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耐尔蓝染色液(Cain法)

耐尔蓝染色液(Cain 法)

简介：

脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。

Leagene 耐尔蓝染色液(Cain 法)又称硫酸耐尔蓝染色液，可以鉴别组织内的中性脂肪和酸性脂肪(脂肪酸或磷脂等)，如用于动脉粥样硬化灶、急性出血性胰腺炎的脂肪坏死时，该染色液可区分两种脂类。脂肪组织内出现酸性脂肪，即表示有中性脂肪分解。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、组织固定于的Cain 甲醛钙固定液，低温恒冷切片机或半导体制冷切片机切片，切片厚

度8μm 。

2、切片用蒸馏水水洗后，裱贴于载玻片上。

3、预热Nile blue 染色液至，切片入预热后的Nile blue 染色液浸染。

4、取适量的Cain 分化液，按Cain 分化液：蒸馏水=1：3的比例配制Cain 分化工作液。

切片直接用Page 分化工作液分化，直至无余色脱出为止。 5、蒸馏水稍洗。 6、甘油明胶封固。

染色结果：

中性脂肪红色或淡红色

脂肪酸、细胞核

蓝色复合脂类深浅不一的紫色

细胞质及其他组织成分

淡蓝色

编号名称

DL0020 3×50ml Storage 试剂(A): Cain 甲醛钙固定液 250ml RT 避光试剂(B): Nile blue 染色液 50ml RT 避光试剂(C): Cain 分化液 50ml

RT 使用说明书

1份

注意事项：

1、Nile blue染色液应室温保存，不可冷冻保存。

2、染色和分化过程均应控制在60℃。

3、该Nile blue染色法有一定的不确定性，未必能够染出所有颜色。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项货号：G2540 规格：100ml 有效期：12个月有效产品简介：软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。番红0软骨染色的原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。自备材料： 10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、Weigert铁苏木素、系列乙醇等。操作步骤（仅供参考）： 1.标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2.常规脱蜡至水。 3.入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min。 4.酸性乙醇分化液分化15s。 5.蒸馏水洗10min。 6.（可选）在固绿染色液内浸染5min，蒸馏水洗1min。 7.入Safranin O stain内浸染1-2min，蒸馏水洗1min。 8.分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

9.二甲苯透明，光学树脂封固。染色结果：软骨基质深红色软骨细胞核蓝色软骨细胞浆红色细胞核灰黑色注意事项： 1.需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2.Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3.切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4.Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 5.95%乙醇脱水时间不宜过长。 6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

尼氏Nissl染色

尼氏(Nissl)染色液产品简介：碧云天生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。 Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。 Nissl染色液染色后呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。本Nissl染色液染色的有效成分是Cresyl violet。Cresyl violet可以和RNA或DNA结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。保存条件：室温避光保存，至少一年有效。注意事项：特别注意：Nissl染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。样品数量较多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1. 样品处理 a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。无水乙醇5分钟。 90%乙醇2分钟。 70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟。 b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。 c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。 2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。 95%乙醇约5秒。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照

最优考马斯亮蓝染色Protocol

考马斯亮蓝染色推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。（见后页比对照片）操作步骤： 1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。） 2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时； 3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间） 4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次；脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用0.1 M Tris-H3PO4缓冲液（pH6.5）漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗＜1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。试剂的配制： 1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：1.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB-G250、20%乙醇脱色液：H2O 2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、0.12% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。脱色液：H2O 3、Neuhoff染色法：固定液：12%三氯醋酸染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、0.02% CBB-G250、使用前振摇。染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。脱色所需：0.1 M Tris-磷酸缓冲液（pH6.5）、25%乙醇、10%醋酸

4、传统考马斯亮蓝染色法：固定液：45.4%甲醇、4.6%乙酸染色液：45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.1% CBB-G250 脱色液：5%甲醇、7.5%乙酸 5、网上方法：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：30%甲醇、10%乙酸、0.125% CBB-G250 脱色液：30％甲醇，10％乙酸比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇ?ˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg. Neuhoff法传统法胶体法改良法网上法

HE染色和尼氏染色

HE染色 .HE染色简介: 苏木精一伊红染色法（hematoxylin-eosin staining ），简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝, 如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。 .实验步骤: 1.脱蜡: 将石蜡切片在65C烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（I）、（n）浸泡，各 15min ；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min,下行至90%、80%、70%酒精各2min,蒸馏水（I）、 (U)各2min； 3.染色: 石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收） 4.流水浸洗: 把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲） 5.1%盐酸酒精分化: 快速提拉2-3下，用时3-5s左右; 6.流水浸洗: 自来水洗3次，每次20min ； 7.伊红染色: 时间15min ； 8.流水浸洗; 9.脱水:

先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3S,以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90%2-3s, 100%酉精I、n 1min，二甲苯I、n 2min； 10.封片: 上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡三.结果的判断: 3.1实验结果: 细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 3.2 HE染色评定标准: (1)切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕; (2)染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。四?注意事项: 1?染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2?染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。

常用缓冲液及培养基配方

常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml

番红固绿切片染色快速法不使用石蜡

番红固绿染色简化法 ----------仅限观察植物苗期主根部导管1目的要求：由于专业的番红固绿需要使用超薄切片机，其功能繁琐，并十分耗时，其主要包括染色，包埋，切片，脱蜡，复染等多个步骤，这里不再赘述。若没有切片机，我们往往要四处奔走求人并支付高昂的费用。经本人亲自实验和总结，采用传统常规染色法，在不使用切片机和钞票的条件下，整理如下流程。若只作为一般实验的验证，样品的容量不大并不需要长期保存的情况下，不需要超薄切片机，只需使用双层刮胡刀片，显微镜可以观察1毫米左右的切片。直径最好大于1mm，肉眼可分辨，一般只用于观察主根。为切片方便，可稍微将根晾干，再进行横切或纵切。根据对刊用插图(照片)总的要求得出，文稿插图(含照片)的应用以少而精为原则。凡是能用文字说明的,应尽量不用插图,能用线条图表示的,就不用照片图;能用单色图表示的,就不用彩色图。即使是线条图也尽量避免搞成大幅的插页图,以便于编排和印刷。插图的线条必须准确,主次分明,清晰可辨,便于读者理解文字的内容。若切片够均匀，线条够清晰，也可作为论文插图。 2实验步骤： 2.1实验准备： 2.2材料：目的植物新鲜根部，刮胡刀刀片两片，越锋利越好，但注意安全。常规染色用品。 2.3试剂：无水酒精，95%酒精，蒸馏水，预先备制的苯胺番红试剂和苯胺固绿试剂（最好放置一段时间，可提前一月配置，效果更好，但不必要），二甲苯和50%体积无水乙醇和50%体积二甲苯混合液。 3实验步骤： 3.1切片：按照前文介绍方法切片，若视力好，手法稳，可用单个刀片细细切下，要求，横切厚度在1mm左右，并呈透明圆形，确保中心完好。 3.2染色： 1）滴1-2滴无水酒精； 2）吸去无水酒精用95%酒精冲洗，使其平铺于玻片，酒精分散均匀； 3）第1滴蒸馏水与材料上，是材料包裹于水滴中； 4）滴1-2滴苯胺番红试剂，染色1-3min； 5）使用95%酒精冲去浮色并脱水，处理至透明状态，韧皮部分由于富集细胞壁，颜色可以偏红，其余部分为粉色透明状； 6）少量（一小滴）苯胺固绿复染，并迅速吸去，并滴入无水酒精，操作在2s内完成； 7）继续用无水乙醇洗脱至半透明状，以为无集中色斑为佳； 8）各50%体积的无水酒精和二甲苯混合物，1-2滴； 9）滴1-2滴二甲苯透明； 10）擦去材料以外药剂，使玻片清洁，可不使用盖玻片，一定不能使材料山的二甲苯干掉； 11）镜检。

尼氏染色步骤

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸1ml 冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟； 95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 mickeyzq wrote: 焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸1ml 冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟； 95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进换焦油紫看看,焦油紫着色比较深. （二）神经细胞尼氏体染色正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。焦油坚牢紫显示尼氏体焦油坚牢紫1g 蒸馏水100ml *作方法： 1、切片脱蜡至水 2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟 3、水洗 4、用95%酒精分化 5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶结果：神经细胞单位：紫-蓝色细胞核：紫-蓝色尼氏体：紫-深蓝色注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。神经纤维染色使用说明： 1. 样品处理 a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。无水乙醇5分钟。 90%乙醇2分钟。 70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟 2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：

SDS-PAGE试剂配方

SDS-PAGE电泳所用溶液： 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙烯酰胺(Arc) 29 g N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1 g 用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 5×Tris-甘氨酸缓冲液(1 L) Tris碱15.1 g 甘氨酸(电泳级) 94 g 10 %SDS 50 mL 使用时稀释5倍使用 2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL) 0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL 10％(W/V)SDS 4 mL 甘油 2 mL β-巯基乙醇 1.0 mL (DTT（二硫苏糖醇）0.31g) 溴酚兰0.02g 双蒸水0.5 mL 室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 （G-250） 1.0 g 甲醇450 mL 冰醋酸100 mL ddH2O 450 mL 0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）甲醇100 mL 冰醋酸100 mL ddH2O 800 mL 医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)

SDS-PAGE所需溶液: A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 B液——1.5mol/L Tris·HCl，pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约 3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL（50mL）。 C液——1.5mol/L Tris·HCl，pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL（50mL）。 D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。 E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。 F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。

尼氏染色液(亚甲蓝法)操作步骤及注意事项

尼氏染色液(亚甲蓝法)操作步骤及注意事项货号：G1434 规格：3×50ml 保存：室温，避光，6个月。产品内容：规格 3×50ml Storage 名称试剂(A):Methylene Blue Stain50ml RT避光试剂(B):Nissl Differentiation50ml RT 试剂(C):Ammonium Molybdate Solution50ml RT 产品简介：尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质，能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。尼氏染色液(Nissl Stain，亚甲蓝法)主要优点是操作简便、染色稳定、适用范围广，可以用于石蜡组织切片的尼氏物质、神经元等的染色，尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标，当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时，尼氏体会发生溶解甚至消失。操作步骤(仅供参考)： 1、新鲜组织固定于20%甲醛液中，常规脱水包埋。 2、切片厚5μm，常规脱蜡至水。 3、Methylene Blue Stain滴染10min。 4、入Nissl Differentiation分化，在显微镜下观察至尼氏体清晰为止。

5、入Ammonium Molybdate Solution处理切片数分钟。 6、蒸馏水冲洗。 7、常规脱水透明，中性树胶封固。染色结果：尼氏小体蓝色背景红色或粉红色注意事项： 1、尼氏体离体后容易溶解，所以组织取出后应立即固定，否则难以着色。 2、组织固定起着非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。 3、本染色试剂盒对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。 4、石蜡切片厚度7～10μm或25μm(皮质神经元密度的评估要用25μm厚的切片)。

常规考马斯亮蓝染色液

常规考马斯亮蓝染色液简介：考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色或Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。采用常规染色方法需至少1h ，采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。组成：操作步骤(仅供参考)： (一)常规染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用次。 4、加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。Leagene 推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏水。 5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色。期间更换脱色液2～4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1～2h 后即可出现。 6、完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 (二)快速染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 2、随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。编号名称 PT0018 PT0018 Storage Commassie Blue Staining Solution 100ml 500ml RT 使用说明书 1份

植物制片的染色及显微化学鉴定方法

植物制片的染色及显微化学鉴定方法一、目的与要求 1、学习植物制片的一般染色方法。 2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。二、材料和用品 1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。 2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。三、实验内容 1、植物制片的染色方法 2、常用显微化学鉴定法四、实验方法 1、植物制片的染色方法用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：方法一：（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。（2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。染色结果：木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现蓝色或淡绿色。方法二：（1）将切得的薄片移入盛有FAA固定液的小容器中，盖上盖固定半小时到1小时，24小时以上也可。材料经固定如不及时制片可移入70%酒精中长期保存。（2）材料从固定液中移入盛有蒸馏水的小培养皿中，漂洗半小时到1小时，换水一次。（3）将材料移入载玻片上，用吸水纸吸去多余水分，加一滴苯胺番红染色约10分钟。（4）吸去染液，滴入95%酒精洗两次，去浮色及脱水。（5）加一滴苯胺固绿复染约2～5秒钟，并轻轻晃动玻片，使染色均匀。（注意：此步骤要迅速，若染色时间过长会使红色全部褪去。）（6）吸去染液，滴入无水酒精洗两次，去浮色及脱水。（7）滴入等量无水酒精与二甲苯溶液约1分钟后吸去，再滴入纯二甲苯冲洗2次，使材料透明。（8）擦去材料以外的残存药剂，使玻片清洁，但不使材料上的二甲苯干掉，并及时镜检。（9）镜检后，如材料的构造清晰，红绿对比鲜明，立即加一滴中性树胶封片。染色结果同样是木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现淡绿色。这种方法更节省时间一些。 2、常用显微化学鉴定法显微化学鉴定法即将材料经化学试剂处理后，在显微镜下检查、判定细胞壁的化学组成及细胞内含物性质的方

Cole氏苏木素染色液(常规染色)使用介绍

Cole氏苏木素染色液(常规染色) 产品说明：苏木素是组织化学和免疫组织化学中最常用的染料之一，可以广泛用于组织切片或培养细胞的染色。本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色等配合使用。可以在苏木素染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，也可以在免疫组化染色后再进行苏木素复染。染色步骤简单，操作时间短。苏木素染色后细胞核呈现蓝色。使?说明: 1、样品处理 a)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10 分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10 分钟。无水乙醇5 分钟。90% 乙醇2 分钟。70%乙醇 2 分钟，蒸馏水2 分钟， b)对于冰冻切片：蒸馏水2 分钟， c)对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10 分钟以上，蒸馏水洗涤2 分钟，换用新鲜的蒸馏水，再洗涤 2 分钟。 2、苏木素（HE）染色对于上述处理好的样品，用苏木素染色5-10 分钟（可以根据染色结果和要求调整时间），用自来水洗去残留的染色液，约10 分钟。蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。 3、脱水、透明、封片或进行其它染色 a)脱水、透明、封片：95%乙醇脱水2 分钟，换用新鲜的95%乙醇再脱水2 分钟；二甲苯透明 5 分钟，换用新鲜的二甲苯，再透明 5 分钟，用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色。 b)进行其它染色：如果进行免疫荧光染色或荧光染料染色，在苏木素染色后，70％乙醇洗涤2 次，每次 2 分钟。再用PBS 或生理盐水或TBS 或TBST 等用

于荧光染色的溶液浸泡 5 分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。注意事项： 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2 个样品做预实验。样品数量很多时，可使用染色架和染色缸，以便于操作。 2、本产品亦可反复使用多次，但染色效果会逐渐降低。 3、染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。产地：国产提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。保存：室温避光储存，有效期至少12 个月。关键词：Mayer'苏木素染液(免疫组化) Mayer'苏木素染液(免疫组化)相关染色产品:

丽春红(Ponceau S)染色液的配制及使用

丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。使用说明将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB 检测。补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。丽春红染色液的配制常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下：一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。 4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。

改良番红O-固绿软骨染色液说明书

改良番红O-固绿软骨染色液说明书货号：G1371 规格：5×50ml/5×100ml 有效期：6个月有效产品简介：软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。产品组成：名称规格5×50ml5×100ml Storage 试剂(A)A1:Weigert A液25ml50ml RT避光 A2:Weigert B液25ml50ml RT避光临用时，取A1、A2等量混合为Weigert染液，24h后失去染色力，不宜预先配制。试剂(B):酸性分化液50ml100ml RT 试剂(C):固绿染色液50ml100ml RT避光试剂(D):Safranin O stain50ml100ml RT避光试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT 自备材料： 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。第1页，共2页

台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理

台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。染色原理: 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝拒染法台盼蓝拒染法是利用台盼蓝只能将死细胞染成蓝色而活细胞不能被染上的方法检测细胞存活率的一种快速简便的方法。染色原理: 正常细胞具有完整的细胞膜结构，而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上，而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。流程: （1）将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×10细胞/ml，按10~10个细胞接种于96孔板，每孔100 μl；（2）培养细胞24小时后，对其进行不同处理，每个处理设三个平行对照；（3）收集细胞，经台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞，计算细胞存活率；（4）结果统计：镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。根据下式求细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100 注意事项:

台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。本品为生物染色剂，在细胞毒性试验中用于检测死亡细胞和垂死细胞，也可用于细胞活性的常规评估。如病毒检验，注入循环系统可使肾小管着色，哺乳动物、低等脊椎动物和昆虫的各种组织活体染色。台盼蓝染色的主要（原理）步骤： 1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液； 2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞； 3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液； 4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）； 5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min； 6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察； 7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽； 8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目； 9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。死细胞的细胞膜无屏障作用，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡.台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色.依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。作为细胞染色剂之一的台盼蓝(Trypan Blue)已被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入染料显示蓝色。通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无法区别自杀细胞还是坏死细胞。

PH0351 考马斯亮蓝染色液脱色液实验方法

PH0351|考马斯亮蓝染色试剂盒（染色液+脱色液） Commassie Blue Stain Kit Catalog No：PH0351Size：?100mL+500mL Store at RT 考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。试剂组分 Components Size 考马斯亮蓝染色液/Commassie Blue Stain100mL 考马斯亮蓝染色脱色液/Commassie Blue Decoloring Solution500mL 试剂存储室温保存，一年有效使用说明 1.常规染色脱色方法： a.电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 c.倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d.加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 e.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 f.完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。

改良番红O-固绿软骨染色液

改良番红O-固绿软骨染色液简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。组成：编号名称DB0082 5×50ml DB0082 5×100ml Storage 试剂(A) A1: Weigert A液25ml 50ml RT 避光A2: Weigert B液25ml 50ml RT 试剂(B): 酸性乙醇分化液50ml 100ml RT 试剂(C): 固绿染色液50ml 100ml RT 避光试剂(D): Safranin O stain 50ml 100ml RT 避光试剂(E): 乙酸溶液50ml 100ml RT 使用说明书1份操作步骤(仅供参考)： 1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、常规脱蜡至水。 3、入新鲜配制的Weigert染液染色。 4、酸性乙醇分化液分化。 5、蒸馏水洗1min。 6、在固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。 7、入Safranin O stain内浸染色，蒸馏水洗1min。 8、用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。染色结果：软骨基质深红色软骨细胞核蓝色

细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色注意事项： 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h后失去染色力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。有效期：6个月有效。

考马斯亮蓝R-250及G-250染料

考马斯亮蓝R-250及G-250染料考马斯亮兰G-250；名称：考马斯亮兰G-250 别名：考马斯亮兰G250，酸性蓝90，考马斯亮蓝G，康美赛蓝G-250，亮蓝G 英文：COOMASSIE BRILLIANT BLUE G-250 CAS：6104-58-1 相对分子量：854.04 分子结构：性状：暗蓝-紫-棕色结晶粉末。水中溶解度：40 g/L （20℃），溶于甲醇、乙醇；介绍及用途：考马斯亮兰G-250用于凝胶电泳和蛋白质染色。不用渗透到胶里就比萘酚蓝黑B1（Naphthol Blue Black B1）灵敏度高3倍，简单而又灵敏；可以进行各种蛋白检测，和劳里反应相牵连的化学物质和游离氨基酸对此蛋白染色检测无任何影响。也是P2X7嘌呤能受体激动剂。考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度（一）实验原理双缩脲法（Biuret法）和Folin―酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。 Bradford法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。（3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

改良番红 O-固绿软骨染色液

第1页，共2页改良番红G1371 5×50ml/5×100ml 6个月有效软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O 法等。改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O 结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O 是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O 着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O 淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O 染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。 1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、常规脱蜡至水。 3、入新鲜配制的Weigert 染液染色3-5min ，水洗。 4、酸性分化液分化15s 。 5、蒸馏水洗10min 。

6、在固绿染色液内浸染5min。 7、快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿。 8、入Safranin O stain内浸染5min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。 5、 Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 6、95%乙醇脱水时间不宜过长。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。第2页，共2页