FISH技术

FISH

为了使探针与靶序列的退火速率达到最大值，通常在高离子强度的溶液(6×SSC)，并在比T m值低12-20℃条件下进行杂交反应

1. 探针制备

1.1 探针沉淀

取10ul用切刻平移法制备的探针

加入25ul无水乙醇+1ul NaAc(3M, pH5.2)，混匀，于-20℃静置30min以上

12000rpm离心30min

弃上清，1ml 70%乙醇洗涤

吸去乙醇，残留的乙醇让其自然挥发干净

1.2 探针变性

向探针中加入10ul杂交液，充分吹打混匀(~吹打100次)

12000rpm离心10s

65℃预热5min

75℃变性5min

立即置于冰上冷却

2. 中期染色体标本处理

寻找分裂相，做好标记，划杂交区域（用铅笔画背面）

50℃烘烤2h

加标本变性液，70℃变性2.5min

立即用70%，90%和100%冰乙醇依次脱水，每次脱水5min

晾干

3. 杂交

将10ul 探针加在杂交区域，盖上盖玻片，用封片胶封好四周

置于湿盒中，37℃杂交12-24h

4. 洗脱，免疫荧光检测与信号放大

42℃-50℃，50%甲酰胺/2×SSC中洗4次，每次5 min

(待盖玻片脱落时计时)

42℃-50℃，1×SSC中洗3次，每次5 min

加100-200ul BloI(3%BSA, 0.1%tween20/4×SSC)，37℃孵育15-30min 加100-200ul avidin-FITC于标本上，37℃孵育30-60min

42℃-50℃，0.1%tween20/4×SSC中洗3次，每次5 min

加100-200ul BloII(3%BSA,5%山羊血清，0.1%tween20/4×SSC)，37℃孵育

15-30min

加100-200ul anti-avidin抗体于标本上，37℃孵育30-60min

2×SSC室温下清洗

自然干燥，PI或DAPI复染，加上抗荧光淬灭剂，盖上盖玻片

荧光显微镜下观察

轨枕技术标准

铁路枕木 一、枕木的分类 材料属性分类：木制枕木；钢筋混凝土枕木；复合材料枕木。 用途分类：铁路枕木；专用轨道枕木；架设枕木。 铁路枕木分类： 普通枕木，用于铁路正线线路的普通枕木； 道岔枕木，用于铁路交汇处道岔区域； 桥梁枕木，用于铁路钢结构桥梁设备的桥面线路铺设； 铁路防腐木枕型号分类（按中国标准）： 二、常用枕木的规格 目前，我国的标准铁路轨距为1435mm。 标准的枕木规格如下： 1、普通枕木：宽度220mm；厚度160mm；长度2500mm； 2、道岔枕木（普通）：宽度220mm；厚度160mm；长度2600~4850mm，以150mm进位，共计16个长度规格； 3、道岔枕木（标准）：宽度240mm；厚度160mm；长度2600~4800mm，以200mm进位，共计12个长度规格； 4、桥梁枕木：宽度220mm；厚度240、260、280、300mm；长度3000mm；枕木尺寸 普通木枕：标准长度为2500mm，其断面形状分为I、Ⅱ两类，用于不同等级的线路上。 I类：宽度220mm，厚度160mm； Ⅱ类：宽度200mm，厚度145mm；

道岔木枕：断面尺寸为两种标准； 75型标准为：宽度220mm，厚度160mm；长度从2600mm至4850mm，每种长度相差150mm，共16个长度规格。 92型标准为：宽度240mm，厚度160mm；长度从2600mm至4800mm，每种长度相差200mm，共12个长度规格。 桥梁木枕：其截面尺寸因主梁（或纵梁）中心间距的大小而异。 单线桥梁：长度3000mm，宽度200、220，高度220、240、260、280、300mm； 三、木制轨枕 1、技术条件 树种：落叶松、马尾松、红松等。 2、枕木的尺寸见表1 表1 类别类型长度(㎝)厚度(cm)宽度(cm)备注 普枕Ⅰ2501622 普枕Ⅱ25020 岔枕15进位260-4851622 岔枕20进位260-4801624 桥枕3002024 3、尺寸公差应符合表2的规定 表2(单位：cm) 类别公差 断面形状及尺寸种类限度 普通枕木长度±

我国高速铁路与普速铁路线路关键技术和标准对比分析

我国高速铁路与普速铁路线路关键技术和标准 对比分析 运输1010 李响施宇 10255008 摘要：高速铁路是指营运速率达每小时200公里或250公里的铁路系统。由于运行速度的不同，使得高速铁路和普速铁路在关键技术和标准方面存在着一定的差异。本文从铁路线路的角度出发，研究分析了高速铁路与普速铁路线路标准和线路关键技术的差异。 关键词：高速铁路普速铁路线路关键技术标准对比分析 1、高速铁路与普速铁路概念 高速铁路，简称“高铁”，是指通过改造原有线路（直线化、轨距标准化），使最高营运速率达到不小于每小时200公里，或者专门修建新的“高速新线”，使营运速率达到每小时至少250公里的铁路系统。高速铁路除了在列车在营运达到一定速度标准外，车辆、路轨、操作都需要配合提升。而普速铁路通常指运营速率在150km/h左右的铁路系统 主要是由于运行速率的不同，使得高速铁路和普速铁路在关键技术和标准方面都存在着一定的差异。接下来，本文从铁路线路角度出发，研究分析了高速铁路与普速铁路线路标准和线路关键技术的差异。 2、高速铁路与普速铁路线路标准对比 2.1 普速铁路线路标准总则 1、为统一铁路线路设计技术标准，使铁路线路设计符合安全适用、技术先进、经济合理的要求，制定本规范。 2、本规范适用于铁路网中客货列车共线运行、旅客列车设计行车速度等于或小

于160km/h，货物列车设计行车速度等于或小于120km/h的1、2级标准轨距铁路的设计.3、4级铁路按照相应设计规范执行。 3、铁路的设计年度应分为近期和远期。近期为交付运营后第10年，远期为交付运营后第20年，近远期运量均采用预测运量。 铁路线下基础设施和不易改扩建的建筑物和设备，应按远期运量和运输性质设计，并适应长远发展的要求，对于易改扩建的建筑物和设备，宜按近期运量和运输性质设计，并预留远期发展条件。 随运输需求变化增减的机车车辆等运营设备，可按交付运营后第3年或第5年的运量进行设计。 4、新建和改建铁路或区段的等级，应根据其在铁路网中的作用性质旅客列车设计行车速度和客货运量按规定确定。 5、设计线的旅客列车设计行车速度应根据运输需求、铁路等级地形条件并考虑远期发展条件等因素综合比选确定。 6、各级铁路的下列主要技术标准，应根据远期运量或国家要求的年输送能力客车对数和确定的铁路等级在设计中经综合比选确定：正线数目、牵引种类、机车类型、牵引质量、限制坡度、最小曲线半径、机车交路、到发线有效长度、闭塞类型。 7、新建铁路近期年客货运量分别大于或等于35mt的平原、工程建设标准全文信息系统丘陵地区和大于或等于30mt的山区，宜一次修建双线。 8、牵引种类应根据路网与牵引动力规划线路特征和沿线自然条件以及动力资源分布情况，结合机车类型合理选定并应优先采用电力牵引。 9、机车类型应根据牵引种类牵引质量列车设计行车速度等运输需求，按照与线路平面纵断面技术标准相协调的原则，结合车站分布经技术经济比选确定。10、牵引质量应根据运输需求限制坡度及机车类型等因素，经技术经济比选确定，并宜与相邻线牵引质量相协调。 11、机车交路应采用长交路，并应根据牵引种类、机车类型、车流特点、乘务制度、线路条件，结合路网规划及机务设备布局，经技术经济比选确定。 12、区间通过能力应预留一定的储备。单双线铁路的储备能力在扣除综合维修天窗时间后，应分别采用20%和15%，并应考虑客货运量的波动性。 13、货物列车到发线有效长度应根据运输需求和货物列车长度确定，且宜与邻接线路的货物列车到发线有效长度相协调，并应采用1050、850、750、650m等系列值。改建既有线和增建第二线的货物列车到发线有效长度采用上述系列值引起较大工程时，可根据实际需要计算确定。 14、单双线铁路的闭塞类型宜分别采用半自动闭塞和自动闭塞。当旅客列车设计行车速度大于120km/h时，双线区段应采用速差式自动闭塞，单线区段宜采用自动闭塞或自动站间闭塞，一个区段内应采用同一种闭塞类型。 15、旅客列车设计行车速度120km/h及以上的路段，铁路两侧应设置隔离栅栏 16、铁路线路安全保护区、铁路线路安全保护标志及警示标志的设置，应符合

FISH技术在白血病中的应用~

FISH技术在白血病中的应用 目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。在临床应用中，荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度，已在产前诊断、实体瘤（乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。 血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一，随着对疾病发病机制的深入研究，发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。但常规的细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。而FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。 在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面： ①染色体异位形成的融合基因检测 如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）的BCR-ABL融合基因检测，急性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。 ②基因缺失的检测 一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。但是目前的染色体显带技术分辨率低，只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到，而FISH分辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差，疾病进展较早，且对联合化疗不敏感，多数生存期仅为3个月。而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中，如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好，中位生存期可达到133个月。 ③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测 目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation，allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。移植后动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化判定移植是否成功，对指导移植后治疗和预测复发具有十分重要的意义。FISH技术具有操作简便、快速及结果敏感可靠等优点，通过性染色体计数探针动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化对异性异基因造血干细胞移植后植入状态进行检测。 ④微小残留病灶（minima residual disease，MRD）的检测 白血病患者经化疗缓解后，体内的白血病细胞并未完全清除，仍残留一定数目的白血病细胞，这些残留的白血病细胞是导致复发的根源。通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测，可间接了解体内白血病细胞负荷，便于预测疾病进展和有无复发迹象。 下面我们介绍CLL、MDS、MM相关的FISH探针。

第三代试管Fish技术与A-CGH技术的区别

选择第三代试管婴儿，到底选择什么样的技术合适，选择什么样的技术成功率更高， 具体的需要根据每个人的年龄，身体情况，还有需求来选择，在泰国，做第三代试管 婴儿，用的最多的是FISH技术，还有A-CGH技术。 PGS-FISH早在1990年就已经作为胚胎染色体检查的一种手段，一开始，科学家相信 通过FISH筛选出正常染色体的胚胎可能会增加试管婴儿的成功率。他们在胚胎初期，即胚胎在试管培育过程中的第三天，从已经发育到6-8个细胞的胚胎中抽出1个细胞，从而检测5种染色体以检查出胚胎的性别。但这项技术在技术上使不完善的，只能筛 查部分的染色体，所以对于有其他染色体异常或有遗传病的患者则没有办法真正解决 问题。 另一种更完善的基因检测PGD-aCGH，即囊胚移植前基因检测，则披世多年，而且被 广泛用在美国的试管婴儿医院。因为用aCGH这种检测方法，我们可以检测到更精确 的数据，从而可以知道人体/胚胎全部的24种染色体是否全部正常，因此更能提高试 管婴儿的成功率。 aCGH是胚胎在试管中培养到第5天到第6天时，对已经发育成的囊胚进行46条（22对+X+Y）染色体进行全部检测，只要有一根染色体有问题，就不再被移植，做这个 检测的淘汰率较高，但剩下的都是精英。被移植的精英囊胚着床率及生育率极高，从 而大大降低了胎停及流产风险。说实话，做试管成着床但停育的人非常多，包括现在 35岁以上的女性自然怀孕的流产率也高，就是因为高龄产妇的胚胎染色体更容易发生变异，因此，aCGH应该被以下人群强烈考虑： 1）想追求更高的试管婴儿着床率及生育率 2）习惯性流产的人群 3）纯粹是为了下一代优生考虑

4）做性别选择 5）高龄女性 泰嘉运刘顾问(weixin：laney8）总结：由于国内最近去国外寻求性别选择的越来越多，我从实际经验中也总结到，成功率最高是做aCGH，而第二则是没有做性别选择，直接移植囊胚的，最后一名则是做FISH性别选择的。究其原因，主要原因是做FISH是第 三天胚胎还未长成囊胚时，被生生抽出一个细胞，对还未发育完善成囊胚的胚胎多少 有点伤害，而如果是培育到囊胚阶段的胚胎，生长的潜力是比较强的，移植着床率也 更高。 PGD-aCGH的时间表示例： 1/1 月经的第2-5天，开始打促排针 1/11 取卵（如果要做子宫镜检查的，可以这一天做） 1/12 受精情况D1报告（看你取的卵实际受精了多少个胚胎） 1/16 囊胚情况D5天报告（看第5天出了多少囊胚，没长到囊胚的则再培养到第6天）1/17 囊胚情况D6天报告 (胚胎在试管中只能长到这一天，不能到第7天。这一天还没发展到囊胚，则不可再用) 1/25-30 左右出aCGH报告，可看出哪些胚胎染色体在哪一条是不正常的，不正常的胚胎是不可以用的，因为会导致流产或者其他异常结果。正常的胚胎则着床率非常高。

荧光原位杂交技术FISH技术在疾病分型诊断中的应用

荧光原位杂交技术(FISH)技术在疾病分型诊断中的应用.txt铁饭碗的真实含义不是在一个地方吃一辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。就算是一坨屎，也有遇见屎壳郎的那天。所以你大可不必为今天的自己有太多担忧。荧光原位杂交技术（FISH）技术在疾病分型诊断中的应用 生命科学的发展，生物技术的进步使我们对疾病本质的认识不断地深入，也使我们拥有更多新的治疗方法和药物应对疾病的威胁。如何准确有效地利用这些新的治疗方法和药物治愈疾病是我们迫切需要研究的内容。如何对疾病进行正确的分型和诊断却是上述工作的基础。只有全面地把握病情，并在此基础上进行准确的判断和分析，才能为病患制定及时有效的治疗方案。因此我们要求疾病的诊断工作能提供更为准确和及时的结果。而古老的“望、闻、问、切”和传统的常规手段已远远无法满足我们对疾病诊断的要求，迫切需要将新的技术引入疾病诊断领域。 荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。自20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH技术就在临床诊断及科研工作中得到了广泛的运用，显示出与一些传统技术相比的明显优势。 与传统的免疫组织化学法（IHC）相比，FISH具有良好的稳定性和可重复性。目前免疫组织化学法正广泛应用于肿瘤等多个领域的临床诊断。免疫组化的检测对象是疾病相关的蛋白。由于蛋白的表达和本身的构象受各种因素的影响很大（例如酸、碱和变性剂），检测条件的稳定性对检测结果至关重要。此外，免疫组化检测结果的判断依赖于检测者对显色结果的主观判断，对于一些弱阳性的结果，不同的检测者容易产生分歧。上述的因素都可能影响医生对病情的最终诊断。荧光原位杂交技术检测的对象是细胞中的DNA，致密的双螺旋结构使DNA可以历经千百万年而依然保持良好，其结构稳定，不易被环境条件影响，为荧光原位杂交技术的稳定提供了良好的基础。此外，荧光原位杂交结果的判定借助于对荧光的颜色判断和信号计数，客观地量化了检测地结果。如果借助于相应的FISH操作系统（例如Abbott-Vysis公司的Hybrit杂交仪和VP2000样本预处理系统）和染色体成像系统（例如AI公司的CytoVision）就能实现整个FISH操作的自动化，最大限度的降低操作者和检测者的主观因素，确保结果的准确性。 PCR由于灵敏度高，操作简便快捷是近年来应用比较多的基因诊断技术，但PCR诊断技术的假阴性和假阳性的比例较高，对同一样本也只能作一次分析，不能重复实验结果。随着探针技术的不断发展，FISH目前的灵敏度已经接近或达到PCR的水

荧光原位杂交技术FISH

荧光原位杂交技术FISH 1 目的 通过FISH实验检测两条Brd2基因cRNA探针的效价。 2材料与仪器 2.1材料 件为：95℃预变性3 min；95℃变性30 s；50℃退火45 s；72℃延伸45 s；循环30次； 72℃再延伸8 min。 2) 将所有PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，采用凝胶回收试剂盒回收并纯化PCR产 物，并用微量分光光度计测定其浓度。 3) 进行体外转录反应合成Brd2 cRNA探针，20 μL体外转录反应体系如下：RNase

inhibitor 1μL，10×NTP dig labeling mixture 2μL，10×transcription buffer 2μL，Template DNA 13μL，RNA polymerase 2μL。 4) 37℃水浴孵育2 h，取0.5μL于1%琼脂糖凝胶电泳检测。 5) 加入2μL无RNase污染的Dnase I 37℃水浴孵育15 min来消化模板DNA。 6) 加入EDTA 0.8μL，加入5.6μL NH4Oac终止反应，再加入56μL无水乙醇并混匀，于 -80℃放置20 min。 7) 15000 r/min,4℃离心15 min，弃上清，加入700μL 80%的无水乙醇混匀，15000 r/min,4℃ 离心10 min沉淀RNA。 8) 干燥后用DEPC处理的水50μL溶解RNA。合成的两条探针经1%琼脂糖凝胶电泳鉴 定并用微量分光光度计测定探针浓度，于-80℃保存备用。 3.2荧光原位杂交实验检测探针的效果 1) 正常C57BL/6小鼠用1%戊巴比妥钠深麻后，依次以30 mL 0.01 mol/L DEPC-PBS和 100 mL含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液（PB）行左心室灌注，小心剥离脑组织，于4℃环境下用上述相同固定液进行后固定过夜，后将组织转移浸没于含30%蔗糖的PB溶液中脱水至沉底。 2) 最后取出组织用OTC包埋，冰冻切片机连续切片至需要的层面，切片厚度30 μm。 3) 选取上述脑组织切片于室温条件下经含有2%H2O2的0.1 mol/L DEPC-PB处理10 min 以阻断内源性过氧化物酶，再用0.1mol/L DEPC-PB室温漂洗10 min，接着用含 0.3%Triton X-100的0.1 mol/L DEPC-PB处理20 min，在用乙酰化液处理10 min，后 于0.1mol/L DEPC-PB中清洗2次，每次10 min，后加入预杂交液，60℃预杂交1 h 以封闭非特异结合位点。 4) 分别于两组切片中加入探针并使探针终浓度为1 μg/mL。于60℃杂交炉中恒温孵育 16-20 h，同时设立省略探针的空白对照，以上操作严格在无RNA酶环境下进行。 5) 杂交后组织切片置于wash buffer中60℃浸洗2次，每次20 min，接着切片在RNase buffer中室温孵育5 min，后加入终浓度为20 μg/mL的RNase，37℃作用30 min以消化未结合的cRNA探针。 6) 接下来恒温37℃条件下依次用2×SSC，0. 2×SSC溶液各浸洗切片2次，每次20 min， 再在TS7.5溶液中室温孵育5 min，后置于TBS溶液中室温封闭1 h，加入地高辛抗体（POD-anti-DIG,1:100）室温孵育过夜。

混凝土轨枕的质量标准和标准

附件 9 混凝土轨枕的质量标准和要求

混凝土轨枕的质量标准和要求 1. 无碴轨道双块式轨枕技术条件 以B355型（Rheda 2000）为例，说明考虑并比较了相关的中国和欧洲/德国标准的双块式轨枕的技术条件。 2. 制定本文件时依据铁道部与Rail.One技术转让中下列相关文件： ?Specification of concrete for the production of Rheda 2000 Bi-block sleepers [28.03.06] Rheda2000双块式轨枕生产的混凝土规[2006年3月28日] ?Inspection & Testing plan (ITP) [Doc 992 Bi block CN], [992 Turnout CN], [993 Bi block CN], [993 Turnout CN], [526 CN ITP general] 检查和测试计划（ITP）[文件992 双块式轨枕], [992 岔枕], [993 双块式轨枕], [993 岔枕], [526 CN ITP 概述] ?Definition of acceptable / non-acceptable surface conditions on Rheda2000 Bi-block sleepers [Doc 1353] Rheda2000双块式轨枕表面状况合格/不合格的定义 ?Handling with rejected sleepers [Doc 1227] 不合格轨枕的处理 ?Qualification for the production of Rheda2000 sleepers [29.06.2006] Rheda2000轨枕生产的资格条件

FISH技术全攻略

FISH（荧光原位杂交）技术全攻略 荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。该技术问世与70年代中期左右，其曾多于与染色体异常的研究，近年来随着FISH探针种类的不断增多，使得该技术逐步应用于各种领域。该技术具有快速，安全，灵敏度高以及探针可长期保存等特点，目前已广泛应用于细胞遗传学，肿瘤生物学，基因定位，基因作图，基因扩增及分子诊断等领域。 1对于FISH操作来说，那些因素比较重要？ 在FISH中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率；光照影响了荧光染料的强度，因此探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬灭剂封片且避光保存；各种试剂pH也要精确达到要求，这也直接关系到FISH的稳定性。 2 如何保证FISH操作中的温度？ 最佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作，如Vysis的Hybrit FISH杂交仪。如果是手工操作，首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查，如水浴锅、孵箱，对其中不符合要求的要进行更换（疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内）。其次，要尽可能地保持操作环境温度在20度以上，对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。此外对于需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。同时检测的样本最好不能超过4块。操作中的行动一定要迅速。操作者还往往忽视一些小部件的温度，诸如载玻片和盖玻片。特别是在冬季，盖玻片本身温度就低，加之探针的量本就不多（10ul），因此事先没有

轨枕技术标准

轨枕技术标准-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN

铁路枕木 一、枕木的分类 材料属性分类：木制枕木；钢筋混凝土枕木；复合材料枕木。 用途分类：铁路枕木；专用轨道枕木；架设枕木。 铁路枕木分类： 普通枕木，用于铁路正线线路的普通枕木； 道岔枕木，用于铁路交汇处道岔区域； 桥梁枕木，用于铁路钢结构桥梁设备的桥面线路铺设； 铁路防腐木枕型号分类（按中国标准）： 二、常用枕木的规格 目前，我国的标准铁路轨距为1435mm。 标准的枕木规格如下： 1、普通枕木：宽度220mm；厚度160mm；长度2500mm； 2、道岔枕木（普通）：宽度220mm；厚度160mm；长度 2600~4850mm，以150mm进位，共计16个长度规格； 3、道岔枕木（标准）：宽度240mm；厚度160mm；长度 2600~4800mm，以200mm进位，共计12个长度规格； 4、桥梁枕木：宽度220mm；厚度240、260、280、300mm；长度3000mm； 枕木尺寸 普通木枕：标准长度为2500mm，其断面形状分为I、Ⅱ两类，用于不同等级的线路上。 I类：宽度220mm，厚度160mm；

Ⅱ类：宽度200mm，厚度145mm； 道岔木枕：断面尺寸为两种标准； 75型标准为：宽度220mm，厚度160mm；长度从2600mm至4850mm，每种长度相差150mm，共16个长度规格。 92型标准为：宽度240mm，厚度160mm；长度从2600mm至4800mm，每种长度相差200mm，共12个长度规格。 桥梁木枕：其截面尺寸因主梁（或纵梁）中心间距的大小而异。单线桥梁：长度3000mm，宽度200、220，高度220、240、260、280、300mm； 三、木制轨枕 1、技术条件 树种：落叶松、马尾松、红松等。 2、枕木的尺寸见表1 表1 类别类型长度(㎝)厚度(cm)宽度(cm)备注普枕Ⅰ2501622 普枕Ⅱ25020 岔枕15进位260-4851622 岔枕20进位260-4801624 桥枕3002024 3、尺寸公差应符合表2的规定 表2(单位：cm) 类别公差 断面形状及尺寸种类限度 普通枕木长度±

PNA-FISH技术

医学科学设计与研究作业 姓名：王祥璞 学号：20166020268 班级：16届口腔基础医学

检测并定位牙周致病菌的创新型方法：PNA-FISH技术 Luzia Mendes 、Catarina Ferreira、 Miguel Goncalves Pinto 均毕业 于波尔图大学牙科学院的牙周部。 Rui Rocha、Andreia Sofia Azevedo 、Nuno Filipe Azevedo毕业于波尔 图大学工程院化学工程系的能源、生物科技、环境、工艺学实验室。 关键字 PNA-FISH技术（肽核酸-荧光原位杂交技术）、组织浸润、伴放线放线杆菌（Pg）、牙龈卟啉单胞菌(Aa)、牙周疾病 摘要 目的：我们的目的是通过应用FISH(荧光原位杂交技术)开发肽核酸（PNA）探针，用以检测龈下菌斑和牙龈组织中的伴放线放线杆菌以及牙龈卟啉单胞菌，并对其位置进行定位。 方法：针对每种微生物设计各自的PNA探针，优化之后的PNA-FISH方法 可以使得每种微生物和它们各自的探针（也就是PNA-FISH复合物）同时杂交。在对Pg和Aa代表菌株进行测试之后，PNA-FISH方法就可以用来对患有重度牙 周炎的患者收集的龈下菌斑和牙龈样本中的微生物进行监测。 结果：对于（Pg PNA1007和 Aa PNA235）两种探针而言最佳的杂交环境是59℃ 150分钟。Pg PNA1007探针和 Aa PNA235探针的特异性和敏感性分别都 达到了100%和99.9%。临床样本的结果表明PNA-FISH方法可以监测并区分位于龈下菌斑和牙周组织内混合微生物群中的目标细菌。 讨论：这项研究为监测并定位临床样本中的Pg和Aa细菌提供了一种新的高 精度的方法，并且仅需要短短的数小时。通过使用这种方法我们就可以观测微 生物菌落中的这些菌种在牙周袋内的空间分布，并且在活体牙龈组织中首次应 用了FISH（荧光原位杂交技术）技术。 1.介绍 牙周炎是由易感个体的龈下菌斑和宿主防御系统之间的失衡所导致的。过 去十年来有关牙周膜的研究都非常的重要，然而，因为多种微生物复杂的性质 以及进行体内研究的困难，有关科研和诊断目的方面的性质依然具有挑战性。 现代的分子生物学方法已经取代了传统的培养方式，并且提供了一些新的资源，这些资源不仅仅可以区分单一的微生物，还对所有具有潜在致病性的群体也具 有非常的重要作用。 在这种情况下，生物膜研究中FISH（荧光原位杂交技术）的应用得到了重视，因为它可以通过标记的DNA探针和细菌核糖体RNA进行杂交对微生物进行 原位鉴定。一些人已经通过使用这项技术在体内观测到了龈上、龈下牙龈生物 膜中牙周病原菌的空间分布，以及他们入侵宿主上皮细胞的能力。

铁路建设的混凝土轨枕技术管理探究

铁路建设的混凝土轨枕技术管理探究 铁路建设的混凝土轨枕技术管理探究 摘要：随着我国经济的飞速发展，带动着运输业快速壮大，铁 路运输是我国最重要的运输方式，承担着我国大部分的货物运输以及旅客运输。铁路大量的兴建，混凝土轨枕作为铁路建设的重要组成部分，混凝土轨枕的技术管理是保证铁路质量的关键性问题。本文着重探讨了混凝土轨枕的技术及养护等问题 关键词：轨枕；铁路建设；养护；创新 Abstract: along with our country economy rapid development, led the transportation industry rapidly, the railway transportation is the most important mode of transportation in China, bear most of the transport of goods and passenger transport. The construction of massive concrete sleeper railway, as an important part of railway construction, technical management concrete sleeper is key to ensure the quality of railway. This paper focuses on the concrete sleeper and maintenance etc. Keywords: sleeper railway construction; maintenance; innovation; 中图分类号：F53文献标识码：A 文章编码 1引言 从我国第一条铁路吴淞铁路在上海建成，到如今的拥有近十万公里的庞大的铁路系统。从以前的蒸汽动力机车，到如今的动车组、高铁。我国的铁路建设产生了质的飞跃成为了世界上铁路发展速度最快的国家。其中铁路的轨枕也经历了一代又一代的变化，到如今混凝土轨枕已经成为了铁路建设中用量最大的轨枕。 2混泥土轨枕的发展历程及优缺点

一个典型的的铁路道岔轨枕系统采用十字交叉分析梁对比分析

一个典型的铁路道岔轨枕系统采用梁分析 摘要 一个在较低弹性模量下的简化十字交叉梁在用于铁路道岔轨枕的类比分析，本研究的目的是确定纤维复合材料应用于新兴技术下的铁路道岔轨枕时最优的弹性模量。有限元模拟表明，轨枕的弹性模量和轨枕支撑的弹性模量的变化，在道岔轨枕运行中有重要的影响。体积弹性模量从10MP增长到40MP时弯矩减少了15%，但是弹性模量在从1GP增长到10GP时弯矩增加了75%。在较低弹性模量且发生较大沉降的道砟上的岔枕的弹性模量和体积弹性模量的变化对岔枕的剪切力影响不太明显。在岔枕具有最大弯矩19kn-m和剪切力158kn时，另一种纤维复合材料的弹性模量是4GPa，从岔枕道砟的压力和最大垂直偏转考虑体积弹性模量 至少是20MPa。 1.简介 硬木为铁路轨枕修建和维修首选材料。近年来，铁路枕木硬质木材的价格越来越贵，质量越来越差。这个问题已经导致大部分铁路行业寻找新材料来代替木材。通过马纳洛等人进行的实验，硬木木材轨枕可以采用纤维复合材料来替代硬木。此外纤维复合材料可以在诸如道岔变得越来越大时发挥比硬木更好的作用。使用纤维复合材料时尤其需满足其刚度要求而不止是强度要求，纤维复合材料的成本比木材、钢铁、和混凝土等传统的材料要高，这对道岔选择材料和刚度具有很重要的意义，这可以使道岔达到最佳运行状态，既能满足强度要求，又能满足维护的要求。

道岔是铁路的一部分，火车通过道岔从原轨道进入另一轨道。铺设在道岔上的特殊轨枕称为道岔枕木，简称岔枕。道岔轨枕由不同长度和紧固位置的轨枕组成。由于对道岔轨枕的特殊性，其制造过程是不同的，这也使得他们的维护费用更昂贵。由于火车的穿越，道岔枕木会产生比干线枕木更复杂的载荷。因此，清楚的了解道岔的受力对设计一种纤维复合材料的轨枕具有十分重要的意义。然而，铁路道岔系统的复杂结构使得对道岔的分析比干线更加复杂。 经过实验证实了一些研究人员分析的铁路轨道为弹性地基梁，在这样的模型中，通过车轮负载的等效静荷载的分配来确定钢轨和道砟之间的作用。分配系数取决于轨距和轨枕间距的类型。Shaxin进行调查后认为研究有渣铁路基础时A3三维有限元分析比二维仿真更为准确。但是这种方法计算较为复杂。Kohoutek和campbell用二维梁模型进一步解释了路基轨枕各自的长度变化。在这种模型中能静态分析弹性地基上的不同长度、不同道砟和不同截面属性枕木的轨枕。Shokreih和rahmat研究了杨氏模量对铁路轨枕的影响。他们以轨枕为模型作为温克勒弹性地基基础梁的恒模。研究结果表明，当梁的弹性模量高于基础的模量时，改变杨氏模量的梁对轨枕影响不大，但是当梁的弹性模量低于基础的模量时，却有很大的影响。同样，shahuetal研究表明，轨枕的支撑模量可以显著改变轨道的施工，并且对轨枕的影响更大。Ticoalu进一步的调查显示使用较高的支撑模量可以减小道岔轨道弯矩。这些研究表明，对弹性地基梁的分析已被广泛应用且被认为是很适用于铁路结构分析。同时，这些研究还表明，梁的弯曲刚度和枕木的支撑模量直接影响铁路轨枕的运行。然而，上述研究只是利用有限元分析的单一的铁路轨枕。在道岔中至少有两套连续的轨枕连接在一起，因此需分析整个道岔系统，道岔枕木的作用应用一组轨枕来替代单一的轨枕，应考虑加入的轨枕的互相影响。 在这项研究中，一个考虑钢轨、轨枕、道渣和铁路路基对道岔影响的简单合理的结构模型正在不断完善中。这个模型还要考虑相邻的轨枕的作用。当列车穿越道岔时，还需考虑车轮荷载对轨枕的作用。具有不同弹性模量的枕木和支撑模量的变化对道岔枕木的性能进行了分析。此外，对于木岔枕，用纤维复合材料来替换原来的轨枕，来进行模拟实验。上述研究结果表明替换的复合纤维材料使得铁路道岔得到了优化。 2.铁路道岔的理论模型 铁路道岔由数个轨枕和钢轨组成。因此岔枕可以通过一个更为复杂的梁格模型进行分析。然而一直没有一个使用这种模型来分析铁路道岔的研究。一般对铁路道岔梁的研究是通过对板和桥梁的复杂结构的分析来进行的。Tanetal介绍了一种利用移动的车辆对桥梁的动力作用的车桥相互作用来对梁进行分析的梁格分析

FISH技术及其在环境微生物中的应用

哈尔滨师范大学 学年论文 题目 FISH技术及其在环境微生物中的应用 学生李晓晶 指导教师王继华教授 年级 2009级 专业生物科学 系别生物学系 学院生命科学与技术学院 哈尔滨师范大学 2012年4月

论文提要 荧光原位杂交与微量自动照相集成技术(FISH)能够同时在单细胞水平原位进行细胞的分类鉴定和细胞对底物的吸收特性研究,这是微生物学研究领域的一大突破。目前,这一技术已有效应用于工程系统(污水处理厂、生物反应器等)和自然生态系统中微生物的研究。污染水体的原位强化净化及其生态修复与微生物也有着密切的关系,因此,这一技术的应用不仅能够提高工程系统污水处理效率, 也将为受损水生态系统的原位修复提供科学依据。

FISH技术及其在微生物学中的应用 李晓晶 摘要：微生物对整个生态系统具有重要的影响,了解和检测微生物的种类具有十分重要的意义。但是传统的培养方法又不能满足科学研究的需要,荧光原位杂交技术(FISH)就是今年发展起来的一种快速准确检测微生物的方法。较全面地介绍了FISH技术的优点、微生物的分离和固定方法，以及原位杂交过程，同时对FISH技术在环境微生物学中的应用作了详细研究。 关键词：荧光原位杂交检测环境微生物学种属特性功能特性 污水处理、受损水生态系统的原位修复均与微生物有着密切的关系。因此,对于相关微生物的研究是这一领域的重要研究内容之一。当前,在自然界的微生物群落中绝大部分种类尚不能进行培养(如海水中可培养的微生物只占到总数的0.001%～0.1%；淡水水体或底泥中相对较多,但也只占到总数的0.25%[1])。为了在尽量不破坏周围环境的基础上研究这些尚无法培养的微生物,在过去的十多年里,微生物学家引入了分子生物学技术,如荧光原位杂交(FISH)、多聚酶链(PCR)、DNA测序、变性梯度凝胶电泳(DGGE)等[2]。这些技术在微生物生态学中的应用揭示了环境中微生物群落结构和多样性的大量信息。然而,这些方法一般不能检测微生物在其生存的微生态环中的功能特性。而在研究微生物时,不管是研究微生物的富集培养和分离,还是研究微生物技术的应用都需要在了解微生物分类鉴定的同时,了解微生物的各种功能特性。 有研究者已经开发了一些可以同时研究微生物分类鉴定和功能特性的方法,如FISH/CTC还原结合、MAR(微量自动照相术)和免疫荧光联用技术、FISH-微电极技术等,但这些技术在研究复杂环境微生物群落中的个体微生物时存在很多局限[3-4]。上世纪末,研究者开发研究了一种新技术,即荧光原位杂交(FISH)和微量自动射线照相(MAR)集成技术(本文中FISH/MAR技术),也有称其为MAR- FISH、STARFISH、Micro –FISH等[5-6]。应用FISH/MAR 能同时在原位水平从复杂微生物种群中获得特定微生物的种属和功能特性,从而更好地了解特定微生物在环境中的作用,更清楚地解释自然或人工生态系统中微生物多样性和微生物群落结构多样性的原因及其与微环境的相关关系。 1 FISH 技术简介 1.1原理 FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是: 如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 1.2实验流程

轨枕专业技术标准

轨枕技术标准

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铁路枕木 一、枕木的分类 材料属性分类：木制枕木；钢筋混凝土枕木；复合材料枕木。 用途分类：铁路枕木；专用轨道枕木；架设枕木。 铁路枕木分类： 普通枕木，用于铁路正线线路的普通枕木； 道岔枕木，用于铁路交汇处道岔区域； 桥梁枕木，用于铁路钢结构桥梁设备的桥面线路铺设； 铁路防腐木枕型号分类（按中国标准）： 二、常用枕木的规格 目前，我国的标准铁路轨距为1435mm。 标准的枕木规格如下： 1、普通枕木：宽度220mm；厚度160mm；长度2500mm； 2、道岔枕木（普通）：宽度220mm；厚度160mm；长度2600~4850mm，以150mm进位，共计16个长度规格； 3、道岔枕木（标准）：宽度240mm；厚度160mm；长度2600~4800mm，以200mm进位，共计12个长度规格； 4、桥梁枕木：宽度220mm；厚度240、260、280、300mm；长度3000mm；枕木尺寸 普通木枕：标准长度为2500mm，其断面形状分为I、Ⅱ两类，用于不同等级的线路上。 I类：宽度220mm，厚度160mm； Ⅱ类：宽度200mm，厚度145mm；

道岔木枕：断面尺寸为两种标准； 75型标准为：宽度220mm，厚度160mm；长度从2600mm至4850mm，每种长度相差150mm，共16个长度规格。 92型标准为：宽度240mm，厚度160mm；长度从2600mm至4800mm，每种长度相差200mm，共12个长度规格。 桥梁木枕：其截面尺寸因主梁（或纵梁）中心间距的大小而异。 单线桥梁：长度3000mm，宽度200、220，高度220、240、260、280、300mm； 三、木制轨枕 1、技术条件 树种：落叶松、马尾松、红松等。 2、枕木的尺寸见表1 表1 类别类型长度(㎝) 厚度(cm) 宽度(cm) 备注 普枕Ⅰ250 16 22 普枕Ⅱ250 14.5 20 岔枕15进位260-485 16 22 岔枕20进位260-480 16 24 桥枕300 20 24 3、尺寸公差应符合表2的规定 表2(单位：cm) 类别公差 断面形状及尺寸种类限度 普通枕木 长度±6.0 宽度

FISH技术

FISH 为了使探针与靶序列的退火速率达到最大值，通常在高离子强度的溶液(6×SSC)，并在比T m值低12-20℃条件下进行杂交反应 1. 探针制备 1.1 探针沉淀 取10ul用切刻平移法制备的探针 加入25ul无水乙醇+1ul NaAc(3M, pH5.2)，混匀，于-20℃静置30min以上 12000rpm离心30min 弃上清，1ml 70%乙醇洗涤 吸去乙醇，残留的乙醇让其自然挥发干净 1.2 探针变性 向探针中加入10ul杂交液，充分吹打混匀(~吹打100次) 12000rpm离心10s 65℃预热5min 75℃变性5min 立即置于冰上冷却 2. 中期染色体标本处理 寻找分裂相，做好标记，划杂交区域（用铅笔画背面） 50℃烘烤2h 加标本变性液，70℃变性2.5min 立即用70%，90%和100%冰乙醇依次脱水，每次脱水5min 晾干

3. 杂交 将10ul 探针加在杂交区域，盖上盖玻片，用封片胶封好四周 置于湿盒中，37℃杂交12-24h 4. 洗脱，免疫荧光检测与信号放大 42℃-50℃，50%甲酰胺/2×SSC中洗4次，每次5 min (待盖玻片脱落时计时) 42℃-50℃，1×SSC中洗3次，每次5 min 加100-200ul BloI(3%BSA, 0.1%tween20/4×SSC)，37℃孵育15-30min 加100-200ul avidin-FITC于标本上，37℃孵育30-60min 42℃-50℃，0.1%tween20/4×SSC中洗3次，每次5 min 加100-200ul BloII(3%BSA,5%山羊血清，0.1%tween20/4×SSC)，37℃孵育 15-30min 加100-200ul anti-avidin抗体于标本上，37℃孵育30-60min 2×SSC室温下清洗 自然干燥，PI或DAPI复染，加上抗荧光淬灭剂，盖上盖玻片 荧光显微镜下观察

功能复合材料轨枕及其先进制备技术-西南交通大学科学技术发展

附件5： 2019年辽宁省科学技术奖提名项目公示内容 （科技进步奖） 项目名称: 功能复合材料轨枕及其先进制备技术 提名者:大连理工大学 一、提名意见

二、项目简介（限1页） 随着国家高速铁路的快速发展，高速运行列车对轨道安全性、舒适性提出了更高的要求。轨枕是铁路轨道的重要组成部件，轨枕性能的好坏直接影响了列车运行的安全性和舒适性。橡塑复合材料轨枕因其具有极其优异的减震降噪与超大承载能力，已成为铁路轨枕的主要来源。与国际水平相比，我国铁路轨枕发展尚有较大差距，产品档次低、性能差，开发性能优异的功能复合材料轨枕是铁路轨枕发展的必然方向，是提高列车运行质量，增强我国高速铁路建设国际竞争力的有力保障。本项目基于功能化的合成橡胶和合成塑料，成功地开发了功能复合材料轨枕及其先进制备技术。 本项目是国家863计划课题（2007AA03Z532）、国家自然科学基金重点项目（21034001）的创新成果。基于不同种类、复杂组成的橡塑材料，从功能复合材料轨枕的结构、组成设计出发，通过相应制备工艺、装备攻关，攻克了多项关键技术，首创性地开发了功能复合材料轨枕及其先进制备技术。主要科技创新点包括：（1）创制了高稳定、轻量化功能复合材料轨枕：基于所研发的稀土乙丙共聚物、高抗冲丁苯树脂，成功地创制了高稳定、轻量化的功能复合材料轨枕，所创制的功能复合材料轨枕的绝缘性极佳，绝缘电阻为165 M，远高于限值5 k，且自重轻、静载小，自重仅为传统预制混凝土枕木的三分之一；（2）创制了高强度、极耐候功能复合材料轨枕：基于所研发的稀土氯醚共聚物、高抗冲丁苯树脂，成功地创制了具有高强度、极耐候的功能复合材料轨枕，所创制的功能复合材料轨枕的弹性模量和断裂模量均高于美国铁路工程和道路维护协会(AREMA)标准1.4倍以上，且轨枕的线膨胀系数较低，从-40 ℃严寒冰冻地带到80 ℃高温潮湿热带均可铺设；（3）创制了高阻尼、长寿命功能复合材料轨枕：基于所研发的稀土异丁烯共聚物、高抗冲丁苯树脂，成功地创制了高阻尼、长寿命的功能复合材料轨枕，所创制的功能复合材料轨枕在 1 Hz~5000 Hz频率范围内对轨下基础均有明显减振效果，最大加速度级差约为16.83 dB，且轨道结构承受300万次疲劳荷载后，轨道结构状态良好，极大地延长轨道使用寿命。 本项目核心技术已获授权中国发明专利十余项，在大连广盛元实业有限公司应用，近三年在国内外新增销售额24.5亿元，新增利润1.5亿元。本项目于2015年10月5日通过全球最大铁路产品试验及权威检测机构美国交通技术中心（TTCI）的科技检测鉴定，项目整体技术达到国际领先水平；2018年10月25日通过国家专设高铁实验室（西南交通大学）的全面检测审查，证明功能复合材料轨枕具有极强的自身吸收动载能力，路基坚固耐用；北美一级重载铁路应用试验表明：路基实现了10余年免维护，列车维修周期平均延长近20%。功能复合材料轨枕可承载轴重高达42.5吨的重载货运铁路，为目前世界铁路运输的最高轴重。本项目极大地提高了我国铁路轨枕的综合性能及其先进制备技术水平，对增强中国铁路特别是重载铁路、高速铁路建设的国际竞争能力具有极其重要的战略意义。