比索洛尔与阿托伐他汀对高血压大鼠心肌纤维化影响的实验研究

实验动物心肌肥厚模型

III.实验动物心肌肥厚模型 A、压力超负荷/主动脉缩窄 压力超负荷引起的心脏肥厚常用的手术方法是主动脉缩窄（i.e.缩窄升主动脉）。 小鼠行主动脉缩窄（TAC）可以引起心脏机械性的压力超负荷，最终导致心肌肥厚、心衰（20,84）。TAC通常诱导方法采用在近胸骨端行小切口, 缩窄主动脉的这样的开胸手术。TAC模型虽然不能完全模拟人类的心室重构，但该模型可以用于肥厚发病过程中多种基因学的研究。主动脉缩窄模型能很好的模拟血流动力学超负荷引起左心室肥厚的发生发展。该动物模型在主动脉缩窄造成心肌肥厚几个月后会导致心衰。 B、容量超负荷 在静脉回流适当的情况下，心脏不能排出足够的血液满足全身组织代谢的需要就会引起CHF（充血性心力衰竭）。心内檐沟血或回心血量增加导致瓣膜闭锁不全就会引起心室容量超负荷。在慢性动脉和/或二尖瓣瓣膜回流疾病中的容量超负荷，我们会观察到“舒张期压力-容积曲线”整体右移,说明心脏僵硬度增加，即发生LVH (可见于主动脉瓣狭窄、高血压、肥厚性心肌病)（36）。通常情况下，容量超负荷CHF模型制备方法是腹主动脉-下腔静脉分流术。即于肾动脉上方分离出下腔静脉和腹主动脉，用血管夹在近肾动脉端夹闭主动脉阻断血流；用0.6-mm的针头由主动脉远端刺入，继续进针刺入下腔静脉，使动静脉联合。退针后，缝合血管壁伤口。4-5周后，就能复制出心肌肥厚模型，并具有左心室收缩力增强、舒张末期压力增加的特点（257）。 C、冠状动脉结扎 冠状动脉结扎常用于复制心衰动物模型。冠脉左前降枝（LAD）结扎后会阻断心脏的供养和营养输送，这种情况类似于人类心脏病发作时伴随的症状。血氧和营养供输阻断后，心肌细胞死亡，心脏整体功能受影响，最终导致心功能紊乱。由于这种动物模型非常接近临床心衰疾病的发生发展，研究证明该模型是心衰发病机制研究的重要手段（13）。 D、转基因型心脏肥大模型 几十年以来，一些心脏肥大和心力衰竭的转基因小鼠模型被学者们用于心肌肥厚和心衰这些致命疾病的可能的分子机制研究。受条件限制，在此不能针对于所有模型作一全面的综述，但在此文中，我们介绍一种转基因小鼠模型，该模型能成功模拟心肌肥厚的发生发展以及最终演变为心衰的过程。表1列举的是截止目前，研究学者们发现的较成熟的心肌肥厚/心衰模型。 表1：小鼠心衰模型 转基因小鼠模型代谢转变模型ECM紊乱转基因模型 肌侵蛋白，TNFα，G i，Gαq，PKCβ，PKA，β1AR, 磷酸化蛋白, 肌集钙蛋白, 钙调磷酸酶, L-型Ca2+ 通道 线粒体功能紊乱 氧化应激 脂肪酸氧化(FAO) 通路的受损 基质金属蛋白酶2/MMP2 基质金属蛋白酶9/MMP9 组织金属蛋白酶抑制剂 1/TIMP1

血管紧张素Ⅱ在心肌纤维化形成中的作用

中国微循环2004年2月第8卷第1期?5? 血管紧张素Ⅱ在心肌纤维化形成中的作用 赵凌杰,商玮,蔡辉 中图分类号:R542.2+3文献标识码:A 文章编号:1007-8568(2004)01-0005-03 心脏是由心肌细胞和几种非心肌细胞(成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞)构成的,非心肌细胞约占心脏细胞总数的三分之二,其中90%以上是成纤维细胞,它是合成和分泌细胞外基质的主要细胞。虽然婴儿出生后心肌细胞立即丧失增殖能力,但非心肌细胞仍然增殖,甚至在成人心脏也如此[1]。心肌纤维化有多种分型,大多根据有无心肌细胞坏死和瘢痕出现,而分为修复性心肌纤维化和反应性心肌纤维化。在心肌纤维化的发生发展过程中,血管紧张素Ⅱ(An gⅡ)的作用是非常重要的。 1血管紧张素Ⅱ的作用特点 An gⅡ生理功能的发挥主要是通过AT1受体和G蛋白构成的耦联型受体介导的,除了与传统上介导信号传递的G蛋白相耦联外,最近研究还显示, AT1可增加其细胞内底物的酪氨酸残基磷酸化,包括信号转导子与激活转录子(si g nal transducers and ac2 tiva-tors of transcri p tion,ST AT)家族。An gⅡ还可直接通过其AT1受体诱导ST AT复合体蛋白顺式诱导因子(sis-inducin g factor,S LF)的形成,S LF可与脱氧核糖核酸(DNA)序列综合,存在于许多基因的增强子中,这提示An gⅡ介导的炎症过程与器官重构是通过JAK-ST AT途径实现的,而该途径在调节基因转录,心血管细胞生长与发育以及炎症过程中具有重要作用[2]。S ano等[3]发现自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞胶原合成量是正常W isttar-K y oto大鼠的1.6倍,给予An gⅡ刺激后胶原合成增加的反应也明显强于W isttar-K y oto大鼠,提示高血压大鼠心肌成纤维细胞对An gⅡ的反应性增强。对心室舒张功能不全的心脏病患者的室壁进行活组织检测表明,病变心脏的AT1受体表达增强,且与心肌肥厚的程度呈正相关。以上事实说明AT1受体在心肌成纤维细胞上的表达具有可被诱导性[4]。 2血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞增殖的作用 血管紧张素Ⅱ具有生长因子样作用,是刺激心肌肥大的重要体液因素之一,并可刺激心脏成纤维细胞增殖。许松等[5]通过对钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的心脏成纤维细胞增殖中作用的研究发现,An gⅡ可使心脏成纤维细胞Ca2+浓度及CaN 活性明显增高,An gⅡ可显著刺激心脏成纤维细胞DNA合成速率增加。应用CaN抑制剂CsA(0.1～10μm ol/L),该浓度不引起细胞明显毒性作用(LDH释放和降解排斥染料数的变化均无统计学意义),CsA 以浓度依赖的方式抑制An gⅡ刺激的DNA合成速率增加,这些结果提示CaN可能参与An gⅡ刺激的心脏成纤维细胞增殖的信号传递。 方淑贤等[6]通过采用体外培养的心肌成纤维细胞的方法对芦沙坦对心脏成纤维细胞胶原Ⅰ、Ⅲ型mRNA表达水平的影响的研究发现,在生长因子An g Ⅱ的刺激下,C oⅠmRNART-PCR产物比对照组增加10倍,C oⅠⅢmRNART-PCR产物比对照组增加4倍,提示An gⅡ可直接调控胶原Ⅰ、Ⅲ型基因mR2 NA的表达水平,且对C oⅠmRNA表达调控作用强于对C oⅢmRNA表达调控作用。芦沙坦可直接抑制生长因子An gⅡ对C oⅠ和C oⅢmRNA表达调控作用,表明AT1受体激活对成纤维细胞胶原基因的转录水平有一定调控作用。提示芦沙坦不仅可通过抑制心肌细胞的肥大,也可通过调控成纤维细胞胶原基因的转录水平来达到逆转心肌纤维化的目的。 G rohe等[7]发现An gⅡ可以促进心肌间质成纤维细胞早期反应基因(如c-fos)的表达,加速其增殖,促进纤维化相关癌基因(c-fos,c-j un,E g r-1,纤维连接蛋白基因)表达,并参与细胞表型的调控,纤维化相关癌基因表达增强将导致心肌间质纤维化与心脏表型的“胎心化”。 体外研究也显示,机械牵张可以诱导心肌细胞储存的An gⅡ释放并导致心肌细胞的肥大,表明An gⅡ在压力依赖性心肌肥厚发病中发挥关键性作用。在An gⅡ转基因大鼠(心脏高表达An gⅡ)模型中显示,尽管An gⅡ转基因大鼠无高血压发生,但因An gⅡ表达增强而大鼠最终发展为心肌肥厚,提示 作者单位:210002江苏南京,南京军区南京总医院中医科 第一作者简介:赵凌杰(1966-),女,蒙古族,博士。从事中西医 结合基础研究。 ?心血管专辑?

心肌肥厚动物模型建立方法研究进展Word版

心肌肥厚动物模型建立方法研究进展 摘要目的：综述心肌肥厚（CH）动物模型的建立方法，为CH类疾病的研究和临床治疗提供参考。方法：以“心肌肥厚”“动物模型”“Cardiac hypertrophy”“Model”等组合作为关键词，在中国知网、 PubMed等数据库中检索相关文献，筛选2004－2014年有关CH动物模型建立方法的内容，综述常用模型的基本原理、制备方法及特点等。结果与结论：共查阅到376条文献，其中有效文献29条。目前常用的CH动物模型建立方法有物理法（包括压力超负荷法致CH、容量负荷法致CH、心肌梗死致CH、运动诱导致CH）、化学法（包括药物诱导法致CH）和生物法（包括转基因型CH、自发性高血压大鼠模型致CH）等。其均可模拟CH，而CH原理、制备方法和模型特点各异。在CH动物模型中，大鼠易饲养、经济、抗感染力强，常作为首选造模动物，常用鼠种为SD大鼠及小鼠，雌雄均可。在现有成模方法中，压力超负荷法制作慢性CH模型，手术操作简单方便、重复性好、造价低廉，最为常用；转基因动物模型对人类疾病的模拟程度更高，但耗时长，费用昂贵，可能成为未来的发展方向。 关键词心肌肥厚；动物模型；建模方法；转基因 心肌肥厚（CH）是心肌细胞对多种病理刺激的一种适应性反应。在早期，CH因心室壁增厚、心肌收缩功能改善而被视为代偿性过程 [1]；但在持久病理性应激情况下， CH伴随间质纤维化、收缩功能失调以及基因表达、能量代谢和电生理特征异常，最终导致失代偿性心功能衰竭，严重危害人体健康。目前认为， CH是心血管疾病的一种常见并发症，已被列为引起心血管疾病发生率和病死率显著升高的独立危险因素[2]。其发生机制复杂，至今仍未完全阐明，而对CH的发生机制及治疗方法等研究常用动物实验进行，因此复制动物模型成为目前国内外从事CH研究的常用手段。本文拟以“心肌肥厚”“动物模型”“Cardiac hypertrophy”“Model”等组合作为关键词，在中国知网、 PubMed 等数据库中检索相关文献，筛选2004－2014年有关CH动物模型建立方法的内容。结果共查阅到376条文献，其中有效文献29条。现根据物理法、化学法和生物法等基本造模方法，对常用CH动物模型的基本原理、制备方法及特点等进行综述，为CH类疾病的研究和临床治疗提供参考。 1 物理法 物理法是指通过外界机械力、气压、温度、光和声音等条件的改变，诱发动物形成某一疾病的造模过程，主要包括压力超负荷法、容量负荷法、心肌梗死致CH和运动诱导致CH。其中，前3种均采用手术方式复制CH模型，具有成模时间短、操作方便、重复性好、价格较低等优点，但会给动物造成极大的痛苦；后者通过有规律的运动复制CH模型，能较好地模拟人类CH疾病发展过程，但造模时间较长、操作较烦琐。

高血压动物模型

高血压动物模型高血压病是全身小动脉痉挛引起血管外周阻力增加的直接后果,小动脉的痉挛与遗传/精神刺激、应激、肾脏缺血、肾上腺皮质的作用及钠的作用等诸多因素有关，目前动物高血压模型的复制多以不同角度模拟高血压这些易患因素而形成。所用动物模型有自发性高血压大鼠(SHR)、神经原型、肾外包扎型和醋酸脱氧皮质酮(DOCA)盐型高血压大鼠、肾血管型高血压狗、盐敏感性和盐抵抗性高血压大鼠等。（一）、神经原型高血压模型：可用狗、大白鼠和家兔等，通过机能性方法或物理方法作用于动物神经系统而诱发条件反射性高血压和皮层性高血压模型。1、神经精神刺激：强烈的声、逛、电刺激，条件反射冲突等可以引起动物高级神经中枢强雷兴奋及血压升高。缺点是这种血压升高不能持久，同时，动物对相同刺激有适应的倾向，因此不能建立持久的高血压模型。2、去除压力感受器神经：用电损伤动物的孤束或用6-羟多巴胺破坏孤束核的儿茶酚胺神经元，使减压反射中枢失去调整血压的功能，可建立慢性高血压模型，但是有一部分动物可能在手术后短期内死亡。（二）自发性高血压大鼠模型Okamoto等将血压为19.3~23.3KPa的雄性Wistar大鼠与血压为17，3~18.6KPa的同种雌鼠交配，其子代选择血压高者作为近亲交配，三代后，多数动物血压超过24KPa，他们称之为自发性高血压大鼠（SHR）。通过不断选种，到1969年获得了近交系SHR，至1986年该系已传到第80代。SHR的后代100%发生高血压。一般在出生后血压随年龄而逐渐升高，据第30~32代统计，生后第10周雄鼠血压平均为24.5±2.3KPa，雌鼠为23.7±1.9KPa，此后还会继续升高，常可超过26.6KPa。血压升高机制：在高血压大鼠生长的早期，其血管阻力持续增加，血压升高，心肌肥大，机体的肾素-血管紧张素系统激活，这一过程持续到生存晚期，并发展为更严重的心肌肥大和充血性心功能衰退。随着高血压的持续发展，高血压大鼠出现了与人类高血压患者相似的并发症——脑和心肌损害，以及肾硬化。优点：自发性高血压大鼠从许多方面讲，如发病机制、高血压心血管并发症、外周血管阻力变化、对盐的敏感性等都与人类高血压患者相似，是目前国际公认最接近于人类原发性高血压的动物模型。故其广泛应用于医学基础试验研究中，如SHR高血压形成的电生瑰研究，在肾素血管紧张素系统的研究，在内皮素方面的研究，在丝裂素活化蛋白激酶方面的研究，血管结构与功能方面的研究，都已取得了一定的进展；又如，在受体水平阻断肾素-血管紧张素醛固酮系统，来探讨高血压性心肌重塑的可能机制，也在用自发性高血压大鼠模型。另外，该模型特别是用于人类高血压的研究及高血压药物筛选。如坎地沙坦在高血压大鼠脑缺血的神经保护作用的研究，亦用自发性高血压模型。缺点：饲养条件高，价格较贵，遗传育种麻烦，需要一定时间，且易变种或断种，若大量使用尚存在一定困难。（三）肾外包扎型高血压模型血压升高机制：肾外异物包扎，可致肾周围炎，在肾外形成一层纤维素性鞘膜，压迫肾实质造成肾组织缺血，使肾素形成增加，血压上升。选用120～150g的大鼠。麻醉后，呈俯卧位固定，背部下方垫一高约2～3cm的沙袋，剪去手术视野的毛，用0.05％洗必太酒精消毒皮肤，从第10胸椎到第3腰椎处沿脊椎中线切开皮肤，在左侧季肋下1.5～2cm和距脊椎1cm处用小血管钳分开肌肉，用两指从腹下部将肾脏自创口中挤出，小心地将肾脏与周围组织剥离，将双层乳胶膜剪成“X”形，绕肾门将肾脏交叉包扎，然后在相对侧切开，取出右肾，分离后切除，分别缝合肌肉和皮肤创口。皮下注射1～2万单位青霉素G。手术所用器械必须高压消毒，只要在75％乙醇中浸泡30min，临用时用煮沸过的生理盐水冲洗一下，用毕后仍浸入乙醇中。手术后可加饮1％氯化钠溶液作为促进因素。（四）、肾性高血压模型Gold-blatt高血压模型有双肾及单肾模型。双肾模型是指动物保留两侧肾脏，但使一肾或二肾动脉狭窄，所以又称为二肾一夹或双肾双夹型。单肾模型为切除一侧肾脏，狭窄保留肾的肾动脉，及一肾一夹型。这三种模型的动物都能发生长期稳定的高血压。1、一肾一夹（左侧肾动脉狭窄+右肾切除）血压升高机制主要是由于钠潴留和肾素血管紧张素系统激活以及交感神经活性增强。优点：该模型由于成功率较低，血压不能持续上升，限制了其使用范围，目前较少使用。2、两肾一

四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官AngⅡ和CGRP表达的影响

四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官AngⅡ 和CGRP表达的影响 【摘要】目的探讨四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法选择健康雌性Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组，每组8只。双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型，免疫组化法测定心、脑、肾组织中AngⅡ和CGRP的表达。结果肾性高血压组大鼠各器官CGRP和AngⅡ表达水平较正常对照组均显著升高。四逆汤治疗组大鼠各器官CGRP表达水平较肾性高血压组均明显降低；四逆汤治疗组大鼠AngⅡ在肾脏和心脏的表达水平较肾性高血压组均明显降低，但在脑组织中的表达差异无显著性。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑组织中血管活性物质AngⅡ和CGRP的表达水平，发挥其血压调节作用。 【关键词】四逆汤高血压肾性心脏肾脑血管紧张素降钙素基因相关肽大鼠 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the effects of Sinitang on the expressions of angiotensinⅡ(AngⅡ) and calcium gene related peptide (CGRP) in the main target organs of renal hypertension rats.MethodsTwenty four healthy female Wistar rats were evenly divided into normal control (NC) group, renal hypertension (RH) group and Sinitang treatment (ST) group. The renal hypertension models were established by clipping both renal arteries. The expressions of AngⅡand CGRP in tissues of heart,

麝香保心丸、脉平对腹主动脉狭窄高血压大鼠心肌肥厚的作用

麝香保心丸、脉平对腹主动脉狭窄高血压大鼠心肌肥厚的作用 发表时间：2013-10-24T09:19:25.250Z 来源：《医药前沿》2013年第28期供稿作者：柳玲1 石磊2 黄杲1 梁绪国2(通讯作者) [导读] 高血压心肌肥厚是心律失常、心衰和猝死等发生的主要原因之一，故如何控制左室肥厚形成是一个十分重要的课题。 柳玲1 石磊2 黄杲1 梁绪国2(通讯作者) （1 山东省烟台白石肛肠医院山东烟台 264001） （2 山东省烟台毓璜顶医院山东烟台 264000） 【摘要】目的在腹主动脉狭窄高血压大鼠模型上观察了心肌肥厚的变化，并探讨其与多种细胞因子、基质金属蛋白酶、心肌细胞凋亡率、凋亡调控基因表达等多种因素之间的关系及中药麝香保心丸、脉平对心肌肥厚和各种影响因素的作用。方法双抗夹心ELISA法测定MMP-2、MMP-9和IL-6、IL-10；放免法检测TNF-α；流式细胞法测心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因表达。结果腹主动脉狭窄6周后，大鼠左室重及室重/体重比值明显增加；同时多种细胞因子、基质金属蛋白酶、心肌细胞凋亡率、凋亡调控基因表达等均发生了相应的变化；麝香保心丸和脉平对心肌肥厚和各种影响因素有较好的治疗和预防作用。结论心肌肥厚可能与多种因素有关；麝香保心丸和脉平对预防和治疗心肌肥厚有一定的作用。 【关键词】心肌肥厚麝香保心丸脉平细胞因子基质金属蛋白酶凋亡 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）28-0151-02 Effect of Shexiangbaoxinwan and Maiping on Left Ventricle in Pressure-Overloaded Hypertrophy Rat 【ABSTRACT】 AIM：To explore the effect of Shexiangbaoxinwan and Maiping on left ventricle in pressure-overloaded hypertrophy rats. And also the relationship between left ventricular hypertrophy (LVH) and cytokines, matrix metalloproteinases, apoptosis, and apoptosis genes. METHODS: IL-6, IL-10, MMP-2, MMP-9 were evaluated by ELISA means. TNF-alpha was measured with radioimmunoassays. Flow cytometer was used to measure the apoptosis ratio and the expression of Fas , Bcl-2 and Bax. RESULTS: 6 weeks after abdominal aortic coarctation operation, compared with the sham operated group, the weight of the left ventricle (0.995±0.320g) and heart weight/body weight (0.369±0.149) were significantly increased in modern group. And also IL-6 (213.56±83.41pg/ml), TNF-α(1.997±0.812ng/ml), MMP-2 (72.91±35.59), MMP-9 (60.15±26.43), and apoptosis genes (Fas, Bax, Bcl-2, Bcl-2/Bax) expression were increased；apoptosis ratio (9.81±5.03), IL-10 (91.07±38.74pg/ml) decreased compared with sham operated group. The 2 groups with drugs (SB,MP) decreased the increasing weight of LV and ventricular weight/body weight; and inhibited the changes of influencing factors (IL-6, IL-10, TNF-α, MMP-2, MMP-9, apoptosis ratio, apoptosis genes expression). CONCLUSION: LVH might be related with many influencing factors. Shexiangbaoxinwan and Maiping may have the positive importance in the treatment and prevention of LVH. 【KEY WORDS】 LVH Shexiangbaoxinwan Maiping Cytokines Matrix metalloproteinases Apoptosis 近年来的研究已证实高血压的发病与许多因素有关，进而完善和发展了传统的高血压发生、发展的机制，为彻底地阐明高血压的发病机制、发展和转归机理以及人类最终完全控制高血压奠定了分子生物学机理。但其发生机理以及与心室重构和心肌肥厚的关系尚未完全阐明。本研究采用腹主动脉狭窄大鼠高血压模型，观察了麝香保心丸和脉平对高血压大鼠心肌肥厚的作用及对血清中细胞因子（IL-6、IL-10、TNF-α）、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）水平变化以及大鼠心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因（Bcl-2、Fas、Bax）表达的影响。 1 材料与方法 1.1 动物模型的制备 取健康SD大鼠60只，（雌雄各半，2月龄，体重160～180g）术前禁食12小时，自由饮水。用3%巴比妥钠腹腔注射麻醉后，随机分为腹主动脉狭窄手术组（45只）和假手术组大鼠（15只）。参照文献并对手术方式加以改进，于左肋弓下缘0.5cm、脊柱前0.5cm处行1.5～2.0cm纵切口，逐层分离皮下组织，于左肾后上方分离肾动脉，在左右肾动脉分支之间的腹主动脉下方穿入2.0手术缝线，沿血管走行方向放置针尖磨钝的7号注射针头与腹主动脉一起结扎，这时可触摸到结扎点下方腹主动脉搏动明显减弱，小心拔出针头，腹腔滴入青霉素（40万U/ml）适量，逐层关腹，缝合。术后肌注青霉素10万U。假手术组不结扎腹主动脉，其余同手术组。术后正常饮食，定时观查体征。 1.2 实验动物分组和程序 造模7天后，腹主动脉狭窄手术组随机分为3组，即模型对照组（模型组），麝香保心丸组（SB组），脉平组（MP组）。假手术组、模型组每日饮用水10ml/kg灌胃；SB组，SB100mg/kg、MP组，MP60mg/kg。将上述药物溶解于饮用水中，按10ml/kg每日一次胃管灌入，共6周。实验过程中动物均自由饮食。 治疗6周后，禁食12小时，称体重。麻醉后从腹主动脉抽取6ml血液，高速离心后分离出血清，-70℃保存待用。立即摘取大鼠心脏，剪断肺静脉，从肺动脉瓣之上2mm处将肺动脉切断，在心包的脏层转折处剪断主动脉和上、下腔静脉。取出心脏后用0.1mol/L、PH7.4 PBS洗涤，滤纸吸干，称重；沿二尖瓣平面分离心房与心室，去右心室，称重。计算大鼠左室重/体重（g/100g）比值。 1.3 检测方法 1.3.1 双抗夹心ELISA法测定MMP-2、MMP-9和IL-6、IL-10（分别严格按各试剂盒说明书操作）。 1.3.2 放免法检测TNF-α：采用液相竞争法，分管加样后充分混匀，4℃放置24h，加入分离剂后充分混匀，室温放置20min，4℃离心3500rpm 25min，吸弃上清夜，在自动γ计数器上计算标准曲线和TNF-α浓度。 1.3.3 流式细胞法测心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因表达用机械法分散心肌组织,收集单细胞悬液,经300目尼龙网过滤离心沉淀 2min后,加生理盐水洗涤,再次离心沉淀后,置于70%乙醇中备用。加入碘化丙啶（promide iodine，PI）工作液0.5 ml，终浓度为10 mg/L，室温避光30 min后上机进行流式细胞仪（FACScan型流式细胞仪，美国BD公司生产）检测。 上机前以标准荧光微球调整仪器的变异系数并稳定在2%以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh 650计算机上用CellQuest Plot 软件（BD公司提供）分析数据，由HP1200 c/PS打印结果。 心肌细胞凋亡及凋亡基因表达量以标记阳性细胞百分率表示：=标记阳性细胞数/受检细胞数×100%-非特异结合细胞%[1]。 1.4 主要药品和试剂麝香保心丸（Shexiangbaoxinwan, SB）由上海和黄药业公司提供；脉平原粉（maiping，MP）由甘肃独一味

若干实验性高血压大鼠模型的介绍_程轶群

2006年5月第16卷　第5期 中国比较医学杂志 CHINESE J OURNAL OF COMPAR ATIVE MEDICINE May ,2006Vol .16　No .5 综述与专论 若干实验性高血压大鼠模型的介绍 程轶群,李晓辉 (第三军医大学基础医学部,重庆　400038) 【摘要】　高血压是我国最常见的心血管疾病,而实验性高血压大鼠模型在高血压研究中扮演着重要的角色.本文对目前若干实验性高血压大鼠模型建立的方法以及它们的主要特点和应用进行了综述。 【关键词】　高血压;大鼠;模型,动物 【中图分类号】R544.1 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856(2006)05-0305-04 Introduction of Some Models of Hypertension in Experimental Rats C HE NG Yi -Qun ,LI Xiao -Hui (The Basic Depart ment of The Third Military Medical University ,Chongq ing 400038,China ) 【Abstract 】　Hypertension is the most familiar cardiovascular disease in our country ,and the rat hypertens ion model play an important role in these studies .This text summarized the methods and characterics of some rat hypertension models . 【Key words 】　Hypertension ;Rat ;Model ,ani mal [基金项目]重庆市自然科学基金重点项目及攻关项目(No .20027537、No .20048256) [作者简介]程轶群(1979-),女,在读药理学硕士生,研究方向:心血管药理。E -mail :chengyiqun269998@sina .com [通讯作者]李晓辉,教授,博导。E -mail :xhl @mail .tmmu .com .cn 高血压是我国最常见的心血管疾病,其发生率在成年人中高达20%,不仅发病因素复杂众多,并且常有许多并发症,如脑卒中、心肌梗死、心力衰竭、 冠心病、糖尿病等。为了更好的研究高血压的发病机制,阐明各种药物的作用机理,并且开发出更多有效的药物,研究人员不断地努力尝试建立和应用各种高血压的动物模型,其中以大鼠模型最多,本文综述了目前若干实验性高血压大鼠模型建立的进展,以及它们的主要特点和应用。1　自发性高血压大鼠模型 国际上常用的原发性高血压的大鼠模型有:自发性高血压大鼠(SHR ,京都)、卒中易感型自发性高血压大鼠(SHR SP ,京都)、新西兰遗传性高血压大鼠(GH ,达尼丁)、以色列高血压大鼠(SBH ,耶路撒冷)、米兰高血压大鼠(MHS ,米兰)、里昂高血压大鼠(L H ,里昂)等。其中SHR 是最广泛应用的模型动物之一 [1] 。SHR 是1963年东京Okamoto 用 Wistar 大鼠培育而成的,其被毛呈白色。此鼠高血 压发生率高,在16周龄时高血压已形成,收缩压>21.28kPa ,无明显原发性肾脏或肾上腺损伤,心血管疾病发生率高。SHR 与人类原发性高血压形成 机制有相似之处,血压的升高均与外周血管阻力的增加有关,且对抗高血压药物有反应,因此,它是人类原发性高血压的研究及高血压药物筛选的较为理想的动物模型 [2] 。 2　转基因高血压大鼠模型 高血压病发病率高且病因复杂。临床研究发现其具有明显的家族倾向性,因而可能与遗传因素有关。从基因水平研究高血压病的发病机制是揭示这一疾病病因的根本途径。现已发现若干基因与发病有关,如肾素基因、血管紧张素转换酶基因、血管紧张素原基因、心房利钠因子基因等。目前,应用高血压相关基因制作转基因小鼠的报道已不胜枚举,而制作转基因大鼠的报道却屈指可数。大鼠是实验高血压学中广泛应用的经典动物,制作转基因大鼠有着更重要的理论和实际意义,但同时也有着较高的技术要求。

4种实验动物心肌肥厚模型

实验动物心肌肥厚模型 A、压力超负荷/主动脉缩窄 压力超负荷引起的心脏肥厚常用的手术方法是主动脉缩窄（i.e.缩窄升主动脉）。 小鼠行主动脉缩窄（TAC）可以引起心脏机械性的压力超负荷，最终导致心肌肥厚、心衰（20,84）。TAC通常诱导方法采用在近胸骨端行小切口, 缩窄主动脉的这样的开胸手术。TAC模型虽然不能完全模拟人类的心室重构，但该模型可以用于肥厚发病过程中多种基因学的研究。主动脉缩窄模型能很好的模拟血流动力学超负荷引起左心室肥厚的发生发展。该动物模型在主动脉缩窄造成心肌肥厚几个月后会导致心衰。 B、容量超负荷 在静脉回流适当的情况下，心脏不能排出足够的血液满足全身组织代谢的需要就会引起CHF（充血性心力衰竭）。心内檐沟血或回心血量增加导致瓣膜闭锁不全就会引起心室容量超负荷。在慢性动脉和/或二尖瓣瓣膜回流疾病中的容量超负荷，我们会观察到“舒张期压力-容积曲线”整体右移,说明心脏僵硬度增加，即发生LVH (可见于主动脉瓣狭窄、高血压、肥厚性心肌病)（36）。通常情况下，容量超负荷CHF模型制备方法是腹主动脉-下腔静脉分流术。即于肾动脉上方分离出下腔静脉和腹主动脉，用血管夹在近肾动脉端夹闭主动脉阻断血流；用0.6-mm的针头由主动脉远端刺入，继续进针刺入下腔静脉，使动静脉联合。退针后，缝合血管壁伤口。4-5周后，就能复制出心肌肥厚模型，并具有左心室收缩力增强、舒张末期压力增加的特点（257）。 C、冠状动脉结扎 冠状动脉结扎常用于复制心衰动物模型。冠脉左前降枝（LAD）结扎后会阻断心脏的供养和营养输送，这种情况类似于人类心脏病发作时伴随的症状。血氧和营养供输阻断后，心肌细胞死亡，心脏整体功能受影响，最终导致心功能紊乱。由于这种动物模型非常接近临床心衰疾病的发生发展，研究证明该模型是心衰发病机制研究的重要手段（13）。 D、转基因型心脏肥大模型 几十年以来，一些心脏肥大和心力衰竭的转基因小鼠模型被学者们用于心肌肥厚和心衰这些致命疾病的可能的分子机制研究。受条件限制，在此不能针对于所有模型作一全面的综述，但在此文中，我们介绍一种转基因小鼠模型，该模型能成功模拟心肌肥厚的发生发展以及最终演变为心衰的过程。表1列举的是截止目前，研究学者们发现的较成熟的心肌肥厚/心衰模型。 表1：小鼠心衰模型 转基因小鼠模型代谢转变模型ECM紊乱转基因模型 肌侵蛋白，TNFα，G i，Gαq，PKCβ，PKA，β1AR, 磷酸化蛋白, 肌集钙蛋白, 钙调磷酸酶, L-型Ca2+ 通道 线粒体功能紊乱 氧化应激 脂肪酸氧化(FAO) 通路的受损 基质金属蛋白酶2/MMP2 基质金属蛋白酶9/MMP9 组织金属蛋白酶抑制剂 1/TIMP1

高血压心肌纤维化及其诊断与治疗进展(一)

高血压心肌纤维化及其诊断与治疗进展(一) 【摘要】心肌纤维化是增加心血管疾病发病率和死亡率的重要危险因素之一。对于高血压引起的心肌纤维化病因病理研究，目前已涉及分子水平。其由多种病因引起，如炎症、缺氧、血流动力学变化等，并主要与肾素-血管紧张素-醛固酮系统、细胞因子、细胞凋亡、ECM降解失衡等相关。心肌纤维化的诊断手段主要有生化、超声、MRI及心肌活检。ACEI、ARB、醛固酮拮抗剂、β受体阻滞剂、他汀类药物以及中医中药被证实可阻滞或逆转纤维化。本文从分子水平，阐述了高血压心肌纤维化的病因病理、诊断以及相应的药物治疗进展。 【关键词】高血压心肌纤维化治疗分子机制中可检测到p53的突变6]。研究报道p53在乳腺癌中有较高的突变率7]，本研究亦得出相似结果，表明p53基因突变是乳腺癌发生发展过程中的重要分子事件。另外，本结果显示p53的表达与乳腺癌组织学分级有关而与TNM 分期无关，提示该基因突变与肿瘤的转移可能并无直接关系。 GST-π是机体内参与解毒的一类酶系，能够与亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进药物的代谢，GST-π表达增强与肿瘤耐药有关8]。本研究显示GST-π在乳腺癌中的表达率为42.1%，且与组织学分级和TNM分期有关，而在部分正常乳腺组织中呈低表达，该结果与HuangJ等人报道一致9]，提示GST-π阳性的乳腺癌较GST-π阴性者具有更高的侵袭性。TopoⅡα是机体内重要的核酶，表达于细胞S-G2/M期，参与DNA的复制、转录和翻译等过程，可作为细胞的增殖指数，它的高表达表明肿瘤具有较高的增殖活性；同时，TopoⅡα亦可作为抗癌药物作用的靶点指数，其含量和活性降低可导致肿瘤细胞的耐药10]。本研究中乳腺癌TopoⅡα的表达率高达76.3%，但与组织学分级和TNM分期无关，此结果与国内沈金辉等人报道相似11]，提示TopoⅡα和肿瘤的发生发展可能并无直接关系，其作用主要影响肿瘤多药耐药（MDR）环节。同时，本结果显示TopoⅡα的表达与c-erbB-2和p53呈负相关关系，其意义尚不明确，有待进一步研究。 心肌纤维化（myocardialfibrosis，MF）为胶原浓度显著升高或胶原容积分数（collagenvolumefraction）显著高于正常值，导致细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）的生成/降解失衡而产生。心肌纤维化可降低心室顺应性、限制心肌的电活动、影响胞力的产生传递和对氧和营养物质的吸收，是增加心血管疾病发病率和死亡率的重要危险因素之一1]。 1高血压心肌纤维化的病因病理 正常心肌由心肌细胞（实质）和非心肌细胞（间质）组成。其中，心肌细胞只占心脏细胞总数的1/32]，心间质包括细胞外基质（ECM）、淋巴细胞、纤维细胞、巨噬细胞等组成。研究发现，高血压可导致血管平滑肌细胞以及增生、重构的细胞外基质可在一些较小的血管管腔内重新排列3]。实验研究发现，自发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensiverats，SHR）存在细胞外基质重构4]，及心室或心房纤维化5]；此外临床研究也证实高血压患者的阻力血管发生了胶原沉积6]。 1.1RAAS RAAS组成部分，如血管紧张素转换酶和血管紧张素II被认为是导致心血管系统的结构改变，如心肌细胞和血管平滑肌细胞的肥大和细胞外基质的增加（纤维化）的基本因素7]。AgII 可诱导多种细胞因子分泌，如转化生长因子β1（transforminggrowthfactorβ，TGFβ1）、β3，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，诱导肌原纤维调节因子-1（myofibrillogenesisregulator-1，MR-1）表达8]，并增加核因子-κB水平，促使纤维化的形成。有研究者发现血管紧张素（1-7）可以抑制心肌胶原的沉积，而对血压以及心室肥大并无任何影响。从而表明，血管紧张素（1-7）可独立于血压以及心室肥大之外，有选择性地改善DOCA-盐敏感高血压大鼠心肌纤维化状况9]。此外，近年来发现醛固酮除了维持血液中正常的钠、钾浓度及细胞外液容量外，还有促进胶原、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达，并导致纤维化发生的作用。醛固酮的病理浓度可

高原地区高血压心肌纤维化的临床干预

高原地区高血压心肌纤维化的临床干预 发表时间：2017-11-30T15:44:10.557Z 来源：《医师在线》2017年9月上第17期作者：龙卡志玛 [导读] 高原地区高血压心肌纤维化患者在接受厄贝沙坦或福辛普利治疗后，均能取得较为理想的治疗效果。四川省甘孜州康定市人民医院四川省康定市 626000 【摘要】目的：探析高原地区高血压心肌纤维化的临床干预。方法：2016年5月-2017年5月，我院共收治高原地区高血压心肌纤维化患者66例，依照随机数表将其分为对照组（n=33）与观察组（n=33）。对照组行厄贝沙坦治疗。观察组行福辛普利治疗。对两组患者的治疗效果进行对比。结果：由本次研究可知，两组患者在治疗前其NO、AngⅡ、HA、PCⅢ等指标明显异常，在治疗后均有显著，在改善幅度上两组并无显著差异（P＞0.05）。结论：高原地区高血压心肌纤维化患者在接受厄贝沙坦或福辛普利治疗后，均能取得较为理想的治疗效果。 【关键词】高原地区；高血压；心肌纤维化；厄贝沙坦；福辛普利 高血压的出现极易导致患者发生心肌肥厚或是心肌细胞纤维化，并且该变化在高原地区更为常见[1-2]。为降低高原地区高血压心肌纤维化对患者生命安全的危害，降低其病死率，本次研究特选择我院近年所收治患者为对象，通过实施随机分组治疗，以观察不同药物在高原地区高血压心肌纤维化中的临床干预效果。结果如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 2016年5月-2017年5月，我院共收治高原地区高血压心肌纤维化患者66例，所有患者居住地区均在海拔2000m以上，且居住时间在10年以上，患者对研究知情并签署同意书，经我院伦理委员会批准，依照随机数表将其分为对照组（n=33）与观察组（n=33）。对照组：男17例，女16例；年龄47-74岁，平均年龄（60.7±6.7）岁。观察组：男18例，女15例；年龄49-75岁，平均年龄（60.9±6.8）岁。此两组患者在一般资料上无显著差异（P＞0.05）。 1.2方法 对照组患者行厄贝沙坦（生产厂家：浙江华海药业股份有限公司；生产批号：20151212）治疗，晨起口服，剂量为150mg，1次/d，连续用药7d，若患者血压仍偏高，则将单次剂量提升至2倍，2次/d。观察组患者行福辛普利（生产厂家：生产批号：20160301）治疗，晨起口服，剂量为10mg，1次/d，连续用药7d，若患者血压仍偏高，则将单次剂量改为20mg/次，并要求2次/d。两组患者均连续治疗3个月，随后对其治疗效果进行对比。 1.3指标观察 于治疗前后对两组患者的NO（一氧化氮）、AngⅡ（血管紧张素Ⅱ）、HA（透明质胶）、PCⅢ（血清Ⅲ型前胶原）指标进行检查记录，并做好统计分析。 1.4统计学分析 本次研究所用资料分别以（±s）及（%）的形式进行表示，并以SPSS20.0进行统计分析，以t及x2检验，若得P值低于0.05，则代表差异有统计学意义。 2.结果 由本次研究可知，两组患者在治疗前其NO、AngⅡ、HA、PCⅢ等指标明显异常，在治疗后均有显著改善，在改善幅度上两组并无显著差异（P＞0.05）。如下表1所示。 3.讨论 由于高原地区环境恶劣，大气稀薄，气压偏低，因此其高血压患者极易出现心肌纤维化，进而发展为心力衰竭，威胁到患者的生命安全[3]。为提高高原地区高血压心肌纤维化患者的临床生存率，必须要抑制其纤维化进程。厄贝沙坦及福辛普利作为肾素－血管紧张素－醛固酮系统抑制剂类药物，能够对心肌细胞纤维化进行抑制[4]。故本次研究特选择此两组药物作为研究用药，以观察各自临床效果。由本次研究可知，两组患者在治疗前其NO、AngⅡ、HA、PCⅢ等指标明显异常，在治疗后均有显著，在改善幅度上两组并无显著差异（P＞0.05）。这一结果表明，无论是厄贝沙坦亦或是福辛普利，均能够帮助患者减缓心肌细胞纤维化进程，从而确保患者生命安全。NO能够对细胞纤维化进行抑制，使心肌细胞供血得到改善，保护心肌细胞膜，减少胶原纤维合成，HA、PCⅢ作为细胞间质主要成分，其增加能够增厚心室壁，降低射血分数。AngⅡ若增加则会导致纤维母细胞增多，从而加速患者病情病变。实际上，厄贝沙坦是AngⅡ受体拮抗剂，能够显著抑制ATI受体所介导的肾上腺球细胞释放醛固醇，在降血压的同时可以有效保护心肌细胞的重塑性病理改变; 福辛普利通过抑制肾素－血管紧张素－醛固酮系统的血管紧张素转换酶，阻止血管紧张素Ⅰ转换为血管紧张素Ⅱ，同样可以在降血压的同时抑制肾素－血管紧张素－醛固酮系统激活导致的纤维化改变[5]。 综上所述，厄贝沙坦或福辛普利在高原地区高血压心肌纤维化患者的临床治疗中均有较为理想的临床表现。两者均可在临床治疗中予以推广。 参考文献： [1]孙海霞, 张亚萍. 高原地区高血压心肌纤维化的临床及干预研究[J]. 心脑血管病防治, 2016, 16(5):377-379.