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细胞培养技术练习题

细胞培养技术练习题

选择题1.接种工具灭菌常采用(A) A.灼烧 B.高压 C.过滤 D.熏蒸

2.具有促进愈伤组织生产的物质是(B ) A.维生素PP B.维生素B1 C.维生素B6 D.甘氨酸

3.微量元素母液的配制浓度( B )A.10倍 B.100倍 C.1mg/ml D.10mg/ml

4.配制10倍大量元素母液,所需硝酸铵(C )mg A.9000 B.3700 C.16500 D.4400

5.配制100倍有机物母液时,所需维生素B1( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.1

6.下列哪种不是组织培养常用的维生素(A)A.维生素B2 B.维生素B1 C.维生素B6 D.维生素C

7.下列哪种激素不属于生长素类( C )A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA

8.下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂(A)A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C.硫酸锌 D.硫酸铜填空:1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。

2、目前,较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA消化液。

3、接种培养瓶的细胞数量一般为5×105-1×106/ml 。

4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。

5、细胞冻存时DMSO常用的浓度为10%的浓度。

1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种,分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2. 贴壁生长的体外培养动物细胞,按形态来分,大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型,最常见的为前两种。

3. 细胞在体外生长时具有一些特点,其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

名词解释1、原代培养:原代培养也叫初代培养,是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。

2、组织块培养法:组织块培养是将组织剪切成小块后,接种于培养瓶进行培养。组织块培养法是常用的,简便易行的以及成功率较高的原代培养方法。

3、消化培养法:消化培养法是采用组织消化分散法将细胞间质包括基质、纤维等妨碍细胞生长的物质去除,使细胞分散,形成悬液,从而易于外界吸收养分和排出代谢产物.

4、细胞生长曲线:细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。以培养时间为横轴,细胞浓度为纵轴作图,即得生长曲线。

5、传代:细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。

问答题:1、如何得到单细胞无性系?在细胞培养中,常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞,也可以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法,即可得到单细胞无性系

2、单细胞培养有哪些方法?各有何含义及特点单细胞培养:看护培养;微室培养;平板培养

(1)看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞,并使其生长和增殖的方法。

特点:①简便易行。②效果好,易于成功。③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。

(2)微室培养:即将细胞培养在很少量的培养基中。

特点:在培养过程中可连续进行显微观察,将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。

(3)平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合,平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

特点:可以定点观察;分离单细胞系比液体浅层培养容易;培养细胞气体交换不畅。

3、说明每一种单细胞培养方法的要点?

(1)看护培养:①小三角瓶中加1cm厚的固体培养基,灭菌②将1cm大小的愈伤组织块放在培养基中央。③在愈伤组织块上放1cm2无菌滤纸片,培养室中过夜④将单个细胞接种在滤纸上面⑤培养室培养f1个月可见愈伤组织小块,2-3个月得到单细胞无性繁殖系。(2)微室培养:①载玻片和盖玻片火焰上消毒②在载玻片上涂一圈四环素眼膏,放一小段毛细管。滴一小滴细胞悬浮液于凹穴中③盖上盖玻片,使之与悬浮液接触(3)平板培养:①制备单细胞悬浮液:用酶法或机械震荡法将组织器官游离出单细胞。经过滤后的滤液即是。②悬浮液密度的调制:a通过显微镜,观察记数板凹槽中的悬浮液细胞数,并计算其密度。b一般平板培养要求细胞密度为1′103-1′105。③培养基的配制:1)1.4%琼脂培养基;

2)0.7%琼脂的条件培养基。④平板制作:按1:2或1:4混合,制成3mm厚的平板。⑤培养:26°C暗培养21d,计算细胞团数,计算植板率

4、什么是细胞悬浮培养?简述成批培养和连续培养的的特点?细胞悬浮培养:是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。(1)成批培养的特点:①细胞生长在固定体积的培养基上,直至养分耗尽②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化d必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养(2)连续培养的特点:①由于不断加入新鲜培养基,保证了养分的充分供应,不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快③适于大规模工业化生产