大鼠长期脾虚造模的胃粘膜病理研究

2型糖尿病大鼠模型研究概况

2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的

中医的脾虚证包括三种

中医的脾虚证包括三种

中医的脾虚证包括三种脾虚包括三种：1，没有胃口吃东西、不想吃任何食物；2，消化不良，刚刚吃的东西都没有消化就通过粪便排出来；3，吸收营养的功能差。纳呆，中医症状名，指胃的受纳功能呆滞，故名，也称“胃呆”。即消化不良、食欲不振的症状。如果胃口不好，常有饱滞之感的，称为“胃纳呆滞”。纳是容纳的意思。中医讲水谷（饮食）由口经食道，进入、容纳于胃，故称胃主受纳（受，接受；纳，容纳）。胃的受纳功能降低，食欲减退，又称纳呆、纳少或食少。食少纳呆之证，大抵不外虚、实两类。所谓实者，是由邪气有余，干犯胃府而致胃气不降。凡证属实者，皆有实证实脉等一派有余之象。去其有余之邪，则胃气复常，而饮食自能如常。所谓虚者，由于正气不足。其中有脾胃自身之虚者，也有由其他脏腑之虚损而累及于脾胃者。食少纳呆，无不关乎脾胃。脾胃之气健旺，升降自如，则能纳能化；脾胃之气虚或气滞，则出现食少纳呆。食少纳呆有虚实之分。其实者，或由气滞、或因湿困、或由食伤、或因热盛，皆可导致脾胃气机不畅而致食少纳呆。其虚者，不外脾胃阳气虚弱与阴血亏少。大抵实证多见于暂病，虚证多见于久病。亦有虚实挟杂者。纳呆夹杂的症状纳呆食少：伴腹胀便溏，精神疲乏，舌淡者，为脾胃气虚。纳呆脘闷：伴头身重困，便溏苔腻者，属湿邪困脾。纳呆厌食：兼见嗳气酸腐，脘痛胀痛，苔厚腻浊者，为宿食停滞。纳少厌油：兼恶寒发热者，

为感冒所致；兼疲乏身困，胁肋胀痛，或有黄疸者，属肝胆湿热。饥不欲食：兼见胃中嘈杂、灼热，舌红少苔脉细者，为胃阴不足，虚火内扰，若兼胸胁苦满或腹满，心烦喜呕，脉弦者，为少阳胆热或肝胃不和。实证之治以祛邪为主。邪气去则脾胃之气复而自能饮食。因于气滞者，多由情态不遂、喜怒不解而肝郁不疏，肝气郁结不能疏泄则脾胃之气也因而呆滞。此证之治当分久暂而辨虚实。大抵初病可见胸胁胀满或疼痛者，为肝郁不疏，当以疏肝解郁为主。若久病肝郁已解而唯脾胃受损者，宜补益脾胃。若肝郁脾虚者。湿困脾胃，也较多见，或由外湿、或因内湿，皆可困阻脾胃气机而致食少纳呆，其症多见脘腹痞闷，身肢困重，舌苔白腻，治宜芳香辛散之剂等，宣气化湿以苏醒脾胃。食伤脾胃者，在上者以消食和胃为主；在下者以导滞通腑为主。若食伤脾胃，吐泻太甚，或攻伐太过，或迁延日久，脾胃受伤而难存虚证者，按虚证治。因于热盛而食少纳呆者，多见门苦苔黄等一派热象，但清其热，热去则胃气复，自能饮食。虚证之治以补益为主，当分阴阳气血。再辨是因于脾胃自身之虚，还是由他脏之病而累及者。对脾胃阳气虚者，可用甘温补益法。若由下焦阳虚，火不生土而致者，可用(补骨脂、肉豆蔻)补命火以生脾上。若脾胃气虚而兼食滞者，可用消补兼施。至于胃阴虚者，前面已经谈过。若由肾阴不足或血虚而致者，可用滋阴补血之品。脾胃气虚或气滞，食滞不化，肝郁乘脾，痰

黑升麻提取物对去势大鼠血清性激素及相关靶器官ER表达水平的影响

目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1 材料与方法 (3) 1.1.1 实验动物与实验药物 (3) 1.1.2 实验动物处理方法、分组及所需实验试剂和器材 (3) 1.1.3 标本收集 (4) 1.1.4 放射免疫实验所需主要试剂、仪器及实验方法 (5) 1.1.5 免疫组化实验所需主要试剂、仪器及实验步骤 (5) 1.2 结果 (8) 1.2.1 三组大鼠在不同给药周期血清E2水平的比较 (8) 1.2.2三组大鼠在不同给药周期血清FSH水平的比较 (9) 1.2.3三组大鼠在不同给药周期血清LH水平的比较 (10) 1.2.4 各组大鼠子宫组织中ER表达强度的比较 (11) 1.2.5 各组大鼠阴道壁组织中ER表达强度的比较 (14) 1.3 讨论 (15) 1.3.1 围绝经期性激素的改变 (15) 1.3.2 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的疗效 (16) 1.3.3 黑升麻提取物的非激素样作用 (17) 1.3.4 黑升麻提取物的作用机制假说 (18) 1.3.5 黑升麻提取物的用药周期 (20) 1.3.6 展望 (21) 参考文献 (21) 第2章综述 (26) 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的作用机制 (26) 2.1 摘要 (26) 2.2 概述 (27) 2.2.1 黑升麻提取物来自欧洲 (27) 2.2.2 引进中国 (28) - V -

华北理工大学硕士学位论文 2.3 黑升麻提取物作用机制假说 (29) 2.3.1 神经内分泌作用假说 (29) 2.3.2 选择性雌激素受体调节剂(SERM)作用机制假说 (30) 2.3.3 抗氧化作用和炎症反应作用机制假说 (30) 2.4 黑升麻提取物临床疗效的评价 (30) 2.5 黑升麻提取物在临床应用时的不良反应 (31) 2.6 黑升麻提取物临床应用的前景 (32) 参考文献 (33) 结论 (36) 致谢 (37) 导师简介 (38) 作者简介 (39) 学位论文数据集 (40) - VI -

大鼠二型糖尿病造模方法

大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020

大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两

紫河车对超排卵大鼠血清雌孕激素及妊娠率影响-邱晨

157 第19卷 第10期 2017 年 10 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 19 No. 10 Oct .，2017 不孕症是一种临床常见的生育障碍性疾病，[1] 并且随着环境恶化、饮食结构及生活节奏的变化及性传播疾病的蔓延，不孕症的发病率正在以难以想象的速度逐年上升，严重影响家庭和谐与社会稳定。我们不难发现，现如今治疗不孕症的最常见有效手段是辅助生殖技术，临床上个体化的控制性超促排卵方案，实验室胚胎培养、受精技术的不断进步，才使得胚胎质量得到不断地优化，但体外授精（IVF） 胚胎移植的妊娠率仍然只有 20%~30%[2] 。胚胎着床受诸多方面因素的影响，胚胎质量和子宫内膜容受性是胚胎成功着床的两个重要环节，其中2/3原因 是由于子宫内膜容受性不足所导致的[3] 。简单来说具有容受性的内膜加上优质的胚胎，且二者发育同步，胚胎成功着床的几率才会大。因此治疗关键在 于改善子宫内膜容受性，目前我们的治疗上处于探 索阶段，西医最常使用的是雌激素，它不但可以上调子宫内膜雌激素受体表达，而且可以改善子宫发育，使内膜厚度增加，间接来提高子宫内膜容受性。但临床上仍存在有使用大量雌激素时，内膜不适合胚胎着床的情况。此外雌激素在一定程度上存在一定的毒副作用，例如严重的肝肾疾病、激素依赖、肿瘤、血栓性相关疾病等风险。因此我们希望找到安全有效可以充分替代雌激素的药物来改善子宫内膜容受性及提高妊娠率。在大量临床实践中我们发现紫河车用于助孕治疗疗效显著，在改善子宫内膜容受性方面有着一定的优势。因此我们希望通过此项试验来观察它对内膜容受性的影响。本项研究是观察超促排卵大鼠模型在用药前后，测定血清中雌孕激素 紫河车对超排卵大鼠血清雌孕激素及妊娠率影响 邱晨1，施晓玲2，凌娜2 （1.辽宁中医药大学，辽宁?沈阳?110847；2.辽宁中医药大学附属医院，辽宁?沈阳?110032） 摘 要： 目的：了解紫河车对超排卵大鼠模型血清中雌、孕激素、妊娠率对子宫内膜容受性的影响，在辅助生殖过程中制定个体化治疗方案提供指导依据。方法：将80只大鼠随机分为4组，每组各20只，即空白组、模型组、雌二醇对照组、紫河车实验组。复制大鼠超排卵模型，雌雄合笼，在发现精子或阴栓记为pd1，通过测定pd2、pd5、pd12血清中雌、孕激素，剖取子宫，统计胚胎数目及妊娠率。结果：空白组及模型组的雌孕激素均明显低于雌二醇对照组及紫河车实验组。紫河车实验组胚胎数目和妊娠率虽然低于雌二醇对照组，但是不存在明显差异。结论：紫河车可以提高血清中雌、孕激素水平，间接改善子宫内膜容受性，从而提高妊娠率。 关键词：紫河车；超促排卵大鼠；雌孕激素；妊娠率 中图分类号：R282.71 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 10- 0157- 03 收稿日期：2017-02-18 基金项目：辽宁省自然基金资助项目（2014020056）作者简介：邱晨（1992-），女，辽宁沈阳人，硕士研究生，研究方向：中医妇科。通讯作者：施晓玲（1972-），女，辽宁沈阳人，主任医师，学士，研究方向：中西医结合不孕不育及辅助生殖。 凌娜（1977-），女，辽宁沈阳人，主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：中医妇科。 Effection of Human Placenta on Estrogen and Progesterone and the Pregnancy Rate of Superovulated Rats QIU Chen 1，SHI Xiaoling 2，LING Na 2 （1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China；2.Affilliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To study the effection of human placenta on the estrogen and progesterone and pregnancy rate in superovulated rats and the effection of pregnancy rate on the endometrial receptivity. To provide guidance for making individualized treatment plan in the process of assisted reproduction. Methods ：Eighty rats were divided into four groups by random sample，blank group，model group，estradiol control group and human placenta experimental group with twenty rats respectively. Copied rat-superovulation model，male and female are put into the same cage. When finding sperm and vaginal plug，pd1 was denoted，then test the estrogen and progestogen in pd2，pd5 and pd12，and finally cope with the embryo number and pregnancy rate. Results ：The levels of embryo number and pregnancy rate in blank group and model group were obviously lower than those of estradiol control group and human placenta experimental group. At though embryo number and pregnancy rate in human placenta were lower than estradiol control group，but there was no obvious difference. Conclusion ：Human placenta can improve the level of female progestational hormone in serum，indirect improve endometrial receptive，increase pregnancy rate. Keywords：human placenta；superovulated rats；estrogen and progesterone；pregnancy rate DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.10.047

脾虚证中医诊疗专家共识意见(2017)

1 概述 1.1 中医对脾的认识 《素问·灵兰秘典论》曰：“脾胃者，仓廪之官，五味出焉”，《素问·经脉别论》曰：“饮入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精”，均描述了脾主运化的作用；《灵枢·营卫生会》曰：“中焦并胃中，出上焦之后，此所受气者，泌糟粕，蒸津液，化其精微，……乃化而为血”，指出气血生成由脾胃相互协调完成；《素问·痿论》曰：“脾主身之肌肉”，《素问·玉机真脏论》曰：“脾脉者，土也，孤脏以灌四傍者也”，说明脾主司肌肉和充养四肢百骸的属性；《金匮要略》曰：“四季脾旺不受邪”，指出脾气健旺则外邪不易入侵；《养生四要》曰：“受水谷之入而变化者，脾胃之阳也；散水谷之精气以成营卫者，脾胃之阴也”，表明脾也有阴阳之分。上述有关脾“主运化”“主统血”“主肌肉四肢”“脾为之卫”以及脾为“气血生化之源”的功能，不仅涵盖了现代医学的消化系统，而且与神经、内分泌、血液、循环、免疫、生殖、运动系统功能也密切相关。正是由于脾在脏象理论中所处的特殊地位，使得对脾本质的研究历久不衰并取得了长足进步。 1.2 脾虚证诊疗标准的变迁 脾虚证是证候研究的重要组成部分，也是国内开展研究最早的证候之一，对其诊疗标准的探索呈现不断扬弃和演变的过程。20世纪70年代中期，原广州中医学院脾胃研究组最早提出脾虚证诊断方案[1]。1982年全国中西医结合虚证与老年病研究专业委员会制订脾虚证辨证诊断标准[2]：1)食欲减退；2)食后或下午腹胀；3)大便溏薄；4)面色萎黄；5)肌瘦无力；5项之中具备3项以上即可诊断，由此初步有了脾虚证全国性辨证诊断标准。1986年该专业委员会对1982年的辨证标准进行修改，将大便溏泄列为第1项，食后腹胀增加了喜按的条件，并推荐尿D-木糖排泄率(北京中医医院、北京中医研究所提出)和唾液淀粉酶酸负荷试验(原广州中医学院脾胃研究室提出)作为辅助实验室疗效参考指标[3]。1987年原国家卫生部、1988年国家中医药管理局发布的相关标准都含有脾虚证的诊断和疗效标准[4-5]。19 93年原国家卫生部发布《中药新药临床研究指导原则(第一辑)》[6]列有脾虚证诊断标准、主症轻重程度分级和疗效判定标准，是较为全面且具有代表性的脾虚证诊疗标准，得到较广泛运用。2002年《中药新药临床研究指导原则(试行)》[7]进一步制订了脾气虚证诊断标准、症状量化分级和相应疗效判定标准。 1.3 脾虚证的研究现状 临床脾虚证涉及多种中西医病种，症状复杂多样，研究过程难免产生较多定性为主的病理生理数据，且其间存在的非线性关系在一定程度上制约了脾虚证全貌的现代研究；同时，脾虚证研究多集中在一方一法或专家经验，尚缺乏大样本、多中心、随机对照循证医学研究，证据级别也相对较低。近年来，已有研究提出脾虚证亚型概念并进行了物质能量代谢基因研究的有益尝试，初步提示脾虚证消化吸收功能障碍亚型存在相关物质能量代谢障碍的基因背景[8]；“证候组学”概念的提出，则拟通过系统生物学研究以求解释脾虚证复杂的病变机制[9]。在此基础上，若能将脾虚证复杂临床表现分解为相对简单的如消化吸收障碍、胃肠运动障碍、免疫功能低下不同亚型，从基因、转录、蛋白及代谢等多组学、多层次对其进行系统探讨，应该更能集中反映脾虚证某一证候亚群病理改变的特点，使临床辨证用药更具针对性。

糖尿病大鼠指标

实验流程 1、末次灌胃后，大鼠禁食不禁水12h，与麻醉前进行称重，行腹腔注射3%戊巴 比妥钠，0.3ml/100g 2、腹主动脉取血，留取全血标本。 3、取肝、脾、肾、胃、心脏及脑。 4、称肝、脾、肾、胃、心脏及脑组织，并分装各个组织，放入-80℃冻存。其中 肝组织剪取1g肝脏，送至肝均浆；肝10%甲醛固定做HE染色，每组5只； 肝4%戊二醛固定做电镜，每组一只； 5、小肠10%甲醛固定做HE染色，每组5只；小肠4%戊二醛固定做粪便电镜，每 组1只；其余肠组织-80℃冻存。 6、肝；制成肝均浆，1g肝脏加入9ml冰生理盐水，制成肝均浆液，离心后，取 上清液，于-80℃冻存。 7、全血标本静置30min后，进行离心，分离血清，血清和血浆均放入-80℃冻存。检测指标： 1、肝脏组织 1.1HE染色观察肝脏组织的病理学改变。 1.2透射电镜观察肝脏超微结构变化 1.3电感耦合等离子体质谱（ICP-MS） 1.4试剂盒测肝均浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶 （GSH-Px）、ROS活性氧水平 1.5检测肝脏组织中Western blot、NF-kB、COX-2表达情况，计算其阳性表达 率 2、血清（血浆） 2.1全自动化分析仪测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶TG 2.2酶联免疫吸附法检测血浆中肠结合脂肪酸蛋白（FABp2）、D-乳酸（D-LA）及二胺氧化酶（DAO）水平评价大鼠大肠粘膜损伤 2.3试剂盒测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、4-HNE（羟基壬烯醛）、 谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）评价大鼠氧化应激水平 2.4酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血浆中α肿瘤坏死因子（TNF α）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)浓度 3、肠道菌群

大鼠血清雌激素水平测定方法总结

1、酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。 2、放射免疫分析（英语：radioimmunoassay，缩写为RIA） 简称放免或放免法，是一种在无须采用生物测定方法的情况下，用于检测抗原（例如血清之中激素的水平）的实验室测定方法。这一方法是由罗莎琳·萨斯曼·耶洛和Solomon Aaron Berson于1950年代创建的。 通过抽取的少量血液或病人标本，利用放射性核素标记的抗原和未标记的抗原（两者的免疫原性相同）对专一抗体的竞争性相结合反应，来分析测定体内抗原的含量。放射免疫分析法具有灵敏性高（可达10－12g~10-15g）。 3、免疫荧光法（免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）FIA） 是标记免疫技术中发展最早的一种。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。 主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。 4、化学发光免疫分析（CLIA） 亦称化学发光标记免疫测定，是用化学发光剂直接标记抗原或抗体（化学发光剂标记物），与待测标本中相应抗体或抗原、磁颗粒性的抗原或抗体反应，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测。 5、时间分辨荧光分析法也叫时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA） 是以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合剂作为示踪物，建立的一种新型的非放射性微量分析技术。自从1983年Pettersso n等采用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）法定量测定hCG以来，TRFIA方法学研究和临床应用发展迅速，成为继RIA之后标记免疫分析发展的一个新的里程碑，国内外相继研制了多种TRFIA仪和配套的商品化试剂盒。 是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10^(-12)g/ml，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。由于其高灵敏度，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。 缺点是E2的线性浓度范围为2.5-200pg/ml. ???正常值

中医的脾虚证包括三种

中医的脾虚证包括三种 中医的脾虚证包括三种脾虚包括三种：1，没有胃口吃东西、不想吃任何食物；2，消化不良，刚刚吃的东西都没有消化就通过粪便排出来；3，吸收营养的功能差。纳呆，中医症状名，指胃的受纳功能呆滞，故名，也称“胃呆”。即消化不良、食欲不振的症状。如果胃口不好，常有饱滞之感的，称为“胃纳呆滞”。纳是容纳的意思。中医讲水谷（饮食）由口经食道，进入、容纳于胃，故称胃主受纳（受，接受；纳，容纳）。胃的受纳功能降低，食欲减退，又称纳呆、纳少或食少。食少纳呆之证，大抵不外虚、实两类。所谓实者，是由邪气有余，干犯胃府而致胃气不降。凡证属实者，皆有实证实脉等一派有余之象。去其有余之邪，则胃气复常，而饮食自能如常。所谓虚者，由于正气不足。其中有脾胃自身之虚者，也有由其他脏腑之虚损而累及于脾胃者。食少纳呆，无不关乎脾胃。脾胃之气健旺，升降自如，则能纳能化；脾胃之气虚或气滞，则出现食少纳呆。食少纳呆有虚实之分。其实者，或由气滞、或因湿困、或由食伤、或因热盛，皆可导致脾胃气机不畅而致食少纳呆。其虚者，不外脾胃阳气虚弱与阴血亏少。大抵实证多见于暂病，虚证多见于久病。亦有虚实挟杂者。纳呆夹杂的症状纳呆食少：伴腹胀便溏，精神疲乏，舌淡者，为脾胃气虚。纳呆脘闷：伴头身重困，便

溏苔腻者，属湿邪困脾。纳呆厌食：兼见嗳气酸腐，脘痛胀痛，苔厚腻浊者，为宿食停滞。纳少厌油：兼恶寒发热者，为感冒所致；兼疲乏身困，胁肋胀痛，或有黄疸者，属肝胆湿热。饥不欲食：兼见胃中嘈杂、灼热，舌红少苔脉细者，为胃阴不足，虚火内扰，若兼胸胁苦满或腹满，心烦喜呕，脉弦者，为少阳胆热或肝胃不和。实证之治以祛邪为主。邪气去则脾胃之气复而自能饮食。因于气滞者，多由情态不遂、喜怒不解而肝郁不疏，肝气郁结不能疏泄则脾胃之气也因而呆滞。此证之治当分久暂而辨虚实。大抵初病可见胸胁胀满或疼痛者，为肝郁不疏，当以疏肝解郁为主。若久病肝郁已解而唯脾胃受损者，宜补益脾胃。若肝郁脾虚者。湿困脾胃，也较多见，或由外湿、或因内湿，皆可困阻脾胃气机而致食少纳呆，其症多见脘腹痞闷，身肢困重，舌苔白腻，治宜芳香辛散之剂等，宣气化湿以苏醒脾胃。食伤脾胃者，在上者以消食和胃为主；在下者以导滞通腑为主。若食伤脾胃，吐泻太甚，或攻伐太过，或迁延日久，脾胃受伤而难存虚证者，按虚证治。因于热盛而食少纳呆者，多见门苦苔黄等一派热象，但清其热，热去则胃气复，自能饮食。虚证之治以补益为主，当分阴阳气血。再辨是因于脾胃自身之虚，还是由他脏之病而累及者。对脾胃阳气虚者，可用甘温补益法。若由下焦阳虚，火不生土而致者，可用(补骨脂、肉豆蔻)补命火以生脾上。若脾胃气虚而兼食滞者，可用消补兼施。至于胃

进食状态对糖尿病大鼠血糖及肝糖原的影响

进食状态对糖尿病大鼠血糖及肝糖原的影响 实验目的： 1.熟悉常用的糖尿病大鼠造模方法 2.掌握血糖仪的使用方法 3.掌握组织样品的制备方法 4.了解血清胰岛素水平检测方法 5.熟悉肝糖原提取、鉴定的方法与原理 6.通过本实验探讨临床糖尿病患者不同进食状态对血糖的影响 实验用品： 一、器材： 普通离心机，酶标仪，恒温水浴箱，分光光度计，0.01g电子天平、0.1g电子天平，血糖仪，棉签，干棉球，剪刀2把，镊子2把，研钵2个，白磁盘，试管架，拆条酶标板，吸水纸，5ml离心管，试管，烧杯，漏斗，玻璃棒，刻度吸量管，EP管，滤纸，1000μl微量可调取液器，50ml容量瓶3个，注射器，白瓷反应板，塑料手套，布手套，抹布，记号笔 二、试剂： 5%三氯乙酸溶液，蒸馏水，生理盐水，碘试剂，95％乙醇，标准葡萄糖溶液（50mg/L），98%浓硫酸，30%KOH溶液，0.2%蒽酮显色剂，柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（PH4.4），1%链脲佐菌素（STZ）溶液，10%水合氯醛溶液，大鼠胰岛素（INF）ELISA检测试剂盒 实验步骤： 一、标记： 二、造模：

A、抓取大鼠并称重。（结果见表一） B、大鼠先禁食12小时后（此部分为老师帮忙完成），进行血糖检测。然后抓取大鼠单次腹腔注射按1%STZ溶液（65mg/Kg），注射后一小时，给予自由饮食、饮水。 具体抓取大鼠方法：用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，抓住鼠尾向后轻拉，左手紧抓两耳和头颈部皮肤，余下三指紧捏鼠背部皮肤，如果大鼠后肢挣扎厉害，可将鼠尾放在小指和无名指之间夹住。 C、以后每天安排人员进去喂养动物，记录饮食量和更换垫料。 D、待72小时后大鼠尾静脉采血再次检测血糖，以餐后血糖≥16.7mmol/L为大鼠糖尿病模型造模成功的判定标准。 血糖检测具体步骤：将血糖检测专用试纸插入血糖分析仪中，待血糖仪显示屏上显示滴血标记时，方可使用。用剪刀剪断大鼠尾尖约＜0.5cm，挤出的第一滴血用棉球擦掉不要，第二滴血滴在试纸上。待血糖仪显示屏上显示稳定的数值后记录。（血糖检测结果见表二） 三、麻醉： 大鼠称量后，通过计算每只大鼠所需麻醉量（0.3ml/100g），抓取大鼠，腹腔注射。 四、血清胰岛素水平检测： 麻醉后摘除大鼠眼球，取血约1ml于EP管中，静置一小时以上，由于实验顺序要求先进行接下来的肝糖原检测并鉴定实验，所以静置后将EP管放入冰箱内冷藏一天，第二天进行实验时，将EP管对称放入离心机中，进行2000r/min离心15分钟，分离血清100μl。采用大鼠胰岛素ELISA检测试剂盒，严格按照试剂盒步骤进行血清胰岛素水平检测。 板37°C温育30分钟。 3．洗涤5次，每孔加入酶标试剂50μl，37°C温育30分钟。 4．洗涤5次，每孔加入显色液A,B各50μl，37°C避光显色10分钟。

中医的脾虚证包括三种

中医得脾虚证包括三种 中医得脾虚证包括三种脾虚包括三种:１，没有胃口吃东西、不想吃任何食物;２，消化不良,刚刚吃得东西都没有消化就通过粪便排出来；3，吸收营养得功能差. 纳呆，中医症状名，指胃得受纳功能呆滞，故名，也称“胃呆”。即消化不良、食欲不振得症状。如果胃口不好,常有饱滞之感得,称为“胃纳呆滞"。纳就是容纳得意思。中医讲水谷（饮食）由口经食道,进入、容纳于胃,故称胃主受纳（受,接受；纳，容纳)。胃得受纳功能降低，食欲减退,又称纳呆、纳少或食少。食少纳呆之证,大抵不外虚、实两类。所谓实者，就是由邪气有余，干犯胃府而致胃气不降。凡证属实者，皆有实证实脉等一派有余之象。去其有余之邪，则胃气复常，而饮食自能如常。所谓虚者,由于正气不足.其中有脾胃自身之虚者，也有由其她脏腑之虚损而累及于脾胃者。食少纳呆,无不关乎脾胃。脾胃之气健旺,升降自如，则能纳能化；脾胃之气虚或气滞，则出现食少纳呆.食少纳呆有虚实之分。其实者,或由气滞、或因湿困、或由食伤、或因热盛,皆可导致脾胃气机不畅而致食少纳呆。其虚者，不外脾胃阳气虚弱与阴血亏少。大抵实证多见于暂病,虚证多见于久病.亦有虚实挟杂者.纳呆夹杂得症状纳呆食少:伴腹胀便溏，精神疲乏,舌淡者，为脾胃气虚。纳呆脘闷：伴头身重困，便溏苔腻者,属湿邪困脾.纳呆厌食:兼见嗳气酸腐,脘痛胀痛,苔厚腻浊者，为宿食停滞。

纳少厌油:兼恶寒发热者，为感冒所致；兼疲乏身困,胁肋胀痛，或有黄疸者，属肝胆湿热。饥不欲食：兼见胃中嘈杂、灼热，舌红少苔脉细者，为胃阴不足，虚火内扰,若兼胸胁苦满或腹满,心烦喜呕，脉弦者,为少阳胆热或肝胃不与.实证之治以祛邪为主。邪气去则脾胃之气复而自能饮食。因于气滞者，多由情态不遂、喜怒不解而肝郁不疏,肝气郁结不能疏泄则脾胃之气也因而呆滞。此证之治当分久暂而辨虚实。大抵初病可见胸胁胀满或疼痛者，为肝郁不疏,当以疏肝解郁为主。若久病肝郁已解而唯脾胃受损者，宜补益脾胃。若肝郁脾虚者。湿困脾胃,也较多见，或由外湿、或因内湿,皆可困阻脾胃气机而致食少纳呆,其症多见脘腹痞闷,身肢困重，舌苔白腻,治宜芳香辛散之剂等，宣气化湿以苏醒脾胃。食伤脾胃者，在上者以消食与胃为主；在下者以导滞通腑为主。若食伤脾胃,吐泻太甚，或攻伐太过，或迁延日久，脾胃受伤而难存虚证者,按虚证治.因于热盛而食少纳呆者，多见门苦苔黄等一派热象,但清其热,热去则胃气复，自能饮食。虚证之治以补益为主，当分阴阳气血。再辨就是因于脾胃自身之虚，还就是由她脏之病而累及者。对脾胃阳气虚者，可用甘温补益法。若由下焦阳虚，火不生土而致者，可用（补骨脂、肉豆蔻）补命火以生脾上。若脾胃气虚而兼食滞者,可用消补兼施。至于胃阴虚者，前面已经谈过。若由肾阴不足或血虚而致者,可用滋阴补血之品。脾胃气虚或气滞,食滞不化,肝郁乘

脾虚证诊断标准文献系统评价研究_赵平

脾虚证诊断标准文献系统评价研究 赵平，李先涛 （广州中医药大学基础医学院，广东广州510006） 摘 要：运用循证医学文献系统评价方法，建立“脾虚证文献信息采集表”，对近25年脾虚证诊断标准文献进行研 究，共纳入合格研究文献23篇，经统计分析，脾虚证临床症状、舌象、脉象排序前10位依次为：食欲减退、舌淡、乏力、舌胖嫩/胖大、 大便溏泄、舌边有齿痕、脉细、消瘦、面色萎黄、食后腹胀，与脾虚证国家标准、学会标准存在差异。关键词：脾虚证；辨证论治；标准；文献评价中图分类号：R241.2 文献标志码：A 文章编号：1000－1719（2013）07－1304－03 Study of Systematic Evaluation on the Literature of Spleen －deficiency Syndrome Diagnostic Standard ZHAO Ping ，LI Xiantao （School of Basical Science ，Guangzhou University of Chinese Medicine ，Guangzhou 510006，Guangdong ，China ）Abstract ：By using the method of literature system evaluation on Evidence －based Medicine ，and establishing information collection table of spleen deficiency syndrome literature ， the literature on spleen deficiency diagnosis standard in recent 25years was analyzed．Finally 23pieces of qualified research literature were used in the study．Through the statistic analysis ，the top ten clinical symptoms ， the tongue examination and pulse conditions in turn are anorexia ，paletongue ，tiredness ，enlarged tongue ，loose stool ，tongue edge with tooth marks ，pulse small ，marasmus ，sallow complexion ，abdominal distension after meals ，which are differ-ent from the national standards and academic committee standards on spleen deficiency syndrome． Key words ：spleen －deficiency syndrome ；treatment based on syndrome differentiation ；standard ；literature evaluation 收稿日期：2012－11－21 基金项目：国家自然科学基金（81072733） 作者简介：赵平（1984－），女，湖北襄阳人，硕士研究生，研究方向：中西 医结合专业。 通讯作者：李先涛（1966－），男，湖北人，研究员，博士，研究方向：中医 证候学， E －mail ：lixiantao@gzucm．edu．cn 。脾虚证诊断标准于1982年在广州召开的“全国中西医结合虚证与老年病防治学术会议 ［1］ ”上第一次制 订后，先后于1986年《中医虚证辨证参考标准》［2］ 和 1988年国家卫生部《中药新药治疗脾虚证的临床研究指导原则》［3］ 对脾虚证标准进行了修订，此后，有学者进一步研究和完善， 如邱氏总结脾虚证诊断规范化研究大体经历了3个阶段：起步阶段、修订补充阶段和计量化研究阶段 ［4］。本文运用循证医学文献系统评价方 法，建立“脾虚证文献信息采集表”，对近25年脾虚证诊断标准文献进行研究，旨在为今后脾虚证辨证标准规范化研究提供依据。1资料与方法 1.1 建立文献系统评价工具 建立“脾虚证文献信息采集表”，全面收集脾虚证相关证候文献，对所收集脾虚证文献进行系统评价。脾虚证文献系统研究的主要环节：①确定文献收集的范围：经专家组讨论进行顶层设计，确定脾虚证研究文献的范围。②制订文献研究计划：内容包括收集文献的方法和策略、文献的纳入标准与排除标准、文献质量 评价方法、数据分析方法、评价结果的分析和报告等。③建立评价工具：按照临床流行病学和循证医学的原则和方法， 编制统一、规范的“脾虚证文献信息采集表” ，经预试验、一致性（如Kappa 值）评价、信度和效度评价、进一步修订和完善、再经培训后，进行文献采集。④建立文献系统评价数据库。⑤数理统计分析与计算。1.2 文献检索 以“脾虚”“脾气虚”“诊断标准”作为检索词，检索中国期刊全文数据库（CNKI ）（时间：1986年1月—2011年12月，共检索相关文献篇322篇）和中国生物医学文献数据库（CBM ）（时间：1986年—2011年），共检索相关文献191篇。1.3文献选择1.3.1纳入标准 中医辨证具备明确的脾虚或者脾 气虚证证候，且对脾虚证诊断标准进行相关研究的文 献。1.3.2 排除标准 无中医辨证证候者；重复研究，一 稿多投的文章只取其中1篇；资料来源不清；综述类及Meta 分析类文章；有关脾虚证病因病机等理论探讨类文章；动物实验类研究文献。1.4 资料提取 将两个数据库检索出来的文献进行合并，最后共有文献389篇，每篇通过查阅摘要和关键词，排除动物实验研究、综述、Meta 分析、重复研究、一稿多投、与脾

2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证

2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证论著 燕娟1　郭巍伟1　梁执群1　李志国1　郭永昌2 (山西医科大学1人文社会科学学院;2实验动物中心　山西　太原　030001) 【摘要】　目的　制备一种发病过程类似人类2型糖尿病的动物模型。方法　雄性S D成年大鼠高糖高脂饲料喂养 1个月,诱发出胰岛素抵抗,给予小剂量链脲佐菌素(STZ)25mg/kg,腹腔注射,建立2型糖尿病大鼠模型。结果　试验 组大鼠血糖升高,对胰岛素敏感性下降,从生化指标和形态学方面证实造模成功。结论　本实验2型糖尿病大鼠模型 造模成功,它具有中度高血糖、胰岛素抵抗、成功率高等特点,是人类2型糖尿病及其药物研究的理想动物模型。 【关键词】　糖尿病　动物模型　大鼠 Type2d i a betes ra t m odel and its ver i f i ca ti on.YAN Juan,G UO W ei-w ei,L I ANG Zhi-qun,et al.ShanxiM edical U niversity,College O f Hu2 m anities A nd Social Science,Taiyuan Shanxi030001,China. 【Abstract】　O bjecti ve　Preparati on of a disease si m ilar t o human type2diabetes ani m al model.M ethods　Male S D adult rats fed high- fat high-sugar a month,induced insulin resistance,given l ow-dose strep t ozot ocin(STZ,25mg/kg,intraperit oneal injecti on),set up in type2 diabetic rat model.Results　Test gr oup of rats increased bl ood glucose,insulin sensitivity decreased,fr om the bi oche m ical indices and mor phol ogy confir med the successful model.Conclusi on　The experi m ental rat model of type2diabetes model successfully,it has moderately high bl ood sug2 ar,insulin resistance,the success rate is high,are of human type2diabetes and its drug research ideal ani m al model. 【Key words】　D iabetes;Ani m al model;Rat 糖尿病与心脑血管疾病、肿瘤是当前威胁人类健康的三大非传染性疾病,已成为全球性的卫生问题。随着我国人民生活水平的提高、人口老化、生活方式的改变以及诊断技术的进步,糖尿病的发病率呈现迅速上升趋势,2型糖尿病是糖尿病人群的主体,占糖尿病发病率的90%以上。因此,研制2型糖尿病动物模型具有重要的医学研究意义。在国外2型糖尿病的研究中,采用的动物模型多为遗传相关模型,如ob/ob小鼠、db/db小鼠及肥胖型Zucker大鼠等,其特点是遗传因素在发病过程中占主导作用,不完全与临床相符,且十分昂贵,不利于国内研究的开展[1]。本研究结合前人经验,应用高糖高脂饲料结合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立了2型糖尿病大鼠模型,较符合人类普通型2型糖尿病发病机制,有利于进行2型糖尿病及其并发症的相关研究[2,3]。1　材料和方法 1.1　动物和材料　清洁级雄性S D大鼠40只,体质量(180±20)g,由山西医科大学实验动物中心提供,每笼4～5只,饲以普通饲料,自由摄食摄水,除实验应激外无其他不良刺激。STZ由美国Sig m a公司生产。胰岛素、胰高血糖素放射免疫分析药盒为解放军总医院科技开发中心放免所产品,购自北京普尔伟业生物科技有限公司。 1.2　2型糖尿病大鼠模型的建立　在大鼠适应期后,随机取10只作为正常对照组,其余30只给予高糖高脂饲料(在标准全价混合饲料的基础上添加蔗糖、炼猪油和蛋黄,热能含量21.6kJ/kg)。高糖高脂饲料组喂养4周后,腹腔注射STZ(临用前溶解在pH=4.0的0.1mmol/L柠檬酸缓冲液内,25mg/kg,1次/d,连续2d),正常对照组普通饲料喂养4周,再注射等量柠檬酸缓冲液,1次/d,连续2d。注射药物两天后间隔1d血糖测试仪测查大鼠空腹血糖(测试前禁食12h)即注射后血糖,以血糖含量16.7mmol/L为2型糖尿病大鼠模型判定标准,随机选取10只糖尿病大鼠为模型组。继续普通饲料喂养4周。 1.3　指标测定 1.3.1　一般状况观察　包括大鼠的精神状态、体质量、饮水量、食量、大小便。 1.3.2　血糖测定　腹腔注射STZ或柠檬酸缓冲液2 d后及实验结束时分别进行空腹状态下剪尾取血,测其血糖值,为注射后血糖。4周后处死大鼠测其血糖为终血糖。 1.3.3　血清胰岛素、胰高血糖素水平测定　实验结束时禁食12h,20%的乌拉坦腹腔麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清后放射免疫分析法测定。 1.3.4　胰岛素敏感指数(I SI)的计算　参照李光伟等[4,5]的方法,I SI=ln[1/F BG×F I N S],F BG为空腹血糖,F I N S为空腹胰岛素。 1.4　统计学处理　采用SPSS11.5统计软件对实验数据进行处理,数据以均数±标准差( x±s)的形式表示,用t检验分析。 2　结果 2.1　两组大鼠一般状况　对照组大鼠生长良好,体质量持续增加,无其他症状。模型组大鼠在注射STZ后体质量呈缓慢增长、逐步较前下降、消瘦走势,观察发现有 ? 5 ? 临床和实验医学杂志　2009年4月　第8卷　第4期