荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征患者_8和20q_黄俊

荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征论著患者+8和20q－

黄俊1邓明风1陈永玲1唐元艳2虞咏知2黄知平2

(华中科技大学同济医学院附属荆州医院1检验医学部;2血液内科湖北荆州434020)

【摘要】目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者8号和20号染色体异常的应用。

方法40例MDS患者，采用间期FISH技术，选取+8和20q－探针的组合，检测MDS患者中的+8和20q－异常情况。结果

利用FISH技术，+8和20q－检出率分别为12．5%，15．0%。采用FISH技术的组合探针可以检测出8号和20号染色体异常。

结论FISH技术能够检测出MDS染色体异常，采用组合探针的FISH更为敏感和特异。

【关键词】骨髓增生异常综合征荧光原位杂交染色体异常

Detection of chromosomes+8and20q－in patients with myelodysplastic syndrome by fluorescence in situ hybridization．HUANG Jun，DENG

Ming－feng，CHEN Yong－ling，et al．Department of Laboratory Medicine，Affiliated Jingzhou Hospital，Tongji Medicine College，Huazhong Science and Technology University，Jingzhou Hubei434020，China．

【Abstract】Objective To explore the sensitivity and specificity of fluorescence in situ hybridization(FISH)technique in detection of patients

with mylodysplastic syndrome(MDS)．Methods Bone marrow cells of40patients with MDS were analyzed by interval FISH，and the combination of

probes had been used to detect the abnormalities of chromosome8and chromosome20．Results Chromosome+8had been found in5of40patients with

MDS(12．5%)，and chromosome20q－had been found in6of40patients with MDS(15．0%)．Conclusion The detection of abnormalities in chromo-

somes is helpful in diagnosis and prognosis of patients with MDS，and it is more effective and sensitive in detection of abnormalities in chromosomes by in-

terval FISH technique．

【Key words】Myelodysplastic syndrome;Fluorescence in situ hybridization;Chromosome abnormalities

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组克隆性造血干细胞疾病，其特征是血细胞减少，髓系细胞一系或多系发育异常，伴有无效造血［1］。MDS患者染色体畸变类型十分复杂，临床上以+8及20q－较为常见［2］。本研究于2006年6月至2011年8月，利用荧光原位杂交（FISH）技术，选取8号及20号染色体的探针组合，检测40例MDS患者中+8及20q－。

1资料与方法

1．1入选病例选取我院进行染色体检查的MDS患者40例，其中男性22例，女性18例，中位年龄42（17 75）岁，诊断和分型参照世界卫生组织（WHO）标准［3］。按常规方法一次性采集骨髓进行荧光原位杂交（FISH）检测。对照组为同期住院缺铁性贫血［4］患者，共10例。

1．2方法

1．2．1试剂和仪器本研究探针试剂盒均购自北京金菩嘉医疗科技有限公司，主要包括GLP D20S108/CSP8双色荧光探针；4＇，6－二脒基－2－苯基吲哚（DAPI）荧光染料；荧光显微镜为OLYMPUS BX51TRF。

1．2．2操作流程取EDTA或肝素钠抗凝骨髓液2ml，以0．075mol/L KCl溶液低渗处理后，以3：1甲醇冰醋酸溶液作预固定，制备细胞悬液滴片、烤片，预处理后制备探针混合物，后变性杂交，洗涤玻片并复染，立即盖上盖玻片。暗处放置10 20min，在荧光显微镜下选用合适的滤波片组观察结果。

1．3结果判断物镜下（10/40倍）观察荧光信号，选择细胞核大小一致、边界完整、DAPI染色均一、孤立无重叠以及荧光信号清晰荧光区域，在100倍物镜下，通过特异的单通道滤光片计数200 500个细胞内信号。所有荧光探针组合在正常间期细胞内显示2红2绿。荧光显微镜下计数10例正常细胞内计数400 500个间期细胞中出显示异常荧光信号的细胞数，计算百分比，以其珋x?3s（%）确定MDS 患者8、20号染色体异常阳性标准。

2结果

利用FISH技术，40例患者中，5例患者存在+8，6例患者存在20q－。+8和20q－检出率为12．5%，15．0%。采用FISH技术的组合探针可以检测出8号和20号染色体异常。GLP D20S108/CSP8荧光探针在异常细胞内显示为2红3绿或1红2绿。（图1，图2见封三）。

3讨论

染色体异常对MDS患者的诊断、疗效评估以及预后都有很重要的指导意义。因此，染色体核型分析对于MDS患者具有重要的意义。

目前染色体核型分析常用的技术为骨髓培养法，该法只能分析中期细胞，且存在细胞培养失败导致无结果，或培养中期分裂相不够导致结果不满意等问题。FISH利用标记了荧光信号的探针（DNA单链），与目标样本的DNA进行原位杂交，通过荧光信号反映染色体的变化情况。FISH技术具有很好的稳定性，能够检测单个基因的扩增或缺失，灵敏度高，同时FISH的重复性好，还可以借助染色体扫描/成像系统（AI），以及杂交仪和样本预处理系统，实现整个操作的自动化。逐步应用于恶性肿瘤遗传学异常检测［5］。

本文选择针对8号和20号染色体的组合探针来进行FISH检测，这两个区域的探针涵盖了绝大部分MDS患者中8号与20号染色体异常。结果显示：FISH技术能够检测出MDS染色体异常，采用组合探针的FISH更为敏感和

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临床和实验医学杂志2013年2月第12卷第4期