病毒学试题
一、选择题E．脊髓灰质炎病毒11．以破胞方式从细胞向外释放的病毒是： A6．呈螺旋对称型的RNA【A型题】病毒是：．流感病毒
．麻疹BA．流感病毒1．关于病毒基本性状叙述错误的是：
．脊髓灰质炎病毒BA．体积微小，无细胞结构．腺病毒C
D B．只能在活细胞中增殖 C．痘类病毒．腮腺炎病毒E．呼吸道合胞病毒．疱疹病毒DNAC．含有和RNA D
12．以“出芽”方式从细胞释放的病毒是：ED．对干扰素敏感．脊髓灰质炎病毒病毒．决定病毒具有感染性的是：7E．耐冷不耐热 A．ECHO．麻疹病毒．核酸A ．用于测量病毒大小的单位是：2 B．柯萨奇病毒．衣壳C m) A．微米(μB．包膜 D．腺病毒C．毫微米B(nm)．神经氨酸酶E．脊髓灰质炎病毒 (pm) C．微微米D E．血凝素．对病毒抵抗力叙述错误的是：．毫微微米D(fm)13
分钟可被灭活60℃(am)．病毒的增殖方式是：830A．大多数病毒E．微微微米．大多数病毒在－B ．复制A 70℃下可存活．关于病毒结构叙述错误的是：3
C．紫外线能灭活病毒A．核酸和衣壳组成核衣壳B．二分裂．甲醛能使病毒灭活，但保留抗原性．有包膜的病毒才有感染性B D C．分枝
D．减数分裂C．衣壳由壳粒构成．所有病毒对脂溶剂都敏感E一种病毒所产生的衣壳或包膜包在另一种．D．病毒包膜表面可有刺突14E．芽生
．各种病毒壳粒数目不相同E9．下述与病毒蛋白质无关的作用是：病毒基因组外，这种变异称之为．突变．吸附作用A4．可称为病毒体的结构是： A．核衣壳A B．基因重组．保护核酸作用B
C．加强作用B．核酸C．病毒包膜的成分
C．衣壳．表型混合．对脂溶剂敏感性D D
．互补作用E D．包膜E．免疫原性15．病毒所合成的晚期蛋白的功能是：10．下述哪种属于病毒基因突变：E．壳粒 A．交叉复活病毒是：DNA．呈二十面体立体对称的5 ．抑制宿主细胞蛋白质的合成A
B．合成包涵体的基质蛋白B．多重复活 A．腺病毒
．构成病毒衣壳蛋白C ．风疹病毒B C．温度敏感性变异
．正粘病毒C D．抑制宿主细胞核酸的合成D．互补作用．表型混合E多聚酶DNA．合成子代核酸所需要的E．弹状病毒D．裸露20面体对称型A X型题】【16．病毒与立克次体相同的特点是：
38B ．二十面体立体对称的病毒有：和A．含有DNARNA裸露螺旋对称型
A面体对称型 BC ．在人工合成的培养基中不能生长．腺病毒有包膜20BD ．流感病毒 C．含有核蛋白体有包膜螺旋对称型
．流行性乙型脑炎病毒C复合对称型E D．以二分裂方式进行繁殖
．单纯疱疹病毒DE．对抗生素敏感24．流感病毒是：D
．脊髓灰质炎病毒A E25．肠道病毒是：．病毒不同于衣原体的特点是：17E26．噬菌体：．螺旋对称的病毒有39．能通过细菌滤器A 27．单纯疱疹病毒： C A．麻疹病毒
B．对抗生素不敏感B．狂犬病病毒RNAC．可引起机体多部位感染有包膜病毒A
C．副流感病毒
．严格地细胞内寄生病毒RNA B 无包膜D D．柯萨奇病毒DNA有包膜病毒C E．在感染细胞内可形成包涵体
E．呼吸道合胞病毒18．无包膜的病毒是：病毒DNA D 无包膜40．有包膜的病毒是：缺陷病毒：E A．疱疹病毒
A．HIV
B．披膜病毒．流行性乙型脑炎病毒：28 A
EB病毒B．．流感病毒C E29．丁型肝炎病毒： C．柯萨奇病毒
30D．腺病毒．乙型肝炎病毒：C ECHOD．病毒E．狂犬病病毒．腺病毒：31E．水痘－带状疱疹病毒
B 32 戊型肝炎病毒：．无包膜病毒有41型题】B【
A．森林脑炎病毒衣壳 A 正粘病毒科A
．腺病毒B核酸B B 副粘病毒科．甲型肝炎病毒C C 披膜病毒科包膜 C
．巨细胞病毒D DNA核衣壳D 肝D 病毒科E．脊髓灰质炎病毒壳粒 E E 小核糖核酸病毒科42．病毒非遗传性变异包括：19．麻疹病毒属于：B33B．储存病毒遗传信息的是：
A．互补作用A A ．流感病毒属于：34．保护病毒核酸的是：20B．加强作用．甲型肝炎病毒属于：35E D ．无包膜病毒完整病毒体的是：21 C．基因重组．电镜下可见的病毒形态学最小单位是：22C．风疹病毒属于：36E
D．表型混合2337．乙型肝炎病毒属于：C．含有宿主细胞成分的是：D．基因突变E．
普通光学显微镜可见到与正常细胞结构和着．测定病毒在组织培养中增殖的指标是：48．有关包膜病毒叙述正确的是：43
称为包色不同的斑块， PFU A． A．出芽释放一般呈园形或椭园形，也可是涵体。．细胞融合B．包膜上多有刺突B包涵体由病毒颗粒或成分组成，
．CCPE ．包膜含有宿主细胞膜的化学成分C增殖痕迹。
）的病毒能．血凝抑制试验：有血凝素（HAD．培养液PH的变化D．对脂溶剂敏感6
血凝现．红细胞吸附EE．易侵入肠道并在肠粘膜细胞中增殖称为血凝现象，凝集人或动物红细胞，原理49．关于病毒复制叙述正确的是：44象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，．预防病毒病获得成效的疫苗是：
HA 是相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面．小儿麻痹疫苗．只能在活细胞内复制A A
副粘病毒及B B．从宿主细胞获得能量．流感疫苗常用于正粘病毒、与红细胞结合，也可用于C C．乙肝疫苗流行病调查，黄病毒等的辅助诊断、．复制过程中始终保持完整的结构和传染性
鉴定病毒型与亚型。．早期蛋白能抑制宿主细胞核酸与蛋白质合DD．牛痘苗10.血凝抑制试验成E．风疹疫苗
E．晚期蛋白是病毒的结构蛋白三、简答题二、名词解释 1. 病毒有何主要特点．病毒复制周期包括：45．复制周期：病毒增殖是复制，必须在活细1
．吸附穿入A （1 ）体积微小；脱穿入、胞内增殖。病毒复制一般分为吸附、（2B．脱壳）结构简单，仅含有一种核酸；称为病5壳、生物合成及装配与释放个阶段，）严格寄生，只能在一定种类活细胞中增（3 C．生物合成
毒的复制周期，经过复制产生大量的子代病殖；．形成始体D毒。（．装配与释放E）对抗生素不敏感而对干扰素敏感。4．缺陷病毒：病毒基因组不完整或基因位点2病毒结构由哪几部分组成各部分主要功2. 46．持续感染类型包括：如丁型肝炎改变而不能进行正常增殖的病毒。A．隐性感染能是什么病毒。
辅助结构主要是基本结构为核心和衣壳；．潜伏犬感染B
两种病毒共同感染同一细胞时，干扰现象：3．包膜，有的病毒有其他辅助结构如触须样纤．慢发病毒感染C可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象，维。．急性感染D
称为病毒的干扰现象。E核心成分为核酸其功能：．慢性感染
病毒在细胞内增殖造成细胞破坏死亡4：．CPE．能垂直传播的病毒有：47）决定病毒特性；1（这种效应在体外组的作用称其为杀细胞效应，．脊髓灰质炎病毒A）病毒复制；（2
织培养时可观察到细胞变园、聚集、脱落等，（．风疹病毒B3）具有感染性。总之核酸是主导病毒）。主要见于无包CPE称为致细胞病变作用（感染、增殖、遗传、变异的物质基础。C．巨细胞病毒
膜病毒，如肠道病毒等。衣壳的成分是蛋白其功能：．D HIV．包涵体：是某些受病毒感染的细胞内，用5）保护病毒核酸；1（组B．柯萨奇病毒E．
剂。（2）参与感染过程；同。
6．包膜病毒体的释放方式主要是_出芽（3）具有抗原性。_，麻细菌的致病性主要取决于细菌的侵袭力疹病毒感染细胞后可形成_细胞融合_和毒素的产生。包膜成分含蛋我糖和脂类，其功能：。
7繁殖与扩．可将自身基因整合在宿主细胞基因上的病侵袭力包括细菌的吸附和侵入、（1）维持病毒结构完整性；毒主要有_逆转录病毒（HIV散及抵抗机体的防御功能的能力。）有与宿主细胞膜亲和及融合的性能；（2）、乙型肝炎病毒
（HBV）、疱疹病毒（CMV、EBV毒素包括外毒素和内毒素。、HSV任一）3（）有病毒种、型抗原特异性。
_病毒的致病机制与细菌相比有两个特点；。
病毒复制周期包括哪几个阶段3.
8．①病毒有严格的寄生性，干扰素的主要功能有它必须在活细胞_抗病毒、抗肿瘤、免生物合脱壳、复制周期包括吸附、穿入、疫调节。内才能增殖，因此病毒的致病作用是以对宿主
成及装配与释放9细胞的致病作用为基础，包括引起溶细胞、细．病毒的繁殖方式为__复制_，病毒在细胞内
的增殖导致细胞的病理变化称为_致细胞病变胞膜变化、基因整合及细胞发生转化和增生病毒科名4. 举例列出个与医学有关的DNA5效应（CPE）_等。。称10．病毒的生物合成包括②病毒性感染对机体的致病作用是因为__基因组（核酸）复病毒科如病毒的病毒科有：属DNA小DNA制和,病毒有组织亲嗜性造成官器包括免疫系统的蛋白质合成_二大重要步骤。乳多空病毒科如人乳头瘤B19DNA细小病毒；11．病毒的复制周期包括__损伤，引起炎症和免疫病理性损伤，因此病毒吸附，穿入，脱壳，病毒科如DNA病毒；腺病毒科如腺病毒；肝生物合成，组装释放_五个阶段。的致病机制较细菌复杂。；痘病毒科如天花病毒；疱疹病毒科如单HBV12．病毒合成的蛋白质主要包括_结构蛋白，纯疱疹病毒等。
功能蛋白_两类病毒学部分病毒科名5. 举例列出个与医学有关的RNA513．病毒的穿入方式主要有_包膜和细胞膜融
一、填空题（将正确答案填入空内）称合，病毒胞饮_两种。
___RNA病毒的病毒科有：属RNA小病毒科如．1构成病毒体的主要化学成分是核酸和__14．无包膜病毒体多数通过_细胞裂解_释放，。蛋白质_脊髓灰质炎病毒；黄病毒科如流行性乙型脑炎有包膜病毒体主要通过_出芽_方式释放。
组成，又称2衣壳和核心__HTLV和病毒；逆转录病毒科如HIV；正粘病__．病毒体结构由15．正链RNA病毒的RNA可直接作为_ mRNA _，。__为副粘病毒科如麻疹病毒；毒科如流感病毒；弹核衣壳在细胞的_核糖体上转译病毒蛋白质。
慢病毒状病毒科如狂犬病病毒。__3．人类免疫缺陷病毒的感染类型是16．单链RNA病毒的核酸类型有_正链RNA，
_感染，脊髓灰质炎病毒的常见感染类型是__负链RNA，含逆转录酶的正链RNA_ 三种。
6.病毒感染常用的血清学诊断方法有哪些疱疹病发病可表现为，隐性感染_急性感染。_17．病毒对温度的抵抗力表现为耐_冷_不耐_
病毒感染的血清学诊断方法主要有中和毒在原发感染后都引起_潜伏感染_。热_。加热__56_℃
_30_min即可使病毒失去_ELISA试验、补体结合试验、血凝抑制试验，吸附病毒复制周期中感染细胞的第一步是4．_感染性_，称为_灭活_
试验及蛋白印迹技术。_，与隐蔽期有关的是_生物合成。_18．病毒污染器具的消毒可采用_1％～3％盐
脂溶．5鉴别病毒是否具有包膜，_通常可采用酸溶液_浸泡；．试述病毒致病机制与细菌致病机制有何不7保存含病毒的组织块可用_50％
中性甘油盐水。B．含两种核酸D．病毒引起细胞融合
E19．脊髓灰质炎病毒在人群中可通过_消化道．对抗生素不敏感．包涵体干扰细胞正常代谢C9．病毒的致病物质是（ __传播，在机体内通过_血液_播散。狂犬病毒）D．必须在易感活细胞内增殖
A．内毒素B．外毒素 CE．可诱导细胞产生干扰素．热原D．蛋白质在机体内通过_神经_播散。和核酸 E4．病毒包膜的特点不包括（慢性感染，潜伏感20．病毒的持续感染包括_ ）．侵袭性酶
10．病毒感染可引起的细胞21．用于预防病毒感．来源于宿主细胞A 染的减毒活疫苗是染，慢发感染__。（病变包括_细胞裂解，细胞膜结构和功能改变，）B．镶嵌有细胞编码的蛋白
A．狂犬疫苗 C．可被脂溶剂溶解细胞转化
B特胞毒病感染细的宿主异．乙肝疫苗D型干_ I22．人白细胞和成纤维细胞产生型_．决定 C ．脊髓灰质炎口服糖丸疫苗T淋巴细胞产生_ II型_型干扰素。性扰素，D．乙脑疫苗 E机体抗病毒免疫中，
23．主要的非特异性因素．具有抗原性
E．卡介苗）的是5．与衣壳生物学意义无关。特异性杀伤病毒感NK干扰素是__和_ 细胞_（
11 A．保护病毒核酸．可直接作为mRNA 细胞染细胞主要依靠_ Tc_。翻译蛋白的病毒核酸类型是（ B．组成病毒抗原中24．抗体在抗病毒免疫中的作用主要包括_ ）
A．单股正链RNA B．单股负链RNA C．决定病毒的致病特点病毒。游离（或细胞外）作用和清除和___
C．双股RNA D．裸露病毒体吸附细胞的结构 D．双股（在下列备选答案中选取一个二、型选择题A DNA ．壳微粒数目是病毒分类依据E
正确答案，将其字母填在括号里）E．单股） 6．病毒体的定义是（DNA
是体病测直可接量毒大方的法小．12．与病毒复制 A．无感染性的前病毒中的隐蔽期有关的是（）（） B．无包膜的裸露病毒
．光学显微镜观察A
AC．吸附 B．穿入 C．脱壳．有刺突的包膜病毒 D．生物 B．电子显微镜观察合成 D．可独立生存的病毒 E．装配和释放
C线衍射法．X13．子代病毒释放的途径中．结构完整有感染性的成熟病毒E不包括（）
D．超速离心法
A．病毒体核心的主要物质是（7．细胞裂解释放）
．超过滤法EB．酸磷．A B．细胞融合释放核．白蛋质 C
是染体毒病定感键关胞细的质物决．2CD 酸．通过细胞间桥释放 E ．类脂．肽聚糖（）D．出芽释放不包括．病毒感染造成细胞损伤的因素中8
核膜包．B 壳衣．A ．C E（）．整合释放
酸．刺突D ．核蛋白E14 ．中和抗体直接溶解靶细胞A ．病毒感染细胞的宿主范围主要取决于
不包括．病毒的特征中3 （）（细胞直接杀死靶细胞Tc．B ）．无细胞结构A
．细胞表面的受体A．病毒大量增殖损伤靶细胞C．
特异性杀伤病毒．下列抗病毒免疫因素中，20B．病毒表面的接触蛋白
2．举例说明病毒在体内播散的途径。
）感染细胞的因素是（ C．病毒表面的血凝素病毒在体内播散的途径：
Tc细胞 C． A．巨噬细胞 B D．病毒的衣壳．NK（1）经血液和淋巴液播散，如HIV、HBV、麻．抗体 EE．病毒的包膜．补体细胞 D
疹病毒等。（2）经神经播散，如疱疹病毒、．抗病毒中和抗体的作用是（ 15．逆转录病毒的核酸类型为（））21狂犬病毒。（3）局部播散，如流感病毒、人 A．阻止病毒吸附 A．单股负链RNA B．单股正链
乳头瘤病毒。
B．激活补体杀伤靶细胞 RNA
股单负链ADCC效应C．正C．单股链DNA D．3．简述病毒复制各期的主要特点。
D．降解病毒核酸 DNA 病毒复制各期的特点主要有：
二聚体RNA E．增强吞噬细胞的吞噬杀伤活性E．单股正链（1）吸附期：主要取决于易感细胞表面的受
）．逆转录病毒特有的酶是（16 体；
三、问答题．依聚合酶．依赖ADNA的DNA B（2）穿入期：主要以包膜融合和病毒胞饮方1．举例说明病毒侵入机体的途径。RNA 聚合酶赖RNA的式进入细胞。
病毒侵入机体的途径主要有水平传播和垂直．依DNAC．依赖的RNA聚合酶 D （3）脱壳期：在宿主溶酶体酶和（或）病毒
传播。具体包括：DNA聚合酶的赖RNA脱壳酶作用下脱去衣壳，游离出核酸。
（1）经黏膜侵入，常见．胸腺嘧啶激酶E（4）生物合成：分病毒核酸复制和病毒蛋白①经呼吸道，如流感病毒、麻疹病毒等；的过
程称为17．DNA病毒遗传信息从RNA转为质合成二大步骤
如甲型肝炎病毒和脊髓灰质②经消化道，）（①核酸复制：双股DNA病毒的基因复制炎病毒；转基因B 异因． A基变．主要在细胞核内利用宿主细胞的复制酶，通过、疱疹病毒。③经泌尿生殖道，如HIV C．噬菌体转导化半保留复制；RNA病毒的基因复制一般在细胞④经眼结膜，如腺病毒。 E．基因重组．逆转录D 质内，病毒自身携带或编码复制酶和转录酶。
）经皮肤侵入，包括经注射、输血、动物2（）．易发生潜伏感染的病毒是（18 ②蛋白质合成：分mRNA转录和蛋白质翻昆虫叮咬、咬伤、和经皮肤微小伤口入侵。如病状．A轮流B．感毒病译两个过程。单股RNA病毒有三种类型：正链经注射和输血侵① HIV乙型肝炎病毒、毒 C．麻疹病毒RNA病毒的RNA可直接作为mRNA；负链RNA入机体；．疱疹病毒D E．脊髓灰质炎病毒病毒需先转录出正链RNA作为mRNA；逆转录②狂犬病毒经疯狗咬伤侵入；）．干扰素的本质是（19 病毒先以病毒RNA 为模板转录出DNA，然后③乙脑病毒经蚊叮咬入侵；．病毒抗原A 以前病毒的形式整合在宿主细胞基因上，再转④人乳头瘤病毒经皮肤微小伤口入侵。受病毒抗原刺激后产生的抗体．B 录病毒mRNA。
）经胎盘、产道侵入，由感染母亲经胎盘（3．缺陷病毒编码的蛋白C如疱疹或分娩时经产道传给其胎儿或新生儿，．病毒侵入细胞后可产生哪些致病效应4．抗病毒化学制剂D
病毒、风疹病毒。E．受病毒感染后细胞产生的蛋白质
（1）细胞裂解死亡。如裸露病毒体的感染如体也无法清除潜伏在细胞内的病毒，无法阻止潜伏病毒的再次发作。由于病毒在脊髓灰质炎病毒、腺病毒的感染，同短时间内释放大量病毒，细胞内大量复制，
造成细胞时病毒复制阻断了细胞的正常代谢，裂解死亡。临床上常表现为急性感染。2）细胞结构和功能改变。包括（或①细胞膜抗原改变，如带有病毒抗原，这些抗原可刺激机体细胞膜损伤暴露新抗原。产生特异性抗体和致敏淋巴细胞对其进行识别和杀伤。如麻疹病毒的融合蛋白可②细胞膜融合，影响细是邻近细胞互相融合形成多核巨细胞，胞功能而使细胞死亡。如疱疹病毒和狂犬③细胞内形成包涵体，影响细胞的正病毒均可在细胞内形成包涵体，常代谢。）细胞转化。如肿瘤病毒、乙肝病毒等可（3引起宿主将病毒基因整合在宿主细胞基因上，细胞转化，成为肿瘤细胞。
5．举例说明病毒潜伏感染和隐性感染的区别。）肠道病毒感染大多数为隐性感染，如脊（1呼吸道甲型肝炎病毒的感染。髓灰质炎病毒、隐性感染一病毒感染约1/3表现为隐性感染。般病毒最终被清除，机体产生特异性免疫力，可抵抗再次感染。疱疹病毒的感染大多都可引起潜伏感染，2（）的初次急性感染或隐性感染后，HSVVZV如、三叉病毒可长期潜伏在体内脊髓背根神经节、在神经节。一旦机体抵抗力下降便急性发作。即使体内有特异性抗潜伏期体内查不到病毒，
病毒学检验
《病毒学检验》课程教学大纲 一、课程基本信息 课程名称：病毒学检验（Experimental Virology） 课程编码： 课程类别: 必修课(专业课) 适用专业: 卫生检验学本科 开课学期: 第七学期 课程学时: 63学时（理论学时27，实验学时36） 课程学分：3.5 先修课程：医学寄生虫学及检验、细菌学检验、临床医学概要等 课程简介：病毒学检验是卫生检验重要的专业课程之一，是卫生检验课程体系的重要组成部分，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。本课程通过课堂讲授、实验实习、网络自学等方式进行教学。注重培养学生综合性思维能力，重视学生自主学习、自觉学习，分析和解决实际问题能力，以及创新思维和能力的培养。 选用教材：李洪源、王志玉主编：《病毒学检验》，人民卫生出版社，第一版，2006年7月。 参考书: 1. 张朝武主编：《现代卫生检验》，第一版，人民卫生出版社，2005。 2. 李影林主编：《中华医学检验全书》，人民卫生出版社，1996。 3. 王秀茹主编：《预防医学微生物学及检验技术》，人民卫生出版社，2002。 4. 贾文祥主编：《医学微生物学》，四川大学出版社，2005年1月。 5. 李凡、刘星晶主编：《医学微生物学》，人民卫生出版社，第七版，2008年1月。 二、课程教育目标 通过学习，使学生知悉病毒学检验的基本技术和分子生物学技术，知悉 常见重要致病病毒。要求学生掌握病毒的分离培养方法、血清学实验及分子 生物学技术在病毒学检验中的应用；掌握常见重要致病病毒的生物学性状、 检验方法和预防医学意义。为学生能独立开展各种病毒学检验打下良好基 础。
三、理论教学内容与基本要求 绪论 （一）学时：0.5 （二）要求 【掌握】病毒的特性；病毒学检验的内容及其应用范围；病毒学检验的一般原则。 【熟悉】病毒学检验的质量控制；病毒学实验室的生物安全管理。 【了解】病毒学和病毒学检验的发展史。 第一篇病毒学检验技术 第一章细胞培养技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】体外培养细胞的生物学特性；体外细胞培养的条件；组织培养的种类；细胞系和细胞株的概念；细胞培养方法；细胞培养中平衡盐、消化液和血清的作用；细胞检查方法；细胞的冻存。 【熟悉】用于病毒培养的细胞选择、细胞培养操作过程和细胞培养污染与监测。 【了解】细胞培养技术在病毒学研究中的发展；细胞系的鉴定。 第二章鸡胚接种技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】鸡胚的结构；鸡胚的孵育与检查；接种途径与方法及其用途；病毒的检测；鸡胚接种技术的应用。 【熟悉】实验材料、器械与准备。 【了解】鸡胚的解剖与生理。 第三章动物实验技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】实验动物的分类；普通动物、清洁动物、无特定病原体动物、无菌动物、悉生动物；近交系动物、封闭群动物、突变系动物、杂交群动物及其特点；常用实验动物种类及其品系；
1生物学实验常用技术
生物学实验常用技术一、分子方面 1、基因工程 1)PCR (Polymerase Chain Reaction) (二楼PCR仪器全部会用) 2)RT-PCR;Q-PCR 3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收 4)酶切/链接 5)转化 6)固体/液体LB培养基配制 (高压蒸汽灭菌锅使用方法) 7)质粒大/小抽原理及步骤 (手提、溶液I、II、III作用) 8)基因组DNA抽提 9)RNA提取; 2、蛋白质工程 1)蛋白收集 (蛋白裂解液+PMSF; 1×Loading 裂解(推荐)) 2)SDS-PAGE(电泳胶的配制) 2)考马斯亮蓝染色,银染 3)Western blot 4)蛋白定量常用的方法及原理, 以及熟练操作Bradford法蛋 白定量 (TRIZOL法原理、注意事项及步骤) 二、细胞方面 1)细胞培养、传代 2)细胞冻存与复苏 冻存液配制: (1)DMSO:血清=1:9(推荐)
(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6 均可 DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。 3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次) 4)转染 5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率) 6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化) (5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用) 7)Hoechst染色 8)结晶紫染色(不推荐) 9)苏木精/伊红染色 (9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮) 10)荧光显微镜的使用 11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱) (7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据) 12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果) 三、动物实验 1)小鼠的定制: 常见的小鼠: ICR小鼠(正常),9元/只
病毒学整理
第一章绪论 一、病的发展简史： A 病毒的发现时期 1.科赫法则内容： 1 .在每一病例中都出现相同的微生物，且在健康者体内不存在； 2 .要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中得到纯培养（pure culture）； 3 .用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生； 4 .从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物来。 B 病毒的化学时期 C 病毒研究的细胞水平时期 D 分子病毒学的研究时期 亚病毒定义subvirus：只含有核酸或蛋白质的病毒，称为亚病毒。包括类病毒、拟病毒（或病毒卫星）、朊病毒。 二、分子病毒学研究的主要内容： （1）病毒基因组的结构与功能 1、双义(ambisense)RNA：即基因组的一部分为正极性，另一部分为负极性。 2、病毒基因组的结构与功能 病毒基因组的核苷酸组成及其排列顺序 基因组中开放阅读框架(ORFs)的数量、位置及其功能 病毒基因组中重复序列元件、调节元件对病毒基因表达和基因组复制的影响 阐明病毒结构基因、调节基因及其编码产物在病毒复制循环中的作用，以及它们与细胞基因及其编码产物的相互作用关系等 （2）病毒表达的调控机理 通过对病毒增强子(enhancer)、启动子(promoter)、衰减子(attnuator)和转座子(transposon)等调控元件的研究，可以阐明病毒基因表达的调控原理。 转座子：用插入序列进行整合的遗传单位（能够重复插入到基因组中许多位点的特殊片段）。衰减子：特定的DNA片段，可以减慢、阻止或停止转录 （3）病毒感染的分子机制 （4）病毒致癌的分子机理 病毒癌基因定义：致癌病的所携带的一段基因，侵染敏感细胞使细胞癌变，转化为癌细胞，生长失去控制，无限分裂增殖。 （5）抗病毒活性物质 1. 抗病毒多肽物质 干扰素是一类能够抑制病毒增殖的重要细胞素。具有很强的抗病毒能力，还有免疫调节和肿瘤抑制的作用。利用DNA重组技术，可以在大肠杆菌中生产出干扰素 2. 淋巴因子：重组克隆生产的IL-1、IL-2肿瘤坏死因子TNF 3. 反义RNA(antisense RNA) 定义：指天然存在的或人工合成的一类RNA分子，它不能编码蛋白质，但它的核苷酸顺序可与相应的RNA或DNA互补配对，从而使蛋白质合成受阻。 将反义RNA与其相应的病毒mRNA或DNA杂交，可以使病毒mRNA编码合成蛋白的功能受阻，从而破坏病毒的复制循环。反义技术：利用反义RNA封闭某个基因的技术。
病毒学名词汇总
毒粒（virion）是病毒在复制过程中的一种完整的成熟的病毒颗粒，有固定的形态和大小，而且一般都有侵染性。所以说一般具有侵染性是因为有些病毒的基因组核酸是分节段的，如雀麦花叶病毒的基因组核酸有四种。而且RNA1、RNA2和RNA3、RNA4分装在大小形状相同的三种球形颗粒中，只有三种颗粒混合，才具有侵染性。 外壳（capsid）是由多个病毒蛋白亚基组成的包裹在病毒基因组核酸外面的结构。 壳粒（capsomer）组成外壳的结构亚基，并非总是均匀分布的，往往聚集成群体，二个、三个、五个甚至六个亚基聚在一起，用负染法在电镜下所分辨开的一个个亚基，可能并非单个结构亚基，而是它们的群体，实际上是形态亚基称之为壳粒。 包膜（envelop）大多数动物病毒，在毒粒外被有由糖蛋白，脂肪所形成的外膜，称之为包膜。糖蛋白在膜上往往形成各种形状的突起，包膜在识别寄主、侵入寄主细胞，病毒的抗原性方面起重要作用。 二十面体（icosahedron）一种有12个角顶及20个面的对成的多面体，其每一个面是一个等边三角形；经常用来描述病毒的结构。 亚病毒（subviruses）不具有完整的病毒结构的一类病毒称之为亚病毒，包括类病毒、卫星RNA、朊病毒。 株系（strain）病毒经过生物化学物理等因素的作用后，是病毒致病力、寄主范围、抗原特异性、传播特性甚至粒体形状发生了改变，这些性状变异了的病毒粒体称为株系。 准种（quasispecies）RNA复制酶的低保真性决定了RNA病毒没有固定序列的基因组，由相关基因组构成的异质性群体为准种。 感染周期（infection cycle）病毒完成整个感染的过程，包括识别、吸附、入侵、生物大分子的合成、装配和释放。 流产性感染（abortive infection）是Productive infection（产毒感染）的反义词，是指在一定条件下，病毒感染导致毒粒的无效复制，常不生产感染性毒粒。 潜伏感染（latent infection）一种病毒的持续性感染状态，在此情况下，不产生病毒。一般来说，大部分转录和翻译过程被阻断。 慢性感染（chronic infection）一种病毒能在宿主或细胞培养上继续复制而不杀死宿主或整个细胞培养。 包含体（inclusion body）在显微镜下可以识别的病毒合成和积贮的部位，常是细胞内的病毒晶体。 交叉保护作用（cross protection）两种病毒感染一种寄主时先入侵的病毒能够保护寄主不再受第二种病毒的侵染。
病毒学题库
选择题 1、下列那种病毒对高温耐受的是（） A、疱疹病毒 B、HIV C、猪瘟病毒 D疯牛病病毒 2、下列不是干扰素作用特点的是（） A、作用迅速 B、种属特异性 C、间接作用 D、窄谱性 3、下列哪种病毒免疫后产生的抗体可在体内长时间存在（） A、天花病毒 B、新城疫病毒 C、细小病毒 D、犬瘟热病毒 4、RNA病毒突变率远远高于DNA病毒原因是（） A、病毒增值快 B、病毒分子量小 C、RNA聚合酶缺乏校正活性 D、宿主和病毒无校对修正机制 5、感染病毒的细胞在细胞核和细胞浆内存在着可着色的斑块结构称：（） A、蚀斑 B、空斑 C、包涵体 D、异染颗粒 6、抗体病毒的中和作用主要是（） A、阻止病毒与靶细胞相互作用 B、抑制病毒生物合成 C、诱导干扰素产生 D、杀伤细胞内病毒 7、病毒感染宿主细胞后可出现(D) A、细胞死亡 B、细胞转化 C、包涵体形成 D、以上均对 8、干扰素抗病毒的机制是（） A、阻止病毒进入易感细胞 B、直接干扰病毒mRNA的转录 C、影响病毒的装配和抑制病毒的释放 D、诱导细胞产生抗病毒蛋白 9、诊断流感最常用的血清学检查方法是（） A、ELISA 试验 B、中和试验 C、血凝抑制试验 D、PCR试验 10、、目前已在全世界消灭的病毒是（） A、HBV B、HIV C、天花病毒 D、脊髓灰质炎病毒 11、用于测量病毒大小的单位是（） A、微米 B、毫米 C、纳米 D、厘米 12、病毒的增殖方式是（）
A、出芽 B、复制 C、二分裂 D、分枝 13、下列哪种现象属于病毒基因突变（） A、温度敏感性变异 B、交叉复活 C、表面混合 D、多重复活 14、下列病毒无包膜的是（） A、狂犬病病毒 B、腺病毒 C、疱疹病毒 D、流感病毒 15、干扰素的生物学活性不包括（） A、抑制病毒增值 B、抑制肿瘤细胞生长 C、使机体产生抗病毒中和抗体 D、免疫调节作用 16、无包膜病毒完整病毒体的是（） A、衣壳 B、壳粒 C、包膜 D、核衣壳 17、一种病毒所产生的衣壳或包膜包在另一种病毒基因组外，这种变异称为（） A、基因重组 B、突变 C、互补作用 D、表型混合 18、病毒复制完成的标志是（） A、病毒的释放 B、吸附 C、入侵 D、转录 19、病毒囊膜的组成成分是（）。 A、脂类 B、多糖 C、蛋白质 D、氨基酸 20、病毒含有的核酸通常是（）。 A、 DNA和RNA B、 DNA或RNA C、 DNA D、 RNA 21、决定病毒体感染细胞的关键物质是（）。 A、衣壳 B、包膜 C、核酸 D、刺突 22、细胞融合有利于病毒的（）。 A、吸附 B、脱壳 C、扩散 D、复制 23、有关病毒感染的描述正确的是（）。 A、病毒在人群个体间的相互传播为水平传播，主要经皮肤和粘膜传播 B、母亲将病毒传给其子女的感染为垂直传播 C、慢发病毒感染就是病毒的慢性感染 D、以上均对 24、干扰素抗病毒感染的机制是（）。
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
医学微生物学课件病毒学
病毒学 Virology 传播性广；占传染病的80％。病死率高；持续感染；肿瘤的形成关系；第一节病毒形态学单正链RNA=mRNA 结构和非结构蛋白中间复制体正链翻译晚期蛋白负链复制子代核酸单负链RNA 正链RNA 中间复制体（依赖RNA的RNA多聚酶）裂解（Disintegration）: naked virus cause the host cell lysis 出芽（Budding）: enveloped viruses 亚病毒：一类比病毒还小的、结构更简单的微生物。包括类病毒和Prion。Penetration、Uncoating 融合---有包膜病毒胞饮---无包膜病毒直接穿入在溶酶体酶作用下，脱壳。Biosynthesis （隐蔽期）6大类型：双链DNA病毒单链DNA病毒单正链RNA病毒单负链RNA病毒双链RNA病毒逆转录病毒区域：DNA病毒核内（除痘病毒）RNA病毒胞质（除流感病毒及逆转录病毒）dsDNA病毒复制示意图亲代DNA mRNA 早期蛋白（功能蛋白）子代DNA 子代mRNA 晚期蛋白（结构蛋白）子代病毒复制子代核酸蛋白RNA病毒复制示意图逆转录病毒复制示意图逆转录病毒复制动画Assembly and Release 缺陷病毒因病毒基因组不完整或基因发生改变，而不能进行正常增殖所产生的子代病毒。辅助病毒可以辅助缺陷病毒完成正常增殖的病毒。顿挫感染病毒进入宿主细胞后，如细胞不能为病毒增殖提供所需要的酶、能量及必要的成分，则病毒在细胞中不能合成本身的成分，称为顿挫感染。非容纳细胞、容纳细胞。干扰现象两种病毒感染同一种细胞，常发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象，称干扰现象。机制：IFN、受体、DIP。二、与病毒增殖有关的异常现象第三节病毒遗传学（一）基因突变条件致死性突变株：温度敏感突变株：28－35℃可增殖，37－40 ℃不能增殖，具有减低毒力而保持免疫原性的特点。宿主范围突变株：病毒基因组改变影响了对宿主细胞的感染范围，可感染野生型病毒不能感染的细胞。耐药突变株病毒的基因重组(二）基因重组与重配基因重组：两病毒的基因组发生互换，产生具有两个亲代病毒特性的子代病毒，并能继续增殖。互补作用当两株病毒感染同一细胞时，有其中一个病毒株提供另一个病毒增殖所必须而不能生成的基因产物，使后者能增殖。表型混合一种病毒的衣壳或包膜可以包在另一种病毒体的核酸外面，称为表型混合。多倍体有些病毒的不同株同时感染同一细胞，许多基因组的子代病毒常是多倍体。(三）基因产物的相互作用表型混合和核壳转移第四节理化因素对病毒的影响一、物理因素的影响温度大多数病毒耐冷不耐热。在－70℃（数月）或－196℃（数年）条件下，病毒感染性可保持数月至数年。一般加热60℃经30min或100℃数秒钟可使大多数病毒灭活。pH值多数病毒在pH6～8范围内稳定。射线和UV 射线使核苷酸链发生致死性断裂；UV则是在病毒的多核苷酸上形成双聚体(如胸腺核苷与尿核苷)，抑制病毒DNA 或RNA的复制。* * 病原生物学教研室3000BC，埃及孟非思壁画中长老患小儿麻痹症。1、1892年，俄国学者伊凡诺夫斯基发现烟草花叶病原体能通过细菌滤器，并定名为滤过性病原。2、1898年，荷兰学者Beijerinck命名此种病原体为病毒。3、1898年，德国学者Loeffler和Frosch发现了口蹄疫病毒，揭开动物病毒学新篇章。4、十年后，相继发现了鸡瘟病毒（1900年）、黄热病毒（1901年）、鸡痘病毒（1902年）、狂犬病病毒（1903年）、鸡白细胞增生病病毒（1908年）、细菌病毒--噬菌体（1915、1917年）等。病毒的发现第三十四章病毒的生物学形状什么是病毒？病毒是一类体积微小、结构简单、只含有一种类型的核酸、严格细胞内寄生的、对抗生素不敏感，而对干扰素敏感的非细胞型微生物。病毒与其他微生物的比较- - - - - + 干扰素敏感性+ + + + + - 抗生素敏感性有性或无性二分裂二分裂二分裂二分裂复制增殖方式+ - - + + - 在人工培养基上生长DNA＋RNA DNA＋RNA DNA＋RNA DNA＋RNA DNA＋RNA DNA或RNA 核酸类型+ + + - + -
病毒学试题
试题 1 一、选择题 【A型题】 1．关于病毒基本性状叙述错误的是： A ．体积微小，无细胞结构 B．只能在活细胞中增殖 D．对干扰素敏感 E．耐冷不耐热 2．用于测量病毒大小的单位是： A．微米(μm) C．微微米(pm) D．毫微微米(fm) E．微微微米(am) 3．关于病毒结构叙述错误的是： A．核酸和衣壳组成核衣壳 C．衣壳由壳粒构成 D．病毒包膜表面可有刺突 E．各种病毒壳粒数目不相同 4．可称为病毒体的结构是： B．核酸 C．衣壳 D．包膜 E．壳粒 5．呈二十面体立体对称的DNA病毒是： B．风疹病毒 C．正粘病毒 D．弹状病毒 E．脊髓灰质炎病毒 6．呈螺旋对称型的RNA病毒是： B．腺病毒 C．痘类病毒 D．疱疹病毒 E．脊髓灰质炎病毒 7．决定病毒具有感染性的是： B．衣壳 C．包膜 D．神经氨酸酶 E．血凝素 8．病毒的增殖方式是： B．二分裂 C．分枝 D．减数分裂 E．芽生 9．下述与病毒蛋白质无关的作用是： A．吸附作用 B．保护核酸作用 C．病毒包膜的成分 E．免疫原性 10．病毒所合成的晚期蛋白的功能是： A．抑制宿主细胞蛋白质的合成 B．合成包涵体的基质蛋白 D．抑制宿主细胞核酸的合成 E．合成子代核酸所需要的DNA多聚酶 11．以破胞方式从细胞向外释放的病毒是： A．流感病毒 B．麻疹 D．腮腺炎病毒 E．呼吸道合胞病毒 12．以“出芽”方式从细胞释放的病毒是： A．ECHO病毒 C．柯萨奇病毒 D．腺病毒 E．脊髓灰质炎病毒 13．对病毒抵抗力叙述错误的是： A．大多数病毒60℃30分钟可被灭活 B．大多数病毒在－70℃下可存活 C．紫外线能灭活病毒 D．甲醛能使病毒灭活，但保留抗原性 14．一种病毒所产生的衣壳或包膜包在另一种 病毒基因组外，这种变异称之为 A．突变 B．基因重组 C．加强作用 E．互补作用 15．下述哪种属于病毒基因突变： A．交叉复活 B．多重复活 D．互补作用 E．表型混合 16．病毒与立克次体相同的特点是： A．含有DNA和RNA C．含有核蛋白体 D．以二分裂方式进行繁殖 E．对抗生素敏感 17．病毒不同于衣原体的特点是： A．能通过细菌滤器 C．可引起机体多部位感染 D．严格地细胞内寄生 E．在感染细胞内可形成包涵体 18．无包膜的病毒是： A．疱疹病毒 B．披膜病毒 C．流感病毒 E．狂犬病病毒 【B型题】 A 衣壳 B 核酸 C 包膜 D 核衣壳 E 壳粒 19．储存病毒遗传信息的是：B 20．保护病毒核酸的是：A 21．无包膜病毒完整病毒体的是：D 22．电镜下可见的病毒形态学最小单位是：E 23．含有宿主细胞成分的是：C A 裸露20面体对称型 B 裸露螺旋对称型 C 有包膜20面体对称型 D 有包膜螺旋对称型 E 复合对称型 24．流感病毒是：D 25．肠道病毒是：A 26．噬菌体：E 27．单纯疱疹病毒：C A 有包膜RNA病毒 B 无包膜RNA病毒 C 有包膜DNA病毒 D 无包膜DNA病毒 E 缺陷病毒： 28．流行性乙型脑炎病毒： A 29．丁型肝炎病毒：E 30．乙型肝炎病毒：C 31．腺病毒： 32 戊型肝炎病毒：B A 正粘病毒科 B 副粘病毒科 C 披膜病毒科 D 肝DNA病毒科
《病毒学》课程简介
病毒学课程简介 病毒学，顾名思义，是介绍病毒基本知识的。几乎每年都有病毒肆虐的新闻，如SARS, 禽流感，或埃博拉等。学生物的你肯定想知道小小的病毒何以有如此大的威力。病毒在体外是无生命的化学物质，由蛋白质和（或）核酸组成，只有在宿主细胞内才呈现生物的一面，是生物界的异类和魔法师。通过学习病毒学这门课，你可以知悉病毒的“魔法”，即病毒是如何成功侵入并操控宿主细胞的生理生化过程，以完成自身复制从而致病；还可以在病毒性疾病发生时，知道如何应对。 Virology is a basic biology science, is a body of knowledge with its own perspectives and its own internal development.Viruses are strictly intracellular parasitism. It is made up of nucleic acids and proteins, and possesses only one type of nucleic acid.Viruses are entities whose genomes replicate inside living cells using the cellular synthetic machinery and causing the synthesis of specialized elements that can transfer the viral genome to other cells.You can learn viruses, the wizards how play their sorcery to take over the host cellular machinery serve their ownpurposes by this curriculum.
病毒学检验
病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染 细胞培养技术：是对由组织分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的体外培养方法，即模拟体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术 二、单层细胞培养： 用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系） 三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种 四、 间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定 空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位的浓度 凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。 50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度。 LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量 ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量 CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量 五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩 六、病毒的保存：1、用低温（-60~25℃）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-196~150）保存 2、冷冻干燥保存 七、血清学实验的方法很多，最常用的是中和试验、补体结合试验、红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 中和试验：是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。 中和抗体：凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体 中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和细胞培养中进行
病毒学名词解释
1、感染：病毒生存的基本方式 2、毒粒：病毒的细胞外颗粒形式，也是病毒的感染性形式。一团能自主复制的遗传物质+蛋白质外壳+包膜，有保护和载体作用 3、螺旋对称壳体：亚基有规律的沿着中心轴呈螺旋状排列，进而形成高度有序、对称的稳定结构 4、核衣壳：病毒的蛋白质壳体和病毒核酸构成的复合物 5、裸露毒粒：仅有核衣壳构成的病毒颗粒 6、包膜：有些病毒的核衣壳包裹的一层脂蛋白膜，是病毒以出芽方式成熟时，由细胞膜衍生而来的 7、刺突：包膜或核衣壳上的突起 8、裂解量：每个受感染细胞所产生的子代病毒颗粒的平均数目 9、隐蔽期：自病毒在受感染细胞内消失至出现新的感染性病毒的时间 10、自外裂解：大量噬菌体在短时间内吸附在同一细胞上，使细胞壁产生许多小孔，引起细胞裂解，但是病毒病没有增殖，这种现象称为自外裂解 11、脱壳：病毒侵入后，包膜或壳体除去而释放出病毒核酸的过程 12、烈性噬菌体：感染宿主细胞后能在细胞内正常复制并且引起细胞死亡，形成裂解循环 13、温和噬菌体/溶原性噬菌体：感染宿主细胞后不能完成复制循环，噬菌体基因组长期存在于宿主细胞内，没有成熟的噬菌体产生。这一现象称为溶原现象 14、免疫性：被温和噬菌体感染后，形成的溶源性细菌具有免疫性，其他同类噬菌体虽然也能感染该细胞，但不能导致该细菌裂解，也不能增殖 15、遗传：亲代与子代之间形态结构和生理功能的相似性 16、变异：亲代与子代之间、子代的各个个体之间的差异性 17、株系：同一病毒的不同系或分离物 18、体外诱变剂：对病毒的静态核苷酸进行化学修饰，使其在后面的复制中碱基配对发生改变，导致同型碱基置换或异型碱基颠换，如亚硝酸，羟胺，烷化剂等 19、体内诱变剂：作用于代谢活跃的核苷酸，为碱基类似物或插入剂 20、遗传重组：重组是混合感染中病毒基因组之间的物理作用 21、分子内重组：通过核酸断裂与重接 22、重配：多分体病毒在混合感染中，来源于不同亲本病毒的基因组片段可能重新组合
病毒学题库
病毒学题库 一.填空题（10分） 1.第一个提出病毒概念的是：贝杰林克（Martinus Beijerink）。（病毒学之父） 2.病毒的特点有：没有细胞结构、仅有一种类型的核酸、特殊的繁殖方式、缺乏完整的酶系统和能量合成系统，也没有核糖体、绝对的细胞内寄生。 3.病毒的对称性有：螺旋对称、二十面体对称、复合对称、复杂对称。 4.病毒的复制过程有：吸附、侵入、脱壳、病毒生物大分子的合成、装配和释放。 5.肝炎病毒有：甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒。 6.昆虫病毒杀虫剂的缺点有：杀虫速度缓慢、病毒特异性强，寄主范围窄。 ★7.第一个发现病毒的人是：法国人Adolf Mayer 。 ★8.病毒的宿主有：微生物、植物、动物。 ★9.病毒的核酸类型有：双链DNA（dsDNA）、单链DNA（ssDNA）、双链RNA（dsRNA）、单链RNA（ssRNA）。 ★10.病毒突变体的种类有：条件致死突变体、蚀斑突变体、抗原突变体、共变体、适应新宿主突变体。 ★11.人畜共患的病毒有：流感病毒、狂犬病毒、朊病毒。 ★12.艾滋病病毒的主要传播途径有：性传播、血液传播、垂直传播。 ★13.昆虫病毒杀虫剂的优点有：对人畜（人体、畜禽、鱼虾等）安全无害，不会造成环境污染问题、病毒的宿主特异性高、昆虫病毒使用后效果明显。 二.判断改错题（少了大约11题左右，10对10错，共15分） 1.判断（描述）病毒的大小常用的单位是微米。（×，微米→nm或?） 2.病毒分类系统中“种”作为最小的分类单位。（√） 3.病毒的突变只是指自发突变。（×，病毒的突变可分为自发突变和诱发突变） 4.病毒的非增殖性感染有流产感染，限制性感染和潜伏感染。（√） 5.HIV核心为两条单链DNA构成的双体结构，并含有反转录酶。（×，DNA→RNA） 6.传染性非典型肺炎又称为严重急性呼吸综合症，是一种由冠状病毒感染所引起的急性呼吸道传染病。（√） 7.流感病毒的宿主限制性不是很严格，能跨越种属传播。（√） 8.流感病毒主要通过呼吸道传播，且病毒极易变异，往往造成世界性大流行，甚至爆发流行。（√） 9. 狂犬病只发生在犬和人身上，其他动物很少发生。（×，狂犬病病毒感染所有温血动物）★10.HBsAg阳性，乙肝。（） 三.名词解释（共5题，每题4分，共20分） 1.病毒基因重组：两种不同病毒感染同一细胞时，发生遗传物质（核酸）的交换，称为（病毒）基因重组，其子代称为重组体。 ★2.病毒隐码:描述病毒性质的一系列符号。包括核酸的类型、链数、分子量大小，病毒粒子的形状，宿主传播介质等。【有四对符号，包括核酸类型/核酸链数，核酸分子量（×106）/病毒粒子中含核酸的百分率，病毒粒子的外形/病毒被壳的外形，寄主种类/传播介体种类（或传播方式）】 3.缺损病毒：是指基因组上一个或多个病毒自我复制必需基因功能缺乏，它的复制需依赖其它病毒基因或基因组的辅助活性，否则在活的允许细胞内也不能完成复制。有些病毒因基因
常规病毒学实验技术
常规病毒学实验技术 （一）病毒的培养 实验动物：家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、仓鼠 主要用于： ①分离病毒，并借助感染范围试验鉴定病毒 ②培养病毒，制造抗原和疫苗 ③测定各毒株之间的抗原关系，（用实验动物作中和试验和交叉保护实验） ④制备免疫血清和单克隆抗体 ⑤作病毒感染的实验研究，包括病毒毒力测定、建立病毒病动物模型等 注意：选择对目的病毒敏感的实验动物品种品系，以及适宜的接种途径和剂量。 鸡胚 （一）条件要求 SPF鸡、孵化温度38-39℃，湿度40-70%，通风。新鲜受精卵：产下后不超过10天并保存10℃左右。 （二）优点 组织分化程度低，可选择不同的日龄和接种途径，病毒易于增殖，感染病毒的组织和液体中含有大量病毒，容易采集和处理，而且来源充足，设备和操作简便易行。 （三）接种途径 1．绒毛尿囊膜接种（10-12日龄鸡胚） 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。 1）方法一（造人工气室） ①在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的 烤焦圈。 ②用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗。 ③在气室端中央钻一个小孔。 ④用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜。 ⑤滴加滴生理盐水于刺破处，用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压， 使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。 ⑥用1ml注射器滴入2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。 ⑦用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的 小孔用石蜡密封。 ⑧鸡胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。 2）方法二 ①在气室端的卵壳上开约1.5×1.5cm的口。 ②用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜。 ③滴入接种物。 ④用透明胶纸封闭开口。 2．尿囊腔接种（10-11日龄） 用于正粘病毒和副粘病毒（NDV）
第十四章 病毒学实验技术
第三篇病毒学实验技术 实验学时计划：实验一实验须知6小时；实验二细胞培养用水的制备及检验15小时；实验三组织培养技术20小时；实验四病毒的分离及其理化性质的测定20小时；实验五病毒提纯技术15小时。 实验一实验须知 一、实验室注意事项 1．凡参加病毒学实验的人员均应接种与实验有关的病毒疫苗。 2．实验室内，特别是组织培养操作室，须经常保持干燥、清洁。在进行病毒接种或无菌操作前后，均应用紫外线照射灭菌，必要时可用3～5%的酚或煤酚皂溶液擦拭或喷雾消毒。 3．进入操作室，须先洗净双手并用消毒药水严格消毒；更换拖鞋，戴口罩和帽子，穿消毒的实验服。 4．病毒实验操作完毕后，将所穿戴实验服、口罩、帽子和拖鞋等物，出操作室前须更换；两手须经消毒药水严格浸洗后方能外出。 5．一个接种操作室，严禁同时进行两株病毒株的传种；吸取病毒材料时，勿于悬空吹出或打出。 6．凡沾病毒材料的吸管、试管等器具，须随时投入5%煤酚皂或1%盐酸溶液内，浸泡过夜，或煮沸消毒后才能进行洗涤。 7．凡带有感染性的鸡胚或动物尸体，须立即投入炉内焚化或进行煮沸消毒，或盛入容器内进行高压消毒后，方能携出室外进行处理。 8．工作人员要随时注意安全操作，以免发生事故；如发生意外，应迅速采取有效措施补救。 二、病毒材料收集、运送和保存 （一）材料的收集 分离病毒的成功率与采集材料有密切的关系。采集病料必须在适当的部位和时间内进行，前者与各种传染的发病机理有关，后者常规在疾病早期，因为通常在疾病刚出现时病毒的滴度高。各种病毒感染所采适宜病料参见图1和图2。 由于许多病毒的不稳定性，欲作病毒分离的材料，都应尽快的冷藏。－30℃保存的病毒材料（除少数例外），至少可以活存几个月以上；而－70℃保存的病毒，甚至几年不见毒力降低。有些病毒需在潮湿环境下保存，有的则需干燥环境（如Orf virus）。
病毒学试题
. '. 一、选择题 【A型题】 1．关于病毒基本性状叙述错误的是： A．体积微小，无细胞结构 B．只能在活细胞中增殖 D．对干扰素敏感 E．耐冷不耐热 2．用于测量病毒大小的单位是： A．微米(μm) C．微微米(pm) D．毫微微米(fm) E．微微微米(am) 3．关于病毒结构叙述错误的是： A．核酸和衣壳组成核衣壳 C．衣壳由壳粒构成 D．病毒包膜表面可有刺突 E．各种病毒壳粒数目不相同 4．可称为病毒体的结构是： B．核酸 C．衣壳 D．包膜 E．壳粒 5．呈二十面体立体对称的DNA病毒是： B．风疹病毒 C．正粘病毒 D．弹状病毒 E．脊髓灰质炎病毒 6．呈螺旋对称型的RNA病毒是： B．腺病毒 C．痘类病毒 D．疱疹病毒 E．脊髓灰质炎病毒 7．决定病毒具有感染性的是： B．衣壳 C．包膜 D．神经氨酸酶 E．血凝素 8．病毒的增殖方式是： B．二分裂 C．分枝 D．减数分裂 E．芽生 9．下述与病毒蛋白质无关的作用是： A．吸附作用 B．保护核酸作用 C．病毒包膜的成分 E．免疫原性 10．病毒所合成的晚期蛋白的功能是： A．抑制宿主细胞蛋白质的合成 B．合成包涵体的基质蛋白 D．抑制宿主细胞核酸的合成 E．合成子代核酸所需要的DNA多聚酶 11．以破胞方式从细胞向外释放的病毒是： A．流感病毒 B．麻疹 D．腮腺炎病毒 E．呼吸道合胞病毒 12．以“出芽”方式从细胞释放的病毒是： A．ECHO病毒 C．柯萨奇病毒 D．腺病毒 E．脊髓灰质炎病毒 13．对病毒抵抗力叙述错误的是： A．大多数病毒60℃30分钟可被灭活 B．大多数病毒在－70℃下可存活 C．紫外线能灭活病毒 D．甲醛能使病毒灭活，但保留抗原性 14．一种病毒所产生的衣壳或包膜包在另一种 病毒基因组外，这种变异称之为 A．突变 B．基因重组 C．加强作用 E．互补作用 15．下述哪种属于病毒基因突变： A．交叉复活 B．多重复活 D．互补作用 E．表型混合 16．病毒与立克次体相同的特点是： A．含有DNA和RNA C．含有核蛋白体 D．以二分裂方式进行繁殖 E．对抗生素敏感 17．病毒不同于衣原体的特点是： A．能通过细菌滤器 C．可引起机体多部位感染 D．严格地细胞内寄生 E．在感染细胞内可形成包涵体 18．无包膜的病毒是： A．疱疹病毒 B．披膜病毒 C．流感病毒 E．狂犬病病毒 【B型题】 A 衣壳 B 核酸 C 包膜 D 核衣壳 E 壳粒 19．储存病毒遗传信息的是：B 20．保护病毒核酸的是：A 21．无包膜病毒完整病毒体的是：D 22．电镜下可见的病毒形态学最小单位是：E 23．含有宿主细胞成分的是：C A 裸露20面体对称型 B 裸露螺旋对称型 C 有包膜20面体对称型 D 有包膜螺旋对称型 E 复合对称型 24．流感病毒是：D 25．肠道病毒是：A 26．噬菌体：E 27．单纯疱疹病毒：C A 有包膜RNA病毒 B 无包膜RNA病毒 C 有包膜DNA病毒 D 无包膜DNA病毒 E 缺陷病毒： 28．流行性乙型脑炎病毒： A 29．丁型肝炎病毒：E 30．乙型肝炎病毒：C 31．腺病毒： 32 戊型肝炎病毒：B A 正粘病毒科 B 副粘病毒科 C 披膜病毒科 D 肝DNA病毒科
分子生物学实验技术实验内容
2006 年《分子生物学实验技术》实验内容 RT-PCR （一）总 RNA的提取 实验安排：每两人抽提一管。为了使操作同步以节省时间，各组样品请一起离心。 操作步骤： TM（苯冰预冷的900μlLS -Biotragents液体样品加入 1.5ml Ep管中，再加入1、将100μ l 酚和异硫氰酸胍的混合物）。 2、将样品剧烈混合后，在室温放置5min。 3、加入200μl 氯仿，颠倒Ep 管混和两次，并剧烈振荡混和10s。 4、在4℃条件下，以10000×g 离心15min。 5、将上层水相转移到一个新的Ep 管中，加入等体积的异丙醇（Isopropanol）并混匀，然后在4℃放置至少10min。 6、在4℃条件下，以10000×g离心15min 后，小心并尽可能地去除全部上清夜。 7、用1ml 75%乙醇洗涤RNA 沉淀和管壁。 8、将RNA 沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10μl 无RNase污染的水（RNase- Free Water）将RNA 溶解并于-20℃保存。 注意事项： 1、所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr 或更长时间。 2、所用的塑料材料，如吸头、离心管等需用0.1% DEPC 水浸泡过夜。 3、配制的溶液应尽可能用0.1% DEPC，在37℃处理12hr 以上。然后用高压灭 菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC 处理过的无菌双蒸水 配制，然后经0.22μm 滤膜过滤除菌。 4、操作人员需在超净工作台上操作，并戴一次性口罩、手套，实验过程中手套要勤换。 二）反转录 实验安排： 每人做一管反应体系（20μ l）：按下列顺序加样 μl4 5× Buffer
医学病毒学部分复习
医学病毒学部分 【同步练习】 一、填空题（将正确答案填入空内） 1．构成病毒体的主要化学成分是____________和____________。 2．病毒体结构由____________和____________组成，又称为____________。 3．人类免疫缺陷病毒的感染类型是____________，脊髓灰质炎病毒的常见感染类型是____________，发病可表现为____________。疱疹病毒在原发感染后都引起____________。 4．病毒复制周期中感染细胞的第一步是____________，与隐蔽期有关的是 ____________。 5．鉴别病毒是否具有包膜，通常可采用____________。 6．包膜病毒体的释放方式主要是____________，麻疹病毒感染细胞后可形成 ____________。 7．可将自身基因整合在宿主细胞基因上的病毒主要有____________、 ____________和____________。 8．干扰素的主要功能有____________、____________和____________。 9．病毒的繁殖方式为__________，病毒在细胞内的增殖导致细胞的病理变化称为__________。 10．病毒的生物合成包括______________和_______________二大重要步骤。 11．病毒的复制周期包括______、_______、_______、________和________五个阶段。 12．病毒合成的蛋白质主要包括______________和____________两类。 13．病毒的穿入方式主要有______________和____________两种。 14．无包膜病毒体多数通过___________释放，有包膜病毒体主要通过______方式释放。 15．正链RNA病毒的RNA可直接作为___________，在细胞的__________上转译病毒蛋白质。 16．单链RNA病毒的核酸类型有___________、___________和___________ 三种。