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IH0090B2 多聚赖氨酸溶液(1XPLL,0.1mgml)

多聚赖氨酸溶液(1×PLL,0.1mg/ml)

产品简介：

多聚赖氨酸溶液英文名为Poly-L-lysine solution简称PLL。Leagene Poly-L-lysine 为Poly-L-lysine hydrobromide，分子式为L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys?xHBr，分子量为150,000～300,000，CAS Number 25988-63-0。

本产品为已经配制好的Poly-L-lysine solution, 并经除菌处理，可以直接稀释后用于细胞或组织培养方面的实验。它是一种粘附剂，常用于载玻片的包被。分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长，本产品可以用于促进细胞的贴壁生长。

产品组成:

主要成分: 主要由多聚赖氨酸、DEPC处理水等组成。

操作步骤（仅供参考）：

1、根据实验需要Leagene Poly-L-lysine solution稀释至适当浓度溶液后即可使用。不同

的细胞，多聚赖氨酸包被(Coating)的时间和浓度，甚至稀释液的选择有所不同，请自行参考相关文献进行适当的包被。

2、多聚赖氨酸用于细胞培养时，较为常用的包被(Coating)浓度为0.1mg/ml。包被至少

5min，有些实验需要包被1～2h，有些情况则需要包被过夜。

3、包被完成后，吸除多聚赖氨酸溶液，干燥培养器皿，至肉眼观察完全干燥。通风橱内吹

风数分钟即可完成干燥，对于有些实验则需要干燥2h或更长时间。干燥时间较长通常会更加有利于后续的细胞粘附。

4、直接进行细胞培养，也可以用水、PBS或培养液等适当溶液润洗后再进行细胞培养。

注意事项：

1、多聚赖氨酸溶液可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化

并吸收，摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。

2、注意无菌操作。

3、避免反复冻融，如果大量使用，可以取适量溶液置于4℃保存，6个月有效。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：12个月有效。

多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mgml,无菌)

多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml,无菌) 简介：多聚赖氨酸溶液英文名为Poly-L-lysine Solution 简称PLL 。Leagene Poly-L-lysine 为Poly-L-lysine hydrobromide ，分子式为L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys ?xHBr ，分子量为150,000～300,000，CAS Number 25988-63-0。 PLL 是一种粘附剂，常用于载玻片的包被,可以直接稀释后用于细胞或组织培养方面的实验。分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以促进细胞贴壁生长，本产品可以用于促进细胞的贴壁生长和核酸杂交，制备好的载玻片可4℃保存半年。组成: 操作步骤(仅供参考)： 1、用于细胞培养 ①_x0001_ 根据实验需要Poly-L-lysine Solution 稀释至适当浓度溶液后即可使用。不同的细胞，Poly-L-lysine Solution 包被(Coating)的时间和浓度，甚至稀释液的选择有所不同，请自行参考相关文献进行适当的包被。 ②Poly-L-lysine Solution 用于细胞培养时，包被至少5min ，有些实验需要包被1～2h ，有些情况则需要包被过夜。 ③包被完成后，吸Poly-L-lysine Solution ，干燥培养器皿，至肉眼观察完全干燥。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥，对于有些实验则需要干燥2h 或更长时间。干燥时间较长通常会更加有利于后续的细胞粘附。 ④进行细胞培养，也可以用水、PBS 或培养液等适当溶液润洗后再进行细胞培养。 2、用于核酸杂交 ①_x0001_ 方法一：取事先准备好的载玻片或盖玻片经冷却至室温，在Poly-L-lysine Solution 上下浸蘸几下，自然干燥，4℃备用，亦可室温保存1个月。 ②_x0001_ 方法二：Poly-L-lysine Solution 涂于玻片上，自然干燥后即可使用，可用于细胞涂片和切片。 ③_x0001_ 方法三：滴加5～10μl Poly-L-lysine Solution 至玻片上，用另一盖玻片以血涂片方法推片或用另一玻片紧贴于其上，相互摩擦以使两玻片相对的一面涂布上明胶包被溶液。编号名称 IH0095 Storage Poly-L-lysine Solution(1mg/ml,无菌) 10ml -20℃ 避光使用说明书 1份

多聚赖氨酸处理

配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。一个能最多有效过滤200ml。铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。消毒后30分钟进入实验室。事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。具体细节就不多说了。首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。再将水吸出来。反复三次。注意换吸管，要无菌操作的。最后将铺好的板子放于培养箱待用。如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。

1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ； 2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml； 3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可； 4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量； 5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你； 6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。我问过博士德公司，他们分装的多聚赖氨酸是用来作免疫组化的，没有做过细胞培养实验，他们不保证能否用在细胞培养中，建议你买其他公司的吧，有固体的，分子量为15-30万，我们实验室用浓度0.01%的来促进神经细胞贴壁。我们用的多聚赖氨酸浓度为100ug/ml,一般包被3-4小时即可用.我们包被完后一般放在培养箱里,临用时拿出来洗三次，吹干即可．如果不急着用，放在培养箱里较长时间也没关系，把瓶盖拧紧即可，我最长放了２星期也没有问题。左旋和右旋的多聚赖氨酸都可以用于包被细胞培养器具,主要看你的细胞贴壁能力如何,左旋的更利于细胞贴壁.我们一般使用0.01%浓度的,包被过夜,第二天用双蒸水洗两三次,超净台紫外照射,风干。可以直接买sigma的原装粉剂自己配。还有,配好的多聚赖氨酸在4度时间不能放置太久,大概就一两周吧。存放于-20度中的一般为0.1%的,而且不能反复冻融,只能融化一次。最好是配好后分装。

多聚赖氨酸包被方法

Poly-lysine-coated tissue culture surfaces 1. To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at -20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry. 2. To coat culture dishes: 多聚赖氨酸包被培养皿/板 Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm fil ter. 配制1mg/ml储存液 Store in 5-ml aliquots at -20°C. 分装保存在-20度 When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. 使用前按1：10稀释成100μg/ml工作浓度。用5-10ml一次性无菌注射器和0.22μm 滤器过滤除菌，备用。 Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.

多聚赖氨酸的配置、保存、使用

多聚赖氨酸的配置、保存、使用一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用 0.1 mg/ml进行包被。二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)： .snap 三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。答： PH应该在 7.0~ 7.4，PBS：取氯化钠 7.650 g，无水磷酸氢二钠 0.724 g，磷酸二氢钾 0.210g溶于蒸馏水1000 mL中，以1N氢氧化钠溶液调pH值为 7.0~ 7.4，经121℃灭菌15分钟

五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答： Sigma的产品说明书上写的很xx的。另外，有本书上是这么写的，供参考： Poly-lysine-coated tissue culture surfaces To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μmfilter. Store in 100-μlaliquots at?20° C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13μg/mlworking solution.Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culturesurfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μmfilter.Store in 5-ml aliquots at ?20° C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts waterto prepare 100μg/mlworking solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry. Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°

ε-聚赖氨酸等4种食品添加剂新品种

附件1 ε-聚赖氨酸等4种食品添加剂新品种一、ε-聚赖氨酸英文名称：ε-polylysine 功能：防腐剂（二）质量规格要求 1.生产工艺由小白链霉菌( Streptomyces. Albulus)PD-1经过液体深层有氧发酵制得的食品添加剂ε-聚赖氨酸。 2.技术要求 2.1感官要求：应符合表1的规定。

附录 A 检验方法 A.1 安全警示试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。操作者应采取适当的安全和防护措施。 A.2 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682—2008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 A.3 鉴别试验易溶于水，略带苦味。 A.4 ε-聚赖氨酸含量的测定 A.4.1 试剂和材料 A.4.1.1 硫酸钠溶液：0.30 mol/L。称取42.6 g硫酸钠溶解并定容至1000 mL，用乙酸调pH为4.0。 A.4.1.2 ε-聚赖氨酸标准贮备溶液：10.0 mg/mL。称取1.0 g ε-聚赖氨酸标准样品，溶解并定容至100 mL。 A.4.1.3 ε-聚赖氨酸标准溶液：1.0 mg/mL。移取10.0 mL ε-聚赖氨酸标准贮备溶液于100 mL容量瓶中，定容至100 mL。 A.4.2 仪器和设备凝胶渗透色谱仪：配有紫外检测器。 A.4.3参考色谱条件 A.4.3.1凝胶柱：水相凝胶过滤色谱（7.8 mm ×300 mm）。 A.4.3.2检测温度：30 ℃。 A.4.3.3检测波长：210 nm。 A.4.3.4流速：0.5 mL/min。 A.4.3.5进样量：20 μL。 A.4.3 分析步骤 A.4.3.1 标准曲线的绘制分别移取0.00 mL、5.00 mL、10.00 mL、15.00 mL、20.00 mL、25.00 mL ε-聚赖氨酸标准溶液至25 mL容量瓶中并定容，溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤。打开色谱仪，并调至工作状态，待基线平稳后，依次将上述ε-聚赖氨酸标准溶液注入凝胶柱中，进样量为20 μL，记录峰面积，以标准溶液中ε-聚赖氨酸的质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 A.4.3.2 试样测定准确称取0.1 g试样，溶解定容至100 mL。配好的试样溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤，进样量为20 μL，进行凝胶渗透色谱检测，记录峰面积，并根据标准曲线查得试样中ε-聚赖氨酸的质量。 A.4.4 结果计算 ε-聚赖氨酸含量的质量分数w，按公式（A.1）计算：

多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mgml)

多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml) 简介：多聚赖氨酸溶液英文名为Poly-L-lysine Solution 简称PLL 。Leagene Poly-L-lysine 为Poly-L-lysine hydrobromide ，分子式为L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys ?xHBr ，分子量为150,000～300,000，CAS Number 25988-63-0。 PLL 是一种粘附剂，常用于载玻片的包被,可以直接稀释后用于细胞或组织培养方面的实验。分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以促进细胞贴壁生长，本产品可以用于促进细胞的贴壁生长和核酸杂交，制备好的载玻片可4℃保存半年。组成: 操作步骤(仅供参考)： 1、用于细胞培养 ①_x0001_ 根据实验需要Poly-L-lysine Solution 稀释至适当浓度溶液后即可使用。不同的细胞，Poly-L-lysine Solution 包被(Coating)的时间和浓度，甚至稀释液的选择有所不同，请自行参考相关文献进行适当的包被。 ②Poly-L-lysine Solution 用于细胞培养时，包被至少5min ，有些实验需要包被1～2h ，有些情况则需要包被过夜。 ③包被完成后，吸Poly-L-lysine Solution ，自然干燥培养器皿，至肉眼观察完全干燥。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥，对于有些实验则需要干燥2h 或更长时间。干燥时间较长通常会更加有利于后续的细胞粘附。 ④进行细胞培养，也可以用水、PBS 或培养液等适当溶液润洗后再进行细胞培养。 2、用于核酸杂交 ①_x0001_ 方法一：取事先准备好的载玻片或盖玻片经160℃冷却至室温，在Poly-L-lysine Solution 上下浸蘸几下，自然干燥，4℃备用，亦可室温保存1个月。 ②_x0001_ 方法二：Poly-L-lysine Solution 涂于玻片上，自然干燥后即可使用，可用于细胞涂片和切片。 ③_x0001_ 方法三：滴加5～10μl Poly-L-lysine Solution 至玻片上，用另一盖玻片以血涂片方法推片或用另一玻片紧贴于其上，相互摩擦以使两玻片相对的一面涂布上明胶包被溶液。编号名称 IH0091 IH0091 Storage Poly-L-lysine Solution(1mg/ml) 10ml 50ml -20℃ 避光使用说明书

用多聚赖氨酸作载体制备IVM人工抗原的研究

兽医科技收稿日期:2008-12-21;修回日期:2008-10-31 基金项目:中国农科院兰州畜牧与兽药研究所基金项目(MY JJ05-3) 作者简介:魏小娟(1976-),女,助理研究员,硕士. 用多聚赖氨酸作载体制备I VM 人工抗原的研究魏小娟,张继瑜,张梅,李剑勇,周绪正,李金善,牛建荣 (中国农业科学研究院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药重点开放实验室,甘肃兰州730050)中图分类号:S852.4+ 3 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2009)01-0065-02 关键词:伊维菌素;人工抗原;多聚-L-赖氨酸摘要:采用N -羟基琥珀酰亚胺活性酯法和混合酸酐法,将伊维菌素(I V M )分别与多聚-L-赖氨酸(PLL)和卵清蛋白(OVA )连接制备人工免疫原5-O -(单)琥珀酰I V M -PLL 和包被原5-O -(单)琥珀酰I VM -OVA,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证实人工抗原合成成功。伊维菌素(Lver m ecti n ,I V M )是大环内酯类杀虫、杀螨剂,由于其具有杀菌活性强以及杀菌谱广等特点已被广泛地应用于畜禽及水产养殖业,也是农业生产上广泛使用的一种杀虫剂。但此类药物在动物性产品中的残留严重影响到我国农产品的国际竞争力,同时也对人及环境存在潜在的威胁。随着人们对I VM 残留的毒性及环境风险的日益关注,迫切需要简单、快速、高效的I V M 残留检测方法,但目前常用的H PLC 法检测的灵敏度较低,无法满足农产品中I V M 及其有毒代谢物的残留分析要求。为此,笔者根据I V M 的结构特点,采用N -羟基琥珀酰亚胺活性酯法和混合酸酐法将伊维菌素与载体蛋白偶联,成功地制备了伊维菌素完全抗原,为畜禽产品中伊维菌素残留的ELISA 检测奠定了基础。1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 伊维菌素白色粉末,有效成分含量>98%(其中B 1a 含量约为92%,B 1b 含量约为18%),浙江海正药业有限公司提供。1.1.2 主要试剂牛血清白蛋白(BSA )、卵清蛋白(OVA )、多聚-L -赖氨酸(PLL)、乙基二甲氨基碳化二亚胺盐酸盐(EDC ),Sig m a 公司产品;二甲基甲酰胺(DMF )、咪唑、琥珀酸酐、吡啶,北京化工厂生产;N -羟基琥珀酰亚胺(NH S)、叔丁基二甲基氯硅烷(t-Bu M e 2S i-C l),天津化学试剂公司生产;硅胶GF254(200~400目),青岛海洋化工厂生产;羊抗兔I gG-HRP ,北京鼎国生物公司生产。1.1.3 主要仪器透析膜(Sig m a)、Sartorious 电子天平、95-1型磁力恒温搅拌器、DDY -6B 型电泳仪、凝胶成像系统及分析软件(Syngene 公司)。1.1.4 试验动物新西兰成年白兔,体重1.7~2.0kg ,购自中牧集团兰州生物制药厂。1.2 试验方法1.2.1 半抗原5-O -(单)琥珀酰I V M 的合成以C 5-OH 为反应位点,在无水吡啶的催化下进行反应。取0.1g I VM 加2.0m L 无水吡啶溶解,加入0.05g 琥珀酸酐,45e 、磁力搅拌下避光反应12h ,反应物在3.6%HC l 和乙酸乙酯间分配,收集酯层减压浓缩;用二氯甲烷复溶残留物,TLC 分离产物(GF 254,展开剂C H 2C 12B TH F B HAC (90B 9.5B 0.5),共有4个条带,Rf 分别为1.0,0.5,0.3,0.2;分别刮取4条带,以乙酸乙酯淋洗,收集洗脱液,减压浓缩,真空干燥。1.2.2 人工抗原的合成免疫抗原5-O -(单)琥珀酰I V M -PLL 的合成(NH S 法):取12m g 半抗原5-O-(单)琥珀酰I V M,加0.4mL D M F 溶解,再依次加入2.7m g NH S 和4.7m g EDC -HC l 混合,20e 避光搅拌10h ,将上述反应液逐滴加至6mL 含20m g PLL 的硼酸盐缓冲液(0.2mm ol/L ,p H 值为9.4)-10%DM F ;溶液开始略显混浊,最后有少量沉淀出现,继续搅拌1h ,再转至4e 条件下搅拌12h,产物经PBS (0.01m o l/L ,p H 值为7.2)透析72h,Sephdex G -200纯化。包被原5-O -(单)琥珀酰I V M -OVA 的合成(混合酸酐法):取10m g 5-O-(单)琥珀酰I V M,用1mL D M F 溶解,加入15L L 氯甲酸异丁酯,20e 搅拌45m i n ,制成A 液;称取30m g 的OVA 溶于10m L 0.2m ol/mL 硼酸盐缓冲液(pH 值为9.4)中制成B 液。将A 液逐滴加入B 液,边加边搅拌,之后在4e 搅拌反应12h ,然后将混合物装入事先处理并在0.01m o l/m L PBS(p H 值为7.4)中浸泡过夜的透析袋中,在4e 、0.01m o l/mL PBS(p H 值7.4)中透析3d ,每天换2次透析液。1.2.3 半抗原和人工抗原的结构鉴定半抗原的结 65 5黑龙江畜牧兽医62009年第1期

聚赖氨酸的研究进展

聚赖氨酸的研究进展食品的腐败变质主要是指由于微生物的作用而导致食品质量下降或失去食用价值的一切变化，它直接影响食品的品质和消费者的健康。全世界每年约有10％～20％的农副产品、水产品、果蔬会腐败变质，经济损失巨大。如何防止食品的腐败变质越来越引起人们的重视，有关食品防腐剂的研究也日趋完善。目前使用的防腐剂品种很多，美国有50多种，日本有43种，中国香港特区27种，主要为丙酸及盐类、山梨酸及钾盐、苯甲酸类、噻菌灵、对羟基苯甲酸酯类、以及新型生物防腐剂聚赖氨酸、鱼精蛋白、乳酸、链球菌素等。我国允许使用的约18种，主要品种有：苯甲酸钠、山梨酸及其钾盐、丙酸钙等，生物防腐剂的开发和应用尚处于起步阶段。苯甲酸系列、山梨酸系列、丙酸盐等这些防腐剂均为化学合成的防腐剂，对人体健康有一定影响。随着人们生活水平的日益提高，迫切需要更安全的防腐剂。日本开始使用聚赖氨酸、Nisin等以微生物发酵法生产的天然防腐剂替代传统的化学合成的防腐剂。作为新型的天然防腐剂，ε-聚赖氨酸已于2003年10月被FDA批准为安全食品保鲜剂。迄今为止，ε-聚赖氨酸的微生物发酵在日本已实现工业化，年产千吨ε-聚赖氨酸的现代化工业装置已建成投产。但该技术在国内还处于实验室阶段，ε-聚赖氨酸生物防腐剂的开发和生产还处于起步阶段，如果能重点扶持这一技术，将会在未来几年创造出可观的经济效益。 1聚赖氨酸的性质 1977年日本学者S．Shima和H．Sakai在从微生物中筛选Dragendo~Positive(简写为DP)物质的过程中，发现一株放线菌No．346能产生大量而稳定的DP物质，通过对酸水解产物的分析及结构分析，证实该DP物质是一种含有25—30个赖氨酸残基的同型单体聚合物，称为ε-多聚赖氨酸(8一 PL)。研究证明由于ε-PL比α-PL有更强的抑菌活性，而且仅一多聚赖氨酸有一定毒性，目前在国际市场上ε-多聚赖氨酸作为食品防腐剂已经取代了α-多聚赖氨酸。其分子式如下： 1．1 ε-聚赖氨酸的理化性质 ε-聚赖氨酸为淡黄色粉末、吸湿性强，略有苦味，是赖氨酸的直链状聚合物。它不受pH值影响，对热稳定(120℃，20min)，能抑制耐热菌，故加入后可热处理。但遇酸性多糖类、盐酸盐类、磷酸盐类、铜离子等可能因结合而使活性降低。与盐酸、柠檬酸、苹果酸、甘氨酸和高级脂肪甘油酯等合用又有增效作用。分子量在3600—4300之间的ε-聚赖氨酸其抑菌活性最好，当分子量低于1300时，ε-聚赖氨酸失去抑菌活性。由于聚赖氨酸是混合物，所以没有固定的熔点，250℃以上开始软化分解。￡一聚赖氨酸溶于水，微溶于乙醇。对其表征进行红外光谱分析表明：在1680～1640cm -1和1580—1520cm-1有强吸收峰。 1．2 ε-聚赖氨酸的生物学性质 ε-聚赖氨酸是一种具有抑菌功效的多肽，这种生物防腐剂在80年代初由日本学者腾井正弘，平木纯首次应用于食品防腐。ε-聚赖氨酸能在人体内分解为赖氨酸，而赖氨酸是人体必需的8种氨基酸之一，也是世界各国允许在食品中强化的氨基酸。因此8一聚赖氨酸是一种营养型抑菌剂，安全性高于其他化学防腐剂，其急性口服毒性为5g/kg。 ε-聚赖氨酸抑菌谱广，对于酵母属的尖锐假丝酵母菌、法红酵母菌、产膜毕氏酵母、玫瑰掷孢酵母；革兰氏阳性菌中的耐热脂肪芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌；革兰氏阴性菌中的产气节杆菌、大肠杆菌等引起食物中毒与腐败的菌有强烈的抑制作用。刘慧等研究也表明：ε-聚赖氨酸对革兰氏阳性的微球菌，保加利亚乳杆菌，热链球菌，革兰氏阴性的大肠杆菌，沙门氏菌以及酵母菌的生长有明显抑制效果，聚赖氨酸与醋酸复合试剂对枯草芽胞杆菌有明显抑制作用。

多聚赖氨酸包被方法定稿版

多聚赖氨酸包被方法 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】

聚赖氨酸

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多聚赖氨酸包被方法

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Poly-lysine-coated tissue culture surfaces 1. To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a μm filter. Store in 100-μl aliquots at -20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry. 2. To coat culture dishes: 多聚赖氨酸包被培养皿/板 Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a μm fil ter. 配制1mg/ml储存液 Store in 5-ml aliquots at -20°C. 分装保存在-20度 When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. 使用前按1：10稀释成100μg/ml工作浓度。用5-10ml一次性无菌注射器和μm 滤器过滤除菌，备用。 Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.

ε-聚赖氨酸的用途及研究进展

ε-聚赖氨酸的用途及研究进展摘要：本文从ε-聚赖氨酸的发现、性质和用途、ε-聚赖氨酸产生菌的筛选和生物合成机理的研究、改造以及发酵生产做了简单介绍，让读者从以上几方面综合了解了ε-聚赖氨酸的各个用途和国内研究发展现状。关键字：ε-聚赖氨酸、生物合成、用途、食品防腐、研究进展 1 引言 ε-聚赖氨酸的用途很广泛，例如可以作为广谱食品防腐剂，作为药物载体、作为细胞融合中的促融剂、作为人工合成抗原的载体、化妆品中的增白剂等。ε-聚赖氨酸作为食品防腐剂，具有广谱、高效、无毒、受pH值影响小等特点,这些特点是目前普遍使用的各种防腐剂所欠缺的,符合食品防腐剂的发展要求。目前使用的食品防腐剂主要是人工合成防腐剂，找到一种抗菌谱广、高效、无毒、不受pH值影响的防腐剂是食品工业迫切需要解决的一个问题。 2 ε-聚赖氨酸的发现 1977年日本学者S.Shima和H．Sakai在从微生物中筛选Dragendo~Positive(简写为DP)物质的过程中，发现一株放线菌No．346能产生大量而稳定的DP物质，通过对酸水解产物的分析及结构分析，证实该DP物质是一种含有25—30个赖氨酸残基的同型单体聚合物，称为ε-多聚赖氨酸(ε- PL)。 ε-聚赖氨酸由赖氨酸单体组成，进入人体后可以完全被消化吸，不但没有任何毒副作用，而且可以作为一种赖氨酸的来源；另外，ε-聚赖氨酸的抗菌谱广，对革兰阳性和革兰阴性细菌、酵母、霉菌&、病毒等都有明显的杀灭作用；抑菌效率高，在浓度很低时就起作用；它还不受食品pH值的影响。ε-聚赖氨酸在日本已经作为食品防腐剂广泛使用，而在世界范围内也只有日本才有这种产品。研究开发这种新型食品防腐剂具有十分重要的理论意义和应用价值。但是，从1977年发现ε-聚赖氨酸开始直到2002年为止对于菌种的筛选和生物合成机理的研究一直没有取得突破，尽管通过对菌种的诱变以及控制发酵条件，目前已经可以获得较高的ε-聚赖氨酸产量，但是这些研究都不是定向的。直到2002年以后，有关ε-聚赖氨酸产生菌的筛选，以及生物合成机理的研究才取得突破。

多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)的配制、保存、使用总结

因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap 三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。另外，有本书上是这么写的，供参考： Poly-lysine-coated tissue culture surfaces To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize throu gh a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry. To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isom er) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working soluti on. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry. Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C. 你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。玻片也是事先泡洗洁精，泡酸，双蒸水洗，烘干后高压灭菌，待用。培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把PLL加到玻片上，静置15分钟，洗出多余的PLL，然后用高压过的双蒸水洗板，培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了。六、多聚赖氨酸消毒该怎么办？？

ε-聚赖氨酸的应用

ε-聚赖氨酸在食品中的应用一、作为食品防腐剂的应用 ε-聚赖氨酸（ε-PL）作为一种天然食品防腐剂，因其良好的抗菌活性和热稳定性而受到了广泛关注。聚赖氨酸对于大多数G+、G－细菌、真菌及某些病毒具有强烈的抑制作用。（一）ε-聚赖氨酸的安全性 ε-PL具有很高的安全性。小鼠急性口服毒理学研究表明ε-PL无毒性，细菌恢复突变测定表明ε-PL无致突变性。Hiraki等人在小鼠灌胃实验中发现，食物中添加高达20000ppm 的ε-PL对小鼠生长并无明显副作用，ε-PL对于小鼠繁殖、神经胶质和免疫功能、胚胎和胎儿发育、后代的生长及其胚胎和胎儿发育无毒性。14C-标记的ε-聚赖氨酸的吸收、分布、代谢和排泄研究（ADME）表明，ε-聚赖氨酸在肠胃中的吸收极差，经168小时的排泄，放射性全部消失。通过自动放射能照仪观察，ε-聚赖氨酸在各组织和器官中没有积累。 1989年日本Chisso公司首先用生物技术方法工业生产聚赖氨酸，从1989年起聚赖氨酸允许在日本作为食品添加剂使用（卫生、劳动和福利部现有食品添加剂名单），以后韩国也允许其作为食品添加剂使用。在日本，ε-聚赖氨酸在多种食品如米饭和面条的防腐方面，具有长期安全使用的历史。例如，将ε-聚赖氨酸以1000—5000ppm的浓度喷雾或浸泡鱼片或寿司，在许多传统日本食品中ε-聚赖氨酸用量达500ppm的浓度。另外，日常消费的食品如米饭、面条原汤、其他汤料、面条和炒菜通常含ε-PL10—500ppm。ε-PL还用于Sukiyaki （日本牛排）、土豆沙拉、蒸蛋糕、卡士达酱的防腐。2004年，ε-PL被美国FDA批准用于米饭和寿司的防腐，推荐用量为5—50ppm。（二）ε-聚赖氨酸的适用范围 ε-PL用于食品防腐时，可单独使用或与其他食品添加剂配合使用。常用的食品添加剂有甘氨酸、酒精、醋、磺酸月桂脂。复配使用可大大提高ε-PL的防腐性能。例如，当ε-PL 与甘氨酸复配用于浓缩牛奶的防腐时，可观察到协同抑菌效果，使添加到食品中的防腐剂的总量得以降低。 ε-聚赖氨酸在奶制品中的防腐保鲜作用徐红华等人通过饱和实验设计研究了ε-聚赖氨酸和甘氨酸对牛奶的保鲜作用，结果表明，单独使用ε-聚赖氨酸和甘氨酸，其抑菌能力明显低于二者混合使用的效果。混合使用时其增效随二者用量的增加而增加；但当ε-聚赖氨酸用量过高时，这种增效会有所减弱。其中添加420mg/Lε-聚赖氨酸和2% 的甘氨酸抑菌效果最佳。 ε-聚赖氨酸在淀粉类食品中的防腐保鲜作用日本学者腾井正弘在米饭中添加0.4%—0.6%ε-聚赖氨酸-醋酸制剂研究对米饭的防腐作用，结果显示：30℃培养４８小时后，添加ε-聚赖氨酸的样品中细菌总数为6.0×10３个/g，而空白样中细菌总数为3.6×108个/g，表明ε-聚赖氨酸的醋酸剂有明显抑菌作用。对动物性食品的防腐保鲜作用腾井正弘将鸡肉等肉类浸渍在溶有0.12％ε-聚赖氨酸甘氨酸制剂调味液中，再涂上面粉用油炸。这种鸡在30℃放置72小时，经细菌总数检测发现：浸渍过炸鸡中细菌总数为1.0×104个/g，而空白样中为108个/g以上。（三）ε-聚赖氨酸的商品剂型酒精制剂以含50% ε-聚赖氨酸德糊精粉末为基础原料，添加30% —70% 的酒精制剂，主要用于各种蛋制品。研究发现，将无水乙醇或者含水乙醇与ε-聚赖氨酸盐混合能明显抑制酵母生长。有机酸制剂添加有机酸如：醋酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸等，添加量为0.5%—5.0%。其中ε-聚赖氨酸与醋酸对枯草芽胞杆菌有明显的抑制作用。主要用于米饭、饮料、色拉、酱类等食品。