EDTA脱钙液

EDTA 脱钙液

简介：

在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。EDTA 脱钙液主要由EDTA 、磷酸盐等组成， pH 值为7.2。其优点是：①经EDT A 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm 。

2、 组织固定后，用PBS 清洗3次。

3、 组织用蒸馏水洗清洗3次。

4、 组织转移至EDT A 脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。。

5、 用蒸馏水冲洗数次。

6、 常规脱水、包埋。

注意事项：

1、 厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。

2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。

3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。

6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 编号 名称 DD0002 DD0002 Storage EDTA 脱钙液 500ml 5L 4℃ 使用说明书 1份

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录：

脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。

脱钙液的配制

脱钙液配制 30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。 在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱 钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙 速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理 想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱 钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造 成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但 核染色不佳。加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱 钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化, 有利于切片,从而使制片效果更加理想。对照组以单纯30% 盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位 相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整, 染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不 清。经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核 质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日 常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方 法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重 复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。 王淑兰，制作骨骼组织切片的新脱钙液 改良的Plank·Rycho 脱钙液的配制: 氯化铝7g , 盐酸815ml , 甲酸5ml , 甲醛15ml ,TritonX-100 0.5ml ,蒸馏水100ml 。 为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们 在Plank·Rycho 脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发 挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。甲醛不仅是优 良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚) 是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作 用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的 脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。脂质被溶解后,组 织间隙疏通,脱钙液能顺利渗入骨组织内,有利于钙盐析出。 改良的脱钙液性质温和,虽然脱钙速度较强酸类脱钙液缓 慢,但能减少对细胞核的破坏,获得良好的组织学形态。 胥维勇，介绍一种改良的Plank·Rycho 脱钙液

EDTA脱钙液

EDTA脱钙液 产品简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解脱钙。EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Jimei EDTA脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。 产品组成： 自备材料： 1、PBS 2、蒸馏水 3、加热装置或微波炉 操作步骤（仅供参考） 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。如 果想加快脱钙速度，可以置于37。C进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周~3个月即可，每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3~5min，中间间隔3~5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5 mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14~60天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37~40。C，温度过高容易使骨组织 造成松散解体，尤其不可大于60。C。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时

病理检验技术(1)

荧光原位杂交 FISH 用DNA探针与组织切片上互补的DNA杂交，通过观察荧光信号在染色体上的位置和颜色来反映相应基因的情况。 第一章病理检验技术概述 病理学的作用： 1、研究疾病的病因、发病机制，认识 疾病的发生发展规律 2、为临床诊断疾病、治疗疾病、分析预 后提供依据等。 病理检验的定义： ------在临床医疗实践中，通过对患者病变组织或细胞进行检查，以协助临床诊断疾病的方法称为病理检验。 一、病理检验的主要任务 （一）确定疾病的诊断 （二）为临床选择治疗方案提供依据 （三）提供有关预后因素的信息。（最正确、最可靠、最后的诊断） （四）了解疾病的发展及分析疗效 （五）为科学研究积累资料 （六）为提高临床诊断水平服务 二、病理检验分类 （一）细胞学检验（脱落细胞、细针穿刺吸取） （二）组织学检验---最后的诊断 活体组织检验、手术标本检验、手术中病理检验 （三）尸体剖验 病理学技术： 在病理学临床及科学研究工作中使用的各种技术方法统称为病理学技术。病理检验技术的质量和水平是临床病理诊断工作中至关重要的因素。“技术是病理学之母。” 第二节、病理检验技术常规工作 收发工作 协助取材和尸体剖检工作 制作制作切片及细胞学涂片 病理资料管理及检索 药品、物资的管理及仪器维护 大体标本的收集和制作 第六章组织制片技术 P39 常规石蜡切片制作程序

组织固定→取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封片→观察 第一节组织块的处理 （一）组织切片制作过程中的各种操作： 1、取材与固定：合理取材、及时固定； 2、洗涤、脱水、透明； 4、浸蜡、包埋； 5、切片、贴片（展片、捞片）和染色： 6、封片：长期保存。 一、取材： -------按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 注意事项： 部位、大小、形状、方向 二、固定和固定液 固定：将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内的物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置过程。 （一）固定目的： （1）防止组织、细胞的自溶与腐败；（2）凝固或沉淀细胞内物质； （3）增加组织硬度，便于制片； （4）产生不同的折光率，有利于染色后观察辨认。 （二）固定方法： 1、浸泡固定法：病理外检一般均用此法； 2、注射、灌注法：体积过大或整个脏器或尸体的固定； 3、微波固定法：应用于临床病理快速诊断，微波固定组织温度至关重要。微波固定介质可用 生理盐水或10%甲醛。 4、蒸汽固定法：为了固定组织中可溶性物质、 血液、细胞涂片等； （三）固定液的特性： 1、渗透力强，迅速渗入组织内部 2、不会使组织过度收缩或膨胀 3、能硬化组织，保持细胞形态和位置 4、使组织对染料产生亲和力，产生折光率（四）组织固定注意事项： 1、及时固定 2、固定容器宜大 3、固定液应足量：固定组织体积的10-20倍 4、防止组织变形 5、确定恰当的固定时间 （五）组织固定液 常用固定液： 1、4%甲醛（福尔马林）：配置为市售的40%甲醛1份加水9份混合即成； 2、酒精（乙醇）：高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定； 3、中性缓冲甲醛液：可提高免疫组化阳性率。 4、酒精-甲醛液（A-F固定液）： 5、Zenker固定液： 1、4%甲醛（福尔马林）： 久置能产生白色沉淀（三聚甲醛），容易氧化变成甲酸，严重影响细胞核着色。

EDTA脱钙液

EDTA脱钙液 产品简介： 一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解法脱钙。 EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类， 经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Leagene EDTA脱钙液优点：①经EDTA脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小；③用化学方法测试可以确定脱钙的终点。 Leagene EDTA脱钙液缺点：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬。 主要成分：主要由EDTA、磷酸盐等组成，用NaOH溶液调pH值为7.2。 自备材料： 1、PBS 2、蒸馏水 3、加热装置或微波炉 操作步骤（仅供参考）： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加 快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：

微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，避免脱钙过度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 附录： 脱钙终点的测定（物理法）：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害， 尽量避免用力过大或反复检测。 相关产品： 产品编号 产品名称 DD0012甲酸脱钙液 DD0020电解脱钙液(2.5%甲酸) DD0028脱钙后碱处理液 DZ0029硫酸钠水溶液(5%) DH0006苏木素伊红(HE)染色液试剂盒 DZ0209脱钙终点检测试剂盒(化学法)

脱钙液

脱钙液 （一）酸性溶液脱钙法 1．硝酸-间苯三酚液：浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。 混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。 骨组织块5mm 厚脱钙时间12-24 小时。 优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。 缺点：（1）细胞核染色很差。 （2）如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。 （3）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。 （4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 2．硝酸水溶液：浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。厚度5mm 骨组织块脱钙12-24 小时。 优点：（1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。 （2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。 （3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。 缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。 3．福尔马林-硝酸液：40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。 5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要1-3 天。 优点（1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。 （2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。 （3）可作为紧急活检脱钙用。

（4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。 缺点：（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。 （2）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。4．Perenyi’s 液：10%硝酸4 份，0.5%铬酸3 份，无水乙醇3 份。 5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要2-7 天。 优点：（1）该液是一种温和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。 （2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。 （3）推荐该液作为常规脱钙使用。 （4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90% 乙醇中。 缺点：（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。 （2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 5．Von Ebener’s 液：饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。厚度5mm 骨组织块脱钙3-7 天。 优点：（1）细胞核染色相当好。 （2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。 缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 6．甲酸液：甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。厚度5mm 骨组织块脱钙时间需要3-7 天。 优点：（1）脱钙同时可以对组织固定。 （2）对细胞核染色比较好。

甲酸脱钙液

甲酸脱钙液 简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。 Leagene 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。 组成： 自备材料： 1、 PBS 2、 蒸馏水 3、 5%硫酸钠溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 2、 组织固定后，用PBS 清洗。 3、 组织用蒸馏水洗清洗。 4、 组织转移至甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。 5、 用蒸馏水冲洗数次。 6、 组织立即入硫酸钠溶液进行碱处理。 7、 充分流水冲洗。 8、 常规脱水、包埋。 编号 名称 DD0012 Storage 甲酸脱钙液 500ml RT 避光 使用说明书 1份

注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。 2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。 相关： 编号名称 DB0082 改良番红O-固绿软骨染色液 DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DG0005 糖原PAS染色液 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液液 DZ0209 脱钙终点检测试剂盒(化学法) IH0091 多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

缓冲液及组织固定液的配制

缓冲液及组织固定液的配制 1、磷酸盐缓冲液的配制 关于缓冲溶液PB的配制，好多参考书如生物技术实验的后面均附有缓冲溶液的配制配方，可以根据需要配制pH5.7～8.0的磷酸盐缓冲。磷酸盐缓冲液称简PB，加NaCl（氯化钠）的称PBS，加KCl（氯化钾）、NaCl（氯化钠）的称KPBS。S就是指氯化钠的含量，一般为0.85％，即是100ml里面加0.85克，这个时候的PBS的浓度是0.1M的。一般在免疫组化洗涤中采用0.01M的PBS，pH7.0～7.4。我们在实验中直接将0.1M的稀释十倍，即可。最好能现配现用。母液4℃可以保持1～2周，影响不大。 成份 分子量 （MW） 浓度（g/1000mL） 0.01M PBS①0.1M PBS0.1M PB Na2HPO4·12H2O 358.14 2.684 29.009 29.009 NaH2PO4·2H2O 156.01 0.39 2.964 2.964 NaCl 58.44 8.5 8.5~9 / pH值/ 7.4 7.4 7.4 注：①配方来自网上。 2、组织固定液的配制 2.1、4%多聚甲醛-0.1M磷酸缓冲液[1]（pH=7.3）：多聚甲醛40g，置于三角烧瓶中，加入500~800mL 0.1M的磷酸缓冲液（PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至粉末完全溶解，通常需要滴加少许1N NaOH才能使溶液澄清，最后补足0.1M PB至1000mL，充分混匀。该固定试剂适用于光镜免疫细胞化学研究，因较温和，适用于组织标本的较长期保存。 2.2、10%中性缓冲福尔马林固定液[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，蒸馏水900mL，NaH2PO4（磷酸二氢钠）4g，Na2HPO4（磷酸氢二钠）6.5g，混合摇匀后调pH至7.2~7.4。 2.3、10%福尔马林固定液配制[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，自来水900mL，混合后在溶液中加入碳酸钙使溶液呈中性或偏碱性。 2.4、10%中性甲醛液[3]：甲醛原液100mL，0.01M PBS 1000mL（磷酸缓冲液pH 7.4）。

EDTA脱钙液

南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.wendangku.net/doc/997484832.html,/ 第1页 EDTA脱钙液 【产品组成】 【保存条件】 4℃，12个月 【产品概述】 在组织切片过程中，一些组织内含有a骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 EDTA 脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好； ②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬； ③不宜用化学方法确定脱钙终点。 【使用方法】 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA 脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA 脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 【注意事项】 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

甲酸脱钙液使用说明

甲酸脱钙液使用说明 货号：G2490 规格：500mL 保存：室温避光，有效期6个月。 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。自备材料： PBS、蒸馏水、5%硫酸钠溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、组织立即入5%硫酸钠溶液进行碱处理。 7、充分流水冲洗18h以上。 8、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。 2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短

脱钙方法总结

目前所用的脱钙法主要见于下列： 1．硝酸-间苯三酚液： 浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。 骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。 优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。 缺点： （1）细胞核染色很差。 （2）假如脱钙时间太长对组织有较大的损害。 （3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。 （4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 2．硝酸水溶液： 浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。 优点： （1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。 （2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。 （3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。 缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。 3．福尔马林-硝酸液： 40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。 优点： （1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。 （2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。 （3）可作为紧急活检脱钙用。 （4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。 缺点： （1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。 （2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。 4．Perenyi’s 液： 10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。 5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。 优点： （1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。 （2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。 （3）推荐该液作为常规脱钙使用。 （4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。 缺点： （1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。 （2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 5．Von Ebener’s液： 饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。 厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。 优点： （1）细胞核染色相当好。

银氨溶液的配制方法

银氨溶液的配制方法 简介： 网状纤维(Reticular fiber)是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞所产生，直径多在0.2～1.0μm ，有韧性而没有弹性。网状纤维的染色方法很多，但染色原理基本一致，大都采用氨银浸法。Gomori 网状纤维染色原理是利用氨银液易被组织吸附与组织的蛋白质结合，经甲醛还原成黑色或棕黑色的金属银，沉积于组织内及其表面。冰冻切片、低温切片和火棉胶切片均可用于网状纤维染色，各种固定液均可采用，重金属汞盐或锇盐固定液偶尔会产生一些非特异性银背景。常用于鉴别肿瘤的性质和来源、癌与肉瘤、淋巴肉瘤与网状细胞肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、骨尤文瘤与骨网状细胞肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤、恶性神经鞘瘤及早期浸润癌等。 配制方法： 准备试管：在试管里先注入少量氢氧化钠溶液，振荡，然后加热煮沸。把氢氧化钠倒去后，再用蒸馏水洗净备用。 2.配制溶液：在洗净试管中，注入1mL 硝酸银溶液，然后逐滴加入氨水，边滴边振荡，直到最初生成的沉淀刚好溶解为止。向溶液里逐滴滴加氨水首先析出AgOH ： AgNO3+NH3·H2O==AgOH ↓+NH4NO3 常温下AgOH 极不稳定，分解为Ag2O 暗棕色沉淀 2AgOH==Ag2O+H2O 继续滴加氨水，沉淀溶解： Ag2O+4NH3·H2O=2Ag(NH3)2++2OH-+3H2O 同时，生成的OH-与前面反应生成的NH4+反应：OH-+NH4+==NH3·H2O 因此，向AgNO3溶液里加入稀氨水至沉淀溶解的总离子方程式为： Ag++2NH3·H2O==Ag(NH3)2++2H2O 此时溶液中只含NO3-和Ag(NH3)2+，即得到Ag(NH3)2NO3，不是氢氧化二氨合银。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。切片厚4μm ，常规脱蜡至水。 2、氧化、漂白、媒染。 3、滴加Gomori 银氨溶液染色3min 。 4、常规脱水透明，中性树胶封固。 编号 名称 DC0020 Storag e Gomori 银氨溶液 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份

临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较

临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较 发表时间：2016-03-03T10:32:27.000Z 来源：《健康世界》2015年18期作者：蒲正芳 [导读] 南部县人民医院病理科将快速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。 南部县人民医院病理科 637300 摘要：目的：探讨临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果。方法：选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例，把70例标本随机分成两组，观察组和对照组，每组分别35例标本。给予对照组硝酸脱钙液检验，观察组快速脱钙液检验，比较观察两组标本在微波以及常温条件下骨组织脱钙和切片染色效果。结果：使用快速脱钙液处理的观察组标本组织切片在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色；使用硝酸脱钙液处理的组织切片薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的影响。结论：将快速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。 关键词：临床病理检验；常用骨组织脱钙液；效果；比较 因骨组织中有大量钙盐沉淀，形成坚硬的结缔组织，实施直接切片治疗非常复杂，选取对保护骨组织形态结构有利并且制片效果较好的脱钙方式是当前重点研究的问题，这对临床检验中诊断病理有重要意义。当前众多研究中使用的改良脱钙方式较多，但具体何种方式可保证取得良好的检验效果仍不明朗[1]。为研究临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果，选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例，现将结果报告如下： 1资料与方法 1.1一般资料选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例。将70例标本随机分成两组，每组35例。按照标本的差异把骨组织切取为体积是1.5×1.5×0.5cm的标本薄片，通常骨髓的直径为0.1cm，将所有标本放入到浓度为10%的福尔马林中固定24h，随后运用到脱钙实验中。 1.2方法 1.2.1对照组给予对照组标本使用硝酸脱钙液临床病理检验。硝酸脱钙液是5%的硝酸5ml溶于95ml蒸馏水中。脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切成小片，对小块骨组织标本无需改刀，随后放入到10%的福尔马林中固定24h，随后进行脱钙步骤。（2）将等待脱钙的标本放入到硝酸脱钙液中，其中脱钙液不能少于待脱钙标本体积的10倍。（3）在室温下脱钙骨髓的穿刺标本需要在30min-60min内完成；皮质骨脱钙标本需要在5d-7d内完成；指耻骨脱钙标本需要在3d-6d内完成。（4）脱钙之后的骨组织经过水冲洗后进行取材、脱水、透明、石蜡包埋、制片等一系列技术。 1.2.2观察组给予患者标本使用37%的8ml盐酸、5ml冰醋酸、10g水杨酸、87ml蒸馏水混合。使用微波炉加热可使组织内部分子运动加速并把脱钙的速度加快，因为标本在酸性溶液中滞留时间较短，因此对骨组织的副作用较小。具体脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切成小片，对小块骨组织标本无需改刀，随后放置到装有脱钙液的耐高温玻璃或者塑料容器内，脱钙液不得少于待脱钙标本总体积10倍。（2）随后把容器放入到功率为850W的医用微波炉中实施微波脱钙工作。（3）入微波炉之后使用高档加热5min使温度达到100℃，将骨髓的穿刺标本继续保留10min，把其他标本留置30min，对脱钙效果进行检查。（4）脱钙之后的标本不需要水洗，直接按照病理进行取材、脱水、透明、包埋、制片[2]。 2结果 使用快速脱钙液处理之后的标本组织切片的厚度在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色，具体情况见图1；使用硝酸脱钙液处理的组织切片薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的影响，具体情况见图2。 3讨论 脱钙是指使用物理或者化学的方式把骨组织成分中的胶原纤维以及钙盐分离，将钙盐去除。快捷、简单、有效的脱钙方式是当前医学研究中重点关注的问题。近年来，广大病理研究人员也进行了大量实验以及探索，比如当前在临床检验中使用的微波脱钙技术等方式，但是

福尔马林-EDTAEDTA脱钙液

福尔马林-EDTA脱钙液 货号：G2520 规格：500ml 保存：室温，避光，12个月 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 主要由福尔马林、EDTA等组成，pH值约为7.2～7.4，相对于常规EDTA脱钙液，该试剂脱钙后对组织结构损害小，但脱钙速度更慢。其优点是：①经EDTA脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害比常规EDTA 脱钙液更小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。 操作步骤（仅供参考） 1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3.组织用蒸馏水清洗3次，每次20min。 4.组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置 于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，每周更换一次直至终点。 5.用蒸馏水冲洗数次。 6.常规脱水、包埋。 注意事项：

1.厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2.适当加温能加快脱钙的速度，一般维持在37～40℃，温度过高容易使骨组织松散解体，尤其不可大于 60℃。 3.脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以 免脱钙过长引起组织损害。 4.脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5.骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6.每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。

JYBL-Ⅰ脱钙液使用说明

JYBL-Ⅰ脱钙液使用说明 货号：G2470 规格：500mL 保存：室温避光保存，有效期12个月。 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 JYBL-Ⅰ脱钙液主要由稀酸、甲醛、甲酸等组成。其优点是：①作用迅速，24～36h即可； ②对组织的结构损害小；③脱钙完全。该脱钙液特别适用于日常病理科骨组织标本的脱钙，但不宜用化学方法确定脱钙终点。 自备材料： PBS、蒸馏水、加热装置或微波炉 操作步骤(仅供参考)： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的JYBL-Ⅰ脱钙液中，脱钙24～36h。如果想加快脱钙速度，可

以置于37℃进行脱钙。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙24～36h即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录：脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。

JYBL-Ⅲ脱钙液

JYBL-Ⅲ脱钙液 简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Leagene JYBL-Ⅲ脱钙液主要由甲醛、50%甲酸等组成。其优点是：①甲酸是最接近无机酸和有机酸临界线的一种有机酸，对组织的结构损害小；②脱钙完全。该脱钙液病理科特殊骨组织标本脱钙，如果在脱钙前对组织固定，效果更好。 组成： 自备材料： 1、 PBS 2、 蒸馏水 3、 加热装置或微波炉 操作步骤(仅供参考)： 1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 2、 组织固定后，用PBS 清洗。 3、 组织用蒸馏水洗清洗。 4、 组织转移至JYBL-Ⅲ脱钙液中，脱钙24h 。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。 5、 用蒸馏水冲洗数次。 6、 常规脱水、包埋。 注意事项： 1、 厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙24即可。 编号 名称 DD0018 DD0018 Storage JYBL-Ⅲ脱钙液 500ml 5L RT 避光 使用说明书 1份

2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。 相关： 编号名称 DB0082 改良番红O-固绿软骨染色液 DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DG0005 糖原PAS染色液 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 DZ0209 脱钙终点检测试剂盒(化学法) IH0091 多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

骨组织脱钙液介绍

骨组织脱钙液概述 在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。骨组织含钙量最多。除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。 为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。然后再行常规制片。 用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。 在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。 EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。对组织的渗透性差，作用慢。大剂量使用价格较贵。电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。 不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。EDTA 是一种相对较好螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织抗原性。经 EDTA 脱钙的组织可以进行免

OSTEOSENS脱钙液

OSTEOSENS脱钙液使用说明书 组织学中用于敏感脆弱组织脱钙 产品编号：OS-OT-1L (1000 ml) OS-OT-2.5L (2500 mL) 产品介绍 硬组织脱钙是显微分析的必要在标准组织学方法里，把样品完全浸入到脱钙液中。脱钙的时间主要由样品的大小和密度决定。该试剂含有EDTA，在组织脱钙期间可以结合钙离子。使组织变软以便于进一步处理。 测试样品敏感硬组织髂骨嵴(Latin Crista iliaca)和角化组织（血管）。 产品描述 OSTEOSENS脱钙液—在组织学中用于敏感脆弱组织的脱钙液，含有EDTA. 需准备的材料： 固定液：4%中性甲醛固定液、10%中性甲醛固定液 脱水/返水试剂：70%酒精 80%酒精 95%酒精 100%酒精 透明试剂：二甲苯或者二甲苯替代物（脂肪族烃） 包埋石蜡：BioWax Plus, BioWax 56/68, BioWax Blue, BioWax Micro 封片剂： BioMount, BioMount High, BioMount M, BioMount New, BioMount New Low, BioMount DPX, BioMount DPX High, BioMount DPX Low, BioMount DPX Low Eco, BioMount C, BioMount Aqua, 加拿大树胶 高品质载玻片：防脱载玻片、病理级载玻片 高品质盖玻片：标准级别尺寸范围 18×18mm -24×60mm 浸镜油：分为A, C, FF, 37 组织染色液 样品脱钙准备： ①组织样品首先需要被固定 ②组织样品要被完全浸入到OSTEOFAST 脱钙液，使其完全脱钙 脱钙步骤 髂骨嵴(Latin Crista iliaca)和其他硬组织 脱钙的时间和脱钙液的使用量依据处理样品的尺寸，类型，密度。15 x 9 x 3 mm 的髂骨嵴浸入50 ml OsteoSens 脱钙液 18-24小时 紧密的钙化组织 一块紧密的钙化组织1.5 x 1 x 0.3 cm)需花费 48-72 小时脱钙 注意：如果组织不要求用组织学方法处理，可以用OSTEOFAST 1脱钙液加快对骨硬组织的脱钙和固定 结束 例如：当髂骨嵴组织飘在脱钙液上脱钙即可结束。

EDTA 脱钙液 (pH 7.2 )使用说明

EDTA脱钙液（pH7.2）使用说明 货号：E1171 规格：100ml/500ml 保存：常温保存，有效期1年。 产品简介： 一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解法脱钙。 EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 EDTA脱钙液优点： ①经EDTA脱钙的组织染色结果好； ②对组织的结构损害小； ③用化学方法测试可以确定脱钙的终点。 EDTA脱钙液缺点： ①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用； ②脱钙后组织会稍微变硬。 操作步骤： 1，骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2，组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3，组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4，组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。

5，用蒸馏水冲洗数次。 6，常规脱水、包埋。 注意事项： 1，厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2，适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3，脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4，脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5，骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6，每隔一段时间检测一次脱钙程度，避免脱钙过度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录： 脱钙终点的测定（物理法）：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。