氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：

谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。

组成：

编号名称TO1043

100T

Storage

试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃避光试剂(B): GSH assay buffer 100ml RT

试剂(C): DTNB 80mg RT 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂2g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃避光试剂(F): DMSO 3ml RT 避光试剂(G): ddH2O 100ml RT 避光

使用说明书1份

自备材料：

1、离心管或小试管

2、蒸馏水

3、离心机

4、水浴锅

5、比色杯

6、分光光度计或生化分析仪

操作步骤(仅供参考)：

1、配制GSH标准储存液：取还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入ddH2O，溶解并混匀，即为

还原型GSH标准储存液(10mM)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。2、配制DTNB储存液：在本试剂盒提供的DTNB中加入DMSO，溶解并混匀，即为DTNB

储存液(40mg/ml)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

3、配制50×GSH还原酶：按GSH还原酶原液：GSH assay buffer 混合，即为50×GSH

还原酶。-20℃保存，3个月有效。

4、配制GSH检测工作液：按下表配制GSH检测工作液。

1个样品10个样品50个样品

GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml

DTNB储存液5μl 50μl 250μl

5、配制T-GSH检测工作液：按下表配制T-GSH检测工作液。

1个样品10个样品50个样品

GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml

DTNB储存液5μl 50μl 250μl

50×GSH还原酶43.2μl 432μl 2160μl

6、配制蛋白沉淀工作液：在本试剂盒提供的蛋白沉淀剂中加入ddH2O，配制成5%的水

溶液，即为蛋白沉淀工作液，4℃保存。

7、配制标准品：把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成标准溶液。

然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取50、25、15、10、5、2μM GSH 标准溶液6个点做标准曲线。注意：由于GSH标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定，用

蛋白沉淀工作液配制的GSH溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。

8、配制NADPH工作液：在本试剂盒提供的10mg NADPH中加入1ml ddH2O，溶解并

混匀，即为NADPH储存液(10mg/ml)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

取按NADPH储存液(10mg/ml)加入8.23ml的比例加入GSH assay buffer，充分混匀，即为NADPH工作液(0.12mg/ml)。

9、准备样品：

①红细胞或血浆样品的制备：请尽量使用新鲜的血液进行测定。离心，沉淀为红细胞，上

清为血浆。对于红细胞，用PBS洗涤两次。取约红细胞沉淀或血浆，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。4℃或冰浴放置10min，4℃，离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。对于处理好的红细胞样品最后需用蛋白沉淀工作液稀释后再进行后续的测定，而对于血浆样品，应直接取进行测定。

②组织样品的制备：取组织用液氮速冻，迅速研磨，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex

振匀，再加入700μl蛋白沉淀工作液，用匀浆器充分匀浆。孵育，离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定。

③细胞样品的制备：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀3倍

体积的蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5min。离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定，稀释倍数通常为5～20倍。

10、GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

11、

加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——系列标准品(2～50μM) —0.08 —待测样品——0.08 GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6

室温或25℃孵育5min。

NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4

T-GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的T-GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——

系列标准品(2～50μM) —0.08 —

待测样品——0.08

GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6

室温或25℃孵育5min。

NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4

12、GSH和T-GSH检测：立即用酶标仪或自动生化分析仪于处每隔2min检测一次，空白孔调零，共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测，只检测1次)，以检测其反应速率ΔA/min。如果酶标仪不能检测410nm，可测定405～420nm处吸光度。

计算：

①动力学测定法：根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min，以GSH标准

的浓度(50、25、15、10、5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。根据待测的ΔA410/min，对照标准曲线就可以计算出测定时样品还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)的含量。

GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量动力学法测定结果比终点测定法的结果精确。根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量，可以计算出每毫克组织或细胞中的总谷胱甘肽的含量，通过测定蛋白浓度，从而计算出样品的蛋白量，最后计算出每mg蛋白中还原型谷胱甘肽的含量。

②终点测定法：即反应6min仅测定1次吸光度。以GSH标准的浓度(50、25、15、10、

5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。样品对照标准曲线即可

计算出总谷胱甘肽的含量。终点测定法比动力学法快捷。根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量，可以计算出每毫克组织或细胞中的总谷胱甘肽的含量，通过测定蛋白浓度，从而计算出样品的蛋白量，最后计算出每mg蛋白中还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)的含量。

GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量

参考区间：

成年全血GSH 1.02±0.17mmol/L

注意事项：

1、GSH比较稳定，血液样品以ACD抗凝后冰箱4℃保存，3～4周内稳定。

2、请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下

降。

3、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。

4、测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。

5、轻度溶血样本对GSH测定无影响。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：

编号名称

DC0032 Masson三色染色液

DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液

NR0001 DEPC处理水(0.1%)

PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)

TC0711 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)

GSH含量的测定.doc

主要目的： ——测定物质还原性谷胱甘肽（GSH）的含量。 主要原理： 参照 GSH检测分析试剂盒说明书， 5,5 ’–二硫代–双–（2–硝基苯甲酸）能和 谷胱甘肽（GSH）反应产生 2–硝基– 5–巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（ GSSG）， 由于 2–硝基– 5–巯基苯甲酸是一黄色产物，通过测定其在412 nm处的最大吸 收可确定样品中谷胱甘肽的含量用纯化的谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制 成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘 肽（ GSH）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。用酶标仪在412 nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。

实验室签章

一、试剂 ——谷还原性胱甘肽（ GSH）测定试剂盒（南京建成生物研究所） 二、仪器设备 —— 96 孔酶标板 —— UV-Vis 可见多功能酶标 仪——旋涡混匀器——离心机 ——移液枪及其相应量程枪头

三、实验方法 根据试剂盒说明书具体操作步骤如下: 1.上清液的制备：取稀释后的血清或组织匀浆液 mL，加试剂一应用液 2 mL 混匀， 4000 rpm 离心 10 分钟，取上清液 1 mL 进行显色反应。 2.显色反应：空白管中加入 1 mL 试剂一，标准管加入 20μmol/LGSH标准 液 1 mL，测定管加入上步骤得到的上清液 1 mL，然后各管中分别加入mL 试剂 二、试剂三、 mL 试剂四。 3.混匀，室温静置 5 分钟后，在 412 nm处将酶标板空板进行扫描，准确吸 取 mL 各管反应液加入到新的 96 孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（ OD值）。 4.血清中 GSH含量计算公式 GSH含量（ mg/L） 测定 OD值 -空白 OD 值 -3 mmol/L） ×标准品浓度（ 20×10 标准 OD值-空白 OD值 ×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数 组织中 GSH含量公式 测定OD值-空白OD值 -3 GSH含量（mg/gprot ）×标准品浓度（20×10 mmol/L） ×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数÷待测组织匀浆液蛋白浓度 （gprot/L ） 参考文献 Lapshina E A, Sudnikovich E J, Maksimchik J Z, et al. Antioxidative enzyme and glutathione S-transferase activities in diabetic rats exposed to long-term ASA treatment [J]. Life sciences, 2006, 79(19): 1804-1811.

乙烯直接氧化制环氧乙烷银催化剂

《乙烯直接氧化制环氧乙烷银催化剂》 ： 班级： 学号： 成绩：

乙烯直接氧化制环氧乙烷银催化剂 摘要：要从技术现状、技术进展和发展趋势等几方面，对国外乙烯直接氧化制环氧乙烷的银催化剂的进展情况进行了综述。重点阐述了Shell催化剂、SD催化剂、VS催化剂的技术研究现状，并针对我国环氧乙烷生产装置和催化剂研究状况，提出了今后环氧乙烷催化剂的发展方向和建议。 关键词：乙烯；直接氧化；环氧乙烷；催化剂 Abstract：Advances in silver catalyst for ethylene oxide from ethylene by direct oxidation at home and abroad were re—viewed。based on the status-progress-and trend of its technology．The research status of catalysts-such a8 Shell.SD-and YS were expounded emphatically．Aiming at the process unit of ethylene and research status of relative catalyst in China．the developing direction and suggestion of the catalyst for ethylene oxide in future were put forward． Key words：ethylene；direct oxidation；ethylene oxide；catalyst

乙烯液相氧化法生产乙醛

编号：No.23课题：乙烯液相氧化法生产乙醛授课内容： ●乙烯氧化法生产乙醛反应原理 ●乙烯氧化法生产乙醛工艺流程 知识目标： ●了解乙醛物理及化学性质、用途、生产方法 ●掌握乙烯氧化法生产乙醛反应原理 ●掌握乙烯氧化法生产乙醛工艺流程 能力目标： ●分析影响反应过程的主要因素 ●分析和判断主副反应程度对反应产物分布的影响 思考与练习： ●乙烯氧化法生产乙醛反应催化剂组成和特点 ●影响乙烯氧化法生产乙醛反应过程的主要因素 ●乙烯氧化法生产乙醛工艺流程的构成 授课班级： 授课时间：年日月 乙烯液相氧化法生产乙醛第二节一、概 ．乙醛性质和用 乙醛是无色透明、易挥发的液体，具有辛辣的刺激性气味。沸20.℃，冰-12℃着火4℃，自燃温18℃。乙醛蒸汽与空气形成爆炸性混合物，爆炸范3.5％ 乙醛与水乙醇、乙醚及其它多种有机液体能以任何比例混和。乙醛蒸汽对人的眼鼻呼器官有刺激作用，对中枢神经系统有麻醉作用，形成慢中毒，表现为体重减轻、贫血、神恍惚、听觉错乱等

症状 乙醛分子内具有醛官能团能够发生醛类所能进行的全部化学反应由于醛官能团本的化学活性再 加上与醛基相邻甲基上的氢原子受到羰基的影响而活化导致乙醛分子具很强的化学活性 乙醛没有单独的用途，在工业上大量用于合成多种有机产品，如6-所示 从图中可见，乙醛在有机化工生产中显然是很重要的一种产品 ．工业生产方 目前工业上生产乙醛的方法主要有四种乙炔水合法乙醇氧化或脱氢法烷烃氧化及乙烯直接氧化 法 ）乙炔水合乙炔在硫酸汞催化剂的作用下，液相水合生产乙醛的方法早191年就实现了工业化，它的反应方程式为 S CO + CHO + 141.5KJ/mol 此法技术成熟并可得到纯度高、产率高的乙醛但是当所用乙炔来自电石时，则需耗大量的电力同时它所使用的催化剂中含有硫酸催化剂再生时需用硝酸设备的腐蚀重。催化剂中还含有汞在生产过程中易挥发，严重影响工人的身体健康所以此法逐步淘 汰。． 图6-4 以乙醛为基础的合成 由于石油和天然气制乙炔技术得到了很大的发展，目前乙炔水合法仍是重要的一种工业生产路线。为了避免汞催化剂的毒害和设备的腐蚀，已经对非汞催化剂进行了许多研究，出现了乙炔气相水合工艺，即乙炔气在非汞型的固体催化剂上用水蒸汽进行直接水合。研究用过的催化剂很多，主要是磷酸盐，如：磷酸镉钙和磷酸铜钙，并已实现了工业化。 （2）乙醇氧化或脱氢法乙醇氧化法是用银或铜作催化剂，在550℃左右的温度下进行反应，反应式为： 10 → CHCHO + HO + 173KJ/mol 0H + CHCH233222此法生产乙醛的转化率为35％左右，产率达90～95％，在此反应中易生成一些深度的氧化产物而消耗一部分乙醇。 乙醇脱氢法是以铜或以铬活化的铜作催化剂，在260～290℃的温度下进行反应，反应式为： CHCHOH → CHCHO + H - 69KJ/mol 2323由于反应温度较低，不易生成深度氧化物，所生成的乙醛也不易分解，并副产高纯度氢气，因而，用脱氢法比用氧化法更为优越。 工业上也有将氧化法和脱氢法结合起来的工艺，即只提供不足量的空气作氧化剂，氧化反应释放

谷胱甘肽含量测定

【实验目的】 了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。 【实验原理】 谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 研钵、高速离心机、移液管、离心管、试管、分光光度计 2.实验试剂 还原型谷胱甘肽标准液；偏磷酸溶液；磷酸溶液缓冲液（pH7）；二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液；蒸馏水。 3.实验材料 小麦叶片 【实验步骤】 1.标准曲线制作 取7支试管，编号，按照下表加入各种试剂，混匀，25℃保温反应10min。以1号管为参比调零，测定显色液在412nm处的吸光度。以吸光度为纵坐标，还原型谷胱甘肽物质的量（μmol）为横坐标，绘制标准曲线。 试管号 试剂（ml） 1 2 3 4 5 6 7 10μg/ml GSH标准液0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

蒸馏水 2.0 1.9 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 pH7磷酸缓冲液 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 DTNB试剂0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 GSH浓度μg/2ml 0 1 2 4 6 8 10 2.提取 取材后，称取0.2g样品置于研钵中，加入少量5%偏磷酸研磨成匀浆后，定容至6ml, 8000转离心10min。收集上清液来测定谷胱甘肽含量，测量提取液体积。 3.测定 取上清液2ml，显色，操作同标准曲线。重复3次。 显色反应后，分别记录样品管混合液的吸光度和空白对照管反应混合液的吸光度。根据吸光度差值，从标准曲线上查出相应的还原型谷胱甘肽量，计算还原型谷胱甘肽含量（μmol/g）。 4.计算 GSH含量（μmol/g）=（C x×V t）/ （FW×V S） 式中，C x为2ml样品中GSH的含量（μg）；V t为样品提取液总体积（ml）；V s为显色时样品液体积（ml）；FW为样品质量（g）。 【实验结果】 1.标准曲线 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 GSH浓度（μg/2ml）0 1 2 4 6 8 10 吸光度值A 0 0.067 0.134 0.314 0.452 0.579 0.723 以GSH浓度（μg/2ml）为横坐标，吸光度值为纵坐标，建立标准曲线。

GSH-Px活力的测定SOP

主要目的： ——测定物质谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）活力。 主要原理： ——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）可以促使过氧化氢（H 2O 2）与还原性谷胱甘肽（GSH ）反应生成H 2O 及氧化性谷胱甘肽（GSSG ）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。 H 2O 2+2GSH 2H 2O+GSSG GSH-Px 的活力以催化GSH 的反应速度来表示，由于这两个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称为非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应引起的GSH 减少的部分。而GSH 含量的测定可以跟据GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在412nm 处测其吸光度即可计算出 实验室签章 GSH-Px

一、试剂 ——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒（南京建成生物研究所） 二、仪器设备 ——96孔酶标板 ——UV-Vis可见多功能酶标仪 ——旋涡混匀器 ——离心机 ——水浴锅 ——移液枪及其相应量程枪头

三、实验方法 根据试剂盒说明书具体操作步骤如下: 1. 非酶管和酶管各加入1 mmol/LGSH 0.2 mL ，酶管加入稀释后的待测血清和组织匀浆液0.2 mL ，37 oC 水浴预温5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂一应用液0.1 mL ，37 oC 水浴准确反应5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂二应用液2 mL ，同时非酶管加入待测细胞上清液0.2 mL 。混匀，3500-4000转/分，离心10分钟，取上清1 mL 作显色反应。 2. 空白管加入1 mL GSH 标准品溶剂应用液，标准管加入1 mL 20 μmol/LGSH 标准液，非酶管和酶管各加入上一步骤1 mL 上清液，然后空白管、标准管、非酶管和酶管各加入1 mL 试剂三应用液，0.25 mL 试剂四应用液和0.05 mL 试剂五应用液。 3. 混匀，室温静置15分钟后，在412 nm 处将酶标板空板进行扫描，准确吸取 0.2 mL 各管反应液加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（OD 值）。 4. 血清中GSH-Px 活力计算公式 GSH-Px 活力（U/mgprot ）--OD = 非酶管值酶管OD 值标准管OD 值空白管OD 值 ×标准品浓度（20 μmol/L ）×稀释倍数 组织中GSH-Px 活力计算公式 GSH-Px 活力（U/mgprot ） --OD =非酶管值酶管OD 值标准管OD 值空白管OD 值×标准品浓度×min 稀释倍数（5）反应时间（5) ÷[取样量（0.2 mL ）×待测组织蛋白浓度（mgprot/ mL ）] 参考文献 Oliveira Lazarin M, Ishii-Iwamoto E L, Yamamoto N S, et al. Liver mitochondrial function and redox status in an experimental model of non-alcoholic fatty liver disease induced by monosodium L-glutamate in rats [J]. Experimental and molecular pathology, 2011, 91(3): 687-694.

谷胱甘肽含量测定

植物生理学模块实验指导 玲主编 科学 还原型谷胱甘肽含量的测定方法（分光光度计法） 【实验目的】 了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。 【实验原理】 谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶（100ml、200ml、1000ml）、分光光度计 2.实验试剂 50g/L三氯乙酸（TCA）溶液（含5mmol/L Na 2 -EDTA）：称取5g三氯乙酸，用蒸馏水溶 解稀释至100ml。再称取186mg Na 2-EDTA·2H 2 O，加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。 0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液（pH7.7）：配制方法见附录。 0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。 4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液：称取15.8mg DTNB，用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，混匀，4℃保存。现用现配。

还原型谷胱甘肽的稳定性研究

919 还原型谷胱甘肽的稳定性研究 朱义福 （星湖生物科技股份有限公司，广东肇庆 526040） 摘要：本文研究了pH 、温度、光照以及外加抗氧化剂等因素对还原型谷胱甘肽(GSH)纯品溶液稳定性的影响。结果表明，GSH 水溶液在pH=2.0~4.0范围内最为稳定；在30 ℃以下，24 h 内自身氧化较少；应避光处理或保存；外加抗氧化剂在pH=6.0时，保护作用明显。 关键词：谷胱甘肽；稳定性；抗氧化剂 文章篇号：1673-9078(2011)8-919-923 Stability of Reduced Glutathione under Different Conditions ZHU Yi-fu (Star Lake Bioscience Co., Inc., Zhaoqing 526040, China) Abstract: The effects of pH, temperature, sunlight and antioxidant on the stability of reduced glutathione (GSH) solution were studied in this paper. Results indicated that GSH solution was relative stabile under the following conditions: pH 2.0~4.0 and temperature <30℃. And it should be kept in dark place. Besides, the GSH solution showed the highest stability in the presence of antioxidant at pH 6.0. Key words: glutathione; stability; antioxidant 谷胱甘肽（Glutathione ，GSH ），即γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸，是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的生物活性三肽化合物。GSH 是许多酶反应的辅基，在生物体内具有清除体内自由基、解毒等多种重要的生理功能，特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境具有重要意义[1]。国内外关于GSH 的研究主要集中在菌种选育[2]、培养条件优化[3]、分离纯化[4]和临床应用上[5]，其工业化生产技术一直被国外极少数发达国家所垄断，国内尚未实现工业化生产，从而造成GSH 的市场价格居高不下，影响了GSH 的推广和应用。 GSH 易溶于水、稀醇、液氨和N,N-2甲基甲酰胺，而微溶于或不溶于醇、醚和酮。GSH 的固体较稳定，而水溶液在外界环境中受温度、pH 、光照等条件影响，易氧化，产生氧化型谷胱甘肽（即GSSG ），GSSG 是由两分子GSH 脱氢后通过二硫键相连的二聚体，其反应如下： 氧化型GSSG 不具有生理活性，只有还原型GSH 才能发挥重要的生理功能。GSH 的不稳定性是造成较难分离纯化、产品纯度不高的重要原因。因此，本文通过大量的试验对GSH 稳定性进行研究，为国内GSH 的工业化生产提供参考。 收稿日期：2011-03-26 作者简介：朱义福（1976-），男，工程师，研究方向：生物医药分离纯化技术 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 GSH 纯品（纯度>98%）：日本Kyowa 公司。四氧嘧啶（Alloxan ）：美国sigma ； 二硫苏糖醇（DTT ）：上海生工所；抗坏血酸（Vc ）：广州化学试验厂；保险粉（Na 2S 2O 4）：上海国药集团化学试剂公司；其它试剂为国产分析纯。 1.2 主要仪器 SC-15数控超级恒温槽：宁波新芝生物科技公司；CR21G 高速冷冻离心机：日本Hitachi 公司；752型紫外可见光分光光度计：南京第四分析仪器公司；S40 pH 精密测量仪，AB54-S 分析天平：瑞士METTLER TOLEDO 公司；RW20D 搅拌器：德国IKA 公司；Agilent LC1100液相色谱仪：美国HP 公司。 1.3 分析方法 GSH 含量测定采用四氧嘧啶Alloxan 试剂法 [6]：（1）标准曲线的制作：准确称取6.146 mg 的GSH 标准品，用40%乙醇溶解，定容至100 mL ，得到浓度为200 μmol/L 的标准液。取0 mL 、0.2 mL 、0.4 mL 、0.6 mL 、0.8 mL 、1.0 mL 上述标准液于试管中，补加去离子水至1.0 mL ，配成浓度为0 μmol/L 、40 μmol/L 、80 μmol/L 、120 μmol/L 、160 μmol/L 、200 μmol/L 的GSH 溶液。然后依次加入pH 7.6的磷酸缓冲液2.5 mL ，0.1 mol/L 的甘氨酸溶液0.5 mL ，以及Alloxan 试剂1.0 mL ，反应20

乙烯直接氧化制环氧乙烷银催化剂

《乙烯直接氧化制环氧乙 烷银催化剂》 姓名: 班级: 学号: 成绩: 乙烯直接氧化制环氧乙烷银催化剂 摘要:要从技术现状、技术进展与发展趋势等几方面,对国内外乙烯直接氧化制环氧乙烷得银催化剂得进展情况进行了综述、重点阐述了Sheｌl催化剂、ＳD催化剂、VS催化剂得技术研究现状,并针对我国环氧乙烷生产装置与催化剂研究状况,提出了今后环氧乙烷催化剂得发展方向与建议。 关键词:乙烯;直接氧化;环氧乙烷;催化剂 Abｓtract:Advances ｉｎsｉlverｃatalyｓｔfｏｒｅthylｅne ｏｘidｅfrom ethyleｎe by direcｔoxidation at home anｄａbｒoａd were ｒe—ｖｉｅweｄ。ｂased on the status-ｐroｇress－anｄtreｎｄof ｉts technoｌogy.Ｔhe rｅsｅarch staｔus of catalｙsts-ｓuｃh a8 Sｈｅlｌ、SD-ａnｄYS ｗｅre expounｄｅd emphａticaｌｌy.Aｉｍｉng aｔtｈe prｏcｅｓｓｕnｉt of et ｈylｅne ａnｄresearch stａtus of reｌaｔｉveｃatalyｓt in Ｃhiｎａ.the deveｌｏpiｎｇdｉrection ａnd ｓuggestｉon of the catａlyst ｆｏr ethylenｅoxide in futurｅwere put foｒwａｒd. Ｋey wｏｒds:ethyｌｅｎe;direct oxidａtioｎ;ｅthylｅne ｏxide;catalyｓt

氧化型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法) 简介： 谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。 氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。通过分光光度法(酶标仪)检测410nm 处吸光度，与相应处理的GSH 标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶 解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。 2、 配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合， 即为50×GSH 还原酶。。 3、 配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。 1个样品 10个样品 50个样品 编号 名称 TO1043 100T Storage 试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(D): 蛋白沉淀剂 2g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 3ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 100ml RT 避光 使用说明书 1份

乙烯氧化法生产环氧乙烷

编号：No.22课题：乙烯氧化法生产环氧乙烷 授课内容： ●乙烯氧化法生产环氧乙烷反应原理 ●乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程 知识目标： ●了解环氧乙烷物理及化学性质、用途、生产方法 ●掌握乙烯氧化法生产环氧乙烷反应原理 ●掌握乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程 能力目标： ●分析影响反应过程的主要因素 ●分析和判断工艺流程特点 思考与练习： ●乙烯氧化法生产环氧乙烷反应催化剂组成和特点 ●影响乙烯氧化法生产环氧乙烷反应过程的主要因素 ●乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程的构成 授课班级： 授课时间：年月日

第六章乙烯系产品的生产 乙烯是碳原子数最少的烯烃，由于它具有极其活泼的双键结构，因而其反应能力很强，且成本低、纯度高、易于加工利用，所以是有机化工中最重要的基本原料。通过乙烯的聚合、氧化、卤化、烷基化、水合、羰基化、齐聚等反应的实现，可以得到一系列极有价值的乙烯衍生物，如环氧乙烷、乙二醇、乙醛、醋酸、醋酸乙烯、乙苯、聚乙烯等，由乙烯出发还可生产溶剂、表面活性剂、增塑剂、合成洗涤剂、农药、医药等。乙烯系主要合成产品及其用途如图6-1所示。 目前，乙烯的产量在各种有机产品中居首位。就用途而言，乙烯最大的消费是塑料工业，其中尤以聚乙烯所需乙烯量最大，乙烯的其它消费依次为环氧乙烷、乙苯、乙醛、乙醇，还有醋酸乙烯、α-烯烃、卤代烷等。 第一节乙烯直接氧化法生产环氧乙烷 一、概述 1．环氧乙烷的性质和用途 环氧乙烷（EO）又叫氧化乙烯。它是无色易挥发的具有醚类香味的液体，能与水、醇、醚及其它有机溶剂以任意比例互溶。沸点 10.5℃, 熔点 -111.3℃, 燃点 429℃。环氧乙烷能与空气形成爆炸性混合物，其爆炸范围为 3.6～80%（体积）。 环氧乙烷有毒，如停留于环氧乙烷蒸气的环境中10min，会引起剧烈的头痛、眩晕、呼吸困难、心脏活动障碍等，接触液体E0会被灼伤，尤其是40～80％的EO水溶液，较其它浓度的EO水溶液能更快地引起严重的灼伤。工作环境的空气中EO的允许浓度，美国职业防护与保健局(0SHA)1984年规定：8h的平均允许浓度为1ppm，废除了以前工作环境中最大允许浓度为50ppm的规定。

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介： 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。 GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。产品内容： 提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用； 试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。现用现配； 试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可； 试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存； 试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用； 标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。

操作步骤： 一、粗酶液的提取： 1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。 2、细菌、真菌：按照细胞数量104个：提取液体积（mL）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。 3、血清（浆）等液体：直接测定。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。 2、将20μmol/mL标准液用提取液稀释为0.3125μmol/mL的标准溶液。再吸取20μL各标准溶液与80μL 试剂四混匀待用，此标准液混合物的浓度为0.0625μmol/mL。标准液混合物现用现配。 3、将30μL样本与30μL试剂一混合后室温放置5min。 4、操作表：(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) 测定管对照管样品混合物（μL）20- 试剂二（μL）2020 37℃下预热5min 试剂三（μL）2020 37℃下反应5min 试剂四（μL）200200 样品混合物（μL）-20 4000rpm常温离心5min，取上清于EP管或者96孔板中。 试剂名称(μL)测定管对照管标准管空白管上清液100100--标准液混合物--100-试剂四---100 试剂五40404040 试剂六40404040 蒸馏水20202020

乙烯氧化法生产环氧乙烷复习过程

编号：No.22课题：乙烯氧化法生产环氧乙烷授课内容： ●乙烯氧化法生产环氧乙烷反应原理 ●乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程 知识目标： ●了解环氧乙烷物理及化学性质、用途、生产方法 ●掌握乙烯氧化法生产环氧乙烷反应原理 ●掌握乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程 能力目标： ●分析影响反应过程的主要因素 ●分析和判断工艺流程特点 思考与练习： ●乙烯氧化法生产环氧乙烷反应催化剂组成和特点 ●影响乙烯氧化法生产环氧乙烷反应过程的主要因素 ●乙烯氧化法生产环氧乙烷工艺流程的构成 授课班级： 授课时间：年月日

第六章乙烯系产品的生产 乙烯是碳原子数最少的烯烃，由于它具有极其活泼的双键结构，因而其反应能力很强，且成本低、纯度高、易于加工利用，所以是有机化工中最重要的基本原料。通过乙烯的聚合、氧化、卤化、烷基化、水合、羰基化、齐聚等反应的实现，可以得到一系列极有价值的乙烯衍生物，如环氧乙烷、乙二醇、乙醛、醋酸、醋酸乙烯、乙苯、聚乙烯等，由乙烯出发还可生产溶剂、表面活性剂、增塑剂、合成洗涤剂、农药、医药等。乙烯系主要合成产品及其用途如图6-1所示。 目前，乙烯的产量在各种有机产品中居首位。就用途而言，乙烯最大的消费是塑料工业，其中尤以聚乙烯所需乙烯量最大，乙烯的其它消费依次为环氧乙烷、乙苯、乙醛、乙醇，还有醋酸乙烯、α-烯烃、卤代烷等。 第一节乙烯直接氧化法生产环氧乙烷 一、概述 1．环氧乙烷的性质和用途 环氧乙烷（EO）又叫氧化乙烯。它是无色易挥发的具有醚类香味的液体，能与水、醇、醚及其它有机溶剂以任意比例互溶。沸点 10.5℃, 熔点 -111.3℃, 燃点 429℃。环氧乙烷能与空气形成爆炸性混合物，其爆炸范围为 3.6～80%（体积）。 环氧乙烷有毒，如停留于环氧乙烷蒸气的环境中10min，会引起剧烈的头痛、眩晕、呼吸困难、心脏活动障碍等，接触液体E0会被灼伤，尤其是40～80％的EO水溶液，较其它浓度的EO水溶液能更快地引起严重的灼伤。工作环境的空气中EO的允许浓度，美国职业防护与保健局(0SHA)1984年规定：8h的平均允许浓度为1ppm，废除了以前工作环境中最大允许浓度为50ppm的规定。

谷胱甘肽过氧化物酶

谷胱甘肽过氧化物酶 开放分类：医学植物生理学 ?目录 ?图片 ?讨论 ?知识魔块 分享完善词条 谷胱甘肽过氧化物酶 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒水平。硒是GSH-Px酶系的组成成分，它能催化GSH变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。NADPH的减少量则和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。GSH-Px主要包括4种：分别为胞浆GSH-Px、血浆GSH-Px、磷脂氢过氧化物GSH-Px及胃肠道专属性GSH-Px。 编辑摘要 谷胱甘肽过氧化物酶- 简介

谷胱甘肽过氧化物酶 GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2 O2的分解，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒水平。 谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。 谷胱甘肽过氧化物酶- GSH-Px酶系 主要包括4种不同的GSH-Px，分别为胞浆GSH-Px、血浆GSH-Px、 胞浆GSH-Px

由4个相同的分子量大小为22kDa的亚基构成四聚体，每个亚基含有1个分子硒半胱氨酸，广泛存在于机体内各个组织，以肝脏红细胞为最多。它的生理功能主要是催化GSH参与过氧化反应，清除在细胞呼吸代谢过程中产生的过氧化物和羟自由基，从而减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用。 血浆GSH-Px 构成与胞浆GSH-Px相同，主要分布于血浆中，其功能目前还不是很清楚，但已经证实与清除细胞外的过氧化氢和参与GSH的运输有关。 磷脂过氧化氢GSH-Px 是分子量为20kDa的单体，含有1个分子硒半胱氨酸。最初从猪的心脏和肝脏中分离得到，主要存在于睾丸中，其它组织中也有少量分布。其生物学功能是可抑制膜磷脂过氧化。 胃肠道专属性GSH-Px 是由4个分子量为22kDa的亚基构成的四聚体，只存在于啮齿类动物的胃肠道中，其功能是保护动物免受摄入脂质过氧化物的损害。谷胱甘肽过氧化物酶- 正常值 (1)酶速率法(37℃)：2.96～83U/g?Hb

乙烯液相氧化法生产乙醛

编号：No.23课题：乙烯液相氧化法生产乙醛 授课内容： ●乙烯氧化法生产乙醛反应原理 ●乙烯氧化法生产乙醛工艺流程 知识目标： ●了解乙醛物理及化学性质、用途、生产方法 ●掌握乙烯氧化法生产乙醛反应原理 ●掌握乙烯氧化法生产乙醛工艺流程 能力目标： ●分析影响反应过程的主要因素 ●分析和判断主副反应程度对反应产物分布的影响思考与练习： ●乙烯氧化法生产乙醛反应催化剂组成和特点 ●影响乙烯氧化法生产乙醛反应过程的主要因素 ●乙烯氧化法生产乙醛工艺流程的构成

此法技术成熟，并可得到纯度高、产率高的乙醛，但是当所用乙炔来自电石时，则需消耗大量的电力，同时它所使用的催化剂中含有硫酸，催化剂再生时需用硝酸，设备的腐蚀严重。催化剂中还含有汞，在生产过程中易挥发，严重影响工人的身体健康。所以此法逐步被淘汰。 图6-4 以乙醛为基础的合成 由于石油和天然气制乙炔技术得到了很大的发展，目前乙炔水合法仍是重要的一种工业生产路线。为了避免汞催化剂的毒害和设备的腐蚀，已经对非汞催化剂进行了许多研究，出现了乙炔气相水合工艺，即乙炔气在非汞型的固体催化剂上用水蒸汽进行直接水合。研究用过的催化剂很多，主要是磷酸盐，如：磷酸镉钙和磷酸铜钙，并已实现了工业化。 （2）乙醇氧化或脱氢法乙醇氧化法是用银或铜作催化剂，在550℃左右的温度下进行反应，反应式为： 02→CH3CHO + H2O + 173KJ/mol CH3CH20H + 1 2 此法生产乙醛的转化率为35％左右，产率达90～95％，在此反应中易生成一些深度的氧化产物而消耗一部分乙醇。 乙醇脱氢法是以铜或以铬活化的铜作催化剂，在260～290℃的温度下进行反应，反应

总谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)

总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法) 简介： 谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。 总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率微板法)(T otal Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒，其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG 还原成的GSH 和样品本身含有的GSH 都与发色底物DTNB 反应，生成黄色的TNB 和GSSG 。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶 解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。 2、 配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合， 即为50×GSH 还原酶。-20℃保存，3个月有效。 3、 配制T-GSH 检测工作液：按下表配制T-GSH 检测工作液。 1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液 5μl 50μl 250μl 编号 名称 TO1049 100T Storage 试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(D): 蛋白沉淀剂 4g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 50ml RT 避光 使用说明书 1份

谷胱甘肽的介绍

还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 中文别名：L-谷胱甘肽;5-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸;还原型谷胱甘肽;谷胱甘肽(还原型) 产品信息： 【分子式】C10H17N3O6S 【分子量】307.32 【CAS号】70-18-8 【外观】白色结晶性粉末 【产品规格】 1、含量：98%-101% 还原型谷胱甘肽原料药。 2、含量：8%，15%，50% 的谷胱甘肽酵母抽提物。 【产品的应用】 谷胱甘肽广泛应用在医药、保健品、食品添加剂、饮料、化妆品、生化试剂等领域，8%，15%，50% 的谷胱甘肽酵母抽提物，更是富含蛋白质、氨基酸、核酸、多种有机酸及丰富的B族维生素，能够提供更加全面的营养。 【产品包装与贮存】 1、1kg，5kg，10kg，20kg或25kg纸桶。 2、置于阴凉、干燥、通风处密封存放。 产品概述： 1、谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）通过肽键缩合而成的非蛋白巯基三肽化合物，是用途极广泛的活性短肽。 2、谷胱甘肽溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰胺，而不溶于乙醇、醚和丙酮。谷胱甘肽的固体状态较为稳定，其水溶液在空气中易被氧化。 产品功能： 1、谷胱甘肽（GSH）是神奇的抗氧化剂 谷胱甘肽是含巯基的抗氧化剂，能够清除影响人体健康的自由基，现代医学认为，自由基是导致衰老和疾病的主要原因之一。人体细胞的抗氧化系统中含量最多和最重要的就是谷胱甘肽，谷胱甘肽是清除自由基的主力军，被科学家誉为“大师级抗氧化剂”和“谷胱甘肽防御系统”。谷胱甘肽不仅直接参于清除自由基，还对外来的抗氧化剂如维生素C和E等起到调节作用，保持它们的活性（还原）状态。 自由基是人体细胞代谢过程中产生的一类高化学活性的中间物质，它能够攻击蛋白质、DNA和细胞膜中的脂质大分子，破坏这些生物大分子的生理功能，使细胞膜变硬变脆而丧失功能，缩短细胞的寿命；能导致细胞膜形成空隙，使致病菌、病毒等侵入细胞，进一步破坏核膜，使遗传物质暴露，致使遗传物质受损，引起突变和破坏；加重免疫细胞受损，使受损的机体，免疫力低下，许多病症更容易发生。1956年，哈曼教授首先提出了自由基理论，他发现长期在强日光下作业的渔夫寿命比较短，进一步研究证明紫外线会刺激体内产生自由基，而自由基会促进生理周期老化，使死亡提前到来。 在正常状态下，人体细胞内的谷胱甘肽能够及时和人体代谢过程中产生的自由基结合，转化为低活性的物质，消除自由基对人体的伤害。但是，随着人年龄的增长，人体自身产生谷胱甘肽的能力变弱，产生的谷胱甘肽的量不足以及时清除掉人体内的自由基，多余的自由基开始破坏细胞内的生物大分子物质，细胞功能受到影响，人体开始出现衰老，疾病开始增多；另外，一些外界因素：如紫外线辐射，饮酒，吸烟，环境污染，某些药物等，也会导致人体产生过多的自由基，会加大人体内谷胱甘肽的需求，一旦谷胱甘肽供应不足，多余的自由基就会损害人的健康，影响人的寿命。

氧化型型谷胱甘肽(Glutathione Oxidized,GSSG)含量测定试剂盒使用说明

氧化型型谷胱甘肽（Glutathione Oxidized,GSSG）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1180常量法50T/48S 一、试剂盒组成： 试剂Ⅰ液体1瓶50ml（4℃保存） 试剂Ⅱ液体1支170l（4℃保存） 试剂Ⅲ液体1瓶60ml（4℃保存） 试剂Ⅳ液体1瓶8ml（4℃避光保存） 试剂Ⅴ粉剂4℃保存，用前8ml蒸馏水溶解 试剂Ⅵ液体1支40l用前0.8ml蒸馏水稀释 标准品粉剂1mg（4℃避光保存） 说明书一份 二、实验原理 氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型方式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。 三、实验仪器 分析天平、微量匀浆器（规格2ml）、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。 四、操作步骤 1、样品的处理

组织处理 新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；10000rpm4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。 血液处理 血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ,4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。 血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的PBS 清洗3次（用PBS重悬血细胞，600g离心10分钟），加入等体积试剂Ⅰ，混匀后4℃放置10分钟，8000g离心10分钟，吸取上清放于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。 细胞处理 收集不少于108个细胞，首先用PBS清洗细胞2次（PBS重悬细胞，600g离心10分钟），加入3倍细胞沉淀体积的试剂Ⅰ重悬细胞，反复冻融2-3次（可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解），8000g离心10分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。 2、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。 3、试剂Ⅱ放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。 4、标准品的稀释：将标准品用1ml蒸馏水溶解(4℃保存)，浓度为1mg/ml。取适当溶液配制浓度为25g/ml、20g/ml、12.5g/ml、6.25g/ml、3.125g/ml、0g/ml的标准品（试剂Ⅰ十倍稀释后进行稀释）。 5、取1.5ml离心管，加入100L稀释好的标准品或样品，加入2L试剂Ⅱ，混匀后37℃孵育30分钟。