高效液相色谱法测定牛奶中的四环素类抗生素残留
实验六 高效液相色谱法测定牛奶中的四环素类抗生素残留
姓名： 班级：食品科学
学号：
一 目的要求
1 通过实验强化对高效液相色谱法分离及定量分析原理的理解；
2 直观了解流动相组成在高效液相色谱中对分析物保留时间和分离度的影响；
3 直观了解高效液相色谱仪的结构；
4 掌握利用外标法进行定量分析的方法。
二 实验原理
在畜牧生产过程中，将一些抗菌素作为添加剂以较低浓度加入到饲料中，可使导致动物生产效率下降的支原体病等慢性传染病得到有效抑制，因而能够促进动物生长。但是，这种做法常导致在动物性食品中的抗生素残留，人类食用后导致耐药菌群的产生，将会产生一系列严重后果。四环素类抗生素就是被经常使用的一类抗生素，其中四环素（Tetracycline, TC ）、土霉素（Oxytetracycline, OTC ）和金霉素（Chlortetracycline, CTC ）就是该类抗生素中的三种，是提取自链霉菌属培养液的广谱抗生素，结构如下：
我国和欧盟规定其在牛奶中的最大残留限量为0.1 mg/kg 。
三种抗生素在酸性条件下稳定，易与蛋白质发生强烈结合，且易与金属离子形成鳌合物。在乙二胺四乙酸二钠（EDTA ）存在条件下，用草酸甲醇提取可获得较高回收率。
三种抗生素的共有结构均可在C 18柱上产生保留，OTC 和CTC 均与TC 仅差一个取代基，采用适当的流动相，以反相色谱方式可将三者有效分离。三者具有共同的发色团，在225、268和360nm 均有吸收，短波吸收易受干扰，采用360nm 作为吸收检测波长可获得较好的同时测定结果。
采用外标法对样品中三种抗生素进行定量分析。对标准溶液系列分别进行高效液相色谱分离，测定三者各自的峰面积，并以此回归三者的工作曲线，样品分离后通过测定三者各自峰面积，可在各自工作曲线上计算出浓度。
三 仪器与试剂
1 仪器
LC-20AT 型高效液相色谱仪，配备SPD-20A 型紫外检测器（日本Shimadzu 公司）；B5500S-MT 型超声清洗器（上海必能信超声有限公司）；L500台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；BS 124S 电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）。
2 试剂
甲醇、乙腈、草酸、EDTA 均为分析纯试剂，TC 、OTC 和CTC 标准品（德国Ehrenstorfer 公司）含量98%。
OH
OH
CONH 2
N(CH 3)2
H 3C
OH
Tetracycline OH
OH
CONH 2
N(CH 3)2
OH
H 3C
OH
Oxytetracycline OH
OH
CONH 2
N(CH 3)2
Cl
H 3C
OH
Chlortetracycline
四实验步骤
1 试剂配制
草酸水溶液：称取1.26 g草酸，用水溶解并定容于1000 mL，浓度为0.01 mol/L。
草酸甲醇溶液：称取1.26 g草酸，用甲醇溶解并定容于1000 mL，浓度为0.01 mol/L。
TC、OTC、CTC标准储备液：分别称取TC、OTC、CTC各1 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL，浓度均为100 mg/L，储存于-18℃冰箱中。
2 标准溶液系列和样品制备
标准溶液制备：吸取适量标准储备液，用流动相逐级稀释，制成三者浓度均为0.05、0.10、0.25、0.50、1.0、2.0 mg/L的标准溶液系列，此标准系列储存于4 ℃冰箱可保存3 d。
样品制备：准确称取牛奶样品5 g，置于50 mL离心管中，加入5 mL 0.01 mol/L的草酸甲醇溶液、0.1 g EDTA，旋涡混合3 min，超声振荡3 min，以10000 r/min离心10 min，取出全部上清液并量出体积（或用流动相稀至最近整数体积），过0.45 μm滤膜后供测定。
3 测定
色谱柱为Nova-Pak C18柱，填料粒径4 μm，柱尺寸300 mm×3.9 mm；流动相为乙腈＋甲醇＋0.01 mol/L草酸水溶液（22＋8＋70）；流速为1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长360 nm，带宽20 nm，参比波长430 nm，带宽50 nm；进样量25 μL。升高流动相中乙腈比例至35，降低水比例至57，观察在高效液相色谱中流动相组成的改变对分析物保留时间和TC、OTC、CTC之间分离度的影响。
4实验结束后，按要求关好仪器。
五结果处理
1 对标准溶液系列中的每一个标准溶液分别进行3次分离，记录每次分离中TC、OTC、CTC各自的峰面积并求平均值，对该系列各自峰面积的平均值和浓度值进行线性回归，获得各自标准曲线方程A i=a i+b i C i中的a i和b i，其中i=1、2、3，代表TC、OTC、CTC。该项工作亦可利用仪器的功能在仪器上完成。
2 对测定的样品溶液分别进行3次分离，记录每次TC、OTC、CTC各自的峰面积并
求平均值，将各值代入各自Ai=ai+biCi中，得到样品的结果。该项工作亦可利用仪器的功
能在仪器上完成。
六注意事项
1 分离要在基线稳定条件下进行，否则峰面积计算的准确性会受到影响。
2 色谱柱在测定结束后要用纯甲醇清洗至少1 h以上
七结果处理
八思考题
1 在牛奶中四环素类抗生素的提取过程中，加入EDTA的作用是什么？
答：三种四环素都容易和金属离子螯合，而EDTA是一种良好的金属离子螯合剂，可以置换出四环素中的金属离子，可以排除金属离子对实验的干扰。
2 在牛奶中四环素类抗生素的提取过程中，加入甲醇和草酸的作用是什么？
答：草酸甲醇可以洗脱掉四环素上的蛋白质，可是四环素的回收率提高。
3 为什么在气相色谱中温度对分析物的保留时间和分离度有较大影响，而在高效液相色谱中，该因素的影响不如流动相组成的影响显著？
答：因为在气象色谱中，速率理论指出：HETP=Au1/3+B/u+Cu，其主要受到流动相速率u和分子扩散速率的影响，而两者都受温度的较大影响，所以会导致保留时间和分离度的较大变化，而液相色谱则受温度影响不大。
动物源性食品中青霉素类抗生素残留检测的研究进展
本版编辑： 四川畜牧兽医 ２００７年第１２期 综述 直接的影响。其中ＲＳ－２与ＲＳ－４菌株具有较广的耐药性，在研制微生态制剂或与抗菌药物联合应用上有更好的使用价值，能达到较好的互补效应。３．３微生态制剂的作用机制是运用有益的活菌制剂来调节机体的微生态平衡，活菌的数量直接影响益生菌剂的使用效果。本试验发现一些抗菌药物如环丙沙星、左氟沙星、氨苄青霉素、阿莫西林等对乳酸杆菌大部分菌株和芽孢杆菌都敏感。因此，当用猪源乳酸杆菌及植物源乳酸杆菌等菌株研制微生态制剂时，在生产和使用过程中应避免接触这些抗菌药物，以免杀死活菌使制剂失去效用。４结论本试验以６株猪源乳酸杆菌、１株植物源乳酸杆 菌以及４株芽孢菌对３２种抗菌药物进行了药物敏感性试验。结果表明，猪源乳酸菌对抗菌药物的耐受性达３１．２５％～５３．１３％。所有猪源乳酸菌对复达欣、头孢他啶、头孢氨苄、苯唑青霉素、复方新诺明、痢特灵、头孢噻肟、青霉素、杆菌肽等不敏感；其中对ＲＳ－２和ＲＳ－４株菌不敏感的药物达１７种之多，可以作为本项目的新型益生素进行深入研究。植物源乳酸杆菌仅对１０种药物有耐受性，对大多数抗菌药物表现极敏，与猪源乳酸菌存在明显差异，不适合作为新型益生素应 用，但可用于后续课题的优化组合对比试验。芽孢杆菌对多种抗生素敏感，只有杆菌肽抑菌圈为零，可用于后续课题的对比及优化组合试验。■参考文献（略） 目前国内外已对青霉素类抗生素的残留进行了多方面研究，为更深入、更全面地了解各种新型研究技术以及相关法律法规，并为我国开展进一步的残留监测提供参考，现将国内外有关的残留检测方法综述如下。１残留标准和休药期 为了避免消费者受到抗生素残留的危害，各国都制定有各种抗生素最高残留限量（ＭＲＬ）标准。我国对 牛乳中的抗生素残留问题一向非常重视，早在１９８２ 年，卫生部颁布的《乳与乳制品卫生管理办法》中就明确说明：应用抗生素期间和停药后５ｄ的乳汁不得食用。２００１年９月，农业部发布《无公害食品生鲜牛乳》的行业标准，并于１０月正式实施，该标准也要求鲜牛乳中“抗生素不得检出”。早在１９７３年欧共体就规定：禁止使用青霉素、氨苄青霉素作为饲料添加剂。我国《关于出口动物性食品中农药、兽药残留量和生物毒素检验方法标准摘要》中规定：青霉素的残留按ＳＮ０５３９－１９９６标准应小于０．０２５ＩＵ／ｇ。对无公害肉产品有害物质限量应符合《无公害畜禽肉产品安全要求》（ＧＢ１８４０６．３－２００１）中的规定：青霉素在牛羊猪的肌肉、肝、肾中的残留应≤０．０５ｍｇ／ｋｇ。 因此，在中华人民共和国农业部公告第２７８号中，根据各青霉素类抗生素的吸收转化效率和半衰期的差异以及不同食品动物的代谢速度，对休药期作了具体的规定： 注射用青霉素Ｇ（钾、钠）：弃奶期３ｄ；注射用苄星青霉素（注射用苄星青霉素Ｇ）：兽药规范７８版，牛、羊 收稿日期：２００７－０９－１０ 作者简介：秦川（１９８２－），男，在读研究生，研究方向：预防兽医学。 动物源性食品中青霉素类 抗生素残留检测的研究进展 秦 川，田晋红 （西南大学药学院，重庆北碚４００７１６） 中图分类号：Ｓ８５９．８４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－８９６４（２００７）１２－００２４－０３ 摘要：青霉素类抗生素的广泛应用给畜牧业带来巨 大经济效益的同时，其残留也带来了一系列的负面影响。本文综述了青霉素类抗生素在动物源性食品中残留检测的研究进展，包括两方面内容：青霉素类抗生素在动物性食品中的残留和休药期；国内外关于青霉素类抗生素残留的检测方法，如：微生物法、高效液相色谱法、酶联免疫法等。 关键词：青霉素；动物源性食品；残留；休药期；检测方法 ###############################################曾宪春２４
牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展
牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展 3.1微生物检测法 微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如纸片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用传统的微生物检测方法，缺点是：(1)时间长；(2)显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法做出准确判断；(3)操作复杂。优点是费用低，一般实验室都能操作。其中，纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。 3.1.1纸片法 纸片法，即PD法(Paper Disc)。常用的纸片法有枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片检测法。这两种方法主要用来检测牛奶中的β－内酰胺类抗生素，其操作过程基本相同，而选用的菌种不同。枯草杆菌纸片法检测的结果易出现假阳性，为了确定阳性物质是否为青霉素（或β－内酰胺类），对加热后的乳样用青霉素酶处理，以灭活乳样中的青霉素。然后再行检测，检测限可达0.01 IU/mL。而嗜热脂肪杆菌纸片检测法不仅用于检测奶样中β－内酰胺类抗生素，并能暗示是否还存在其它抑菌物质，检测限可达0.008 IU/mL以下。一般在4h 内即可获得结果。因此，在实践中嗜热脂肪杆菌纸片法比枯草杆菌纸片法应用更为广泛。此外，神保胜彦(1991)对纸片法作了进一步研究和改进。改进后的纸片法不仅能够确定抗生素的种类，而且提高了检出率和准确性，氯霉素最低检出量0.01mg/kg，土霉素0.05mg/kg，链霉素1mg/kg，红霉素0.05mg/kg，青霉素0.0025mg/kg。 3.1.2 TTC法 TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。该法简便、快速，无需特殊设备，3～4h可见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用。检测各种抗生素所用的TTC法试验的灵敏度（最低检出量）分别为：青霉素0.004 U/mL，链霉素0.5 U/mL，庆大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL。 目前趋向研究更为灵敏、准确、简便、快速的微生物检测方法。如美国和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺实验法（CAST）。此外，美国近年来补充的一个新的实验方法－快速抗生素筛选法（FAST）。尽管这些快速微生物检测法有时会产生一些假阳性，但在某种程度上是允许的；如产生这类情况，可进一步做确证实验。 3.2理化检测法 理化检测方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法、联用技术等等，能进行定性、定量和药物鉴定，敏感性较高，但有的检测程序较复杂，有的检测费用较高。在牛奶中抗生素残留检测方面，最常用的理化检测方法是高效液相色谱和联用技术。 3.2.1高效液相色谱 高效液相色谱(HPLC)是目前广泛应用的一种理化检测方法，它引入了气相色谱理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。几乎所有的化合物包括高极性／离子型待测物和大分子物质，均可用HPLC进行测定。HPLC的分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细(ф 5～10μm)，需高压泵推动，柱效高(105塔板／m)，速度快，灵敏度与GC相近。与GC相比，HPLC流动相参与分离机制，其组成、比例和pH值等可灵活调节，如离子对色谱、胶束色谱、手性分离色谱等，使许多极难分离的待测物得以分析。反相HPLC发展最快，目前已成为大多数抗生素残留的常规分析方法。主要原因是：(1)化学键合固定相(C18或C8)性质稳定，不淋失；(2)使用水、甲醇或乙腈等水溶性有机溶剂作流动相，不干扰紫外检测，成本低；(3)样品中极性杂质先
牛奶中抗生素残留及其检测
牛奶中抗生素残留及其检测 徐州市畜禽水产品检测中心 摘要:抗生素在畜牧业中广泛应用，这造成了牛奶中大量残留抗生素。本文论述了牛奶中残留抗生素的原因及其危害性，并列举了目前较为流行的牛奶中抗生素残留的检测方法，介绍了其检测原理。为了了解徐州市牛奶中抗生素的残留情况，随机抽取样品40份，分别采用TTC法和纸片法对样品进行抗生素残留的检测，以农业部2001年发布的无公害食品牛奶中“抗生素不得检出”为判断标准。调查结果显示徐州市牛奶中有部分牛奶存在抗生素的残留。 关键词：牛奶，抗生素残留，国标TTC，微生物法 Assay on Residue of Antibiotics in Milk Abstracts: Antibiotics are used in stockbreeding abroad, and It is the reason why there is residue of antibiotics in milk. The reason and hazard of antibiotics residue are discussed in this paper. Several kinds of popular antibiotics screening test are listed and their principle is introduce simultaneously. In order to know the situation of antibiotics residue in milk from Xuzhou, we selected 40 samples at random. And detected the residue of antibiotics in milk by TTC and paper disc. Antibiotics should not be detected from milk according to the standard issued by the department of agriculture in 2001, but the test results showed that the residue of antibiotics in milk from Xuzhou is higher. Key words: milk, antibiotics residue, TTC, microbial test 抗生素是治疗动物疾病的常用药物，并作为饲料成分被广泛使用。但抗生素容易在动物体内及其产品中残留，经过食用后进入人体，给人类的健康造成危害。目前人们对牛奶的消费量越来越大，牛奶中残留的抗生素会对饮用者的身体健康造成危害，也会对牛奶发酵过程的发酵剂产生抑制作用，从而使牛奶变质造成经济损失。牛奶中抗生素残留的问题日益受到社会的重视。 一牛奶中抗生素残留情况的简介 1抗生素的种类介绍 抗生素类是主要的兽药添加剂和兽药残留物质，约占药物添加剂的60%，在世界及我国的农产品或食品进出口贸易中，常需检测的抗生素残留主要有以下六类： ⑴内酰胺类：内酰胺类抗生素主要用于抗革兰氏阳性细菌感染，也能有效抑制抗革兰氏阴性细
几种常见抗生素的相关性质和检测方法
四环素 四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素及半合成抗生素，具有菲烷的基本骨架。 四环素类抗生素在赶早状态下比较稳定，但遇日光可变色。在酸及碱性条件下都不够稳定，易发生水解。四环素类药物主要有以下化学性质： 1.酸性条件下不稳定：C-6羟基和C-5α上的氢正好处于反式构型易发生消除反应，生成无活 性橙黄色脱水物。 在pH2～6条件下C-4位二甲氨基很易发生可逆反应的差向异构化。医学|教育网搜集整理土霉素由于存在C-5羟基与C-4二甲氨基之间形成氢键，4位的差向异构化比四环素难。 而金霉素由于C-7氯原子的空间排斥作用，使4位异构化反应比四环素更容易发生。 2.碱性条件下不稳定：在碱性条件下生成具有内酯结构的异构体。 3.和金属离子的反应：在近中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。 四环素化学结构 本品为黄色结晶形粉末,无臭,空气中稳定,微溶于水,易溶于稀硫酸及氢氧化钠,略溶于乙醇,不溶于氯仿及乙醚,pH2以下溶液不稳定,碱性溶液中很快破坏。 土霉素 子式C22H24N2O9,分子量460.45。又称地霉素、氧四环素。是一种广谱抗菌素,黄色结晶性粉末,无嗅微苦。有二个分子结晶水。熔点181～182℃(分解)。微溶于水,溶于乙醇、丙酮和乙二醇,不溶于氯仿和乙醚。在空气中稳定,遇强光颜色变深。在碱性溶液中容易破坏失效。 化学结构 金霉素 子式C22H23ClN2O8，分子量478.87。又称氯四环素，是一种广谱抗菌素，金黄色结晶。无臭
味苦。熔点168～169℃。一般医药上用其盐酸盐。熔点210℃（分解）。微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、丙酮和氯仿。见光颜色变深。在空气中和弱酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中易分解。 化学结构 强力霉素 强力霉素是抗生素类药，四环素类药物，可以治疗衣原体支原体感染。其性状为淡黄色或黄色结晶性粉末，臭，味苦。在水中或甲醇中易溶，在乙醇或丙酮中微溶，在氯仿中不溶。 氯霉素 性状:白色针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末；味苦。在甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇中易溶。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，遇碱类易失效。 化学结构 妥布霉素 硫酸卡那霉素
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法 随着奶牛饲养业的发展，抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。生鲜牛奶中抗生素的来源主要是：第一，治疗泌乳期病牛时使用的抗生素会从奶牛体内移行到乳腺残留进入牛奶中，资料表明治疗后的奶牛，其挤出的牛奶5天内都有抗生素残留；其二，为了预防奶牛疾病并提高产量，在奶牛饲料中添加抗生素也会造成牛奶中抗生素的残留；第三，由于牧场管理不善，挤奶、储奶没有严格的卫生制度和配套的设施，人为添加或造成牛奶抗生素的污染。 牛奶中含有抗生素，不仅对人的健康造成很大的危害，而且对乳品加工企业带来经济损失（因无法生成酸奶和奶酪）。因此必须严格控制牛奶中抗生素残留，除了要做好科学饲养、精心管理；正确挤奶和预防疾病外，还要规范抗生素的使用，按国标中有关规定，用药后的奶牛5天后所产的牛奶才可作为原料乳，并且要检测其残留。世界粮农组织（FAO）、世界卫生组织（WHO）、欧盟（EC）及美国的食品和药品管理局（FDA）等对食品中抗生素最大残留量都有明确的规定，我国也有鲜奶中抗生素残留量检验标准（—94）。 目前，鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类：生物测定法（微生物测定法、放射受体测定法）、免疫法（放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法）、理化分析法（波谱法、色谱及联用技术）。下面介绍几种常用的牛奶中抗生素残留检测方法。 TTC法 TTC法是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准（—94）的检测法，属生物检测法。其测定原理基于抗生素对微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素，则加入菌种（嗜热链球菌）经培育~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.这样实验后样品颜色不变的为阳性,样品染成红色的为阴性。 TTC法的具体操作步骤: 1.菌液制备:将单菌种(嗜热链球菌)以脱脂乳为培养基,在36±1℃培养箱中培 养15小时后,再以脱脂乳以至于1:1稀释待用; 2.取待检样液9mL,在80℃水浴加热5分钟后冷却到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小时,加入4%的TTC指示剂, 36℃±1℃水浴培养30分钟; 3.若样液颜色不变为阳性,呈红色为阴性;若阳性的样液,再置于水浴中培养30 分钟,不显色的为阳性,呈红色为阴性. TTC法测定各种抗生素的灵敏度为:青霉素:4ppb,链霉素:500ppb,庆大霉 素:400ppb,卡那霉素:5000ppb.它具有费用低,易开展的优点;缺点是耗时长，要求操作人员需有一定专业知识且实验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程，否则易出现假阳性，以致出现检验结果的不稳定性。Delvotest sp法（戴尔沃检测法） 该法最早在香港传到广东的，其使用是基于20世纪80年代初香港要求广东出口的生奶必须“无抗”且要求采用Delvotest法检测。该方法也是生物测定法，其试剂是由荷兰DSM公司生产并由AOAC认证。原理是利用微生物—嗜热芽胞菌在64℃条件下培养～3小时后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素, 嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸,指示剂将不变色.
抗生素残留现状及检测方法
抗生素残留现状及检测方法 随着我国经济的快速发展，人们追求效益最大化，抗生素的 使用越来越普遍，如用抗生素治疗奶牛的乳腺炎；畜禽养殖户在 饲料中添加抗生素和激素，提高种畜的抗病能力和食欲；水产养 殖用户为了让大闸蟹加快脱壳过程、长得肥大生猛，给蟹喂食大 量抗生素和激素等。我国是抗生素生产和使用大国，据统计每年约有6000吨抗生素用于饲料添加剂，占全球抗生素饲料添加剂的50%。 抗生素的大量滥用已经严重威胁到人们的身体健康，专家指出，经常食用含有抗生素的食品，即使是微量的，也能使人出现荨麻疹或造成过敏性休克。时常摄入含有抗生素的食品，可使某些菌株产生耐药性，从而带来预防与治疗某些人畜疾病的困难。如果长期食用抗生素残留的食物，可造成人体中一些非致病菌的死亡，使菌群平衡失调或引起核黄素缺乏症和紫癜性损伤。特别是氯霉素的滥用，极易损害人类骨髓的造血功能，并由此导致再生障碍性贫血的发生。两年前，四川资阳地区曾暴发猪链球菌疫情，微生物专家李明远教授认为，很可能是养殖业者长期在猪饲料里滥用抗生素导致的。 常用抗生素包括β-内酰胺类、四环素类，氨基糖苷类，大环内酯类，磺胺类等，世界各国均对抗生素的使用量提出严格标准，欧盟的标准比日本和美国的标准更加严格，限量值更低，我国要想保障本国食品安全并出口产品到上述国家，就必须加强我国的自身的检测能力。 一般来说，肉类（畜禽），鱼虾（水产），蛋类，奶类，饲料、蜂蜜等产品需要进行抗生素检测，常用方法包括：液相色谱或液相色谱与质谱联用，微生物抑制法和酶联免疫方法。 色谱方法是一种理化检测方法,一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高，但检测程序复杂，费用较高，需购买色谱仪等检测设备，不适合小型检验室。 微生物抑制法和酶联免疫方法属于筛选方法，操作简便、快速，消耗成本低，不需要购买大型仪器，但阳性结果需要其他方法进行确认。酶联免疫方法存在一定的假阳性，下面针对微生物方法进行详细介绍。
四环素类抗生素的环境行为研究进展
动物医学进展,2011,32(4):98 102 Pr ogress in Veterinary Medicine 四环素类抗生素的环境行为研究进展 贺德春1,许振成2*,吴根义1,丘锦荣2,秦国建1 (1.湖南农业大学资源环境学院,湖南长沙410128;2.环境保护部华南环境科学研究所,广东广州510655) 摘 要:四环素类抗生素被广泛用于动物疾病的治疗,并长期以亚治疗剂量添加于动物饲料中用于动物疾病的预防和促进动物生长。由于四环素类抗生素大量使用使其在环境中普遍存在,并导致了细菌耐药性。研究表明某些四环素类抗生素在环境中具有一定的持久性,因此其在环境中行为引起了众多学者的关注。论文回顾了四环素类抗生素在环境中残留、迁移转化等方面的研究进展,重点阐述近年来有关四环素类抗生素环境行为方面的研究新成果,并探索提出今后应该开展的研究方向。 关键词:四环素类;环境行为;残留;吸附;降解 中图分类号:S859.799.9文献标识码:A文章编号:1007 5038(2011)04 0098 05 自20世纪40年代以来,抗生素不仅作为药物用于动物疾病的治疗,同时也作为饲料添加剂用于疾病的预防与促进动物的生长,提高畜禽生产效率,兽用抗生素的使用在促进养殖业快速发展,改善人 收稿日期:2011 01 17 基金项目:环境保护部公益基金(200809093) 作者简介:贺德春(1979-),男(土家族),湖南溆浦人,讲师,博士研究生,主要从事农业毒害污染控制及环境行为研究。 *通讯作者 [19] C arriz o L C,Ru ete C M,M anucha W A,et al.H eat shock pro tein70exp ress ion is associated with inhibition of renal tubule epithelial cellapoptosis during recovery from low protein feed ing[J].Cell Stres s C hap erones,2009,11(4):309 324. [20] M orimoto R I.Regu lation of the heat shock tran scriptional resp on se:Cros s talk b etw een a family of heat s hock factors, m olecular chap er ones an d negative regulators[J].Genes Dev,2008,12:3788 3796. [21] 曾 炯,黄兴国.肉鸡应激机理及其研究进展[J].江西饲料, 2009(6):1 4. [22] 许竟成,蔡亚非.动物热激蛋白的研究进展[J].资源开发与 市场,2009,25(7):619 622. [23] 赵书景,毛献灵.热休克蛋白与动物机能关系的研究[J].上 海畜牧兽医通讯,2009(4):41 43. [24] 刘东武,陈志伟.营养元素调控热休克蛋白研究进展[J].河 南师范大学学报,2009,37(1):134 136. [25] 董云伟,董双林,纪婷婷.水生动物热休克蛋白研究进展[J]. 中国海洋大学学报,2008,38(1):39 44. Advance in Heat Stress Mechanism Effect in Animals LI Lin,XU Chen yi,YANG Shu hua,LONG Miao,H E Jian bin (College of A nimal H u sbandr y and Vete rinary M ed icine,S heny ang A g ricultu ral Univ ersity,S heny ang,L iaoning,110161,China) Abstract:Studies hav e show n that the amount of heat shock pr otein's synthesis increases in anim al to avo id the irrever sible damag e that caused by heat stress to the anim al.The heat shock pr otein is a g eneral class of cellular chapero ne protein that can be produced by all living cells after stimulated by the stressor,w hich can participate in the protein folding,assembly,and transpo rt and other activ ities in cells'life processes, and also play s an im por tant ro le in the regulatio n of cell grow th,survival and differentiation.T herefo re, the mechanism,results and pro tection of heat shock protein in the heat stress is described fr om the partici patio n in the heat stress.A s the results of previous studies is summ arized,scientific and detailed outlook to the research prog ress of the heat shock protein may be appeared in som e important o f biomedical area,so as to provide a reliable theoretical basis to reduce the adv erse effects of the heat stress in liv estock produc tion practice effectively. Key words:heat stress;heat shock pr otein;mechanism
四环素类抗生素研究进展
塑ｊ竖匿药垫堕生２旦箜盈鲞筮２翅Ｈ！域塑型堂』删：趔至堂：ｙ丛婴：№：！ ５４５ 四环素类抗生素研究进展 张建成 四环素类抗生素是ｌ临床上广泛应用的广谱抗生素，因其既有抗生作用又有抗炎作用…，近年来临床上用四环素治疗不少非感染性疾病，取得了很好的疗效【２Ｊ。此外，在包括美国在内的一些国家，四环素还被大量用作生长促进剂投喂给动物。故其在药品市场中占有重要地位。 ｌ 四环素类抗生素的历史回顾 １９４８年，高效广谱、具有口服活性的第一个四环素类金霉 素（ｃｌＩｌｏｎｅⅡａｃｙｃｌｉｌｌｅ）从链霉菌踟ｒｅｏｆａｃｉｅｎｔｓ中提取得到。在随后短短几年内土霉素和四环素也被从链霉菌发酵液中分离得到，这三种四环素类抗生素都显示了完全的交叉抗性，它们有着相似的，广泛的抗菌谱，不仅对革兰氏阳性，革兰氏阴性和支原体，甚至对立克次体和衣原体之类的微生物都有活性ｂＪ。１９５７年，去甲环素也被发现，通过对这些抗生素进行降解研究，发现 它们具有极为相似的化学结构，有四个环线形相连构成主体骨架，从此“四环素”被看成一
类新的抗生素Ｈ１。 随着四环素类抗生素化学结构被逐渐澄清，许多实验室加 入到开发半合成品的研究工作中。美他环素、多西环素和米诺环素为一些最重要的半合成品，称为第二代四环素。 为了获得在中性ｐＨ值下，水溶性良好、利于吸收的四环素类衍生物，通过对酞氨基团的修饰，得到了毗咯烷甲四环素和赖甲四环素拉．６Ｊ。 ２细菌对四环素类抗生素的耐药机制 四环素类抗生素的广谱抑菌作用是通过干扰细菌蛋白质的合成起作用的。四环素类有既抑制７０ｓ，又抑制８０ｓ核糖体的功能，能和１６ｓｒｌ州Ａ上临近与氨酞ｔＲＮＡ连接的区域形成可逆复合物。从作用机制上看是非选择性的，但四环素类抗生素对细菌有选择性毒性，因为原核细胞中的主动转运体系能使药物特异地透过细胞，真核细胞却能主动地外排这类抗生素。在革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中都有外输泵基因，而且大部分外输泵基因都具有四环素抗性。四环素外输泵蛋白属于主要异化超家族（ｈⅡ丐），是目前Ｔｅｔ蛋白中研究最清楚的。所有ｔｅｔ外 输泵基因都编码膜相关蛋白可将四环素泵出胞外，降低了细胞内药物浓度保护了胞内的核糖体，从而产生耐药性¨Ｊ。Ｔｅｔ（ｘ） 基因是唯一通过产生灭活四环素的酶而耐药的。已报道两株厌氧拟杆菌转座子上携带有Ｔｅｔ（ｘ）基因。１＇ｅｔ（ｘ）产生４４ｋｕ胞浆蛋白，它在氧和ＮＡＤＰＨ存在时可化学修饰四环素，序列分析表明这个酶与其他ＮＡＤＰＨ需要的氧化还原酶有同源性。 细菌对四环素类抗生素的耐药机制主要有两点：（１）由质粒或转座子编码排出系统；（２）
牛奶抗生素检测试剂E50说明书
牛奶抗生素检测试剂E50说明书 一，检测原理 本试剂为微生物抑制法检测牛奶中抗生素含量。每个微孔中散播了芽孢杆菌孢子，含有琼脂培养基和pH指示剂。当在65度下培养时，微孔内的芽孢发育生长，该细菌生长时产酸，从而降低了培养基的pH值。pH的改变使指示剂由原来的蓝紫色变成黄绿色。 若加入的牛奶中含有抗生素，抗生素会抑制微生物的生长，从而不会产酸，指示剂不会变色。试剂将保持原来的蓝紫色。最终依据颜色的变化，可以判定牛奶样品中是否含有抗生素。 二，操作过程 1，确定要检测的样品数，用小刀沿微孔条间缝隙划开金属薄膜。取出对应数量的微孔。准备进行实验。注意防止划破剩余的微孔板上的金属薄膜。 2，从塑料框上取下要进行检测的微孔，放在一个空的塑料框上。剩余的微孔板需立即放回塑料袋中，4-8℃下冷藏保存。 3，将要使用的微孔上的胶粘金属膜揭去，在每个微孔中加入50μl牛奶样品。建议使用自动微量取样枪添加样品。 4，用试剂盒内的胶粘纸小心地密封微孔板(条)，将其垂直放入到已经预热到65℃的水浴锅或孵育器中。必须确保微孔已经完全密封。若在培养过程中有水渗入到微孔中，将会产生错误的检测结果。 5，培养时间参照试剂盒盖子上所标时间。在实验时建议做好阴性和阳性的控制样。若有阴性控制样，则以阴性控制样变为黄色的时间为准。 6，培炎结束后，取出微孔，从微孔侧面观察结果。绿-黄色或者黄色表示样品中不含抗生素(阴性)，蓝-紫色表示样品中含有抗生素(阳性)。绿-蓝色表示抗生素浓度接近试剂盒的检测限，此时建议重做检测 三，注意事项 1.我们推荐使用阴性控制样品(无抗奶)和阳性控制样品(含有较高浓度的抗生素如10mg/L青霉素-G的牛奶)来确定加热培养所需的最佳时间 2. 本试剂盒对抗生素和其他抗菌物质如清洁剂和消毒剂异常敏感。必须防止样品被此类物质所污染。 3. 微孔板需密封在塑料袋中以防止微孔干结，并在4-8℃下冷藏存放 4.牛奶中少量的天然抑制剂不会影响到试剂盒的检测结果。但初乳、哺乳期末期和乳腺炎牛奶中的抑制物质将会有所增加，此时检测结果将会受到影响。 5.如果要分析含有防腐剂的牛奶，培养时间需适当延长几分钟 6.正确的结果判读要看小孔的侧面。
细菌对四环素类抗生素的耐药机制研究
细菌对四环素类抗生素的耐药机制: 四环素类药物为广谱抗生素，发现于20世纪40年代，是通过阻止氨酰tRNA与核糖体结合位点（A）的结合来阻止菌体蛋白合成的一类抗生素，具有广泛的抗菌活性。在临床中以其有效的杀菌作用及较小的副作用而被广泛用于治疗人和动物的细菌性感染。此外，在包括美国在内的一些国家，四环素还被大量用作生长促进剂投喂给动物。近年来，耐药性的出现限制了它们的使用。在20世纪50年代中期以前， 主要的共生菌和病原菌都对四环素敏感，例如,1917?1954年分离到的433株不同的肠杆菌仅 2%对四环素耐药。而Lima等的研究表明,1984 1993年间60%的S . flexneri分离株对四环素、链霉素和氯霉素耐药。 1?四环素类抗生素家族 20世纪40年代发现了四环素家族的首批成员金霉素（chlor tetracycline ，氯四环素）和土霉素（oxyte tra cycline，氧四环素），随后又相继发现其他四环素类药物，其中有些为天然分子，如四环素（tetracycline ）；有些为半化学合成产品，如美他环素（methacycline ，甲烯土霉素）、多西环素（doxycycline ）和美满霉素（minocycli ne，米诺环素）等。随着研究的不断深入，水溶性好或口服吸收率高的新型半合成药物如罗利环素（rolitetracycline ）和赖甲环素（lymecycline ）相继问世；最新研制出的甘氨酰环素已完成I 期临床试验，目前正在进行H期临床试验。而一些早期的药物，如氯莫环素（clomocyclinc ）、罗利环素、赖甲环素和金霉素在各国都已不再使用。
抗生素残留量检查法标准操作规程
抗生素残留量检查法标准操作规程 目录 1 目的 (2) 2 范围 (2) 3 职责 (2) 4 依据 (2) 5 定义 (2) 6 内容 (2) 6.1 说明............................................................................................... 错误！未定义书签。 6.2 原理 (2) 6.3 实验材料 (2) 6.4 操作步骤 (3) 6.5 判定标准 (3) 6.6 注意事项 (4) 7 相关文件 (4) 8 附件 (4) 9 变更历史记录 (4)
1目的 1.1本规程规范了抗生素残留量检查法的操作过程。 2范围 2.1本规程适用于供试品中氨苄西林的残留量检查。 3职责 3.1质量检验人员：应严格执行本规程的规定。 3.2质量保证人员：负责对本程序的执行进行监督、检查。 4依据 4.1《中国药典》2010年版三部，附录ⅨA，“抗生素残留量检查法”P59~P60。 5定义 N/A 6内容 6.1原理 6.1.1抗生素残留量检查法是依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用，比较对照品 与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，检查供试品中抗生素的残留量。 6.2实验材料 6.2.1仪器 6.2.1.1生物安全柜 6.2.1.2恒温培养箱 6.2.1.3恒温水浴锅 6.2.1.4游标卡尺 6.2.2器具 6.2.2.1牛津杯规格：内径6mm、外径8mm、高10mm 6.2.2.2玻璃平皿规格：直径约90mm 6.2.2.3试管及硅胶塞规格：18×180mm 6.2.2.4吸管规格：10ml 6.2.3标准物质 6.2.3.1取氨苄西林对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶解，并稀释成每1ml中含氨苄西林 10mg的溶液，作为氨苄西林对照品储备液，200ul/支无菌分装，-20℃保存，备用。 6.2.4试剂、试液
四环素类抗生素研究现状及进展
四环素类抗生素研究现状及进展 摘要：四环素类抗生素被广泛用于动物疾病的治疗，并长期以亚治疗剂量添加于动物饲料中用于动物疾病的预防和促进动物生长。由于四环素类抗生素大量使用使其在环境中普遍存在，并导致了细菌耐药性。研究表明某些四环素类抗生素在环境中具有一定的持久性，因此其在环境中行为引起了众多学者的关注。论文回顾了四环素类抗生素在环境中残留、迁移转化等方面的研究进展，重点阐述近年来有关四环素类抗生素环境行为方面的研究新成果。 关键词：四环素类抗生素；环境行为 Tetracycline antibiotics research status and progress Name:LiuQiong Abstract：Studies have shown that the amount of heat shock protein′s synthesis increases in animal to avoid the irreversible damage that caused by heat stress to the animal.The heat shock protein is a general class of celluar chaperone protein that can be produced by all living cells after stimulated by the stressor,which can participate in the protein folding,assembly,and transport and other acitivities in cel ls′ life processes,and also plays an important role in the regulation of cell growth,survival and differentiation.Therefore,the mechanism,results and protection of heat shock protein in the heat stress is described from the participation in the heat stress. As the results of previoud studies is summarized,scientific and detailed outlook to the research progress of the heat shock protein may be appeared in some impartant of biomedical area. Keywords：tetracylines; environmentalbe havior 近年来，由于抗生素在医疗和畜禽养殖业的大量使用所导致的环境污染问题日趋严重，已成为国内外研究的热点之一. 进入环境中的抗生素除了会造成化学污染外，还可能会诱导环境中抗性微生物和抗性基因的产生，并加速抗生素抗性的传播和扩散. 这些抗性微生物可能会通过直接或者间接接触（如食物链）等途径进入人体，增加人体的耐药性，从而给人类公共健康带来威胁. 目前致病菌耐药性的增加和扩散已经成为全球疾病治疗所面临的一个巨大问题. 据报告，美国每年有超过两百万人受到抗性病原体感染，14000 人最终死亡（Pruden et al., 2006）. 而越来越多的证据显示，致病菌耐药性的扩散与环境抗性微生物和抗性基因紧密相关（Zhang et al., 2009c），因此尽快
牛奶总抗生素检测试剂盒试用方法
牛奶及中性液态乳制品中抑菌素 检测试剂盒 (总抗生素检测试剂盒) 产品编号：SW-5001 【简介】 华益精点牛奶及中性液态乳制品中抑菌素检测试剂盒是用来检测牛、羊的原奶和巴杀奶等中性液态奶中的抗生素。试剂盒提供的微孔中有细菌培养基和pH 指示剂，向微孔中加入奶样，如果样品中没有抗生素，孵育一定时间后，细菌产酸，使指示剂从紫色变为黄色；如果样品中有抗生素，则细菌不产酸，指示剂没有颜色变化。 【检测对象】 本产品是一种使用灵活，操作方便的抑菌素定性检测试剂盒，用于牛、羊等生乳、经加工处理的中性液态乳制品及乳粉中抑菌素（如残留抗生素等）的定性检测。 【产品组成】 1.96孔微孔板2块； 2.粘性胶膜2张； 3.说明书1份。 【产品性能】 以下为对应的抗生素检出限： 青霉素-G：1-2ng/mL 阿莫西林：1-2ng/mL 氨苄西林：1-2ng/mL 哌拉西林：3-4ng/mL 苯唑西林：5ng/mL 头孢哌酮：20ng/mL 头孢氨苄：20ng/mL 盐酸四环素：75ng/mL 强力霉素：75ng/mL 土霉素：50ng/mL 林可霉素：100-150ng/mL 链霉素：500-1000ng/mL 庆大霉素：50ng/mL 卡那霉素：100ng/mL 【检测步骤】 1、根据所检测样品的数量，先用刀将铝箔分割线切开，再将所需的微孔切下。注意不要将剩余微孔上的铝膜破坏，不然会导致培养基变干失去检测作用。并将剩余的检测微孔放回4℃左右的冰箱保存；
2、将取下的微孔板的铝膜撕掉，向每个微孔中加入50微升的待测样品。同时用其中一个微孔作为阴性对照，加入50微升不含抑菌素的阴性对照样品； 3、用粘性胶膜小心地将板孔封上，并置于64±0.5℃环境下孵育，如水浴锅或培养箱。可在孵育2.5-3h之间观察，如阴性对照组未变黄则继续培养直到阴性对照组变黄停止培养。水浴及培养箱的温度波动均会导致更长的检测时间，并会影响检测的灵敏度。 【判断标准】 1、黄色表示不含抗菌物质或抗菌物质的浓度在检出限以下，结果判为检测阴性； 2、蓝色或紫色表明所检测的待测样品中含有抗菌物质，结果判为检测阳性。【储存条件及有效期】 1、4-8℃避光保存，防止冷冻； 2、有效期：1年。 【注意事项】 1、由于本试剂盒对抗菌物质及其敏感（抗生素及其他成分，如消毒剂，洗涤剂 等），在贮存及检测时都应避免任何该类物质的污染； 2、剧烈振动或低温冷冻都会使培养基变得松动，影响检测结果，请轻拿轻放本 试剂盒； 3、每次检测时最好设立不含抗生素的阴性对照样品，以确定最佳孵育时间； 4、每个样品所需的微量进样器吸头不可重复使用； 5、培养的温度过高或过低，以及温度波动都会影响检测时间及检测灵敏度； 6、本品为一次性产品，请勿重复使用； 7、本产品检测结果仅供参考，最终结果应以权威检测机构的结果为准。 【结果判读时的额外注意事项】 随着贮存时间的推移，所需的培养时间会逐渐增加，对于不同类型的乳制品，可能需要不同的检测时间。
抗生素的检测方法
乳品中抗生素的检测方法经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。因此，FAO及WHO早在1969年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，WHO于1979年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（Antibiotic-Free Milk）的生产和消费已成为大势所趋。但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。 我国关于奶制品中抗生素检测的国家标准方法最早出现在《牛乳检验方法——GB5409—85》中，采用TTC法。1994年制订的《食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留量检验——GB/T 4789.27—1994》，也采用TTC法。2001年9月，农业部发布的《无公害食品生鲜牛乳》行业标准中，检测方法同《GB5409—85》，并不得检出。《绿色食品消毒牛乳标准》也做了类似规定。可看出，我国还未将抗生素纳入常规检测，作为必检项目；所采用的TTC法精确性和时效性都比较差。 展望新世纪的乳制品工业，为了保障人体健康，适应WTO的要求，增强国内乳制品业的国际竞争力，必须将抗生素的检测纳入议事日程。 首先是要制定相应的法规和检测程序，将乳制品中抗生素的检测、报告、处罚和管理等纳入法制化轨道，适应市场经济就是法制经济的要求。 其次是要修订、制订乳制品标准，将抗生素的检测纳入国标体系。解决国内标准混乱，与国际标准冲突的问题，加大采用国际标准的比例，同国际标准接轨。 再次是要进行抗生素检测方法筛选工作，提高国产试剂盒的研制能力。努力研究发展一些简单、快速、经济和便携化的能检测多种抗生素残留的分析技术；发展高效、高灵敏的联用技术和多残留组分确证技术。
牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展
牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展 Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】
牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进 展 摘要：抗生素在畜牧业中的广泛应用，不可避免地造成牛奶中残留抗生素。抗生素残留不仅危害人类健康，同时也影响牛奶的品质，造成经济损失。本文综述牛奶中抗生素残留的来源和危害、现状以及残留的检测方法。 关键词：牛奶；抗生素残留；微生物法；高效液相色谱法；色/质联用法；免疫法 随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。对此，检测技术也迅速发展，以寻求简便、快速、准确、敏感性高的检测方法满足日趋严格的残留限量要求，保障人们饮用牛奶的卫生和安全。 1.牛奶中抗生素残留的来源及其危害 牛奶中抗生素残留的来源 一般认为，对泌乳牛用药不当或不注意安全时间是牛乳中抗生素残留的重要因素，尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。在牛饲料中添加饲料添加剂已十分普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用是预防疾病，这是牛奶抗生素残留的重要原因。此外，一些不法交奶户在高温季节为防止乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，这也是乳中抗生素残留的一个来源。1983年，Egan调查表明，用经抗生素治疗的乳牛用过的挤乳器给正常乳牛挤乳，可使正常牛的乳中残留抗生素，所以挤乳是乳中抗生素残留的另一个来源。 牛奶中抗生素残留的危害 牛奶是老少皆宜的营养品，牛奶中若含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反应。即使是正常饮用者，体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素治疗很难奏效。抗生素是奶牛场治疗乳房炎的