丙型肝炎检测方法的研究进展_尹秀华

丙型肝炎检测方法的研究进展

尹秀华

天津市宝坻区中医医院检验科　３０１８００

关键词　丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）引起的传染病，主要通过血液传播。我国平均感染率为３．２％。北方稍高，约为４．６％，南方为２．６％～２．９％，感染人数估计有３　７００万。受感染的母亲传播给婴儿的发生率为５％。丙肝是严重威胁人类健康的传染病之一，多数患者可以演变为慢性丙型肝炎，其中２０％左右可发展为肝硬化，肝硬化患者１０年内有大约３０％发展为终末期肝病，并且ＨＣＶ感染与原发肝癌有较密切关系。随着医学检测方法的不断进展，丙肝检测方法也有了很大的进展。本文对丙肝检测方法进行了综述。从胶体金法、ＥＬＩＳＡ法（丙肝抗体检测）、丙肝抗原检测和分子生物学的诊断几个方面进行阐述。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗－ＨＣＶ抗体、ＨＣＶ－ＲＮＡ等实验室指标为临床诊断依据。

关键词　ＣＶ　抗－ＨＣＶ　胶体金　ＨＣＶ－ＲＮＡ　ＥＬＩＳＡ　ＲＴ－ＰＣＲ

中图分类号：Ｒ５１２．６＋３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－７５８５（２０１３）０２－０１７１－０３

丙型肝炎病毒是单股正链ＲＮＡ病毒，属黄病毒科丙型肝炎属。ＨＣＶ基因组含有一个开放读码框（ＯＲＦ），编码１０余种结构和非结构（ＮＳ）蛋白，膜蛋白分布于病毒表面，ＮＳ３蛋白是一种多功能蛋白，氨基端具有蛋白酶活性，羧基端具有螺旋酶／三磷酸核苷酶活性；ＮＳ５Ｂ蛋白是ＲＮＡ依赖的ＲＮＡ聚合酶，均为ＨＣＶ复制所必需，是抗病毒治疗的重要靶位［１］。丙型肝炎呈世界性分布。丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是丙型肝炎的病原体，其致病机制主要是通过病理性免疫应答导致肝细胞损伤，它还有诱发原发性肝癌的可能［２］。据世界卫生组织统计，全球丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染率约为３％，每年新发ＨＣＶ病例约３１５万例［３］，而高度慢性化是该病的最大特征［４］。因此，控制ＨＣＶ感染的形势十分严峻，而早发现、早诊断和早治疗是防控ＨＣＶ传染源、阻断传播途径最为有效的手段。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗－ＨＣＶ抗体、ＨＣＶ－ＲＮＡ等实验室指标为临床诊断依据。现将ＨＣＶ感染实验室诊断进展综述如下。

１　ＨＣＶ的胶体金法检测

胶体金法快速检测技术是近年来发展起来的一种新技术。从１９８９年诞生至今，已被广泛应用于免疫检测的各个领域，具有简便、快速、标本用量少、不需仪器设备等优点。它采用特异性抗原抗体反应及免疫层析技术。对于Ｓ／ＣＯ（标本的测定值与临界值之间的比值）值较低的抗ＨＣＶ血清标本特异性低而易造成阴性结果。但是其有效性仍然值得肯定，其特异性、敏感性基本均达到ＥＬＩＳＡ水平，与国内相关报道一致［５］。它在急诊及临床应用中具有较强的优势，已在生物医学领域，尤其是医学检验得到广泛应用，可作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。金标法是一种操作简便、快捷、观察直观、省时的检测抗－ＨＣＶ的方法。虽然临床存在一定的假阴性和假阳性率，可能因环境因素和人为因素以及试

剂自身原因造成，但金标法仍可作为筛查丙型肝炎病毒抗体比较适合的方法推广应用，对于早期发现、预防和控制丙型肝炎，具有重要的临床价值和应用［６］。

２　ＥＬＩＳＡ法检测丙肝抗体

目前我国最常使用的检测丙肝抗体的方法就是ＥＬＩＳＡ法。它具有简单、快速、方便的特点，但对灰区结果判读的可靠性通常较差。ＥＬＩＳＡ试剂为筛检试剂，存在一定数量的假阴性和假阳性结果，在ＨＣＶ流行率低的人群中，如无偿献血者抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂的假阳性和假阴性问题都一直比较突出［７，８］。ＥＬＩＳＡ在检测过程中影响因素诸多如类风湿因子、高免疫球蛋白血症、标本中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的干扰、用于固相包被的ＨＣＶ基因工程抗原不纯等均可造成假阳性结果［９］。在检测过程中影响因素也很多如加样时间过长、检验速度过快、洗板等均可造成假阳性结果［１０］。目前国产和进口ＨＣＶ抗体检测ＥＬＩＳＡ试剂盒各批次试剂的国家生物制品质量检定结果比较其灵敏度、阴性符合率、阳性符合率结果相似，难分优劣，均达到国家标准。国产试剂实验操作相对简单，物流周期短，有效期长，价格合理，更适合于临床［１１］。丙肝抗体检测特异性和灵敏度高，是目前医院输血前／术前血检中检测丙肝的主要方法，在日常输血前／术前常规检测中，ＥＬＩＳＡ法检测丙肝抗体具有重要的临床价值。近年来酶联免疫反应加速仪的应用将替代常规温育法，酶联免疫反应加速仪具有加速抗原抗体反应的作用，在缩短工作时间的基础上，可以提高ＥＬＩＳＡ检测的灵敏度，有利于临床“灰区”标本结果的正确判读，对临床正确、快速诊断，避免漏诊有很大的积极意义［１２］。

３　ＨＩＶ核心抗原检测

ＨＣＶ主要的抗原有Ｃ、Ｅ１、Ｅ２、ＮＳ２、ＮＳ３、Ｎｓ４、ＮＳ５等，其中核心抗原（ｃＡｇ）是由ＨＣＶ基因组中保守部位编码而来，该抗原的相关研究是近年

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来的热门课题。核心蛋白可以和ＮＳ３、ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ｂ蛋白共同诱导成熟树突状细胞凋亡，从而抑制宿主的细胞免疫应答；ＨＣＶ核心蛋白与肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）受体以及淋巴毒素Ｂ受体结合亦可以调控细胞凋亡，从而参与免疫应答的调控；赵景民等研究了慢性丙型肝炎肝组织ＣＰＰ３２蛋白酶、Ｆａｓ、ＦａｓＬ的表达发现慢性丙型肝炎肝组织中除了Ｆａｓ、ＦａｓＬ表达上调外，ＣＰＰ３２蛋白酶及其ＲＮＡ也平行上调。他选择了６５例中４０例经免疫组化检测ＨＣＶ抗原阳性的肝细胞，通过连续免疫组织化学和原位杂交，分析发现，ＣＰＰ３２和Ｆａｓ蛋白酶及其ＲＮＡ主要在ＨＣＶ　ｃＡｇ阳性的肝细胞内表达，而在单纯ＮＳ３或ＮＳ５阳性的肝细胞中则表达较少，另外ＦａｓＬ阳性的单个核细胞也呈一定程度的平行表达，这一结果提示ｃＡｇ与ＣＰＰ３２和Ｆａｓ蛋白酶及其ＲＮＡ的表达有一定的相关性。

ＨＣＶ一般通过被污染的血液和血液制品传播，尽早检出ＨＣＶ感染者是实现丙型肝炎早期诊断、阻断ＨＣＶ传播的重要途径。利用重组ＨＣＶ抗原开发的抗ＨＣＶ抗体检测技术，目前检测的特异性已高达９９％以上。但是在ＨＣＶ感染后至抗ＨＣＶ抗体产生之前还有一段较长时期约４０～７０ｄ，称为感染后血清阳转前的窗口期。ＨＣＶ核心抗原作为ＨＣＶ感染者体内出现的早期感染的标志，几乎与ＨＣＶ－ＲＮＡ同时出现。一般情况下，丙型肝炎病毒感染者在感染后数周内血清ＨＣＶ抗原出现，在ＨＣＶ感染后至抗ＨＣＶ抗体产生之前还有一段感染后血清阳转前的窗口期（ＰＷＰ）ＨＣＶ，核心抗原的平均检出时间只比ＨＣＶ－ＲＮＡ晚约１ｄ。ＨＣＶ抗原检测耗时短，方法与常规酶免疫实验相似，不用添加仪器设备，大大缩短了窗口期。但是，当机体出现抗ＨＣＶ抗体之后，体内ＨＣＶ核心抗原和抗体相结合，抗原检出率降低或不能检出。因此，ＨＣＶ核心抗原可应用于ＨＣＶ感染早期诊断［１３］。此法可以作为补充检测，但受检测方法、仪器等条件限制，灵敏度较差。

４　核酸ＲＮＡ的检测

ＨＣＶ感染后一般到抗体转阳有一个较长的窗口期，约ｌ％～３％的患者抗－ＨＣＶ可持续阴性，而基因组的复制出现得很早，感染后数天即出现病毒血症，已有输血后即有丙型肝炎病毒感染发生的报道。ＨＣＶ－ＲＮＡ检测大约在１～２周内就能检测出患者是否患有丙肝病毒感染，大大的缩短了窗口期。它的检测分两种方法即定性和定量检测。由于ＨＣＶ为ＲＮＡ病毒，因此通常应用ＲＴ－ＰＣＲ在体外进行病毒扩增，做定性或定量检测。近几年发展起来的ＰＣＲ技术主要有荧光定量ＰＣＲ、竞争性定量ＰＣＲ和交替定量ＰＣＲ等，这些技术可以监控ＨＣＶ在体内的复制情况，为慢性ＨＣＶ患者的病情诊断和疗效评价提供了依据。实时荧光定量ＰＣＲ（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ）也可以对血清中ＲＮＡ做定量检测，并以此作为临床治疗ＨＣＶ的一项观察指标，但也有报道认

为其虽然可以做出早期诊断，但敏感性仍有待提高。为了保证临床用血的安全性，国外已有国家将ＨＣＶ核酸的检测作为常规项目。罗氏诊断（Ｒｏｃｈｅ　ｉａｇ－ｎｏｓｔｉｃｓ）Ａｍ－ｐｌｉｃｏｒ　ＨＣＶ　Ｔｅｓｔ（ｖｅｒｓｉｏｎ　２．０）的检测原理是应用ＰＣＲ扩增技术直接检测病毒ＲＮＡ，并且采用国际单位来报告分析检测的敏感性，其操作步骤简单，可以满足批量检测的需要。而ＨＣＶ核酸检测并非都须依赖ＰＣＲ扩增技术。Ｃｈｉｒｏｎ公司推出的支链ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）技术就是一种不依赖ＰＣＲ的核酸放大定量方法。先将血清ＨＣＶ－ＲＮＡ与包被在固相板上的探针杂交，固定后加入多个靶探针分别与ＨＣＶ－ＲＮＡ　５’ＵＴＲ的核心抗原区的不同位点杂交，放大信号数１０倍，然后加入ｂＤＮＡ扩增子，与各靶探针结合，每个扩增子提供多个酶探针结合位点，这样每个核酸信号得以放大数百倍，最后通过底物发光检测，ＤＮＡ量与发光强弱成正比。ｂＤＮＡ技术的最大特点是不需经过呈指数增长的扩增过程，只需将待检测病毒裂解使核酸释放，并转化为单链进行检测，因此其稳定性和重复性均较高。但由于其放大倍数有限，故对低水平ＨＣＶ－ＲＮＡ检测的敏感性仍有待提高。ＨＣＶ－ＲＮＡ特异性高，当需要对可疑丙肝病毒感染患者标本做确证实验时发挥重要作用［１４］。双探针实时荧光定量法检测ＨＣＶ－ＲＮＡ可以提高其检测的灵敏度和特异性［１５］。丙型肝炎病毒抗体、抗原和ＲＮＡ的联合检测已成为ＨＣＶ感染诊断的主要指标，缩短了窗口期，有利于丙肝患者早期诊断和治疗。

５　ＨＣＶ基因检测

ＨＣＶ容易发生感染病引起慢性肝病的原因就源于病毒基因变异组的高度变异性。Ｓｉｍｍｏｎｄｓ将其分为６个基因型。不同基因感染和预后差别很大。有多种分子生物学检测方法例如：核苷酸测序法、型特异性引物扩增法、基因芯片法、型特异性探针杂交法、限制性片段长度多肽性分析法、遗传发育关系进化树等。血清学基因型在大规模的流行病学调查中具有低污染率、危险性小、操作简便的优点。但其特异性和敏感性有局限。国内有学者报道应用限制性长度多态性分析研究ＰＢＭＣｓ和血浆中ＨＣＶ基因型的相关性和慢性化的关系发现，ＨＣＶ感染人体后，不仅在血浆中，而且在ＰＢＭＣｓ中都可以检测到ＨＣＶ－ＲＮＡ，另外ＨＣＶ　１ｂ型比ＨＣＶ２ａ型更易感染ＰＢＭＣｓ，ＨＣＶ　１ｂ型感染者也更容易出现慢性持续性感染，以至最终发展为肝硬化。国内也有将基因芯片技术运用于ＨＣＶ分型，此技术可以克服传统的抗－ＨＣＶ检测窗口期比较长，ＲＴ－ＰＣＲ检测不能进行基因分型的缺点，但由于其技术成本高、操作较复杂而在临床应用中受限［１６］，但其在ＨＣＶ分型和诊断中仍有广阔的发展前景。

６　丙肝抗体其他免疫学检测方法

重组免疫印迹法（ＲＩＢＡ）是ＨＣＶ感染的确证试验，主要解决ＥＬＩＳＡ试验中的假阳性问题。随着检测技术的提高出现的第三代ＥＩＡ，其敏感性与特

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异性均有很大提高，对于ＥＩＡ阳性者，ＲＩＢＡ并不能提供更多的有关ＨＣＶ感染的信息。对于ＥＩＡ弱阳性者，ＲＩＢＡ可为阳性、不能确定或为阴性，无助于诊断，从费用－效益角度考虑，临床诊断ＨＣＶ感染ＥＩＡ检测即可，没有必要再用ＲＩＢＡ试验证实。此技术也可应用于ＨＣＶ血清型分型，但印迹这一操作较复杂，限制了这项技术在临床上的普遍使用。斑点免疫渗滤试验（ＤＩＦＡ）和斑点免疫层析试验（ＤＩＣＡ）用于抗ＨＣＶ快速检测。ＤＩＦＡ是将抗原固定在滤纸上，向滤纸滴加样品液，待渗入后再滴加酶标抗体，最后滴加底物溶液，根据滤纸上是否出现斑点判断结果。在ＤＩＦＡ基础上发展了ＤＩＣＡ，采用试纸条的形式，各种试剂均固定在试纸条上，检测时将样品滴加在试纸条的一端，将样品端放入一种溶液中进行“层析”，一段时间后根据试纸条上的显色情况判断结果。

化学发光技术和荧光酶免疫技术操作烦琐，一般用于科研。蛋白芯片目前正处于研究阶段。ＨＣＶ各种检测方法各有利弊，ＨＣＶ－ＲＮＡ，ＨＣＶ－Ａｂ，ＨＣＶ－Ａｇ联合检测有利于提高ＨＣＶ的检出率，对临床疑似ＨＣＶ感染的患者可先初筛ＨＣＶ－Ａｂ、ＨＣＶ－Ａｇ，初筛阳性则用ＨＣＶ－ＲＮＡ进行确认，并对确认ＨＣＶ阳性的患者进行抗病毒疗效监测，协助临床对ＨＶＣ感染者早发现，早治疗［１７］。

参考文献

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收稿日期２０１２－０７－０６

（编辑　落落

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（上接第１６５页）

６　细胞治疗

蛋白质、多肽类药物不能透过血脑屏障且易被体内酶降解和代谢。目前兴起的细胞治疗给药有助于克服这些缺点。细胞治疗就是把细胞移植到脑内，以细胞为药源不断释放药物到中枢神经系统病变靶组织中支。目前主要有直接细胞移植治疗和聚合物包封的细胞移植治疗两种基本给药方式［１４］。

总之，脑靶向药物的研发已经成为治疗中枢神经系统疾病药物研发的热点和趋势。随着细胞生物学和分子生物学的进展，从分子水平、细胞水平、器官水平乃至整体水平对脑及整个神经系统，特别是血脑屏障的结构、功能、生化、病理等方面进行深入研究，随着对血脑屏障进一步的认识，脑靶向给药必将日臻完善。

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收稿日期２０１２－０７－２７

（编辑　紫苏）

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氯离子扩散系数测定方法492法

混凝土氯离子扩散系数快速测定方法 北欧试验方法 NT BUILD 492 中交武汉港湾工程设计研究院有限公司

氯离子扩散实验—北欧实验方法 NT BUILD 492 1.范围 本过程可以从非稳态迁移实验确定混凝土、砂浆或者水泥基修补的材料中氯化物的迁移系数. 2.适用领域 本实验方法适用于在实验室中成型或者从建筑物上钻取的试样.氯离子迁移系数的方法是测量被测材料对氯离子渗透的电阻.这种非稳态下的迁移系数不能直接与从其他实验方法获得的氯化物的扩散系数相比较,例如非稳态下的浸渍实验或者稳态下的迁移实验. 3.参考文献 ① NT BUILD 201,“Concrete:Making and curing of moulded test specimens for strength tests”,2nd ed.,Approved 1984-05. ②NT BUILD 202,“Concrete,hardened:Sampling and treatment of cores for strength tests”,2nd ed.,Approved 1984-05. ③NT BUILD 208,“Concrete,hardened:Chloride content”,2nd ed.,Approved 1984-05. ④Tang,L and Soensen,H.E.,“Evaluation of the Rapid Test Methods for Chloride Difficient of Concrete,NORDTEST Project No.1388-98”,SP Report 1998:42,SP Swedish National Testing and Research Institute,Boras,Sweden,1998. 4.定义 迁移:离子在外加电场作用下的运动. 扩散:分子或离子在浓度梯度的作用下的一种运动,确切的说是化学电势,即从一个高的浓度区到一个底的浓度区. 5.取样 该实验方法需要直径为100mm、厚度为50mm的圆柱形试样,该试样可以从成型的圆柱试件上或至少为100mm的芯样上切割得到.该圆柱形或芯样应该各自满足在NT BUILD 201和NT BUILD 202中所描述的条件.在实验中需要三个试件. 6.实验方法 6.1原理 在试件的轴向上利用外部的电势能迫使试件外部的氯离子向试件内部迁移。经过一段时间后，将该试件沿轴向方向劈裂，在新劈开的断面上喷射硝酸银溶液，从生成的可见的白

精选-乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序

乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP） 测定标准操作程序 编写者：宿金涛 日期：2012年3月1日 一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。 HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBeAg抗体反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBeAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。这条带是HBeAg抗体-HBeAg-HBeAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。无论HBeAg抗体是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBeAb,HBcAb检测试剂才有竞争抑制法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。

丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定

一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG 抗体测定的结果准确有效。 二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒 IgG抗体。 三、临床意义 丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7 亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。 丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。 四、方法原理 本试剂盒采用间接法原理进行检测。以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。 五、标本的采集与处理 5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

化学发光法检测肝炎病毒结果解读

化学发光法检测肝炎病毒的结果解读 肝炎病毒感染是一个全球性的健康问题，根据美国疾病控制中心的报告，全球有将近20亿的感染人群。其中3.5亿人为慢性持续性感染。另外，全球有近3/4的人居住高流行区域，其中也包括中国。因此，有效的肝炎病毒检测和筛查显得十分重要。 化学发光法检测肝炎病毒，在方法上提高了病毒检测的灵敏度和特异性，而且流量检测，快速、方便，并逐渐替代ELISA，成为肝炎病毒的常规检测方法。 目前，发光法检测肝炎病毒的项目包括 甲型肝炎病毒HA V-IgM、HA V-IgG 乙型肝炎病毒HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe、anti-HBc-IgM、anti-HBc 丙型肝炎病毒anti-HCV 肝炎病毒的感染是一个动态的变化过程，应结合病史资料全面综合分析和判断不同项目、不同时期的检测结果。以下关于肝炎病毒检验结果的解释，供临床医生参考、应用。 1. 甲型肝炎病毒中的HA V-IgM抗体在发病早期出现在血液中，半年后恢复正常，可以用于早期诊断急性甲型肝炎；HA V-IgG抗体是一种保护性抗体，其升高表示既往感染HA V，可用于流行病学调查。 2. 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）：常伴随HBV同时存在，可以作为传染性的标志之一。其升高常见于乙型肝炎的潜伏期和急性期；慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、或者乙肝的携带者。（参考值0-0.05 IU/ml） 3. 乙型肝炎病毒表面抗体（anti-HBs）：一般在HBsAg转阴后出现，是保护性抗体，可以持续多年，其保护性与该抗体的浓度高低有关。其升高表示既往感染，现已恢复，或者是乙肝疫苗接种成功。（参考值0-10 mIU/ml） 4. 乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)：升高为阳性，表明患者已感染乙肝病毒，并且病毒复制活跃，传染性强；如持续升高易转为慢性肝炎。（参考值0-1 s/co） 5. 乙型肝炎病毒e抗体(anti-HBe)：降低为阳性，阳性见于HBeAg转阴的病人，表明HBV 部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低。（参考值>1 s/co） 6. 乙型肝炎病毒核心抗体（anti-HBc）：升高为阳性，anti-HBc升高且高水平，表明乙型肝炎正在感染；低水平则是既往感染，具有流行病学意义。anti-HBc-IgM是机体感染HBV后在血液中最早出现的特异性抗体，在肝炎的急性期水平升高，是诊断乙型肝炎和病毒复制活跃的指标。（参考值0-1 s/co） 7. 丙型肝炎病毒抗体（anti-HCV）：升高表示既往或现症感染HCV，是一种非保护性抗体，可用于流行病学调查感染消退；还见于假抗HCV反应性结果。（参考值0-1 s/co）

试验设计分子扩散系数测定

实验设计：丙酮分子扩散系数测定 一、实验原理 扩散属于由于分子扩散所引起的质量传递，扩散系数在工业中是一项十分重要的物性指标。 在如图所示的垂直细管中盛以待测组分的液体A，该组分通过静止气层Z扩散至管口被另一头气流B带走。紧贴液面上方组分A的分压为液体A在一定温度下的饱和蒸汽压，管口处A的分压可视为零，组分A的汽化使扩散距离Z不断增加。记录时间t与Z的关系即可计算A在B中的扩散系数。 液体A通过静止气体层的扩散为单相扩散，此时传递速率： N=D/(RTZ) ·P/P·(P－P) 可写成: A2AA1Bm N=ρ/RT·D/Z·ln(P/P) (a) B1AB2设S为细管的截面积，ρ为液体A密度。在dt时间内汽化的液体A的量应等于液体A扩散出管口的量，即 SNdt=ρSdZ/N 或: AA N=ρ/M·dZ/dt AA (b) 二、计算公式 T形管： 横管为两端开口的普通玻璃管，用于气体流通；竖管为下端封口的毛细管，用于盛放丙酮溶液(丙酮为被测气体)，由于使用了毛细管，可以将被测气体的扩散视为一维的竖直扩散。． 真空泵： 可生成20-60kPa的负压，使毛细管中扩散出的气体迅速离开管口，以保证管口处被测气体浓度不变(接近零)。 游标卡尺： 实验中使用精度为0.1mm的游标卡尺，可以通过显微镜对毛细管内的液位进行测量。 显微镜： 由于游标卡尺刻度较密，且置于水浴箱中，要借助显微镜进行读数。

水浴箱： 毛细管浸于水浴池中，使毛细管内液体保持恒温。另外，温度高时扩散较快，可加快实验速度。实验中要求设定为50度。 系统时钟：可成倍加快实验速度，减少实验中的等待时间。 扩散系数：D=BρRT/(2MP) ·1/ln(P/P)B1AB23；797kg/m ρ—丙酮密度，T—扩散温度，实验中要求设定为232K； M—丙酮分子量，58.05；A P—大气压，100kPa； P—空气在毛细管出口处的分压，可视为P；B2**为丙酮的饱和蒸气压，P=P-P —空气在毛细管内液面处的分压，P，P AB1B1A*=50kPa；时P232K A2为纵坐标作图得到的直线的斜率。Z B—以时间t为横坐标，2为纵坐标，时间的数据，以Z实验时每隔10-15分钟测量一次扩散距离Z 为横坐标作图可得到B，将所有数据带入计算公式即可求得扩散系数。 三、注意事项 1.开始测量数据后，不要改变水浴温度，温度对扩散速率有影响。 2.测量时真空泵要一直开启。 3.计算时要注意单位的统一。 试验步骤： 进入实验后，水浴加热器与真空泵均未开启，鼠标点击两个红色开关即可打开相应的设备。． 打开水浴加热器后，点击显示仪表盘可出现温度设置窗口，将温度设定为50度。仪表盘默认显示的是当前实际温度，要察看或改变设定温度应按下右侧的“调节”按钮。仪表盘将显示设定温度的同时，设定温度的个位或十位处于闪动状态，闪动状态的数字可以调节，再次按下“调节”按钮可以切换闪动位。 仪表盘右上方的“升高”与“降低”两个按钮可以对闪动数字进行调节。 调节完成后按下“设定”按钮即可切换到实际温度显示。 调节状态下，若30秒不进行任何操作，将自动切换回实际温度显示。 主界面的水浴温度显示盘下有3个温度指示灯，它们是用来指示水浴加热器工作状态的。 黄灯闪烁说明实际温度已高于设定值，正在降温。 红灯闪烁说明实际温度还未达到设定值，正在加热。 绿灯闪烁说明实际温度已达到设定值，正在保温。 点击真空泵的显示仪表盘也可出现设置窗口，不过实验中只是要保证气体流动顺畅，故实际上不需要对其进行调节，只要将泵打开即可。 仪表盘显示的是真空泵设定的压力，右侧的两个按钮可对真空泵压力进行调整，点击一次调整10kPa。 确定水浴温度达到50度、真空泵打开后，即可开始测量实验数据。鼠标点击主界面上的显微镜即可出现显微镜的观测窗口。 第1次打开显微镜的观测窗口时，由于显微镜还没有对准毛细管的液面，故看不见液面与卡尺。通过点击右上侧框格中的4个按钮，

两种方法检测乙型肝炎病毒五项指标的结果对比

两种方法检测乙型肝炎病毒五项指标的结果 对比 作者：龙青文，何建军，马家驹，何秀琳，肖金平 【关键词】酶联；血清乳胶；定性分析 ［关键词］酶联；血清乳胶；定性分析 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、e 抗原(HBsAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)的检测在许多方面如诊断乙肝判断愈后、筛选献血员、乙肝的流行病学调查、判断人群对乙型肝炎的免疫水平，对食品、保育及饮水管理行业人员定期进行健康体检等起着重要的作用。故选择一种特异、敏感、稳定的实验室检测方法检测乙型肝炎病毒的五项指标显得尤为重要。现将56例检测者血清同时用酶联免疫法和血清乳胶层析法对比检测结果报告如下。 １材料与方法 1.1 标本来源56例受检者中，男29例，女27例，最大年龄72岁，最小年龄29岁，平均年龄46岁；来自健康体检人群15例，其中13例检测具有阳性结果，2例各项指标均为阴性、另41例为门诊检查结果有阳性的患者，均系血清标本。

1．2 方法酶联免疫法用乙型肝炎病毒(HBsAg，HBsAb，HBeAg、HBeAb，HBcAb)诊断试剂盒，由上海华泰生物工程实业有限公司生产，48人份，批号20040503，按说明书操作。乙肝两对半血清/血浆乳胶层析法检测试剂板由ACONLaboratories.Inc.SanDiegoCA92121USA提供，批号200407029，按说明书操作。 1.3 质量控制酶联免疫法每项检测项目均设阴、阳性对照各2孔，每空加入阴性对照(或阳性对照)各1滴，并设有空白对照1孔。乳胶层析法各项检删项目均设质控区(C)。 1.4 检测结果判定标准：酶联免疫法是根据颜色的变化，作定性分析。此法HBsAg、HBsAb、HBeAg呈黄色为阳性反应，无色为阴性反应，阳性对照为黄色，阴性对照为无色。HBeAb、HBcAb无色为阳性，黄色为阴性，阳性对照为无色，阴性对照为黄色。乳胶层析法HBsAG、HBsAb、HBeAg在测试区内(T)出现一条红色条带则是阳性结果，不出现红色条带则为阴性。HBeAb、HBcAb结果则相反，强阳性标本测试区内(T)将没有红色条带，弱阳性标本测试区内(T)将有一条非常弱的红色条带，阴性标本测试区(T)将会出现明显的红色条带。无论相应的待测物质是否存在于标本中，质控区(C)都会出现红色条带。两种检测方法结果对比分析用卡方检验两两比较进行统计学处理。

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(胶体金法)

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法） 【检验目的】 定性测定人血清（浆）中的HCV抗体，用于临床术前的初筛查检测。 【实验原理】 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体（anti-IgG Ab），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5）和人IgG抗体。检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Atenti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色游离金标鼠抗人IgG 抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。 【样本要求】 1、采集静脉血样本必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。 2、如果血清和血浆样品收集后 7天内检测，样品须放在0-4C保存；大于7天必须-20C—下冷冻保存。 3、常规抗凝剂不影响实验结果。 4、溶血、粘稠及高指标本不适于本试剂。含特殊物质的标本可能会导致检测结果不稳定， 在检测前须清除。 5、在标本中加0.1%NaN3不影响实验结果。 【试验方法】 测试条： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金试纸条从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴（10卩）样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。 4、随即滴加2滴样本稀释液（约100^）1。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 测试卡： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到测试卡上的 S孔。 4、随即滴加2滴（约100 ^）1样本稀释液到测试卡上的 D孔。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 【结果判断】 阳性：试纸条/试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。 阴性：试纸条/试卡只在对照线位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条/试卡重新测试。

化学发光法检测肝炎病毒结果解读

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化学发光法检测肝炎病毒的结果解读 肝炎病毒感染是一个全球性的健康问题，根据美国疾病控制中心的报告，全球有将近20亿的感染人群。其中亿人为慢性持续性感染。另外，全球有近3/4的人居住高流行区域，其中也包括中国。因此，有效的肝炎病毒检测和筛查显得十分重要。 化学发光法检测肝炎病毒，在方法上提高了病毒检测的灵敏度和特异性，而且流量检测，快速、方便，并逐渐替代ELISA，成为肝炎病毒的常规检测方法。 目前，发光法检测肝炎病毒的项目包括 甲型肝炎病毒 HAV-IgM、HAV-IgG 乙型肝炎病毒 HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe、anti-HBc-IgM、anti-HBc 丙型肝炎病毒 anti-HCV 肝炎病毒的感染是一个动态的变化过程，应结合病史资料全面综合分析和判断不同项目、不同时期的检测结果。以下关于肝炎病毒检验结果的解释，供临床医生参考、应用。 1. 甲型肝炎病毒中的HAV-IgM抗体在发病早期出现在血液中，半年后恢复正常，可以用于早期诊断急性甲型肝炎；HAV-IgG抗体是一种保护性抗体，其升高表示既往感染HAV，可用于流行病学调查。 2. 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）：常伴随HBV同时存在，可以作为传染性的标志之一。其升高常见于乙型肝炎的潜伏期和急性期；慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、或者乙肝的携带者。（参考值 IU/ml） 3. 乙型肝炎病毒表面抗体（anti-HBs）：一般在HBsAg转阴后出现，是保护性抗体，可以持续多年，其保护性与该抗体的浓度高低有关。其升高表示既往感染，现已恢复，或者是乙肝疫苗接种成功。（参考值 0-10 mIU/ml） 4. 乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)：升高为阳性，表明患者已感染乙肝病毒，并且病毒复制活跃，传染性强；如持续升高易转为慢性肝炎。（参考值 0-1 s/co） 5. 乙型肝炎病毒e抗体(anti-HBe)：降低为阳性，阳性见于HBeAg转阴的病人，表明HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低。（参考值 >1 s/co）

丙型肝炎病毒抗体检测说明书

丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 说明书 【产品名称】 通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 【包装规格】 条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。 【预期用途】 本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。 丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。 【检验原理】 本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。 检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。然后，混合物再毛细效应下向上层析。如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。 【主要组成成分】 丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维； 缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠； 25ul吸管 检测记录表 各组份的包装数量如下： 说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。

传染病学_病毒性肝炎检测试题

病毒性肝炎习题一 选择题 A型题（最佳选择题。先列出题干，继以列出5个答案：A、B、C、D、E。按题干要求在5个备选答案中选出一个最佳答案。） 1.下列肝炎病毒基因组归类于DNA病毒的是： A．甲型肝炎 B．乙型肝炎 C．丙型肝炎 D．丁型肝炎 E．戊型肝炎 2.下列试验中反映细胞坏死严重程最有价值的指标是: A·谷丙转氨酶 B·谷草转氨酶 C·白蛋白 D·球蛋白 E·凝血酶原活动度 3.下列哪一项不是丙型肝炎的传播途径: A·输血或血制品途径 B·粪口途径 C·注射途径 D·母婴传播 E·日常生活密切接触途径 4.对HBeAg阳性母亲生下的新生儿预防处理，最好的方法是: A·丙种球蛋白 B·乙肝疫苗 C·高效价乙肝免疫球蛋白 D·乙肝疫苗十高效价乙肝免疫球蛋白 E·乙肝疫苗十丙种球蛋白 5.某医务工作者在给一HbeAg阳性患者采血时，不小心刺破手指，下列哪项处理最为重要: A·立即酒精消毒

B·接种乙肝疫苗 C·肌注高效价乙肝免疫球蛋白 D·肌注高效价乙肝免疫球蛋白，接种乙肝疫苗 E·定期复查肝功能和HBV-IgM 6.当患者血清中只有抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe阳性时应考虑: A·急性乙型肝炎 B·慢性乙型肝炎 C·重型肝炎 D·急性乙型肝炎恢复期 E·乙肝病毒慢性携带者 7.对急性重型肝炎诊断价值最小的是: A·谷丙转氨酶＞10OOU/L B·肝性脑病 C·深度黄疸 D·肝脏迅速缩小 E·腹水、鼓肠 8.关于HBV-DNA的描述哪项是正确的: A·HBV-DNA是单链环状DNA B·HBV-DNA是双链线状DNA C·游离型HBV-DNA是指血清中除HBV颗粒以外形式存在的游离HBV-DNA D·整合到肝细胞基因组中的HBV-DNA称整合型HBV-DNA E·和HBsAg一样，HBV-DNA阳性只代表有HBV感染，与病毒的复制无关9.有关HAV感染与基因变异的概念，哪项是错误的: 1.A·HAV可分为4个基因型 2.B·与基因型相对应也有4个血清型 3.C·HAV感染后可刺激抗体产生特异性IgM和IgG抗体 4.D·IgM抗体仅存在于感染后6个月之内是近期感染标志 5.E·IgG抗体可保存多年，是过去感染的标志 10.下述哪项不是HBV的结构成分: 1.A·HBsAg 2.B·HBcAg 3.C·HBeAg 4.D·HBV-DNA 5.E·HBV-DNAp

丙肝的诊断标准

丙肝的诊断标准 要诊断丙肝，首先要做的事情就是正确的认识它，尽量不要走入疾病的误区，这样才能更好的治疗，康复就指日可待了。但是我们应该如何知道丙肝的诊断标准呢?怎么根据丙肝的诊断标准来判读自己或者是别人是否得丙肝呢? 首先，必须明确感染丙型肝炎病毒，不一定就患丙型肝炎，因为丙型肝炎也存在无症状病毒携带者，他们一般没有明显的肝脏损害。诊断丙型肝炎主要包括两个方面：一是丙型肝炎病毒的标志物是否为阳性，二是有无肝脏损害及损害的严重程度。病毒标志物主要包括血清抗—HCV(抗丙型肝炎病毒抗体)和HCV RNA(丙型肝炎病毒核糖核酸)。肝脏损害的检查主要包括肝功能、B超及肝脏病理组织学的检查。 急性和慢性丙肝的诊断标准 (一)急性丙型肝炎的诊断 1.流行病学史：有输血史、应用血液制品史或明确的HCV暴露史。输血后急性丙型肝炎的潜伏期为2～16周(平均7周)，散发性急性丙型肝炎的潜伏期尚待研究。 2.临床表现：全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛等，少数伴低热，轻度肝肿大，部分患者可出现脾肿大，少数患者可出现黄疸。部分患者无明显症状，表现为隐匿性感染。 3.实验室检查：ALT多呈轻度和中度升高，抗-HCV和HCV RNA阳性。HCV RNA常在ALT 恢复正常前转阴，但也有ALT恢复正常而HCV RNA持续阳性者。 有上述1+2+3或2+3者可诊断。 (二)慢性丙型肝炎的诊断 1.诊断依据：HCV感染超过6个月，或发病日期不明、无肝炎史，但肝脏组织病理学检查符合慢性肝炎，或根据症状、体征、实验室及影像学检查结果综合分析，亦可诊断。 传播的预防

(一)丙型肝炎疫苗预防目前尚无有效疫苗可预防丙型肝炎。 (二)严格筛选献血员严格执行《中华人民共和国献血法》，推行无偿献血。通过检测血清抗-HCV、丙氨酸氨基转移酶(ALT)严格筛选献血员。应发展HCV抗原的检测方法，提高对窗口期感染者的检出率。 (三)经皮肤和黏膜途径传播的预防推行安全注射。对牙科器械、内镜等医疗器具应严格消毒。医务人员接触患者血液及体液时应戴手套。对静脉吸毒者进行心理咨询和安全教育，劝其戒毒。不共用剃须刀及牙具等，理发用具、穿刺和文身等用具应严格消毒。 (四)性传播的预防对有性乱史者应定期检查，加强管理。建议HCV感染者在性交时使用安全套。对青少年应进行正确的性教育。 (五)母婴传播的预防对HCV RNA阳性的孕妇，应避免羊膜腔穿刺，尽量缩短分娩时间，保证胎盘的完整性，减少新生儿暴露于母血的机会。 丙肝的诊断标准不仅仅是患者需要掌握的，作为患者的亲戚朋友也是需要引起重视的，一旦有出现异常情况的话，我们可以利用自己掌握的知识进行判断，不仅能够把握住最佳的治疗时机，还能增加疾病治愈的机会。

乙型肝炎病毒检测技术的研究进展

乙型肝炎病毒检测技术的研究进展 吴淑秋 [关键词] 乙型肝炎病毒检测技术 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是世界范围内严重的公共卫生问题之一,约5%的世界人口现行慢性感染，在我国乙型肝炎是常见的传染病和多发病之一，主要通过血液、血制品、性传播及母婴传播，是引起肝硬化和肝癌的常见病因。我国一般人群中HBsAg阳性率约为10％左右，乙型肝炎其传染性和病死率均居高不下[1]，已经成为现在最为严重的社会公共卫生问题，严重影响着人们的身体健康。所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。随着检测技术的不断发展，对乙型肝炎血清标记物的认识也在不断深入和更新。到目前为止, 乙型肝炎病毒病原学检测主要是电子显微镜技术、免疫学技术和分子生物学技术和基因芯片技术, 现将乙型肝炎病毒几种检测技术作一综述。 1电子显微镜技术 电子显微镜技术主要包括常规电镜法(electron micros-copy, EM)和免疫电镜法(immune electron microscopy,IEM)。 1.1 常规电镜法1970年英国学者Dane等在电镜下发现了完整HBV颗粒即Danes颗粒[2],R De V os等随后用电子显微镜观察18例HBsAg阳性的慢性肝炎患者的肝组织,发现了直径约25 nm的核心抗原(HBcAg)颗粒[3]。常规电镜法的优点是标本用量小、制样速度快、观察比较直观,不过因其观察灵敏度较低而要求病毒在标本中大量存在,所以本检测技术在观察HBV方面的应用受到限制。 1.2免疫电镜法免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。Takashi等[4]对96例HBsAg阳性患者的肝组织进行免疫电镜观察,发现在肝细胞胞浆和胞核中存在HBcAg和HBeAg。胡莲美等[5]在HBV转基因小鼠血清中发现直径约22 nm的球形HBsAg,以及少量直径约42 nm的Danes颗粒。免疫电镜法较常规电镜法的敏感性高,从而可增加HBV的检出率,但该检测技术的样本制备过程较复杂,对操作者的技能要求较高。 2 免疫学技术

气体扩散系数的测定

气体扩散系数的测定和计算 实验目的 1. 了解和掌握气体扩散系数测定的一般方法 2. 测定并计算气体扩散系数 实验原理 气体的扩散系数与系统的温度、压力以及物质的性质有关。对于双组分气体混合物，组分的扩散系数在低压下与浓度无关。测定二元气体扩散系数的常用方法有蒸发管发、双容积法、液滴蒸发法等。这里以蒸发管法为例进行说明。下图所示为蒸发管法测定气体扩散系数的装置。 将此装置置于恒温、恒压的系统内。测定时，将液体A 注入圆管的底部，使气体B 徐徐地流过关口。圆管中待测组分A 汽化并通过气层B ，组分A 扩散到管口处即被气体B 带走，使得管口处的浓度很低，可认为p A2为0，而液面处组分A 的分压p A1为在测定条件下的组分A 饱和蒸汽压。此过程可近似看作稳态过程。 若气体B 不能溶解于液体A 中，则该过程为组分A 通过停滞组分B 的稳态扩散过程。则组分A 的扩散通量为 )(21A A BM AB A p p zp RT p D N -?= 对组分A 物料衡算得 A A A M Ad N dzA θρ= 整理得

θ ρd dz M N A A A = 又该过程为稳态过程则有 θ ρd dz M p p zp RT p D N A A A A BM AB A =-?= )(21 对上式积分得 ?? -=z z A A A AB BM A zdz p p pM D RTp d 0)(210ρθθ 得 2)(2 0221z z p p pM D RTp A A A AB BM A --=ρθ 也即 2)(2 0221z z p p M p RTp D A A A BM A AB --=θρ 测定时，可记录一系列时间间隔与z 的对应关系，便可由上式计算出气体的扩散系数D AB 。 实验装置 1-加热器开关 2-真空泵开关 3-空气泵 4-水浴 5-温度计 6-加热器控制器 7-毛细管 8-游标卡尺 9-显微镜

丙肝诊断标准

丙型病毒性肝炎（WS 213-2008） 1 诊断标准 1.1 流行病学史 1.1.1 曾接受过血液、血液制品或其他人体组织、细胞成分治疗，或器官移植。 1.1.2 有血液透析史、不洁注射史，或其他消毒不严格的有创检查、治疗史，有静脉注射史。 1.1.3 职业供血者，特别是接受过成分血单采回输者。 1.1.4 与HCV 感染者有性接触史，或HCV 感染者（母亲）所生的婴儿。 1.2 临床表现 1.2.1 急性丙型病毒性肝炎 1.2.1.1 病程在6 个月以内，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 1.2.1.2 可有轻度肝肿大、部分患者出现脾肿大；少数患者可伴低热或出现黄疸。 1.2.1.3 部分患者可有关节疼痛等肝外表现发。 1.2.1.4 部分患者可无明显症状和体征。 1.2.2 慢性丙型病毒性肝炎 1.2.2.1 病程超过6 个月，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 1.2.2.2 部分患者可有肝病面容、肝掌、蛛痣及轻度肝、脾肿大。 1.2.2.3 部分患者可无明显症状和体征。 1.2.3 丙型病毒性肝炎肝硬化 1.2.3.1 可有全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋区疼痛或不适等。 1.2.3.2 可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及腹壁或食管、胃底静脉曲张及脾脏肿大和脾功能亢进。 1.2.3.3 失代偿期患者可有腹水、肝性脑病及消化道出血史。 1.3 实验室检查 1.3.1 急性丙型病毒性肝炎有血清ALT、 AST 升高，部分病例可有血清胆红素升高。 部分慢性丙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎肝硬化患者亦可有ALT、AST 升高。 1.3.2 血清抗-HCV 阳性。 1.3.3 血清HCV RNA 阳性。 １.４组织病理学检查 １.４.１急性丙型病毒性肝炎 可有小叶内及汇管区炎症等多种病变，其组织学特征包括； ａ）单核细胞增多症样变，即单个核细胞浸瑞于肝窦中，形成串珠状； ｂ）肝细胞大泡性脂肪变性； ｃ）胆管损伤伴汇管区大量淋巴细胞浸润，甚至淋巴滤泡形成； ｄ）常见界面性炎症。 １.４.２慢性丙型病毒性肝炎 肝组织中常可观察到不同程度的界面炎、管区淋巴浸润甚至淋巴滤泡形成、胆管损伤及不同程度的纤维化，小叶内肝细胞脂肪变性、库普弗细胞或淋巴细胞聚集１.４.３慢性丙型病毒性肝炎肝硬化在慢性丙型病毒性肝炎肝硬化病例改变的基础上出现肝纤维化及小叶结构的改变，即假小叶形成。 1.5 影像学检查

肝炎病毒测试题

冷市镇2014年肝炎病毒培训测试题村名姓名计分 一、选择题 A型题 1. 甲型肝炎病毒属于 A. 肠道病毒70型 B. 肠道病毒72型 C. 腺病毒8型 D. 疱疹病毒6型 E. ECHO病毒 2. 甲型肝炎病毒的主要传播途径是 A.呼吸道传播 B.消化道传播 C.血液接触 D. 蚊虫叮咬 E.性接触 3.HA V区别于其他肠道病毒的生物学特性是 A. 形态 B. 大小 C. 结构 D. 对热的抵抗力 E. 目前无法细胞培养 4.HA V随粪便排出体外最主要的时间是 A. 感染后1周内 B. 发病2周后 C. 发病前后2周内 D. 恢复期 E. 发病后1个月 5.Dane颗粒是指 A.HA V颗粒 B.完整的HBV颗粒 C.HBV球形颗粒 D. HBV管形颗粒 E.狂犬病病毒包涵体 6. HBV的核酸类型为 A. 单正链RNA B. 单负链RNA C. 双链分节段DNA D. 双链环状DNA E. 双链RNA 7. 乙型肝炎病毒的主要传播途径是 A.消化道传播 B.血液、血制品传播 C.蚊虫叮咬 D. 呼吸道传播 E.直接接触 8. 下列病毒中抵抗力最强的是 A.脊髓灰质炎病毒 B. 乙型肝炎病毒 C.乙脑病毒 D. 单纯疱疹病毒 E. 流感病毒 9. HBsAg在血清中的最主要存在形式是 A.小球形颗粒 B.管形颗粒 C.Dane颗粒 D.免疫球蛋白 E. 免疫复合物 10. HBV感染的主要标志是 A. 血中测出HBsAg B. 血中测出抗-HBs C. 血中测出HBcAg D. 血中测出HBeAg和抗-HBs E. 血中测出抗-HBe 11. HBV的免疫病理机制中包括 A.Ⅰ、Ⅱ型超敏反应 B. Ⅱ、Ⅲ型超敏反应 C.Ⅰ、Ⅳ型超敏反应 D. Ⅲ、Ⅳ型超敏反应 E. 以上都不是 12. 与原发性肝癌相关的病毒是 A.HAV B.HBV C.HIV D.EBV E.HSV-2 13. 关于HBV的叙述下列哪项是正确的 A.核酸为双股线状DNA B.其DNA多聚酶无逆转录酶功能 C. 血中测出HBeAg是体内HBV复制的指标之一

气体扩散系数测定

气体扩散系数的测定 实验目的 1.了解和掌握气体扩散系数测定的一般方法； 2.认识菲克定律； 3.测定并计算气体扩散系数； 4.求出液体表面蒸发的气体扩散系数。 实验原理 挥发性液体之气体扩散系数可藉由Winklemann's method来检测,在有限内径的垂直毛细管中保持固定的温度和经过毛细管顶部的空气流量,可确定液体表面的分子扩散到气体中的蒸气分压。 最小平方法或称最小平方差法 (least-squares method) 的最基础型——线型的 (linear).今有一组实验数据基本上呈现线型的态势,则若以表示直线方程式,其中代表斜率 (slope),代表截距 (intercept),则最小平方法就是在使误差的平方和达到最小,即使下式最小化(minimize)，因此将上二式常规化(normalize) 得据此可由Cramer法则求出斜率和截距。其中是的平均值,是的平均值.一般而言,线性关系的良窈可由E值的大小来判断,但要注意值本身的大小.此外,统计学家尚有一个相关系数 (correlation coefficient) 的判断法,相关系数R可由计算得到。 气体的扩散系数与系统的温度、压力以及物质的性质有关。对于双组分气体混合物，组分的扩散系数在低压下与浓度无关。测定二元气体扩散系数的常用方法有蒸发管发、双容积法、液滴蒸发法等。这里以蒸发管法为例进行说明。下图所示为蒸发管法测定气体扩散系数的装置。 将此装置置于恒温、恒压的系统内。测定时，将液体A注入圆管的底部，使气体B徐徐地流过关口。圆管中待测组分A汽化并通过气层B，组分A扩散到管口处即被气体B带走，使得管口处的浓度很低，可认为p A2为0，而液面处组分A 的分压p A1为在测定条件下的组分A饱和蒸汽压。此过程可近似看作稳态过程。若气体B不能溶解于液体A中，则该过程为组分A通过停滞组分B的稳态扩散过程。则组分A的扩散通量为

乙型肝炎病毒表面抗原胶体金法说明书

【产品名称】 通用名称：乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测试剂盒（胶体金法） 英文名称：Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen (Colloidal Gold) 【包装规格】 条型：25人份/盒（1人份/袋×25袋）、50人份/盒（1人份/袋×50袋）、100人份/盒（1人份/袋×100袋）、 100人份/盒（25人份/筒×4筒）。 卡型：20人份/盒（1人份/袋×20袋）、40人份/盒（1人份/袋×40袋）。 【预期用途】 本产品用于体外定性检测人血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。 本产品适用于乙型肝炎病毒感染的辅助诊断。乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性传染疾病，该病主要通过血液、母婴和性接触进行传播。乙肝表面抗原是乙肝病毒的外壳蛋白，伴随乙肝 病毒感染出现在血液中，是乙肝病毒感染的主要标志。乙肝表面抗原检测是该病的主要检测方法之一。【检测原理】 本试剂应用双抗体夹心法免疫层析胶体金技术检测样本中的乙肝表面抗原。试剂在检测线（T线）包被有HBsAg-1抗体，质控线（C线）包被有羊抗鼠IgG，在胶体金垫上含有胶体金标记的HBsAg-2抗体。检测时，若为阳性样本，样本中的HBsAg先与胶体金垫上的抗体反应，形成抗原-金标抗体复合物，在NC膜上层析至检测线时，会与包被HBsAg-1抗体形成抗体-抗原-金标抗体复合物，并在检测线位置显示出色带。若样本中无HBsAg，则不能形成复合物，T线位置上不出现色带。C线在检测样本时均应出现色带，否则试验无效。本试剂具有使用简便，稳定性好，特异性强、灵敏度高的特点。 【主要组成成份】 检测条/卡：在检测线包被有抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体1（小鼠来源），质控线包被有羊抗小鼠IgG抗体，在胶体金垫上含有胶体金标记的抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体2（小鼠来源）；滴管：仅适用于卡型；干燥剂。 不同批号试剂中各组份不能互换。需要用户自备计时器，如钟表等。 【储存条件及有效期】 4-30℃干燥阴凉避光保存，有效期20个月。打开内包装后检测试剂会因吸湿失效，需在30分钟内使用。 【样本要求】 1. 可用于检测血清/血浆样本。

丙型病毒性肝炎诊断标准(WS213-2008)

丙型病毒性肝炎诊断标准（WS213-2008） 1范围 本标准规定了丙型病毒性肝炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。 本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对丙型病毒性肝炎的诊断、报告。 2缩略语 HCV:丙型病毒性肝炎病毒 抗-HCV：抗丙型病毒性肝炎病毒抗体 HCV RNA:丙型病毒性肝炎病毒核糖核酸 RT-PCR:逆转录聚合酶链反应 EI.ISA:酶联免疫吸附试验 EIA:酶免疫检测 ALT:丙氨酸氨基转移酶 AST:门冬氨酸氨基转移酶 B超：腹部超声显像 CT:计算机断层扫描 MRI:磁共振成像 3诊断依据 3.1流行病学史

3.1.1曾接受过血液、血液制品或其他人体组织、细胞成分治疗，或器官移植。 3.1.2有血液透析史、不洁注射史，或其他消毒不严格的有创检查、治疗史，有静脉注射毒品史。 3.1.3职业供血者，特别是接受过成分血单采回输者。 3.1.4与HCV感染者有性接触史，或HCV感染者（母亲）所生的婴儿。 3.2临床表现 3.2.1急性丙型病毒性肝炎 3.2.1.1病程在6个月以内，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.1.2可有轻度肝肿大、部分患者可出现脾肿大；少数患者可伴低热或出现黄疽。 3.2.1.3部分患者可有关节疼痛等肝外表现。 3.2.1.4部分患者可无明显症状和体征。 3.2.2慢性丙型病毒性肝炎 3.2.2.1病程超过6个月，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.2.2部分患者可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及轻度肝、脾肿大。 3.2.2.3部分患者可无明显症状和体征。

3.2.3丙型病毒性肝炎肝硬化 3.2.3.1可有全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.3.2可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及腹壁或食管、胃底静脉曲张及脾脏肿大和脾功能亢进。 3.2.3.3失代偿期患者可有腹水、肝性脑病及消化道出血史。 3.3实验室检查 3.3.1急性丙型病毒性肝炎有血清ALT、AST升高，部分病例可有血清胆红素升高。部分慢性丙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎肝硬化患者亦可有ALT、AST升高。 3.3.2血清抗-HCV阳性。 3.3.3血清HCV RNA阳性。 3.4组织病理学检查 3.4.1急性丙型病毒性肝炎 可有小叶内及汇管区炎症等多种病变，其组织学特征包括：a)单核细胞增多症样病变，即单个核细胞浸润于肝窦中，形成串珠状； b)肝细胞大泡性脂肪变性； c)胆管损伤伴汇管区大量淋巴细胞浸润，甚至有淋巴滤泡形成； d)常见界面性炎症。