LSL-KRas G12D小鼠肺癌or胰腺癌模型-华夏凯奇

LSL-KRas G12D小鼠肺癌or胰腺癌模型

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大致如下图：

在k-ras locus上敲入了LSL-KrasG12D, 并在前面加上了一下stop codon, 通过小鼠鼻腔注入Adeno-Cre病毒，诱导肺中的K-rasG12D表达，从而产生肺癌。K-rasG12D的表达是被内源性的启动子调节的。如果全身性用Cre诱导的话，小鼠会得胰腺癌。(小鼠由Tyler Jacks实验室制作)。LSL=Loxp-Stop-Loxp

重要的参考文献：Genes Dev. 2001 Dec 15;15(24):3243-8.

we used a Lox–Stop–Lox K-ras conditional mouse strain (referred to as LSL-K-ras G12D), in which expression of oncogenic K-ras is controlled by a removable transcriptional termination Stop element.( https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,/pubmed/11751630 ).

这里有比较详细的信息https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,/available_details.asp?ID=01XJ6

The endogenous K-ras locus is targeted in the LSL-K-ras G12D strain and, therefore, endogenous levels of oncogenic K-Ras G12D protein are expressed following removal of the Stop element. Removal of the Stop element from the LSL-K-ras G12D allele was achieved by the use of an AdenoCre, which allows control of the timing, location, and multiplicity of tumor initiation.

Strain Description:These mice carry a latent point-mutant allele of Kras2 (K-rasG12D). Cre-mediated recombination leads to deletion of a transcriptional termination sequence (Lox-Stop-Lox) and expression of the oncogenic protein.

Intranasal infection with an adenovirus encoding Cre resulted in a very high frequency of lung tumors. Homozygotes die in utero.

Husbandry: Breeder pairs are supplied as a heterozygote (male or female) x wildtype C57BL/6 mate. This Kras allele is non-functional in its germline configuration, therefore the mice are maintained by backcrossing heterozygous

animals to C57BL/6. Average litter size is 9.

Donating

Investigator:

Dr. Tyler Jacks

Key Reference: Jackson EL, Willis N, Mercer K,Bronson RT, Crowley D, Montoya R, Jacks T, and Tuveson DA. 2001. Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of K-ras. Genes and Development 15: 3243-3248

PMID: 11751630 [PubMED Abstract]

Related References: Johnson L, Mercer K, Greenbaum D, Bronsont RT, Crowley D, Tuveson DA, and Jacks T. 2001 Somatic activation of the K-ras oncogene causes early onset lung cancer in mice. Nature 410:1111-1116 PMID: 11323676 [PubMED Abstract]

Tuveson DA, Shaw AT, Willis NA, Silver DP, Jackson EL, Chang S, Mercer KL, Grochow R, Hock H, Crowley D, Hingorani SR, Zaks T, King C, Jacobetz MA, Wang L, Bronson RT, Orkin SH, DePinho RA, Jacks T. 2004. Endogenous oncogenic K-ras(G12D) stimulates proliferation and widespread neoplastic and developmental defects. Cancer Cell 5, 375-378. PMID:15093544 [PubMED Abstract]

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 [摘要] 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。 方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种，定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹

股沟淋巴结肿大情况，并于接种后 21 天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结称重并测量大小，同时观察肿瘤的形态特点，生长方式，肺、肝、肾等脏器，并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。 结果:21 天观察，实验使用 10 只小鼠，最终存活 8只，其中形成肿块 7 只（3只形成的肿块较大），成瘤率 70%，淋巴结转移率 70%。肉眼观察，较大肿瘤 2*1.5*1.3cm，灰白色，质地较硬，从中间切开，发现肿块大部分坏死，中心部分出现腔，腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察，坏死组织粉染，轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性：瘤细胞大小和形态不一致，细胞核体积增大并呈现多形性，核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多，核浆比失调，胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移，无器官转移，且具有高转移力。 [关键词]HCa-F（高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移 [前言]研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大，在亚非国家较常见，我国的发病率较高，属于常见的肿瘤之一。近年来，我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩，一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效[1]。随着临床治疗经验的积累，逐渐

建立小鼠肿瘤模型的研究进展

建立小鼠肿瘤模型的研究进展 摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。 关键字：肿瘤，动物模型，小鼠 肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择 可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件 （1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。 （2）制作模型的方法简单易行。 （3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。 （4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择 现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,/journal/wjcr https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞 移植瘤小鼠模型 韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。

复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响

复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响 发表时间：2012-11-06T10:56:14.590Z 来源：《中外健康文摘》2012年第24期供稿作者：姜家康陈睿 [导读] 复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。 姜家康陈睿(通讯作者)迟文成（黑龙江中医药大学附属第一医院 150040） 【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0067-03 【摘要】目的复原抗癌汤对H22原发性肝癌小鼠的抑制作用及其可能机制。方法建立H22原发性肝癌小鼠模型，随机分为空白对照组、荷瘤对照组、化疗组、中药低、中、高剂量（4.48、8.96、17.92g/kg·d）组进行治疗，检测各组肿瘤的生长情况；HE染色观察肿瘤组织和肝组织的病理变化；免疫组化法检测肿瘤组织MMP-9的表达。结果与荷瘤对照组比较，复原抗癌汤各剂量以及顺铂对原发性肝癌均有抑制作用，抑瘤率分别为53.12%、32.87%、37.51%、39.82%（P均＜0.05）；HE染色见化疗组、中药治疗组癌组织较荷瘤组生长局限，核仁固缩，核浆比较对照组小，形态较规则，核仁边移现象少见；免疫组化见中药治疗组与化疗组比较其MMP-9蛋白表达强阳性率高于后者（P ＜0.05）。结论复原抗癌汤通过抑制MMP-9的生成，抑制基质降解，最终抑制肝癌细胞的血性转移。 【关键词】复原抗癌汤原发性肝癌 mmP-9 原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，素有“癌中之王”之称，早期症状隐匿，发现时已属中晚期，病死率高，这与其具有高度侵袭与转移关系密切。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1免疫组化试剂：即用型SABC免疫组化染色试剂盒、浓缩型DAB显色试剂盒、小鼠用MMP-9蛋白免疫组化检测试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.1.2实验仪器：主要包括：日本OLYMPUS公司超薄切片机、日本日立公司透射电子显微镜H－600、中国光学仪器厂倒置式生物显微镜XSJ-D。 1.1.3实验药品（1）复原抗癌汤： 1.75g/装，江苏江阴天江药业特制提供。其主要成分如下：(西洋参、红豆杉、黄芪、白术、半枝莲、竹茹、薏苡仁、厚朴、柴胡、白花蛇舌草)复原抗癌汤由以上药味经特定的制备工艺和流程提纯制成。(2）顺铂（DDP）：20mg/支，山东齐鲁制药有限公司生产，批号：7050172DC。(3）生理盐水：500ml，哈尔滨制药六厂生产。 1.2方法 1.2.1动物分组选用BALB/C小鼠120只(雌雄各半)，体重18～20g，由哈尔滨医科大学肿瘤附属医院实验动物中心提供（合格证号：SCXK（黑）2006/008）。随机分组：A组（空白对照组）、B组（荷瘤对照组）、C组（化疗组）、D组（中药低剂量对照组）、E组（中药中剂量对照组）、F组（中药高剂量对照组）,每组10只。 1.2.2造模瘤株：H22原发性肝癌荷瘤小鼠购自长春生物试剂动物实验中心。将H22原发性肝癌荷瘤小鼠[1]后脱颈处死，在超净工作台上分离瘤体，将实体瘤部分放入75％酒精浸泡消毒10min后，取生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水洗净后剪碎加生理盐水研磨，过300目尼龙网制成单细胞悬液，台盼蓝（tryan-blue）染色试验计算后细胞数>95%，用吸管轻吹打待测细胞悬液，取少许在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，按白细胞计数法，于低倍镜下计数4角的4个大方格内活细胞总数，按下式计算： 用生理盐水调整细胞浓度至1×107/ml，取1ml注射器吸取0.2mL瘤细胞悬液，按照下述方法接种于B组、C组、D组、E组、F组BALB/C 小鼠肝左叶内，制成原位原发性肝癌模型[2]。 1.2.3给药 A组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；B组：予0.2ml/d生理盐水灌胃，每日一次；C组：予顺铂3mg/kg·d，每只0.3ml 腹腔注射，隔日一次，共7次；D组：予复原抗癌汤按4.48g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；E组：予复原抗癌汤按8.96g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次；F组：予复原抗癌汤按17.92g/kg·d药量灌胃，每次0.2ml，每日一次。各组于接种日起第3天开始给药，按上述方式给药达到治疗次数后停药，并于次日进行实验动物取材。 1.2.4取材停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开腹腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，随后以中性福尔马林固定12小时，备用。 1.3观察指标 1.3.1通过计算抑瘤率来观测复原抗癌汤对肿瘤生长的抑制作用 停药次日，颈椎脱位法处死小鼠，打开胸腔，暴露肝组织及肿瘤组织，无菌摘取瘤体，电子天平称取瘤重，依次做标记，按公式[3]: 抑瘤率=*100% 计算抑瘤率。 1.3.2观察小鼠肿瘤组织及肝组织形态学改变 将已固定的肿瘤组织及肝组织取出；逐级酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，6μm厚切片；HE染色，中性树脂胶封片，观察并比较各组小鼠肝组织和肿瘤组织的形态学有无变化。 1.3.3免疫组化法检测肿瘤组织的MMP-9蛋白表达 免疫组化法检测原发性肝癌组织中MMP-9蛋白的表达，参考试剂盒说明书。 判断标准：经免疫组化法各步骤处理后MMP-9阳性细胞的胞浆和/或胞核呈淡黄色或棕黄色，采用二级计分法进行阳性细胞计数[4]，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5 个视野，每个视野计数100 个细胞，计算每张切片阳性细胞百分率，阳性细胞数＜ 5%，0 分;5%～25%，1 分; 25%～50%，2分; 50%～75%，3 分; ＞75%，4 分。染色强度: 淡黄色1 分; 棕黄色2 分; 棕褐色3分; 两者相加: 0～1 分为阴性

Sorafenib治疗进展期原发性肝癌[1]

实用临床医药杂志 ?154?Journal of Clinical Medicine in Practice2010年第14卷第17期 综　述 Sorafenib治疗进展期原发性肝癌 吴小忠,杨　民 (江苏省宜兴市第二人民医院普外科,江苏宜兴,214221) 关键词:Sorafenib;进展期原发性肝癌;治疗 中图分类号:R73517 文献标识码:A 文章编号:1672O2353(2010)17O0154O03 1　原发性肝癌的治疗现状 原发性肝癌(PLC)包括肝细胞性肝癌和胆管细胞性肝癌,就世界范围来看,它是第5大恶性肿瘤,患者主要集中在亚洲和非洲。它发病的危险因子前2位是HBV 和HCV感染,而我国病毒性肝炎患者和肝炎病毒携带者数目庞大,PLC发病率居世界各国之首,是PLC发病大国。PLC在我国是最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于肺癌,居常见恶性肿瘤第2位[1]。目前对于PLC的治疗包括以外科治疗为主的综合性治疗方法。外科治疗是目前早期PLC首选且最有效的方法[2O3],主要是手术切除(病灶切除和部分肝切除)、肝移植和局部微创治疗。对于小肝癌(≤5cm),目前外科治疗效果较好,国内最近大样本资料显示其手术后5年生存率可达58.20%,10年生存率达38.47%[4]。但是由于PLC起病隐匿,早期诊断困难,目前仅有30%左右的PLC患者可以接受外科手术治疗,大多数患者在就诊时已达局部晚期或远处转移,丧失了最佳的治疗时机,缺乏有效的治疗手段和药物。虽然介入栓塞化疗、全身化疗、射频消融、微波治疗等其他各种治疗在临床广泛应用,但是远期疗效仍不佳。肝移植或许是治疗中晚期PLC的希望之一,有报道PLC 肝移植术后1年及3年生存率分别为84.01%及71. 40%[5],但是它面临的技术难题是手术前难以确定有无远处微小转移以及手术后肝癌的高复发率。同时在我国存在供肝来源、治疗经费、合并肝炎病毒感染等问题,许多肝癌患者在等待移植中病情恶化甚至死亡,或者移植手术后肝癌复发。因此外科手术切除和肝移植虽然有可能治愈肝癌,但治愈率仅有15%左右[6],难以手术切除或者已有远处转移的肝癌患者中位生存时间仅有数月7。从目前的情况来看,尚无理想的PLC治疗方法。因此亟待开发更多的治疗策略以摆脱PLC治疗的困境,改善PLC患者的预后。 2　Sorafenib是多靶点肿瘤抑制药物 2.1　S orafenib介绍、作用原理 PLC的发生发展和许多的基因突变以及信号传导通路密切相关,如异常癌基因的激活和抑癌基因的失活[8]、细胞增值信号Raf/MAP K-ER K传导通路的持续活化[9]、血管内皮生长因子异常分泌导致肿瘤血管的持续增生等[10]。针对这些分子机制,目前PLC的分子靶向治疗渐露锋芒。所谓分子靶向治疗是以肿瘤发生发展中的关键大分子为靶向,特异性阻断肿瘤细胞的信号转导,来控制其基因表达和改变其生物学行为;或者通过抑制肿瘤血管生成,从而抑制肿瘤细胞的生长和繁殖,积极发挥抗肿瘤作用。 S orafenib(索拉非尼,商品名Nexava),是Bayer和Onyx公司共同研制的一种多靶点的生物靶向新药,临床前研究和临床试验提示索拉非尼有广泛的抗肿瘤作用[11]。S orafenib属于多酶抑制剂,能抑制RAF O1、BRAF 丝氨酸/苏氨酸激酶的活性,以及血管内皮生长因子(V EGF O2、V EGF O3)、血小板衍化生长因子(PD GF O p)、受体酪氨酸激酶KIT、Fms样酪氨酸激酶O3(FL T O3)等多种受体的酪氨酸激酶活性。S orafenib具有抑制肿瘤细胞增殖和血管形成的双重作用,即它一方面可以抑制受体酪氨酸激酶KIT和FL T O3以及Raf/MEK/ER K途径中丝氨酸/苏氨酸激酶,抑制肿瘤细胞增生;另一方面它可以通过上游抑制受体酪氨酸激酶V EGFR和PD GFR,及下游抑制Raf/MEK/ER K途径中丝氨酸/苏氨酸激酶,抑制肿瘤新生血管的形成和切断肿瘤细胞的营养供应而达到遏制肿瘤生长的目。因此它可以起到抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤细胞增值的双重作用[12]。 2.2　S orafenib对其他晚期肿瘤的作用 S orafenib于2005年12月20日被FDA批准用于治疗晚期肾细胞癌,其疗效得到肯定。一项前瞻性、随机、双盲、全球多中心的III期临床试验说明了它的疗效[13]。903例晚期肾细胞癌(RCC)患者随机分为2组,一组接受S orafenib治疗,另一组接受安慰剂治疗。结果表明,S o2 rafenib组的PFS(无进展生存时间)较安慰剂组延长1倍(P<0.01)。sorafenib组患者在总体生存方面与安慰剂组相比获得39%的改善(P<0.05)。PFS结果与安慰剂组相一致,死亡风险降低28%,表明了S orafenib改善生存的趋势。 收稿日期:2010-01-20 基金项目:宜兴市科技局民生科技促进计划资助项目(2008-09);江苏省“六大人才高峰”资助项目(09-B-075)

三种小鼠实验性高脂血症模型效果的比较分析

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html, 三种小鼠实验性高脂血症模型效果的比较分析 作者：哈建利张明军夏涛 来源：《科教导刊》2015年第26期 摘要目的：筛选出一种理想的小鼠高脂血症动物模型造模方法。方法：参考相关文献选取三种小鼠高脂血症动物模型配方并略作调整，制成乳剂给小鼠灌胃，分别在2w、4w、6w时取尾静脉血，测定血清中TG、TC、LDL和HDL含量。结果：三种高脂配方均可不同程度地导致小鼠血清中脂代谢紊乱，形成高血脂动物模型。结论：在20%三磷酸甘油酯和10%胆固 醇的基础上加入3%胆酸钠，灌胃4w就可形成理想的小鼠高脂血症动物模型。 关键词高脂血症小鼠模型分析 中图分类号：R589 ; 文献标识码：A ; ; DOI：10.16400/https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,ki.kjdkz.2015.09.078 Comparative Analysis of Three Experimental Rats Hyperlipidemia Models HA Jianli[1]， ZHANG Mingjun[1]， XIA Tao[2] （[1]Nursing School， Hubei Polytechnic Institute， Xiaogan， Hubei 432000; [2]Teaching & Research Section of Environmental Hygiene， Tongji Medical School， Huazhong University of Science & Technology， Wuhan， Hubei 430030） Abstract Objective： To choose an ideally modeling method of rats hyperlipidemia model. Methods： By referring to relevant documents， choose three experimental rats hyperlipidemia models， make into emulsions to perfuse rats' stomachs， and sample tail vein blood after 2 weeks，4 weeks and 6 weeks separately， to measure TG， TC， LDL and HDL contents in blood serum. Results： The three models result in rat lipid metabolic disorder in different degrees， to form hyperlipidemia models. Conclusions： By adding 3% sodium cholate liquor into 20% triglycerol phosphate and 10% cholesterol， perfuse rats' stomachs for 4 weeks to form an ideal rats hyperlipidemia model. Key words Hyperlipidemia; rat; model; analysis 随着我国经济的不断发展，人们生活水平不断提高，高脂血症（hyperlipidemia）的发病率在我国已呈逐年上升趋势。高脂血症是机体脂代谢紊乱的重要标志，也是动脉粥样硬化、心脏

肺癌PDX动物模型建立

恶性肺结节/肺癌PDX动物模型及分子评价体系建立 一．研究背景 1．临床治疗的问题 化疗/靶向治疗中90%达不到预期治疗效果，表明目前的评价肿瘤药物疗效的动物模型局限性较大。肿瘤动物模型对药物反应的预测价值在于该模型能在多大程度上真实模拟人体内的真实肿瘤环境，如肿瘤发生、微血管形成、免疫反应、肿瘤相关性成纤维细胞浸润和肿瘤基质成分，同时还应该能模拟人体药物反应如耐药性的产生。然而目前尚无系统的报道介绍实验预测和最终临床效果的相关性，尤其是针对靶向治疗。 2．PDX模型的选择原则 （1）标本选择时必须到相关的临床分期，多数抗癌药物表现出阶段性特异的效果，如胰腺癌的药物BB-94就是早期时抗肿瘤效果明显，但对进展期无效；（2）需检测药物与肿瘤各成分细胞的相互作用（如：肿瘤细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肿瘤-浸润的免疫细胞等）；（3）应该确定药效学与药代动力学的关系，以确定人和小鼠之间药效和毒性的关系。药代/药效的关系可通过驱动基因突变来确定（如EGFR，Hedgehog信号通路），但对针对基质及肿瘤微环境的药物的价值尚待确定；（4）成功的药效/药代模型用于预测人对药物的剂量反应需要寻找人和小鼠中的生物标志物；（5）如何解决靶向药物的脱靶作用以及非肿瘤组织表面的靶点的作用；（6）如何控制转移及研究药物在抑制转移中的作用。 3．临床研究动物模型现状及问题 目前主要的临床前小鼠模型分为两类：（1）移植瘤模型：包括人肿瘤细胞系接种、自体移植模型和患者来源移植模型；是将人源或同源小鼠肿瘤组织接种于皮下或相关原位部位；此模型针对细胞增殖及存活的药物可用于预测临床效果，但对靶向药物的价值有限，尤其是针对肿瘤微环境的药物；（2）遗传调控小鼠模型：包括遗传调控肿瘤模型和非遗传调控肿瘤模型。通过遗传工程人为导致小鼠基因突变并诱导肿瘤发生，这种模型是基于通过二代测序发现的驱动基因突变建立的突变小鼠模型。

原发性肝癌免疫治疗进展

外科病人的免疫治疗 文章编号：1005-2208（2011）08-0742-04 原发性肝癌免疫治疗进展 蔡秀军1，沈柏用2 中图分类号：R6文献标志码：A 【关键词】肝细胞肝癌;免疫治疗 Keywords hepatocellular carcinoma；immunotherapy 手术切除、经肝动脉插管栓塞化疗、经皮无水乙醇注射、射频消融、肝移植等是目前治疗原发性肝癌［也称肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）］常用的方法，并逐步形成以手术切除为主的综合治疗模式。然而，当前的治疗方法虽然可有效地治疗局部病灶，但不能完全解决复发、转移等问题。随着分子生物学和分子免疫学的发展，基于免疫识别和效应机制而产生的肝癌免疫治疗成为当前的研究热点之一。肿瘤免疫治疗的独特之处在于其通过增强机体免疫反应，激发肿瘤特异性免疫，打破免疫耐受，以达到延缓肿瘤进展，减少肿瘤的复发、转移，甚至治愈肿瘤的目的，有望成为肝癌综合治疗模式中的重要组成部分。目前，一些免疫治疗途径与方法已取得发展，并进入了不同阶段的临床试验，其治疗的安全性和疗效已在临床应用中得到初步显现。当然，由于肿瘤发生机制尚未完全明了，除少部分免疫原性较强的肿瘤外，绝大部分肿瘤免疫原性较弱，且与正常组织有交叉，给免疫治疗的开展带来一些困难。根据机体抗肿瘤免疫效应机制，肿瘤免疫治疗主要分为主动免疫治疗和被动免疫治疗两大类。同时，有些免疫治疗方法既可激发宿主抗肿瘤免疫应答，又可作为外源性免疫效应物质直接作用于肿瘤细胞。此外，人们应用一些免疫调节剂如胸腺肽、细胞因子、卡介苗、短小棒状杆菌、酵母多糖、香菇多糖等，通过非特异性地增强宿主的免疫功能、激活宿主产生抗肿瘤免疫应答，也取得了一定的抗肿瘤效果。 本文对原发性肝癌的免疫治疗现状和进展作一综述。 1主动免疫治疗 肿瘤细胞可能存在着与正常细胞不同的抗原成分，肿瘤的主动免疫治疗主要是利用这种抗原成分诱导机体产生抗肿瘤免疫应答，进而主动杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。值得注意的一点是，机体抗肿瘤免疫的敏感性往往较低，只能检出肿瘤表面免疫原性强的肿瘤抗原，无 法发现能诱导特异性肿瘤免疫应答，但不足以排斥肿瘤的比较弱的肿瘤抗原。同时，该方法还需依靠宿主的免疫功能状态，以保证瘤苗免疫后能激发宿主产生抗肿瘤免疫应答。目前用于临床的肝癌主动免疫主要包括肝癌肿瘤疫苗、重组甲胎蛋白疫苗和树突状细胞（dendritic cell，DC）疫苗。 1.1肝癌肿瘤疫苗肝癌肿瘤疫苗是将自体或同种异体的肝癌细胞经过高温、酶解、基因转染等方法处理后，消除其致瘤性，但保留免疫原性，回输体内，刺激机体产生特异性抗肿瘤免疫反应。Yang等［1］对HCC小鼠模型注射H22自体肿瘤全细胞疫苗以诱导产生特异免疫反应，结果显示其生存时间显著延长。Kuang等［2］开展了一项随机对照的Ⅱ期临床试验，将粒-单核细胞集落刺激因子（granulo-cyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF）、白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）联合甲醛固定的自体瘤组织用于肝癌病人，治疗组2年存活率（18/19）明显高于对照组（13/21），总存活率明显提高（P=0.01）。Peng等［3］对67例肝细胞癌术后病人开展随机对照研究，平均随访33.6个月的结果显示，肝癌肿瘤疫苗治疗组病人术后1、2、3年肿瘤复发率分别为1 2.6%、35.9%、54.0%，显著低于对照组（术后1、2、3年肿瘤复发率分别为31.6%、61.3%、72.1%）。 1.2重组甲胎蛋白疫苗甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）主要来自胚胎时期的肝细胞，在胚胎后期减少，出生后逐渐消失，在成年时仅存微量，但是当肝细胞癌变时，该抗原可重新合成而大量表达，是诊断肝癌的重要指标，同时也是HCC免疫治疗的潜在靶点。但是，由于AFP曾在胚胎期出现过，宿主对其已形成免疫耐受，抗原性很弱，难以引起宿主免疫系统对肿瘤细胞的有效杀伤。2003年，Butterfield等［4］报道了采用4种AFP多肽表位免疫治疗Ⅳ期原发性肝癌的临床试验，结果显示这些AFP多肽表位在高浓度血清AFP的肝癌病人中可引发抗原特异性T细胞免疫应答，但并未观察到临床反应，也未出现血清AFP的降低。进一步研究发现，应用转导AFP多肽的自体DC细胞治疗10例Ⅲ/Ⅳ期肝癌，6例病人出现AFP表位特异性T细胞增加且IFN-γ分泌增加，提示AFP疫苗具有免疫活性［5］。 作者单位：1浙江大学医学院附属邵逸夫医院外科，浙江杭州310016；2上海交通大学医学院附属瑞金医院外科，上海200025通讯作者：蔡秀军，E-mail：cxjzu@https://www.wendangku.net/doc/9f12012356.html,

高血脂动物模型评价及进展

高血脂动物模型评价及进展 高脂血症是动脉粥样硬化和冠心病发病的最重要的因素之一，寻找高脂血症的发病原因，探求其治疗方法已经成了医药学界甚为关注的问题，而选择理想的高脂血症动物模型是开展相关实验、研究脂质代谢紊乱的关键，目前，已应用大鼠、豚鼠、家兔、小鼠、金黄地鼠等实验动物建立了高脂血症动物模型。目前高脂血症动物模型主要有先天性、转基因和化学物质诱导三种，前2种由于来源困难和价格昂贵，限制了其应用，化学物质诱导应用最为广泛，它主要包括两类，一类是利用高脂饮食饲喂或灌胃一段时间后形成的，另一类是利用化学试剂通过静脉或腹腔注射一次形成的，本文将按照不同种类的动物，对采用高脂饮食饲喂或灌胃诱导高脂血症的模型进行综述。 1大鼠 大鼠是目前国内研究人类脂质代谢使用最多的实验动物，其优点是易于饲养管理，抵抗力较强，采样方便，血量丰富，有着明确的遗传背景，便于一次进行较多指标的检测，并且能够明显地反映出实验处理的影响，但是，在国外高脂血症动物模型的研究中，大鼠的使用呈逐渐减少的趋势。 人大鼠 HDL 30 80 LDL 60 10 LDL/HDL 2 0.13 VLDL 10 大鼠血浆中HDL是血浆胆固醇的主要载体，而人类的血浆胆固醇的主要载体是LDL，物种差别比较大，而且，大鼠血浆中CETP（胆固醇酯转运蛋白）的活性仅为人类的14%，此外，大鼠具有对抗动脉粥样硬化形成的能力，因此，在复制高血脂动物模型时，大鼠的使用在减少。 大鼠缺少胆囊，加入胆盐的高脂饲料，会促进大鼠有效吸收胆固醇与脂肪；饲料配方中胆固醇含量与血清TC水平呈正相关，猪油含量的改变会影响TG水平，可见高脂饲料配方中胆固醇和猪油等物质是必不可少的，但猪油含量过高饲料不易成形，且油脂含量过高动物会产生消化不良现象；在部分造模方法中加入一些抗甲状腺素分泌类药物，以降低胆固醇向胆汁酸转化，但是由于该类药物普遍存在对肝脏及淋巴结损害，容易造成肝脏及淋巴结损伤，增加大鼠生存负荷，降低生活质量，并且不符合正常代谢过程，又容易造成模型动物死亡，因此，本

肺积方抗小鼠肺癌转移

肺积方抗小鼠肺癌转移 作者：田建辉, 施志明，周之毅, 黄云胜, 王琳 【摘要】目的：观察肺积方对小鼠肺癌转移的疗效。方法：采用小鼠转移瘤模型，24只C57BL/6小鼠分为模型组、顺铂组和肺积方组，每组8只。模型组以生理盐水0.3 ml灌胃，肺积方组予肺积方煎剂（4 g/ml）0.3 ml灌胃，1次/d，顺铂组予顺铂（0.5 mg/ml）0.52 ml腹腔注射，1次/3 d。干预20 d后，称取小鼠体质量、瘤质量和肺质量，玻片计数法计数肺部转移灶的数目。结果：顺铂组小鼠的体质量低于模型组和肺积方组（P＜0.01），而肺积方组体质量最大；顺铂组和肺积方组的瘤质量低于模型组（P＜0.01）；顺铂组和肺积方组小鼠肺部转移灶数目比模型组少（P＜0.01）。结论：肺积方可以抑制肿瘤生长，减少肺部转移瘤的个数，并具有保持小鼠体质量的作用。 【关键词】肺癌转移中医药肺积方小鼠 Methods: The lung cancer metastasis model of mice was established in this experiment study. Twenty four mice were randomly divided into three groups: untreated group, cisplatin group and Feiji Formula group. Mice in the Feiji Formula group were treated with Feiji Formula decoction; in cisplatin group, with cisplatin by intraperitoneal injection; and in the untreated group, with normal saline (NS). After twenty day treatment, the body and tumor weights as well as the number of metastatic tumors in both lungs of each mouse were measured.

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 【署名】 指导教师：于晓棠 【摘要】 目的：通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。 方法：使用近交系615 小鼠皮下接种腹水型肝癌高淋巴道转移菌株（HCa-F ）进行肿瘤淋巴道转移实验，取其淋巴结观察是否有淋巴道转移以及检测瘤株淋巴结转移能力。取肺肝肾组织切片以观察是否有血道转移。 结果：小鼠腹水型肝癌发生淋巴道转移，转移率为40% ，并可造成相关器官发生病变。 结论：此方法操作简单，结果直观，小鼠腹水型肝癌淋巴道转移率较高。 【关键词】小鼠腹水型肝癌淋巴道转移 【前言】 为更好地了解肿瘤的发病机制、肿瘤与宿主的关系、肿瘤侵袭与转移的过程和治疗措施的有效性,需要建立合适的动物模型。小鼠与人类在遗传学、病理学、 生物学许多特性方面相似,是肿瘤研究的理想动物模型。而且目前的技术能够在 鼠的基因水平上设计与人类疾病相关的基因突变而获得相关疾病模型[1]。小鼠模型是目前可以整合基础和临床肿瘤研究的武器[2], 已应用于肿瘤研究的各个领域。随着对肿瘤认识的不断深入，以及实验动物学的发展和一些新技术的运用，

小鼠肿瘤模型的研究取得了重要进展,并已得到广泛应用。 肿瘤转移是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，淋巴结转移是癌早期最常见的转移方式，且淋巴转移还可以成为进一步血道转移的桥头[3] 。小鼠腹水型肝癌淋巴道转移试验是研究肝癌的淋巴道转移的生物学特性的试验。因为新近流行病学资料表明，我国的原发性肝癌病人数占全世界肝癌病人的一半以上。由于乙型肝炎、肝炎后肝硬化病人众多，致使我国的肝癌发病率和死亡率居高不下， 其死亡率占所有恶性肿瘤的第二位。在上个世纪我国进行大规模的现场筛查， 通过早期发现早期治疗，在临床治疗方面取得了巨大进步，使肝癌有不治之症变成了部分可治之症。近来综合治疗技术的发展，大肝癌缩小后二部切除，又使部分病人获得了可治愈机会。随着临床治疗经验的积累，逐渐意识到及时是小肝癌根治性切除，转移复发仍然是一个十分严峻的问题。术后5 年复发率可高达50% 。解决这些问题，单靠临床经验、病例分析是远远不够的。要涉及到肝癌的实质性问题——肿瘤本身的生物学特性，尤其是其转移的生物学特性。对肝癌转移的生物学行为进行实验研究，必须有一个良好的转移模型系统。 HCa-F 是从小鼠腹水型肝癌细胞株H22 中筛选出的特异性向淋巴道转移的细胞，HCa-F 为高转移细胞株，接种于615 小鼠腋中线皮下淋巴结转移率高于80%[4][5] 。本实验为感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义提供了很好的帮助。 【正文】 方法： 一。实验材料：

姜平平 原发性肝癌的细胞凋亡的研究进展综述

原发性肝癌的细胞凋亡的研究进展综述 [摘要]: 近年来，肿瘤的生物学特性与其细胞凋亡关系密切, 有关肿瘤凋亡的研究日益深入, 细胞凋亡与原发性肝癌关系密切, 多种受体介导的细胞信号传导参与 原发性肝癌细胞调亡的启动, 多种基因参与了原发性肝癌细胞凋亡的调控。[1] 关键词肿瘤原发性肝癌细胞调亡抑制基因产物 前言凋亡（apoptosis）一词由Kerr于1972年首先提出。细胞凋亡是指在特定 时空发生的、受机体严密调控的细胞自杀现象，它呈现其独特的、有别于细胞坏死的形态学和生物化学特点，被普遍认为是有机体维持个体内稳态恒定的极其重要的机制之一。它与有丝分裂相反而又互补，并共同参与调控细胞群落，细胞数量的恒定，其调控机制的失常是包括肿瘤在内的一系列疾病的产生根源。因此细胞凋亡已成为当今细胞生物学尤其是肿瘤学基础与临床研究的前沿与热点。 正文 1 肝脏致病因子与细胞凋亡 1 . 1 病毒感染与肝细胞凋亡 肝炎病毒、腺病毒、疤疹病毒、黄热病毒和砂粒病毒均可引起肝细胞凋亡[2]。这种凋亡可能是宿主对病毒感染的一种防疫反应一被感染的细胞通过凋亡来防止病毒复制。病毒感染后宿主细胞发生凋亡既可以是病毒的直接效应, 也可以是宿主免疫反应的结果[3]。A n d o[4J等用转基因小鼠模型研究证明,乙肝病毒感染鼠肝细胞后, 在细胞毒性T 细胞作用下.触宿主细胞凋亡。在丙肝病毒感染的肝脏, 肝细胞凋亡亦明显增强。有研究者认为, 细胞凋亡在病毒性肝炎的慢性化过程中起着重要作用[2]。而病毒感染也可通过 编码蛋白质来抑制感染细胞的凋亡从而加强病毒的复制[3]。病毒的抗凋亡效应可能是抑制P5 3 基因、过度表达B cJ 一2 及其相似基因和抑制I L 一1 旦转化酶来完成的。 1 . 2 细菌感染与肝细胞凋亡 致病细菌与宿主间的相互作用十分复杂。很多致病菌可同时引起宿主细胞炎症、坏死和细胞凋亡。给致敏小鼠注射革兰氏阴性菌内毒素脂多糖后, 在早期只造成肝细胞凋亡增强, 而晚期则同时出现肝细胞凋亡和坏死。葡葡球菌肠毒素亦可直接造成小鼠肝细胞凋亡。细菌毒素对肝细胞凋亡的影响可能需要肿瘤坏死因子和干扰素了等细胞因子的参与。对肿瘤坏死因子的被动免疫可完全抑制内毒素所致的肝细胞凋亡[5]。 1 . 3 肝中毒性物质与肝细胞凋亡 许多化学物质通过氧化和烷化造成细胞D N A损伤而引起肝细胞凋一亡。许多中毒性肝炎和药物性肝炎的致病因子导致的损伤与细胞凋亡有关[5]。引起胆汁郁积的物质或药物可通过鹅脱氧胆酸盐等来诱导加强细胞凋亡, 而且这一作

医学实验肝癌动物模型的研究进展

万方数据

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医学实验肝癌动物模型的研究进展 作者：陈谦， 孙慧， 李强 作者单位：陈谦(天津医科大学附属肿瘤医院肝胆科,300060)， 孙慧,李强(300060,天津市环湖医院肿瘤科) 刊名： 中华实验外科杂志 英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY 年，卷(期)：2006,23(3) 被引用次数：11次 参考文献(13条) 1.张伟俈动物模型与实验外科[期刊论文]-中华实验外科杂志 2003(4) 2.叶燕丽;周昕熙;王莲桂裸小鼠的繁殖及在肿瘤学中的应用[期刊论文]-实验动物科学与管理 2005(1) 3.Roy J;Couillard S;Gutman M A novel pure SERM achieves complete regression of the majority of human breast[外文期刊] 2003 4.Celinski SA;Fisher WE;Amaya F Somatostatin receptor gene transfer inhibits established pancreatic cancer xenografts[外文期刊] 2003(1) 5.Frydman B;Blokhin AV;Brummel S Cyclopropane-containing polyamine analogues are efficient growth inhibitors of a human prostate tumor xenograft in nude mice[外文期刊] 2003(21) 6.She Y;Lee F;Chen J The epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor ZD1839selectively potentiates radiation response of human tumors in node mice,with amarked improvement in therapeutic index[外文期刊] 2003 7.Katz MH;Takimoto S;Spivack D A novel red fluorescent protein orthotopic pancreatic cancer model for thepreclinical evaluation of chemotherapeutics[外文期刊] 2003(1) 8.Yao X;Hu JF;Daniels M A novel orthotopic tumor model to study growth factors and oncogenes in hepatocarcinogenesis[外文期刊] 2003 9.Shoji T;Konno H;Tanaka Sakaguchi T Orthotopic implantation of a colon cancer xenograft induces high expression of cyclooxygenase-2[外文期刊] 2003(2) 10.Lennder P A new liposomal contrast medium for CT of the liver.An imaging study in a rabbit tumour model[外文期刊] 1996 11.李雁;汤钊猷我国肝癌模型研究的历史和现状[期刊论文]-中华实验外科杂志 2001(5) 12.Niemann H;Kuse W Application of transgenesis in livestock for agriculture and biomedicine[外文期刊] 2003(3/4) 13.Wang BJZ Specific genetic modifications of domestic animals by gene targeting and animal cloning [外文期刊] 2003 本文读者也读过(6条) 1.彭方兴.严律南肝癌动物模型的研究进展[期刊论文]-中华实验外科杂志2000,17(5) 2.李翠云.段小娴肝癌动物模型研究进展[期刊论文]-医学研究杂志2006,35(10) 3.陈华.赵德明.CHEN Hua.ZHAO De-ming肝癌动物模型[期刊论文]-实验动物科学与管理2005,22(4) 4.胡卫.陈涛鼠移植性肝癌模型研究进展[期刊论文]-河南肿瘤学杂志2003,16(6) 5.徐静.李旭肝癌动物模型的建立[期刊论文]-实用肝脏病杂志2005,8(2)