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乙肝病毒外膜大蛋白检测及其对判定HBV DNA复制的意义

乙型肝炎抗病毒治疗的适应证概要

乙型肝炎抗病毒治疗的适应证近年来，随着乙型肝炎抗病毒药物的研究进展，人们越来越认识到抗病毒治疗的重要性。我国《慢性乙型肝炎防治指南》（简称：《指南》）中指出：“慢性乙型肝炎治疗的总体目标是：最大限度地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。”“慢性乙型肝炎治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化和对症治疗，其中抗病毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就应进行规范的抗病毒治疗。”本节的重点是讨论乙型肝炎抗病毒治疗的适应证。一、乙型肝炎治疗的难点乙肝是在全世界广泛流行的一种传染病，但到目前为止，还没有一种药物能够杀死或消灭乙肝病毒，使慢性乙肝病毒感染者痊愈。乙肝治疗为什么那么难呢？ 1．乙肝病毒的原始模板cccDNA很难清除这首先要从乙肝病毒复制说起。乙肝病毒颗粒由外膜和内核两部分组成，完整的乙肝病毒颗粒是直径42纳米的球形（图1），病毒的外膜厚7纳米，由蛋白质和膜脂质组成，称作乙肝病毒表面抗原（HBsAg）。病毒的中心部分直径约28纳米，为病毒的核心，其中包括核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg），内核中心含有病毒基因（HBV DNA）和DNA聚合酶（HBV DNA-p）。 HBV DNA是由两条螺旋状DNA链围成的环形结构。这两条DNA链一条叫“正链”，一条叫“负链”。较长的负链已经形成了完整的环状；较短的正链没有封闭，呈半环状。在感染肝细胞之后，这条半环状的DNA链要以负链为“模板”复制、延长，形成完整的环状。这样，乙肝病毒基因就形成了一个完全环状的双股DNA。我们把这种DNA称作共价闭合环状DNA，即cccDNA。cccDNA是病毒复制的“原始模板”。“模板”形成后，病毒基因会以其中的一条cccDNA为“模板”，一段基因又一段基因地复制，形成负链、正链。最后再装配到一起形成新的乙肝病毒颗粒。新的病毒基因再从肝细胞中释放出来，感染更多的肝细胞（图2）。HBV DNA聚合酶作用就是“催化”乙肝病毒基因按照一定的“模板”复制出螺旋状的病毒DNA链。没有这种聚合酶的作用，乙肝病毒复制就会停止。

乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs) 检测的临床价值

乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)检测的临床价值董　梅，吴　纯，韩　冰，耿　欣，刘彬杰，聂荷香解放军第309医院，北京　100091 摘要：目的探讨乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)诊断乙型肝炎的意义。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)、乙肝病毒前S1(PreS1)，采用荧光定量PCR方法检测HBV DNA。结果 HBeAg阳性样本中乙型肝炎病毒大蛋白与HBV DNA的检出无显著性差异(χ2=2.46，P>0.05)；乙肝病毒前S1与HBV DNA的检出有显著性差异(χ2=17.34，P<0.01)；乙型肝炎病毒大蛋白吸光度值(OD值)与HBV DNA拷贝数相关系数r=0.912，P<0.05。在HBeAg阴性样本中LHBs的吸光度均值和阳性率均呈线性增加，Pre S1的吸光度均值以及阳性率与HBV DNA拷贝数均不相关。结论乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)与HBV DNA有良好正相关，与乙肝前S1(Pre S1)相比，LHBs可更好反映临床乙肝病毒复制水平。关键词：乙型肝炎病毒；大蛋白；酶联免疫吸附测定；聚合酶链反应中图分类号：R 446.6 文献标识码：A 文章编号：1005-1139(2011)10-0984-02 DOI: CNKI:11-3275/R.20110627.1634.005网络出版时间：2011-06-27 16:34:04 网络出版地址：https://www.wendangku.net/doc/9110902072.html,/kcms/detail/11.3275.R.20110627.1634.005.html Hepatitis B virus large protein in diagnosis of Hepatitis B DONG Mei, WU Chun, HAN Bing, GENG Xin, LIU Bin-jie, NIE He-xiang Chinese PLA 309 Hospital, Beijing 100091, China The first author: DONG Mei. Email: dongmei0659@https://www.wendangku.net/doc/9110902072.html, Abstract: Objective To study the role of hepatitis B virus large protein(HBVLP) in diagnosis of hepatitis B. Methods HBVLP and HBV PreS1 were detected by ELISA, and HBV DNA was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PCR). Results No significant difference was found in HBVLP and HBV DNA(χ2=2.46, P>0.05) while a significant difference was observed in HBV PreS1 and HBV DNA(χ2=17.34, P<0.01) in HBeAg positive samples. The OD value was closely correlated with the copies of HBV DNA (r=0.912, P<0.05). The mean OD value and positive rate for HBVLP were linearly increased in HBeAg negative samples. However, the mean OD value and positive rate for HBV PreS1 were not related the copies of HBV DNA. Conclusion HBV LP is positively related with HBV DNA and can show a higher HBV replication level than HBV PreS1. Key words: hepatitis B virus; large protein; enzyme-linked immunosorbent assay; polymerase chain reaction 目前临床用于检测乙型肝炎病毒的方法主要有乙肝两对半(HBV M)血清标志物和HBV DNA。有研究者对HBeAg阴性的乙肝患者平均为期9(1-18.4)年的随访，发现其进展为肝硬化和肝癌(HCC)的发生率分别为23%和4.4%[1]。我国约三分之一的活动期乙肝患者中HBeAg为阴性，而病毒仍处于复制活跃状况[2]。因此加强对HBeAg阴性慢性乙肝患者的体内病毒复制水平的监测具有重要意义。乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large envelope protein，LHBs)是乙型肝炎病毒包膜蛋白的重要组成部分。研究表明，LHBs具有复杂跨膜构象拓扑结构，并可反式激活细胞内HBV的再复制，与HBV的感染、复制及预后密切相关[3-4]。因此，检测LHBs对于判定体内HBV的复制情况可能具有重要的临床意义。本文研究了乙肝患者血清中LHBs、乙肝前S1与HBV DNA的关系，探讨乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)检测的临床意义。材料和方法 1材料　选取本院2009年10月-2010年10月门诊和住院乙肝患者188例，其中男149例，女39例，年龄15-77岁，平均45.23岁。所有标本静脉抽血离心后血清与血细胞分离，于-80℃保存备用。 2方法　乙肝两对半(HBV M)指标采用罗氏公司C6000仪器(电化学发光法)检测，LHBs采用酶联免疫法检测，试剂由北京热景生物技术有限公司提供；乙肝前S1试剂购自上海长征医学科技有限公司，HBV DNA采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)定量检测，试剂购自复兴诊断公司，所有试剂均在有效期内，试验操作严格按照说明书进行。 3统计学处理　采用SPSS12.0软件进行统计学分析。各种检测指标阳性率的比较均采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。收稿日期：2011-03-02 修回日期：2011-05-10 作者简介：董梅，女，硕士，主任医师，主任。研究方向：检验诊断和结核分支杆菌依赖性研究。Email: dongmei0659@https://www.wendangku.net/doc/9110902072.html,

2015版乙肝防治指南全文V3.0

题目待定《慢性乙型肝炎防治指南》（2015年版）慢性乙型肝炎的预防、诊断和抗病毒治疗指南中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病分会 2015年10月22日本指南为规范慢性乙型肝炎的预防、诊断和抗病毒治疗而制定，涉及慢性乙型肝炎其它治疗策略和方法请参阅相关的指南和共识。中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2005年组织国内有关专家制定《慢性乙型肝炎防治指南》（第一版），并于2010年第一次修订。近5年来，国内外有关慢性乙型肝炎的基础和临床研究取得很大进展，为此我们对本指南进行再次修订。本指南旨在帮助临床医生在慢性乙型肝炎诊断、预防和抗病毒治疗中做出合理决策，但不是强制性标准，也不可能包括或解决慢性乙型肝炎诊治中的所有问题。因此，临床医生在面对某一患者时，应在充分了解有关本病的最佳临床证据、认真考虑患者具体病情及其意愿的基础上，根据自己的专业知识、临床经验和可利用的医疗资源，制定全面合理的诊疗方案。我们将根据国内外的有关进展情况，继续对本指南进行不断更新和完善。本指南中的证据等级分为A、B和C 三个级别，推荐等级分为1和2级别（表1，根据GRADE分级修订）表1 推荐意见的证据等级和推荐等级级别详细说明证据级别 A高质量进一步研究不大可能改变对该疗效评估结果的信心 B中等质量进一步研究有可能使我们对该疗效评估结果的信心产生重要影响 C低质量进一步研究很有可能影响该疗效评估结果，且该评估结果很可能改变

推荐等级 1 强推荐充分考虑到了证据的质量、患者可能的预后情况及治疗成本而最终得出证据价值参差不齐，推荐意见存在不确定性，或推荐的治疗意见可能会 2 弱推荐有较高的成本疗效比等，更倾向于较低等级的推荐一、术语慢性HBV感染(chronic HBV infection)—HBsAg和（或）HBV DNA阳性6个月以上。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B)—由乙型肝炎病毒持续感染引起的肝脏慢性炎症性疾病。可以分为HBeAg阳性慢性乙型肝炎和HBeAg阴性慢性乙型肝炎。 HBeAg阳性慢性乙型肝炎(HBeAg positive chronic hepatitis B)—血清HBsAg阳性、HBeAg 阳性、HBV DNA阳性，ALT持续或反复升高，或肝组织学检查有肝炎病变。 HBeAg阴性慢性乙型肝炎(HBeAg negative chronic hepatitis B)—血清HBsAg阳性，HBeAg 阴性，HBV DNA阳性，ALT持续或反复异常，或肝组织学检查有肝炎病变。非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carrier)—血清HBsAg阳性，HBeAg阴性，HBV DNA低于检测下限，1年内连续随访3次以上，每次至少间隔3个月，ALT均在正常范围。肝组织学检查显示：组织学活动指数(HAI)评分< 4或根据其他的半定量计分系统判定病变轻微。乙型肝炎康复(resolved hepatitis B)—既往有急性或慢性乙型肝炎病史，HBsAg阴性，HBsAb阳性或阴性，抗-HBc阳性，HBV DNA低于最低检测限，ALT在正常范围。慢性乙型肝炎急性发作(acute exacerbation or flare of hepatitis)—ALT升至正常上限10倍以上。乙型肝炎再活动(reactivation of hepatitis B)—常常发生于非活动性HBsAg携带者或乙型肝炎康复者中，特别是在接受免疫抑制治疗或化疗时。在HBV DNA持续稳定的患者，HBV DNA 升高≥2 log10 IU/mL，或者基线HBV DNA 阴性者由阴性转为阳性且≥100 IU/mL，或者缺乏基线HBV DNA者HBV DNA≥20 000 IU/mL。往往伴有肝脏炎症坏死再次出现，ALT升高。HBeAg阴转(HBeAg clearance)—既往HBeAg阳性的患者HBeAg消失。 HBeAg血清学转换(HBeAg seroconversion)—既往HBeAg阳性的患者HBeAg消失、抗-HBe 出现。 HBeAg逆转(HBeAg reversion)—既往HBeAg阴性、抗-HBe阳性的患者再次出现HBeAg。组织学应答(histological response)—肝脏组织学炎症坏死降低≥2分，没有纤维化评分的增

乙型肝炎病毒大蛋白检测及其临床意义

乙型肝炎病毒大蛋白检测及其临床意义乙型肝炎病毒（HBV，hepatitis B virus）大蛋白存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与病毒复制密切相关，具有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放有关[1]。有研究表明HBV 大蛋白具有双重跨膜拓扑结构[2]，针对HBV大蛋白特殊构象制备的单克隆抗体，可以更准确地检测血清中乙肝病毒外膜大蛋白。为了解乙肝患者血清中HBV大蛋白与HBV DNA的相关性，我们对179例HBV感染者血清HBV大蛋白进行了检测。 1 材料与方法 1.1 研究对象179例病例为本院2008年6月-2009年11月住院患者，男性122例，女性57例，年龄17-65岁，平均年龄为36±1 2.5岁，诊断标准符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准。 1.2标本来源血液标本由真空采血管采集、分离血清后冻存于-20℃保存。 1.3主要试剂HBV DNA检测采用广州中山大学达安基因股份有限公司试剂；HBV“二对半”检测采用时间分辨荧光免疫分析法，试剂购置苏州新波生物技术有限公司；HBV大蛋白定量检测试剂由北京热景生物技术有限公司提供。 1.4主要方法HBV-LP检测试剂应用结构生物学和免疫学技术，筛选出针对乙型肝炎病毒大蛋白前S区立体构象型表位的高特异性、

高亲和力的单克隆抗体，并在微孔条上预包被，配以辣根过氧化物酶标记抗体，TMB显色，采用双抗体夹心法原理检测。 1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析，HBV-LP和HBV DNA阳性检出率比较采用配对计数资料x2检验。 2 结果 2.1HBV DNA与LP阳性率比较179例HBV感染者血清同步检测HBV DNA和HBV LP，HBV DNA（+）144例（80.4%），HBV LP（+）145例(81.0%)，其中HBV DNA（+）、HBV LP（+）126例，HBV DNA（+）、HBV LP（-）18例，HBV DNA（-）、HBV LP（+）19例，HBV DNA（-）、HBV LP（-）16例，以HBV DNA和HBV LP作为判断病毒复制的指标，差异无统计学意义 (x2=0.01,P>0.05)。 2.2 HBV LP与HBeAg阳性率的比较 144例HBV DNA阳性患者中，HBV LP（+）126例（87.5%），HBeAg（+）73例（50.7%）,其中HBV LP （+）、HBeAg（+）65例，HBV LP（+）、HBeAg（-）61例，HBV LP（-）、HBeAg（+）8例，HBV LP（-）、HBeAg（-）10例，以HBV DNA和HBeAg 作为判断病毒复制的指标，差异有统计学意义（x2=81.3,P<0.001）。 3 讨论目前HBeAg和HBV DNA水平是反映患者乙肝病毒复制的主要指标，其中有HBV DNA定量检测对抗病毒治疗效果及预后判断尤其重要。但在实际过程中，往往出现HBV病毒变异，使得患者血清中保留着低水平的HBV DNA。Michael Bruns等[3]通过鸭肝模型研究也发现，含有嗜肝病毒血清的感染性不仅依赖于具有感染性的Dane颗粒的多少，

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV+DNA的关系

万方数据

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA的关系作者：郝建华，张健华，冯静霞，吴冠瑜， HAO Jian-hna， ZHANG Jian-hua， FENG Jing-xia， WU Guan-yu 作者单位：广东省深圳市第六人民医院检验科,518052 刊名：实用医学杂志英文刊名：THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE 年，卷(期)：2008,24(17) 被引用次数：2次参考文献(8条) 1.Bruss V.Gerhardt E.Vieluf K Functions of the large hepatitis B vires surface protein in viral particle morphogenesis 1996(01) 2.Bruss V.Vieluf K Functions of the Internal Pre-S Domain of the Large Surface Protein in Hep-atitis B Virus Particle Morphogenesis[外文期刊] 1995(11) 3.Brass V Envelopment of hepatitis B virus nucleocapsid[外文期刊] 2004(02) https://www.wendangku.net/doc/9110902072.html,mbert C.Mann S.Prange R Assessment of determinants affecting the dual topoi of hepadna-viral large envelope proteins 2004 5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会.中华医学会肝病学分会病毒性肝炎防治方案[期刊论文]-中华传染病杂志2001(01) 6.Brans M.Miska S.Chassot S Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles[外文期刊] 1998(02) 7.Foo N C.Ahn B Y.Ma X Cellular vacuolization and apoptosis Induced by hepatitis B virus large surface protein[外文期刊] 2002(06) 8.孙颖.辛绍杰.雷厉乙肝病毒外膜大蛋白检测对判定HBV DNA复制的意义[期刊论文]-世界华人消化杂志 2006(03)引证文献(2条) 1.郝建华.张然蓉.张健华.张庆侠.冯静霞.谢世超乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白检测的临床价值探讨[期刊论文]-实用医学杂志 2010(3) 2.周晖.李琴.吴长有.江楚文.陈学福慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞特异产生γ-干扰素的研究[期刊论文]-实用医学杂志 2009(24) 本文链接：https://www.wendangku.net/doc/9110902072.html,/Periodical_syyxzz200817064.aspx

慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识

?指南?慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家委员会自2005年12月中国《慢性乙型肝炎防治指南》发布以来［1］，国内外对于乙型肝炎病毒（HBV）及其相关慢性肝病的研究不断深入。亚太肝脏学会（APASL）、欧洲肝脏学会（EASL）及美国肝脏病学会（AASLD）陆续发布了各自更新的慢性乙型肝炎（CHB）临床指南及共识［2-4］。因此，《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》、《临床肝胆病杂志》与《中国肝脏病杂志（电子版）》编辑部组织国内部分专家，对CHB治疗进展进行总结，形成了《慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识》。《共识》经专家委员会讨论，可作为当前CHB抗病毒治疗的指导。然而CHB抗病毒治疗的疗效受多种因素影响，只有在规范化基础上进行个体化治疗才能达到最佳治疗效果。随着相关临床证据的不断积累，专家委员会将对《共识》内容进行更新。本《共识》基于目前CHB抗病毒治疗临床实践及研究的最新成果，遵照循证医学的原则编写，共识的循证医学证据等级见表2。表!"文中出现的缩写对照中文名称缩写英文全称乙型肝炎病毒慢性乙型肝炎HBV CHB hepatitis B virus chronic hepatitis B 乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg surface antigen of hepatitis B virus 乙型肝炎病毒e抗原HBeAg e antigen of hepatitis B virus 丙氨酸氨基转移酶ALT aianine aminotransferase 天门冬氨酸氨基转移酶AST aspartate aminotransferase 肝细胞癌核苷（酸）类似物HCC NUCs hepatoceiiuiar carcinoma nucieos（t）ide anaiogue 干扰素IFN interferon 聚乙二醇化干扰素Peg-IFN pegyiated interferon 表#"数据类型相应的循证医学证据等级注释标记证据分级高质量证据进一步研究，结果评估时不可能改变置信度A 中等质量证据进一步研究在评估结果时可能存在对置信度有影响的，可能改变评估B 低质量证据进一步研究在评估结果时极可能对置信度有影响，很可能改变评估，任何评估均不确定C 建议的分级强烈的建议影响建议力度的因子包括证据质量、推定患者重要的结果及花费1 较弱的建议参数选择和值的变异性大或有更不确定性：认定是更弱的建议，确定建议的不可靠、高费用或资源消耗 2 一、背景 HBV感染可引起肝脏炎症和纤维化，严重者可发展为肝硬化甚至肝癌，已经