免疫学实验指导书
免疫学实验指导
刘佳斌编
生命科学学院
生物技术系
2005.3
实验1
动物的注射采血及血清制备
家兔采血有耳静脉采血，耳动脉放血，心脏采血和劲动脉放血法，耳缘静脉采血一般适用于只需少量血液，常用于免疫注射采少量血，测其效价，心脏采血和耳动脉采血法，耳缘静脉采血一般只适用少量采血。常用于免疫注射采少量血，测其效价。心脏采血和耳缘动脉采血可采大量血有能保存动物，从动脉可采大量，动物死去。兔一般采血20ML不影响其存活。
鸡一般用心脏采血法，每只鸡一次取血20ML，不影响其存活，经3—6个月后，可再次采血。注射途径一般有皮下、静脉、皮内和腹腔。
一、目的与内容：
(一)目的
1.学习动物不同部位的采血方法
2.练习对家兔耳静脉的注射方法
3.用离心法制备血清
(二)内容
1、鸡心脏采血
2、家兔采血
3、制备血清
二、材料与用品
(一)材料
兔、鸡
(二)用品
生理盐水、注射器、剪刀、镊子、试管、离心管、离心机
三、操作与观察
(一)鸡心脏采血
1、固定鸡腿、翅膀，拔取心脏部位羽毛，用手将鸡按定。
2、寻找内肋骨到肩胛部皮下静脉，心脏在此静脉分支下面，以食指触摸心跳，消毒，垂直刺入针头，如触及肋骨则稍后退，将针头稍后偏于胸骨，切不可硬往里插，针头向里刺入后，可感到心脏跳动。此时，针头刺入心脏，徐徐抽取血液。采血20ML取下针头，将血液放入离心管。
(二)家兔采血
1、家兔心脏采血
（1）固定兔，剪取左前胸心脏部位的毛，酒精棉球消毒皮肤。
（2）用左手食指、中指、无名指防在右胸处，轻轻向左推，将心脏推至左恻固定，拇指在胸左恻由下向上数至第三至四肋骨探测心脏搏动最剧烈处
（3）将针头从搏动处刺入心脏，若准确徐徐抽取血液，足量后拔除，再改变方向成径直刺入心脏，取血液20ML，放入离心管。
（4）家兔静脉注射，在耳缘静脉注入1ML生理盐水。
2、家兔耳缘静脉采血。
(三)制备血清
四、作业与思考
1、心脏采血关键什么？需要注意哪些问题？
2、抓兔子时为什么不能抓它的双耳？正确的抓取方法是什么？
实验2
抗原与免疫血清的制备
将抗原注射入动物体内，刺激动物的B淋巴细胞转化为浆细胞，产生特异性抗体。待其血清中累积大量抗体时，采其血液分离血清，即抗体的免疫血清。抗原量低到一定程度时，抗体不能产生或用现有方法不能测出，但超过最高限度，又对抗体产生抑制作用。本实验抗原为细菌细胞，采用每毫升含9亿个细菌比较恰当。
一、目的与内容
(一)目的
1、抗原与抗体的制备方法
2、为凝集实验制备材料
(二)内容
1、抗原的制备
2、免疫血清的制备
二、材料与用品
(一)材料
大肠杆菌，家兔
(二)用品
麦氏比浊管，试管，注射器，9号、7号针头，离心机等
0.5%的石炭酸生理盐水
三、操作与观察
（一）抗原的制备
（1）取5ML0.5%的石炭酸生理盐水，注射大肠杆菌斜面，洗下菌台
（2）用无菌毛细菌滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管
（3）将此含有菌液的小试管放60度水浴箱中1小时，并不时摇动。
（4）取一与比浊管同质量的小试管，加菌液1ml，再加石炭酸生理盐水４ml（或更多，是原菌液浓度而定），混匀后各比浊管比浊。
麦氏比浊法原理：某一未知菌浓度，菌液在投射光作用下用肉眼与某一比浊管比较，如果二者透光度相同，即可目测该菌大致浓度。
（5）稀释：用0.5％的生理盐水，待菌液稀释9亿／ｍｌ，即等浊于第3支。
（二）免疫血清的制备
（1）注射动物：耳缘静脉注射抗原。
（2）14日采血1ｍｌ，分离血清，测其效价，合格即大量采血。
（3）心脏采血
（4）分离免疫血清。
四、作业与思考
１．在动物体内制备免疫血清为何要多次注射？
２．制备大肠杆菌抗原时，使用石炭酸生理盐水和加热６０℃1ｈ的目的是什么？
实验3
环状沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体反应，在有电解质的情况下，会产生细微的沉淀，称为沉淀反应。环状沉淀反应是使抗原抗体在沉淀管内形成交界面，然后在此交界面处出现—环状乳白色沉淀物，出现此环状反应的抗原最高峰，稀释度为沉淀素效价。
一、目的与内容
(一)目的
通过沉淀素的效价测定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果观察。
(二)内容
鸡血清与免抗鸡免疫血清发生沉淀反应。
二、材料与用品
(一)材料
鸡血清、兔血清、免抗鸡免疫血清
(二)用品
小试管、1ml吸管量筒、生理盐水
三、操作与观察
1.将鸡血清以1：25稀释，去该液1ml，用倍比稀释法稀释为各种浓度（1#1*、2#2*……）分别表示自第1管、第2管中吸取1ml以此类推。）
2.将9个干洁小试管插在试管架上，使直立。
3.用吸管吸取1：2的免抗鸡免疫血清，加入小试管底部，每管约两滴。
从最高峰稀释度加起，加入时沿壁徐徐加入，使与下层免抗鸡免疫血清之间形成界面，切勿摇动。
5.室温静置15—30分钟，观察试管中的两液面交界处，有无白色沉淀出现。
6.结果记录：由白色沉淀“+”，无沉淀“—”，出现沉淀最大稀释度的试管其稀释度倒数为沉淀素效价。
四、作业与思考
1.结果：
该沉淀素效价为
2.试验时为何稀释抗原，而不稀释抗体？
实验4
玻片凝集反应
细菌细胞成红细胞颗粒抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可以看见的凝集块，称为凝集反应。玻片凝集法主要利用抗血清来鉴定未知菌，也可用来显示免疫血清的存在，这是一种定性方法。
一、目的与内容
(一)目的
1.了解血清学反应的基本原则。
2.学习玻片凝集现象。
3.观察凝集现象。
(二)内容
兔抗血清与与大肠杆菌发生凝集反应。
二、材料与用品
(一)材料
大肠杆菌、注射大肠杆菌抗原后的家兔
(二)用品
琼脂斜面、培养物、生理盐水、玻片、接种环、血清
三、操作与观察
1.采集家兔血液10ml，离心，制备抗血清。
2.以1：10用生理盐水稀释抗血清。
3.在玻片一端用小滴管加1 滴1：10抗血清，另一端加1滴生理盐水。
4.挑取少许细菌混入生理盐水中，再搅匀，挑取少许细菌混入血清，搅匀。
5.将玻片略微摆动后，静置室温中，1—3 分钟后观察一端是否有凝集反应出现，另一端为生理盐水对照，仍未均匀混合。
四、作业与思考
2. 是否出现凝集反应，如没有分析原因？
3.为何采用生理盐水稀释血清，而不用蒸馏水？
医学免疫学 实验设计 例子
《医学免疫学》实验设计 期别：xxx 班级：xx 学号：xxxxxxxx 姓名：OOO IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制 【立题依据】 自身免疫性疾病（Autoimmune diseases）是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识，也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员，在全球大约有2000万患者，中国至少有100万的患者，但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度（75%），表现为明显的家族遗传性。同时，Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症，如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制，并探索更加有效治疗及预防方案，对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。 Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞（APC）和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子，研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ，由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子，这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击，使其丧失胰岛素分泌活性，最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞（Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链（CD25）分子，胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。 白细胞介素-35（IL-35）是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子，属于IL—12细胞因子家族，IL-35为异源二聚，主要由活化的Treg分泌，对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用，参与介导机体免疫耐受的形成。IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制，还不十分清楚，仍有待继续研究和解决。 【实验目的】 本实验就是通过提高NOD系小鼠（Ⅰ型糖尿病患鼠）体内的IL-35水平，观测小鼠各期的血糖尿糖等水平及后期的Ⅰ型糖尿病发病率、胰岛炎评分等，评定IL-35对Ⅰ型糖尿病的预防及治疗效果，并与其它一些免疫抑制性的药物（环孢菌素A）等，进行药敏对比；同时，体外测定小鼠体内IL-4及干扰素-γ（IFN-γ）的等含量及调节性T淋巴细胞的含量等，对小鼠的免疫体质及IL-35对Ⅰ型糖尿病作用的免疫学机制有大体认识及方向把握，为以后的研究打下基础。从而为新药（联合药）的开发，免疫抑制领域的深入研究有一定意义。 【实验对象】 NOD系Ⅰ型糖尿病鼠和NON系正常不患病鼠（雌性4周龄） 起源在对ICR/Jcl小鼠进行近郊培育的第6代，从白内障易感亚系分离出非肥胖糖尿病品系（NOD）和非肥胖正常品系（NON）。在近交20代时，首先发现NOD雌鼠有胰岛素依赖性糖尿病。 特征自发Ⅰ型糖尿病以及多种自身免疫疾病小鼠。通过病理学观察发现，NOD小鼠自身免疫性胰岛炎发生于4周龄。NOD小鼠发病后，充分呈现该品系小鼠糖尿病的生理生化特征即：尿频·多饮·高血糖症状。在几周的时间內，血糖迅速升高，饮水量剧增，大量的排尿，体重迅速下降，在这个过程中，患鼠血糖呈现迅速上升，后逐步下降，但仍维持高于正
医学免疫学实验教学大纲
《医学免疫学》实验教学大纲 实验名称：医学免疫学 学时：6学时 学分： 适应专业：护理学专业 执笔人：边藏丽 审定人：王恺兵 一、实验目的与任务 实验教学是医学免疫学教学的重要组成部分，通过实验教学加深对基础理论知识的理解，了解常用的免疫学检查方法，掌握免疫学基本实验技术（试管凝集、玻片凝集、对流免疫电泳、免疫细胞形态观察、淋巴细胞分离、ELISA等），培养学生严谨求实的科学态度以及观察、分析、综合能力、创造思维能力和初步的科研能力。 二、教学基本要求 医学免疫学实验对象多为具有传染性的材料，要求学生在实验教学中严格遵守实验室规则，牢固树立无菌观念，认真操作与观察实验结果，实事求是的记录实验结果，并对实验结果进行认真分析和讨论。 四、实验教学内容及学时分配 实验一凝集反应（试管凝集、玻片凝集） 3学时 1．目的要求 掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素；掌握凝集反应原理、方法和用途。 2．方法原理 颗粒性抗原与相应抗体在一定条件下特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象。 3．主要实验仪器及材料 试管、玻片、水浴箱、吸管、伤寒杆菌“H”“O”诊断菌液、大肠埃希菌、大肠埃希菌
诊断血清等。 4．掌握要点 掌握凝集反应原理、方法和用途；血清效价；凝集现象的观察。 5．实验内容： （1）玻片凝集（抗原定性试验） （2）试管凝集（抗体定量试验） 实验二对流免疫电泳、血型鉴定 2学时1．目的要求 掌握沉淀的反应原理、方法和用途；了解对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；掌握血型鉴定的反应原理、方法及结果判断。 2．方法原理 对流免疫电泳是将经典沉淀反应与电泳技术结合而设计的一项实验。沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生结合并出现肉眼可见的沉淀物的一种血清学反应。 带电的胶体颗粒可在电场中移动，其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。抗原在的缓冲带负电荷，将抗原加于琼脂板阴极端的小孔中，由阴极向阳极移动；抗体为球蛋因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。此种在双向琼指扩散基础上加电泳的方法，称为对流免疫电泳。 血型鉴定属直接凝集反应。将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。 3．主要实验仪器及材料 标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）、酒精棉球、采血针、载玻片、待测血清、甲胎蛋白诊断血清，肝癌病人阳性血清， L巴比妥缓冲液，琼脂对流免疫板、打孔器、加样器、电泳仪等。 4．掌握要点 （1）对流免疫电泳的操作步骤，结果观察； （2）血型鉴定的方法及结果判断。 5．实验内容： （1）讲述沉淀的反应原理、方法和用途；对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；血型鉴定的反应原理、方法及结果判断； （2）对流免疫电泳的操作及结果观察； （3）血型鉴定的操作及结果观察； 实验三小鼠吞噬细胞及转化细胞形态观察 2学时 1.目的要求 观察吞噬细胞的吞噬现象；了解机体的非特异性免疫功能。观察转化细胞、淋巴母细胞的形态了解机体的特异性免疫功能。 2．方法原理 巨噬细胞可吞噬异种或异体细胞等体积较大的异物，中性粒细胞可吞噬多种细菌。观察这两类细胞的吞噬现象，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数，用以评价机体的免疫状态。 淋巴细胞，在受抗原的刺激后，可转化为淋巴母细胞，淋巴细胞转化率的高低可反映机体细胞免疫水平。
医学检验免疫学检验归纳总结
医学检验免疫学检验归纳 总结
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 方针滴定法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫：
免疫放射： 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 竞争法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术
固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：..........
《医学免疫学与病原生物学》
《医学免疫学与病原生物学》 课程实验教学大纲 [适用对象]中医学（骨伤）、针灸推拿学专业 [实验学时] 9 学时 一、实验教学任务和目的 《微生物与免疫学实验》是与《微生物与免疫学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的医学专业基础实验课程。课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础医学有关课程和临床医学课程、为学生将来从事医药相关工作和科研工作奠定基础。 二、实验教学基本要求 （1）训练学生掌握微生物学与免疫学最基本的操作技能。 （2）加深理解课堂讲授的微生物学与免疫学理论。 （3）培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。 （4）培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。 (5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 三、实验教学内容 实验一细菌的人工培养法 1、实验目的和要求 （1）掌握各种培养基接种技术。 （2）熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。 （3）了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。 2、实验内容 （1）分离培养法(平板划线法) （2）斜面培养基接种方法 （3）液体培养基接种法 （4）半固体培养基的接种法 （5）观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌
在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。 3、实验仪器 普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。 4、实验学时 1学时 实验二细菌的分布及消毒与灭菌 1、实验目的和要求 掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在医学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。 2、实验内容 （1）高压蒸气灭菌法 （2）干热灭菌器（干烤箱） （3）紫外线的杀菌实验 （4）热力对芽胞及繁殖体的作用 （5）药物敏感性试验 （6）化学消毒剂的杀菌的作用———手指皮肤消毒前后的细菌学检查 （7）空气中的细菌检查 （8）污水和净水中的细菌数检查 （9）皮肤表面的细菌检查 3、实验仪器 普通琼脂平板、1％高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。 4、实验学时 2学时 实验三细菌形态与结构的检查法 1、实验目的和要求 (1)学会显微镜油镜的使用和保护方法。 (2)认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。 (3)掌握革兰氏染色方法 (4)了解细菌的动力 2、实验内容 (1)显微镜油镜的使用 (2)观察细菌的形态结构 (3)动力试验 (4)革兰染色 3、实验仪器
免疫学及免疫学检验学题库答案
一、名词解释第1章概论 1.免疫学： 2.免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学： 第2章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence） 10.最适比（optimalratio） 带现象（11.zonephenomenon） 第3章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 半抗原 13.免疫佐剂14. 多克隆抗体15.(polyclonal antibody, pcAb) 凝集反应章5第 16.凝集反应 直接凝集反应 17.间接凝集反应18. 明胶凝集试验19.
第6章沉淀反应 20.沉淀反应 絮状沉淀试验 21. 免疫浊度测定 22.凝胶内沉淀试验23. 单项扩散试验24. 双向扩散试验 25. 免疫电泳技术26. 对流免疫电泳 27. 火箭免疫电泳28. 免疫电泳29. 免疫固定电泳30.第19章补体检测及应用31.补体 免疫溶血法32. 33.补体结合试验 第22章感染性疾病与感染免疫检测 34.感染 第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应 Ⅰ型超敏反应 36. Ⅱ型超敏反应 37.Ⅲ型超敏反应38. Ⅳ型超敏反应 39. 第24章自身免疫性疾病及其免疫检测
40.自身耐受 自身免疫 41. 自身免疫病42. 自身抗体43. 抗核抗体44. 第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45.免疫增殖性疾病 免疫球蛋白增殖病46. 47.本周蛋白 血清区带电泳 48.免疫电泳49. 免疫固定电泳 50.第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病 获得性免疫缺陷综合征 52. 第27章肿瘤免疫与免疫学检验 53.肿瘤免疫学 肿瘤抗原 54.肿瘤标志物55. 第28章移植免疫及其免疫检测 56.移植 主要组织相容性复合体 57.移植排斥反应58. 移植物抗宿主反应59.(GVHR) 血清学分型法60. 二、填空题。．
免疫试验设计
免疫学实验设计 题目：StreamlineDireetHST分离卵黄抗体班级：2011级临床医学本科（12）班姓名：
StreamlineDireetHST分离卵黄抗体班级：2011级临床医学本科（12）班 作者及学号: 一、实验背景 1、卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白（Egg Yolk Immunoglobulin，lgY），目前研究较多的是鸡卵黄抗体。母鸡接受免疫后，在卵黄成熟期，血液中的免疫球蛋白IgG选择性的转移到卵黄中形成IgY。IgY是一种7S免疫球蛋白，分子量180kD，由两条重链（分子量22~30kD）组成，等电点接近5.2。IgY的结构虽与IgG相似，但其Fc段氨基酸组成与IgG相差很大，不结合类风湿因子，不与蛋白A、G以及哺乳动物Fc受体和补体结合。在免疫检测中，可代替哺乳动物来源的抗体，提高监测的特异性及敏感性。已经证明特异性IgY对人及动物的许多疾病具有一定的预防和治疗作用，与其他用于被动治疗的免疫球蛋白相比，IgY具有价廉易得、稳定性好、可口服等优点，在疾病的免疫检测和防治方面具有良好的前景。 IgY具有以下优点: （1）由于鸡与哺乳动物的种系关系较远,可产生针对哺乳动物保守蛋白的抗体(在哺乳动物体内难以产生),用于免疫学测定“同时IgY不与类风湿因子 (RF)及哺乳动物补体结合,减少了免疫检测的干扰,提高准确性”。 （2）经特定抗原免疫后,母鸡产生对抗原的持久性应答,可不断获得特异性的多克隆抗体,其均来源于同一个体,抗体均一性好。 （3）卵黄中的IgY含量明显高于鸡血清中lgG的含量,约为巧一25mg/mL卵黄在相同的免疫时间内,由一只鸡所生鸡蛋中提取的抗体量是由一只兔的血清制备的120倍。 （4）IgY还可抵抗幼龄动物的胃酸屏障作用,并可抗肠道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。 鸡蛋提供了廉价易得的IgY来源，从一枚鸡蛋中可获得100~250 mg IgY。如何将大量的卵黄抗体提取出来，是决定IgY能否被广泛应用的一个重要前提。鸡卵黄中含水48%、蛋白质17.8%、脂肪30.5%，其中几乎所有的脂肪都与蛋白
免疫学检验课程大纲
《免疫学与免疫学检验》课程教学大纲 一、课程的性质和任务 《免疫学与免疫学检验》课程是高等职业院校医学检验技术专业的专业核心主 干课程是从事医学实验室工作专业技术人员的一门必修的专业课程。随着免疫学和 免疫学技术的发展免疫学检验技术成为医学检验中的一个重要组成部分。免疫学检 验技术以其特异性强、灵敏度高、结果稳定、方便快捷和成本低廉的特点应用范围 廷伸至医学检验专业的各个领域尤其是床旁检验POCT产品的应用当中发展成为一 种微量化学定性或定量分析方法。对疾病的病因、发病机制、诊断、治疗和特异性 预防起着重要的作用。 二、课程教学目标 1. 使学生掌握抗原、免疫球蛋白、抗原和抗体反应、补体和免疫应答等免疫学 基础知识和理论，熟悉免疫系统和免疫分子概念和知识。 2. 使学生能够熟悉免疫学检验的基本原理和设计方法，使学生掌握抗体制备技术、免疫比浊分析、酶免疫分析术和荧光免疫技术等基本检验方法。 3. 使学生掌握免疫学常规仪器的操作和维护，使学生熟悉免疫学实验室的一般 管理方法。 三、教学内容与要求 第一章绪论 【教学目的】通过本章学习，了解免疫学的主要成就及与医学的关系，理解免疫学研究的基本内容，掌握免疫学的基本概念 【教学重点与难点】本章重点是免疫学基本概念，难点是免疫系统。
【教学内容】 第一节免疫学和免疫学检验概况 一、免疫应答的类型和特征 二、免疫学发展简史 三、免疫学检验 第二节免疫系统 一、免疫器官 1、中枢免疫器官 2、外周免疫器官 二、免疫细胞 1、淋巴细胞 2、免疫辅佐细胞 三、免疫分子 【教学建议】课堂讲授 第二章免疫化学 【教学目的】通过本章学习，了解补体激活的三条途径，理解抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素，掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能【教学重点与难点】本章重点是掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能，难点是抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素。 【教学内容】 第一节抗原 一、抗原的性质 1、异物性 2、理化特性 3、其他因素 二、抗原的特异性 1、抗原决定簇 2、共同抗原和交叉反应
免疫学实验指导
实验一免疫球蛋白的粗提（盐析法） 一、实验目的 1、学习免疫球蛋白的粗提方法 2、实践IgG分离纯化过程 3、了解分离纯化抗体的原理 二、实验原理 随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，常用盐析法、凝胶柱层析、离子交换剂层析以及免疫亲和层析等技术对血清抗体进行分离纯化。但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵提纯为基础，再经过透析或层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。硫酸铵溶液能使蛋白质胶体脱水并中和其电荷而使之沉淀下来（称为盐析）。不同浓度的硫酸铵盐析蛋白成分不同，利用这一原理提取所需的免疫球蛋白成分。盐析只能粗提，为了获得纯化的免疫球蛋白成分，必须进一步采用层析的方法进行分离。 水膜与同性电荷的排斥作用是蛋白质胶体稳定的基础，在蛋白质胶体溶液中加入一定量的（NH4）2SO4或Na2SO4盐类，使溶液中大部分自由水分子转变为离子水化分子，降低蛋白质极性基团与水分子的相互作用，破坏蛋白质水膜，蛋白质溶解度也随之降低。蛋白质由于分子质量和携带的电荷不同，可在不同浓度的高盐溶液内分级析出。33% （NH4）2SO4为沉淀IgG的最适饱和度。
二、实验材料与试剂配制 1．人全血清（购买商品） 2．硫酸铵饱和溶液 硫酸铵800g~850g H2O 1 000ml 加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH 调pH至7.0（不调pH值也可以）。 注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即可。 3．0.01Mol/L pH7.4 PBS液 A液：0.10Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·2H2O 15.60g
医学检验 免疫学检验 归纳总结
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验(RBC膜上的不完全抗原) 间接coombs试验(血清中的游离抗原) 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫:放射免疫: 免疫放射: 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定(方法) 双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定(方法) 双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA (方法)Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法
其她标记技术 化学发光免疫分析技术CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素,亲与素放大技术 固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验ELISPOT 免疫印迹法IBT/EITB 放射免疫浊度试验RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞与B 细胞的分离E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲与板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞T细胞MTT比色法 CFSE(活细胞染料) T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞:B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞:、、、、、、、、、、 吞噬细胞、、、、、、、、、、、、、、、
微生物免疫学实验报告
1实验内容： 2显微镜油镜的使用与保护。 3细菌的形态与结构的观察。 4实验目的： 5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。 6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。 7熟悉细菌的特殊结构。 8实验材料： 显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。 4实验方法： (1)显微镜油镜的使用与保护 显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的 工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。 1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。 2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。 3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。 ⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。 ⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。 4、显微镜的保护： ⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。 ⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。 ⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。置于干燥处，以防受潮。 (二)细菌形态观察
1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌 2、细菌的特殊结构： 荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌 鞭毛：水弧菌（周毛菌） 芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）
医学免疫学实验教学开展综合设计性实验的探索
医学免疫学实验教学开展综合设计性实验的探索 发表时间：2015-08-26T15:57:35.263Z 来源：《医药前沿》2015年第19期供稿作者：阳帆曹艳华杨志英李坚(通讯作者) [导读] 湘南学院基础医学部传统医学免疫学实验实验内容滞后，教学方法上普遍采取灌输式教学，考核办法僵化。 阳帆曹艳华杨志英李坚(通讯作者) （湘南学院基础医学部湖南郴州 423000） 【摘要】传统医学免疫学实验实验内容滞后，教学方法上普遍采取灌输式教学，考核办法僵化。结合医学免疫学自身特点，以培养创新型医学人才为目标，对实验教学进行教学改革，在医学免疫学实验中开展以病例为引导的综合设计性实验。通过实施新的实验项目，学生综合分析及解决问题的能力、独立思考能力等均得到提高。 【关键词】医学免疫学；实验教学；教学改革 【中图分类号】R19 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）19-0365-02 医学免疫学是基础医学中的一门重要学科，也是现代生命科学研究的前沿学科，其研究理论及相应技术的快速变革拉动着整个生命科学的快速进步，尤其是基于免疫学理论的新方法和手段。此外，基于免疫学理论的治疗手段与药物不断出现，免疫学知识在临床诊疗中运用已愈发广泛。但是，大多数高校的免疫学教学仍落后于发展，其中实验教学尤为突出，传统的免疫学实验教学大多是理论知识的验证与简单重复，实验内容设置难以适应现代免疫学的发展，学生在实验过程中实践能力差、兴趣低下，实验报告往往相互抄袭。因此，我们尝试改革部分传统医学免疫学实验，新增了一个综合设计性实验项目，旨在引入临床案例，从而使学生转变为教学主体，促使学生自主进行实验设计，调动其学习积极性，培养学生操作能力及创新意识，也符合时代发展要求[1]。 1.综合设计性实验的要求 《普通高等学校本科教学工作水平评估方案( 试行)》对实验教学提出了开设设计性实验的要求，并对设计性实验进行了定义：“设计性实验是指给定实验目的要求和实验条件, 由学生自行设计实验方案并加以实现的实验”[2]。设计性实验又被称为探索性实验，其基本过程包括：①明确实验目的，查阅文献，拟订立题报告；②设计实验方法和实验步骤；③进行预实验，根据实验结果调整或修改设计方案，进行正式实验；④收集整理实验资料并进行统计分析；⑤总结和完成论文，进行论文答辩[3]。 与传统实验相比，设计性实验强调的是学生的主体地位，通过引导式教学辅助学生对问题开展调查、分析及验证，在实施过程中学生可将基础知识与临床联系，有利于学生综合分析能力及独立思考能力的培养。 2.实验题目的选择 在选择实验题目的过程中，充分考虑理论课程的教学进度及大纲要求，力求保证学生在实验过程中在掌握基本理论及基本操作的同时，又能了解相关临床疾病的免疫学诊疗进展等。因此我们选择以某一疾病案例为出发点，要求学生就如何检测此疾病血清标志物及检测意义等进行实验设计。给出题目同时，教师将已具备的实验条件以及设计性实验组织实施过程对学生进行讲解。3.实验的组织与实施 3.1 实验设计 学生得到课题后，首先进行自选分组，要求每组8～10人，教师指导学生课余时间查阅相关书籍、文献及资料等。此后，学生整理并汇总相关资料形成各组实验方案以及注意事项。实验设计完成后以PPT形式进行小组汇报，要求教师及其他小组成员参与，对其实验方案进行讨论与评估。此过程中，教师的角色是一名 “引导者”，目的是培养学生分析、解决问题的能力以及独立思考的能力，锻炼其科研思维能力，促使学生由被动接受向主动参与转变。 3.2 正式实验 学生确定方案后，教师引导学生积极参与实验准备，通过准备实验帮助学生及时修正方案存在的缺陷。实验开展过程中，教师应将基本操作方法及注意事项向学生进行讲解与示范，运用多媒体、显微互动等多种手段进行直观讲解。使学生掌握规范的基础操作技能，培养其实践动手能力。 4.实验报告或论文的撰写与评价 实验结束后，要求学生根据自己的客观实验结果书写实验报告或论文，报告内容包括设计方案、实验器材、实验步骤、存在的问题及解决办法、注意事项、数据处理及体会等。 由于实验的目的是培养学生发现、分析及解决问题的能力，因此，教师应引导学生就客观的实验结果进行分析，促使其发现实验设计的不足，指导学生将临床病例与实验结果结合从而综合分析问题，培养学生综合分析能力。 在对学生报告或论文进行评价时，需着重综合素质的考评，考评的目的是一方面培养学生独立思考、发现问题及分析问题的能力，另一方面提高学生的操作规范性及实验完整性。 5.结语 开展综合设计性实验使学生尽早地接触了临床，使其初步了解在临床病例中如何发现问题，并如何分析问题及解决问题，培养了学生的综合思维能力，提高了其对免疫学的兴趣。实验开展过程中摒弃传统的灌输式教学，将学生放于主体地位，取得了较好的教学效果。然而，综合设计性实验的开展对教师要求较高，教师需就临床病例的选择、实验选题及整个实验有序开展进行大量前期准备，此外，对教学经费预算及实验组织统筹等要求较大，仍需进一步改进。 【参考文献】 [1] 王飞,沈利.病原生物学验证性实验与设计性实验结合教学的实践[J]. 实验技术与管理, 2015, 2: 185-187. [2] 教高厅[2004]21号.普通高等学校本科教学工作水平评估方案(试行) [S]. [3] 周利梅,陈新民,李敏.在设计性实验中培养医学生的科研能力[J].医学教育探索,2007, 6(12): 1126-1127，1135. 资助项目：湘南学院“十二五”重点学科
医学免疫学教案
第1次课教学整体设计
、课堂训练内容安排 （1）案例； （2）通过图片思考、根据情境设计展开讨论分析； （3）问题探讨，总结归纳； （4）培养学生创新思维。 三、课后作业与思考题：（根据课程内容适当设计巩固性作业、项目式作业、预习性作业、推荐参考书及网站） （1）项目式作业： 每小组针对每种类型超敏反应至少写出两种疾病和对应的治疗方案、护理注意事项（2）预习性作业： 案例角色扮演 教学后记:
教学过程（教学设计实施步骤及时间分配） 步骤1：师生互问好，考勤（3 分钟） 步骤2：复习，提问（4 分钟） 步骤3：图片展示，案例，学生分析（8 分钟） 步骤4：教师对知识点进行集中总结 一、概念 机体接受某些抗原刺激后，再次接触相同抗原时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。 二、类型 I型超敏反应：速发型 U型超敏反应：细胞毒型、细胞溶解型 川型超敏反应：免疫复合物型、血管炎型 W型超敏反应：迟发型 （一）1型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 过敏性休克：某男孩，15 岁，急性扁桃体炎，青霉素治疗。皮试为弱阳性，护士误作阴性处理，给患者静脉滴注青霉素，约半分钟后，患者出现胸闷、气急、呼吸困难，随即抽搐、昏迷、抢救不及而死亡。（时间短、症状重）步骤5：学生分析，回答（5 分钟） 2、常见疾病 过敏性鼻炎、荨麻疹、湿疹、哮喘、消化道上吐下泻等 3、变应原接触/吸入性变应原：花粉、室尘、动物皮毛等 食物变应原：鱼、虾、蛋、牛奶、海产品等药物：青霉素、异种免疫血清（TAT、普鲁卡因、VitB等 步骤6：视频播放（5 分钟）
（二）n型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某产妇27岁，血型RH-,产下的RH+女婴浑身多处瘀斑，2天后死亡。诊断死于新生儿溶血症。 新生儿溶血的机制 步骤7：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 输血反应、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血细胞减少症、甲状腺功能亢进症 （三）川型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某男8岁，因患白喉大量注射动物免疫血清，1 -2周后局部红肿、淋巴结肿大、皮肤出现皮疹、 发痒、面部及眼睑浮肿、关节疼痛、肾小球肾炎、尿中出现蛋白。为什么 步骤8：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 局部免疫复合物病、全身性免疫复合物病 （四）W型超敏反应（5分钟） 1 、案例分析 高校新生入学后，以0T试验普查对结核病免疫力。 1 、常见疾病 传染性迟发型超敏反应性疾病、接触性皮炎、同种异型移植排斥反应3、特点 （1 ）发生较慢，常需24?72小时; （2）无抗体和补体参与。 （3）炎症反应与效应T 细胞和吞噬细胞及其产生的细胞因子或细胞毒性介质有关步骤9：临床案例，小组分析，讨论（10 分钟）
《免疫学检验》教学大纲.
《免疫学检验》教学大纲 课程编码：10272042 课程名称：免疫学检验 英文名称：Immunological detection technique 开课学期：7 学时学分：40/2.5 课程类型：专业课 开课专业：预防医学专业 选用教材：《免疫学检验》人民卫生出版社2006年8月第一版 主要参考书：1. 《免疫学检验》吕世静主编人民卫生出版社2003年2月第 2版 2. 《临床免疫学和免疫检验》王兰兰主编2004年1月第3版 3. 《简明免疫学技术》朱正美主编科学出版社2002年7月第 1版 4. 《免疫学常用实验技术》柳忠辉主编科学出版社 执笔人：黎明兰 一、课程性质、目的与任务 免疫学检验是研究免疫学技术在医学领域中应用的一门学科，是预防医学专业（卫生检验方向）一门重要的专业课。免疫学检测技术因其特异性强、敏感性高、稳定、简便和快速的优势，现已广泛应用于生物学、临床医学、预防医学及其他有关领域。 通过对该课程的学习，掌握各类免疫学检验技术的原理、类型、技术要点、实际应用及方法学评价，更好的为防病治病服务。 二、教学基本要求 1.掌握免疫学检验常用技术的原理、技术要点、应用及方法学评价。 2.掌握免疫学检验常用技术的测定方法。 3.掌握免疫学技术在免疫预防计划免疫、动植物检疫、健康相关产品免疫 功能评价中的应用。 4.了解免疫学技术的最新进展及与其他学科的关系。 三、各章节内容及学时分配 第一章抗原抗体的纯化（2学时） 教学目的与要求 掌握抗原和抗体纯化方法的基本原理、方法评价和应用。了解抗原抗体各种纯化方法的程序及分离物的选择。 教学内容 第一节盐析法 一、原理 二、常用中性盐 三、操作步骤 四、影响因素 五、方法评价与应用 第二节凝胶层析法
医学免疫学实验设计例子
《医学免疫学》实验设计 期别:xxx 班级:xx 学号:xxxxxxxx 姓名:OOO IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制 【立题依据】 自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识,也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员,在全球大约有2000万患者,中国至少有100万的患者,但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度(75%),表现为明显的家族遗传性。同时,Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症,如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制,并探索更加有效治疗及预防方案,对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。 Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞(APC)和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子,研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ,由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子,这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击,使其丧失胰岛素分泌活性,最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞(Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链(CD25)分子,胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell 和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。 白细胞介素-35(IL-35)是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子,属于IL—12细胞因子家族,IL-35为异源二聚,主要由活化的Treg分泌,对
实验五 凝集反应—医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导 实验五凝集反应 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。 2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。 【实验用品】 1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。 2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。 【内容和方法】 一、玻片凝集试验(slide agglutination) 1.原理 玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。 2.方法 （1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。 （2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。 （3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。 3.结果观察与判定
《医学免疫学》教学大纲
《医学免疫学》教学大纲 课程编号：03100030 课程名称：医学免疫学（） 学分：2.5学分 总学时：45学时 理论学时：27学时 实验学时：18学时 先修课程：生物学、生物化学、生理学、病理学 适应专业：临床医学五年制 使用教材： 1.曹雪涛.医学免疫学（第6版），人民卫生出版社，2013. 2.高劲松、吴高莉. 病原生物免疫学实验教程.北京大学医学出版社，2014. 参考教材： 1.曹雪涛、何维.医学免疫学（第3版），人民卫生出版社，2015. 2.郝素珍.医学免疫学，人民卫生出版社，2010. 3.司传平、丁剑冰.医学免疫学，高等教育出版社，201 4. 4.柳忠辉、吴雄文.医学免疫学实验技术，人民卫生出版社，2014. 一、课程在培养方案中的地位、目的和任务 免疫学是研究机体防御系统——免疫系统的组织结构和生理功能的科学，主要包括三部分。基础免疫学从基因、分子、细胞和整体等不同水平研究免疫系统的结构与功能；抗原的特性；及免疫系统对抗原应答的机制与规律。临床免疫学包括免疫病理学和临床疾病免疫学。免疫病理学主要研究在疾病条件下，免疫系统的变化及对抗原应答的规律。免疫学技术主要包括免疫学诊断、预防、治疗技术原理，以及免疫学实验原理与技术操作。 医学免疫学还广泛渗入到医学各个领域，形成了众多分支学科，成为指导医学实践的理论基础。因此，医学免疫学是医学教育中的一门主干课程，是医学生必修的医学基础课程。本课程的任务是，通过教学使学生掌握免疫学的基础理论，基本知识和基本技能，为学习其他基础医学课程及临床医学课程奠定基础。 二、课程基本要求 1.基础理论与基本知识 （1）免疫学概论
免疫学实验整理
免疫学实验整理 一、凝集试验、吞噬试验 （一）凝集试验 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 （二）吞噬试验（示教） 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬） 名解： 1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。 2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。 4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。 6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer. 实验及注意点： 1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原） 检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理 免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T 细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）。由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体）。免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。 最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。 利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开。然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体）的鉴别。上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限。比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原（或抗体）的含量。该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。