性。体液免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，判定体液免疫功能试验结果阳性。单核—巨噬细胞功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，判定单核—巨噬细胞功能试验结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量结果阳性，判定NK细胞活性结果阳性。

正常动物实验需进行四个方面的测定。

3.2 采用免疫功能低下动物实验，受试样品对免疫功能低下者具有增强免疫力作用。

在免疫功能低下模型成立条件下，血液白细胞总数、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及NK细胞活性五个方面测定中，任两个方面试验结果为阳性，判定该受试样品对免疫功能低下者具有增强免疫力作用。

其中细胞免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能试验结果阳性。体液免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能试验结果阳性。单核—巨噬细胞功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核—巨噬细胞功能试验结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量结果阳性，可以判定NK细胞活性结果阳性。血液白细胞总数测定的二个以上剂量结果阳性，可以判定血液白细胞总数结果阳性。

免疫功能低下模型动物实验至少需进行三个方面的测定。同时在各项实验中，任何一项测试都不出现加重免疫抑制剂作用的结果。

增强免疫力功能检验方法

Method for the Assessment of Enhancing Immune Function

1.原理：

免疫系统主要包括中央和外周淋巴器官、淋巴组织和全身各处的淋巴细胞、抗原呈递细胞等，还包括血液中的白细胞。淋巴细胞经血液和淋巴使各处的淋巴器官和淋巴组织连成一个功能整体。胸腺属中央淋巴器官，主要功能是确保T淋巴细胞的产生和成熟。外周淋巴器官包括血液、淋巴管和免疫活性细胞；脾脏对抗原发生免疫应答作用，脾窦的巨噬细胞具有清除功能，脾白髓含有记忆B细胞，产生对T依赖抗原的体液免疫应答。淋巴细胞是特异性免疫应答的主要细胞群，按其表面标志物，分为T细胞、B细胞和天然杀伤细胞（NK）三大类，T细胞又分为CD4+（Th）细胞和CD8+T淋巴细胞。B淋巴细胞转化为浆细胞后能合成和释放抗原特异抗体，所有抗体都是免疫球蛋白，但并非所有的免疫球蛋白分子都具有抗体功能。免疫系统可产生特异性免疫和非特异性免疫功能，检测上述免疫系统的各种代表性指标的改变可对增强免疫力作用的功能做出相应判定。

2. 实验动物选择

推荐用近交系小鼠，如C57BL/6J、BALB/C等，6～8周龄，18～22g（BALB/C 种可16-18g），单一性别，雌雄均可，每组10～15只。

3. 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和1个阴性对照组。以人体推荐量的10倍为其中一个剂量，另设二个剂量组。必要时设阳性对照组。选做免疫低下模型法时，应设模型对照组。受试样品给予时间四周或30天。

4．免疫功能低下动物模型

可选用环磷酰胺、氢化可的松或其他合适的免疫抑制剂进行药物造模。

4.1 造模原理：

4.1.1环磷酰胺主要通过DNA烷基化破坏DNA的合成而非特异性地杀伤淋巴细胞，并可抑制淋巴细胞转化；环磷酰胺对B细胞的抑制比T细胞强，一般对体液免疫有很强的抑制作用，对NK细胞的抑制作用较弱。

4.1.2氢化可的松主要通过与相应受体结合成复合物后进入细胞核，阻碍NF-κB 进入细胞核，抑制细胞因子与炎症介质的合成和释放，达到免疫抑制目的。氢化可的松还可损伤浆细胞，抑制巨噬细胞对抗原的吞噬、处理、和呈递作用，所以氢化可的松对细胞免疫、体液免疫和巨噬细胞的吞噬、NK作用都有一定的抑制作用。

4.2 免疫抑制剂剂量选择

环磷酰胺可选择40mg／kg，腹腔注射，连续两天，末次注射给药后第5天测定各项指标；氢化可的松可选择40mg／kg，肌内注射，隔天一次，共5次，末次注射给药后次日测定各项指标。

各指标对两种模型敏感性不同，环磷酰胺模型比较适合抗体生成细胞检测、血清溶血素测定、白细胞总数测定；氢化可的松模型比较适合迟发型变态反应、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球实验、NK细胞活性测定，建议根据不同的免疫功能指标选择合适的模型。

4.3 受试物给予

连续给予受试物4周或30天，在第3周后开始给予免疫抑制剂，进行模型与预防性给药相结合的实验。

5. 实验方法

5.1血液白细胞数测定

小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数检测方法(仪器法)

全血用EDTA·K

2

抗凝后经血细胞分析仪检测，可测定白细胞数量，并可对白细胞进行分分类计数。

5.1.1仪器和材料

乙二胺四乙酸二钾（EDTA·K

2·2H

2

O，MW404.47），离心管，全血细胞分析仪

上样管，眼科镊子，振荡器，加样枪，冷冻离心机，全血细胞分析仪。

5.1.2实验步骤

5.1.2.1试剂配制

血液抗凝：EDTA·K

能与血液中的钙离子结合成为螯合物，从而阻止血液凝

2

可阻止1ml血液凝固。

固，1.5～2.2mg的EDTA·K

2

加纯净水至100ml制成抗凝剂，50μl抗凝抗凝剂配制：称量8mg EDTA·K

2

剂可抗凝1ml小鼠全血。

5.1.2.2采血

以摘除小鼠眼球的方法采集全血，采用干净无菌的眼科镊子摘取小鼠一侧或双侧眼球，让血液自由滴入装有抗凝剂的1.5ml离心管（或商品化的抗凝管）中，采血过程中不断混匀血液与抗凝剂防止血液凝固，每只动物采集抗凝全血约1ml。

5.1.2.3检测分析

上机前血液颠倒混匀，注意检查是否存在凝块。在24h内以全血细胞分析仪检测白细胞总数和淋巴细胞数。上机操作参照仪器说明书。

5.1.3数据分析

一般采用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算

，P≤0.05，用F值，p＞0.05，结论：各组均数间差异无显著性意义；F值≥F

0.05

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品组的白细胞总数显著高于阴性对照组，可判定该项实验结果阳性。

5.2 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验

可任选下列方法之一

5.2.1 MTT法

5.2.1.1 原理

当T淋巴细胞受ConA刺激后发生母细胞增殖反应，活细胞特别是增殖细胞通过线粒体水解酶将 MTT（一种淡黄色的唑氮盐）分解为兰紫色结晶而显色，其光密度值能反映细胞的增殖情况。

5.2.1.2 仪器和材料

RPMI1640 细胞培养液、小牛血清、2-巯基乙醇（2-ME）、青霉素、链霉素、

刀豆蛋白A（ConA）、盐酸、异丙醇、MTT、Hank's液、PBS缓冲液（pH7.2-7.4）纱布、200目筛网、24孔培养板，96孔培养板（平底），手术器械、大号注射器内芯、二氧化碳培养箱、酶标仪、分光光度计、超净工作台、高压灭菌器、无菌滤器。

5.2.1.3 实验步骤

5.2.1.3.1 试剂配制

完全培养液 RPMI1640培养液过滤除菌，用前加入10％小牛血清， 1％谷氨酰胺（200mmol/L），青霉素（100U/mL），链霉素（100ug/L）及5×10－5mol/L 的2-巯基乙醇，用无菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调pH至7.0-7.2，即完全培养液。

ConA液用双蒸水配制成100ug/mL的溶液，过滤除菌，在低温冰箱（-20℃）保存。

无菌Hank's液用前以3.5％的无菌NaHCO

3

调pH7.2-7.4。

MTT液将5mgMTT溶于1mL pH7.2的PBS中，现配现用。

酸性异丙醇溶液 96mL 异丙醇中加入4mL 1mol/L的HCl，临用前配制。5.2.1.3.2 脾细胞悬液制备

无菌取脾，置于盛有适量（3-5ml）无菌Hank's液平皿中，并在脾上面放置一块纱布，用大号注射器内芯轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank's液洗2次，每次离心10min（1000r/min）。然后将细胞悬浮于2mL的完全培养液中，用全自动细胞计数仪计数脾细胞，或用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为3×106个/mL。

5.2.1.3.3 淋巴细胞增殖反应

将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μl ConA 液（相

当于7.5μg/mL），另一孔作为对照，置5％CO

2，37℃CO

2

孵箱中培养72h。培养结

束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/mL）50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，超声震荡（2秒）或人工吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。也可将溶解液直接移入2mL比色杯中，分光光度计上

在波长570nm测定OD值。

5.2.1.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。

5.2.1.5 注意事项

ConA的浓度很重要，浓度过低不能刺激足够的细胞增殖，浓度过高会抑制细胞增殖，不同批号的ConA在实验前要预试，以找到最佳浓度。

5.2.2 XTT法

5.2.2.1原理

由于MTT经还原所产生的甲臜产物不溶于水，且溶解甲臜的有机溶剂有毒性，可选择XTT法替代MTT法。其原理是：XTT是二甲氧唑黄，在电子耦合试剂存在的情况下，活细胞线粒体中的脱氢酶可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲臜，生成的甲臜能够溶解在组织培养基中，不形成颗粒，可直接用酶联免疫检测仪检测定吸光值。

5.2.2.2实验步骤

脾细胞悬液制备同MTT法；

淋巴细胞增殖反应：调整细胞浓度为5×107，取细胞悬液100μl分别加入96孔培养板中，一孔加5～10μl ConA 液，另一孔作为对照，设2个平行孔，置37℃5％CO

2

饱和湿度孵箱中培养72h。培养结束前4h，向各孔中加入20～50μl 的XTT工作液（按试剂盒说明现用现配），孵育4小时。用酶标仪在450nm波长处检测每孔的光密度。

5.2.2.3 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。

5.2.2.4 注意事项

细胞浓度及培养时间在实验前要预试，以找到最佳效果。

5.2.3 溴脱氧尿嘧啶核苷标记酶联免疫吸附测定法(BrdU-ELISA法)

5.2.3.1 原理

T淋巴细胞在有丝分裂原ConA等的刺激下产生增殖反应，BrdU可竞争掺入到增殖细胞中新合成的DNA链内，将BrdU标记的细胞作为抗原结合到固相载体表面，加入酶连接的抗-BrdU抗体，使BrdU抗原与酶标抗体充分结合，抗原抗体复合物与底物作用后产生有色物质，其光密度可反映细胞增殖的程度。

5.2.3.2 仪器和材料

低温离心机，全自动酶标仪、超净工作台、二氧化碳培养箱、96孔培养板（平底）、倒置显微镜、移液器、手术器械、200目筛网、细胞活性分析仪；RPMI1640 细胞培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A（ConA）、Hank's液、PBS 缓冲液（pH7.2-7.4）、BrdU细胞增殖检测试剂盒（ELISA）、纯净水、终止液。

5.2.3.3 实验步骤

5.2.3.3.1 试剂配制

完全培养液 RPMI1640培养液过滤除菌，用前加入10％小牛血清，1％谷氨酰胺（200mmol/L），青霉素（100U/mL），链霉素（100μg/L）及5×10－5mol/L的2-巯基乙醇，用无菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调pH至7.0-7.2，即完全培养液。

ConA液用双蒸水配制成100ug/mL的溶液，过滤除菌，在低温冰箱（-20℃）保存。

无菌Hank's液用前以3.5％的无菌NaHCO

3

调pH7.2-7.4。

BrdU 标记液 将标记剂（试剂盒No.1）按1：100的比例加到培养液中混匀，现配现用。

抗体贮存液（母液） 在Anti-BrdU-POD （试剂盒No.3）中加1.1ml 双蒸水充分混合，存于-20℃备用。

抗体工作液 每100μl 抗体母液加10ml 抗体稀释液（试剂盒No.4），现配现用。

洗液 每10ml 清洗缓冲液（试剂盒No.5）加100ml 双蒸水。

5.2.3.3.2 脾细胞悬液制备

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's 液平皿中，并在脾上面放置一块纱布，用大号注射器内芯轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank's 液洗2次，每次离心10min （1000r/min ）。然后将细胞悬浮于2mL 的完全培养液中，用全自动细胞计数仪计数脾细胞，或用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为2×107个/mL 。

5.2.3.3.3 淋巴细胞培养

将细胞加入96孔培养板中，10μl /孔，每份细胞加2孔，第1孔再加入90μl 1640培养液，第2孔加入85μl 1640培养液和5.3μl ConA ，同时设3个空白孔，每孔仅加100μl 1640培养液，置5%CO 2、37℃培养箱孵育72h ，培养结束前4 h 加入

BrdU 标记液，10μl /孔，培养结束后离心（1000r/min,10min ）,弃上清，吹干细胞，放4℃冰箱保存待测。

5.2.3.3.4 酶联免疫吸附测定

每孔加200μl 固定液，常温放置30min 后,吸弃固定液。加入100μl BrdU 抗体工作液，37℃孵育60min ；吸弃未结合的抗体，加250μl 洗液洗3次，轻拍移去洗液。加底物溶液（含TMB ）100μl /孔，常温孵育15min 。用酶标仪测量吸光值，不加终止液时，测定发射波长为370nm （记为A 370），参考波长492nm （记为

A 492）；加终止液时，测定发射波长为450nm （记为A 450），参考波长690nm （记为

A 690）。

5.2.3.4 数据处理及结果判定

计算每孔标记指数（LI ），LI= （A 370- A 空白370）- （A 492- A 空白492）或LI= （A 450- A 空白450）- （A 690- A 空白690）。用加ConA 孔的LI 值减去不加 ConA 孔的LI 值所得

的差值代表淋巴细胞的增殖程度。

采用方差分析对标记指数差值进行统计学分析，按方差分析的程序先进行方

，则各组均数间差异无显著性；F 差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F

0.05

,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；值≥F

0.05

对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品组的LI值差值显著高于对照组的LI值差值，可判定该项实验结果阳性。

5.2.3.5 注意事项

选择有丝分裂原时ConA的浓度很重要，ConA的浓度过高会产生抑制作用，不同批号的ConA在实验前要预试，以找到最佳刺激分裂浓度。

5.3 迟发型变态反应（DTH）

迟发型变态反应是细胞免疫的体内检测法，当致敏T细胞再次与抗原接触，引起T细胞活化，释放出多种细胞因子，致局部组织发生以单核细胞为主的炎症反应，一般在24～48h达高峰。可任选下列方法之一试验。

5.3.1 二硝基氟苯诱导小鼠DTH（耳肿胀法）

5.3.1.1 原理

二硝基氟苯（DNFB）稀释液可与腹壁皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激 T 淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4～7d 后再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击后24～48h达高峰，其肿胀程度可以反映迟发型变态反应程度。

5.3.1.2 材料

DNFB、丙酮、麻油、硫化钡、打孔器。

5.3.1.3 实验步骤

5.3.1.3.1 试剂配制

DNFB溶液 DNFB溶液应新鲜配制，称取DNFB50mg，置清洁干燥小瓶中，将预先配好的5mL丙酮麻油溶液（丙酮：麻油=1：1），倒入小瓶，盖好瓶塞并用胶布密封。混匀后，用250μl注射器通过瓶盖取用。

5.3.1.3.2 致敏每鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛，范围约 3cm×3cm、用 DNFB 溶液50μl均匀涂抹致敏。

5.3.1.3.3 DTH的产生与测定 5天后，用 DNFB 溶液 10μl均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击。攻击后 24h 颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳。用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。

5.3.1.4 数据处理与结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

用左右耳重量之差表示DTH的程度。受试样品组的重量差值显著高于与对照组的重量差值，可判定该项实验结果阳性。

5.3.1.5 注意事项：

操作时应避免DNFB与皮肤接触。

5.3.2 绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）

5.3.2.1 原理

SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，攻击部位出现肿胀，其肿胀程度可反映迟发型变态反应程度。

5.3.2.2 仪器与材料

游标卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μl）、足趾容积测量仪。

5.3.2.3 实验步骤

5.3.2.3.1 致敏小鼠用2％(v/v)SRBC腹腔或静脉免疫，每只鼠注射0.2mL（约1×108个SRBC）。

5.3.2.3.2 DTH的产生与测定免疫后4天，测量左后足跖部厚度或肿胀度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC，每只鼠20μl（约1×108个SRBC），注射后于24h测量左后足跖部厚度或肿胀度，同一部位测量三次，取平均值。

测量方法：用游标卡尺测量肉眼读数。或用足趾容积测量仪进行测量足跖部肿胀度，操作方法按仪器操作指引进行。

5.3.2.4 数据处理和结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

以攻击前后足跖厚度或肿胀度的差值来表示DTH 的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。

5.3.2.5 注意事项

前后两次测量足跖厚度时，最好由专人来进行。卡尺紧贴足跖部，但不要加压，否则会影响测量结果。

攻击时所用的SRBC要新鲜（保存期不超过1周）。

5.4 抗体生成细胞检测（改良法）

5.4.1 原理

溶血空斑试验是检测产生IgM、IgG等抗体分泌细胞数体外试验法。用绵羊红细胞（SRBC）免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体分泌细胞周围的SRBC溶解，形成肉眼可见的空斑。

5.4.2 仪器和材料

溶血空斑自动图象分析仪、二氧化碳培养箱、恒温水浴、离心机、手术器械、、200目筛网、SRBC、补体（豚鼠血清）、Hank's液、RPMI1640培养液、SA缓冲液

（C

4H

4

N

2

O

3

0.46g, MgCl

2

0.1g, CaCl

2

.2H

2

O 0.2g, NaCl 8.38g, NaHCO

3

0.252g and

C 8H

11

N

2

NaO

3

0.3g, 加蒸馏水至1000mL）、灭菌生理盐水、琼脂糖。

5.4.3 实验步骤：

5.4.3.1 SRBC 绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，生理盐水2500rpm/min，15min，洗涤3次，制备压积SRBC，放入4℃冰箱保存备用。

5.4.3.2 完全培养基的制备：新生小牛血清经绵羊红细胞（v/v，5：1）吸收，4℃，30-60min后，加入不完全培养基RPMI 1640中，制备成含20%小牛血清的完全培养基。

5.4.3.3 补体制备股动脉取血，静置30-60min，2500rpm/min，15min分离血清，将5-10只豚鼠血清混合后，与压积SRBC以5：1（v/v）比例混合，4℃冰箱放置30-60min，间或震荡，2500rpm/min，15min分离血清，分装，-80℃冰箱保存。用时以完全培养基1：10（v/v）比例稀释。

5.4.3.4 免疫动物压积SRBC以生理盐水制成2%（v/v）的细胞悬液（约1×108个SRBC），每只鼠腹腔注射0.2mL。

5.4.3.5 脾细胞悬液制备将SRBC免疫4-5天后的小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾脏，并在脾上面放置一块纱布，用大号注射器内芯轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液，200目筛网过滤，1000rpm/min，10min，去上清，Hank’液洗2遍，以完全培养基RPMI 1640制备成5×106～1×107个细胞/mL的脾细胞悬液。

5.4.3.6 空斑的测定

5.4.3.

6.1 底层培养基制备 0.5g琼脂糖加入100mL灭菌生理盐水中，加热溶解，待温度于50℃左右时，以1mL/孔的量加至六孔培养板中，琼脂凝固后备用。5.4.3.6.2 顶层培养基制备 0.5g琼脂糖加入100mL Hank’s液中（PH

7.2-7.4）,加热溶解，以0.5mL/试管的量加至46-50℃恒温的试管中。

5.4.3.

6.3 铺板： 50μl 20%SRBC（生理盐水配制，v/v）、200μl脾细胞悬液先后加入含有0.5mL顶层的试管中，迅速混匀，倒入六孔板中并铺平顶层混合液，每个样本做两个平行孔。

5.4.3.

6.4 空斑测定：已制备好培养板放入37℃、5% CO2培养箱中孵育1h，然后每孔加入500μl以完全培养基稀释的补体（v/v，1：10），继续孵育2h，自动图象分析仪读取溶血空斑图象分析软件计数溶血空斑数。取平行孔空斑数的平均值为样本的溶血空斑数值，以空斑数/106脾细胞表示。

5.4.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

用空斑数/106脾细胞或空斑数/全脾细胞来表示，受试样品组的空斑数显著

高于对照组的空斑数，可判定该项实验结果阳性。

5.5 血清溶血素的测定

可任选下列方法之一。

5.5.1 血凝法

5.5.1.1 原理

用SRBC免疫动物后，产生抗SRBC抗体（溶血素），利用其凝集SRBC的程度来检测溶血素的水平。

5.5.1.2 仪器和材料

SRBC、生理盐水、微量血凝实验板、离心机

5.5.1.3 实验步骤

5.5.1.3.1 SRBC 绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。

5.5.1.3.2 免疫动物及血清分离取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min。将压积SRBC用生理盐水配成2％（v/v）的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2m l进行免疫。4～5d后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。5.5.1.3.3 凝集反应用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100μl，再加入100μl 0.5％(v/v)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。

5.5.1.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

血清凝集程度一般分为5级（0－Ⅳ）记录，按下式计算抗体积数，受试样品组的抗体积数显著高于对照组的抗体水平，可判定该项实验结果阳性。

抗体水平＝（S

1+2S

2

+3S

3

……nS

n

）

式中1、2、3……n代表对倍稀释的指数，S代表凝集程度的级别，抗体积数

越大，表示血清抗体越高。

0级红细胞全部下沉，集中在孔底部形成致密的圆点状，四周液体清皙。

Ⅰ级红细胞大部分沉集在孔底成园点状，四周有少量凝集的红细胞。

Ⅱ级凝集的红细胞在孔底形成薄层，中心可以明显见到一个疏松的红点。

Ⅲ级凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层,中心隐约可见一个小红点。

Ⅳ级凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层，凝块有时成卷折状。

5.5.1.5 注意事项

血清稀释时要充分混匀。最后一个稀释度应不出现凝集现象。

5.5.2 半数溶血值（HC

50

）的测定

5.5.2.1 原理

用SRBC免疫动物后，产生抗SRBC抗体（溶血素），在补体参与下，与SRBC 一起孵育，可发生溶血反应，释放血红蛋白，通过测定血红蛋白含量反映动物血清中溶血素的含量。

5.5.2.2 仪器和材料

分光光度计、全自动酶标仪、恒温培养箱、96孔培养板、离心机、恒温水

浴、SRBC、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液（C

4H

4

N

2

O

3

0.46g, MgCl

2

0.1g, CaCl

2

.2H

2

O

0.2g, NaCl 8.38g, NaHCO

3 0.252g and C

8

H

11

N

2

NaO

3

0.3g, 加蒸馏水至1000mL）、

都氏试剂（碳酸氢钠1.0g、高铁氰化钾0.2g、氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL）5.5.2.3 实验步骤

5.5.2.3.1 SRBC 绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。

5.5.2.3.2 制备补体采集豚鼠血，分离出血清（至少5只豚鼠的混合血清），将1mL压积SRBC加入到5mL豚鼠血清中，放4℃冰箱30min，经常振荡，离心取上清，分装，－70℃保存。用时以SA缓冲液按1∶8稀释。

5.5.2.3.3 免疫动物及血清分离取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min。将压积SRBC用生理盐水配成2％（v/v）的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫。4～5d后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，使血清充分析出，2000r/min离心10min，或6000r/min,4min,收集血清。

5.5.2.3.4 溶血反应测定

5.5.2.3.4.1检测方法1（分光光度计测定）：

取血清用SA缓冲液稀释（一般为200～500倍）。将稀释后的血清1mL置试管内，依次加入10％(v/v)SRBC 0.5mL，补体1mL（用SA液按1:8稀释）。另设不加血清的对照管（以SA液代替）。置37℃恒温水浴中保温15～30min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液1mL，加都氏试剂3mL，同时取10％(v/v)SRBC 0.25mL加都氏试剂至4mL，充分混匀，放置10min后，于540nm 处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。

5.5.2.3.4.2检测方法2(全自动酶标仪测定)：

设样品孔和空白对照孔，样品孔：取血清10μl,用1mL1:5稀释的SA缓冲液稀释；每孔加入稀释后的血清100μl；空白对照孔：每孔加入100μl1:5稀释的SA缓冲液，再依次加入10％(v/v)SRBC 50μl，补体100μl（用SA溶液或PBS溶液按1:8稀释），置37℃恒温水浴中保温30min，1500r/min离心10min。然后样品孔和空白对照孔各取上清液50μl加入另一个96孔培养板内, 加都氏试剂150μl。同时设半数溶血孔, 加入10％(v/v)SRBC 12.5μl,再加都氏试剂至200μl。用震荡器充分混匀，放置10min后，于540nm处用全自动酶标仪测定各孔光密度值。

5.5.2.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

溶血素的量以半数溶血值（HC

50

）表示，按下列公式计算：

样品光密度值

样品HC50＝─────────────────×稀释倍数

SRBC半数溶血时的光密度值

样品光密度值-空白光密度值

或样品HC50＝─────────────────────×稀释倍数

SRBC半数溶血时的光密度值-空白光密度值

受试样品组的HC

50显著高于对照组的HC

50

，可判定该项实验结果阳性。

5.6 小鼠碳廓清实验

5.6.1 原理

在一定范围内，碳颗粒的清除速率与其剂量呈指函数关系。

以血碳浓度对数值为纵座标，时间为横座标，两者呈直线关系。此直线斜率(K)可表示吞噬速率。动物肝、脾重量影响吞噬速率，一般以校正吞噬指数a表示。

5.6.2 仪器和试剂

分光光度计、全自动酶标仪、计时器、血色素吸管、印度墨汁、Na

2CO

3

5.6.3 实验步骤

5.6.3.1 溶液配制

注射用墨汁将印度墨汁原液用生理盐水稀释3～4倍。

Na

2CO

3

溶液取0.1gNa

2

CO

3

，加蒸馏水至100mL。

5.6.3.2 注射墨汁称体重，从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，按每10g体重0.1mL计算。待墨汁注入，立即计时。

5.6.3.3 测定

注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到 2mL

0.1%Na

2CO

3

溶液中。用分光光度计或全自动酶标仪在600nm波长处测光密度值

（OD），以Na

2CO

3

溶液作空白对照。

将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。

以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞噬指数a：

lgOD1-lgOD2

K＝───────

t2－t1

体重3

吞噬指数a＝───────×K

肝重＋脾重

5.6.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，

计算F值，F值< F

0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F

0.05

,P≤0.05,用

多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。

5.6.5 注意事项

静脉注入碳粒的量、取血时间、取血量一定要准确。

墨汁放置中，碳粒可沉于瓶底，临用前应摇匀。

使用新的墨汁时，应在实验前摸索一个最适墨汁注入量，即正常小鼠在20～30min内不易廓清。

5.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球试验方法

5.7.1原理：激活的巨噬细胞具有吞噬表面带有阳性可调理基团的荧光微球，将含有巨噬细胞的腹腔液与调理过的荧光微球孵育一定时间后，去除多余未被吞噬的微球，收集以巨噬细胞为主的标本，用流式细胞仪检测巨噬细胞，计数吞噬荧光微球的巨噬细胞，计算吞噬百分率和吞噬指数，据此判定巨噬细胞的吞噬能力。

5.7.2仪器和材料

Hank's液，小牛血清，PBS缓冲液，生理盐水，荧光微球(φ2μm)， 1％小牛血清白蛋白（BSA）。

流式细胞仪，超声清洗仪，二氧化碳细胞培养箱，离心机，6孔培养板，细胞刮，过滤器（75μm）,流式上样管，流式细胞仪专用鞘液，移液枪及吸头，白细胞计数板，手术器械一套，注射器，滴管，胶头吸管。

5.7.3 实验步骤

5.7.3.1试剂配制

5.7.3.1.1 含5％小牛血清的Hank's液：取10m l小牛血清加入200m l Hank's 液中，混匀，临用前配。

5.7.3.1.2 PBS缓冲液的配制方法：KH

2PO

4

6.66g，Na

2

HPO

4

·12H

2

O 6.38g，将

上述试剂溶于1000ml蒸馏水中调PH值至7.2即成。

5.7.3.1.3 2％绵羊红细胞悬液的配制方法：实验前取绵羊颈静脉血，置于盛有玻璃珠（20个左右）的三角瓶内，连续顺一个方向充分摇动5～10分钟，除

去纤维蛋白，用生理盐水洗涤3次，每次1500rPm，离心10分钟，4℃冰箱保存。实验前弃去上清，按血球压积用生理盐水配制成2％的红细胞悬液。

5.7.3.1.4 1％BSA的配制：0.5gBSA溶于50mlPBS缓冲液中，临用前配较好。

5.7.3.1.5 荧光微球预调理：100μl荧光微球与10m l 1％BSA 37℃避光孵育30min, 超声处理5min，临用前配。

5.7.3.2 腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球过程

实验前4天给每只小鼠腹腔注射0.2ml 2%绵羊血红细胞激活小鼠巨噬细胞，实验当天用颈椎脱臼法处死小鼠，腹腔注射加小牛血清的Hank's液3ml/只，轻轻按揉腹部20次，以充分洗出腹腔巨噬细胞，然后将腹壁剪开一个小口，吸取腹腔洗液2ml用75μm过滤器过滤至试管内，调整巨噬细胞数为4～6×105/ml。用移液枪吸取1ml腹腔洗液于6孔培养板中，加入已经预调理过的荧光微球（1×107/板），37℃二氧化碳细胞培养箱（或室温）避光孵育90～120分钟，孵育结束后弃上清（含未贴壁细胞和多余荧光微球），每次使用1.0mlPBS缓冲液轻轻洗涤2次，去上清后再加入4℃PBS缓冲液0.3ml，用细胞刮刮下贴壁细胞，轻轻吹打均匀后经75μm过滤器过滤后上机分析。

5.7.3.3 流式细胞仪检测分析

5.7.3.3.1 设门：首先设立FSC-SSC二维散点图，通过调节FSC和SSC电压值，以巨噬细胞设门界定分析的巨噬细胞群，最大限度地排除其它有核细胞、细胞碎片等的干扰；

5.7.3.3.2 获取：在荧光微球发射光的荧光通路检测巨噬细胞的荧光强度，每份样本获取5000个巨噬细胞，数据可显示于二维散点图和直方图中。在二维散点图中可通过设门圈定未吞噬荧光微球的巨噬细胞群和吞噬荧光微球的巨噬细胞群；在直方图中可通过标尺标定未吞噬荧光微球的巨噬细胞群和吞噬荧光微球的巨噬细胞群，全部数据经相关软件分析未吞噬荧光微球的巨噬细胞和吞噬不同数量荧光微球的巨噬细胞的比例。

吞噬一个荧光微球 吞噬二个荧光微球

图 1 吞噬荧光微球后的小鼠腹腔巨噬细胞图(荧光显示400 )

图2 吞噬荧光微球后的小鼠腹腔巨噬细胞FSC-SSC 和FL2-SSC 二维散点图

R1: 总巨噬细胞群

R2: 未吞噬荧光微球的巨噬细胞群

R3: 吞噬一个荧光微球的巨噬细胞群

R4: 吞噬两个光微球的巨噬细胞群

R5: 吞噬三个荧光微球的巨噬细胞群

R6: 吞噬四个或四个以上荧光微球的巨噬细胞群

M1M2M3

M4M5

R1

R2R3R4R5R6

能明显增强机体免疫功能的食品

能明显增强机体免疫功能的食品。 山楂：山楂深受人们的喜爱，它的功能主要是助消化、保护心血管、降低血脂血压、抗菌、减肥、抗肿瘤、清除自由基、增强免疫力。 大蒜：大蒜有抗菌消炎的作用，可保护肝脏、调节血糖，保护心血管，抗高血脂和动脉硬化，抗血小板凝集。营养学专家发现，大蒜提取液有抗肿瘤的作用，建议每日生吃大蒜3—5克。 沙棘：沙棘生长在半丘陵地带，维生素c含量丰富，对造血系统有促进作用，可抗疲劳、保护消化道、清除自由基、改善血管系统和增强免疫力。 螺旋藻：螺旋藻的蛋白质含量高达印％一70％，生物价值为68％。螺旋藻含有丰富的胡萝卜、素、维生素E和其他维生素，可提高体液的PH值，纠正酸性体质，使人体处于略碱性，从而提高人体免疫力，并具有抗肿瘤、抗艾滋病的作用。 花粉：花粉是植物的精华，经常服用可抗衰老、抗疲劳、增强中枢系统的功能，增强身体的免疫功能。 芦荟：芦荟与金香、大蒜、洋葱、野百合一样属于百合科多年生草本植物，主要生长在干燥炎热的地区，具有极强的生命力，可清热排毒、缓泻、消炎抗菌，增强免疫力，还可护胃保肝和护肤美容。 生姜：既是调味品又是营养品，主要作用是抗凝血、降血脂、预防脑中风．切成薄片生吃效果最好。 香菇：从古到今，香菇一直被称为“长生不老药”。它对病毒体有极好的过滤作用，云南的“香菇火锅宴”是强身壮体的药膳。 蜂胶：蜂胶能提高人体巨噬细菌吞噬病毒和细菌的能力，使机体免疫处于动态平衡的最佳状态，被称为“天然的免疫增强剂”。 牛奶和黄豆：牛奶和黄豆都属于高蛋白食品，瑞典伦德大学安德斯-黑肯森研究小组发现．牛奶中的酪蛋白和卵清蛋白可增强呼吸道和内脏器官抗感染的能力，防止病毒和细菌粘到呼吸道上。黄豆中的大豆蛋白被人体消化、吸收和利用的程度极高．它和乳蛋白同样可以构成体内的抗体。 宜多吃的食物—— 梨：吃多了也不会胖。其他水果中的果糖，食用过多一般会导致肥胖，可是梨因为有促进大肠代谢的生理作用，故不用担心能量过剩，这对容易发胖的女性十分适宜。 蒸煮生梨，生梨带皮，截去上端，挖去芯，放入一小匙冰糖和一片大蒜，再把切去的上端作盖，放人深碗中，周围浇上米汤，以快要浸梨为度，入火蒸煮。可治感冒，也是老年人的好点心。 生姜：促进发汗，温暖身体。生姜是厨房中不可少的食物。在炒肉或蔬菜之前，先在锅中将生姜炒一下，使生姜的香味和刺激成分游离出来，并使它的药效易于利用。炒成焦黄色的生姜有温暖作用，可以促进内脏的机能更加活跃。因此，由体寒所引起的腰痛，或刚染风寒之时，生姜或炒或煮，食之均有益处。 豌豆：活跃肝功能，消除身心疲劳。在日本料理中，豌豆常用来作装饰，其实豌豆具有促进胆汁分泌和活跃肝脏功能的作用，应该大量食用。肝脏功能一活跃，体内的疲劳物质和不需要的东西就都会被排除体外，所以精神上的不安也会随之消除。 玉米：调整肠胃。玉米含有大量的纤维，可以刺激肠道，有助于肠的蠕动。但多吃则可能因过度刺激肠道而引起腹泻。玉米有镇静的作用，和干贝一起煮，能消除眼睛的疲劳和精神紧张。上火或是烦躁不安的人可以多食蒸玉米或是玉米汤。而有便秘的人，也应多吃玉米。

免疫功能检查参考值及临床意义

免疫功能检查参考值及临床意义 2010-09-24 15:32:56 作者：佚名来源：网络转载 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12～16岁7.5～15.5克/升，成人7.6～16.6克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2.免疫球蛋白A(IgA) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿0～120毫克/升，1～6个月30～820毫克/升，6个月～2岁140～1 080毫克/升，2～6岁230～1 900毫克/升，6～12岁290～2 700毫克/升，12～16岁500～3 000毫克/升，成人710～3 350毫克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3.免疫球蛋白M(IgM) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50～200毫克/升，1～6个月150～700毫克/升，6个月～2岁250～1 300毫克/升，2～6岁350～1 500毫克/升，6～12岁400～1 800毫克/升，12～16岁500～1 800毫克/升，成人700～2 000毫克/升。 【临床意义】

一种增强免疫力的保健食品及其制备方法

一种增强免疫力的保健食品及其制备方法技术领域本发明涉及保健食品领域，公开了一种增强免疫力的保健食品及其制备方法。背景技术免疫力是指人体免疫系统抵御病原体感染的能力。免疫系统由胸腺(青春期以后即逐渐萎缩、退化)、脾脏和淋巴组织等组成。健全的人体免疫系统主要作用之一是机体防御功能，即保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病。免疫力是一个从弱到强，再从强到弱的动态发展过程。0～12岁前的儿童免疫器官发育不完善，体内有抗体活性的免疫球蛋白分泌量少，免疫功能不健全，这时的孩子极容易生病。13～45岁期间是免疫功能相对稳定期，免疫功能相对完善。但是由于这一阶段的人容易受到生活、学习、工作的压力影响，使体内的抗体和生长因子分泌量大幅度波动，这种就会造成体内的免疫球蛋白含量不稳定，导致免疫力下降而生病。46岁以后人体的免疫器官功能开始衰退，体内有抗体活性的免疫球蛋白和生长因子分泌下降，免疫力下降，开始诱发老年性疾病。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易

诱发重大疾病。枸杞，为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实，是一味传统常用中药，始载于《神农本草经》。《本草纲目》谓其补肾、润肺、生精、益气。《圣惠方》载枸杞子酒补虚损、强筋骨、悦颜色、健身体。枸杞味甘，性平，主要归肝、肾、肺经。其甘补平和，质润多液，入肾可益精充髓助阳；走肝能补血明目；归肺以润肺止咳；凡肝肾不足和肺肾阴虚所致诸症，均可应用。为滋阴助阳，益精补血之良药。其化学成分主要含胡萝卜素、硫胺素、核黄素、烟酸、抗坏血酸、谷甾醇、亚油酸、玉蜀黍黄素、甜菜碱、酸浆果红素及微量元素等。现代医学通过大量药理实验和临床实验证明，枸杞的确具有促进调节免疫功能、保肝功能，抗衰老功能及抗疲劳等药理作用。桑葚，为多年生桑科桑树的成熟果穗。桑葚的营养丰富，含有人体所必需的多种营养成分，如维生素、铁、钙等矿物元素及人体必需的种氨基酸和微量元素等，并含有果胶、无机盐类和紫红色色素等，中医认为，桑葚味甘酸，性寒，具有补肝益肾、养血生津、滋阴补血、 润肠通便，生津止渴等功效。现代研究认为，桑葚具有调节免疫、降血糖、降脂、抗衰老、护肝等作用。女贞子，为木犀科女贞属植物女贞的成熟果实，其味甘、苦，性凉，入肝、肾经,，具有滋补肝肾、明目乌发之功效, 用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明等症。女贞子始载于《神农本草经》，列为上品。现代药理学研究表明，女贞子具有提高机体免疫功能、

合理膳食 增强免疫力

合理膳食增强免疫力 近段时间，我国南方地区出现登革热的小范围流行。对于登革热预防重点是消灭蚊子和预防蚊子叮咬，除此之外，还需要通过合理膳食，增强自身的免疫力，抵抗疾病的侵袭。 在和疾病斗争的过程中，人的免疫力发挥着至关重要的作用。人体免疫力的高低受多种因素的影响，其中营养因素起着十分重要的作用，它是维持人体正常免疫功能和健康的物质基础。营养不良会导致机体免疫系统功能受损，对病原体的抵抗力下降，从而促进感染的发生和发展。因此，通过合理营养可以改善人体的免疫状况，增强对疾病的抵抗能力，对预防疾病的发生有重要的意义。与机体免疫功能关系密切的营养素有蛋白质、维生素A、维生素C、维生素E、铁、锌和硒等。 1、蛋白质 蛋白质是机体免疫功能的物质基础。蛋白质摄入不足影响组织修复，使皮肤和粘膜的局部免疫力下降，排除病原菌的能力减弱，容易造成病原菌的繁殖和扩散，降低抗感染能力。随着生活条件的改善，蛋白质缺乏已经不常见，但节食、偏食的人中容易出现。动物性食物中所含的蛋白质（也包括大豆及其制品中所含的蛋白质）进入机体后，比植物性蛋白质更容易被人体所充分利用。因此，每天要适量吃一些动物性食物。 2、维生素A

维生素A对机体免疫系统有重要的作用。维生素A缺乏可以引起呼吸、消化、泌尿、生殖上皮细胞角化变性，破坏其完整性，容易遭受细菌侵入，增加机体对呼吸道、肠道感染性疾病的易感性。富含维生素A的食物主要有动物肝脏，比如羊肝、猪肝、鸡肝等，植物性食物只能提供维生素A原类胡萝卜素，维生素A原类胡萝卜素在体内可以转换为维生素A。胡萝卜素主要存在于深绿色或红黄色的蔬菜和水果中，比如胡萝卜、菠菜、芹菜、芒果、红薯等。 3、维生素E 维生素E可以提高机体免疫功能，提高对感染的抵抗力。维生素E食物来源主要是植物油、植物种子的胚芽、坚果、豆类和谷类。 4、维生素C 维生素C是人体免疫系统所必需的维生素，可以从多方面增强机体对抗感染的能力，缺乏会使免疫系统功能降低。维生素C是胶原合成必不可少的辅助物质，可以提高机体组织对外来病原菌的阻挡作用。维生素C也可以促进淋巴母细胞的生成和免疫因子的产生。维生素C能促进干扰素的产生，抑制新病毒的合成，有抗病毒作用。新鲜的蔬菜、水果是维生素C丰富的食物来源。如鲜枣、青椒、猕猴桃、菠菜、山楂、柑橘、柚子、草莓等。 5、铁 铁缺乏时容易引起贫血，降低抗感染能力。富含铁的食物有：动物血、肝脏、大豆、黑木耳、芝麻酱中含铁丰富。

常用细胞免疫检测方法及其用途

细胞免疫功能检测常用有哪几种方法 一、迟发型过敏反应的体外检测方法 皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。 1．皮肤试验用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原，24～48小后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。 2．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）诱发接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导致DTH反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。 二、细胞免疫的体外检测方法 体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于红细胞（1.092）、多形核白细胞（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。 1．T细胞计数

保健食品功能评价规范

保健食品功能评价规范 第一部分功能学评价程序 一、主题内容和适用范围 1、本程序规定了评价食品保健作用的统一程序。 2、本程序适用于评价保健食品的增强免疫力功能，辅助降血脂功能功能，辅助降血糖功能，抗氧化功能，辅助改善记忆功能，缓解视疲劳功能，促进排铅功能，清咽功能，辅助降血压功能，改善睡眠功能，促进泌乳功能，缓解体力疲劳功能，提高缺氧耐受力功能，对辐射危害有辅助保护功能，减肥功能，改善生长发育功能，增加骨密度功能，改善营养性贫血功能，对化学性肝损伤有辅助保护功能，祛痤疮功能，祛黄褐斑功能，改善皮肤水份功能，改善皮肤油份功能，调节肠道菌群功能，促进消化功能，通便功能，对胃粘膜有辅助保护功能。 3、本程序规定了评价食品保健作用的人体试食实验规程。 二、保健食品功能评价的基本要求 1 对受试样品的要求 1.1应提供受试样品的原料组成或/和尽可能提供受试样品的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)有关资料。 1.2 受试样品必须是规格化的定型产品，即符合既定的配方、生产工艺及质量规范。 1.3 提供受试样品安全性毒理学评价的资料以及卫生学检验报告，受试样品必须是已经过食品安全性毒理学评价确认为安全的食品。功能学评价的样品与毒理学评价、卫生学检验的样品必须为同一批次（安全性毒理学评价和功能学评价实验周期超过受试样品保质期的除外）。 1.4 应提供功效成分或特征成分、营养成分的名称及含量。 1.5 如需提供受试样品违禁药物检测报告时，应提交与功能学实验同一批次样品的违禁药物检测报告。 2 对实验动物的要求 2.1 根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。 2.2 动物的性别、年龄依实验需要进行选择。实验动物的数量要求为小鼠每组10－15只（单一性别），大鼠每组8－12只（单一性别）。 2.3 动物应符合国家对实验动物的有关规定。 3 对给受试样品剂量及时间的要求 3.1 各种动物实验至少应设3个剂量组，另设空白对照组，必要时可设阳性对照组。剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍（特殊情况除外），受试样品的功能实验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。 3.2 给受试样品的时间应根据具体实验而定，一般为30天。当给予受试样品的时间已达30天而实验结果仍为阴性时，则可终止实验。 4 对受试样品处理的要求 4.1 受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。 4.2 对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。 4.3 液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60-70℃减压进行浓

15增强免疫力的功能性食品

第十五章增强免疫力的功能性食品 本章要点 1.免疫的基本概念 2.具有增强免疫力功能的物质 第一节概述 在生物进化过程中，免疫系统出现于脊椎动物身上并趋于完善。免疫是指机体接触“抗原性异物”或“异己成分”的一种特异性生理反应，它是机体在进化过程中获得的“识别自身、排斥异己”的一种重要生理功能。免疫系统对维持机体正常生理功能具有重要意义。与免疫有关的功能食品是指具有增强机体对疾病的抵抗力、抗感染、抗肿瘤功能以及维持自身生理平衡的食品。 一、免疫的基本概念 （一）免疫系统 机体识别自我与非我的作用，通过免疫应答反应来排斥非我的异物，以维护自身稳定性的生物学功能即为免疫。机体的免疫系统就是通过这种对自我和非我物质的识别和应答，承担着三方面的基本功能： 1. 免疫防护功能 指正常机体通过免疫应答反应来防御及消除病原体的侵害，以维护机体健康和功能。在异常情况下，若免疫应答反应过高或过低，则可分别出现过敏反应和免疫缺陷症。 2. 免疫自稳功能 指正常机体免疫系统内部的自控机制，以维持免疫功能在生理范围内的相对稳定性，如通过免疫应答反应清除体内不断衰老、颓废或毁损的细胞和其他成分，通过免疫网络调节免疫应答的平衡。若这种功能失调，免疫系统对自身组织成分产生免疫应答，可引起自身免疫性疾病。 3. 免疫监视功能 指免疫系统监视和识别体内出现的突变细胞并通过免疫应答反应消除这些细胞，以防止肿瘤的发生或持久的病毒感染。在年老、长期使用免疫抑制剂或其他原因造成免疫功能丧失时，机体不能及时清除突变的细胞，则易发生肿瘤。 （二）天然免疫与获得性免疫 机体的免疫功能包括天然免疫（非特异性免疫）和获得性免疫（特异性免疫）两部分。天然免疫是机体在长期进化过程中逐步形成的防御功能，如正常组织（皮肤、粘膜等）的屏障作用、正常体液的杀菌作用、单核巨噬细胞和粒细胞的吞噬作用、自然杀伤细胞的杀伤作

保健食品增强免疫力的评价方法

保健食品增强免疫力的评价方法 一、实验内容： 1.细胞免疫 2.体液免疫 3.非特异性免疫功能 4.NK细胞活性 二、评价指标 1.体重和免疫脏器重量的测定： 称量实验动物在实验的初，中，终期的体重，测量胸腺和脾脏重量，评价受试动物的一般情况，脏器/体重比，包括胸腺/体重比，脾脏/体重比 2.细胞免疫功能测定： 1)小鼠脾淋巴细胞转化实验 2)迟发性超敏反应（DTH） 3.体液免疫功能 1)抗体生成细胞检测 2)血清溶血素测定 4.单核/巨噬细胞功能测定 1)小鼠廓清实验 2)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 5.NK细胞活性测定 三、动物选择 1.正常或免疫功能低下的模型动物进行实验。 2.一般选择小鼠，品系不限，推荐使用近郊系动物，性别为单一性，6-8W，体 重18-22g。 3.动物数量每组10-15只，清洁级以上。

四、实验剂量 1.至少设3个剂量组，另设空白对照组，也可加阳性对照组。 2.尽可能找出最低有效剂量。 3.3个剂量中，有1个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂 量）的10倍 4.最高剂量不得高于人体推荐摄入量的30倍 5.剂量必须在毒理学评价的安全剂量范围内 五、实验时间 一般30天 六、结果判定 1.细胞免疫功能 小鼠脾淋巴细胞转化实验和DTH反应实验结果均为阳性，或其中一个实验的两个剂量组结果阳性，则可判定样品具有增强细胞免疫作用 2.体液免疫功能 抗体生成细胞实验和血清溶血素测定如结果均为阳性，或其中一个实验的2个剂量组结果阳性，可判定具有增强体液免疫作用。 3.单核/巨噬细胞功能实验 小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果均为阳性，或其中一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定具有增强非特异性免疫作用 4.NK细胞活性 一个以上剂量组结果阳性，可判定具有增强NK细胞活性作用 5.在1-4项实验中，若有2个功能检测呈阳性（其中1，2，3应在以上单项功 能判定的基础上），可判定该样品具有增强免疫作用。 6.对1-4任何一项实验，具有抑制作用，可判定该样品具有免疫抑制效应。 七、实验方法 1. 细胞免疫

什么食物有助于增强人体免疫力

什么食物有助于增强人体免疫力现在人们的生活水平越来越高，肯定都希望自己有一个好的身体。但是，很多人身体免疫力比较低，就很容易生病，无论是大病或者是小病，给生活产生的影响还是较大的。鉴于这种情况，我们可以采取适当的食补方法进行补救。那么，什么食物有助于增强人体免疫力?下面咱们就来看看有关情况吧。 1、接骨木 十五种可以提高免疫力的食物Gg.jpg 用接骨木浆果提取物抗感冒一项古老的民间偏方，最近科学研究也证明了这点(接骨木可以抗感冒)。小规模人类研究结果表明接骨木有助于促进感冒的康复。但是科学家们警告说(这)还需要进一步研究。接骨木浆果含有丰富抗氧化剂，也具有抗感染的作用。 2、白蘑菇 不要看蘑菇长不高就认为没有营养。蘑菇中含有矿物质硒和抗氧化剂。体内硒水平过低常常使重感冒的加重风险增加。在蘑菇中还含有B族维生素核黄素和烟酸，这些维生素在维持免疫系统健康发挥重要作用。 动物实验也表明白蘑菇具有抗病毒，抗菌，抗肿瘤的作用。 3、巴西紫莓 虽然种植上和蓝莓没什么两样，但是销售上却是超级食品，巴西紫莓其暗淡的颜色表明其抗氧化物花青素含量很高。虽然巴

西莓并与一些特殊疾病并没有关联或者具有抗病能力，其内的抗氧化物有助于抗衰老和抗病。巴西紫莓可以榨汁，和牛奶混合或者晾干加到燕麦卷里。 4、牡蛎 十五种可以提高免疫力的食物vf.jpg 由于牡蛎中含有矿物质锌。男性不育与体内锌含量偏低有关。而锌还可以抗病毒，然而学者们却不能解释原因。但是目前已发现锌与免疫系统的若干功能有关，其中包括伤口愈合。 5、西瓜 熟西瓜同样含有大量功能强大的抗氧化物谷胱甘肽，具有保湿和提神的作用。由于其有助于加强免疫系统的功能，所以可以抗感染。谷胱甘肽位于靠近瓜皮的红壤处。 6、卷心菜 卷心菜是富含谷胱甘肽(具有免疫增强功能)的另一植物。在当令时，卷心菜在冬季也很容易获得，而且不贵。把各种各样的卷心菜(白的，紫的，中国的)加到汤里，慢慢炖，可以让抗氧化物释放入汤中，从而增加食物的营养价值。 7、杏仁 一把杏仁可以增进你的免疫系统的抗压能力。推荐1/4杯份量的杏仁含有的维他命E几乎占日需要量的一半，维生素E可以增加免疫力。杏仁含有的核黄素和烟酸，B族维生素同样有助于抗击压力。 有关什么食物有助于增强人体免疫力的介绍，大家应该清楚了吧。增强人体免疫力的方法有很多，无论是选择什么食物，最

(完整版)临床免疫学检验知识点

临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。 B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T细胞的标志是CD4；杀伤T细胞的标志是CD8；T细胞受体=TCR。 T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋CD4＋CD8－ = 辅助性T细胞（Th） CD3＋CD4－CD8＋ = 细胞毒性T细胞（Tc或CTL）（T细胞介导的细胞毒试验） CD4＋CD25＋ = 调节性T细胞（Tr或Treg） T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。 T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验； 6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志：CD16（ADCC）、CD56。 测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS，表面标志CD14，包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sIg，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mIg，作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL（高变区）是抗原结合部位。

-保健食品各功能需要做的动物及人体试验

保健食品各功能需要做的动物及人体试验功效成分或标志性成分检测、卫生学试验、稳定性试验、复核检验 （一）只要求动物实验的项目有： 1. 增强免疫力功能检验方法 主要指标：细胞免疫功能 体液免疫功能 单核－巨噬细胞功能 NK细胞活性测定 判定：四项指标中任两项结果阳性。 注意事项：不认可增强单项免疫力功能。 2. 改善睡眠功能检验方法 主要指标：戊巴比妥纳睡眠时间实验 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验判定：3项实验中任2项阳性，且直接睡眠作用。 注意事项：对动物进行直接睡眠实验时，也要同样注意进行30天灌胃。 3. 缓解体力疲劳检验方法 主要指标：血乳酸 血清尿素 肝糖原/肌糖原 动物负重游泳实验 判定：负重游泳实验结果阳性，血乳酸曲线下面积、血清尿素、肝糖/肌糖原3项生化指标中任2项指标阳性。 注意事项： （1）对同批受试样品进行违禁药物的检测。 （2）在负重游泳实验时，酒类样品测试当天可以不灌胃。 4. 提高缺氧耐受力功能检验方法 主要指标：常压耐缺氧实验 亚硝酸钠中毒存活实验 急性脑缺血性缺氧实验 判定：三项试验中任二项实验结果阳性。 注意事项：每批实验动物的体重尽量保持一致。 5. 对辐射危害有辅助保护功能检验方法 主要指标：外周血白细胞计数 骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数 小鼠骨髓细胞微核实验 血/组织中SOD活性实验 血清溶血素含量实验 判定：以上5项实验中任3选项进行实验，3项实验中任何2项实验结果阳性。 注意事项：选用小鼠，受试样品于照射前给予14～30天，照射后仍然给予

受试物，必要时可延至45天。 6. 增加骨密度功能检验方法 根据受试样品作用的原理不同，分为方案一（补钙为主的受试物）和方案二（不含钙或不以补钙为主的受试物）两种。 主要指标：体重 骨钙含量 骨密度 判定：（方案一）骨钙含量/骨密度显著高于低钙对照组且不低于相应剂量的碳酸钙对照组，钙的吸收率不低于碳酸钙对照组。 （方案二）①不含钙的产品：骨钙含量/骨密度较模型对照组明显增加，其它指标（体重除外）不显著低于卵巢切除＋溶剂组。②不以补钙为主（可少量含钙）的产品：骨钙含量/骨密度较模型对照组明显增加，差异有统计学意义，且不低于相应剂量的碳酸钙对照组，其它指标（体重除外）不显著低于卵巢切除＋溶剂组。 注意事项： （1）使用未批准用于食品的钙的化合物，除必做主要指标外，还必须进行钙吸收率的测定；使用属营养强化剂范围内的钙源及来自普通食品的钙源可以不进行钙的吸收率实验。 （2）必须使用单光子骨矿密度仪或双能X线骨密度仪或其它相关仪器测量股骨中点及股骨远心端的单位面积骨矿含量。 7.对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法 根据样品的用途进行选择，方案一（四氯化碳肝损伤模型）和方案二（酒精肝损伤模型） 方案一 主要指标：谷丙转氨酶+谷草转氨酶+肝组织病理学检查 判定：模型成立的前提下，ALT或AST任一项指标阳性，病理结果阳性。 方案二 主要指标：丙二醛+还原型谷胱甘肽+甘油三酯+肝组织病理学检查 判定：满足以下任一条件，可判定该受试物具有对酒精性肝损伤有辅助性保护作用①肝脏MDA、GSH、TG三项指标结果阳性；② 肝脏MDA、GSH、TG三指标中任2项指标阳性，且肝脏病理结果阳性。 注意事项：报告中需提供列表详细描述肝脏病理情况。 （二）只要求人体实验的项目有： 1. 缓解视疲劳功能试验 受试对象：为儿童、青少年或成人，长期用眼，视力易疲劳者。排除患有眼部疾病者、短期内服用与受试物功能有关的物品者或长期服用其它有关治疗视力的药物或使用其它治疗方法者。 要求：考虑年龄、性别等因素，进行均衡性检验。 2. 祛痤疮功能试验 受试对象：选择临床痤疮I－III度的自愿健康受试者，排除因病理性原因及妊娠及哺乳期妇女。 要求：

十五种可以提高免疫力的食物

十五种可以提高免疫力的食物 发表时间：2010-10-31 发表者：张春来(访问人次：2517) 1.接骨木 用接骨木浆果提取物抗感冒一项古老的民间偏方，最近科学研究也证明了这点(接骨木可以抗感冒)。小规模人类研究结果表明接骨木有助于促进感冒的康复。但是科学家们警告说（这）还需要进一步研究。接骨木浆果含有丰富抗氧化剂，也具有抗感染的作用。 2.白蘑菇 不要看蘑菇长不高就认为没有营养。蘑菇中含有矿物质硒和抗氧化剂。体内硒水平过低常常使重感冒的加重风险增加。在蘑菇中还含有B族维生素核黄素和烟酸，这些维生素在维持免疫系统健康发挥重要作用。 动物实验也表明白蘑菇具有抗病毒，抗菌，抗肿瘤的作用。 3.巴西紫莓 虽然种植上和蓝莓没什么两样，但是销售上却是超级食品，巴西紫莓其暗淡的颜色表明其抗氧化物花青素含量很高。虽然巴西莓并与一些特殊疾病并没有关联或者具有抗病能力，其内的抗氧化物有助于抗衰老和抗病。巴西紫莓可以榨汁，和牛奶混合或者晾干加到燕麦卷里。 4.牡蛎 ***还是提高免疫的食物？也许都是。由于牡蛎中含有矿物质锌。男性不育与体内锌含量偏低有关。而锌还可以抗病毒，然而学者们却不能解释原因。但是目前已发现锌与免疫系统的若干功能有关，其中包括伤口愈合。 5.西瓜 熟西瓜同样含有大量功能强大的抗氧化物谷胱甘肽，具有保湿和提神的作用。由于其有助于加强免疫系统的功能，所以可以抗感染。谷胱甘肽位于靠近瓜皮的红壤处。 6.卷心菜 卷心菜是富含谷胱甘肽（具有免疫增强功能）的另一植物。在当令时，卷心菜在冬季也很容易获得，而且不贵。把各种各样的卷心菜（白的，紫的，中国的）加到汤里，慢慢炖，可以让抗氧化物释放入汤中，从而增加食物的营养价值。 7.杏仁 一把杏仁可以增进你的免疫系统的抗压能力。推荐1/4杯份量的杏仁含有的维他命E几乎占日需要量的一半，维生素E可以增加免疫力。杏仁含有的核黄素和烟酸，B族维生素同样有

实验三十四增强免疫力功能试验

实验三十四增强免疫力功能试验 一、实验目的与要求 1 熟悉动物实验的操作技术与要求； 2 掌握保健食品增强免疫力功能检验与评价的方法。 二、实验原理 1 免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是指身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。健全的免疫系统主要有三大功能： （1）防御功能——保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病；（2）稳定清洁功能——不断清除衰老死亡的细胞，保持体内的净化更新； （3）监控功能——及时识别和清除染色体畸变或基因突变的细胞，防止肿瘤和癌变的发生。 2 机体的免疫力功能包括细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面，通过检测动物实验后免疫系统的变化来判断样品是否具有增强免疫力的功能。 三、实验仪器与试剂 1 仪器 （1） 200目筛网； （2） 24孔培养板； （3） 96孔培养板（平底）； （4）玻片架； （5）微量血凝实验板； （6）血色素吸管； （7）手术器械； （8）打孔器； （9）计时器； （10）二氧化碳培养箱； （11）超净工作台； （12）恒温水浴； （13）离心机； （14）酶标仪； （15） 721型分光光度计； （16）显微镜。 2 试剂 （1）生理盐水； （2）丙酮； （3）甲醇； （4）盐酸； （5）异丙醇； （6） DNFB； （7）麻油； （8）硫化钡； （9） Na2CO3； （10） RPMI1640细胞培养液； （11）小牛血清； （12） 2巯基乙醇（2ME）； （13）青霉素；

（14）链霉素； （15）刀豆蛋白A（ConA）； （16） Hank s液； （17） PBS缓冲液（pH7.2~7.4）； （18） SA缓冲液； （19）琼脂糖； （20）印度墨汁； （21） SRBC； （22）鸡红细胞； （23） YAC1细胞； （24）补体（豚鼠血清）； （25） MTT； （26） Giemsa染液； （27）乳酸锂或乳酸钠； （28）硝基氯化四氮唑（INT）； （29）吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）； （30） NAD； （31） 0.2mol/L的TrisHCl缓冲液（pH8.2）； （32） 1%NP40或2.5%Triton。 四、实验方法与步骤 1 样品处理与给予方式 （1）对于水溶性样品，用蒸馏水配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物；对于脂溶性样品，用调和油配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物。 （2）受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。 （3）对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。 （4）液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60~70℃减压进行浓缩。浓缩的倍数依具体实验要求而定。 （5）对于以冲泡形式饮用的受试样品（如袋泡剂），可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件：常压，温度80~90℃，时间30~60min，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。 （6）必须经口给予受试样品，首选灌胃。如无法灌胃则加入饮水或掺入饲料中，计算受试样品的给予量。 （7）以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。 2 动物实验 （1）动物选择：推荐用近交系小鼠，20g±2g，单一性别，每组10~15只。 （2）剂量分组：实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设阳性对照组。 （3）样品给予时间：所有试验动物均食用全价营养配合饲料，动物自由摄食、摄水。给

提高免疫力的研究

提高免疫力的研究 摘要：人要有一个好的免疫力才能有一个好的身体，才能更好的投入工作中这篇论文主要才介绍免疫力、免疫力降低的原因和症状与如何提高免疫力等几个方面阐述出如能能更好的去在身体条件良好的情况下提高免疫力。 关键词：免疫力提高食品健康 21世纪是一个快节奏的时代，年轻忙着时间学习在高速的时间运转中生活，上班族在赶忙的的工作节奏中生活，中年人在家庭与事业中忙碌。只有到老年了，才能安详的静坐在庭院中，但是那时的身体机能已经不堪重负，抵抗力与免疫力每况愈下。所以在现在的日常生活中我们就应该更注重自身的免疫力，这篇论文，我就用我微薄的知识浅析现在的我们应该如何提升免疫力。 在讲如何提升免疫力的同时，我们应该先从最基本的说起：什么是免疫力，免疫力对我们有什么影响。免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等）；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。人体内执行这一功能的是免疫系统。数百万年来，人类生活在一个既适合生存又充满危险的环境，人类得以存续，也获得了非凡的免疫力。所以说免疫力是生物进化过程的产物。 现在我们的生活环境与生活条件都如此的优越，又是什么会导致我们的免疫力日益的下降？你是不是觉得每日的食物都很有营养，而且每日都在学习工作，并没有什么不良的嗜好，看似好好的生活为什么会使自己的免疫力下降，现在就来说说免疫力下降的原因。 1. 心理紧张。不安、焦急等心理劳累会给植物性神经造成不良的影响，而植物性神经和内分泌系统及免疫力系统有着紧密的联系，由于积劳造成的疾病往往是很难治愈的。 2. 肉体劳累。睡眠不足或过度劳累，会跟心理紧张一样加重植物性神经的负担，而且也会给内分泌系统及免疫系统带来不良的影响，从而造成免疫力下降。 3. 消极悲观。过于消极悲观的性格会造成免疫力降低，所以保持心情舒畅很关键。 4. 饮食失衡。饮食混乱、进食时间不规律。挑食等都会使提供人体免疫力系统所需的营养不足。 5. 运动不足。运动不足导致体力下降，体力跟不上就很难抵抗劳累，进而造成免疫力下降。 6. 过度抗菌。现在社会会给人们提供充足的抗菌药品和商品，但也不要过度清洁，人体的免疫系统一旦适应饿过于清洁的环境，那么免疫力就会下降。 7. 身体老化。随着年龄的增长，人生病后恢复较慢或容易患感冒，这是因为人体的免疫系统老化后不能有效发挥作用。 从上述的7点原因告诉我们原来造成免疫力低下可以很简单很容易，了解了造成免疫力降低的原因之后，应该看看免疫力低下的集中症状。在科学上把免疫力低下的症状分为三种，前两者属于病态，需要治疗。而生理性免疫低下一般不需要治疗。下面我就来简单的介绍一下这三种症状： 症状一：先天免疫力低下。先天免疫力低下，医学上也称为免疫缺陷，是由于组成免疫系统的某种或多种成分因为基因突变等因素而丧失了原有的功能呢个，发生免疫力低下，病情较为严重。这类疫病在免疫低下的孩子中比例较少，但病情较重，持续时间也较长。 症状二：后天继发性免疫力低下。这类症状不是由于其他因素引起的，这类疫病经过去除引起免疫力低下的病因后，免疫功能往往都可以恢复。引起后天继发免疫低下的原因常见于感染、药物、营养不良和其他某些疾病。

增强免疫力功能试验

增强免疫力功能试验 一、实验目的与要求 1熟悉动物实验的操作技术与要求； 2掌握保健食品增强免疫力功能检验与评价的方法。 二、实验原理 1免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是指身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。健全的免疫系统主要有三大功能： 1)防御功能——保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒以及避免发生疾病； 2)稳定清洁功能——不断清除衰老死亡的细胞，保持体内的净化更新； 3)监控功能——及时识别和清除染色体畸变或基因突变的细胞，防止肿瘤和癌变的发生。 2机体的免疫力功能包括细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面，通过检测动物实验后免疫系统的变化来判断样品是否具有增强免疫力的功能。 三、实验仪器与试剂 四、实验方法与步骤 样品处理与给予方式 （1）对于水溶性样品，用蒸馏水配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物；对于脂溶性样品，用调和油配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物。 （2）受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。

（3）对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。 （4）液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60~70℃减压进行浓缩。浓缩的倍数依具体实验要求而定。 （5）对于以冲泡形式饮用的受试样品（如袋泡剂），可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件：常压，温度80~90℃，时间30~60min，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。 （6）必须经口给予受试样品，首选灌胃。如无法灌胃则加入饮水或掺入饲料中，计算受试样品的给予量。 （7）以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。 动物实验 （1）动物选择：推荐用近交系小鼠，20g±2g，单一性别，每组10~15只。 （2）剂量分组：实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设阳性对照组。 （3）样品给予时间：所有试验动物均食用全价营养配合饲料，动物自由摄食、摄水。给予受试物的灌胃体积为20ml/（kg·Bw）。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天，免疫模型动物实验可适当延长。 指标检测 A ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法） 1)试剂配制 i完全培养液：RPMI1640培养液过滤除菌，用前加入10%小牛血清，1% Pen/Strep/Glutamine (100×, liquid)及5×10-5mol/L的β-巯基乙醇，用无菌的1mol/L的 HCl或1mol/L的NaOH调pH至7.0~7.2，即完全培养液。 ii ConA液：用双蒸水配制成100μg/ml的溶液，过滤除菌，在低温冰箱（-20℃）中保存。 iii无菌Hank’s液：用前以3.5%的无菌NaHCO3调pH7.2~7.4。 iv MTT液：将5mg MTT溶于1ml pH7.2的PBS中，现配现用。 v酸性异丙醇溶液：96ml异丙醇中加入4ml 1mol/L的HCl，临用前配制。 2)脾细胞悬液制备：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎， 制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，用Hank’s液洗2次，每次离心10min（1000r/min）。然后将细胞悬浮于1ml完全培养液中，用台酚蓝染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为3×106个/ml。 3)淋巴细胞增殖反应：将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA 液（相当于7.5μg/ml），另一孔作为对照，置5% CO2，37℃ CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混

免疫学检验复习题选择题

一、单选题(A1／A2型题) 1．最早将抗原抗体反应原理及方法应用于临床血清学诊断的学者是(A ) A．Widal B．Landsteiner C．KOhler D．ManciniE．Coons 2．下列各项用于反映B细胞功能的试验是( B) A。淋巴细胞转化B．血清免疫球蛋白检测C．迟发型超敏反应皮肤试验D．移动抑制试验E．CD3检测 3．对流免疫电泳的沉淀线出现在抗原抗体之间且靠近抗原孔可说明(B) A．抗原强阳性B．抗原弱阳性C．抗原阴性 D．抗体弱阳性E．抗体阴性 4。下列何种抗原是触发移植排斥反应的首要抗原(D) A．HLA-A、B 、C B．HLA-DP C．HLA-DQ D．HLA-DR E．HLA-D 5．人类MHC基因位于第几对染色体上(B ) A．第1对B．第6 对C．第9对D．第12 对E．第19 对 6．机体的免疫系统具有杀灭或排斥突变细胞功能称为(C ) A．免疫防御B.免疫自稳 C.免疫监视D.免疫应答 E.兔疫识别7．用异硫氰荧光色素(FITC)作标记时其激发光波长近于(D ) A．365nm B．435nm C．450mn D．490nm E．500nm 8.血清中含量最高的补体分子是( C) A．C1 B．C2 C．C3 D．C4 E．C5 9．检测不完全抗体可使用的凝集反应(D ) A．协同凝集反应B．间接凝集反应C．间接血凝试验 D．Coombs试验E．直接凝集反应

10．ELISA试验时易造成空白值增高的原因主要来自于(C ) A．加样不准B保温时间短C洗涤不彻底D比色误差E包被不好11．GVHR的中文全称为( B) A．宿主抗移植物反应B移植物抗宿主反应C补体依赖的细胞毒作用D．荧光偏振免疫分析E人类白细胞抗原 12．为提取高纯度特异性IgG通常采用的方法是(C) A．区带电泳B．凝胶过滤C．亲和层析D．选择性沉淀E．超速离心13．初次应答中首先产生的抗体是(C ) A．1gA B．IgG C．IgM D．IgE E．IgD 14．用于前列腺癌初筛的首选肿瘤标志物是(B ) A．AFP B．PSA C．CEA D．CAl9-9 E．HCG 15．不完全抗原的特点是(B ) A．仅具有免疫原性B仅具有反应原性C具有免疫原性及反应原性D．与抗体不产生沉淀反应E．不可能是病原微生物的产物16．化学发光的基本原理是发光物由于(D ) A．在一定波长激发光照射下发光B．在化学反应中获得能量而发光C．在电子激发态时发光D在电子激发态返回基态时释放能量而发光E．某物在化学反应中生成发光物而发光 17．组织相容性抗原指的是(C ) A．同种异型抗原B．隐蔽的自身抗原C同种移植抗原 D．有核细胞表面抗原E．N曾异性抗原