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大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

步骤如下:

(一)固定与修块

取组织块放入Bouin 氏液中,组织块的直径应小于7mm。6 小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3 大小。

(二)脱水与透明

1.75%乙醇50 分钟

2.85%乙醇50 分钟

3.95%乙醇(I)30 分钟

4.95%乙醇(II)30 分钟

5. 100%乙醇(I)30分钟

6.100%乙醇(II)30分钟

7 1/2 二甲苯(乙醇与二甲苯等体积)20分钟

8. 二甲苯(I)20分钟

9. 二甲苯(II)10分钟(可依据透明效果而定)

若脱水不好,二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后,要充分滤干组织

块,一般用筒纸吸干组织块上的液体,以免影响其他液体的浓度,但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。

(三)浸蜡、包埋与修蜡块

1 .浸蜡:

将60C恒温箱打开,使石蜡充分溶解,待脱水与透明结束后,将

组织块转入石蜡里,放置于60C恒温箱120分钟。

2.包埋:

将60C的石蜡倒入纸盒内,然后用小镊子将各组织块按一定的顺

序排列好,使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中,以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固,可将纸盒置于一玻璃板上(或大培养皿内),然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上,包埋时蜡盒底部

要放平,做蜡块的蜡要反复冻融较好。

3.修蜡块:

待纸盒内蜡凝固后,用刀片将其修成梯形,组织块与蜡块边缘

之间的距离不得小于2mm。

(四)切片

在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上,用手指充分

匀,呈半干状为佳。切片厚约4-8 am,将切片在55C左右水浴中展开,展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片,放入37C烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后,将载玻片置于玻片架上,进行下面的实验。

(五)脱蜡、染色与脱水

倾斜玻片架,将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干,减轻对其他试剂浓

度的影响。全过程约需要60分钟。

1.脱蜡

(1) 二甲苯(I) 15分钟

(2) 二甲苯( II) 15分钟 ( 3) 100%乙醇2 分钟

( 4) 95%乙醇( I) 1 分钟

( 5) 95%乙醇( II) 1 分钟

( 6)蒸馏水浸洗1 分钟

2.染色

( 7) xx 精30 秒钟

( 8)自来水冲洗60 秒。(显微镜下观察效果)

( 9)伊红(着色即可) 10 秒钟

( 10)蒸馏水浸洗1 分钟

3.脱水

( 10) 95%乙醇( I) 1 分钟

( 11) 95%乙醇( II) 1 分钟

( 12) 100%乙醇2 分钟

(13)二甲苯( I) 2 分钟

(14)二甲苯( II) 3-5分钟

(六)封片将载玻片取下,滴加1~2 滴中性树胶,用镊子夹住盖玻片的一角,盖

上盖玻

片,之后倾斜载玻片,多余的中性树胶用筒纸吸干,室温下保存。

2.简要版:

肝组织HE染色切片制作过程

(1)取材与固定:

取大鼠肝右叶固定部位组织块,立即投入10%甲醛中,固

定48h 。

(2)脱水透明:

组织修片,梯度酒精脱水,后二甲苯中透明。动物组织切成0.2-

0. 5cm的薄片,依次经过70%酒精2h--*80%酒精2h 一95%酒精(I、II各2h)和无水酒精(I、II各1h)脱水,二甲苯透明(I、II各lh),以置换组织内的酒

精溶液。

(3) 浸蜡包埋:

将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内,使石蜡浸入组

织并置换出其中的二甲苯。将浸蜡的组织置于包埋器内,并滴入液化蜡进行组织包埋,后置于冰面上待其凝固。

(4) 切片与贴片:

将蜡块固定于切片机上,切成5 u m厚的切片,在45"C

的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上,置于65 C烤箱烤3h。

(5) 脱蜡:

切片置入二甲苯I、H各15分钟,不同浓度酒精(100%5min

一95%5s一80%5s一70% 5s)置换出其中的二甲苯,最后用PBS液洗净。

(6) HE染色:

将石蜡切片放入苏木精中染色5min 一蒸馏水洗净一1%稀盐酸

分化一流水中充分冲洗返蓝,约20min;伊红染色5min,流水冲洗干净。

(7) 脱水、透明:

染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%各5min),二甲苯透明(I、II 各5min)。

(8) 封固:

在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。

光学显微镜下观察组织病理变化,以i00 倍放大率观察切片。