生物实验常用溶液的配制(整理版)
生物实验常用溶液的配制
一、DNA电泳相关：
1、DNA电泳缓冲液：
（1）T ris-乙酸（T AE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。
① TAE使用液：
1×：40mmol/L Tris-乙酸
1mmol/L EDTA
② TAE贮存液（每L）：
50×：242g Tris碱
57.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
（2）T ris-硼酸（TBE）缓冲液：
① TBE使用液：
0.5×：0.045mol/L Tris-硼酸
1mmol/L EDTA
② TBE贮存液（每L）：
5×：54g Tris碱
27.5ml 硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
（3）T ris-磷酸（TPE）缓冲液：
① TPE使用液：
1×：90mmol/L Tris-磷酸
2mmol/L EDTA
② TPE贮存液（每L）：
10×：108g Tris碱
15.5ml 85%磷酸
40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：
①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴
或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；
②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；
③迅速倒入备好的胶模中；
④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；
⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；
⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；
⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min 左右）；
⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。
二、12％SDS-PAGE 的相关溶液
1、5×加样缓冲液：
10% w/v SDS，10 mM DTT或β-巯基乙醇，20% v/v甘油，0.2M Tris-HCl pH 6.8，0.05% w/v 溴酚蓝。（注意：将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/L DTT储液中添加到上述缓冲液中。）
5×Sample Buffer：
10% w/v SDS
10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol
20% v/v Glycerol
0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.8
0.05% w/v Bromophenolblue
另：2×SDS 上样液缓冲液:
100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL , 溴酚蓝0.2 g ,DTT3g;
2、1×电泳缓冲液：
25 mM Tris-HCl pH 8.8，200 mM 甘氨酸，0.1% w/vSDS。
1×Running Buffer
25mmol/L Tris-HCl pH 8.8
200～250mmol/L Glycine（电泳级）（pH 8.3）
0.1% w/v SDS
可以配成5×贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml 10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。
3、分离胶配方：
H2O 10.5，1.5 M Tris-HCl pH8.8 7.5，20% w/v SDS 0.15，30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰
胺(/w/v) 12.0，10% w/v 过硫酸铵15，TEMED 0.02（单位：mL，总体积25 mL）。注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4℃保存。
Running Gel Solution (mL) ：
H2O 10.2
1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8 7.5
20% SDS (w/v) 0.15
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 12.0
10% ammonium persulfate (w/v) 0.15
TEMED 0.02
4、积层胶配方(4% 丙烯酰胺)：
H2O 3.05，0.5 M Tris-HCl pH6.8 1.25，20% w/v SDS 0.025，30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 0.65，10% w/v过硫酸铵0.025，TEMED 0.005（单位：mL，总体积5 mL）。
Stacking Gel Solution (4% Acrylamide) (mL)：
H2O 3.075
0.5 mol/L Tris-HCl pH6.8 1.25
20% SDS (w/v) 0.025
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 0.67
10% ammonium persulfate (w/v) 0.025
TEMED 0.005
5、考马斯亮蓝染色液：
0.25 g考马斯亮蓝R250溶解于90 mL甲醇：水（1:1 v/v）和10 mL冰乙酸的混合液中，过滤除去颗粒状物质。（或考马斯亮蓝R-250 0.5g ,乙醇250mL ,乙酸110mL ,水740mL ,混匀;）
另：0.2％考马斯亮兰R-250染液：
甲醇46.5ml
醋酸7.0ml
考马斯亮兰0.2g
蒸馏水加至100ml
6、脱色液：
170 mL甲醇,加70 mL冰乙酸，加蒸馏水定容至1000 mL。
三、蛋白质纯化的相关溶液
1、超声破菌缓冲液：
20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶
2、包涵体洗涤缓冲液：
20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，2 mol/L尿素，2％Triton。
3、包涵体溶解缓冲液：
20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，8 mol/L尿素，0.2 mmol/L DTT或100 m mol/L β-巯基乙醇，2％Triton。
4、Ni2+亲和层析柱纯化缓冲液：
20mmol/L 磷酸钠
500mmol/L NaCl
洗涤缓冲液（pH6.0）：
20mmol/L磷酸钠
500mmol/LNaCl
咪唑洗脱缓冲液（pH6.0）：
20mmol/L 磷酸钠
500mmol/L NaCl
在洗涤缓冲液（pH6.0）中加入适量3mol/L咪唑分别配成10mmol/L、50mmol/L 、100mmol/L和150 mmol/L的咪唑洗脱缓冲液。
Triton X-100(10% v/v)
酶和缓冲液：
DNase(1mg/ml)
溶菌酶
RNase(1mg/ml)
5、2％T riton X－100溶液：
量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。
6、50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)：
称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。
7、1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)：
SDS 10g
45％乙醇100ml
8、1mol/LT ris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液T rihydroxy methylaminomethane T ris/HCL)pH7.8：
Tris 12.114g
蒸馏水 lOOml
先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml
四、PH缓冲液的配制：
（1）磷酸缓冲盐溶液（PBS）：
①137mmol/L NaCl
2.7mmol/L KCl
10mmol/L Na2HPO4
2mmol/L KH2PO4
用800ml蒸馏水溶解8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4。用HCl调节溶液的PH 值至7.4，加水至1L。分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，或过滤除菌，保存于室温。（注：PBS是一种通用试剂，值得指出的是上述列出的配方缺乏双价阳离子，如果需要，PBS可以补加成1mmol/L CaCl2和0.5mmol/L MgCl2）
② 0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)，pH7.2：
A：0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)：
NaH2PO4·12H2O 35.814g
双蒸水加至500ml
B：0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):
NaH2PO4·2H2O 15.601g
双蒸水加至500ml
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl 8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
③ 1/15 mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)：
甲液：1/15 mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO49.465g
蒸馏水加至1000ml
乙液：l/15 mol/L KH2PO4溶液
KH2P049.07g
蒸馏水加至1000m1
分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:
（2）10×T ris EDT A(TE):
①pH 7.4:
100mmol/L Tris-Cl(pH7.4)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
②pH 7.6:
100mmol/L Tris-Cl(pH7.6)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
③pH 8.0:
100mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，保存于室温。
（3）T ris-Cl（1mol/L）:
用800ml蒸馏水溶解121.1gTri s碱，加浓盐酸调pH 至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后，方可最后调定pH 值。加水定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。如果1mol/L 溶液呈现黄色，应予丢弃。并使用质量更好的Tris。Tris溶液的pH 值因温度而异，温度每升高1℃，pH 值大约降低0.03单位，0.05mol/L溶液在5℃，25℃和37℃时的pH 值分别为9.5，8.9和8.6。（4）T ris缓冲盐溶液（TBS）：
用800ml蒸馏水溶解8g NaCl，0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L。分装后在15 psi（1.05 kg/cm2）高压下蒸汽灭菌20min，保存于室温。
五、常用缓冲液配制：
（1）碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液
贮备液A：0.2 mol/L碳酸钠（Na2CO3·H2O 24.8g配成1000ml）；
贮备液B：0.2 mol/L碳酸氢钠（NaHCO3 16.8g配成1000ml）。
x ml A液+ y ml B液稀释至200ml
（2）磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液
贮备液A：0.2 mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO3·H2O 27.6g或NaH2PO3·2H2O 31.21g配成1000ml）；
贮备液B：0.2 mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO3·2H2O 35.61g或Na2HPO3·12H2O 71.64g配成1000ml）。
x ml A液+ y ml B液稀释至100ml
（3）T ris-HCl缓冲液
贮备液A：0.2 mol/L三羟甲氨基烷（Tris-ydroxy methyLamino methanne,C4H11NO3，24.2g配成1000ml）；
贮备液B：0.2 mol/L盐酸（浓HCl17.1ml配成1000ml）。
50ml ml A液+ x ml B液稀释至200ml
（4）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液
贮备液A：0.1 mol/L柠檬酸（C6H8O7，19.21g配成1000ml）；
贮备液B：0.1 mol/L柠檬酸钠（C6H5O7Na3·2H2O 29.41g配成1000ml）。
x ml A液+ y ml B液稀释至100ml
（5
贮备液A：0.2 mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀释至1000ml）；
贮备液B：0.2 mol/L醋酸钠（C2H2O2Na 16.4g或C2H2O2Na·3H2O 27g配成1000ml）。
x ml A液+ y ml B液稀释至1000ml
六、细胞培养和细胞融合溶液：
1、0.25％胰蛋白酶-0.02％EDT A混合消化液：
胰蛋白酶(Trypsin)粉0.25g
EDTA粉20.0mg
0.01mol／L PBS 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5抽滤，分装置4℃冰箱中保存。
2、Hanks液：
（1）原液
①原液甲：
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO4·7H2O 2g
MgCI2·6H2O 2g
溶于800ml馏水中。
CaCl2(无水) 2.8g
溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
②原液乙：
Na2HPO4·12H2O 3.04g
KH2PO4 1.2g
葡萄糖20.0g
溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
（2）使用液
甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO3调pH值到所需要求。
3、LB培养基（Luria-Bertani培养基）：
每升培养基含有：
细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-trytone）10g
细菌培养用酵母提取物（bacto-yeast extract）5g
氯化钠（NaCl）10g
在950ml重蒸水中分别加入上述组分，摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/L氢氧化钠（NaOH）（约0.2ml）调节pH值至7.0，加入重蒸水定容至1L，在1.034×105Pa高压蒸汽灭菌20min。（液体培养基）
另：固体培养基（含有琼脂或琼脂糖的培养基）
按照上述配方配制液体培养基，高压灭菌前加入下列试剂中的一份：
细菌培养用琼脂（Bacto-Agar）15g/L(铺制平板用)
细菌培养用琼脂（Bacto-Agar）7g/L(配制顶层琼脂用)
琼脂糖15g/L(铺制平板用)
琼脂糖7g/L(配制顶层琼脂用)
在15psi（1.05kg/cm2）高压下灭菌20min。从高压锅取出培养基时应轻轻旋动以使溶解的琼脂或琼脂糖能够均匀分布在整个培养基溶液中。必须小心，此时培养基溶液可能过热，旋动液体可能会发生暴沸。应使培养基降温至50～60℃，方可加入不耐热的物质（如抗生素，加Amp的量为1:100）；为避免产生气泡，混匀培养基时应采用旋动的方式。然后可直接从烧瓶中倒置平板。90mm直径的培养皿每个需约30～50ml的培养基。如果平板上的培养基有气泡形成，可在琼脂或琼脂糖凝结前用本生煤气喷射灯灼烧培养基表面以除去之。设定颜色记号在相应平板的边缘作记号以区别不同的培养基。
培养基完全凝固后，应倒置平板并贮存于4℃备用。使用前1-2h应取出贮存的平板。如果平板是新鲜配制的，在37℃温育时会“发汗”，便会导致细菌菌落或噬菌体噬菌斑在平板表面扩散而增加交叉污染的机会。为避免这一问题，可以拭去平皿内部的冷凝水并把平板倒置，37℃温育数小时方予使用，也可以快甩一下平皿以除去冷凝水，为尽可能减少污染，除去盖上的水滴时，应把开盖的平板呈倒置状态拿着。
4、Amp：抗生素（氨苄青霉素），浓度50mg/ml（溶于水），温度-20℃，工作液（严密型质粒：20μg/ml；松弛型质粒60μg/ml）
5、IPTG：isopropyl-β-D-thiogalactoside(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)，作为蛋白质诱导剂。
实验室试剂的分类使用和存放
实验室试剂的分类使用和 存放 The following text is amended on 12 November 2020.
常用化学试剂的分类、存放和使用 （一）化学试剂的分类 （二）化学试剂的等级标准，化学试剂的取用 （三）部分特殊试剂的存放和使用 化学试剂又叫化学药品，简称试剂。它是工农业生产、文教卫生、科学研究以及国防建设等多方面进行化验分析的重要药剂。化学试剂是指具有一定纯度标准的各种单质和化合物（也可以是混合物)。要进行任何实验都离不了试剂，试剂不仅有各种状态，而且不同的试剂其性能差异很大。有的常温非常安定、有的通常就很活泼，有的受高温也不变质、有的却易燃易爆：有的香气浓烈，有的则剧毒……。只有对化学试剂的有关知识深入了解，才能安全、顺利进行各项实验。既可保证达到预期实验目的，又可消除对环境的污染。因此，首先要知道试剂的分类情况。然后掌握各类试剂的存放和使用。 一、化学试剂的分类 试剂分类的方法较多。如按状态可分为固体试剂、液体试剂。按用途可分为通用试剂、专用试剂。按类别可分为无机试剂、有机试剂。按性能可分为危险试剂、非危险试剂等。 从试剂的贮存和使用角度常按类别和性能2种方法对试剂进行分类。 （一）无机试剂和有机试剂 这种分类方法与化学的物质分类一致，既便于识别、记忆，又便于贮存、取用。 无机试剂按单质、氧化物、碱、酸、盐分出大类后，再考虑性质进行分类。 有机试剂则按烃类、烃的衍生物、糖类蛋白质、高分子化合物、指示剂等进行分类。 （二）危险试剂和非危险试剂 这种分类既注意到实用性，更考虑到试剂的特征性质。因此，既便于安全存放，也便于实验工作者在使用时遵守安全操作规则。 1．危险试剂的分类 根据危险试剂的性质和贮存要求又分为： （1）易燃试剂
实验室用液体配制
抗体稀释液 牛血清白蛋白1g NaN3 0.08g 30% Triton 1ml（PBS） 定容PBS（1x）100ml 驴血清封闭液 血清5-10ml NaN3 0.05g 30% Triton 0.5ml（PBS） 定容PBS（1x）100m 抗原稀释液 A 18ml+ B 82 ml5 双蒸水1000ml ,PH=6 封片液 Na2CO3 0.689g NaHCO3 1.554g 溶于50ml 双蒸水 50ml 甘油加热混合 抗原修复液 A:柠檬酸2.1g----100ml ddH2O B:二水柠檬酸三钠14.7g-----500ml A 18ml+ B 82ml+900mlddH2O--------1L(PH=6.0) Neurobasal Media glutamine, 1%penicillin/streptomycin, 10 ng/mL platelet-derived growth factor, 10 ng/mL FGF, and 2% B27 BRDU BrdU is a brominated analog of thymidine. STABILITY / STORAGE AS SUPPLIED: BrdU should be stored at -0°C and desiccated. If properly stored, it will have a shelf-life of two years. SOLUBILITY / SOLUTION STABILITY: Sigma routinely tests the solubility at 50 mg/mL in 1 M ammonium hydroxide yielding a clear colorless solution. It can be dissolved in water at a concentration of up to 10 mg/mL. It is also soluble in DMF, DMSO and water (with heat) at 50-100 mg/mL. Solutions at neutral pH should be stable for at least 6 months when stored frozen at -20°C. APPLICATIONS: BrdU is selectively incorporated into cell DNA at the S phase of cell cycle. The use of BrdU as a thymidine analog has made possible the identification of DNA synthesis in suspensions of cells, cell smears and tissue sections. The incorporation of BrdU into DNA
微生物笔记整理
第1章绪论 1、微生物的特点是： （1）繁殖快，长不大（2）体积微小，分布广泛 （3）观察和研究的手段特殊（4）物种多，食谱杂 （5）适应性强，易变异 2、（1）列文虎克：首次发现微生物，最早记录肌纤维、微血管中的血流。（2）路易斯·巴斯德：“巴氏杀菌法”（Pasteurization），62-65℃，30min,75-90℃，15-16s。[UHT=ultra high temperature，130-150℃，1-4s，常用在牛奶的杀菌。] （3）罗伯特·柯赫食品微生物发展大事记： 1680年，列文虎克发现了酵母细胞 1861年，巴斯德的曲颈瓶实验，推翻了“自然发生说” 1867年，炭疽菌（属于芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌） 1890年，巴斯德杀菌工艺 1922年，肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢在磷酸盐缓冲液中的Z值为18F（Z值：加热至死曲线中，时间降低一个对数周期所需升高的温度 D值：指在一定的处境和一定的热力致死温度条件下，某细菌数群中90％的原有残活菌被杀死所需的时间 F值：在基准温度中杀死一定数量对象菌所需要热处理的时间） 1988年，在美国，乳酸链球菌肽被列为“一般公认安全”（GRAS） 1990年，HACCP体系 1996年，O157：菌体的抗原，H7:鞭毛的抗原
3、GMP：Good Manufactureing Practice（良好生产操作规范），GMP标准规定了在加工。贮藏和食品分配等各个工序中所要求的操作、管理和控制规范。 HACCP：Hazard Analysis and Critical Control Points（有害分析和关键控制点） 栅栏技术（Hurdle techonology）：利用食品当中各种有效因子（温度、pH、Aw、OR电度包装、辐照、防腐剂）交互作用控制腐败菌生长，提高食品安全。 4、ISO22000 食品安全管理；ISO9001 食品质量管理。 第2章微生物的基本形态与结构 1、细菌基本形态分为三种： 球状，如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（阳性菌） 杆状，如大肠杆菌（Escherichia coli）（阴性菌） 螺旋状，如霍乱弧菌（Vibrio cholarae） 2、细菌的形态受环境影响的因素：培养温度，培养时间，培养基的成分与浓度，pH等。 3、细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，其观察方法是质壁分离+染色；电镜观察。培养细菌的三种方式：1）固体培养，2）斜面培养，3）液体培养。 4、革兰氏阳性菌特别含有磷壁酸，带有负电荷，还可分为壁磷壁酸和膜磷壁酸；革兰氏阴性菌含有脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它由类脂A、核心多糖和O-特异性多糖三部分组成。 5、革兰氏阳细菌、阴细菌的差别：
分子生物学实验室常用试剂配方
分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见 2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217) (1) PBS (217) (2) 胰酶Trypin (217) (3) Tris-NH4Cl (217) (4) Running buffer (218) (5) Washing buffer (218) (6) 湿转液 (218) (7) LB培养基 (218) (8) LB培养板 (218) PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。 配置方法： NaCl : 320g 优级纯 Na2HPO4. 12H2O 61.44g KCl 8g KH2PO4 8g 三蒸水4L 烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。 胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。 Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。 配置方法： 2L 体系： NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤
实验室常规试验所需溶液的配制
实验室溶液的配制 一．蛋白试验 （1）4%的硼酸吸收液：分析纯硼酸，4g溶于50ml水，加热使其溶解，冷却，再用蒸馏水标至100ml。 （2）40%的氢氧化钠：分析纯氢氧化钠，40g溶于100ml水。 （4）0.1mol/L盐酸标准溶液：量取9ml盐酸（GB622，分析纯），用蒸馏水定容到1000ml，摇匀。 标定：在电子天平上准确称取5份烘干至恒重的基准无水碳酸钠，每份0.2g左右，记下所称的基准无水碳酸钠的质量m，将5份基准无水碳酸钠分别置于5个250ml锥形瓶中（提前标号），加入50ml水，加2~3滴甲基红指示剂，然后用待标定的0.1mol/L的HCL标准溶液滴定至溶液由黄色变为灰红色，记下消耗的盐酸标准液的体积Vo，然后将滴定完的锥形瓶在电炉上烧至沸腾，然后转小火保持沸腾2分钟,溶液中的二氧化碳被赶出后溶液又变为蓝绿色，冷却，再用盐酸标准溶液滴定至溶液变为灰红色，记下消耗的盐酸标准液体积Vi，两次滴定之和即为消耗的盐酸标准液体积。平行滴定5份基准无水碳酸钠，记录好 每份的数据。计算公式：C(Hcl)＝m/(V o+Vi)×0.05299，五次结果的平均值即为盐酸标准液的浓度，将盐酸标准液转入1000ml容量瓶保存即可。贴上标签标明配制时间，配制人，溶液浓度。 注：测凯氏定氮仪漏气不漏气的方法——取分析纯硫酸铵0.2g左右做蛋白试验，测其氮含量，作3个平行试验，测得硫酸铵含氮量为21.19%±0.2%，否则应检查加减，蒸馏，滴定各步骤是否正确。 二．钙的测定 （1）10%o淀粉溶液的配制：10g淀粉溶于水，加热使其溶解，冷却后转移到1000ml容量瓶，用蒸馏水定容到1000ml。 （2）1/1三乙醇胺溶液（即50%溶液）：取100ml三乙醇胺溶于100ml
微生物实验报告：微生物形态观察
微生物实验报告：微生物 形态观察 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多 的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状 体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材
实验室常用溶液配制示例
实验室常用溶液配制示例 氢氧化钠滴定液(1、0.5或0.1mol/L) NaOH=40.00 40.00g→1000mL 20.00g→ 1000mL 4.000g→1000mL 【配制】取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。氢氧化钠滴定液(1mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液28mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。 【标定】氢氧化钠滴定液(1mol/L) 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL的氢氧化钠滴定液(1mol/L) 相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即得。氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约3g，照上法标定。每1mL的氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于102.1mg 的邻苯二甲酸氢钾。氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)，取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，照上法标定。每1mL的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。如需用氢氧化钠滴定液(0.05、0.02或0.01mol/L)时，可取氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)加新沸过的冷水稀释制成。必要时，可用盐酸滴定液(0.05、0.02或0.01mol/L)标定浓度。 【贮藏】置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 盐酸滴定液(1、0.5、0.2或0.1mol/L) HCl=36.46 36.46g→1000mL；18.23g→ 1000mL 7.292g→1000mL；3.646g→1000mL 【配制】盐酸滴定液(1mol/L)：取盐酸90mL，加水适量使成1000mL，摇匀。 盐酸滴定液(0.5、0.2或0.1mol/L)：照上法配制，但盐酸的取用量分别为45、18或9.0mL。【标定】盐酸滴定液（1mol/L）取在270～300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL 的盐酸滴定液(1mol/L)相当于53.00mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。 盐酸滴定液(0.5mol/L)照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约0.8g。每1mL的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于26.50mL的无水碳酸钠。 盐酸滴定液(0.2mol/L)：照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约0.3g。每1mL的盐酸滴定液(0.2mol/L)相当于10.60mg的无水碳酸钠。
配制溶液的一般实验步骤
配制溶液的一般实验步骤 配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同，现举两个例 子： 举例 1：配置 0.05mol/L ，400mL NaOH 溶液的步骤：要准确配置氢氧化钠的浓度，则要用容量瓶定容，实验室没有 400 毫升的容量瓶，则选用 500 毫升的容量瓶。 1.计算需要氢氧化钠的质量：0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000 克 2.称 1.000 克氢氧化钠于烧杯中，加少量水溶解，然后倒入 500 毫升容量瓶里，分 3 次洗烧杯，将溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀释至刻度线，摇匀，即，得到 0.05mol/L 的氢氧化钠溶液。 如果不需要很准确的话，可以直接用量筒量 400 毫升，称的时候只要称 0.8 克就可以了。举例 2：配置 1.5mol/L 的稀硫酸 200mL 步骤： 第 1 步：计算：根据 C1V1=C2V2 ，计算需要浓硫酸的体积；第 2 步：量取，利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积；第 3 步：稀释，将浓硫酸转移到小烧杯中，加少量水稀释；第 4 步：转移 , 待溶液温度降低后，将烧杯中的硫酸转移到 200mL 容量瓶中； 第 5 步：洗涤，洗涤小烧杯，和转移的时候用到的玻璃棒， 至少三次，将洗涤的水一并转移到容量瓶中； 第 6 步：定容，加水定容到刻度线，在距离刻度线一厘米左右改
用胶头滴管定容； 第 7 步：摇匀 ,将溶液摇匀 ,如果液面下降也不可再加水定容；第 8 步：将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签；举例 3：配制 500mL ，0.1mol/L 碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤：第一步：计算：所需碳酸钠的质量 =0.5*0.1*106=5.3 克；第二步：称量：在天平上称量 5.3 克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中；第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解；第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入 500mL 容量瓶中；第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2?3次，并倒入 容量瓶中；第六步：定容：倒水至刻度线 1?2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直；第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀；第八步：装瓶、贴签；误差分析：固体药品的称量与液体药品的量取是否准确；把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了；未洗涤烧杯和玻璃棒；用待配液润洗了容量瓶；定容时水加多了或加少了；定容时未平视刻度线。仰视、俯视对溶液浓度有何影响？★俯视刻度线，实际加水量未到刻度线，使溶液的物质的量浓度增大；★仰 视刻度线，实际加水量超过刻度线，使溶液的物质的量浓度 减小。市售盐酸密度1.19,质量分数36%?38%以37%计 算：步骤： 1.计算：假若需要 2mol/L 的硫酸 100mL ，则需 37%
微生物实验手册
微生物实验室规则与安全 微生物学实验室规则 医学微生物学实验的对象大多为病原微生物，具有传染性，因此要求进入实验室后必须严格遵守以下实验室规则： 1．进入实验室应穿白大衣，离室时脱下，反折放回原处，不必要的物品不得带入实验室，必须带入的书籍和文具等应放在指定的非操作区，以免受到污染。无 菌操作时必须戴口罩，并不得开电风扇。 2．实验室内禁止饮食、抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 3．各种实验物品应按指定地点存放，用过的器材必须放入消毒缸内，禁止随意 放于桌上及冲入水槽。 4．须送温箱培养的物品，应做好标记后送到指定地点。 5．实验过程中发生差错或意外事故时，禁止隐瞒或自作主张不按规定处理，应立即报告老师进行正确的处理。如有传染性的材料污染桌面、地面等，应立即用0.2%~0.5% “84”消毒液浸泡污染部位，作用5～10min后方可抹去。如手被活 菌污染也应使用上述消毒液浸泡5～10min后，再以自来水反复冲洗干净。6．爱护室内仪器设备，严格按操作规则使用。节约使用实验材料，不慎损坏了 器材等，应主动报告老师进行处理。 7实验完毕，应物归原处并将桌面整理清洁，实验室打扫干净。最后以0.2%~0. 5% “84”消毒液浸泡手5min，洗净后方可离开实验室。 实验一器皿包扎及消毒与灭菌 一、实验目的 1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的包扎方法。 2、了解干热灭菌、紫外线灭菌、微孔滤膜过滤除菌和高压蒸汽灭菌的原理和应用范围。 3、掌握高压蒸汽灭菌的操作技术。 二、实验原理 （1）实验室中使用的玻璃器皿简介 微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和（将“和”改为“才能”）用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂灼烧而不致破坏；玻 璃器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和 包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响 实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿（如培养皿、吸管等）已 被一次性塑料制品所代替，但玻璃器皿仍是重要的实验室用具。 （2）灭菌的常用方法和基本原理 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、紫外线照射法、微孔滤膜过滤除菌法和高压蒸汽灭菌法等。 A.干热灭菌是用电热干燥箱（图1）加热，利用高温使微生物细胞内的酶、蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
实验室常用溶液及试剂配制
实验室常用溶液及试剂配制 实验室常用溶液、试剂的配制 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂
表三混合酸碱指示剂
表四容量分析基准物质的干燥
表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液
5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制
实验室常用试验方法2 九、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴，用1mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点，同时做空白试验。 计算：X%（一水）= （V1-V0）×C×0.06404 m×（1-0.08566）×100 X%（无水）= （V1-V0）×C×0.06404 m×100 V1-----消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； V0-----空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； C------氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； m---样品质量。 十、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 称取2g（精确到0.0002g）样品，用10ml盐酸（1+1）溶解，转移至100ml容量瓶中定溶，用移液管吸取10ml于250ml锥形瓶中，加50ml水，5ml蔗糖溶液（25g/L），2ml三乙酸胺（1+1），1ml乙二胺（1+1），1滴孔雀绿指示液（1g/L），滴加氢氧化钾溶液（200g/L）至无色，再过量10ml，加0.1g盐
实验室常用溶液及试剂配制(重新排版)
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
微生物实验工作总结(精选多篇)
微生物实验工作总结(精选多篇) 一、教学实验室的改建与新建工作 xx 年初我院对 qj05 楼一楼进行实验室改造，成果如下： 1. 更换中央实验台 8 只 2.qj05 楼 108 、 112 两个实验室原为工艺实验室和书库，经改造建成微生物实验室，可兼做化学类实验。 3. 改建预备室 1 个 4. 改建微生物培养室 1 个 5. 改建饲料工艺实验室 1 个 6. 改建计算机房 1 个 此次改造后，我院教学实验室增加面积 200 多平方米，并且将本科教学实验室集中在 qj05 楼一楼，可基本满足本科实验教学的需要，也便于管理。 二、教学实验室仪器设备的购置计划 最近几年食品学院在调整教学计划，增开大型综合实验的同时，也加强了实验室条件建设，基础实验分室的仪器设备得到补充更新，大大改善了学生的实验条件，因此实践教学的质量也有所提高，生均仪器设备占有量已超过 1000 元。 xx 年食品学院新开了一个食品质量与安全专业，需要进行必要的建设，另外由于我院教学实验室基础实验分室经
改造后，在原信控大楼一楼成立了本科教学实验室，有五个实验室，比原先增加了两个实验室，以前由各研究所承担的部分实验课现在也由院教学实验室承担，现在承担的实验课增加了 14 门学院基础实验分室承担的实验课程增加，需要添置仪器设备；部分仪器设备需要更新；部分实验分室的仪器设备需要配套；学院新办专业食品质量与安全也需要进行必要的建设，由于以上原因学院向校教务处申请实验室条件建设项目预计需要建设经费 80 万元，但该项目 xx 年初批准后，实验室的有关同志从寒假开始就进行了采购工作，在上半年全部完成。本项目建成后，所有实验室，包括仪器设备全部可对食品学院三个专业的学生开放，除教学实验课外，对本科生毕业论文也可提供较好的条件。每年受益的学生人数约 600 多人，并为 xx 年《食品分析》这门食品学院公共课程的教学实验提供一定的准备，该项目完成后也为学院的研究生实验课提供了较好的条件。尤其是工艺实验分室购置了一套肉制品的小型实验室加工设备，为本科教学实验以及科研项目的进行提供了必要的条件。本期建设项目结束后，教学实验室已向教务处递交了总结报告。 表 1 xx 年完成的实验室建设项目一览表 项目名称 实验分室名称 申请经费金额
实验室常用指示剂的配制
实验室常用得指示剂配制 1 百里香酚蓝-酚酞混合指示液 取3份体积百里香酚蓝溶液(1g/L)与2份体积酚酞溶液(1g/L)混合均匀。 2 甲基红-亚甲基蓝混合指示液 将50mL甲基红溶液(2g/L)与50mL亚甲基蓝溶液(1g/L)混合。 3 酸性铬蓝K-萘酚绿B混合指示剂 称取0、1g酸性铬蓝K,0、1g萘酚绿B与20g干燥氯化钾,置于研钵中,充分研磨混匀,贮存于棕色广口瓶中。 4 溴百里(香)酚蓝-苯酚红混合指示液 0、08g溴百里酚蓝与0、1g苯酚红溶于20mL乙醇中,加水50mL,用氢氧化钠溶液(4g/L)调至pH为7、5(红紫色),再以水稀释至100mL。 5 溴甲酚绿-甲基橙混合指示液 6份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)与1份体积甲基橙溶液(1g/L)混合。 6 溴甲酚绿-甲基红混合指示液 3份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)与1份体积甲基红溶液(1g/L)混合,摇匀,贮存于棕色瓶中。 7 1,10-菲罗啉-硫酸亚铁铵混合指示液 称取1、6g1,10-菲罗啉及1g硫酸亚铁铵(或0、7g硫酸亚铁),溶于100mL 水中,贮存于棕色瓶中。 8 甲基红指示液(1g/L) 称取0、10g甲基红,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 9 溴甲酚绿指示液(2g/L)
称取0、20g溴甲酚绿溶解于6mL氢氧化钠溶液(4g/L)与5mL乙醇中,用水稀释至100mL。 10 甲基橙指示液(1g/L) 称取0、10g甲基橙,溶于70℃水中,冷却,用水稀释至100mL。 11 酚酞指示液(10g/L) 称取1、0g酚酞,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 12 溴(甲)酚蓝指示液(1g/L) 称取0、10g溴酚蓝,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 13 钙指示液(钙羧酸指示剂) 称取0、20g钙指示剂〔2-羟基-1-(2-羟基-4-磺酸-1-萘偶氮)-3-萘甲酸〕(C21H14N2O7S)或其钠盐与10g在105℃干燥得氯化钠,置于研钵中研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。 14 铬黑T指示剂 将1、0g铬黑T与100、0g干燥得氯化钠,置于研钵中,研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。 15 铬黑T指示液(5g/L) 称取0、50g铬黑T与4、5g氯化羟胺,溶于乙醇中,用乙醇稀释至100mL,贮存于棕色瓶中。可保持数月不变质。 16 百里香酚蓝指示液(1g/L) 溶解0、10g百里香酚蓝于2、2mL氢氧化钠溶液(4g/L)与5mL乙醇中,稀释至100mL。 17 孔雀绿指示液(1g/L)
常用实验试剂配制
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
实验室溶液配制
实验室所需溶液配制 1.费休氏试液，购买； 2.氢氧化钠溶液，C=0.01mol/l。氢氧化钠分子量40.0，准确称取氢氧化钠固体 0.4g溶于200ml蒸馏水中，并在1L容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 3.中性红溶液，C=1%。准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 4.溴百里香酚蓝溶液，C=1%。准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏 水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 5.碘化钾溶液，C=10%。准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中，并在500ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 6.硫代硫酸钠溶液，C=0.1mol/l。硫代硫酸钠分子量158.11，准确称取硫代硫 酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 7.硫酸溶液，C=2mol/l，硫酸分子量98.08，浓度98%时密度约1.84g/ml，准确 量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中，向水中加入硫酸而非向硫酸中加水，冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液； 8.淀粉溶液，C=0.5%。准确称取可溶性淀粉0.5g，溶于50ml水中，并在100ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 9.铬酸钾溶液，C=50g/L。准确称取铬酸钾固体50g，溶于500ml水中，并在 1000ml容量瓶中定容，搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止. 静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可，不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中； 10.氯化钠基准试剂，C=0.1mol/l，氯化钠分子量58.5，准确称取氯化钠固,5.85g 溶于500ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 11.硝酸银溶液，C=0.1mol/l，硝酸银分子量169.87，准确称取硝酸银固体8.49g 溶于200ml蒸馏水中，并在500ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液，用前采用基准氯化钠试剂（10）标定，需保存于棕色试剂瓶中；
【实验报告】微生物学实验报告格式
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
分子实验室、细胞实验室常用配方
分子实验室、细胞实验室常用配方
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(一)WB相关试剂及常用缓冲液 ●RIＰA（１０0mI）(最后要调pH为７.4） 终浓度分子量称取 50mM 1２1.14 60５．7mg Ｔｒｉs-HCI（pH ７.4) NaCI １50 ｍＭ５8.4４87６.６ｍg TritｏnＸ-1０0 1% 1mI 脱氧胆酸钠1％１g EDTA １mM 292.24８２９.224８mｇSＤS 0．1％０.1g ＰMSF（１00ｍM) 使用时每1ｍl加１ ０ｕl ●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度) AP粉末 1ｇ ddＨ2０ 10mｌ ●1０%SDS(十二烷基硫酸钠）： SＤＳ粉末１0g ｄdH20定容到 100ml 注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡 ●6X蛋白质sample buffer Tris-HCl(１M,ｐH6.８) 30ｍL ＳＤＳ10ｇ 甘油 30ｍL DTT（1５4.２5）９.3g 溴酚蓝０．０6g dd H2０定容至10０mＬ ●10XPBＳ缓冲液的配制： ＮaCｌ 80g KCl 2g Ｎa2ＨPＯ4 14．4ｇ(十二水合36g） KH２PO40 2.４g 加800 mLddH2O,根据开始的pH用ＮaOH或ＨCL调pH到７.4,调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度 ●PBSＴ(1X) ＰBS(1X） 500ml Tweeｎ 2０５０0μｌ ●5０×Tris－乙酸（TＡE）缓冲液配制1Ｌ溶液各成分的用量 Ｔris粉末 2４2ｇ 冰醋酸 57.１ｍl Nａ2EDTA·2H2O 3７.２g
微生物实验室常用的标准菌种管理及、保存SICOLAB整理
微生物实验室常用的标准菌种管理及、保存SICOLAB整理 在微生物实验室中，常需保存-些实验中常用的标准菌种及菌株，如金黄色葡萄球菌，致病性大肠杆菌，几种常见的沙门氏菌，痢疾杆菌等，以供学生进行细菌涂片染色检查、细菌接种培养、制备凝集抗原、免疫动物制备诊断血清及测定诊断血清效价等。在做抗菌药物敏感试验时，也需常备-套对各种抗菌药物“敏感”的对照菌株，使学生学会判断细菌对药物的敏感性。对这些菌种的妥善保管和保存，是良好的实验室管理和实验质量的重要保证。 一、保管 由于实验室中保存的菌种大多对人体具有致病性，经多次移种又易被污染和发生变异，做好安全及质量管理至关重要，主要应做到以下几点。 1.1专人负责菌种保管应指定专人负责，存放于加锁的冰箱中。保管人应具备高度的责任心，明确职责，严格执行有关的规章制度，以确保菌种安全。 1.2详细登记实验室应备有-本详细登记本，对各种菌种进行详细登记，内容包括菌种的名称，编号，数量，分离日期，鉴定者，细菌的形态染色，培养生化特性，抗原结构，动物致病力等，并注明使用、移种及销毁的情况和原因。 1.3定期移种对菌种的保管不仅要求菌种不死，还要力求其生物学性状等不发生变异。各种菌种应按规定时间定期移种。细菌在人工培养基上经数代培养后，其形态、菌落、毒力等均易发生变异，因此，在每移种3次后应做-次全面鉴定，检测菌种有无污染和变异，如发现污染和变异时，应及时处理。 二、保存 保存菌种应根据细菌的培养特性、抵抗力等选择适合的培养基，微生物实验室常用菌种的-般保存方法有以下几种： 2.1科面保存法 2.1.1普通肉汤琼脂斜面：肠道杆菌、葡萄球菌等营养要求不高的细菌可接种于普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏液，以防干涸(但变形杆菌“OX”及伤寒杆菌“O’’菌株宜接种于斜面底部无肉汤的干燥的琼脂斜面，以防变异)，用橡皮塞塞紧，置37℃培养18-24h 后，放于4℃冰箱中，可保存1个月，每经1个月需接种传代1次。 2.1 .2血液琼脂斜面：链球菌及肺炎球菌的营养要求较高，在普通培养基上生长不良或不生长，应接种于血液琼脂斜面上，37℃培养生长后，放4℃冰箱保存，链球菌需半个月-1个月接种1次;肺炎球菌因能产生自溶酶而导致自溶现象，需4d移种1次。肺炎球菌在人工培养基上经数代培养后，其形态、菌落、毒力均易发生变异，在人工培养基上肺炎球菌很快失去荚膜，经多代培养后其光滑型菌落可变为粗糙型，毒力也大为降低。 2.1.3鸡蛋斜面：成分为新鲜全蛋、1%葡萄糖肉汤及甘油。少数沙门氏菌当新从病人检材中分离出来时，常具有Vi抗原，具有Vi抗原的细菌，有抵抗吞噬的作用，并保护细菌不被相应抗体在补体参与下所溶解，故毒力较强。含有Vi抗原的沙门氏菌等，可接种于鸡蛋斜面上，37℃培养18-24h，加无菌液体石蜡至斜面浸没，再超出约1cm，置4℃冰箱，可保存3-6个月，Vi抗原经长期人工培养，也易消失。 2.1.4吕氏血清斜面：白喉杆菌可保存在该培养基上，其成分为l%葡萄糖肉汤(pH7 .4)1份，牛血清或兔血清(无菌)3份。白喉杆菌在此培养基上生长迅速、旺盛，菌体形态典型，如在培养基中再加人5%-10%的中性甘油，则培养出的白喉杆菌的异染颗粒更为明显，但24h后即衰老成为多形态，很少有异染颗粒，菌体粗大3-4倍，置4℃冰箱可保存2周-1个月。2.2半固体穿刺保存法 2.2.1普通半固体：大肠杆菌、葡萄球菌、绿脓杆菌等可穿刺接种于普通半固体培养基内，37℃培养18-24h后，加1层无菌的液体石蜡，厚度约为1cm，置4℃冰箱可保存3-6个月。传代移种时，将半固体菌种管倾斜，使液体石蜡流至-边，再取菌移种于新的培养基。将沾