MP核酸检测试剂盒说明书

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肺炎支原体（MP ）核酸检测试剂盒（PCR 荧光法）说明书

【产品名称】

通用名称：肺炎支原体（MP ）核酸检测试剂盒（PCR 荧光法） 英文名称：PCR-Fluorescence Detection Kit for Mycoplasma Pneumonia

【包装规格】32人份/盒

【预期用途】本产品用于定性检测痰液或咽拭子中的肺炎支原体核酸。

肺炎支原体（M.Pneumonia ）是人类支原体肺炎的病原体，主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，支原体肺炎的临床表现和胸部X 线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X 线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。而病原体核酸检测是目前最为直接的检测手段。

适应症：由肺炎支原体感染引起的肺炎等疾病。

【检验原理】

本试剂盒选用肺炎支原体（MP ）保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA 模板发生特异性结合，在PCR 延伸反应过程中，Taq 酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对肺炎支原体核酸的自动化检测。

注: 不同批号试剂盒中各组份不可以互换。

【储存条件及有效期】试剂-20℃可保存12个月。 【适用仪器】

ABI7300、ABI7500荧光PCR 扩增仪。

【样本要求】

1. 标本：痰液及咽拭子。

2. 采集器：应当选用国家批准生产的一次性使用的咽拭子，拭子应当包括洁净海绵头、PP 杆、PP 杆与海绵头应连接牢固，经无尘清洗包装。

3. 采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。

a. 自然咳痰法 以晨痰为佳，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应大于等于1ml 。

b. 咽拭子取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，转动拭子取出粘液。 4.存放：2-8℃保存，不超过24小时；-20℃下保存，不超过3个月；-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。

5.运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。

【检验方法】

1. 样本处理(样本处理区)

a. 痰液中加4倍体积的生理盐水，用1ml 的枪头反复吹打后置4℃过夜，吸取1ml 至1.5ml 离心管中，12000rpm 离心5分钟。弃上清取沉淀加入50μl 核酸提取液，混匀后2000rpm 离心

10sec ，100℃水浴或干浴10min ，12000rpm 离心10min ，上清供PCR 扩增用。

b. 咽拭子标本试管中加入1ml 无菌生理盐水，充分震荡摇匀，吸取液体转至1.5ml 离心管中，12000rpm 离心5分钟。弃上清取沉淀加入50μl 核酸提取液，混匀后2000rpm 离心10sec ，100℃水浴或干浴10min ，12000rpm 离心10min ，上清供PCR 扩增用（如样本裂解产物当天不使用，请于-20℃保存）。

c. 阴性对照、阳性对照直接取出50μl ，加入50μl 核酸提取液，混匀后100℃水浴或干浴10min 。12000rpm 离心10min ，备用。

注意：核酸提取液内含固体沉淀颗粒物，为使颗粒均匀分布，每次取样时请用吸头反复吸打。 2. 试剂配制 (试剂准备区)

从试剂盒中取出MP 反应混合液，在室温下融化并振荡混匀后，2000rpm 离心10sec 。计算需准备样品数n 份[n=样本数+2管对照品]。每测试反应体系配制如下：

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计算上述各试剂的使用量，加入一适当体积的离心管中，充分混匀后，按36μl 量分装到PCR 反应管中，转移至样本处理区。

分别加入4μl 阴性对照、MP 阳性对照、样品处理上清液，盖紧反应管，转移至检测区。 3. PCR 扩增及荧光检测（PCR 检测区）

荧光通道检测选择：请选择FAM 通道 【检验结果的解释】

阈值设定原则以阈值线超过正常阴性对照品的最高点及线性最佳为准，在阈值以上的荧光曲线应当是具有明显的S 型曲线，阳性对照Ct 值应小于38，阴性对照Ct 值无数据，否则该次实验视为无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差。 1. 检测样本Ct 值≤38.0者判为阳性

2. 检测样本Ct 值﹥38.0的样本建议重做，重做结果Ct 值<40者为阳性,否则为阴性

【检验方法的局限性】

检测结果不能直接作为临床确诊或排除病例的依据，仅供临床医生参考使用。

【产品性能指标】

1． 灵敏度：本试剂盒的产品检测下限为1000copies/ml 。

2． 特异性：本试剂盒与肺炎衣原体、沙眼衣原体、解脲支原体等样本无交叉反应。 3． 精密度：一份弱阳性的标本连续重复10次检测，其CT 值的CV 值小于10％。

【注意事项】

1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理

规范执行。

2. 本试剂盒仅用于体外检测。

3. 实验室严格分区操作：

第一区：试剂准备区-准备扩增所需试剂。

第二区：样本处理区-待检测样本和对照品的处理。 第三区：PCR 检测区-PCR 扩增检测。

4. 各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。

5. 使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液枪和带滤芯吸头。

6. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄

露污染仪器。

7. 加样时应使样品完全加入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。 8. 扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待统一处理。 9. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%的次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭

菌后丢弃。

10. 工作台及各种实验用品应定期用1%的次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。 11. PCR 反应混合液应避光低温保存。

12. 不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。

【参考文献】

1． 《体外诊断试剂说明书编写指导原则》 2． 《临床实验室定量测定室内质量控制指南》 3． 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 4． Real time quantitative PCR. Genome Res. 6:986–994.

5． Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reaction.

Bio/Technology11:1026–1030。

6． Williams JF. Optimization strategies for the polymerase chain reaction. Biotechniques 1989,

7:762-768。

【生产企业】

企业名称：艾康生物技术（杭州）有限公司 地 址：杭州市天目山路398号 邮政编码：310023

电 话：0571-******** ；传真号码：0571-******** 网 址：https://www.wendangku.net/doc/8516579348.html,

【医疗器械生产许可证编号】浙食药监械生产许20120007号

【医疗器械注册证书编号】国食药监械（准）字2012第3400008号 【产品标准编号】YZB/国4947-2011

【说明书批准及及修改日期】2012.01.05