细胞因子与细胞因子疗法
细胞因子与细胞因子疗法
万遂如
(中国畜牧兽医学会动物传染病学分会长春市130062)
随着分子生物学、细胞生物学和医药生物工程技术的不断发展，现代医学中出现了一门新兴学科－生物治疗学。在生物治疗中，包括细胞因子、单克隆抗体、干细胞移植、免疫细胞、肿瘤疫苗等生物技术药物产品中，应用最多的是细胞因子。细胞因子对人类许多常见病、多发病及传染性疾病的治疗作用，已经不是传统疗法(化学药物治疗、放射治疗、手术治疗等)所能比拟的。目前世界上批准上市的细胞因子产品有10余类20多种，用于许多疾病的防治，取得了突破性的进展，为保障人类的健康作出了重大贡献。我国感动中国兽医科技创新领军企业－大连三仪动物药品有限公司在国内率先研制成功一批细胞因子产品，几年来用于兽医临床实践，在动物疾病的防治中发挥了重要作用，开创了生物工程制剂用于防治动物疾病的先河。本文就细胞因子与细胞因子疗法在猪病防治中的应用谈一点个人的见解，供同仁们参考。
1. 细胞因子
1.1细胞因子定义
细胞因子又称细胞素(cytokine)是由免疫细胞(如单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(如血管内皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞和角质细胞等)合成和分泌的，具有介导、调节免疫和细胞生长、造血和炎症反应等密切相关的具有高活性多功能的小分子蛋白质，即为一类非免疫球蛋白。细胞因子有多种名称：如吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子(monokine);由淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子(iymphokine)；具有趋化作用的细胞因子称为趋化性细胞因子(chemokine)；可刺激骨髓干细胞或祖细胞分化成熟的细胞因子称为集落刺激因子(colony stimlaliating factor,CSF);主要由白细胞产生又作用于白细胞的细胞因子称为白细胞介素(inteleukin,IL)。
目前将细胞因子分为白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(INF)、集落刺激因子(CSF)、趋化性细胞因子(chemokine)和生长因子(GF)六类。
1.2细胞因子的共同特征
细胞因子的种类很多，生物活性各异，它们的共同特性表现在以下方面：
1.2.1细胞因子均为分泌到细胞外的小分子蛋白质；
1.2.2在接受抗原和丝裂原等刺激后合成并释放；
1.2.3多数在细胞间发生短距离作用，通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学作用；
1.2.4生物半衰期和发挥作用的时间较短；
1.2.5低水平就可表现生物学活性。
细胞因子这种由细胞产生的多肽或糖蛋白分子，具有广泛的生物活性和多种生物功能，可以刺激或者抑制免疫功能，调节多种细胞生理功能，或促进血细胞生成、分化与增殖，在抗感染与机体免疫系统中起着非常重要的调节作用。一种细胞可产生多种细胞因子，一种细胞因子可由多种细胞产生，一种细胞因子又有多种生物学活性。现在研究证实，机体内产生的众多的细胞因子构成了细胞因子网络，通过网络形式发挥其生物学活性和复杂的免疫调节功能。它们之间常互为因果或互相协同、促进，或互相拮抗、制约，构成了复杂的调节网络，发挥一个整体调节的作用。当机体内细胞因子的含量一旦发生异常变化，则会导致病理性反应，甚至致病。
2、细胞因子疗法
几年来，细胞因子疗法结合抗病毒疗法，抗细菌疗法和对症治疗在兽医临床上的应用，已取得明显的成效，特别是在多种病毒混合感染与多种细菌继发感染的病症，以及动物常见的一
些急慢性传染性疾病的防治中发挥了重要作用，此方法值得总结与推荐。
2.1细胞因子疗法定义
应用重组细胞因子作为药物用于疾病的治疗称为细胞因子疗法。当动物机体由于某些病理生理作用引起体内某种细胞因子的相对或绝对缺乏，而导致免疫学功能紊乱，通过输入外源性细胞因子纠正其平衡，恢复其免疫学功能，以达到治疗疾病的目的。目前，利用基因工程生产的重组细胞因子在人医临床上应用的有数十种之多，兽医临床上的应用才将开始。
2.2细胞因子疗法在猪病防治中的应用
2.2.1猪用干扰素(POIFN)
干扰素是机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生的具有高活性的多种生物学功能的糖蛋白(多种生物学活性的细胞因子)。在正常机体的脾脏、肝脏、肾脏、外周血淋巴细胞和骨髓中都可以检出。干扰素根据抗原性的不同，人类细胞诱生的干扰素分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ，每种又可分为若干亚型。由白细胞产生的IFN-α和由成纤维细胞产生的IFN-β属于I型干扰素，抗病毒作用强于免疫调节作用。T细胞和NK细胞产生的IFN-γ属于Ⅱ型干扰素，主要起免疫调节作用，可作用于机体的多种免疫细胞。病毒、细菌内毒素、原虫、人工合成的双链RNA等诱生剂均可诱导干扰素的产生。
2.2.1.1作用机理
2.2.1.1.1抗病毒作用：干扰素作用于动物机体细胞内的干扰素受体，经信号传导等一系列的生物化学过程，启动基因合成抗病毒蛋白，即翻译抑制蛋白（TIP），该蛋白能切断病毒mRNA与宿主细胞核糖体结合，抑制病毒蛋白质的翻译，抑制病毒多肽链的合成，即阻断病毒的繁殖，起到抗病毒的作用。同时，还能抑制病毒DNA和RNA的合成。病毒本身没有独立的生活酶系统和合成蛋白质场所（没有核糖体），所以只有进入细胞内，依靠动物机体细胞的酶系统和核糖体，才能生长与繁殖。如果动物机体内正常细胞经干扰素作用后产生抗病毒蛋白，病毒就不可能在动物机体内生长与繁殖，使其失去生存的空间。
2.2.1.1.2免疫调节作用：①调节免疫监视功能；增加自能杀伤细胞（NK细胞）和杀伤细胞（K细胞）的杀伤活性，这种杀伤性的调节具有种属特异性，猪干扰素只能增强猪NK细胞的杀伤性；②调节免疫防卫功能；低浓度干扰素可明显促进B细胞分泌IgG抗体的功能，增强组织相容抗原和外周血单核细胞表面FC受体的表达，抑制淋巴细胞的增殖；增强巨噬细胞的吞噬作用、消毁能力；促进巨噬细胞的细胞毒活性；调节免疫自稳功能，降低应激反应等。
大剂量使用干扰素，在细胞免疫方面能抑制T细胞增殖，主要是DNA合成受阻；影响迟发型变态反应及异体组织移植排斥反应的发生；在体液免疫方面，可抑制初次抗体反应和再次抗体反应，既可抑制IgG的合成，也可抑制IgE的合成与释放。
2.2.1.1.3抗肿瘤作用：干扰素能抑制肿瘤病毒的增殖、肿瘤细胞的增生；改变肿瘤细胞表面的性能、诱发新的抗原，从而易被免疫监视细胞识别，并加以排斥；通过免疫调节作用，可增强机体抗肿瘤能力，如激活巨噬细胞，增强NK和ADCC效应。
2.2.1.2猪用干扰素在猪病防治中的应用
临床上主要用于猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒病、口蹄疫、猪瘟、兰耳病、圆环病毒2型感染、伪狂犬病、猪流感、猪水泡病、细小病毒病等疫病的防治，特别是与猪用转移因子和排疫肽联合使用，对猪的一些免疫抑制性疾病和败血性疾病防治效果更佳。2.2.1.2.1使用方法：每40公斤体重肌肉注射1毫升，每日1次，连用3天，重症加量2-3倍。与猪用转移因子联合使用，应用灭菌注射用水或生理盐水或疫苗稀释液稀释，分别肌肉注射或混合肌注即可。
2.2.1.2.2预防与治疗方案
2.2.1.2.2.1猪传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒病的治疗：按使用治疗量干扰素，每日
1次，连用3天，同时肌注复方穿心连注射液或双黄连注射液，每日1次，连用3天。并配合肌注痢菌净或氟哌酸或其他止泻消炎的制剂，每日1-2次，连用4天，并改饮电解质多维加葡萄糖粉或口服补液盐7天。
2.2.1.2.2.2兰耳病、圆环病毒Ⅱ型感染、非典型猪瘟、伪狂犬病、猪流感与呼吸道合胞病毒的治疗：按使用治疗量肌注干扰素，每日1次，连用3天，同时配合肌注复方灵芝多糖注射液或复方黄芪多糖注射液或复方柴胡注射液，每公斤体重0.1毫克，每日1次，连用3-4天。因为干扰素对病毒只有抑制作用而无杀灭作用，对已经形成的病毒无作用，治疗时必须要配合使用抗病毒的药物。同时，由于上述病毒性疾病常混合感染或继发感染细菌性疾病，使病性复杂化。因此，在治疗中还要采用抗菌疗法，根据病情选用广谱抗生素，如头孢噻呋、替米考星、氟苯尼考、强力霉素、阿莫西林、磺胺类药物，以及清开灵等配合治疗。在进行上述治疗时，为了增强疗效，提高治愈率，减少死亡率，提高抗应激能力和免疫力应使用转移因子配合治疗，每100公斤体重注1毫升，每日1次，连用3天，可使病猪很快康复，并能减少病后僵猪的发生。
2.2.1.2.2.3猪口蹄疫治疗：干扰素配合转移因子肌肉注射，每日1次，连用3天；同时配合肌注复方灵芝多糖注射液或复方黄芪多糖注射液，每日1次，连用3天；为防止急性心肌炎引发死亡，应加注天王大败毒注射液或五毒康注射液，每日1～2次，连用2天，可明显的提高治愈率。
2.2.1.2.2.4猪无名高热症与猪呼吸道病综合征的治疗
上午肌注排疫肽（高免球蛋白），每50公斤体重1毫升，重症加量，每日1次，连用2天，同时配合肌注转移因子2次，每日1次；第3天开始改为肌注干扰素，每日1次，连用2～3天，并配合肌注板兰根注射液或穿心莲注射液或双黄连注射或柴胡注射液等，每日1次，连用4天。下午肌注头孢噻呋或支原净或氟苯尼考或地米考星或复方强力霉素等，每日1次，连用4天。同时饮用电解质多维加葡萄糖粉加黄芪多糖粉7天。
2.2.1.2.2.5预防仔猪断奶前后，后备种猪配种前20天，育肥猪转群及母猪产前后各5天，可用喘速治（含泰乐菌素、强力霉素、微囊包被干扰素、排疫肽）于1吨饲料中加药500克，连续饲喂10天，可有效的预防多病毒混合感染与细菌继发感染。
2.2.1.3使用干扰素注意事项
2.2.1.
3.1由于干扰素能抑制病毒的复制与繁殖，因此使用干扰素后，96小时之内不要给动物接种弱毒活疫苗，以免影响免疫效果。灭活疫苗（油剂苗）可与干扰素同时使用，但不要混合注射。
2.2.1.
3.2稀释干扰素要用灭菌的注射用水或生理盐水，不要使用酸碱性溶液和葡萄糖盐水作稀释剂，否则失效。
2.2.1.
3.3妊娠母猪、哺乳母猪及仔猪使用安全，无毒副作用。
2.2.1.
3.4启用后在规定的时间内一次用完，以免失效。解冻溶化后不要再进行冰冻，可放于4℃冰箱中保存，3天内使用完。
2.2.1.
3.5干扰素虽有广谱的抗病毒作用，但又具有相对的种属特异性，一般在同种细胞中生物活性最高；同时不同种的病毒，同一种病毒的不同血清型对干扰素的敏感性也不相同。2.2.2猪用转移因子（TF）
将预先用特异性抗原致敏的T淋巴细胞反复冰冻融解，再经过透析或过滤后，获得的一种低分子多核苷酸与低分子多肽的复合物，即为转移因子，属淋巴因子的一种。含有12个氨基酸，2-4个RNA（核糖核酸），分子量为700-5000，无抗原性，但具有种属特异性，动物的转移因子一般不能用于人类。
2.2.2.1作用机理
转移因子进入动物机体内通过核酸渗入受体的淋巴细胞，起着传递特异性和非特异性细胞免
疫信息的作用，现已证实，它能转移细菌、真菌、病毒、组织相容性抗原等细胞的细胞免疫。受体接受转移因子后，2-24小时内产生效应，可持续数月至1年。转移因子能激活辅助性T 细胞，增强机体的细胞免疫和体液免疫的功能；能诱导淋巴细胞及吞噬细胞在炎症局部集聚，发挥抗感染和抗肿瘤等作用；还能将免疫反应活性转移给正常未致敏的细胞，使之成为致敏淋巴细胞，从而扩大细胞免疫反应。能诱导干扰素（IFN）和白细胞素-2（IL-2）的产生；能修复和增强机体的免疫功能，提高机体的抗病力，减少免疫抑制、免疫麻痹、免疫不全、并能降低免疫应激与其他应激发生的比例。
2.2.2.2猪用转移因子在猪病防治中的应用
2.2.2.2.1使用方法：每100公斤体重1毫升，肌肉注射，每日1次，连用2次，重症加量。与干扰素及排疫肽联合使用，疗效更佳。
2.2.2.2.2预防与治疗方案
2.2.2.2.2.1预防
转移因子可以将免疫反应活性转移给正常未致敏的免疫细胞，使之成为致敏淋巴细胞，提高细胞的免疫效果，具有免疫增强剂的功能。因此，在临床上给猪免疫接种疫苗时，加入转移因子，可有效的提高疫苗的免疫效果。如按免疫程序给猪接种猪瘟弱毒疫苗，加入稀释后的转移因子与疫苗混合肌注，使猪瘟抗体产生快，抗体水平高、抗体均匀度好、抗体持续时间长，明显的增强其疫苗的免疫效果。当发生猪瘟时，用10-12头份猪瘟弱毒疫苗加转移因子（小猪0.5毫升、大猪1-2毫升）混合肌注，2天即可控制疫情。给猪接种O型口蹄疫灭活浓缩疫苗时，同时分开肌注转移因子，也可收到增强疫苗免疫的效果。
由于免疫抑制性疾病如兰耳病、圆环病毒Ⅱ型感染、伪狂犬病、细小病毒病、及猪气喘病等抑制动物机体免疫细胞的功能，干扰疫苗的免疫应答，产生免疫抑制和免疫麻痹，导致免疫失败。如在接种疫苗的同时使用转移因子，可激活被免疫抑制性疾病所抑制的免疫细胞，使其恢复免疫功能，能有效的减少免疫抑制与免疫麻痹的发生。故转移因子可用于预防与治疗猪的免疫抑制性疾病，提高保育舍仔猪的成活率和健康水平。
仔猪断奶前3天，每头肌注0.2毫升转移因子，断奶时可有效的控制断奶应激，饲料应激、营养应激及环境应激的发生。
2.2.2.2.2.2治疗：转移因子用于治疗猪兰耳病、圆环病毒Ⅱ型感染、非典型猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、猪流感、细小病毒病、传染性胃肠炎及流行性腹泻等，应配合干扰素、排疫肽、中药抗病毒制剂及广谱抗生素进行综合治疗，其治疗方法请参照干扰素对病毒性疾病治疗方法实施。
猪呼吸道病综合征、传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病、气喘病、大肠杆菌病的治疗，可按规定剂量肌注转移因子和排疫肽，每日1次，连用2天；同时针对病情选用清开灵注射液或复方板兰根注射液或复方穿心莲注射液，以及抗生素类如支原净、氟苯尼考、强力霉素、头孢塞呋、长效土霉素、克林霉素等配合治疗，每日1次，连用4天。咳嗽与气喘严重者加注冰蟾熊胆注射液或复方蒲公英注射液或喘力克注射液等，每日1次，连用3天。临床治愈后，为防止疾病反复，应有针对性的在饲料中或饮水中添药，使用7-10天。如添加“喘速治”或5%爱乐新，每吨料中添加1000克。
2.2.2.3使用转移因子注意事项
2.2.2.
3.1转移因子用灭菌注射用水或生理盐水或疫苗稀释液稀释后可与弱毒活疫苗混合1次肌注，但不要与灭活疫苗（油菌）混合注射，可分别肌注。
2.2.2.
3.2转移因子不能用酸碱性溶液或葡萄糖盐水稀释，否则影响药效。
2.2.2.
3.3母猪妊娠期，哺乳期及哺乳仔猪使用安全，无毒副作用。
2.2.2.
3.4药品启开后1次性用完，如有污染严禁使用。
2.2.3猪白细胞介素-4（IL－4，倍康肽）
猪白细胞介素－4又称为T细胞生长因子，是T细胞自身分泌的一种生长因子，能诱导机体细胞免疫和体液免疫，增强机体免疫力，提高抗病毒和抗感染的能力。
2.2.
3.1作用机理
2.2.
3.1.1 对T细胞的免疫调节作用
猪白细胞介素-4能维持T细胞增殖，高浓度白细胞介素-4能诱导胸腺细胞的增殖，对毒性淋巴细胞（CTL）和淋巴因子激活杀伤细胞（CAK）具有分化、调节作用。
2.2.
3.1.2对B细胞的免疫调节作用
猪白细胞介素－4可提高体液免疫应答水平，显著增强病毒和细菌以及寄生虫抗原的免疫原性；它是体液免疫的重要调节因子，可增强抗原的提呈能力，使免疫系统对小量抗原刺激发生免疫应答。还能促进B细胞分泌IgG和IgE，增强机体的保护性免疫效应。
2.2.
3.1.3抗肿瘤作用
白细胞介素－4是一种活性很强的巨噬细胞激活因子，能诱导巨噬细胞增殖并提高其活性，杀伤肿瘤细胞，对肿瘤有免疫作用。
2.2.
3.2猪白细胞介素－4在猪病防治中的应用
猪白细胞介素－4在增强猪体的免疫应答和提高免疫保护力方面，具有重要的应用价值。
2.2.
3.2.1预防
2.2.
3.2.1.1可与猪所有的弱毒疫苗混合同时使用，与灭活疫苗分别稀释，分别使用，能使疫苗提前产生免疫力，抗体产生快、抗体水平高、抗体整齐度好、保护力维持时间长，并能减轻接种反应。
2.2.
3.2.1.2在仔猪断奶转群，长途运输前，炎热，换料时应用，能明显提高猪只的抗应激能力，降低应激的发生，保持猪体各系统功能的稳定与平衡。
2.2.
3.2.2治疗
猪白细胞介素－4在兽医临床上应用，其使用方法和治疗适应症与猪用转移因子相同，效果一致，请参照上述猪用转移因子的治疗方法使用即可。
与猪用干扰素和排疫肽分别稀释混合使用，治疗猪的传染性疾病，可明显的提高疗效，减少死亡。
2.2.
3.2.3使用方法
2.2.
3.2.3.1用生理盐水或灭菌注射用水或疫苗稀释液稀释后使用，弱毒冻干疫苗可混合肌注，灭活疫苗分别肌注。
2.2.
3.2.3.2与疫苗联合使用时，仔猪每头0.25毫升，中猪每头0.5毫升，大猪每头1毫升。
2.2.
3.2.3.3治疗时，每60公斤体重用本品1毫升，重病加倍量，肌肉注射，每日1次，连用2～3天；预防时，仔猪每0.2毫升，中猪每头0.25毫升，大猪每头0.5毫升。
2.2.
3.2.4注射事项
2.2.
3.2.
4.1本品严禁与酸碱性溶液和葡萄糖盐水混合使用，否则无效。
2.2.
3.2.
4.2使用前要充分摇匀，启开后1次性用完，如有污染不能使用。
2.2.
3.2.
4.3本品可用于猪只的各个生长阶段，对妊娠母猪、哺乳仔猪、种公猪无毒副作用，无残留，无抗药性。
围术期炎症细胞因子的监测
围术期炎症细胞因子的监测 围手术期是围绕手术的一个全过程，从病人决定接受手术治疗开始，到手术治疗直至 基本康复，包含手术前、手术中及手术后的一段时间，具体是指从确定手术治疗时起，直 到与这次手术有关的治疗基本结束为止，时间约在术前5- 7天至术后7 - 12天。 炎症反应一方面通过致炎因子直接损伤血管内皮，另一方面主要是通过一系列炎症介 质来实现；多数炎症介质通过与靶细胞结合发挥活性，炎症介质作用于细胞后可进一步引起 靶细胞释放次级炎症介质从而放大或抵消初级炎症介质的作用。不管机体遭受何种刺激， 宿主对炎症反应的总体特征非常相似，然而不同的损伤涉及不同类型的细胞，导致不同炎 症介质的产生和释放从而引起系统性和局部性损伤。通常术中的炎症反应与细胞因子的释放有关，细胞因子的作用又进一步加强了手术以及术中缺血再灌注损伤，如此恶性循环终将导致组织损伤而增加手术后临床相关并发症，影响患者的预后。 目前，手术方式以及麻醉方法、药物对恶性肿瘤术后免疫功能的影响逐渐受到重视。细 胞因子是机体免疫及炎症反应中细胞之间交流的信息分子，它们通过效应细胞表面相应的 受体对细胞生长、成熟和修复产生调控作用。创伤、应激、感染等是影响围术期病死率的 重要因素，与机体免疫状态密切相关。本文旨在总结各种炎症因子的特点、围术期使用不同药物和麻醉方式对炎症细胞因子的影响，提高患者围术期安全，从而改善患者的预后。 1. 炎症细胞因子 多达20%的肿瘤源自于慢性炎症，大部分的实体瘤都有炎性渗出物。免疫细胞对肿瘤 的发生、生长和进展有着广泛的影响，并且很多这些效应都是由促炎症细胞因子介导。在所有细胞因子中，TNF和IL-6具有促进肿瘤发生的效应，这一点是可以确定的。TNF和IL-6 作为肿瘤相关炎症和肿瘤形成的主要调节因子，使得它们在癌症的辅助治疗中成为很受欢迎 的研究目标。因此在围术期对患者进行炎症细胞因子的检测具有重要的临床意义。
细胞因子
第六章细胞因子 一．选择题 【A型题】 1．下列哪类细胞不能分泌细胞因子？ A. T淋巴细胞 B. B淋巴细胞 C. 浆细胞 D. 单核细胞 E. 成纤维细胞 2．细胞因子不包括： A. 淋巴毒素 B. 过敏毒素 C. IL-2 D. 集落刺激因子 E. 干扰素 3．IFN-γ主要由下列那种细胞产生？ A. LAK细胞 B. 巨噬细胞 C. NK细胞 D. 成纤维细胞 E. B淋巴细胞 4．下列哪种细胞因子是以单体的形式存在？ A. IL-12 B. IL-10 C. M-CSF D. TGF-β E. IL-8 5．关于IL-2的生物学作用，下列哪项是错误的？ A. 以自分泌和旁分泌发挥作用 B. 能促进T淋巴细胞增殖与分化 C. 能被活化的B淋巴细胞膜上的IL-2受体识别 D. 能增强NK细胞活性 E. 抑制Th1细胞的分化 6．天然的特异性细胞因子抑制物是： A.IL-1ra B.IL-2R C.IL-4R D.IL-6R E. IL-8R 7．能增强MHC-I类分子表达的细胞因子是： A. IFN B. TGF C. CSF D. IL-1 E. IL-2 8．与多发性骨髓瘤的形成和发展有关的细胞因子是： A. IL-2 B. IL-1 C. IFN D. IL-6 E. IL-4 9．能刺激红细胞前体细胞增殖分化为成熟红细胞的细胞因子是： A. IL-1
B. IL-2 C. IL-4 D. IFN E. EPO 10．能促进初始CD4+T细胞分化成Th2细胞的细胞因子是： A. IL-3 B. IL-5 C. IL-2 D. IL-4 E. IL-3 11．关于细胞因子的叙述，下列哪项是错误的？ A. 由细胞合成和分泌的生物活性物质 B. 能调节多种细胞生理功能 C. 在免疫系统中起着非常重要的调控作用 D. 无论在什么情况下对机体都是有利的 E. 细胞因子包括IL、IFN、CSF、TNF和趋化性细胞因子 12．能刺激未成熟T细胞前体细胞的生长与分化的细胞因子是： A. IL-11 B. IL-4 C. IL-7 D. EPO E. GM-CSF 13．能与IL-4协同刺激朗格汉斯细胞分化为树突状细胞的细胞因子是 A. IL-11 B. IL-4 C. IL-7 D. EPO E. GM-CSF 14．关于细胞因子的效应作用，下列哪项是错误的？ A. 以非特异方式发挥作用 B. 无MHC限制性 C. 生物学效应极强 D. 在体内持续时间都很长 E. 作用具有多向性 15．TNF- 主要是由哪种细胞产生？ A. 单核/巨噬细胞 B. 静止T淋巴细胞 C. B淋巴细胞 D. 树突状细胞 E. 红细胞 16．能以三聚体形式存在的细胞因子是： A. IFN B. M-CSF C. IL-12 D. TNF E. IL-9 17．在胞膜外区有两个不连续的半胱氨酸残基和WSXWS基序的细胞因子受体是: A. 免疫球蛋白基因超家族 B. 红细胞生成素受体家族 C. 干扰素受体家族 D. 肿瘤坏死因子受体家族 E. 趋化性细胞因子受体家族 18．刺激B细胞产生IgA的细胞因子是： A. TNF
细胞因子的ELISA方法检测
实验报告
1.取已包被抗体并完成封闭的酶标条2条，分别装于酶标架上。在每条酶标条的1~6孔分别加入稀释液100微升。 2.向第6、7孔加入分别加入2000pg/ml PGFβ1标准品100微升。 3.用加样枪吹吸混匀第6孔的液体，注意避免气泡形成。混匀后其浓度约为1000pg/ml。 4.再吸出100微升加入第5孔，吹吸混匀。其浓度变为500pg/ml。以此类推，一直加到第2孔。吸去多余的100微升。 5.向第8、9孔各加入100微升样品1。10、11孔加入100微升样品2. 6.封口膜覆盖酶标板，防止水分挥发。 7.将酶标板置于37℃温箱孵育120min。 8.取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体，注意甩动方向，避免液体流入相邻酶标孔，造成交叉污染。 9.加入洗涤液，注意不要溢出至相邻孔，造成交叉污染。静置3min后甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。在吸水纸上拍干孔中液体。 10.每个孔各加入酶标记抗体100微升。封口膜覆盖酶标板，将酶标板置于37℃温箱孵育60min。 11. 取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体。再加入洗涤液，静置3min后，甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。在吸水纸上拍干孔中液体。 12. 每个孔各加入底物A 100微升，再加入底物B各100微升。晃动酶标板混匀。将酶标板放入37℃温箱孵育15min显色。 13. 取出孵育后的酶标板，见酶标板孔中液体呈蓝色。 14. 每个孔各加入终止液100微升，可见液体变成淡黄色。 15.用酶标仪在450nm处测OD值。结果如下： 16. 分析结果： 将2组标准品的OD值和标本1、标本2的4个副本的OD值合并得到平均值。根据各自的OD值，在半对数坐标上标出62.5、125、250、500、1000、2000这6个不同稀释度标准品所处的位置，将6个点连线集会成标准曲线。
细胞因子6项临床意义
6 项细胞因子检测试剂盒 检测靶标 促炎因子： IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α、 抑炎因子：IL-4、IL-10、 本项目涵盖由Th1、TH2、Th17、单核/巨噬细胞、树突细胞等多种细胞分泌的细胞因子，可更全面的反映疾病状态下机体免疫系统的改变。 重症疾病 细胞因子水平是早期预警全身炎症反应综合证（SIRS）的灵敏指标，SIRS 发生时IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α等细胞因子大幅升高，是反映SIRS 的关键细胞因子。对于临床重症患者，如脓毒症、不明原因发热、急性胰腺炎、重症肺炎、围手术期等患者，若发生SIRS 不能及时治疗，则易引发ARDS 和MODS，死亡率高达40-60%，因此，越完善的因子种类更有利于反映患者的细胞因子风暴，进而警醒临床医生及时干预。 IL-4 是机体Th2 细胞特异性分泌的细胞因子，IFN-γ是机体Th1 细胞特异性分泌的细胞因子，临床中多用IFN-γ/IL-4 来反映机体Th1/Th2 漂移水平，Th1/Th2 漂移是评估肿瘤疾病病情的重要指标； 自身免疫性疾病 IL-17 几乎参与所有自身免疫疾病的炎症反应，是自身免疫性疾病炎症损伤 评估的主要指标 感染/炎症相关疾病 IL-6、IFN-γ、TNF-α是感染患者主要升高的促炎因子，IL-4、IL-10 是机体最主要的抗炎因子，检测促炎/抗炎因子变化情况可评估感染病情进展及预后疗效。 细胞因子谱鉴别脓毒症和噬血细胞综合征（HLH） 脓毒症：IL-6 显著升高，IL-10 升高较明显 噬血细胞综合征：IFN-γ和 IL-10 显著升高
革兰氏阴阳性菌细胞因子谱 G-BIRCP：我们将 IL-6、 IL-10 同时高度增高＞10 倍（ X＋S），定义为革兰氏阴性菌感染相关细胞因子谱（ G-BIRCP）G+BIRCP：将 IL-6 为轻度增高＞2 倍甚至>10 倍（ X＋S），但 IL-10 正常或增高值＜10 倍（ X+S）者，定义为革兰氏阳性菌感染相关细 胞因子谱（ G＋BIRCP） 噬血细胞综合征（HLH）细胞因子谱 IFN-γ＞100pg/mL, ，IL-10＞60pg/mL ,且 IFN-γ水平高于 IL-10 水平。该标准对于 HLH 诊断的敏感度和特异性分别达到 88.0%和 98.7%，且阳性预测值和阴性预测值达到了 93.6%和97.5%。 细胞因子在不同类型疾病中的结果解读 1、常见细菌感染/病毒感染相关细胞因子 2、常见自身免疫性疾病相关细胞因子
干细胞与再生医学
需要重点看的概念 1 embryonic stem cells, ES 胚胎干细胞 2 Stem cells 干细胞 3 hematopoietic stem cell 造血干细胞 4 Neural stem cells (NSCs) 神经干细胞are initially present in a single layer of pseudostratified epithelium spanning the entire distance from the central canal to the external limiting membrane. NSCs continue to proliferate, and are patterned over several days in vivo to generate mature neurons, oligodendrocytes, and astrocytes. 神经干细胞起先呈现为单层假复层上皮，覆盖于整个中央管到外部的限制性膜。神经干细胞能增殖，并在数天内产生成熟的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 5 plasticity 可塑性一种成体干细胞具有生成另一个组织的特化细胞的能力，即成体干细胞具有一定跨系、甚至跨胚层分化的特性，称其为干细胞的可塑性，也称为成体干细胞的横向分化。Transdifferentiation (plasticity of stem cell): means the adult stem cell from one embryonic layer can differentiate into cells derives from other layer. 6 Human mesenchymal stem cells 人间充质干细胞 7．fate mapping 干细胞命运图：在正常环境下受各种稳态因素调节的分化趋势。这些趋势包括干细胞对机体正常发育活动的参与，以及干细胞对各种生物学危险诸如组织损伤、器官衰老以及疾病的反应。 判断 7 There must be stem cells that divide and generate neurons in the adult mammalian brain. （T） 在成年的哺乳类动物体内一定有能够分裂并产生神经元得干细胞存在 填空 8 (adult) stem cells have been identified in the brain, particularly in a region important in memory, known as the hippocampus. 研究者已经证实脑中含有成体干细胞，特别是在对记忆尤为重要的海马区 9 NEP cells continue to proliferate, and are patterned over several days in vivo to generate mature (neurons) , oligodendrocytes, and astrocytes in a characteristic spatial and temporal pattern. 神经上皮干细胞持续增殖，并在数天内被模式化，以特有的时空模式产生成熟的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 问答 10 neuronal precursors can be isolated from 神经前体细胞可从哪些部位分离 1) the developing human brain, 发育中的人脑 2) adult human hippocampus, 成人的海马
细胞因子检测的意义及方法比较
细胞因子检测的意义及检测方法比较 摘要：干扰素（interferon, IFN)是1957年发现的细胞因子，最初发现某一种病毒感染的细胞能产生一种物质可干扰另一种病毒的感染和复制，因此而得名。根据干扰素产生的来源和结构不同，可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他们分别由白细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产生。各种不同的IFN生物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。这里主要利用生物分析法和免疫分析法进行检测。 关键词：干扰素生物分析法免疫分析法 正文： 细胞因子是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节和血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。众多细胞因子在体内通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能。所以细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，对于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等都有重要意义。 生物分析法有两种： 1.依赖性细胞株：利用一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能在体外增殖的特性进行检测，但是干扰素的测定利用此法并不简便，所以不当采用。 2.功能检测：利用一些细胞因子的功能特性，可建立相应的活性测定方法。在这里可以利用干扰素的抑制病毒感染效应，对已进行病毒感染的细胞群加入干扰素的特征进行观察，达到检测的目的。 免疫分析法： 1.流式细胞仪检测: 原理：利用Brefeldin(BFA)、Monensin阻断了胞内高尔基体介导的转运方法，使得细胞因子聚集、蓄积，增强细胞因子信号，可被流式细胞仪检测。 方法：用抗细胞因子（干扰素）抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。 所需材料：蛋白转运抑制剂：阻断高尔基体介导的转运作用，使得刺激细胞表达的细胞因子聚集在胞浆内质网内，以利于准确检测细胞产生细胞因子的能力。 2.酶联免疫吸附实验（ELISA） ①间接ELISA（Indirect ELISA）：用于筛检抗体（抗特定抗原成分的特异性抗体）。此法是测定抗体最常用的方法。 ②夹心ELISA（Sandwich ELISA）：用于检测目的抗原的量。其优点是避免了对特异性抗体的直接标记，但增加了操作步骤和测定时间。 ③竞争ELISA（Competitive ELISA）用于确定抗原特异性或待检标本中含交叉反应成分时为了提高实验的特异性而使用的一种方法。根据标记抗原与同种未标记待测抗原与抗体间发生竞争性结合的原理，主要用于测定小分子抗原。 检测方法的进展：高通量细胞因子检测 CBA(Cytometric Bead Array)是一种微珠多用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其采用夹心法分析策略，与传统的ELISA分析技术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已知的标准品
细胞因子
细胞因子（CK）的概念：是由细胞分泌，影响细胞生物学行为，造血免疫功能和对炎症的反应的一类物质。（抗体，补体除外） 细胞因子的特点： 1. 大多为5-20KDa的小分子蛋白； 2.以旁分泌或自分泌形式影响附近细胞或细胞自身； 3.效能高，10—12mol/L水平即有明显生物学作用。 4.一种细胞因子可由多种细胞产生，一种细胞也可产生多种细胞因子； 5.细胞因子的产生受基因和环境调控； 6.可发生多重，重叠的作用； 7.以网络形式发挥作用； 8.通过与细胞因子受体结合而对靶细胞产生作用； 9.与神经，内分泌共组成细胞间信号分子系统。 细胞因子和激素 1. 激素是内分泌腺产生的化学物质，内分泌腺是许多同样腺体细胞 组成，通常“统一行动”； 2. 激素通常随血液循环与全身，发挥“远程效应”； 3. 激素通常对特定组织或细胞发挥特有效应； 4. 激素调节作用通常是全身性/系统性的变化： 5. 以辐射或树杈形式发挥作用。 但是，有些细胞因子和激素并没有严格的界限。 细胞因子的结构功能分类：有白介素（IL）类，干扰素（INF）类，集落刺激因子，趋化因子，肿瘤坏死因子，生长因子等。 细胞因子检测的临床应用 1 特定疾病的辅助诊断。 2 评估免疫状况，判断疗效和预后。 3 细胞因子临床治疗应用的监检测。 细胞因子检测方法 1. 功能检测：利用细胞因子功能特性，建立相应的生物学活性测定方法。此 法敏感性高但灵敏度不高，容易受干扰因素影响。 2. 免疫检测：制备抗细胞因子单抗或多抗测定。特异性强，操作简便，但灵 敏度不高，且不能代表其活性。 3. 分子生物学检测：利用分子杂交技术检测细胞内细胞因子mRNA表达，或用 PCR扩增。此法当前最敏感，但只代表细胞因子基因表达，不能代表当前水平。 细胞因子检测的临床应用原则 细胞因子最大特点是其功能多样性，重叠性和组织细胞非特异性，所以不能
细胞内细胞因子的检测
细胞内细胞因子的检测 细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。研究显示，细胞因子可以具有多重功能，作用于多个细胞亚群并可在不同亚群细胞表达。早期细胞因子表达与T细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如Th1(IL-2，IFN-γ)与Th2(IL-4，IL-5，IL-10)，但这些研究很难推广，因为T细胞克隆与体内T细胞功能相关性还不清楚。 活化的T细胞可分泌多种细胞因子至细胞外，而流式细胞仪仅能检测细胞内的抗原，所以应阻断细胞因子分泌至细胞外，方法为破坏高尔基体，因细胞因子（即各种蛋白）在合成后需经高尔基体的加工和转运，才能到达细胞膜，然后通过高尔基体膜与细胞膜的融合作用将细胞因子分泌至细胞外。因此破坏高尔基体即可切断细胞因子的转运途径，干扰其分泌。近来，Jung与Picker采用了Brefeldin(BFA)与monensin等药物预孵检测胞内细胞因子的表达的方法。这一方法阻断了胞内高尔基体介导的转运使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。 胞内细胞因子染色与传统的检测可溶性蛋白的方法如ELISA相比，具有显著优越性。该法从单个细胞水平检测内多个细胞因子的同时，还可标记各种细胞表面分化抗原以及活化分子、趋化因子受体和黏附分子等，从而区分表达特定细胞因子的细胞亚群及其表型特征。使用特定刺激剂研究细胞因子应答是细胞因子研究中的重大进展。早在1986年，Mosmann等应用Th细胞克隆技术和细胞因子产生的不同，发现小鼠CD4细胞是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。后来在人类的CD4细胞群中也发现了Th1和Th2细胞亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α等，介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏反应，在抗胞内病原菌感染中发挥重要作用；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10，其主要功能是刺激B细胞增殖并产生抗体，与体液免疫有关。应用该方法，在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在1型与2型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被
细胞因子详解
捋捋让人迷惑的细胞因子 细胞因子是一类调节蛋白或者糖蛋白，他们的分类现在还不是完全清楚。他们通过结合细胞表面的特定受体，激发细胞内信号通路起作用。 白细胞组成了免疫和炎症系统，大多数细胞因子作用于白细胞或者由白细胞表达，他们在免疫和炎症反应中起到重要的调节作用。实际上，一些免疫抑制和抗炎作用的药物就是通过调节这些细胞因子的表达起作用的。 细胞因子由特定的细胞表达并分泌到胞外，结合细胞表面的细胞因子受体后激活细胞内信号 传导通路 细胞因子分类 细胞因子最早在20世纪70年代中期被提出，它当时被认为是一种多肽因子，可以调控细胞分化和免疫系统。干扰素（IFNs）和白介素（ILs）是主要的多肽家族，在当时细胞因子主要指这两类家族。 起初细胞因子的分类主要是根据分泌该因子的细胞类型或者细胞因子初次被发现时的生物活性。然而这些分类方法现在看来都不够准确，无法满足后期的分类需求。最近，根据细胞
因子一级，二级和三级结构的分析，可以将大多数的细胞因子分为6大家族。因此，根据分类方式的不同，某些细胞因子会有多个名称。 表1：细胞因子根据结构分类结果 细胞因子家族成员 ‘β-Trefoil’ cytokines Fibroblast growth factors Interleukin-1 Chemokines Interleukin-8 Macrophage inflammatory proteins ‘Cysteine knot’ cytokines Nerve growth factor Transforming growth factors Platelet-derived growth factor EGF family Epidermal growth factor Transforming growth factor-αHaematopoietins Interleukins 2–7, -9, -13 Granulocyte colony stimulating factor Granulocyte-macrophage colony stimulating factor Leukaemia inhibitory factor Erythropoietin Ciliaryneurotrophic factor TNF family Tumour necrosis factor-α and –β
第六章 细胞因子
第六章细胞因子 （参考答案） 一、单选题 1、恶液质素主要由哪种细胞产生（） A、T细胞 B、B细胞； C、中性粒细胞； D、树状突细胞 胞 2、MCP-1可趋化哪类细胞（） A、活化T细胞; B、B细胞； D、纤维母细胞； E、树状突细胞 3、IL-2的产生细胞主要是（） T细胞 B、B细胞 C、单核-巨噬细胞 D、NK细胞 E、中性粒细胞4、α亚家族趋化性细胞因子的典型代表是（） A、IL-1； B、IL-2； C、IL-3； D、IL-4IL-8 5.天然免疫过程中重要的负调节性细胞因子是（） IL-1； B、IL-6；IL-10； D、IL-12；E、IL-18 二、填空题 1．由___淋巴细胞____产生的细胞因子称为淋巴因子；由___单核巨噬细胞_____产生的细胞因子称为单核因子；可刺激骨髓干细胞或祖细胞分化成熟的细胞因子称为____集落刺激因子_______。 2．TNF分为两种，即TNF-α和TNF-β。前者主要由___单核巨噬细胞_____产生；后者主要由活化的___淋巴细胞______产生。 3．细胞因子通常以__旁分泌____形式作用于邻近细胞，或以__自分泌___形式作用于产生细胞因子的细胞本身。 三、名词解释 1．细胞因子——机体细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面相应受体，近距离进行精细调节，在固有免疫和获得性免疫中发挥重要作用。 2．趋化因子——（chemokine) 又称趋化性细胞因子，是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子家族，已发现50多个成员。 3．集落刺激因子——可刺激骨髓干细胞或祖细胞分化成熟的细胞因子。
4．白细胞介素——由淋巴细胞和单核巨噬细胞分泌的一类具有重要免疫调节作用的细胞因子，包括单核细胞因子（monokine)和淋巴因子。 5．干扰素——由活化淋巴细胞和体细胞分泌的一类具有抗病毒功能和免疫调节功能的细胞因子。 6．肿瘤坏死因子——包括TNF-α和TNF-β两类，分别由单核巨噬细胞和活化淋巴细胞产生，具有抑制肿瘤细胞增殖、抑制病毒感染细胞增殖、促进TL、BL增殖、炎症介质等生物学作用。 四、问答题 1．简述细胞因子的共同特点 ①、分子量低，属糖蛋白； ②、以自分泌或旁分泌形式在局部发挥作用； ③、具有激素样活性，作用迅速而短暂； ④、通过和受体结合，对免疫细胞功能进行正负调节 2．简述细胞因子的生物学功能 ①、白细胞介素(interlukin,IL) ——免疫调节作用； ②、干扰素（interferon,IFN）——抗病毒作用； ③、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）——抗肿瘤活性和炎症介质； ④、集落刺激因子（colony stimulating factor,CSF）——刺激骨髓造血前体细胞生长分化； ⑤、趋化因子（chemokine)——趋化免疫细胞； ⑥、生长因子（growth factor,GF)；
乳腺癌相关细胞因子
众所周知细胞因子是由免疫原或其他因子刺激细胞所产生的具有信息传递功能的蛋白质或多肽。它既是机体免疫系统应答的效应成分，又是免疫细胞间进行信息传递的介质。大多数细胞因子对乳腺癌细胞具有抑制生长、促进凋亡的负面作用，同时具有促进生长繁殖、为侵袭转移提供条件的作用。这与细胞因子的浓度，癌细胞的恶性程度，癌细胞生长的微环境等因素有关，这些细胞因子的相互作用及其临床意义值得关注。 在部分地区，乳腺癌的发病率已居于妇女恶性肿瘤发病率首位。细胞因子（CK）是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导免疫效应细胞和相关细胞合成、分泌的，具有生物活性的一类蛋白或多肽。近年来研究表明乳腺癌与细胞因子密切相关。 1 细胞因子对肿瘤细胞的作用 1.1 细胞因子对肿瘤细胞生长的促进作用表现在以下几方面 ①介导乳腺癌细胞逃避免疫监视：研究发现肿瘤细胞招募的调节性T细胞可能在逃避免疫监视方面起着主导作用，从肿瘤中去除Treg细胞后，宿主免疫系统能有效地排斥早晚期肿瘤[1]。 ②促进血管的生成，为肿瘤生长提供营养。 ③促进肿瘤细胞的侵袭与转移。TNF和IL-1促进内皮细胞表达粘附分子，而肿瘤表达的粘附分子受体能使其实现转移。 1.2 细胞因子的抗肿瘤作用 ①对肿瘤细胞的直接杀伤，如TNF-α； ②促进宿主的抗肿瘤免疫； ③影响肿瘤血供，减少营养来源； ④刺激造血形成，解除放疗、化疗对免疫的抑制。 2 乳腺癌相关的细胞因子
2.1 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的特异性最高的刺激血管生成的因子。人VEGF基因位于6p21.3，长度大约为14kb。VEGF基因的表达与缺氧、细胞分化、雌激素和细胞因子有关。在乳腺肿瘤的生长过程中，肿瘤细胞产生蛋白水解酶分解原有的血管基底膜，血管内皮细胞在肿瘤细胞产生的VEGF诱导下，形成毛细血管芽向肿瘤方向运动，最后形成毛细血管[2]。但这些新生的毛细血管基底膜不完整，管壁通透性高，利于肿瘤的血行转移。免疫组织化学分析，结果表示VEGF在乳腺癌肿瘤样本中的表达率为39.8%，但是没有在临近的正常组织中表达。值得注意的是，VEGF阳性患者的5年生存率明显低于VEGF阴性患者。 2.2 肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子（TNF）有a、b两型，都具有参与免疫应答、引起恶病变的作用。但TNF-α对肿瘤的作用，存在不同的观点。有学者认为TNF-α起到直接和间接杀伤或抑制肿瘤的作用，其作用机制为TNF-α和癌细胞上的TNF-α受体结合，内移入细胞裂解其DNA。但也有一些学者认为TNF-α对肿瘤有促进作用。其促进作用可能通过以下几种途径： ①促进肿瘤细胞存活，肿瘤细胞产生的TNF通过诱导依赖于NF-κB的抗凋亡分子的表达促进肿瘤细胞存活。 ②促进肿瘤血管的新生：局部大剂量的TNF-α可以破坏肿瘤血管，但小剂量持续的TNF-α可以促进血管生成，有利于肿瘤的生长和扩散。 ③抑制T细胞和巨噬细胞的细胞毒作用而损坏免疫监视。 2.3 转移生长因子-β 转移生长因子-β（TGF-β）是一种丝裂原活化蛋白激酶，将细胞外信号传至细胞内，参与细胞的生长、分化、增殖的调节及恶性转化，与乳腺癌的发生、发展有关。TGF-β对不同时期
第五章细胞因子
第五章细胞因子 主要内容 （一）细胞因子的概念与种类 1．细胞因子（CK）机体多种细胞分泌的小分子蛋白质或多肽，通过与细胞表面相应受体结合发挥抗感染、抗肿瘤、免疫调节、参与炎症反应、促进细胞生长和组织修复等多种生物学作用。 2．细胞因子的分类按来源分为两类：淋巴因子（LK）和单核因子（MK）；按结构和功能可分为以下六类： （1）白细胞介素（IL）：是一组能介导白细胞和其他细胞间相互作用的细胞因子。主要作用是调节细胞生长，参与免疫应答和介导炎症反应。 （2）干扰素（IFN）：因其能干扰病毒感染和复制而命名。IFN有α、β和γ三种类型。IFN-α和IFN-β合称为Ⅰ型干扰素，主要由被病毒感染的细胞、单核-巨噬细胞、成纤维细胞产生，其作用以抗病毒、抗肿瘤为主，也有一定的免疫调节作用。IFN-γ又称Ⅱ型干扰素，由活化的T细胞和NK细胞产生，其作用以免疫调节为主，抗病毒、抗肿瘤作用不及Ⅰ型干扰素。 （3）肿瘤坏死因子（TNF）：因最初发现其能引起肿瘤组织出血坏死而得名。主要的有TNF-α、TNF-β。TNF-α由单核-吞噬细胞产生，大剂量可引起恶液质。TNF-β由活化的T细胞产生又称淋巴毒素。TNF能发挥抗肿瘤、抗病毒、免疫调节作用，也能引起发热反应、炎症反应和恶液质。 （4）集落刺激因子（CSF）：能够刺激造血干细胞和不同发育分化阶段的造血祖细胞增殖分化的一组细胞因子。 （5）趋化性细胞因子：是一类促进炎症的细胞因子，其主要作用是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。 （6）生长因子（TGF）：具有刺激细胞生长作用的细胞因子。有些生长因子也可抑制免疫应答，如转化生成因子-β（TGF-β）可抑制多种免疫细胞的增殖、分化及免疫效应。 （二）细胞因子的共同特性 1．理化特点和分泌特点 （1）理化特点：多数是小分子糖蛋白。多以单体形式存在（如IL-1、IL-2），少数以二聚体（如IL-10、IL-12）、多聚体形式存在（TNF为三聚体）。
细胞因子检测
细胞因子检测 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,?在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病的发病及病理过程。 1、免疫学检测法其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。?如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。 2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)?的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。 3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
一、IL-1的检测(生物活性测定) 产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。IL-1可分为IL-1α(?也称酸性IL-1,pI=5.0)和IL-1β(中性IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,?只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IL-1?的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或125I-UdR的DNA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。本试验介绍L929细胞增殖MTT比色法。 （一）IL-1的诱生 体外试验可用LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用 P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备IL-1。本试验以小鼠巨噬细胞制备IL-1。 1、取6～10周龄BALB/c或C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。 2、用带9号针头的5ml注射器腹腔注入5ml冷的含5％小牛血清的Hanks液(5?％?NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(内含腹腔细胞),反复抽吸几次。 3、1500r/min离心8min,洗细胞2次。
病理过程
病理过程(pathological process)，基本病理过程)：多种疾病中可能出现的、共同的、成套的 功能、代谢和结构的变化。如低钾血症，水肿等。健康（health）：不仅没有疾病，而且躯体上、精神上和社会上处于完好状态。强壮体魄+健全的心理精神状态。 高渗性脱水（hypertonic dehydration）：又称低容量性高钠血症（hypovolemic hypernatremia），特点：失水＞失钠，口渴；有血清Na+浓度＞150mmol/L，血浆渗透压＞310mmol/L,细胞内外液量均减少。原因：水摄入减少；水丢失过多。影响：脱水症；细胞内液向外液转移；尿量减少、尿比重增高。 低渗性脱水（hypotonic dehydration）：也称低容量性低钠血症（hypovolemic hypnatremia），特点：失钠＞失水，血清Na+浓度＜130mmol/L，血浆渗透压＜280mmol/L，伴 有细胞外液量的减少。原因：肾内或肾外丢失大量的液体或液体积聚在第三间 隙后处理措施不当所致，如只补水不补盐。影响：细胞外液减少，易发生休克； 血浆渗透压降低，无口渴感，饮水减少；经肾失钠-尿钠增多，肾外失钠-尿钠 减少。 等渗性脱水（isotonic dehydration）：特点：失钠=失水，血容量减少，但血清Na+浓度和血浆渗透压仍在正常范围。呕吐、腹泻、大面积烧伤等等渗性液体的大量丢失所 造成的血容量减少，均可致等渗性脱水。不处理-高渗性脱水（不感蒸发+呼吸 等丢失水分）；补给过多低渗溶液-低渗性脱水。 水中毒（water intoxication）：又称高容量性低钠血症（hypervolemic hyponatremia），特点：血钠下降，血清Na+浓度＜130mmol/L，血浆渗透压＜280mmol/L，但体钠总量正常 或增多，有水潴留使体液量明显增多。原因：主要是多过的低渗性体液在体内潴留 造成细胞内外液量都增多，引起重要器官功能严重障碍。影响：细胞外液量增加， 血液稀释；细胞内水肿；CNS症状；尿量早期增加，尿比重（指在4℃条件下尿液与 同体积纯水的重量之比，取决于尿中溶解物质的浓度，与固体总量成正比，常用来衡 量肾脏浓缩稀释功能）下降；体重增加。 低钾血症（hypokalemia）：血清钾浓度低于3.5mmol/L称为~ 但体内钾总量不一定少，但多数情况，低钾血症伴有缺钾。原因：钾摄取不足；钾丢失过多；细胞外钾转入细胞 内；毒物中毒；低钾性周期性麻痹。影响：神经肌肉松弛-超极化阻滞状态腱反射 减弱，呼吸肌麻痹，消化道运动降低；体外性低血压。心肌-3高1低：收缩性减 弱，兴奋性、自律性、传导性增高。 高钾血症（hyperkalemia）：血清钾浓度高于5.5mmol/L称为~ 极少伴有细胞内钾含量的增高，未必总是伴有体内钾过多。原因：钾摄入过多；钾排出减少；细胞内钾转运 到细胞外；假性高钾血症。影响：神经肌肉-兴奋性先增高后降低，去极化阻滞状 态，肌肉软弱无力至迟缓性麻痹；心肌-3低1高：兴奋性增高（严重时降低）， 收缩性、自律性、传导性降低。 反常性酸性尿（paradoxical acidic urine）：低钾血症合并代谢性碱中毒时，肾小管上皮细胞泌K+减少，泌H+增多，尿液呈酸性的现象。 反常性碱性尿（paradoxical alkaline urine）：高血钾合并代谢性酸中毒时，肾小管上皮细胞泌K+增多，泌H+减少，尿液呈碱性的现象。 水肿（edema）：过多的液体在组织间隙或体腔内积聚称为~原因：血管内外液体交换平衡 脱水热：高渗性脱水严重患者，尤其小儿，由于从皮肤蒸发的水分减少，使散热收到影响，从而导致体温升高. 低镁血症（hypomagnesemia）：血浆镁浓度低于0.75mmol/L称为~ 高镁血症（hypermagenesemia）：血浆镁浓度高于1.25mmol/L称为~
浅谈细胞因子
浅谈细胞因子在养猪中的应用 李爱民 一、细胞因子是什么？ 我们都知道，免疫系统由多种免疫细胞组成，免疫细胞的主要作用是什么呢？——维持机体的免疫平衡，让猪不发病。细胞因子在其中具有重要的调节作用，细胞因子是多种具有高活性多功能的小分子蛋白质，包括干扰素(IFN)、转移因子（TF)、白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(INF)、MHC-Ⅱ等，和抗体（免疫球蛋白）、补体等一起形成完整的免疫功能。 二、细胞因子能干什么？ 细胞因子具有广泛的生物活性和多种生物功能，可以刺激或者抑制免疫功能，调节多种细胞生理功能，或促进血细胞生成、分化与增殖，在抗感染与机体免疫系统中起着非常重要的调节作用。当机体内某种细胞因子的含量一旦发生异常变化，则会导致病理性反应，甚至致病。细胞因子是免疫系统从事具体工作的“一线工人”！是保持机体健康的物资基础。细胞因子数量的多少和猪“防火墙”的高度直接相关！ 三、免疫抑制和亚健康状态的本质是什么？ 免疫抑制—就是免疫器官抑制或阻断免疫抗体的形成,导致抗病能力下降或免疫应答不完全。也就是说，我们给猪打过疫苗以后，没有产生我们想要的足够的抗体！这是一个让人无比失望的现实——疫苗用的可能是进口的，剂量也比较大，免疫次数也不少，抗体就是不合格！免疫抑制导致基础免疫失败，这是猪越来越难养的根本原因。 亚健康状态—指非病非健康状态，这是一类次等健康状态，是界于健康与疾病之间的状态。处于亚健康状态的猪群，虽然没有明确的疾病，但出现精神活力和适应能力的下降，如果这种状态不能得到及时的纠正，非常容易引起疾病。我们经常看到某个猪群里出现母猪体态偏瘦、被毛粗乱、有泪斑甚至毛孔有铁锈色渗出
第五章 细胞因子
第五章细胞因子 复习要点： 1．掌握细胞因子概念和命名。 2．掌握细胞因子的共同特点。 3．熟悉细因子及其受体的分子结构。 4．了解细胞因子的生物学活性。 5．了解细胞因子的检测以及细胞因子与临床的关系。 一、单项选择题 1．在Ig类别转换中，能促进IgM转换为IgE的细胞因子是：★ A.IL-4 B.IL-2 C.TNF D.IFN E..IL-6 2.下列可形成三聚体的细胞因子是：★ A.IL-4 B.IL-2 C.TNF D.IFN E..IL-6 3．以下关于细胞因子的叙述，哪项是错误的？ A. 是一组小分子的蛋白质 B. 需其他物质刺激才能产生 C. 其作用具有特异性 D. 可以作用于自身细胞 E. 微量即起作用 4．下列哪种免疫分子的作用具有特异性? A. Ab B. IL-1 C. 补体 D．IFN E．TNF 5．关于干扰素的作用，下列哪项是正确的? Ａ．由活化的T 细胞产生Ｂ．以三聚体存在 C. 由感染机体的病毒合成 D. 具有抗病毒和免疫调节作用 E.．以上都不是 6．促进造血干细胞增殖分化的细胞因子是： A．IL B．TNF C．IFN D．TGF E．CSF 7．主要作用于单核细胞的趋化因子属于：★★ A．CC 亚族B．CXC 亚族C．C 亚族D．CX3C 亚族 E. 以上都不是 8．下列哪类细胞不能分泌细胞因子? A. T 淋巴细胞 B. B 淋巴细胞 C. 浆细胞 D. 单核细胞 E. 成纤维细胞 9．细胞因子不包括： A．淋巴毒素 B. 过敏毒素 C. IL-2 D. 集落刺激因子 E. 干扰素 10．关于细胞因子的效应作用，下列哪项是错误的? Ａ．以非特异方式发挥作用Ｂ．无MHC 限制性 C．生物学效应极强 D. 在体内持续时间很长 E. 作用具有多向性 11．关于IFN的生物学作用，下列哪项是错误的? ★★ A. 增强细胞表达MHC-I、II类分子 B. 激活巨噬细胞 C. 促进Tho细胞分化为Th1细胞
细胞因子与疾病实例
细胞因子与疾病实例 1、乙肝： 乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后, 在细胞免疫导致的肝损伤中细胞及其所释放的细胞因子起着重要的作用, 多种因素影响细胞增殖并且调节其亚型比例, 细胞因子网络受到破坏, 在细胞因子介导下便可造成肝脏等组织和器官的损害, 直接或间接的影响到乙型肝炎发病及其转归。Th细胞亚群、细胞因子与HVB清除和感染的慢性化、肝细胞损伤、肝纤维化、肝细胞癌有着重要的关系。Th1/Th2的不平衡可造成疾病的不同病理状态, 比例是否平衡是机体能否有效清除病毒和病毒感染细胞的主要因素之一。 TNF是一类能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子。根据其来源和结构不同，它介导自细胞黏附于血管内皮细胞，使之在炎症部位聚集，刺激单核细胞产生细胞因子，同时激活T 细胞和B细胞产生抗体，增强CTL对病毒感染细胞的杀伤作用。还可诱导急性期蛋白的合成，与病情的严重程度有关。在抗HBV感染过程中TNF具有抑制及清除HBV的作用。 本研究表明，TNF-α水平乙型肝炎组(包括大三阳和小三阳)明显高于正常对照组(P<0．01)。由此说明，TNF-α在反映乙肝病变程度方面是一项敏感指标，TNF-β水平与病情严重程度有关。人IL-6分子量为21～26kD，由184个氨基酸残基组成的糖蛋白。作为肝细胞的刺激因子，主要诱导肝细胞急性期反应蛋白的合成。 慢性乙肝患者血清IL-6、IL-8和TNF-a 含量明显高于健康对照组，IL-6、IL-8两种细胞因子作为肝细胞损伤的介质，共同参与乙肝的免疫病理损伤，有研究表明，它们在清除病毒及免疫复合物过程中释放溶酶体酶等炎性介质，并与抗原及病毒感染后改变了的肝细胞膜成分发生反应，造成肝细胞坏死、丙氨酸氨基转移酶升高。本实验结果显示，病毒有复制组的血清IL-6、IL8和INF-a含量明显高于健康对照组，IL-6、IL-8水平与HBV DNA载量关系密切，HBV复制时体内病毒量增加，HBV DNA作为TNF-a的强诱导剂，致使机体免疫系统紊乱加重而刺激机体产生更多TNF，从而产生和释放IL-6、IL-8，使肝组织中出现大量细胞因子，从而促进炎性反应，导致肝细胞炎性反应、坏死。本实验结果中血清IL-6、IL-8和INF-a水平呈现慢性乙肝大于慢性HBV携带者大于非活动HBsAg携带者的改变，既表明了其与肝细胞受损的程度，与病毒复制呈正相关，说明慢性乙肝患者病情的加重与IL-6、IL-8等细胞因子的大量产生有关。亦表明慢性乙肝患者体内的确存在免疫功能的紊乱，IL-6、IL-8和TNF-β水平在一定程度上反映了患者的病情。 2、丙肝： 丙肝感染者在感染丙型肝炎病毒后病情容易发展为慢性病变, 其中一个重要原因就是