细胞粘附肽_RGDS_抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡_刘强
基金项目:吉林省科技厅资助课题(No200505177)＊通讯作者
文章编号:1007-4287(2008)08-0972-04
细胞粘附肽(RGDS )抑制人胃癌细胞
B GC823生长及诱导其凋亡
刘 强,王 华＊,王 芳,蔡明军,李 晶
(吉林大学中日联谊医院,吉林长春130033)
摘要:目的 研究细胞粘附肽(R GDS )对人胃癌细胞系B GC823(Human stomach cancer BGC823)生长增殖的影响,进而探讨R GDS 诱导B GC823细胞凋亡的作用。方法 用不同浓度的R GDS 处理BGC823细胞48h 后,MTT 法检测RGDS 对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,通过HE 染色、透射电子显微镜、免疫组织化学、流式细胞术和凋亡细胞的DNA 片断等方法观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果 R GDS 能抑制BGC823细胞的生长增殖,并呈浓度依赖性;R GDS 诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白Survivin 的表达引发这一途径。结论 RGDS 能够通过诱导BGC823细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖。
关键词:RGDS ;胃癌细胞系BGC823;细胞凋亡中图分类号:R735.2
文献标识码:A
Preliminary studies on inhibiting effects of cellular adhesion motif RGDS on growth of sto mach cancer cellsBGC823and in -ducing apoptosis LIU Qiang ,W ANG Hu a ,W ANG Fang ,et al .(China -Japan Union Hos pital of J ilin U ni vers ity ,Changchun 130033,China )
Abstract :Objective To investigate the effect of cellular adhesion motif RGDS on the growth and proliferation of hu man stomach cancer cells BGC823,and to study the function of cellular adhesion motif R GDS in inducing B GC823apoptos is .Methods B GC823cells were treated with cellular adhesion motif R GDS at various concentrations .MTT assay was used to examine the growth and prolif -eration of BGC823cells after treatment with cellular adhesion motif RGDS for 48hours .HE staining and electromicroscope were used to observe the morphology of apoptotic cells ,and Survivin ,flow cytometry were also used to analyze the BGC823apoptosis .Results cellular adhesion motif RGDS significantly inhibits the growth and proliferation of BGC823cells in dose -dependent manner .And cellu -lar adhesion motif RGDS also induce the apoptos is of BGC823cells .Inducing apoptosis was caused by inhibiting the expression of Sur -vivin .Conclusion cellular adhesion motif R GDS may inhibit tumour cell growth and proliferation through inducing apoptosis .
Key words :R GD ;B GC823cells ;cell apoptosis
(Chin J Lab Diagn ,2008,12:0972)
R GD 作为胞外基质(E CM )很多糖蛋白中高度保守的序列,在介导细胞与细胞、细胞与胞外基质蛋白的相互作用中发挥着十分关键的作用[1]
。研究表
明,外源性RGDS (含RGD 的细胞粘附肽)在多种病理条件下可以发挥治疗作用,并可抑制肿瘤细胞的增殖及诱导其凋亡。对于这方面的工作国内仅有抑制人大肠癌细胞(HCT -8)[2]
增殖的报道。最近,还发现RGDS 能直接进入细胞并能通过激活细胞凋亡蛋白酶家族的某些成员,引起细胞凋亡[3,4]。近年的研究也发现,和RGD 序列相连的第4位的氨基酸对其活性影响较大,并证实了RGDS -NH2的生物活
性明显高于R GDS [5]。为进一步考察RGDS 细胞粘
附肽对细胞凋亡的影响,本文利用本实验室合成的RGDS 对其抑制B GC823的增殖及诱导其凋亡作用进行了究,为其在肿瘤治疗中的应用提供了理论基础。
1 材料和方法
1.1 实验材料细胞粘附肽RGDS 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室提供,使用前,用蒸馏水溶解、灭菌,IMDM 培养液稀释成不同浓度。噻唑蓝(MTT ):Sigma 公司。用PB S 配制成5g /L 溶液。I MD M 培养粉:Gibco 公司产品。免疫组化试剂盒:购自Santa Cruz Bio -technology 公司。
1.2 细胞培养 人胃癌细胞系BGC823细胞:由吉林大学中日联谊医院中心研究室提供,放在含10%灭活新生牛血清的I MDM 完全培养液中,置37℃,5%CO 2培养箱中培养。2-3d 传代1次。
1.3 BGC823细胞生长抑制试验 按Mosman[6]方法。将处于指数生长期的B GC823细胞,用含10%新生牛血清的I MDM制成3×107cells/L细胞悬液,接种于96孔板。培养24h后换成含牛血清的完全培养液。分2组:R GDS组,加200μL含不同浓度R GDS的培养液(1
2.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL);空白对照组,加200μL I MDM培养液,每组5复孔。继续培养24h、48h、72h之后,每孔加入20μLMTT(5g/L),培养箱中孵育4h,吸去上清,每孔加150μLDMSO,充分振荡,酶标仪(EXL800)检测各孔光密度吸收值。
1.4 凋亡细胞的普通光镜观察 细胞经胰蛋白酶消化,接种于盖玻片上,用10%新生牛血清的I MD M 培养24h后,换成含50μg/mL RGDS的I MDM培养液,继续培养48h,丙酮固定,HE染色,光镜观察细胞形态变化。
1.5 凋亡细胞的透射电镜观察 传代细胞在含体积分数为10%新生牛血清的培养液中贴壁生长24h 后,换成含50μg/mL R GDS的培养液,培养48h后,收集细胞于琼脂离心管中。取出细胞团,按常规电镜样品制作程序处理样品,制作超薄切片,透射电子显微镜观察。
1.6 凋亡细胞的DNA片段分析 按细胞凋亡的阶梯状DNA区带检测方法进行。
1.7 凋亡细胞的Survivin蛋白检测 按细胞凋亡检测试剂盒方法进行。
1.8 流式细胞仪检测 依照参考文献[7]方法进行。收集不同浓度R GDS处理48h的细胞,70%的冷乙醇固定24h以上,PB S洗2遍,加10mg/L RNA 酶,37℃温育30min,碘化丙锭(PI)染色,流式细胞仪(ELITE,日本)进行检测。
1.9 统计学处理 所有实验数据采用x±s表示,实验数据应用SPSS10.0统计软件进行方差分析。2 结果
2.1 RGDS对BGC823细胞生长的抑制作用 用四种不同浓度(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)和三个作用时间点(24h、48h、72h)的RGDS 作用后的B GC823细胞,在波长492nm处,用酶标仪分别测定其各孔的OD值,计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率(IR)=(对照组平均OD值-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。
RGDS在12.5μg/mL-100μg/mL浓度范围内,随着浓度增大以及作用时间延长,对BGC823细胞增殖的抑制作用明显增强,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。且呈浓度和时间依赖关系(见表1)。
表1 细胞粘附肽RGDS对人胃癌细胞BGC823增殖抑制效应的影响(x±s,%)
Time
RGDS Concentration(μg/mL)
Control12.52550100
24h021.07±1.6830.18±2.61＊40.84±2.15＊52.67±3.21＊48h042.62±2.78＊51.64±1.89＊64.67±2.68＊75.21±2.06＊72h053.98±3.09＊64.67±2.01＊74.31±3.12＊85.47±2.97＊ ＊P<0.01vs Control,The data in the table are inhibition ratio
2.2 RGDS诱导BGC823细胞凋亡
2.2.1 普通光镜观察 用50μg/mL R GDS处理48h 的B GC823细胞HE染色的细胞爬片,可见较多凋亡细胞:细胞呈圆形,细胞核固缩深染,核染色质边集,有些细胞核碎裂,呈数个深蓝色颗粒(见图1)。2.2.2 透射电镜观察 用50μg/mL R GDS处理48h 后的细胞,可见细胞体积缩小,胞浆浓缩,染色质凝集于核膜内侧,细胞核固缩或碎裂成小片,但细胞浆中线粒体完整,有些线粒体中嵴减少变稀疏(见图2)。凋亡晚期细胞,可见细胞分解为膜包裹的凋亡小体。
2.2.3 Survivin检测 用50μg/mL的RGDS处理B GC823细胞48h后,阳性细胞呈现棕色或棕褐色,阴性细胞显蓝色(见图3)。经图像分析检测,对照组与实验组细胞的平均灰度值(196.56±10.12、105.36±12.32)有显著性差异。
2.2.4 流式细胞仪检测 图4为浓度为25μg/mL-50μg/mL的R GDS处理B GC823细胞48h后的DNA 片段的流式细胞直方图,从图中可以看到在二倍体峰前出现凋亡峰,随着RGDS浓度的增大,凋亡峰逐渐增大,对照组,25μg/mL和50μg/mL RGDS作用组凋亡峰所占的百分比分别为0%、24.7%和44.3%。当RGDS浓度达到100μg/mL以上时,即有细胞碎片出现。
RGD S(μg.mL-1):(A)0;(B)50
图1 细胞粘附肽RGDS作用BGC823细胞48h的HE 染色(200×
)
(A)Control;(B)BGC823cell treated with R GDS(50μg.mL-1)图2 细胞粘附肽RGDS作用48h后BGC823细胞
的超微结构
R GDS(μg.mL-1):(A)0;(B)50
图3 细胞粘附肽RGDS作用BGC823细胞48h后的
Survivin蛋白免疫组化(×400)
2.2.5 凋亡细胞的DNA片段分析 用50μg/mL的
R GDS作用B GC823细胞48h后的DNA电泳图谱(见
图5)。从图中可以看到对照组细胞中的DNA片段
大小均一,且分子量较大。加入RGDS的B GC823细
胞内的DNA片段均有不同程度的断裂,在电泳带上
呈现出很清晰的“梯状”降解条带。
3 讨论
细胞粘附肽(Ar g-GLy-Asp,RGD)是存在于胞外基
质(EC M)纤连蛋白(fibronectin)
和其它相关粘附分子
R GDS(μg.mL-1):(A)0;(B)25;(C)50
图4 细胞粘附肽RGDS作用于BGC823细胞48h后的DNA
片段的流式细胞直方图
图5 细胞粘附肽RGDS的作用于BGC823细胞的凋
亡电泳图
中的特征三肽序列Arg-Gly-Asp(R GD),该三肽序列
是细胞粘附、扩散和迁移的识别部位。体外实验已
明确R GDS(含RGD的细胞粘附肽)具有明显的抑制
血小板凝聚作用及抗癌作用等。RGDS的抗癌作用
引起人们的广泛关注,相继的研究证明,它能有效抑
制人大肠癌细胞(HCT-8)凋亡。
细胞凋亡是机体的一种基本生理机制。正常情
况下,细胞凋亡与细胞增殖一起维持着组织中细胞
总数的动态平衡。当细胞凋亡和/或增殖发生异常,
则可能导致疾病特别是肿瘤的发生。肿瘤不仅是细
胞增生异常的疾病,而且是死亡异常的疾病,即不仅
是由于细胞增生过度,亦是因细胞死亡过低(应死亡
而未死亡),是增生与死亡失调所致。
本文研究了RGDS对胃癌细胞B GC823生长增殖的影响。MTT试验的结果表明RGDS抑制了人胃癌细胞BGC823的生长增殖,并呈浓度和时间依赖性。
我们从研究抗肿瘤药物作用机制的常规方法,即诱导细胞凋亡角度出发,采用FC M、透射电镜来探讨R GDS对肿瘤细胞是否具有诱导凋亡的作用,以及免疫细胞化学的方法来初步阐释其可能的作用机制。通过对用RGDS处理48h后的B GC823细胞,从细胞形态的观察发现细胞体积变小,胞核深染,胞浆发红等特征,出现很多的凋亡细胞;透射电镜的观察结果显示,细胞表面微绒毛消失,异染色质趋边凝聚,都聚集在核膜上,形成新月形帽状结构,甚至核膜消失,细胞核碎裂,可见凋亡小体,这说明R GDS诱导BGC823细胞产生了凋亡。为了更进一步的证实RGDS作用后的B GC823细胞发生了凋亡,我们通过流式细胞仪和DNA电泳来检测凋亡。流式细胞仪检测结果表明B GC823细胞发生凋亡,且凋亡峰随着浓度的增加而增高;DNA电泳的结果表明,B GC823细胞内的DNA片段都断裂成了大小不等的小片段,在电泳带上呈现出很清晰的梯状降解条带,这证实了R GDS有明显的诱导细胞凋亡的作用。我们还深入的探讨了R GDS作用后细胞内抗凋亡蛋白Survivin表达的影响。免疫组织化学染色的结果表明RGDS作用48小时后,抗凋亡蛋白Survivin 的表达量明显减少,从而也证实了RGDS诱导B GC823细胞产生了凋亡。这也暗示出RGDS诱导胃癌细胞凋亡的机制可能是抑制癌基因Survivin的表达。
结果证实,R GDS能抑制B GC823细胞增殖并诱导其凋亡,这可能是因为细胞粘附肽对肿瘤细胞作用主要通过保守序列RGD的靶向性来起作用。诱导B GC823细胞凋亡作用机制可能是抑制癌基因Survivin的表达来发挥抗肿瘤作用。
作者简介:刘强,男,医学硕士,副教授,外科学。
参考文献:
[1]Pierschbacher M D,Ruos lahti E.Cell attachment activity of fibronectin
can be duplicated by s mall s ynthetic fragments of the molecule[J].Na-ture,1984,309:30.
[2]Wang hua,Zeng Hong-bin,Yang Shao-juan,et al.Cellul ar Adhes ion
Tripeptide R GD Inhibits Gro wth of Human Ileocecal Adenocarcinoma Cell s HCT-8and Induces Apoptosis[J].Che m J Chin Univ,2007,23(5): 558.
[3]Aguzz i MS,Giampietri C,Marchis FD,et al.R GD S peptide induces cas-
pase8and cas pase9activation in human endothelial cells[J].Blood, 2004,103:4180.
[4]Taga T,Suzushi A,Gonzal ez-Gomez I,Gilles FH,Stins M,Shimada H,et
al.αv-Integrin antagonist EMD121974induces apoptos is in brain tumor cells growing on vitronectin and tenas cin[J].Int J Cancer,2002,98:690.
[5]Pierschbacher M D,R uoslahti E.Infl uence of s tereochemis try of the se-
quence Arg-Gl y-As p-Xaa on binging specificity in cell adhesion[J].J Bi-ol Chem.,1987,262:17294.
[6]Darz ynkiewicz Z,Bruno S,Bino GD,et al.Features of apoptotic cells mea-
sured by fl ow cytometry[J].Cytometry,1992,13:795.
[7]Soleas GI,Diamandis EP,Goldbery DM.Resveratrol:a molecule whose
ti me has come and gone[J].Clin Bioche m,1997,30:91.
(收稿日期:2007-10-28)
科技书刊应使用阿拉伯数字的场合
总的原则应是:凡可以使用阿拉伯数字,而且又很得体的地方,均应使用阿拉伯数字。在科技书刊中,主要用于以下场合。
1 公元世纪、年代、年、月、日、时刻 如:20世纪90年代,1998-02-15,18:06:25。
2 物理量量值必须使用阿拉伯数字 如:1m(1米),30多V(30多伏)。
3 非物理量的量词(计数单位)前面的数字 如:插了1根管子。
4 计数的数字 如:95%,500余。
5 元件、仪器型号、样品编号、标准代号及其他序号 如:第8天。
6 文后参考文献(古籍除外)著录中的数字。
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立 目的建立过表达CCR3人SGC7901胃癌细胞细胞株，为后续CCR3在胃癌转移的研究奠定基础。方法分离正常人外周血单个核细胞，提取总RNA，PCR 扩增CCR3基因CDS序列，连接至质粒pEFP-N1，进行CCR3基因的克隆，构建含有CCR3基因的pEFP-N1-CCR3重组质粒。重组质粒通过脂质体转染法对人SGC7901胃癌细胞进行转染。结果Realtime-PCR及Westernblot证实CCR3基因能够在人SGC7901胃癌细胞中正确表达。结论成功建立稳定表达CCR3基因的SGC7901胃癌细胞株，为研究CCR3在胃癌细胞株转移中的机制奠定了基础。 标签：CCR3；SGC7901细胞；胃癌转移 趋化因子受体（Chemokine receptor）是表达在一些特定的细胞表面的G蛋白偶连的七跨膜域受体[1]。这些受体与细胞外的配体趋化因子结合。与特异的趋化因子结合后，趋化因子受体引发钙离子内流而产生细胞趋化反应，从而诱导细胞到生物体的特定部位。CCR3在胃癌远端迁移上到底扮演什么样的角色也未完全清楚。目前，将外源性CCR3基因转入人胃癌细胞使其过度表达未见报道。本实验尝试构建含有CCR3的重组质粒pEFP-N1-CCR3并转染至人SGC7901胃癌细胞，并检测转染后SGC7901细胞CCR3的表达情况。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1质粒菌株和慢病毒包装细胞pEFP-N1慢病毒穿梭载体，psPAX2和pMD2G包装质粒，大肠杆菌DH5。人SGC7901胃癌细胞，生长培养基为高糖DMEM培养基，含10%胎牛血清。 1.1.2 主要试剂及引物Lipofectine2000转染试剂盒；T4连接酶；质粒抽提试剂盒；限制性内切酶EcoRI和BamHI；胎牛血清；CCR3一抗；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG。 1.2人SGC7901胃癌细胞的培养人SGC7901胃癌细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖的完全培养基中，置于37℃，5%CO2孵育箱中贴壁培养， 0.25%胰酶3d传代换液一次。 1.3 pEFP-N1-CCR3的构建及鉴定 1.3.1 CCR3的CDS序列扩增取健康人外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞并抽提总总RNA，在Pubmed中的nucleotide上查询CCR3的CDS编码区并设计克隆引物，并在克隆引物中加入BglII和EcoRI酶切位点，用taq聚合酶扩增CCR3的CDS序列，
胃癌的发病机制及预防
胃癌的发病机制及预防 姓名：孟慧佳学号：2011013281 班级：生物工程111 正文： 胃界于食道和十二指肠之间，是消化道最宽大的部分，它的形状和位置随内容物的多寡和体位变化而改变。胃分4个部分，靠近食道的部分是贲门部，胃上部膨大部分是胃底部，自胃底部往下是胃体部，靠近十二指肠的部分叫幽门部。 在胃内壁上覆盖着一层厚约0.3-1.5毫米的胃黏膜，胃黏膜上生长着三种腺体：即贲门腺、胃底腺和幽门腺。三种腺体加起来的数量是惊人的，每天分泌的胃液的数量约有1500-2500毫升，贲门腺和幽门腺主要分泌黏液，起到保护胃黏膜的作用。胃酸的强刺激和胃蛋白酶的强消化力，都不能破坏胃黏膜，主要就是因为黏液总是先于胃酸和胃蛋白酶分泌出来，并均匀地布散到胃壁上的缘故。胃黏膜的这种巧妙的自我保护功能，是令人叹为观止的大自然的杰作之一。 胃的功能有：1．存放食物。液体食物在胃里停留时间很短，油脂性食物在胃里停留时间较长，混合性食物在胃里停留时间约4-6个小时。 2．胃蛋白酶可消化食物中的蛋白质。 3．制造内因子及吸收维生素B2。 4．胃酸可杀灭随食物进到胃里的细菌。 胃内有食物时，胃的蠕动方向是由贲门向幽门进行，当胃内容物排空后、血糖也消耗到较低水平时，胃会由幽门向贲门方向逆性蠕动，这叫饥饿蠕动，使人产生饥饿感。 胃癌介绍： 恶性肿瘤胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位（胃窦幽门区最多、胃底贲门区次之、胃体部略少），可侵犯胃壁的不同深度和广度。癌灶局限在粘膜内或粘膜下层的称为早期胃癌，侵犯肌层以深或有转移到胃以外区域者称为进展期胃癌。肉眼或胃镜观察胃癌有多种形态，如表浅型、肿块型、溃疡型、浸润型、溃疡癌（为慢性胃溃疡癌变）。显微镜放大观察癌细胞有多种类型（组织学分类），如腺癌（占约90%，包括乳头状腺癌、管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌）、腺鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、类癌。更细微的癌细胞内部的分子结构也有很多差异，因此，虽都称为胃癌，即使肉眼和显微镜下所见类型是相同的，但个性仍有很大差异，目前并不知晓究竟有多少个性独特的胃癌。 胃癌的发病机制： 正常胃粘膜上皮细胞是由原始新生细胞（干细胞）不断分裂生长分化而来，何时生长何时死亡都是受机体控制的，不会疯狂失控生长。干细胞都有各种原癌基因和抑癌基因，绝大多数情况下原癌基因的特性不表达出来，不会形成致癌物质，因此也就不能发育成胃癌细胞。 有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表达出来，这就是遗传的因素。除了遗传等内在因素外，还有很多外在的致癌因素，如上述高危人群面临的各种非遗传因素，也可直接诱发或长期破坏胃粘膜屏障使促癌物质更易诱发干细胞癌基因表达或基因突 变而产生致癌物，使新生不成熟的原始细胞不能分化成具有正常功能的胃粘膜上皮细胞，而是变成各种分化程度不良且生长失控的非正常细胞。 若机体的免疫监测功能正常，往往可以清除少量的异常细胞，但当长期心里状态不佳引起内分泌系统异常及免疫功能长期低下、或异常细胞由于某种未知原因逃逸了机体的免疫监测，则异常细胞最终发展成机体无法控制其生长的胃癌细胞，完成癌变过程。
clusterin 在胃癌组织及胃癌细胞株中表达的初步研究
claudin－6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞株中表达的初步研究 张俊会1，郭靠山2，王光亮1，马春生3 Expression of claudin－6and clusterin in gastric carcinoma tissues and cell lines Zhang Junhui1，Guo Kaoshan2，Wang Guangliang1，Ma Chunsheng3 1Xingtai Medical College，Hebei Xingtai054000，China;2Second Affiliated Hospital of Xingtai Medical College，Hebei Xingtai 054000;3Third Hospital of Xingtai，Hebei Xingtai054000，China． 【Abstract】Objective:To study the expression and clinical significance of claudin－6and clusterin protein in gas- tric carcinoma tissues and cell lines．Methods:The expression of claudin－6and clusterin protein were detected by immunohistochemistry and immunocytochemistry method in normal gastric tissue，gastric dysplasia，gastric carcinoma and gastric carcinoma cell lines(MKN28，SGC7901，BGC823)．Results:The positive expression rates of claudin－6 and clusterin in gastric carcinoma tissues，gastric hyperplasia and normal gastric mucosa were53．3%，65%，100% and60%，75%，100%，and differences among the3groups were remarkly significant(P＜0．05，P＜0．05)．The ex- pression of claudin－6and clusterin protein were related to tumor depth of gastric carcinoma and lymph nodes metas- tasis，but they were not correlated with patient＇s age，sex and vessel invasion．In addition，the expression of claudin－6 protein was positively related to that of clusterin protein(r=0．899，P＜0．05)．In gastric carcinoma cell lines claudin －6and clusterin were mostly expressed in cytoplasm and cell membrane．On the basis of the degree of differentia- tion，the immunostaining intensities of clusterin among3cell lines(MKN28，SGC7901，BGC823)were reduced，but those of claudin－6were not remarkly significant．Conclusion:Loss of the expression of claudin－6and clusterin play an important role in the carcinogenesis and subsequent progression of gastric carcinoma and might be used as mean- ingful markers of judging biological behavior of gastric carcinoma． 【Key words】gastric carcinoma;claudin－6;clusterin;immunohistochemistry Modern Oncology2013，21(02):0370－0373 【摘要】目的：探讨claudin－6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞中的表达及其临床意义。方法：应用免疫 组织化学及免疫细胞化学法检测claudin－6及clusterin在正常胃黏膜、非典型增生胃黏膜、胃癌组织及胃癌 细胞株（MKN28、SGC7901、BGC823）中的表达。结果：胃癌组织、非典型增生胃黏膜及正常胃黏膜中claudin－ 6及clusterin的阳性表达率分别是53．3%、65%、100%及60%、75%、100%，二者的阳性表达率在三组间有统 计学差异（均P＜0．05）。在不同浸润深度及有无淋巴结转移组内claudin－6及clusterin阳性表达的差异性 有统计学意义（P＜0．05），而在不同性别、年龄及脉管侵犯组内无统计学差异（P＞0．05），Spearman等级相关 性分析显示claudin－6与clusterin表达呈正相关（r=0．899，P＜0．05）。在三株胃癌细胞中claudin－6与 clusterin均阳性表达在细胞膜和细胞质中。依分化程度clusterin在MKN28、SGC7901、BGC823三种细胞系中 免疫染色强度逐步减弱，claudin－6在三种细胞系中免疫染色强度无明显差别。结论：claudin－6与clusterin 的缺失与胃癌发生发展及浸润转移有关，有望成为反映胃癌生物学行为有价值的标志物。 【关键词】胃癌；claudin－6；clusterin；免疫组织化学 【中图分类号】R735．2【文献标识码】A DOI：10．3969/j．issn．1672－4992．2013．02．48 【文章编号】1672－4992－（2013）02－0370－04 【收稿日期】2012－06－30 【修回日期】2012－07－21 【基金项目】河北省卫生厅医学科学研究重点项目计划（编号：20090594） 【作者单位】1邢台医学高等专科学校，河北邢台054000 2邢台医学高等专科学校第二附属医院，河北邢台 054000 3邢台市第三医院，河北邢台054000 【作者简介】张俊会（1970－），男，河北邢台人，副教授，主要从事消化系统肿瘤病理研究。 有研究表明多种上皮组织来源的肿瘤claudins表达异常，并与这些肿瘤的发生、发展密切相关［1］。胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，有关其发生、发展的机制尚未完全阐明。为此，我们采用免疫组化法检测claudin－6蛋白在正常胃黏膜、非典型增生及胃癌组织中的表达及其与clusterin表达的关系，以探讨其在胃癌的发生、发展及浸润转移中的作用。 1资料与方法 1．1资料 全部病例来自邢台市人民医院病理科2008年2月－2009年11月存档石蜡包埋标本。胃癌组45例，包括男性33 · 073 ·张俊会，等claudin－6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞株中表达的初步研究
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究_那迪
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究 那迪，刘福囝，姜成钢，徐昊，王振宁，徐惠绵 Experimental study on destruction of gastric cancer MKN45cells culture medium to peritoneum mesothelial cells Na Di，Liu Funan，Jiang Chenggang，Xu Hao，Wang Zhenning，Xu Huimian Department of Oncology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Liaoning Shenyang110001，China．【Abstract】Objective:To examine the mechanism by which the gastric cancer cells lead to early peritoneal metas- tasis．Methods:HMrSV5cells were co－incubated with the supernatants of gastric cancer cells．Morphological chan- ges of HMrSV5cells were observed．The cell damage was quantitatively determined by MTT assay．The apoptosis of HMrSV5cells was observed under transmission electron microscope．Acridine orange/ethidium bromide－stained con- densed nuclei was detected by fluorescent microscopy and flow cytometry．The expressions of Bcl－2and Bax was im- munochemically evaluated．Results:Conspicuous morphological changes of apoptosis were observed in HMrSV5cells 24h after treatment with the supernatants of gastric cancer cells．The supernatants could induce apoptosis of HMrSV5 cells in a time－dependent manner．The supernatants could up－regulate the expression of Bax and suppress that of Bcl－2in HMrSV5cells．Conclusion:Gastric cancer cells can induce the apoptosis of HPMCs through supernatants in the early peritoneal metastasis．The abnormal expressions of Bcl－2and Bax may contribute to the apoptosis． 【Key words】peritoneal carcinomatosis;stomach neoplasms;mesothelial cell;apoptosis Modern Oncology2013，21(02):0235－0238 【摘要】目的：建立胃癌腹膜转移早期间皮细胞的损伤模型，探讨胃癌腹膜转移早期癌细胞对间皮细胞的损 伤与细胞凋亡的联系，以及凋亡程度与相关蛋白表达。方法：将人胃癌细胞培养液上清，与人腹膜间皮细胞 系HMrSV5共培养。观察间皮细胞形态、增殖改变，透射电镜观察细胞凋亡，流式细胞仪和荧光染色判断凋亡 比例。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达情况。结果：接触胃癌培养液上清24h后，间皮细胞 大片脱落并出现典型凋亡表现。胃癌细胞的分泌物明显抑制间皮细胞的生长。胃癌细胞培养液上清可诱导 间皮细胞凋亡、抑制细胞增殖，呈程度－时间依赖性地抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl－2的表达；并能增加促 凋亡蛋白Bax表达。结论：胃癌细胞在腹膜转移早期可以通过其分泌物诱导间皮细胞损伤、凋亡，凋亡机制与 Bcl－2和Bax的失调有关。提示保护间皮细胞，抗间皮细胞凋亡在胃癌腹膜转移治疗中可能有一定应用价 值。 【关键词】腹膜癌转移；胃癌；间皮细胞；细胞凋亡 【中图分类号】R730．23；R735．2【文献标识码】A DOI：10．3969/j．issn．1672－4992．2013．02．04 【文章编号】1672－4992－（2013）02－0235－04 临床上腹膜转移是胃癌根治术后面临的棘手问题。腹膜为癌细胞转移提供了所需的炎性介质，在癌腹膜转移早期，由癌细胞，成纤维细胞，间皮细胞等分泌的细胞因子作用于间皮细胞，使间皮细胞在形态结构功能上发生改变，为腹膜转移提供“土壤”［1］。在对癌细胞浸润间皮组织的研究中，Buck等把癌细胞接种到间皮细胞受损的小鼠腹腔内后， 【收稿日期】2012－08－22 【修回日期】2012－09－21 【基金项目】国家自然科学基金资助项目（编号：81071956） 【作者单位】中国医科大学附属第一医院肿瘤外科，辽宁沈阳 110001 【作者简介】那迪（1982－），男，辽宁人，主治医师，博士，主要从事胃癌腹膜转移研究。E－mail：dawangmo@yahoo．cn 观察到癌细胞在受损区域迅速种植生长，而间皮细胞完好的小鼠却很少发生转移［2］。目前的研究发现，在癌细胞黏附到间皮细胞之前，间皮细胞就已经发生了改变：间皮细胞变圆或半圆形，进而细胞脱落导致间皮下结构暴露，形成裸区，癌细胞进而黏附种植［3－5］。我们认为间皮细胞的上述损伤改变与癌细胞诱导的细胞凋亡相关。基于上述假设，我们拟建立胃癌细胞黏附到间皮细胞之前所释放的细胞因子对腹膜间皮细胞的损伤模型，并检测细胞凋亡是否参与了上述损伤。 1材料与方法 1．1实验材料 试剂：FCS、DMEM、Bcl－2，Bax抗体及二抗、MTT、吖啶橙、溴乙啶（AO/EB）、PI均购自Sigma公司。细胞系：人胃癌细胞株MKN45由中国医科大学细胞生物学教研室提供。人 · 532 · 现代肿瘤医学2013年02月第21卷第2期MODERN ONCOLOGY，Feb.2013，VOL.21，NO.02
胃癌细胞凋亡相关基因
胃癌细胞凋亡基因 西安国医肿瘤医院研究人员通过大量的研究分析发现，胃癌细胞凋亡是有相关基因控制的，目前发现的有以下三个基因：bcl-2基因、Bax和Fas/FasL。下面来详细介绍： 1.bcl-2基因 bcl-2基因编码26kD的膜蛋白，是第一个被确认有抑制凋亡作用的基因。bcl-2基因激活、过表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡不平衡，而且会使具有遗传改变又得不到修复的细胞免于死亡而进入细胞循环，多种遗传成分改变可导致肿瘤的发生。因此，bcl-2在肿瘤发生发展中起着重要的作用。 乳腺癌中，高表达的Bcl-2与乳腺癌细胞凋亡指数呈负相关，而且与有丝分裂指数呈正相关，提示在细胞增殖活跃期，Hcl-2阳性细胞凋亡减少，即Bcl-2过表达影响了细胞凋亡。Nakamum检测了肠型胃癌、胃腺瘤、肠化生及非化生胃黏膜，发现在肠化生中Bcl-2蛋白表达量最高(77.1%)，胃腺瘤(37.5%)和肠型胃癌(10.8%)中较低。 因而认为，Bcl-2蛋白的过表达主要是在胃癌的早期阶段起作用，使转化细胞逃避凋亡，以进一步积累其他基因的异常。Lauwers采用单克隆抗体124检测正常、伴有肠化生的萎缩性胃炎及异型增生胃黏膜，发现正常胃黏膜仅在胃小凹与腺体交接处增生的干细胞中有Bcl-2蛋白的微表达，而在肠化生黏膜的过增生区域及胃小凹表面分化不良的细胞中均可检测到Bcl-2，这些分化不良的细胞正是胃癌癌前病变的一个特征。 因此推测，胃黏膜受损后增生加快，导致一些分化不良的细胞出现，这些分化不良的细胞又因Bcl-2蛋白的过表达而逃避凋亡，呈现生长优势，细胞寿命延长，基因变异积累的机会增加，为进一步向恶性细胞转化提供了条件。 2.Bax Bax是第一个被分离到的Bcl-2家族成员之一，与Bcl-2的同源区主要集中在BH1和BH2区。Bax的功能与Bcl-2相对，可促进细胞的凋亡。Bax与Bcl-2在体内的表达呈部位互补形式。Bcl-2倾向于分布在生长细胞、增殖细胞，而Bax倾向于分布在终末分化细胞、退化细胞，在凋亡旺盛的细胞中表达更强。 国外Komatauin报道，在胃黏膜癌变的早期阶段，即已发生Bax的表达异常。
胃癌治疗整理
胃癌临床治疗概况整理 目录 1. 概况 (1) 2.胃癌靶向治疗 (2) 2.1. HER2靶点与曲妥珠单抗 (2) 2. 2 VEGF 靶点与相关靶向药物 (3) 2. 3 EGFR 靶点与西妥昔单抗 (3) 2. 5 mTOR靶点与依维莫司 (4) 2.3 胃癌靶向治疗小结 (5) 3. 胃癌化疗 (5) 3.1 胃癌的化疗 (5) 3.2 胃癌化疗小结 (6) 参考文献 (7) 1.概况 胃癌是世界第四大常见类型的癌症(934 000 例新病例，占所有新发癌症病例的8．6%)，是全球第二大癌症死亡原因( 每年死亡人数达70 万)1。而包括中国在内的亚洲地区发病率最高。根据世界卫生组织(WHO) 2012 年数据统计，世界上每年有一百万新发的胃癌病例，超过40% 的病例就发生在中国2。目前由于筛查手段的限制，我国大部分胃癌患者初次诊
断就已经处于进展期。因此，胃癌的研究与治疗显得尤为重要。 2.胃癌靶向治疗 目前化疗是晚期/转移胃癌患者的主要治疗手段，但是患者的中位生存时间仍较短(8～11 个月)，因此，寻找更有效的联合化疗方案是胃癌的重要研究方向。尽管胃癌的发病机制尚不完全清楚，但是通过对胃癌发生、发展、复发和转移过程中分子生物机制的研究，胃癌相关的分子靶点就产生了。目前主要研究靶点有HER2、VEGF、EGFR和C-MET 等。 2009年ToGA研究的成功宣告胃癌治疗进入分子靶向时代，ToGA试验是一个在胃癌的靶向治疗中具有里程碑式意义的III期临床试验，首次将患者延长至1年以上，大大提高了进展期胃癌患者生活质量3。目前已经完成胃癌靶向药物Ⅲ期临床研究的药物有曲妥珠单抗、雷莫卢单抗、阿帕替尼。 2.1. HER2靶点与曲妥珠单抗 HER-2 是目前临床意义最明确、应用最广泛的靶点。HER2 属于酪氨酸激酶受体，具有酪氨酸激酶活性但缺乏特异性配体，是一种原癌基因通过17 号染色体ERBB2 编码4。HER2 在许多组织中，包括乳腺癌、胃肠道、肾脏和心脏中表达。它通过与肿瘤细胞增殖，凋亡，粘附，迁移而导致肿瘤发生的关键驱动因素。 曲妥珠单抗(trastuzumab)是针对HER-2 的完全人源化单克隆抗体抗体5，美国FDA 批准用于HER-2 阳性乳腺癌的治疗。曲妥珠单抗为首个被推荐应用于胃癌临床的靶向治疗药物，通过结合HER2 受体的胞外域，使受体裂解而产生堵塞，抑制二聚化，同时诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC) 而发挥作用，还可增加受体的内吞作用并通过抗血管生成而产生影响。 ToGA 研究3是奠定曲妥珠单抗在HER-2 高表达胃癌人群治疗地位的里程碑式的研究。该研究发现，相对于XP 方案（5-FU/卡培他滨+ 顺铂）的11.2 个月，联用曲妥珠单抗后患者的OS 延长到13.8 个月，患者生存期首次超过了1 年。尤其是IHC3+或IHC2+/FISH+亚组，化疗联合曲妥珠单抗组的mOS 长达16.0 个月，mPFS 提高到7.6 个月，客观缓解率提高到51.3%，均较单纯化疗组显著提高。曲妥珠单抗是首个在胃癌治疗中获得阳性结果的单抗，但遗憾的是，HER-2 扩增在胃癌中的比例仅占10%~15%；在预后最差的弥漫性胃癌中只占2%~10%6，临床实用价值有限。另外，针对HER-1 和HER-2 两个靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI）拉帕替尼却未能复制曲妥珠单抗的成功7。在一项纳入HER-2 阳性的晚期胃癌一线治疗的Ⅲ期临床LOGIC 研究中，XELOX 方案（奥沙利铂+卡培他滨）联合拉帕替尼后mOS 为12.2 个月，与单纯化疗组的10.5个月比较差异无统计学意义（P＞0.05）。可见，对于HER-2 靶点及其靶向治疗的研究尚需进一步探索。
胃癌干细胞
润文宝 | 日期：2011-06-25 胃癌干细胞的研究进展 恶性肿瘤的克隆性增殖生长、维持及转移潜能取决于一群数量稀少、具有自我更新(self-renewal)潜力的细胞群体——肿瘤干细胞(Cancer stern cell，CSC)。目前肿瘤的放射和化学治疗对细胞周期活跃的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用，但不能根除细胞周期相对沉默的肿瘤干细胞，这可能是肿瘤复发的主要原因。胃癌对人类健康危害极大。研究胃干细胞及胃癌干细胞发生、发展的分子和细胞学机制，发现相关的特异分子靶点和针对这些靶点的药物，将为胃癌相关基础研究及临床靶向治疗提供新的切人点。 一、肿瘤干细胞学说的提出 肿瘤组织与胚胎组织间具有相似性，肿瘤可能起源于胚胎样组织。肿瘤细胞与胚胎干细胞及成体干细胞间存在许多相似性。近年来提出的肿瘤干细胞学说认为，肿瘤组织中存在极少量细胞，具有无限自我更新和高度增殖能力以及多种分化潜能，能产生不同表型的肿瘤细胞，使肿瘤在体内不断扩大或转移形成新的肿瘤。1994年分离获得的人髓系白血病干细胞证明了肿瘤干细胞的客观存在，之后又相继从乳腺癌、脑肿瘤和前列腺癌组织中分离并培养出各种肿瘤干细胞，证实了实体肿瘤干细胞的存在。 二、胃干细胞、炎性反应与胃癌的发生 胃干细胞是具有自我更新和复制能力的原始细胞，属于成体干细胞，通过向祖细胞分化。进一步分化形成胃的各种腺体细胞，维持胃黏膜更新及组织内环境稳定。由于缺乏特异性标志和理想的分离纯化技术，故目前对胃干细胞的研究较少。有研究证实G蛋白偶联受体(Lgr5)表达于胃腺体底部细胞中，通过分化细胞学示踪实验发现，胃腺体细胞均来自于Lgr5阳性的细胞。另有研究通过结合转基因技术和绿色荧光蛋白示踪技术，成功示踪了数量极少的胃祖细胞，这些细胞正常情况下呈静息状态，当受到炎性刺激时，祖细胞发生对称分裂，进行数量扩增，同时还可进行不对称分裂分化为各种腺体细胞。胃干细胞受到持续的炎性刺激、自身抗体或其他因素作用时可发生肠上皮化生，此过程可能是组织细胞干细胞水平分化异常所致。胃干细胞可产生胃型和肠型细胞，胃癌表型表达的异质化反映了胃祖细胞向这两个方向分化的内在潜能。已有研究证实幽门螺杆菌通过对胃上皮干细胞的影响和作用，在慢性萎缩性胃炎向胃腺癌的转化过程中起关键作用。小鼠胃上皮祖细胞系(mGEP)能支持胃癌相关幽门螺杆菌的吸附。对感染后的mGEP进行基因芯片表达谱分析显示。mGEP代谢和信号传导路径发生改变，氨基酸代谢的免疫过氧化物酶抗体路径(IPA)表达上调，多胺合成相关的限速酶鸟氨酸脱羧酶1(Odel)表达明显上调，该酶与胃肠型化生及慢性胃炎到胃癌的转化相关；抗酶抑制剂(Azinl)的表达亦显著上调。该蛋自在人胃癌组织中高表达，并与Odcl的表达量和活性相关。慢性炎性刺激使得胃上皮干细胞发生转化进展，促进肿瘤形成和进展。有研究称肿瘤为“不可治愈的炎性反应。慢性炎性反应能
术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响
术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响 梁 辉1,陈国玉1,俞学明1,冯振卿 2 (1.南京医科大学第一附属医院,江苏南京210029;2.南京医科大学病理教研室,江苏南京210029) 摘要:[目的]研究术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响。[方法]21例胃癌患者术前静脉滴注52氟尿嘧啶150m g /k g ?d ,术中取胃癌组织标本,应用3′2OH 末端标记法(T UNE L )检测细胞的凋亡率(AI ),与非化疗组比较。[结果]术前应用52Fu 组总的T UNE L 指数为(8.6±3.8)%,对照组总的标记指数为(5.4±2.6)%,差异有显著性(P <0.05);52Fu 诱导作用与细胞分化有关。52Fu 诱导胃癌细胞凋亡有剂量依赖性。[结论]术前应用52Fu 辅助化疗可明显诱导进展期胃癌细胞凋亡,具有一定的临床应用价值。 关键词:胃肿瘤;细胞凋亡;药物疗法;氟尿嘧啶中图分类号:R735.2文献标识码:A 文章编号:1671-170X (2001)04-0231-02 T he E ffect of Preo p erative Chem othera py on Cell A p o p tosis in Advanced G astric Carcinoma LIANG Hui ,CHEN G uo 2y u ,Y U Xue 2m in g ,et al. (The Fir st A ff iliated H os p ital o f Nan j in g M edical Univ er sit y ,Nan j in g 210029,China ) 收稿日期:2001-03-27 目前临床胃癌仍以中晚期为主,为提高胃癌的 切除率,改善预后,临床上倡导以手术为基础的综合治疗,其中术前化疗受到广泛关注,术前化疗主要用于中晚期胃癌,而化疗药物对于肿瘤细胞的作用主要是通过诱导癌细胞凋亡的途径。体外细胞培养验证了多种药物和理化因素可诱导胃癌细胞凋亡,术前应用52氟尿嘧啶(52Fu )诱导进展期胃癌细胞凋亡国内未见报道。本研究探讨其诱导凋亡的规律,报道如下。 1 材料与方法 1.1 一般资料 2000年1月～2000年12月收治的胃癌患者,随机进入术前化疗组(术前化疗+根治术)21例。化疗组中男性15例,女性6例,平均年龄54.6岁。对于肝肾功能异常,恶液质,未能根治以及重度贫血,年龄>70岁的患者不入组。 所有病人术前均经病理确诊,术后有病理诊断, 临床资料完整,均为腺癌。 52Fu 应用方法:按150m g /k g ?d 计算用量,以0.25g 为最小剂量单位,静脉滴注至术前一天,病人最长滴注5天。 1.2DNA 原位末端标记法(T UNE L ) [1] 术中标本切下后即取癌组织,以10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片厚度4μm 。试剂盒购自博士德公司,严格按说明操作。1.3凋亡指数计算(AI ) 随机记数5个高倍镜的肿瘤细胞共500个,计算每100个细胞中阳性细胞数即凋亡指数(AI )。1.4统计学方法 各组数值以均数±标准差(x ±s )表示,显著性检验采用t 检验。 2 结果 2.1 胃癌组织细胞凋亡的观察 HE 染色下,凋亡细胞散在分布于胃腺上皮内,表现核固缩、碎裂。末端标记后,凋亡细胞核呈棕色或棕褐色,多位于核膜上,或形成凋亡小体,部分胞 Abstract :[Pur p ose ]T o stud y the effect of p reo p erative chem othera py on cell a p o p tosis in advanced g astric carcinom a.[M ethods]52Fu 150m g /k g ?d w as adm inistered intravenoul y p reo p eration 21p atients.T he a p o p tosis index of g astric carcinom a cells w as evaluated b y in situ T UNE L and com p ared betw een p re -and non 2chem othera py g rou p .[Results]T he AI w as (8.6±3.8)%in p re 2chem othera py g rou p and (5.4±2.6)%in control g rou p .T here w as si g nificant difference betw een tw o g rou p s (P <0.05).T he induction of a p o p tosis b y 52Fu w as associated w ith dosa g e and g rade.[C onclusions]T his stud y su gg ests that the a p o p tosis m a y be induced b y p reo p erative adm inistration 5 2Fu in advanced g astric carcinom a which has the value of clinical a pp lication. K e y w ords :g astric neo p lasms ;a p o p tosis ;dru g thera py ;fluorouracil
莪术醇对人胃癌细胞凋亡、MMP2、NO影响的初步
·论著·2012年12月第9卷第34期 中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD 胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一，手术是其最有效 的治疗方法，对于术后复发失去再次手术机会的及晚期胃癌 患者，化疗仍是最有效的手段之一，但其疗效不尽人意，因为在消灭肿瘤细胞的同时，受其毒副作用影响而表现出较差的预后。因而寻求一种新的治疗方案迫在眉睫。肿瘤的靶向治疗基于分子水平，通过抑制相关蛋白或基因在信号转导通路、血管生成等途径发挥较强的抗肿瘤作用，且细胞毒性作莪术醇对人胃癌细胞凋亡、ＭＭＰ２、ＮＯ影响的初步探讨 徐立春陈海燕文洁陶亚玲 扬州大学医学院肿瘤防治研究中心，江苏扬州225001 [摘要]目的初步探讨莪术醇（Curcumol ）对人胃腺癌细胞（SGC-7901细胞）凋亡、基质金属蛋白酶（MMP2）、一氧化氮（NO ）的影响。方法将莪术醇溶于无水乙醇中，初始浓度为9mg/mL ，设实验1、2、3、4、5组，莪术醇的浓度分别是 7.5、15、30、60、120μg/mL ，并以含1%无水乙醇的培养液为对照组。采用台盼蓝（Trypan blue ）、噻唑蓝（MTT ）法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响；用流式细胞仪（FACSCalibur ）检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率；用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后，其MMP2的表达情况；NO 试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO 含量。结果30μg/mL 的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳，与对照组比较，其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义（P <0.05）；莪术醇实验组能促进细胞凋亡，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；莪术醇实验组作用细胞后，其MMP2蛋白表达明显下降，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；实验研究表明，随着莪术醇实验组浓度的增加，其细胞培养液上清中的NO 含量逐渐降低，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论30μg/mL 的莪术醇浓度是最佳药效组，它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖，明显促进肿瘤的细胞凋亡，显著抑制MMP2的表达，降低细胞培养液上清中的NO 含量，从而发挥系列抗肿瘤作用。本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制，为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据。 [关键词]莪术醇；SGC-7901；凋亡；基质金属蛋白酶；一氧化氮 [中图分类号]R000[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）12（a ）-0018-04 Preliminary discussion on effect of curcumol in apoptosis,MMP2and NO in SGC-7901cells XU Lichun CHEN Haiyan WEN Jie TAO Yaling Cancer Prevention Research Center,Medical College of Yangzhou University,Jiangsu Province,Yangzhou 225001,China [Abstract]Objective To discuss the effects of Curcumol on the apoptosis,MMP2and NO of human gastric cancer cells (SGC-7901cells).Methods Curcumol was dissolved in dehydrate alcohol and the initial concentration of Curcumol was 9mg/mL.Group 1,group 2,group 3,group 4and group 5were set up as experimental groups.The Curcumol concentrations were set as follows:7.5,15,30,60,120μg/mL,control group contained 1%dehydrate alcohol (dissolvent compare).The Trypan blueand method was used to analyze the cytoactive of SGC-7901;MTT assay was performed to study the inhibitory rate of SGC -7901cells proliferation;the metastasis of SGC -7901was described through the scratches experiment;the apoptosis rate were detected by FACSCalibur and the expression of Matrix metalloproteinase 2(MMP2)were detected by Western Blot.The content of NO in cell culture medium was detected by NO kit.Results Curcumol had a good effect on drug concentration and restrain the tumor growth in 30μg/mL,and compared with controls,it had significant difference in restrain the proliferation of tumor cell (P <0.05);Curcumol could promote the apoptosis,it showed significant difference when compared with controls (P <0.05);Curcumol could make the expression of MMP2protein descend to varying de -grees,it had significant difference when compared with controls (P <0.05);this research showed with the increasing of the concentration of curcumol,the content of the NO in the supernate gradually reduced,it had significant difference when compared with controls (P <0.05).Conclusion Curcumol in 30μg/mL is the best efficacy group,it can significantly inhib -it the proliferation of SGC-7901cell,significantly promote the tumor cell apoptosis,significantly inhibit the expression of MMP2,reduce the content of NO in supernate,and express the series antitumor function.This study discusses the possible mechanism of curcumol cure the stomach cancer from cell and molecular level;provide the basis in theory and experiment for clinical application that Curcumol and its derivatives or structure analogues treat stomach cancer. [Key words]Curcumol;SGC-7901;Apoptosis;MMP2;NO [基金项目]江苏省医学卫生重点基金资助项目（编号：K200511）。 [作者简介]徐立春，研究员，教授，主要从事肿瘤防治基础与临床方面的 研究。18
胃癌细胞表面-唾液酸糖链的表达与其侵袭、
胃癌细胞表面,唾液酸糖链的表达与其与侵染、转移相关 性的研究
摘要 本设计为了研究唾液酸在胃癌发病过程中的相关作用，探讨,唾液酸糖链结构在胃癌发生中所造成的影响。设计内容主要分为两部分：,唾液酸糖链结构在不同分化程度的胃癌细胞表面的表达对胃癌细胞侵染能力相关性的研究；,唾液酸糖链结构对胃癌细胞的转移能力相关性的研究；第一部分分为两个实验设计用MAL细胞化学染色法选出阳性细胞计算出MAL胃癌细胞的阳性率和体外细胞粘附试验测得吸光度测试唾液酸跟细胞粘度的关系；第二部分通过重组基底膜实验来计数胃癌细胞的穿膜细胞数，确定,唾液酸对胃癌细胞的侵染、转移的影响。为胃癌疾病的研究和治疗提供一定的理论及实验基础。 关键词：,唾液酸；表达；胃癌细胞；侵染；转移
第一部分：文献综述 1 唾液酸 0 1.1简介 0 1.2唾液酸的生物学功能 0 2 胃癌 (1) 2.1胃癌发生的过程 (1) 2.2胃癌的侵染、转移 (1) 3 唾液酸与肿瘤作用 (2) 3.1唾液酸与恶性肿瘤 (2) 3.2唾液酸与胃癌 (3) 4凝集素 (4) 4.1简介 (4) 4.2 MAL简介 (4) 4.3 MAL对胃癌细胞表面糖链的标记 (5) 第二部分课程设计部分 1材料 (7) 1.1细胞株及细胞培养 (7) 1.2试剂 (7) 1.3试剂配制 (7) 1.4仪器设备 (8) 2方法 (9) 2.1 MAL细胞化学染色 (9) 2.2 体外细胞粘附试验 (10) 2.3 重组基底膜侵袭实验 (10) 3 设计 (11) 3.1 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其转移能力的相关性 (11) 3.2 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其侵染能力的相关性 (11)