当前位置：文档库 › 虾类胰蛋白酶的研究进展

虾类胰蛋白酶的研究进展

综述与专论

生物技术通报

BI OTEC HNOLOG Y BULLETI N 2011年第2期

虾类胰蛋白酶的研究进展

王萍

1,2

吴燕燕1

李来好1

杨贤庆1

刁石强

(1中国水产科学研究院南海水产研究所,广州510300;2上海海洋大学,上海201306)

摘要: 综述了近年来国内外对甲壳类动物虾类胰蛋白酶的研究概况,详细分析了虾类胰蛋白酶的分离纯化、特性、结构及其在食品工业上的应用,展望对虾加工过程产生的大量虾头废弃物中胰蛋白酶资源的开发利用。

关键词: 虾胰蛋白酶分离纯化特性应用

Researc h Progress on Shri m p Trypsin

W ang P i ng

1,2

W u Y anyan 1

L i L ai hao 1

Yang X ia nqi ng 1

D i ao Shiqia ng

Sou t h Chi na Sea F isheries Researc h Institute ,Chi nese A ca de my of Fishery Scie nces ,Guangzhou 510300;

Shanghai O cean Universit y,Shanghai 201306)

Abstrac:t A ccordi ng t o the do

m esti c and fore i gn recen t research repo rts on trypsi n o f crustacean s hr i m p ,this paper rev i ewed iso lati on and purificati on ,cha racte ristics ,structure and t he app licati on i n food industry of t he shri m p tryps i n .S i m u ltaneously ,the pros pect w as sugg ested on t he exp l o ita tion and utilizati on of trypsi n fro m large quantities o f shr i m p head w aste during pro cessi ng .

K ey words : Shr i

m p T ryps i n Pur ifi cation Character i stic A pp licati on 收稿日期:2010 10 11

基金项目:国家科技支撑项目(2008BAD94B02),广东省重点项目(2005B33201002)作者简介:王萍,女,硕士研究生,研究方向:水产品加工与质量安全;E m ai:l p i ng m i ngji ng @126.co m 通讯作者:吴燕燕,女,研究员,博士,研究方向:水产品加工与质量安全;E m ai:l wuyy1028@yah oo .co https://www.wendangku.net/doc/9c10371041.html,

胰蛋白酶(trypsi n ,EC 3.4.21.4)是消化酶的一

种,属于丝氨酸蛋白酶家族。它是一种内肽酶,最初分泌物为胰蛋白酶原,经降解而成为具有活性的酶。主要作用于精氨酸或赖氨酸羧基端的肽键。大多数脊椎动物胰蛋白酶在腺泡以无活性的前体即酶原形式释放,经腺管进入肠腔,且酶原在肠激酶作用下切去活化肽成为有活性的胰蛋白酶。而在昆虫及甲壳动物等无脊椎动物中,胰蛋白酶主要由中肠腺分泌,且甲壳动物体内是否存在肠激酶目前尚未有报道,因此胰蛋白酶原可能的活化机制为自我活化。

1 虾类胰蛋白酶的分离纯化

胰蛋白酶作为动物体内重要的蛋白消化酶类,研究者对于人类及陆生动物如鼠、狗、牛和猪等胰蛋

白酶的研究较多。近年来,随着水产养殖业的发展,虾类消化酶的研究也逐渐形成,主要是研究对虾养殖过程中不同饲料、生长阶段、水体环境下虾类消化酶活性状况,并以此为依据选择合适的虾类养殖条

件。关于虾类胰蛋白酶的基础性研究,国外比国内开展得早。迄今为止,已研究报道了南极大磷虾、南美白对虾、斑节对虾、印度对虾、东方扁虾、太平洋大磷虾、凡纳滨对虾和中华齿米虾等虾类胰蛋白酶。

胰蛋白酶是一种蛋白大分子,其分离纯化应遵循蛋白质大分子分离纯化的原则。一般原则即根据蛋白质分子大小、溶解度差异、荷电差异、与某些物质的吸附差异以及与生物分子专一性结合等性质对其进行分离。具体方法如沉淀、离心、透析、凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析等。

一般采用沉淀法和离心法对酶进行初级分离,其中沉淀法多用不同饱和度硫酸铵分级沉淀。虾类胰蛋白酶在中性及碱性环境下呈阴离子存在,所以利用离子交换层析法时一般采用阴离子交换剂。亲和层析因具有高效、快速、简便等优点,现已成为研究者纯化胰蛋白酶的重要手段。亲和层析一般采用蛋白酶抑制剂作为亲和配体,如苯甲脒(Osnes [1]

;Rub n

[2]

),鸡卵黏蛋白

[3]

,载体一般为琼脂糖凝胶

2011年第2期王萍等:虾类胰蛋白酶的研究进展

微球Sepharose4B。

2 虾类胰蛋白酶的特性研究

许多研究学者将虾类胰蛋白酶活力变化作为指示养殖过程中虾类生长状况的指标之一,如潘鲁青等[4]测定了中国对虾幼体消化酶的活力,并讨论了利用动物个体发育中酶活力的变化作为营养状态指标来指导投饵:一般采用淀粉酶/蛋白酶活力(A/P)比值或淀粉酶/类胰蛋白酶(A/T)比值作为指标,比值高则为植物食性或偏植物食性,比值低则为肉食性或偏肉食性。鲍蕾[5]研究了不同p H、盐度和饵料磷对日本沼虾生长过程中胰蛋白酶的影响。国外学者对虾类中胰蛋白酶的研究比较深入,如Osnes与M ohr等[1]和Anheller等[6]分别从南极大磷虾中提取出3种胰蛋白酶并进行了不同程度的生化分析, K lein等[7]研究了南美白对虾肝胰脏中的胰蛋白酶基因,T itani等[8]第一次报道了格鲁西东欧鳌虾胰蛋白酶的氨基酸序列。

2.1 胰蛋白酶分子量研究

哺乳动物胰蛋白酶分子量研究已经成熟且有较多报道,如牛胰蛋白酶分子量为23.3kD,猪胰蛋白酶为24.0kD,水产鱼类中胰蛋白酶的分子量范围在20-30kD[9]。

关于虾类胰蛋白酶分子量的研究国外报道较多。H on jo等[10]报道,印度对虾存在7种相对分子量为36kD的胰蛋白酶。Lu等[11]研究了斑节对虾两种胰蛋白酶,相对分子量分别为27和29kD; Jiang等[12]检测出3种相对分子量分别为18.5、23 3和50.1kD的斑节对虾胰蛋白酶;Johnston等[13]从东方扁虾中分离出分子量为35kD的胰蛋白酶; Le m os等[14]报道了圣保罗对虾体内4种相对分子量分别为14.6、16.2、17.5和19.5kD的胰蛋白酶; Sa i n z等[15]从南美白对虾中分离出A、B、C3种胰蛋白酶,分子量分别为32.9、32.9和30.2kD。

多位学者报道了关于南极大磷虾胰蛋白酶的研究。O snes和M ohr等[1]从南极大磷虾提取到相对分子量在32-33kD范围内的3种胰蛋白酶。An heller等[6]从南极大磷虾的提取物得到3种丝氨酸胰蛋白酶(TL I、II、III),相对分子量为24-33kD。Bustos等[2]提取到的胰蛋白酶来自南极磷虾加工废水,相对分子量为32-33kD左右。Sala m anca等[16]从南极大磷虾蛋白酶中分离出一种相对分子量为30kD的胰蛋白酶。S j dah等[17]经过精确研究得到南极大磷虾胰蛋白酶的相对分子量:TL I25 02kD, TL II25 07kD,TL III25 06kD。

2.2 胰蛋白酶等电点的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电聚焦的技术手段,Sa i n z 等[15]对南美白对虾3种胰蛋白酶的等电点进行研究表明,3种胰蛋白酶A、B、C的pI分别为3.5、3和4.5;斑节对虾两种胰蛋白酶等电点分别为2.1、2 4[11];Sa la m anca等[16]从南极大磷虾蛋白酶中分离出的胰蛋白酶pI为4.1。

总结研究结果,虾类胰蛋白酶的pI为2-6,这与哺乳动物相比有很大的差异,哺乳动物的胰蛋白酶的等电点一般为8.0-9.0,属于酸性蛋白酶。而与鱼类胰蛋白酶的等电点4.5-6.0范围相比,虾类范围较宽,但都属于碱性蛋白酶。

2.3 胰蛋白酶最适p H研究

一般来说,胰蛋白酶的反应最适宜p H值在7.0 -9.0之间[18]。研究报道来自哺乳动物牛、羊、猪的胰蛋白酶最适p H值7.8-8.5左右。p H值2-3是稳定的,pH值5以上易自溶失活。pH>9.0不可逆失活。这表明,哺乳动物体内的胰蛋白酶可在较低pH的酸性条件下保持酶性质稳定。相比较,海洋动物鱼类胰蛋白酶适宜p H值一般在7.0-9.0,处在碱性条件下稳定,酸性条件下酶活很低[19]。

甲壳动物蛋白酶的最适p H范围较脊椎动物大,一般pH5.5-9.0[20]。潘滨等[21]报道凡纳滨对虾蛋白酶的最适pH为7.0,与中华管鞭虾(p H 7.5)、斑节对虾(pH7.0-8.0)和加州对虾同属中性蛋白酶。Sai n z等[15]对南美白对虾胰蛋白酶研究发现,在p H6.0-11.0胰蛋白酶能保持80%的活性。日本新糠虾蛋白酶粗酶及胰蛋白酶样酶的适宜p H 值为6.0(7.0)-11.0,最适为8.0[22],Bustos等[2]报道经纯化的南极大磷虾胰蛋白酶反应的适宜p H 值为6.0-11.0,最适为8.0左右。

近年来研究者对虾类消化腺主要蛋白酶适宜反应pH有新发现,且结果需要更深入的研究才能解释。Teschke等[23]对两种褐虾(Crangon crangon& C rangon all m ani)中肠腺胰蛋白酶研究结果表明,其最高反应活性发生在酸性p H条件下,其中Crangon

生物技术通报B iotechnology Bulletin2011年第2期

crangon总蛋白酶活性在p H5-7之间活性很高,且最适p H在5.5-6。Navarrete delToro等[24]报道了欧洲龙虾(钩虾)的胰蛋白酶活性即使在酸性p H条件下也可保持很高的活性,且其活性可被胰蛋白酶抑制剂完全抑制。

2.4 胰蛋白酶最适温度的研究

Jiang等[12]以酪蛋白为底物得到了两种斑节对虾胰蛋白酶的反应最适温度分别为65、55。

D ittrich[25]以B ApNA为底物研究了一系列甲壳动物的胰蛋白酶反应最适温度,其中南极大磷虾为53。Sa i n z[15]报道了南美白对虾3种胰蛋白酶A、B、C可在温度40-70范围内保持高于80%的酶活性,最适温度是55。凡纳滨对虾蛋白酶的最适温度为60,高于日本对虾(40)、中国明对虾(47)和中华管鞭虾(55)[4]。Sala m anca等[16]从南极大磷虾蛋白酶中分离出一种胰蛋白酶,该酶在20具有很高的酶活性。吴志强[22]的研究表明,日本新糠虾蛋白酶粗酶及胰蛋白酶的适宜温度均为25-50,最适反应温度为37。

据研究报道,鱼类胰蛋白酶的最适反应温度在30-60范围内,这与消化酶适宜的温度范围相一致。由于虾类生存环境及种属特性,酶反应的最适温度同样存在差异,但总结研究者的研究可以得到虾类胰蛋白酶最适反应温度主要范围为40-70。

2.5 胰蛋白酶动力学研究

一般常采用酶动力学参数为K m和K cat,K m表示酶和底物之间的亲和能力,K m值越小,酶与底物的亲和力越大,反之亦然;K cat被称为催化常数,又叫做转换数(TN值),它的单位为S 1,K cat值越大,表示酶的催化速率越高。

Sainz[15]研究了南美白对虾胰蛋白酶的动力学参数K m、K cat、K cat/K m值,并与南极大磷虾、斑节对虾、印度对虾、鲤鱼、鳀鱼、格陵兰鳕鱼及哺乳动物参数的作了比较。

由表1可推出胰蛋白酶不同物种间Km和K cat 不同,同一物种间也同样存在差异。Sai n z等[15]研究表明,南美白对虾胰蛋白酶A、B、C中,酶C对底物BapNA的亲和力较强,且催化效率高。表1中鯷鱼的K cat值远大于其他几组,说明酶的催化速率较高。与哺乳动物相比,鱼、虾胰蛋白酶Km较低,表明鱼虾胰蛋白酶与底物BapNA亲和力较强。

2.6 抑制剂影响胰蛋白酶活力的研究

胰蛋白酶抑制剂是一种能够降低胰蛋白酶活性的小分子物质,可分为3类:蛋白抑制剂、竞争性抑制剂和活性中心滴定剂。在虾类胰蛋白酶酶学性质的研究中用的较多的抑制剂有P MSF、TLC K、TPC K和

表1 胰蛋白酶样酶的动力学参数比较(以BApNA为底物)

胰蛋白酶K m(mm ol/L)K

ca t

(S 1)K c at/K m(mm ol/L 1S 1)参考文献南美白对虾胰蛋白酶A0.0003040.4331424[15] 南美白对虾胰蛋白酶B0.003420.371081.8[15] 南美白对虾胰蛋白酶C0.0002720.5832142.3[15] 东方扁虾0.0930.919.7[13] 印度对虾0.249!![10] 斑节对虾! !20.4[11] 南极大磷虾酶?0.040.7418.5[1] 南极大磷虾酶#0.040.4511.3[1] 鲤鱼0.0393.1079.5[26] 鯷鱼0.66324.84[27] 格林兰鳕鱼 1.25!![28] 哺乳动物胰蛋白酶 1.22.72.3[29] 44

2011年第2期

王萍等:虾类胰蛋白酶的研究进展

EDTA 等。Teschke 和Sabo r ow sk i [23]

研究报道E64(半胱氨酸蛋白酶抑制剂)对两种褐虾(C rangon crangon 和Crangon all m ani )的抑制效果均高于70%,而AEBSF(丝氨酸蛋白酶抑制剂)的抑制效果低于10%,说明这两种虾中半胱氨酸蛋白酶是主要的蛋白消化酶,这与之前的研究结果有很大不同。Johnston 等

[13]

研究得到P M SF 、TLCK 和SB T I 抑制

剂对东方扁虾的胰蛋白酶反应活性抑制效果分别高

达97%、90%和92%。Bustos 等[2]

报道,纯化后的南极大磷虾胰蛋白酶活性受P M SF 、TLC K 、Benza m i di n e 和p Am i n obenza m i d i n e 的抑制,TPCK 对其活性无影响,证明是一种丝氨酸蛋白酶。Sa i n z 等[15]

研究表明,TLC K,P M SF 和SBT I 对南美白对虾多种胰蛋白酶活性均有抑制。Om ond i 等

[30]

研究了多种抑

制剂对印度对虾消化腺胰蛋白酶活性的影响,结果表明,AEBSF 、BBSTC I 和OTI 对其酶活性有强烈抑制作用,TLCK 、SBTI 、P M SF 对其活性也有抑制作用。

2.7 胰蛋白酶氨基酸组成及基因研究

丝氨酸蛋白酶家族包括多种功能及多种形式的酶类,如胰腺蛋白消化酶:胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶;凝血系统中的肝脏蛋白酶:凝血酶、Xa 因子蛋白酶和I Xa 因子蛋白酶。在Z w illi n g [31]

的报道中就分析了无脊椎动物鳌虾胰蛋白酶的氨基酸序列及与其他丝氨酸蛋白酶的同源性。报道对鳌虾胰蛋白酶与牛胰蛋白酶、肺鱼胰蛋白酶B 、角鲨胰蛋白酶、灰色链霉菌胰蛋白酶、牛胰凝乳蛋白酶、牛弹性蛋白酶、猪凝血酶和牛X a 因子蛋白酶的氨基酸序列进行比较(表2)。鳌虾胰蛋白酶氨基酸序列中含6个半胱氨酸残基,而脊椎动物中含12个。从表2中的氨基酸序列可以看到无脊椎动物中胰蛋白酶N 端开始的氨基酸序列均为I V GG ,此序列是胰蛋白酶的保守序列,因胰蛋白酶原被激活为胰蛋白酶时发生限制性水解形成的,Z w illi n g 的研究对于后来研究者探究丝氨酸蛋白酶的进化具有重要意义。

表2 鳌虾胰蛋白酶与其他丝氨酸蛋白酶N 端氨基酸序列的比较(数据来源于Zw illi ng [31]

)

注:?中为鳌虾胰蛋白酶与其他丝氨酸蛋白酶N 端氨基酸序列相同位置同种氨基酸

在许多动物中已发现编码胰蛋白酶的多基因家族,如鼠(至少10个基因)、鸡(9个基因),双翅目中也有发现。据研究,哺乳动物胰蛋白酶和类胰蛋白酶不仅存在于胰腺中,还在其他组织中有发现

[28]

。同样甲壳类动物虾类胰蛋白酶基因也存在

多个基因家族与多态性。K lei n 等[7,32]

对南美白对

虾消化腺c DNA 文库进行筛选,并对南美白对虾胰蛋白酶多基因家族的基因组结构及其多态性进行研究,认为南美白对虾共有编号分别为30、39、40、21、42和T ry pv III 等6种胰蛋白酶,这6种蛋白分属3

个基因家族,有两个基因在肝胰腺(中肠腺)中表

达。3个基因家族之间,内含子存在高度多态性(一致度为54%-59%),而每个家族内部对应的内含子比较保守(突变率只有3%-6%)。在获得的编码5种胰蛋白酶的5个c DNA 克隆中,最长的一条c DNA 编码一段长255个氨基酸残基的前酶原。比较蛋白质序列结果表明,南美白对虾胰蛋白酶与螯虾胰蛋白酶有高达74%的一致性,而与哺乳动物和昆虫的一致性均大约为40%。

生物技术通报B iotechnology Bulletin2011年第2期

3 在食品工业中的应用研究

蛋白酶在食品工业中应用较广泛。用于谷物、焙烤食品中可提高蛋白干燥速率,提高产品的可操作性,缩短面团混合时间,提高面包品质,增加面包体积;可提高蛋及蛋制品干燥制品的质量;在肉类处理中,可起到嫩化作用,水解血蛋白,复原骨蛋白;在鱼肉加工中,蛋白酶可水解鱼肉,降低黏度,有助于去除鱼皮,用于鱼子加工;用于豆类加工制造中,如酱油,豆腐,有利于蛋白水解,去除豆浆中的豆腥味;可加速乳酪凝乳的形成,奶酪的老化,加工凝乳布丁;用于酿造领域,有利于发酵,抗冷冻净化,减少泡沫,作为助滤剂,促进苹果乳酸的发酵;蛋白酶还可用于巧克力的发酵生产中。

目前,研究者对虾类中胰蛋白酶的研究重点主要集中在利用酶活指示虾类在养殖过程中的生长、营养状况,为优化人工饵料问题提供依据。而胰蛋白酶作为虾类主要的内源蛋白酶之一,被应用在虾头等下脚料处理中的研究不多。

由于虾头内含有丰富的内源蛋白酶,虾死后发生组织自溶。黄彦云等[34]对南美白对虾死后组织自溶规律进行研究,结果表明,南美白对虾死后1h 后肝胰腺首先发生自溶,且在2、3、4h后发生自溶程度远大于其他组织。国内研究者利用虾头可发生自溶的特性对虾头酶解进行了研究,朱志伟等[35]在初步探究近缘新对虾虾头内源蛋白酶性质基础上,分析和比较利用内源蛋白酶对虾头的酶解工艺。结果显示,当固液比1%2,酶解温度60,p H值7.06,酶解时间4h,酶解产物中游离氨基酸含量较高;固液比1%2,酶解温度50,p H值8.2,酶解时间4h,酶解产物中TC A可溶性蛋白(短肽)含量较高。随后,朱志伟等[36]又将内源蛋白酶与多种外源酶复合对虾头酶解,得到如下结论:利用虾头内源蛋白酶可以对虾头进行有效酶解;复合酶使用后,能较大程度地提高酶解产物中游离氨基酸的含量;复合酶解难以明显地提高酶解产物中TCA可溶性蛋白(短肽)的含量。

总结研究报道可说明,虾头内源蛋白酶可有效地酶解虾头,这不仅可为虾头的资源化利用提供更经济、快速的途径,还可带动水产养殖经济的发展。但是国内对这方面研究还处在初级阶段,迫切需要更深入的研究和实践。

4 虾类胰蛋白酶的研究展望

我国对虾出口以冷冻虾仁为主,占虾体重量1/3的虾头、壳在虾仁生产过程中被剔除,估计我国大陆每年剔除的虾头约1.5-2.0万,t其中大部分被用于生产饲料。虾头中含有丰富的蛋白质、甲壳质和碳酸钙等,近年来,国内研究者对虾头的资源化利用得到快速发展,大大提高了虾头的利用价值。同时,因虾头中存在丰富多样的内源酶,研究者多采用内源酶蛋白酶酶解技术对虾头进行酶解作用。胰蛋白酶是虾头主要的内源酶之一,一方面大量虾头资源为其提取提供了丰富原料;另一方面,待其大量提取纯化后,不仅可用于其他水产废弃物的处理,而且可广泛用于医药、食品等领域。

胰蛋白酶作为应用广泛的蛋白酶之一,研究其纯化及特性有助于了解胰蛋白酶结构与功能的关系,也有助于较高活性胰蛋白酶的提取利用,同时可以提高水产品废弃物资源化利用程度。目前国内对虾类胰蛋白酶的基础性研究与国际水平还有距离,虾废弃物利用程度未到达最大化。因此,对虾类胰蛋白酶需要进行更深入更全面的研究:(1)基因组学方面,对虾头蛋白酶基因克隆,并进行外源表达,以筛选新的酶系,提高虾头废弃物中酶的利用率。

(2)蛋白质组学方面,全面分析虾头蛋白酶的独特性质和可利用价值,在此基础上,对虾头蛋白酶进行蛋白质组学研究。利用蛋白质工程最新技术对虾头蛋白酶进行分子改造,以提高虾头蛋白酶利用价值和虾产业的附加值。(3)虾头的生物加工方面,分析虾头蛋白中氨基酸比例及其营养价值,控制生化物理条件利用虾头内源酶和外源酶制剂,对虾头废弃物的营养成分进行改良,以最大限度的应用于食品、饲料及其他工业中去,拓展虾加工业的产业链,提高虾加工的下游附加值,提升产品品质。

参考文献

[1]Osnes KK,M oh rV.On the pu rificati on and characterizati on of three

an i on ic seri ne typ e pepti de hydro l ys es fro m An tarcti c kril,l Euphau sia Superba.C o m parati ve B i oche m i stry and Physiol ogy B,1985,82

(4):607 619.

[2]Bu st os RO,Romo CR,H ealy MG.Purifi cati on of tryp si n li ke en

z ym es fro m An t arcti c krill processi ng w aste w ater.Process B ioche m

2011年第2期王萍等:虾类胰蛋白酶的研究进展

istry,1999,35(3 4):327 333.

[3]杨栋.太平洋磷虾蛋白酶的生物化学和组织化学研究[D].青

岛:中国海洋大学,2003.

[4]潘鲁青,王克行.中国对虾幼体消化酶活力的实验研究.水产学

报,1997,21(1):26 31.

[5]鲍蕾.p H、盐度和饵料磷对日本沼虾生长的影响[D].保定:河

北大学,2000.

[6]Anheller J E,H ell gren Lars G I,Karl s t a m KB,et a.l B i oc h e m ical

and b i ological p rofile of a new b i ological en z ym e p reparati on f ro m An tarcti c k ill(E.superba)s u itab l e for d ebri de m en t of u lcerati ve l e s i on s.A rch Der m atol Res,1989,281(2):105 110.

[7]K lei n B,LeM ou ll ac G,S ell os D,et a.l M ol ecu l ar cl on i ng and s e

quencei ng of trypsi n c DNAs from P e na e u s v annam ei(Cru stacea,De

c apoda):use i n assess i ng gene exp ressi on duri ng the m ou lt cycl e.

Th e In t ernational Journal of B i oche m i stry&Cell B i ology,1996,28

(5):551 563.

[8]T itan iK,S asaga w a T,W oodbu ry RG,et a.l Am i no aci d s equ ence

of crayfis h(A stac u s fluv ua tilis)tryp si n.B i oc h e m istry,1983,22

(6):1459 1465.

[9]胡重江.草鱼胰蛋白酶的纯化及部分性质研究[D].重庆:西南

农业大学,2005.

[10]H on j o I,K i m u ra S,Non akaM.Pu ri fi cati on and characterizati on of

tryps i n li ke enz ym e fro m shri m p P ena e u s ind ic u s.N i ppon Su is an Gakk ai sh,i1990,56(10):1627 1634.

[11]Lu PJ,L i u HC,T sai I H.Th em i dgu t tryps i ns of s h ri m p(P enae u s

m onod on):h i gh effici ency to w ard native protei n s ub strates i n clu

d i ng coll agens.B i ological Ch

e m i stry H oppe Sey l er,1990,371(2):

851 859.

[12]J i ang ST,M oodyMW,Chen H C.Purificati on and characterizati on

of protease fro m d i gesti ve tract of grass s h ri m p(P ena e u s m on o d on).Food Science,1992,56(2):322 326.

[13]Johns t on D,H er m ans J M,Yello w lees D.Isolati on and characteri z

ati on of atryp si n from the s li pper l obster,Th e nus orien t ali s(Lund).

A rch

B i och e m,1995,324(1):35 40.

[14]L e m os D,R odr guez A.Nu tri ti on al eff ects on body co m pos i ti on,

en ergy conten t and tryps i n acti v i ty of P e na e u s japon ic u s du ri ng earl y postlarval devel op m en t.A quacu lt u re,1998,160(1 2):103 116. [15]Sai n z J C,Garc a C arre o FL,H ern nd ez Cort s P.Penaeus van

nam ei i sotryp si ns:purifi cati on and characterizati on.Co m parative

B i oche m istry and Phys i ology Part B:B i oc h e m istry and M olecu lar

B i ology,2004,138(2):155 162.

[16]Sala manca MH,Barria C,A sen j o J A,et a.l Isol ati on,pu ri fi cati on

and p reli m i nary charact eriz ati on of cryoph ili c p roteases of m ari ne ori gin.B i o separati on,2001,10(4):237 241.

[17]S j dah J,Emm er ,V i n cent J,et a.l Characteri zati on of protei na

ses fro m Antarctic krill(E uphausi a superba).Protei n Exp res s i on and Pu ri fi cati on,2002,26(1):153 161.[18]Eggerer J.H ysteretic behav i or of citrat e syn t hase:s i te d irected

li m ited proteol ysis.European J ou rnal of B i oc h e m istry,1984,143

(1):205 212.

[19]张美红,胡重江,李英文.国内外关于鱼类胰蛋白酶的研究进

展.饲料工业,2006,27(2):20 22.

[20]Fernandez G i m enez AV,G arc a C arre o FL,Navarrete del Toro

M A,et a.l D i gesti ve p rotei nas es of red s h ri m p P leoti cus m uelleri( Decapoda,P e naeoi dea):parti al c h aracteriz ati on and rel ati on s h i p w it h m olti ng.C o m parati ve B ioch e m istry and Phys i ology,2001,130

(3):331 338.

[21]潘滨,谢月霞,戴君勇.凡纳滨对虾蛋白酶的分离纯化及生化特

性.水产科学,2009,28(12):763 766.

[22]吴志强.日本新糠虾消化系统组织学及胰蛋白酶样酶理化性质

初步研究[D].青岛:中国海洋大学,2004.

[23]Teschke M,Saborow s k iR.C ystei ne protei nases substitute f or s er

i n e protei nases i n the m i dgu t glands of Crang on crangon and

C rangon a ll mani(Decapoda:Cari d ea).Jou rnal of Experi m en tal

M arine B iol ogy and Eco l ogy,2005,316(2):213 229.

[24]Navarrete del Toro M de L,Garc a C arre n o F,L!p ez M O,et a.l

Asparti c protei n ases in the d i gesti ve tract ofm ari n e decapod crusta ceans.J ou rnal of Experi m ental Zoology PartA:E col og i calG enet ics and Physi o l ogy,2006,305A(8):645 654.

[25]D i ttri ch BU.L i fe under extre m e cond i ti on:aspect of evol u ti onary

adap t ati on to te m perat ure i n crustacean proteases.Po l ar B i ology,

1992,12(2):269 274.

[26]CaoM J,Osato m iK,Suz uk iM,et a.l Purification and ch aract er

izati on of t w o an i on ic tryps i ns fro m t h e hepatopan creas of carp.

F i sheri es Science,2000,66(6):1172 1179.

[27]M art n ez A,O lsen RL,Serra J L.Purification and charact eriz ati on of

t w o tryps i n li ke en z y m es fro m the d i gesti ve tract of anchovy E n

g rau lis e ncrasi chol u s.Co m parative B ioche m istry and Physi ology

Part B:Comparati ve B i oche m i stry,1988,91(4):677 684.

[28]S i m pson BK,H aard NF.Purifi cati on and characterizati on of tryp

si n fro m the Green l and cod,(G adu s o g ac).1.K i netic and t h er m o dyna m i c characteri zation.B ioch e m istry and C ell B i ology,1984,62

(9):894 900.

[29]Lottenb erg R,H all J A,B li nder M,et a.l The action of thro m b i n

on pepti de p n itroan ili de s ub strates:sub strate sel ecti vity and exa m i n ati on of hydrolysis und er d iff eren t reacti on cond i ti on s.B ioch i m ica et B i ophysica A cta(BBA) Protei n S truct u re and M olecu l ar Enzy m ology,1983,742(3):539 557.

[30]Om ond i J G.D i gestive endo p roteases fro m the m idgut g l ands of the

i ndian w h ite s hri m p,P ena e u s Ind ic u s(Decapod a:Pen aei dae)fro m

Kenya.W estern Ind i an Ocean Jou rnal ofM ari n e Science,2005,4

(1):109 121.

(下转第97页)

2011年第2期陈鹏等:红麻不育系和保持系中cob基因的克隆与分析

参考文献

[1]李德芳.红/黄麻新用途综合开发与国际合作.中国麻业科学,

2007(增刊):411 414.

[2]T ouzet P,Budar F.Unveili ng t he mo l ecular ar m s race bet w een t w o

conflicti ng geno m es i n cyt oplas m i c m al e st erility?.T rends i n P l an t Science,2004,9(12):568 570.

[3]Ugal e SP,Khuspe SS.Cytop l as m ic genetic m al e sterili ty i n H ibisc u s

c annabi nu s L.J M A U I,1976,2(6):102 106.

[4]周瑞阳.红麻雄性不育株的发现.中国农业科学,2002,35(2):212.

[5]周瑞阳,张新,张加强,等.红麻细胞质雄性不育系的选育及杂种

优势利用取得突破.中国农业科学,2008,41(1):314.

[6]Schnab le PS,W i se RP.The mo l ecular bas i s of cytop l as m i c m al e st e

rili ty and fertili ty res t orati on.Trend s i n P l an t S ci en ce,1998,3(5): 175 180.

[7]C hase CD.Cytop l as m i c m al e sterility:aw i ndow t o t h ew orl d of p l an t

m i tochondrial nu cl ear i n teractions.T rends Gen et,2007,23(2):

81 90.

[8]W ang J,CaoM J,Pan GT,et a.l RNA editi ng ofm i tochondrial f unc ti onal gen es at p6and co x2i n m aiz e.M i tochondri on,2009,9(5): 364 369.

[9]Zhu Y,T Sarai ke Y,Y a m a m oto Y,et a.l orf260c r a,a n ovelm it ochon

d ri al gene,i s associat ed w it h t h

e hom eotic transfor m ati on o

f sta m ens

i nto p i stil li ke struct u res(p i stillody)i n a ll op las m ic wh eat.P l an t C ell

Physi o,l2008,49(11):1723 1733.

[10]G all agher LJ,Betz SK,Chas e CD.M itochondri al RNA ed iti ng trun

cat es a c h i m eric open reading fra m e ass oci ated w ith S ma l e s t erility

i n m aiz e.Cu rr G enet,2002,42(3):179 184.

[11]LeeYP,K i m S,L i m H,et a.l Iden ti fi cati on ofm itochond ri al geno m e

rearrange m ents un i que to novel cyt op l as m i cm ale sterili ty i n rad is h.

Theor Appl Genet,2009,118(4):719 728.

[12]W ang Z,Zou Y,L iX,et a.l Cyt op l as m i c m ale sterilit y of rice w i th

Boro II cytop las m is cau s ed by a cytot oxic pep ti d e and is restored by t wo relat ed PPR motif genes vi a d istinct m odes of mRNA s il en ci ng.Plan tC el,l2006,18(3):676 687.

(责任编辑马鑫)

(上接第47页)

[31]Z w illi ng R,Neu rat h H,E ricsoon LH,et a.l The a m i no ter m i nal

sequen ce of an i nvertebrate trypsi n(cray fis h Ast a c u s le p to d act y l u s):ho m ol ogy w it h other seri ne p roteas es.Febs Letters,1975,62

(2):247 249.

[32]K lei n B,Sell os D,Van W or m houd tA.G eno m i c organ i sati on and

pol y m orph i s m of a C ru st acean tryp si n mu lti gene f a m il y.Gene,

1998,216(1):123 129.

[33]刘勇,宋光泉,阎杰.虾废弃物中蛋白质的资源化利用.安徽农

业科学,2010,38(2):912 915.[34]黄彦云,孔小明,王福广,等.南美白对虾死后组织自溶规律的

研究.动物医学进展,2005,26(3):86 89.

[35]朱志伟,曾庆孝,林奕封.虾头的内源蛋白酶酶解研究.食品科

学,2003,24(10):29 32.

[36]朱志伟,曾庆孝,林奕封,等.虾头的内源蛋白酶酶解及复合酶

解研究.武汉工业学院学报,2003,22(2):4 7.

(责任编辑马鑫)

胰蛋白酶活性测定

实验一胰蛋白酶活性测定实验目的：掌握测定胰蛋白酶浓度、活性、比活的原理与方法。实验原理：胰蛋白酶相对分子量23.7 KD，主要水解肽链中碱性氨基酸与其它氨基酸相连接的肽键，此外还能水解碱性氨基酸形成的酯键，如把人工合成的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（N-benzuyl-L-argine ethyl ester, BAEE）水解为H-苯甲酰-L-精氨酸（BA）。胰蛋白酶所催化的上述反应中，产物BA对253 nm 的光吸收远大于BAEE，因此可以在实验起始点把253 nm 的消光值调为零，然后记录反应体系对253 nm 的消光值的增量，并把这个增量作为测定胰蛋白酶的活性指标。酶活单位定义：在底物BAEE浓度1m mol/L，光程1 cm，波长253nm，温度25 0C，测量体积3mL,.条件下吸光值每分钟递增0.001（A/min=0.001）为1个BAEE酶活单位。胰蛋白酶制剂中蛋白质浓度含义：胰蛋白酶含量一般E1%表达。这个值的含义是：浓度为1% 酶蛋白，在1cm光径下，对紫外280nm 的消光值。不同厂家、不同产品的E1%值有很大差别。E1% 值越高，表明酶制剂中酶蛋白含量越高。由于酶制剂中蛋白质含量各不相同，所以用酶制剂配制E1%的蛋白质溶液时，按照厂家对产品的E1% 的测定值配制溶液。在本实验中，胰蛋白酶酶蛋白样品采用SIGMA 公司生产的产品,生产公司对展品的描述是对280nm紫外吸收值15.3，配制胰蛋白酶标准溶液可根据厂家的这个说明。器材以试剂：器材，电子天平，紫外分光光度计，微量加样器。试剂：标准胰蛋白酶，N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯，HCI, Tris。 1．胰蛋白酶活性测定： 1）配制E1%的胰蛋白酶溶液

食品营养学研究进展

食品营养学研究进展题目：膳食纤维的生理功能及其在食品开发中的应用日期：2016年12月30号

摘要膳食纤维特殊的理化性质和生理功能使它在生理代谢过程和预防疾病等方面扮演重要的角色。要保障人体健康，需要适量摄入膳食纤维。本文综述了膳食纤维的定义，膳食纤维的分类及其生理功能，并且简单介绍了目前国内外膳食纤维的提取方法以及膳食纤维在食品开发中的应用。 Abstract The special physical and chemical properties and physiological functions of dietary fiber make it play an important role in the process of physiological metabolism and disease prevention. To protect the health of the human body, the need for adequate intake of dietary fiber. In this paper, the definition of dietary fiber, the classification and physiological function of dietary fiber were reviewed, and the extraction methods of dietary fiber and the application of dietary fiber in food development were introduced. 关键字：膳食纤维生理功能应用前景随着人们生活水平的提高，对食品的要求越来越精细，所摄入的食物中，粗纤维的含量越来越少，现代“文明病”诸如便秘、肥胖症、动脉硬化、心脑血管疾病、糖尿病等，严重地威胁着现代人的身体健康，在人们的食物中补充膳食纤维已成为当务之急。膳食纤维被公认为是蛋白质、碳水化合物、脂肪、维生素、矿物质和水之后的第七大营养素。因此膳食纤维是健康饮食不可缺少的。此外，膳食纤维作为一种极其重要的食品成分，也已经成为功能性食品领域研究的热门课题。一，膳食纤维的定义及分类 1.1膳食纤维的定义膳食纤维是一般不易被消化的食物营养素，含纤维素、木质素、半纤维素、树脂、果胶等。国际食品法典委员会(CAC)将膳食纤维具有的特征归纳为:降低通过时间和增加粪便量;促进结肠发酵作用;降低血总胆固醇或LDL胆固醇水平，降低餐后血糖或胰岛素水平。当前关于膳食纤维的定义相对权威的一个概念是美国谷物化学学会(AACC)成立的膳食纤维专门委员会提出的[1]，他们从生理学角度出发，将其定义为在小肠中不能被消化吸收，而在大肠中可部分或全部发酵的可食的植物成分、碳水化合物和类似物质的总和，包括多糖、寡糖、纤维素、半纤维素、果胶、树胶、蜡质、木质素等，此定义明确规定了膳食纤维的范畴，是可食的植物成分，而非动物成分。

我国居民膳食结构现状

我国居民钙摄入现状膳食结构是指膳食中各类食物的数量及其在膳食中所占的比重，由于影响膳食结构的这些因素是在逐渐变化的，所以膳食结构不是一成不变的，通过适当的干预可以促使其向更利于健康的方向发展。当今世界大致有四种膳食结构模式：一是发达国家模式。也称富裕型模式，主要以动物性食物为主，通常年动物性食品年人均消达270kg，而粮食的直接消费量不过60-70kg。二发展中国家模式。也称温饱模式，主要以植物性食物为主，一些经济不发达国家年人均消费谷类与薯类达200kg，肉蛋鱼不过5g，奶类也不多。三是日本模式。也称营养模式，主要特点是既有以粮食为主的东方膳食传统特点，也吸取了欧美国家膳食长处，加之经济发达，人均年摄取粮食110kg,动物性食品135kg左右. 四是地中海模式。为居住在地中海地区的居民所特有。突出特点是饱和脂肪摄入量低，不饱和脂肪摄入量高。膳食含大量碳水化合物。蔬菜水果摄入量较高。心脑血管疾病发生率很低。一、我国膳食结构的现状（依据2002年全国膳食调查）（一）中国居民传统的膳食结构特点：高碳水化合物，高膳食纤维，低动物脂肪（二）、居民膳食质量明显提高。我国城乡居民能量及蛋白质摄入得到基本满足，肉、禽、蛋等动物性食物消费量明显增加，优质蛋白比例上升。城乡居民动物性食物分别由1992年的人均每日消费210克和69克上升到248克和126克。与1992年相比，农村居民膳食结构趋向合理，优质蛋白质占蛋白质总量的比例从17%增加到31%、脂肪供能比由19%增加到28%，碳水化合物供能比由70%下降到 61%。（三）、儿童青少年生长发育水平稳步提高。婴儿平均出生体重达到3309克，低出生体重率为3.6%，已达到发达国家水平。全国城乡

食品安全研究进展

乳制品的安全性摘要：本文简单介绍了国内含乳饮料的现状，以及在乳饮中添加多种添加剂的不良现象。概述了食品添加剂对人体造成的危害，通过这些说明了在乳饮中的要适当的使用食品添加剂。关键词：食品添加剂；营养快线；膳食平衡；食品安全 1国内含乳饮料的现状食品安全（food safety）指食品无毒、无害，符合应当有的营养要求，对人体健康不造成任何急性、亚急性或者慢性危害。食品安全也是一门专门探讨在食品加工、存储、销售等过程中确保食品卫生及食用安全，降低疾病隐患，防范食物中毒的一个跨学科领域。近年来，由于食品安全事件的频繁发生，我们更应该高度关注食品安全问题。本文主要从乳饮料方面介绍[1]。目前，含乳饮料已经成为饮料市场中的一个重要细分品类。2005年，娃哈哈推出“果汁+牛奶”的“营养快线”，而其他诸如“小洋人”、“旺旺”等品牌的产品紧随其后，国内的乳业巨头也纷纷投身该领域，包括蒙牛推出的“真果粒”、伊利“果立享”等等。有数据显示，2008年，娃哈哈营养快线的销售额就达到90亿元。乳业专家王丁棉指出，含乳饮料实际营养价值远低于牛奶，含乳饮料最大的特点就是含乳成分少，含乳饮料蛋白质含量多在0.7%～1.3%之间，大部分只有0.8%，另外一个特点就是含糖分较高。暨南大学一位教授也表示，含乳饮料的蛋白质含量通常只有普通牛奶的三分之一左右。此外，含乳饮料的某些风味是使用食品添加剂调出来的，而不是真的实际添加了该种物质。 “含乳饮料添加剂较多是普遍现象”，为了满足口感、风味上的要求，含乳饮料往往含有多达18种食品添加剂。华南理工大学轻工与食品学院教授陈中认为，某些含乳饮料类产品可能存在过度宣传的问题，消费者区分能力有限，很难进行辨别，消费者不应该只看广告宣传，而是在购买时注意看看产品标签说明中对碳水化合物、脂肪、蛋白质等成分的标注。朱丹蓬估计，零售价格3元/瓶的含乳饮料成本不到1元钱，更多的是营销和渠道成本。 2 “营养快线”真的营养吗？ “没吃早餐？就喝营养快线！15种营养，一步到位！”这则广告在电视、门户网

食品营养学研究进展

食品营养学研究进展文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

食品营养学研究进展题目：膳食纤维的生理功能及其在食品开发中的应用日期：2016年12月30号

摘要膳食纤维特殊的理化性质和生理功能使它在生理代谢过程和预防疾病等方面扮演重要的角色。要保障人体健康，需要适量摄入膳食纤维。本文综述了膳食纤维的定义，膳食纤维的分类及其生理功能，并且简单介绍了目前国内外膳食纤维的提取方法以及膳食纤维在食品开发中的应用。 Abstract The special physical and chemical properties and physiological functions of dietary fiber make it play an important role in the process of physiological metabolism and disease prevention. To protect the health of the human body, the need for adequate intake of dietary fiber. In this paper, the definition of dietary fiber, the classification and physiological function of dietary fiber were reviewed, and the extraction methods of dietary fiber and the application of dietary fiber in food development were introduced. 关键字：膳食纤维生理功能应用前景随着人们生活水平的提高，对食品的要求越来越精细，所摄入的食物中，的含量越来越少，现代“文明病”诸如、、、、糖尿病等，严重地威胁着现代人的身体健康，在人们的食物中补充膳食纤维已成为当务之急。膳食纤维被公认为是蛋白质、碳水化合物、脂肪、维生素、矿物质和水之后的第七大营养素。因此膳食纤维是健康饮食不可缺少的。此外，膳食纤维作为一种极其重要的食品成分，也已经成为功能性食品领域研究的热门课题。一，膳食纤维的定义及分类 1.1膳食纤维的定义膳食纤维是一般不易被消化的食物营养素，含纤维素、木质素、半纤维素、树脂、果胶等。国际食品法典委员会(CAC)将膳食纤维具有的特

营养师报考条件、时间

营养师报考条件公共营养师为营养师中之一，整个营养师职业包括“公众营养师”“食品营养师”“运动营养师”“餐饮营养师”四个种类，本职业共设三个等级，分别为助理营养师、营养师、高级营养师。四级公共营养师 (1)连续从事本职业工作1年以上。 (2)具有医学或食品专业中专毕业证书。 (3)经四级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。三级公共营养师 (1)连续从事本职业工作6年以上。 (2)取得四级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作4年以上。 (3)取得四级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作3年以上，经三级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。 (4)具有医学或食品专业大学专科及以上学历证书。 (5)具有非医学或食品专业大学专科及以上学历证书，连续从事本职业工作1年以上。 (6)具有非医学或食品专业大学专科及以上学历证书，经三级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。二级公共营养师 (1)连续从事本职业工作13年以上。 (2)取得三级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作5年以。 (3)取得三级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作4年以上，经二级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。 (4)具有医学或食品专业大学本科学历证书，取得三级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作4年以上。 (5)具有医学或食品专业大学本科学历证书，取得三级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作3年以上，经二级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。 (6)具有医学或食品专业硕士研究生及以上学历证书，连续从事本职业工作2年以上。一级公共营养师 (1)连续从事本职业工作19年以上。 (2)取得二级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作4年以上。 (3)取得二级公共营养师职业资格证书后，连续从事本职业工作3年以上，经一级公共营养师正规培训达规定标准学时数，并取得结业证书。新职业试行期间：（4）具有医学或食品专业大学本科学历证书，连续从事本职业或相关职业工作13年以上。（5）具有医学或食品专业硕士、博士研究生学历证书，连续从事本职业或相关职业工作10年以上。

重组人胰蛋白酶

重组人胰蛋白酶 Cat. No.: RHT03 CAS: 9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1. 重组生产，无动物源性重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2. 优势安全性高重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等；特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染；冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失；不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。

?纯度高 HPLC纯化；活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高比活性不低于2500 USP u/mg。 3.用途范围胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500 USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂

5.信息产品名称比活包装产地重组人胰蛋白酶≥2500 USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品重组猪胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液。

食品营养学

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 食品营养学食品营养学主讲教师:郭爱伟学时:32:gaw2008@https://www.wendangku.net/doc/9c10371041.html,西南林学院 1/ 57

绪论

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 目的要求1.了解本课程的性质、任务及学科的发展情况； 2.明确该课程与其他学科的关系。 3/ 57

食品营养？? 营养？ ? 营养学？ ? 食品营养学？ ? 为什么要学食品营养？ ? 怎样学？

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 第一节营养及营养学一.营养的概念二.营养学三.食品营养学 5/ 57

一、营养的概念1、营养(nutrition) 是有机体消化吸收食物并利用食物中的有效成分来维持生命活动、修补体组织、生长的全部过程。 2、营养素(nutrient) 一些能维持人体正常生长发育、新陈代谢所必需的营养物质，目前已知的有40一45种人体必需的营养素，且存在于各类食品种。

基因营养学的研究进展

醇排出体外的作用,因而有降低血中胆固醇和预防心血管疾病的功效。玉米油含甾醇1441mg/100g,比葵花籽油496mg/100g及大豆油436mg/100g均高,其中B2谷甾醇占60.3%,燕麦甾醇10.5%。甾醇是降血脂用药物类固醇的原料,甾醇和其他药物复配的谷甾醇片有良好的降血脂及血清胆固醇作用。日本已批准植物甾醇为调节因子的特定专用保健食品FOSH U的功能性添加剂。美国FDA发布的健康公告称∶“植物甾醇phytosterol及酯、植物甾烷醇phytostanol及酯,能通过降低血中胆固醇水平而有助于减少冠心病的危险。每天从膳食中摄入1.3g植物甾醇或3.4g植物甾烷醇能达到明显降低胆固醇的作用”。在美国各种植物甾醇巳被批准为公认安全食品。芬兰F orbes Medi2T ech公司推出的一种植物甾醇叫F orbes W ood Sterol,是从木材造纸副产品塔尔油(T all Oil)中提取,纯度达95%以上,为白色粉状结晶。据该公司介绍.每天服用122g就有降低胆固醇的作用。我国有丰富的植物甾醇资源,应能开发更多天然安全可靠调节血脂的功能性食品添加剂。以上介绍的只是国际上较普遍的几个品种。其实每个国家均有其自身的特有资源和一些特殊的功能添加剂。我国地域广阔,北寒南热,有山有海,植物的种类丰富。各地均有一些传统认为既是食用植物,又是防病抗病的健康食品,有待我们去研究其功能因子,开发具有中国特色的食用植物提取物,以极大地丰富我国的功能性添加剂的品种和市场。基因营养学的研究进展殷铭俊1,陈执中2 (1.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所,上海200337; 2.复旦大学药学院,上海200032) Progress on studies of gene nutriology YI N Ming2jun1,CHE N Zhi2zhong2 (1.Biochemical Institute,State K ey Laboratory o f Bioreactor Engineer,Huadong Univer sity o f Science and Technology,Shanghai200237;2.School o f Pharmacy,Fudan Univer sity,Shanghai,200032) 摘　要:从基因概念的发展、基因的分子生物学定义、基因多态性,基因突变与损伤,基因营养学的目的以及根据基因制定食谱并举应用实例综述基因营养学的研究进展。关键词:基因;基因突变与损伤;基因营养学 50多年前,1953年2月28日Watson和Crick发现了被称为“生命奥秘”DNA结构,4月25日在《自然》(Nature)杂志上发表了DNA双螺旋结构。DNA 结构解释了遗传物质是如何复制和传递信息的。DNA这种优雅神秘的双螺旋结构,引发的革命震动了生物学界和医学界。1962年Watson和Crick共同获得了诺贝尔医学奖。 1990年启动了人类基因组计划(human genome project,HGP),在Watson和Crick发表双螺旋结构50周年早11天即2003年4月14日美国人类基因组研究项目首席科学家Collins隆重宣布人类基因组序列图绘制成功[1]。在这前半年,2002年10月底另一项新的科学规划———国际人类基因组单倍型图谱计划(haplotypes map project,HapMap计划)正式开始实施。人类基因组单倍型图谱被称为致病基因图谱[2]。 HGP的突破性进展和全面完成以及致病基因图谱计划的实施,促进了基因与疾病、基因的个体化治疗的研究,同时促进了健康新领域———基因营养学的发展。 1　基因

胰蛋白酶的制备

一、猪胰蛋白酶制备（一）猪胰蛋白酶原的提取 ?猪胰脏1.0Kg（新鲜的或杀后立即冷藏的），除去脂肪和结缔组织后，绞碎。 ?加入2倍体积预冷的乙酸酸化水（pH2.5）于10～15℃搅拌提取24小时，四层纱布过滤得乳白色滤液，用2.5M H2SO4调pH至2.5～3.0，放置3～4小时后用折迭滤纸过滤得黄色透明滤液（约1.5升）。 ?加入固体硫酸铵（予先研细），使溶液达0.75饱和度（每升滤液加492克）放置过夜后抽滤（挤压干），得猪胰蛋白酶原粗制品。（二）胰蛋白酶原激活 ?向胰蛋白酶原粗制品滤饼分次加入10倍体积（按饼重计）冷的蒸馏水，使滤饼溶解，得胰蛋白酶原溶液。将研细的固体无水氯化钙慢慢加入酶原溶液中（滤饼中硫酸铵的含量按饼重的四分之一计），使Ca2+与SO42-结合后，边加边搅拌均匀，边加边搅拌，使溶液中最终仍含有0.1M CaCl2。 2．用5M NaOH调pH至8.0，加入极少量猪胰蛋白酶（约2-5mg）轻轻搅拌，于室温下活化8～10小时，（2～3小时取样一次，并用0.001M HCl稀释），测定酶活性增加的情况。 3．活化完成（比活约3500～4000BAEE单位）后，用2.5M H2SO4调pH至2.5～3.0，抽滤除去CaSO4沉淀。（三）胰蛋白酶的分离

1．将已激活的胰蛋白酶溶液按242克/升加入细粉状固体硫酸铵，使溶液达到0.4饱和度，放置数小时后，抽滤，弃去滤饼。 2．滤液按250克/升加入研细的硫酸铵，使溶液饱度达到0.75，放置数小时，抽滤，弃去滤液。（四）胰蛋白酶的结晶 1．将上述胰蛋白酶滤饼（粗胰蛋白酶）溶解后进行结晶：按每克滤饼溶于1.0ml pH9.0 的0.4M硼酸缓冲液的量计加入缓冲液，小心搅拌溶解。 2．用2M NaOH调pH至8.0，注意要小心调节，偏酸不易结晶，偏碱易失活，存放于冰箱。3．放置数小时后，应出现大量絮状物，溶液逐渐变稠呈胶态，再加入总体积的1/4～1 /5的pH8.0的0.2M硼酸缓冲液，使胶态分散，必要时加入少许胰蛋白酶晶体。 4．放置2～5天可得到大量胰蛋白酶结晶，待结晶析出完全时，抽滤，母液回收。（五）胰蛋白酶的重结晶将第一次结晶的胰蛋白酶产物进行重结晶：用约1倍的0.025M HCl，使上述结晶分散，加入约1.0～1.5倍体积的pH9.0 的0.8M硼酸缓冲液，至结晶酶全部溶解，取样后，用2M NaOH调溶液pH至8.0（准确）（体积过大，很难结晶），冰箱放置1～2天，可将大量结晶抽滤得第二次结晶产物(母液回收)，冰冻干燥后得重结晶的猪胰蛋白酶。二、胰蛋白酶活性的测定以苯甲酰L—精氨酸乙酯（英文缩写为BAEE）为底物，用紫外吸收法进行测定。苯甲酰L —精氨酸乙酯在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸（英文缩写为BA）。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。

食品营养学文献综述模板

文献综述维生素E的抗辐射作用研究进展生命科学与工程学院 2011级生物技术专业本科班王宁指导教师李志亮副教授太阳辐射是指到达地球表面的连续电磁辐射[1]，包括部分紫外线和可见光，99%以上的有害紫外线被地球周围位于平流层中[2]的臭氧层吸收掉，从而使我们的地球生机盎然, 充满活力[3]。紫外线的波长在200—400 nm范围内，分为长波紫外线UVA、中波紫外线UVB和短波紫外线UVC三个波段[4]。不同波段紫外线辐射所引起的生物学效应及皮肤疾病不同，其中UVB主要引起皮肤红斑、免疫抑制及皮肤癌，UVA则引起皮肤晒黑、皮肤光敏反应及皮肤光老化[5]。因此,进一步掌握光致皮肤损伤机制及正确的紫外线防护措施,对相关疾病的治疗及预防有着重要的临床指导意义。 1 紫外线辐射的损伤机制及其研究意义 1.1紫外线辐射的损伤机制紫外线辐射可造成机体表皮细胞DNA损伤，亦可诱发表皮细胞酶活性进行损害DNA 的修复系统的启动[6]。紫外线辐射还可以诱发活性氧自由基[7]，自由基作用于细胞膜、核酸、蛋白质和酶类，会导致不可逆的损伤[8]，与衰老、心脑血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生有关。 1.2 紫外线辐射损伤的研究意义近年来，对辐射引起自由基损伤机制的研究越来越广泛和深入[9]，同时，辐射损伤的保护一直是研究者所面临的一个重要课题，采用抗氧化剂抑制氧化应激损伤受到越来越多的重视[10]。所以，研究清除氧自由基的物质是生命科学发展的必然趋势[11]。 2 维生素E及其功能维生素E是脂溶性维生素，又名生育酚，属于酚类化合物。天然维生素E有多种，均为苯骈二氢吡喃衍生物，各型维生素E在生物体内的活性不同[12]。实验证明，天然维生素E 比合成维生素E更有效[13]。维生素E具有抗衰老功能[14]，可以抗氧化，保护多价的不饱和脂肪酸免受氧化破坏[15]，预防和阻止诱发脂质过氧化，维持生物膜的正常结构；可以抗自由基，其自身结构决定了其具有还原性和亲脂性，当自由基进入脂相，发生链式反应时，维生素E可以起到迅速捕捉自由基的作用；还可以缓解心血管病的发生。

应用营养学的发展现状与趋势展望(1)

应用营养学的发展现状及趋势展望(1).txt15成熟的麦子低垂着头，那是在教我们谦逊；一群蚂蚁能抬走大骨头，那是在教我们团结；温柔的水滴穿岩石，那是在教我们坚韧；蜜蜂在花丛中忙碌，那是在教我们勤劳。辽宁医学院学报 2009 Jun130 (3) J LiaoningMedicalUniversity 应用营养学的发展现状及趋势展望裴婷娜 (本溪市中心医院营养科 ,辽宁本溪 117000) 摘要 :近年来 ,随着我国人民生活水平不断提高 ,因为营养过剩和不平衡而导致的疾病越来越多 ,严重威胁着人们的健康甚至生命。营养与临床治疗和康复被认为是现代医疗模式的三大组成部分 ,在增进健康、促进病人康复过程中发挥重

要作用。本文详细阐述了应用营养学的学科性质、营养知识在临床中的应用及应用营养学在我国的发展趋势 ,以期引起人们对这门学科的重视与关注 ,促进其不断发展。关键词 :应用营养学 ;发展现状 ;趋势展望中图分类号 : R15114 文献标志码 :A 文章编号: 1674 -0424 (2009) 03 -0284 -02 TheDeveloping Status Quo and Tendency Prospect on the Practical Nutriology PE I Tingna (NutritionalDepartmentof the CenterHospitalofBenxi, Benxi, 117000 China) Abstract: In recentyears, with the improvementofpeoplepslivingstandard, thediseasescausedbyovernutritionandoutofbal2 ance have raised rapidly, which have

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC2310 规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解。试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。产品说明：胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。自备仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g样品，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000rpm4℃离心10min，取上清液，即粗酶液，置冰上待测。或者直接称取1mg酶粉，加1mL提取液，充分混匀后置冰上待测（为保证实验的准确性建议梯度稀释）。二、测定： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到253nm，蒸馏水调零。第1页共2页

2.工作液的配制：将试剂一与试剂二按2:97配置工作液，按需配制，并置于37℃水浴预热30min以上。 3.空白管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL蒸馏水，混匀，迅速于253nm测定0s 和60s的吸光度，分别记为A1、A2，△A空白=A2-A1。 4.测定管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL粗酶液，混匀，迅速于253nm测定0s 和60s的吸光度，分别记为A3、A4，△A测定=A4-A3。三、胰蛋白酶活性计算： 1.按蛋白浓度计算：活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。胰蛋白酶（U/mg prot）=(△A测定-△A空白)÷0.001÷（Cpr×V1）÷T =100000×(△A测定-△A空白)÷Cpr 2.按样本鲜重计算：活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。胰蛋白酶（U/g鲜重）=(△A测定-△A空白)÷0.001÷（W×V1÷V2）÷T =100000×(△A测定-△A空白)÷W Cpr：粗酶液蛋白质浓度（需要另外测定），mg/mL；W：样本鲜重，g； V1：加入反应体系中粗酶液体积，10μL=0.01mL；V2：粗酶液总体积，1mL； T：反应时间，1min。注意事项：实验前用1～2个样做预实验，保证吸光值变化在0.01～0.15之间。第2页共2页

运动营养学的研究现状与发展趋势

运动营养学的研究现状与发展趋势聂英涛李正洪吴静广西师范大学体育学院【摘要】采用文献资料法，阐述了国内外运动营养发展概况，对运动营养学研究的内容及其意义进行分析，同时对运动营养学的发展趋势进行了预测。【关键词】运动营养学研究现状发展趋势生命在于运动，运动是人体需要特别的营养。随着社会的发展，“运动”正成为人们生活中不可或缺的重要组成部分。如何科学有效的为运动的人体补充合理的营养，使运动的目标得以实现，是运动营养学研究的根本目的。 21世纪是科学技术迅速发展的世纪，运动营养学也得到了飞速的发展，然而，当今竞技体育的竞争日趋激烈，运动员的竞技能力不仅受训练、遗传、健康状态、心理等多种因素的影响，合理营养也是其中的一个非常重要的因素。同时随着我国经济建设的发展和人们物质生活水平的提高，全民健身意识逐渐加强，由此给运动营养学工作提出了更新、更高的要求。为使我国竞技体育水平不断提高，并促进群众体育活动的广泛开展，提高全民族身体素质，对运动营养学的研究与应用做一系统的阐述是有必要的。一、运动营养学发展的概况运动营养学是一门用营养学和生物化学的手段来研究和评估运动人体代谢及体能状况，并提供营养学强力恢复手段的学科。这门学科经过几十年的发展，已经成为一个相对独立的，在运动科学中成为研究热点的学科，并在竞技体育和全民健身运动中发挥增强体能和保证健康的作用。 1．我国运动营养学发展概况

我国历史悠久，文化源远流长。在古代就有专门为贵族营养服务的食医，同时对营养、运动与健康也有研究。古代养生运动有：五禽戏、八段锦、太极等。古典的养生学说，如《食经》、《食医心鉴》、《饮膳正要》等，用“食医同源”、“医膳功”的唯物主义观点，论述了食物的功用与合理营养的保健作用。我国现代对运动营养学的研究始于20世纪50年代后期。北京医科大学运动医学研究所率先成立运动营养生化研究室，对我国运动营养的创立、研究及发展做出了重要的贡献。国家体委于1987年正式成立了运动营养研究中心，该中心成立后发展迅速，到目前已有3个研究室（运动营养生化室、放免生理室和食品研究室）。同年代的研究机构还有北京体育大学运动医学教研室，在运动营养的教学和科研工作中做出大量的工作。早期运动营养的研究多为运动员膳食营养做调查，个别运动项目的热能消耗，以及维生素C、维生素B1需要的研究。到了20世纪70～80年代，随着运动训练和比赛的需要，以及体育科学的发展，运动营养备受重视，不仅在体育界，而且在医药卫生界也开展了运动营养的研究。1989年由中国营养学会拟定的《我国的膳食指南》中提出了8条原则：食物要多样，饥饱要适当，油脂要适量，粗细要搭配，食盐要限量，甜食要少吃，饮酒要节制，三餐要合理。2000年中国营养学会公布了中国居民膳食营养素参考摄入量（DRAs），其中包括推荐营养素摄入量（RNI），不再使用推荐的膳食营养素供给量（RDA）。2000年10月17日，中国营养学会在第八次全国营养学术会议上又公布了我国第一部“膳食营养参考摄入量”，这标志着我国营养学界在理论研究和实际运动的结合方面又迈出了新的一步。2008年北京奥运会，在“科技奥运”理念的大背景下，国家队队员的食谱也有着很大的讲究。据了解，每支“国字号”队伍都有运动营养学专家设计的食谱软件，曾参加国家体育总局相关运动营养学课题研究的专家、南京体育学院教授张蕴琨说：“要成为奥运冠军，不能只靠练，良好的营养结构有助于令训练和比赛事半功倍。”项目不同食谱结构不同。可以说，中国健儿在奥运会取得的成功，合理的营养是其关键因素之一。 2．国际运动营养发展概况现代营养学奠基于18世纪中叶，到了19世纪，由于碳、氢、氮定量分析法，及由此而建立的食物组成与物质代谢的概念，氮平衡学说和等价法则的创立，为现代营养学的形成和发展奠定了基础。瑞典人发现并运用肌肉组织活检，促进了肌糖原储存的研究。美国与欧洲一些国家密切合作，发展了生理与营养领域里的研究。运动膳食学是近几年新兴的一门学科，应用性比较强，以个体为基础进行研究，具有很强的针对性，可以确定运动员达到营养目标需要的膳食策略。1991年在洛桑国际奥运会的办公室召开的一次国际联席会上，探讨了膳食对竞技能力影响的问题，说明膳食的重视程度逐渐被认可。基础理论研究方面，日本女子体育学院Yukari Kaw ano观察了女子体操运动员4个月训练中血常规指标及日常膳食营养摄入。东京大学的Hideo Hatta研究了运动中乳酸代谢。日本和洋大学健康与营养系Shuhei Kobayashi指出运动食品与保健品的“功能作用”有其独特性。竞技体育的发展和反兴奋剂的开展，对运动营养的发展也起着推动作用。

(人)胰蛋白酶

重组人胰蛋白酶 Cat.No.:RHT03 CAS:9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.重组生产，无动物源性重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2.优势安全性高重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等；特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染；冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失；不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。上海雅心生物技术有限公司

?纯度高 HPLC纯化；活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高比活性不低于2500USP u/mg。 3.用途范围胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂上海雅心生物技术有限公司

5.信息产品名称比活包装产地重组人胰蛋白酶≥2500USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml(1cm光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品重组猪胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液。上海雅心生物技术有限公司

食品营养学研究进展

食品营养学研究进展题目：膳食纤维的生理功能及其在食品开发中的应用日期：2016年12月30号

分子营养学研究进展

分子营养学研究进展 [摘要] 分子生物学的快速发展，使营养学的研究深入到分子水平，从而诞生了分子营养学这门新兴学科。本文综合叙述了分子营养学的发展简史以及当今研究比较多的几种营养素对基因表达的影响，同时叙述了基因多态性对部分营养物质吸收、代谢和利用的影响，最后文章展望了分子营养学的前景及面对的任务。 [关键词] 分子营养基因表达基因多态性 1953年，Watson和Crick发现了DNA的双螺旋结构，从那时起，分子生物学技术取得了突飞猛进的发展，几乎在生命科学的每一个方面都有广泛的应用。随着分子生物学技术的发展而来的是一些新兴学科的兴起，分子营养学就是营养学与现代分子生物学原理和技术有机结合而产生的一门新兴边缘学科，它在阐述营养素与基因表达如何相互作用，导致营养相关疾病发生发展方面取得了许多重要进展。 1分子营养学的定义及发展简史 1.1分子营养学定义分子营养学(molecular nutrition)主要是研究营养素与基因之间的相互作用，即应用现代分子生物学技术，在基因表达调控和蛋白质组学的水平上，研究营养与基因表达间的相互关系，旨在阐明营养素或营养调控因子对动物（人）生理机能的调控机理，为有效地、经济地促进动物（人）生长发育，提高动物（人）抗病力，最大限度地实现遗传潜力提供理论依据。广义上的分子营养学也指一切进入分子领域的营养学研究。分子营养学一方面研究营养素对基因表达的调控作用，从而对营养素的生理功能进行更全面、更深入的认识；另一方面研究遗传因素对营养素消化、吸收、分布、代谢和排泄的决定作用。在此基础上，探讨二者相互作用对生物体表型特征(如营养充足、营养缺乏、营养相关疾病、先天代谢性缺陷)影响的规律，从而针对不同基因型及其变异、营养素对基因表达的特异调节制订出营养素需要量和供给量标准。 1.2分子营养学发展简史传统营养学对动物（人）机体营养代谢的过程已经有了深入的了解，但是这些研究绝大部分是在机体水平上的研究。随着分子生物学技术的日渐成熟，并向整个生物领域的快速渗透，营养学自身发展需要从细胞分子水平阐明营养物质或生物活性物质调控机体营养分配与代谢的途径及机理；麻省理工学院临床营养研究中心Dr.Young教授指出：营养学家应该考虑基因组序列对他们的研究意味什么，如果不去尝试回答这个问题，营养学将面临死亡。在这种背景下，分子营养学应运而生。人类对癌症研究快速推动了营养学与基因表达的联姻，直接导致了分子营养学的诞生。 1908年，Garrod AE博士在推测尿黑酸尿症（alcaptonuria）的病因时，第一个提出了基因——酶的概念，认为先天性代谢缺陷的发生是由于基因突变或缺失，导致某种酶缺乏、代谢途径某个环节发生障碍、中间代谢产物发生堆积的结果。早期的研究主要是集中在先天性代谢缺陷方面，营养学家在这些研究中积累了丰富的经验并获得了突出的成就。1975年，美国实验生物学科学家在亚特兰大举行了“营养与遗传因素相互作用”专题讨论会，但是当时由于分子生物学发展的限制而使分子营养学的发展非常缓慢。1985年，Simopoulos AP博士在西雅图举行的“海洋食物与健康”的会议上，首次使用了“分子营养学”这个名词。从1988年开始分子营养学研究进入了黄金时代。 2营养素对基因表达的调控

虾类胰蛋白酶的研究进展

胰蛋白酶活性测定

食品营养学研究进展

我国居民膳食结构现状

食品安全研究进展

食品营养学研究进展

营养师报考条件、时间

重组人胰蛋白酶

食品营养学

基因营养学的研究进展

胰蛋白酶的制备

食品营养学文献综述模板

应用营养学的发展现状与趋势展望(1)

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

运动营养学的研究现状与发展趋势

(人)胰蛋白酶

食品营养学研究进展

分子营养学研究进展

最新论当代中国大学生营养现状与发展趋势

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法