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五种植物内生真菌的分离纯化及生物活性研究

摘要........................................................................................................................................I Abstract...................................................................................................................................III 缩略语说明..............................................................................................................................V 本论文研究流程图................................................................................................................VI 附表索引...............................................................................................................................VII 插图索引 (Ⅸ)

第1章绪论 (1)

1.1植物内生真菌研究现状 (1)

1.1.1植物内生真菌的起源 (1)

1.1.2植物内生真菌的生态学 (1)

1.1.3植物内生真菌与宿主的关系 (2)

1.1.4植物内生真菌的生物多样性 (3)

1.1.5植物内生真菌的分离与鉴定 (3)

1.1.6植物内生真菌次级代谢产物活性研究 (4)

1.2本论文研究的五种药用植物的研究现状 (7)

1.2.1细叶小檗 (7)

1.2.2陇塞忍冬 (8)

1.2.3甘青大戟 (9)

1.2.4贯叶连翘 (9)

1.2.5宝盖草 (10)

1.3本文相关的生物活性的研究目的与意义 (10)

1.3.1抗乙酰胆碱酯酶活性的研究目的与意义 (10)

1.3.2抗单胺氧化酶活性的研究目的与意义 (11)

1.3.3杀虫及抑菌活性的研究目的与意义 (11)

第2章五种植物内生真菌的分离纯化 (13)

2.1引言 (13)

2.2实验材料和仪器 (13)

2.2.1实验植物样品 (13)

2.2.2实验仪器 (13)

2.2.3药品与试剂 (13)

2.2.4平面及斜面培养基 (14)

2.3实验方法 (14)

2.3.1培养基的制备 (14)

2.3.2内生真菌的分离 (14)

2.3.3内生真菌的纯化 (14)

2.3.4内生真菌的保藏 (15)

2.3.5内生真菌的形态学观察 (15)

2.4实验结果与讨论 (15)

2.4.1实验结果与分析 (15)

2.4.2讨论 (19)

第3章五种植物内生真菌生物活性研究 (21)

3.1引言 (21)

3.2实验材料 (21)

3.2.1待测菌株 (21)

3.2.2实验仪器 (21)

3.2.3实验试剂及药品 (22)

3.2.4实验动物 (22)

3.2.5培养基 (22)

3.3实验方法 (22)

3.3.1内生真菌的发酵及待测样品的制备 (22)

3.3.2粗提物抗MAO活性测定 (23)

3.3.3粗提物抗AChE活性测定 (25)

3.3.4粗提物杀虫活性测定 (26)

3.3.5粗提物抑菌活性测定 (27)

3.4实验结果与讨论 (28)

3.4.1结果 (28)

3.4.2讨论 (43)

第4章内生真菌BGC-2化学成分研究 (45)

4.1引言 (45)

4.2材料及仪器 (45)

4.2.1实验菌株 (45)

4.2.2实验材料及仪器 (45)

4.2.3培养基 (46)

4.3实验方法 (46)

4.3.1显色剂的配制 (46)

4.3.2培养基的制备 (46)

4.3.3菌种的活化与种子液的制备(一级发酵) (47)

4.3.4菌种的大批量发酵(二级发酵) (47)

4.3.5菌株BGC-2次级代谢产物提取 (47)

4.3.6菌株BGC-2菌液粗提物化学成分研究 (47)

4.3.7单体化合物抗单胺氧化酶活性测定 (49)

4.3.8单体化合物抗乙酰胆碱酯酶活性测定 (49)

4.4实验结果 (50)

4.4.1单体化合物的结构鉴定 (50)

4.4.2化合物的抗单胺氧化酶活性 (54)

4.4.3化合物的抗乙酰胆碱酯酶活性 (55)

注：Nd表示未检测 (56)

4.5讨论 (56)

第5章内生真菌的分子生物学鉴定 (57)

5.1引言 (57)

5.2实验材料 (57)

5.2.1待测菌种 (57)

5.2.2实验试剂 (57)

5.2.3实验仪器 (58)

5.3实验方法 (58)

5.3.1试剂的配制 (58)

5.3.2培养基的制备 (58)

5.3.3菌种的活化 (58)

5.3.4菌丝体DNA的提取 (58)

5.3.5DNA纯度检测 (59)

5.3.6PCR扩增ITS区段 (59)

5.3.7扩增产物检测 (60)

5.3.8扩增产物的纯化及序列的测定 (60)

5.3.9扩增产物序列的分析 (60)

5.4实验结果与讨论 (61)

5.4.1结果 (61)

5.4.2讨论 (65)

结论 (67)

参考文献 (69)

致谢 (69)

附录A(攻读硕士期间所发表的论文及成果) (69)

附录B(内生真菌DNA序列) (79)

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