实验七 GPI-专一性磷脂酶D(GPI-PLD)活性测定
实验七 GPI-专一性磷脂酶D （GPI-PLD ）活性测定
姓名：mangogola
本实验采用从人胎盘膜上分离的含有GPI-Anchor 的碱性磷酸酶（Apase ）作为底物，当它与血清保温时，在去污剂的存在下，血清中的GPI-PLD 能将Apase-anchor 的磷脂酸切掉，但这并不影响Apase 的活性，却会使其亲水性发生变化。利用非离子型去污剂TritonX-114缓冲液系统（TritonX-114在t<20℃时能与水形成均一溶液；而当t>20℃时便从水溶液中分离出来，经离心后与水相分离成两相），可分别得到具有anchor 的Apase 和酶作用后不含anchor 的Apase ，只要分别测出分相前的总活力和分相后水相中的活力，便可以计算出GPI-PLD 的活力。
Apase 测活原理是其以PNPP 为底物，在碱性条件下生成具有鲜艳黄色的对硝基苯酚（在405nm 处有特征吸收峰），因此通过测定单位时间内A405nm 的增加值计算出产物的量，从而推算出酶活力。
GPI-Anchor ：蛋白质分子的羧基端连接于一含寡糖的磷脂酰肌醇分子形成含甘油二脂的疏水Anchor ，其甘油二脂部分插入到膜的双脂层中构成膜的一部分，而蛋白质则以共价键的方式“抛锚”于膜的表面。
GPI-PLD ：寡聚糖基磷脂酰肌醇专一性的磷脂酶D ，能将游离的带GPI-Anchor 蛋白的anchor 部分的磷脂酸切下来。
ALP ：结合着GPI-Anchor 的碱性磷酸酶。
一．实验过程
1. GPI-Anchor 蛋白的制备（ALP 制备）
2.自然降解率测定
ALP 原液
100ul+2%NP-40 160ul+BufferC 1740ul 2000ul （20×）
ALP （20×）25ul+ BufferC 25ul +0.8%TritonX-114 450ul 500ul （400×）
从400×稀释的ALP 中分别取100ul 到总1、总2管中，置于37℃，剩余溶液于37℃水浴两分钟后12000rpm 离心两分钟，迅速置于37℃水浴，分别从中取100ul 到上1、上2按上表准备五支管，对应标号并加好溶液后，置于37℃水浴中，每管分别加入100ulPNPP ，精确反应4min ，加入2mlNaOH 以终止反应。然后加入50ulDOC ，于405nm 下测吸光度值。
3．GPI-PLD 活性测定
血清稀释：小鼠血清10ul+ BufferC 2990ul 3000ul （300×）
ALP 原液50ul+2%NP-40 80ul+BufferC 870ul 1000ul （20×）
0℃
0℃
ALP （20×）25ul+ 血清（300×）
25ul 37℃水浴20min ， +0.8%TritonX-114 450ul
500ul （400×）
从上面×稀释的ALP 中分别取100ul 到总S1、总S2管中，置于37℃，剩余溶液于37℃水浴两分钟后12000rpm 离心两分钟，迅速置于37℃水浴，分别取上相100ul 到上S1、上S2
。
按上表准备五支管，对应标号并加好溶液后，置于37℃水浴中，每管分别加入100ulPNPP ，精确反应4min ，加入2mlNaOH 以终止反应。然后加入50ulDOC ，于405nm 下测吸光度值。
二．实验结果观察与记录
1.自然降解率的测定
上相OD 1=0.013，上相OD 2=0.011，上相均值OD=0.012；
总相OD 1=0.298，总相OD 2=0.300，总相均值OD=0.299。
自然降解率%=
2.GPI-PLD 活性测定
上S 1OD =0.200，上S 2OD=0.213，上S 均值OD=0.2065；
总S 1OD=0.502，总S 2OD=0.497，总S 均值OD=0.4995。
三．注意事项
1.自然降解率一般要在10%以下才可进行GPI-PLD 活性的测定，自然降解率越低越好。
2.利用TritonX-114溶液进行离心分相时，要充分考虑温度的要求（t>20℃），比如事先加热离心转头、离心过程中加热、保证足够离心时间等等。
3.测量吸光度时，按照从低浓度向高浓度的顺序，可不用清洗比色皿。
4.测定ALP 活性时要准确计时，保证酶反应时间均为4min 。
0℃ 0℃
实验一 酶的底物专一性
实验一酶的底物专一性 一、实验目的 了解酶的专一性，掌握检查酶的专一性的原理和方法，学会排除干扰因素，设计酶学实验 二、实验原理 （1）酶的专一性。 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。按照酶的专一性程度分为： 键专一性（只要求作用于一定类型的键，对键两端的基团无严格的要求，如脂酶，核酶）。 基团专一性(又叫族专一性，只对键两端的其中一个基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶)。 绝对专一性（只作用于一种底物，如某些核酸工具酶）。 立体异构专一性（旋光异构专一性和几何异构专一性）。 （2）淀粉和蔗糖的结构 淀粉有2种：直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉是由200～300个α-葡萄糖以α-1,4糖苷键相连成一直链，支链淀粉不仅有α-1,4糖苷键，还有α-1,6糖苷键，从而在直链淀粉的基础上形成分支。 蔗糖是双糖，由α-葡萄糖和β-果糖以α-1,2糖苷键相连而成。 （3）Benedict反应 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，以颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。本实验分别以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性 三、试剂 （1）干酵母、可溶性淀粉或食用淀粉、蔗糖、NaCL、柠檬酸钠、无水碳酸钠、硫酸铜。 （2）新鲜淀粉酶溶液：唾液1ml 倒入10ml量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到70ml，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。 （3）蔗糖酶溶液：干酵母2.5g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4ml），用力研磨10分钟，转移到50ml离心管中，另用25ml蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，4000r/min离心5分钟，小心取出上清液（含
探究酶的专一性
《探究酶的专一性》的说课稿 江西省玉山县樟村中学童长春 各位评委老师、各位同仁大家早上好，今天我说课的实验题目是《探究酶的专一性》，下面我将从教材分析、学情分析、实验教学方法、实验教学过程、实验教学反思及自我评价这六个方面进行我的说课。 一、说教材分析 （一）、课程的地位和作用：“酶的专一性”是人教版《（必修1）》分子与细胞第五单元第一节的内容。本节内容是在“酶的作用和本质”的基础上，进一步理解酶的特性，理解实验探究方案设计原则及变量的控制，。同时参阅江西省生物教学课程标准和考纲要求，设定本课的重点是建构酶的特性知识体系，进一步探究酶的专一性；难点是如何进行酶的专一性的实验创新设计与实施。 （二）、实验教学目标。依据新课标要求,本着体现提高学生的科学素养、提倡合作探究的理念，培养学生实验探索的能力,提高学生发现问题、分析问题、解决问题的能力，确定以下目标： 1、知识与能力 概述酶的特性的知识体系。通过学生主动参与科学探究的实验活动，掌握科学探究的程序和方法，理解探究性实验设计的基本原则，培养学生创造性思维的能力和动手实践的能力。 2、过程与方法目标 本课设计的基本模式就是：教师引导——合作交流——创新方案——实验探究——精讲点拨——拓展延伸。 3、情感态度和价值观目标 通过对酶的专一性的探究性实验，培养学生崇尚科学的态度和实事求是的精神。培养学生敢于质疑，科学严谨的意志品质和勇于创新的精神。 二、学情分析 高一学生已具备了以下与本节学习相关的知识和技能：①在初中阶段学习了多种消化酶在食物消化中的作用，并且做了“观察唾液淀粉酶对淀粉有消化作用”的实验。②通过上节课对“酶的高效性”的学习，初步掌握了对照实验的设计与操作方法、自变量和无关变量的分析与控制方法。然而，学生对于课本实验进行进一步改进的实验方案设计以及具体实验操作细节上，还有较大的不足。
实验六淀粉酶的专一性和温度pH激动剂抑制剂对酶活性的影响
实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂 及抑制剂对酶活性的影响 实验类型：验证型 目的和要求 1.通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。 2.熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。 3.了解唾液淀粉酶的收集与预处理。 原理 酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂的Cu2+还原成Cu1+，生成砖红色Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。不同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。通过上述特征性反应，并以蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。 操作方法 一、唾液淀粉酶的收集与处理 1.制备唾液 实验者先将痰咳尽，用自来水漱口，以清除口腔内食物残渣，再在口腔内含蒸馏水约15ml，并作咀嚼咕漱运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。 2.煮沸唾液 取上述唾液约2ml，盛入1中号试管中,置沸水浴煮沸5分钟备用。 3.稀释唾液 调整唾液淀粉酶活性，使之在、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下，作用5min，水解淀粉至红色糊精为宜。具体做法是取12凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作： ①第1排每凹各加1滴制备唾液，12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴，用滴管采用抽吸法，由稀到浓（14→12）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。每混匀一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。
高三生物—— 活动：探究酶的专一性
高三生物—— 活动：探究酶的专一性 实验解读 1．实验原理 淀粉(非还原糖)――→水解 麦芽糖(还原糖)； 蔗糖(非还原糖)――→水解葡萄糖(还原糖)＋果糖(还原糖)； 还原糖＋本尼迪特试剂―――→沸水浴 加热红黄色沉淀。 2．实验步骤 试管 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液 3 mL － 3 mL － 3 mL － 2%蔗糖溶液 － 3 mL － 3 mL － 3 mL 新鲜唾液 － － 1 mL 1 mL － － 蔗糖酶溶液 － － － － 1 mL 1 mL 温度处理 37 ℃恒温水浴保温15 min 本尼迪特试剂 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 水浴加热 沸水浴2～3 min 实验结果 不出现 红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 出现红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 不出现红黄色沉淀 出现红黄色沉淀 3.结论：酶具有专一性。 1．酶的专一性的实验探究方法——对比法 (1)设计思路：常见的方案有两种，即底物相同但酶不同或底物不同但酶相同，最后通过观察酶促反应能否进行得出结论。 (2)设计方案 项目 方案一 方案二 实验组 对照组 实验组 对照组 材料 同一种底物(等量) 与酶相对应的底物 另外一种底物 试剂 与底物相对应的酶 另外一种酶 同一种酶(等量)
现象发生反应不发生反应发生反应不发生反应 结论酶具有专一性酶具有专一性 2.变量分析 (1)自变量：不同底物或不同酶液。 (2)因变量：底物是否被分解或有无产物生成。 (3)无关变量：试剂量、反应温度、pH等。 命题点一实验原理、步骤和现象 1．(2019·浙江稽阳联考)下表为“探究酶的专一性”的实验数据，下列相关叙述正确的是() 试管123456 本尼迪特试剂/mL222222 1%淀粉溶液/mL3\3\3\ 2%蔗糖溶液/mL\3\3\3 新鲜唾液/mL\\11\\ 蔗糖酶溶液/mL\\\\11 实验结果 A.1%淀粉溶液中含有一定量的氯化钠 B．按表格将各种溶液分别加入6只试管后，再共同保温一段时间 C．试管3有红黄色沉淀产生，说明有葡萄糖生成 D．若5号试管出现轻度阳性反应，不可能是淀粉溶液中有杂质 答案A 解析氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，所以1%淀粉溶液中含有一定量的氯化钠，A正确；本尼迪特试剂需要在酶促反应完成后加入，过早加入可能会对酶活性造成影响，从而影响实验结果，B错误；利用本尼迪特试剂能检测出试管3有还原糖生成，但不能确定就是葡萄糖，C错误；5号试管出现红黄色沉淀的原因，可能是淀粉溶液中有还原糖类杂质，D错误。2．现有3支试管甲、乙、丙，先向各试管内加入2 mL可溶性淀粉溶液，再按图中所示步骤操作，然后分别用本尼迪特试剂检验。下列说法中不正确的是()
10探究酶的专一性
探究酶的专一性 一、教学目标 比较唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用。 二、实验原理 含有自由醛基或酮基的单糖和双糖叫还原性糖。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子（铜、铋、汞、银等）还原，糖本身被氧化成酸性化合物。此性质常用于检验糖的还原性，并且常称为测定还原糖含量的各种方法的依据。还原糖与碱性硫酸铜可生成砖红色沉淀物。 本尼迪特试剂内含有硫酸铜，因此淀粉水解生成的麦芽糖和蔗糖水解生成的葡萄糖、果糖等还原糖在煮沸的条件下，与本尼迪特试剂会有砖红色沉淀物产生，淀粉和蔗糖（非还原糖）无此反应。本尼迪特试剂可以用来鉴定淀粉和蔗糖溶液中是否有麦芽糖、葡萄糖及果糖，进而推测淀粉和蔗糖是否被水解。 三、教学重难点 1、教学重点：建构酶的特性知识体系，探究酶的专一性。 2、教学难点：实验设计与实施。 四、实验材料与用具 （一）实验材料 稀释200倍的新鲜唾液，质量分数为2%的蔗糖溶液，溶于质量分数为0.3%氯化钠溶液中的淀粉溶液（其中淀粉含量为1%），蔗糖酶溶液，本尼迪特试剂 （二）实验用具 试管，试管架 五、教学过程 【提问】我们已经学习过酶的相关知识，那么它具有哪些特性呢？ 【学生活动】……… 【讲述】酶具有专一性，但是我们还需要实验来验证它。今天的实验就是探究酶的专一性。下面我们来看具体操作步骤。 【PPT展示】 1．取2个试管，分别编为1号、2号。 2．向1号试管中加入本尼迪特试剂2mL，再加入1%的淀粉溶液3mL；2号试管中加入本尼迪特试剂2mL，再加入2%蔗糖溶液3mL。 3．将两个试管内的溶液充分混匀后，放在沸水浴中煮2～3min。观察并记录实验结果（淀粉、蔗糖不产生砖红色沉淀）。 4．再取4支试管，分别编为3号、4号、5号、6号。 5．3号、4号试管中各加入稀释200倍的新鲜唾液1mL；然后在3号试管中加入质量分数为1%的淀粉溶液3mL，在4号试管中加入质量分数为2%的蔗糖溶液3mL。充分混匀后，放在37℃恒温水浴中保温，15min后取出。两管各加本尼迪特试剂2mL，摇匀，放在沸水浴中煮2～3min。观察并记录实验结果。 6．5号、6号试管各加入蔗糖酶溶液1mL，然后在5号试管中加入质量分数为1%的淀粉溶液3mL，在6号试管中加入质量分数为2%的蔗糖溶液3mL。充分混匀后，放在37℃
酶的专一性及影响酶促反应的因素
酶的专一性及影响酶促反应的因素 一实验目的 通过本实验，证明酶对底物催化的专一性，以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。 二实验原理 唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。 淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色；而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通过颜色变化可以了解淀粉的程度，以观察PH、温度激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 三药品器材 试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱，冰箱等。 1.1%淀粉溶液称取可溶性淀粉1g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。 2．1%蔗糖溶液称1g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。 3．PH6.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液154.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液45.5ml混合即可。 4．PH4.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液98.6ml，0.1mol/L柠檬酸溶液101.4ml混合即可。 5．PH8.0缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液194.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液5.5ml混合即可。 6．班氏试剂溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml 为A液。取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml ,加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。将A液缓慢倒入B液中，混合即可。
酵母蔗糖酶的提取及性质测定
酵母蔗糖酶的提取及性质测定 引论及原理 酶的分离制备在酶学以及生物大分子的结构功能研究中有重要意义。本实验属综合性实验，接近研究性实验，包括八个连续的实验内容，通过对蔗糖酶的提纯和性质测定，了解酶的基本研究过程；同时掌握各种生化技术的实验原理、基本操作方法。本实验技术多样化，并且多个知识点互相联系，实验内容逐步加深，构成了一个综合性整体，为学生提供一个较全面的实践机会，学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作初步的研究。 蔗糖酶（invertase ）（β—D —呋喃果糖苷果糖水解酶）（fructofuranoside fructohydrolase ）（EC.3.2.1.26）特异地催化非还原糖中的α—呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。每水解1mol 蔗糖，就生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，本实验采用Nelson 比色法测定还原糖量，由此可得知蔗糖水解的速度。 在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替应用，才能得到较为满足的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离效果。啤酒酵母中，蔗糖酶含量丰富。本实验用新鲜啤酒酵母为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶，并对其性质进行测定。 一、蔗糖酶的提取与部分纯化 （一）实验目的 学习酶的提取和纯化方法，掌握各步骤的实验原理，并为后续实验提供一定量的蔗糖酶。 （二）实验原理（略） （三）实验仪器、材料及试剂 仪器 1. 高速冷冻离心机、恒温水浴箱、－20℃冰箱 2. 电子天平、研钵（＞200ml ）、制冰机、50ml 烧杯 3. 离心管（2ml ，10ml ，30ml 或50ml ）、移液器（1000ul ）或滴管、量筒 材料及试剂 1. 市售鲜啤酒酵母（低温保存） ＋ H 2O 蔗糖酶 O H H O
探究影响酶活性的因素
酶的特性 一、课程目标分析 本节课是在对酶的作用和本质已有较深理解，并且通过实验已对酶的催化效率有了感性认识的基础上实施的。通过本节课的学习，应了解酶的概念，理解酶的特性，领悟探究酶的特性的科学研究方法，比如变量的控制、定性说明基础上的定量探究等。由于新课程倡导探究性学习的理念，强调让学生具有较强的生物学实验的操作技能、收集和处理信息的能力、以及交流与合作的能力等，可以说对酶的特性的学习是感悟新课程理念的范例，因此在苏教版和人教版的教材中，都有探究酶的特性及活性受温度和酸碱度影响的实验。当然本节内容成为历年高考的重点也是情理之中，比如04年上海卷考查了胰蛋白酶对底物的分解速度和温度之间的关系、05年江苏卷考查了探究酶的高效性的实验、06年广东卷考查了探究淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验等。此外，同学们在学习本节内容的过程中，还可开展研究性学习，研究酶与人类生活的关系，开阔自己的眼界，更好地体会新课程理念。 二、学习方法建议 1、与无机催化剂比较认识酶的特性------高效性 同学们对酶的认识有限但对催化剂的特点、作用条件比较熟悉。催化剂是在化学反应中能增大反应速率，但本身的化学性质和质量在反应前后都没有发生变化的物质。无机催化剂催化反应时有时需加热、加压如工业合成氨。而生物体内的代谢主要是在细胞内进行的，细胞内的环境是一个常温、常压的状态，这种环境状态下发生的化学反应，应该有适合的生物催化剂。可见同样是催化剂但作用的特点是不同的。比如生物催化剂过氧化氢酶和无机催化剂Fe3+需都能催化H分解为H，但列表比较后会发现： 通过对表格中信息的分析，联系上节课中的实验 ------ 比较过氧化氢酶在不同条件下的分解，与无机催化剂比较，认识酶的高效性。 2、根据蛋白质结构和功能关系理解酶的特性------专一性 酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，其中绝大多数酶是蛋白质。由于氨基酸种类、数目、排列顺序和肽链数目及空间结构的不同，就形成了分子结构不同、各具特定空间构型的蛋白质，蛋白质的分子结构是蛋白质功能的物质基础。同学们如何理解生物催化剂催化化学反应时的专一性，可借鉴蛋白质结构和功能的关系。特定空间构型的蛋白质具备特定的生理功能，那么便可推导出某种酶也应有特定的空间构型，特定的空间构型只能与特定的底物相结合，就象锁钥关系，这样也就比较容易理解酶在催化反应时，某种酶只能催化一种或一类物质的化学反应，正由于酶空间结构上有特定的活性部位。酶的专一性保证了生命活动有条不紊地进行。 3、通过设计实验进行探究感知酶的特性-------酶作用的条件比较温和 在使用加酶洗衣粉时，温水的洗涤效果要比冷水好；人患感冒发烧时，常常不思饮食，其原因是什么？人体消化道的胃、小肠PH不同但胃肠内都有酶参与大分子物质的消化。同学们对这些事例能做出适当的解释吗？这些事例说明了酶与无机催化剂比较的又一特性，酶作用的条件比较温和。当然假设是否可靠，应设计实验检验。例如： 课题定量测定不同pH对酶活性的影响 [目的原理] （1）鲜肝提取液中含有过氧化氢酶，最适pH为7～7.3，不同pH影响酶的活性；
(整理)《酶的高效性和专一性》实验教学设计1
《酶的高效性和专一性》实验教学设计 覃流静200811000075 林冰洁200811000072 卢珊珊200811000073 祝进贵200811000074 一、教材、学情分析 教材内容分析：《酶的高效性和专一性》是人教版高中《生物》第一册第三章第一节的一个必修实验内容。通过此实验使学生能够加深对酶的特性的理解，而酶的特性是“新陈代谢与酶”一节中非常重要的知识点，要求的层次比较高，属“应用”层次，但酶的特性这个知识点，学生理解起来较困难，而且在生产实践上也有广泛的应用，因此在教材中占有重要位置。 教学需1课时，由于在理论课时学生已经学习了酶的发现和概念以及酶的特性，在此基础上，教师引导学生设计实验，提出预期，让学生分组进行实验探究，观察思考，进行讨论，由学生自己总结出结论：酶具有高效性和专一性。这样的教学设计能体现学生自主、探究、合作的学习方式。有利于培养学生科学的思维方式和探究精神，提高学生的科学素养。 学生学情分析：在酶的高效性和专一性实验之前，学生已经学习了有关酶特性的知识，知道酶特性包括专一性和高效性，已有一定的理论基础。且学生已做过了《生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定》，学会了简单的实验操作技能，但由于本次实验，包含了两个小实验，所用原料和试剂都要按量按时间精确进行，所以指导好思维活跃的高二学生群体，保证其能够按照实验步骤进行是关键。通过本实验教学，培养学生合作交流和协同交流的意识。 二、课程目标： 1.知识与技能 （1）初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。 （2）探索酶是否具有专一性和高效性。 （3）通过学生参与发现问题、提出假设、设计并实施实验方案、对实验结果进行交流、表达等活动，训练学生的观察能力、描述能力、实验能力、发散性思维能力、独立完成探究的能力。 2.过程和方法 （1）通过小组成员相互配合，培养协调合理分工的能力；
实验四 酶的特性实验
说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！ 实验四酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。 （一）酶的专一性 1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。 2、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架； (3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。 3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 ①唾液的获取 用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。 ②不同稀释度唾液的制备（用大试管） 本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。 1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验） 表1 唾液淀粉酶稀释度的确定 （2）淀粉酶的专一性 表2 淀粉酶专一性实验 （二）温度对酶活力的影响 1、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合
大实验 酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究
大实验酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究 本实验为学生提供一个较全面的实践机会，学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质作初步的研究。 一．实验原理及相关知识 （1）蔗糖酶的介绍 自1860年Bertholet从酒酵母Sacchacomyces Cerevisiae中发现了蔗糖酶以来，它已被广泛地进行了研究。蔗糖酶（invertase）（fructofuranoside fructohydrolase）（EC.3.2.1.26）特异地催化非还原糖中的 —呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成蜜二糖和果糖。 （2）。实验原理： 本实验提取面包酵母中的蔗糖酶。该酶以两种形式存在于酵母细胞膜的外侧和内侧，在细胞膜外细胞壁中的称之为外蔗糖酶（external yeast invertase）, 其活力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50% 糖成分的糖蛋白。在细胞膜内侧细胞质中的称之为内蔗糖酶（internal yeast invertase），含有少量的糖。两种酶的蛋白质部分均为双亚基，二聚体，两种形式的酶的氨基酸组成不同，外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸，Ser和Met，它们的分子量也不同，外酶约为27万(或22万，与酵母的来源有关)，内酶约为13.5万。尽管这两种酶在组成上有较大的差别，但其底物专一性和动力学性质仍十分相似，因此，本实验未区分内酶与外酶，而且由于内酶含量很少，极难提取，本实验提取纯化的主要是外酶。 两种酶的性质对照表如下： 实验中，用测定生成还原糖（葡萄糖）的量或旋光法来测定蔗糖水解的速度，在给定的实验条件下，每分钟水解底物的量定为蔗糖酶的活力单位。比活力为每毫克蛋白质的活力单位数。 本实验共有以下分实验： 一、蔗糖酶的提取与部分纯化 二、离子交换柱层析纯化蔗糖酶 三、蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定
蔗糖酶与淀粉酶的专一性百替生物
蔗糖酶与淀粉酶的专一性 实验原理 酶具有高度专一性，一种酶只作用于一种或一类化合物的一定的化学键，催化一定的化学反应，产生一定的产物。 蔗糖是一种二糖，分子组成为α-吡喃葡萄糖1，2β呋喃果糖；棉子糖是一种三糖，其分子组成为α-吡喃半乳糖1，6α-吡喃葡萄糖1，2β呋喃果糖；淀粉是一种多糖，分子只含有α1，4和α1，6葡萄糖苷键。 蔗糖酶专一水解α-吡喃葡萄糖1，2β呋喃果糖苷键。因此，蔗糖酶能催化蔗糖和棉子糖的水解，不能催化淀粉水解；淀粉酶专一水解α1，4葡萄糖苷键，故淀粉酶只能催化淀粉水解。 蔗糖、棉子糖和淀粉均无还原性，对Benedict试剂呈阴性反应，而它们的水解产物则为还原性糖，与Benedict试剂共热产生红棕色氧化亚铜沉淀，据此可检查蔗糖、棉子糖、淀粉有无水解，观察酶的专一性。 仪器设备 恒温水浴箱、漏斗、量筒、试管及试管架、吸量管、滴管、电炉、水浴锅 试剂 1．1％蔗糖溶液 2．1％棉子糖溶液
3．1％淀粉溶液 4．Benedict试剂：柠檬酸钠173克和无水碳酸钠100克溶于蒸馏水约800ml中（可加热促溶），冷后慢慢倾入17.5克结晶硫酸铜100ml，边加边摇，然后加蒸馏水至1000ml。混匀备用。若浑浊可过滤试剂可长期保存。 5．鲜酵母 6．甲苯 7．硅藻土 8．5%氨水 实验操作 1．酵母蔗糖酶提出液制备 取鲜酵母（面包酵母）1.2克，放在小试管内，倾入甲苯1～2ml用粗玻璃棒搅拌约30～45分钟使酵母液化，然后加蒸馏水3－5ml，充分混匀。3000转/分离心10分钟，倾弃上清液，保留沉淀于小试管中，加蒸馏水1.5ml，甲苯0.2ml，混匀，在30℃水浴中过夜。次日取出，用玻棒搅匀，一边搅拌一边加3－5％稀醋酸，调节pH至3.5～4.0（用pH试纸测试），离心（3000转/分）10分钟。将上清液倾入洁净的烧杯内，加入少量硅藻土（约一小匙），混匀，过滤。滤液用氨水中和至pH5左右，放4℃冰箱保存备用。使用前可根据实验需要的活性大小适当稀释。 2．准备稀释唾液（淀粉酶的来源）：实验者先用水漱口，然后含一口蒸馏水于口中轻漱一、二分钟，吐入小烧杯中。 3．取大试管6支按表加入试剂。 管号 123456 试剂
验证酶的专一性实验设计思路
验证酶的专一性实验设计思路： 实验一：底物：淀粉溶液实验组：淀粉酶对照组：蔗糖酶 实验结果检测试剂：用斐林试剂检测反应产物 实验二：酶：淀粉酶实验组底物：淀粉对照组底物：蔗糖 实验结果检测试剂：斐林试剂检测反应产物 1.下图甲表示某酶促反应过程，图乙表示图甲的反应过程中有关物质浓度随时间变化的曲线 （物质a的起始浓度为10 mmol/L）。下列叙述错误 ．．的是 甲乙 A．物质a可能是麦芽糖但不可能是蔗糖 B．在该实验条件下物质a在2 min内可被完全分解 C．若曲线①②③表示不同酶浓度下酶促反应速率，则曲线①酶浓度大于曲线②和③ D．若曲线①②③表示不同温度下酶促反应速率，则曲线①温度低于曲线②和③ 2.下列与酶相关实验的叙述中，正确的是 A．探究酶的高效性时，自变量可以是酶的种类 B．探究温度对酶活性的影响时，因变量不止一种 C．探究pH对酶活性的影响时，自变量不止一种 D．探究酶的专一性时，自变量一定是酶的种类 3.下列对实验的相关叙述，正确的是( ) A.探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的专一性作用时，可用碘液替代斐林试剂进行鉴定 B.纸层析法分离叶绿体色素的实验结果表明，叶绿素b在层析液中溶解度最低 C.调查人群中某种遗传病的发病率时，应选择有遗传病史的家系进行调查统计 D.鉴定蛋白质时，应将双缩脲试剂A液和B液混合以后再加入待检组织样液中 4.（双选）下列关于高中生物实验原理、操作等的叙述中，正确的是( ) A. 生长素和酶都能与双缩脲试剂发生紫色反应 B．研究土壤中小动物类群丰富度时，常用取样器取样的方法进行调查 C．模拟探究细胞表面积与体积的关系实验中，NaOH在体积较小的琼脂块内扩散较快 D、在探究酵母菌呼吸方式的实验中，酒精是因变量 5．（双选）下列有关酶的叙述，正确的是 A．酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸 B．酶通过为反应物供能和降低活化能来提高化学反应速率 C．在动物细胞培养中，胰蛋白酶可将组织分散成单个细胞 D．在PCR中，加入DNA连接酶可连接两条DNA单链中的氢键，使双链延伸
酶的专一性的实验报告
酶的专一性的实验报告 篇一:实验一酶的专一性实验 实验一酶的专一性实验 实验原理 淀粉在唾液淀粉酶的催化作用下，能够水解成麦芽糖。在煮沸的条件下，斐林试剂能使麦芽糖氧化，自身还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂可以用来鉴定溶液中是否有麦芽糖，进而可以看出唾液淀粉酶是否只能催化淀粉水解，不能催化其他糖类(如蔗糖)水解。 目的要求 1(初步学会做酶的专一性实验的方法。 2(理解酶具有专一性的特点。 材料用具 新鲜的唾液。 消过毒的脱脂棉，镊子，试管，小烧杯，量简，玻璃棒，酒精灯，火柴。可溶性淀粉的质量分数为州的溶液?，蔗糖的质量浓度为3g,InL(克每毫升的溶液，斐林试剂，清水。 方法步骤 1(用清水将口漱净，口内含一块消过毒的脱脂棉。用镊子取出 脱脂棉，使其中的唾液收集到小烧杯中。 2(取3mL唾液，注入另一个小烧杯中，加入30mL蒸馏水，用 玻璃棒搅匀，制成稀释的唾液备用。 1( 取两支洁净的试管，编号，按下表加入试剂: 1 2
3%淀粉溶液 2mL — 3%蔗糖溶液— 2mL 2%淀粉酶溶液 2mL 2mL 摇匀，37?保温5 min 斐林试剂 2mL 2mL 摇匀，100?保温3 min 现象砖红蓝色 现象分析 结论 讨论: l、两次保温的目的各是什么, 2、你认为这样设计检测酶专一性的实验完善了吗,还应有哪些 改进才能使之更完善, 3、设计一个鉴定蔗糖酶专一性的实验。 结论 篇二:10探究酶的专一性 探究酶的专一性 一、教学目标 比较唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用。 二、实验原理 含有自由醛基或酮基的单糖和双糖叫还原性糖。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原，糖本身被氧化成酸性化合物。此性质常用于检验糖的还原性，并且常称为测定还原糖含量的各种方法的依据。还原糖与碱性硫酸铜可生成砖红色沉淀物。
探究酶的专一性
探究酶的专一性 一、学习任务分析 实验是一切自然科学研究的基础和起点。探究性实验教学在高中生物教学中占有重要的地位。浙教版高中生物必修1模块中有4个探究实验,主要围绕有关生物催化剂———酶的催化特性、证实大部分酶的化学本质是蛋白质的实验探究。因此本实验在整个必修一实验中占有非常重要的地位。所以本次实验课主要以认知学理论为基础，来培养学生“发现问题——提出问题——解决问题”的科学探究方法，初步领悟科学探究思想。 二、学习者分析 从学生的知识结构上看：学生具备了一定的生物细胞知识，了解细胞的结构和功能，对化学催化剂有感性认识，具备了一定的发现问题、提出假设、设计实验以及进行探究活动的一般方法，具有利用网络进行搜集、处理及表达、展示信息的能力。但对在实验中控制变量问题的能力较弱。从学生年龄特征上看：高二学生的逻辑思维能力已经增强，具备了对事物的推理、判断和创造性思维能力。 三、教学重难点 1、教学重点：比较唾液淀粉酶与蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用； 2、教学难点：对照性实验设计中的几个主要原则； 四、教学目标 1、知识与技能目标： (1)说明酶在细胞代谢中的特性。 (2)进行有关实验和探究，学会控制自变量，观察和检测因变量变化以及设置对照组和重复实验。 2、过程与方法目标： (1)学生主动参与科学探究的虚拟实验活动，掌握科学探究的程序和方法，培养创造性思 维能力和动手实践的能力。 (2)通过以小组为单位的学习，学生学会与人交流和合作的能力 3、情感态度与价值观目标： (1)通过对“比较唾液淀粉酶与蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用”的探究性学习，培养崇尚科学的态度和实事求是的精神。 (2)培养知难而进、锲而不舍的顽强的意志品质和勇于探索未知世界、勇于创新的精神。 五、教学过程 1、贴近生活激趣导入： 课前让同学们预习本节内容找寻生活中与酶有关的产品，现在我们来交流一下（学生有可能找到加酶洗衣粉洗涤衣物的问题、多酶片、生物酶牙膏等问题）。通过上节课的学习我们知道，酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，其中绝大多数酶是蛋白质，不同的酶对不同的物质的催化能力有何不同？从而导入酶的专一性的课题。 2、引导学生回忆、分析、探究 引导学生回忆初中知识，食物的消化过程；打比喻“一把钥匙开一把锁”得出酶具有专
探究酶的高效性和专一性教学设计
探究酶的高效性和专一性教学设计 甘南州合作第一中学马涛 指导思想：新课标倡导研究性学习的理念，注重生物核心素养的渗透，尝试从生命观念、科学思维、科学探究、社会责任四个方面去培养学生的核心素养。力图促进学生学习方式的变革，引导学生主动参与探究过程并进行实践，培养学生获取新知识、批判性思维的能力、分析问题和解决问题的能力并旨在培养学生的综合素养。高中生物探究实验可以大大提高学生的探究思维能力，动手操作能力。本节课对人教版实验“比较过氧化氢在不同条件下的分解”和酶的特性进行了整合和创新，首先创新性的利用一套装置可以探究多个问题，可以探究酶的高效性、酶的专一性、PH 对酶活性的影响以及酶量对化学反应速度的影响等多个实验。同时将反应装置由试管变成了注射器这一封闭装置，并巧妙地利用圆形滤纸片，通过注射器 180 度旋转来控制反应的起始，有效的避免了原来实验中存在反应剧烈，误差较大这一问题；并将相同时间内活塞移动的距离作为一项观测指标，将定性试验变身为定量实验，培养了学生的逻辑思维能力和实验素养。 实验教学分析：学生在初中已经对无机催化剂特点以及生物探究实验有了一个初步的了解，这就为本节课的学习打下了一定的基础。由于本实验是在课本实验的基础上进行了大胆的创新，原来学生从来没有接触过注射器装置，如何引导学生会用圆形滤纸片滴加不同的物质来进行多项探究是本案例的难点。依据重难点，本节课首先利用视频和提供的试验材料和用具，学生主动提出可以探究的问题。通过微课，小组讨论如何控制过氧化氢和酶的接触，经过讨论得出可以用圆形滤纸片滴加不同的物质来进行多项探究。最后采取小组合作讨论，形成小组的设计方案，通过展示、其他小组的评价和修订，最后形成相对规范的实验设计方案。在试验过程中，教师要做好引导，让学生自己来动手实验，切实提高学生的探究能力和实验能力。试验完成后，让学生学会得出结果和结论，主动尝试分析实验中存在的问题，并能提出解决的方案。这种设计有利于学生由感性到理性的认知规律，有利于引导学生主动参与探究过程，并且有利于培养学生的多种能力。 核心素养： 1、生命观念：通过对酶本质和特性的探究，加深学生对生物体生命活动能高效有序进行的微观认识。 2、科学思维：结合生物个体水平的知识、化学和物理学知识以及学生的生活经验，
酶的专一性
酶的专一性 酶的底物专一性即特异性(substrate specificity)是指酶对它所作用的底物有严格的选择性。一种酶只能催化某一类，甚至只与某一种物质起化学变化。例如酯酶只能水解脂类，肽酶只能水解肽类，糖苷酶只能水解糖苷等。 (一)酶的专一性分为两种类型： 1．结构专一性有些酶对底物的要求非常严格。只作用于一个底物，而不作用于任何其他物质，这种专一性称为“绝对专一性”(absolute specificity)。例如脲酶只能催化尿素水解，而对尿素的各种衍生物(如尿素的甲基取代物或氯取代物)不起作用。又如延胡索酸水化酶只作用于延胡索酸(反丁烯二酸)或苹果酸(逆反应的底物)，而不作用于结构类似的其他化合物。有些类似的化合物只能成为这个酶的竞争性抑制剂或对酶全无影响。此外，如麦芽糖酶只作用于麦芽糖，而不作用于其他双糖。淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。碳酸酐酶只作用于碳酸。 有些酶对底物的要求比上述绝对专一性略低一些，它的作用对象不只是一种底物，这种专一性称为“相对专一性”。具有相对专一性的酶作用于底物时，对键两端的基团要求的程度不同，对其中一个基团要求严格，对另一个则要求不严格，这种专一性又称为“族专一性”或“基团专一性”。例如α-D-葡萄糖苷酶不但要求α-糖苷键，并且要求α-糖苷键的一端必须有葡萄糖残基，即α-葡萄糖苷，而对键的另一端R基团则要求不严，因此它可催化含有α-葡萄糖苷的蔗糖或麦芽糖水解，但不能使含有β-葡萄糖苷的纤维二糖(葡萄糖-β-1，4-葡萄糖苷)水解。β-D-葡萄糖苷酶则可以水解纤维二糖和其他许多含有β-D-葡萄糖苷的糖，而对这个糖苷则要求不严，可以是直链，也可以是枝链，甚至还可以含有芳香族基团，只是水解速度有些不同。 有一些酶，只要求作用于一定的键，而对键两端的基团并无严格的要求，这种专一性是另一种相对专一性，又称为“键专一性”。这类酶对底物结构的要求最低。例如酯酶催化酯键的水解，而对底物，中的R及R′基团都没有严格的要求，既能催化水解甘油脂类、简单脂类，也能催化丙酰、丁酰胆碱或乙酰胆碱等，只是对于不同的脂类，水解速度有所不同。又如磷酸酯酶可以水解许多不同的磷酸酯。其他还有水解糖苷键的糖苷酶，水解肽键的某些蛋白水解酶等。 各种蛋白水解酶都水解肽键，但它们的专一性程度各不相同。细菌中的蛋白水解酶，如枯草杆菌蛋白酶，对于被作用肽键的两端没有严格的要求，只要求组成肽键的氨基端有一个疏水基团；而血液凝固酶系统中的凝血酶，它的专一性程度则相当高，对被水解的肽键的羧基一端要求L-精氨酸残基，氨基一端要求甘氨酸残基。 胰蛋白酶只专一地水解赖氨酸、精氨酸羧基形成的肽键，胰凝乳蛋白酶专一地水解由芳香族氨基酸或带有较大非极性侧链的氨基酸羧基形成的肽键，弹性蛋白酶专一地水解丙氨酸、甘氨酸及短脂肪链氨基酸的羧基形成的肽键，胃蛋白酶水解芳香族或其他疏水氨基酸的羧基或氨基形成的肽键。蛋白质进入动物消化道后，先受胃蛋白酶、胰蛋白酶及弹性蛋白酶的作用，再受羧基肽酶、氨基肽酶和二肽酶的协同作用，最终水解为氨基酸。 2．立体异构专一性(stereospecificity) (1)旋光异构专一性 当底物具有旋光异构体时，酶只能作用于其中的一种。这种对于旋光异构体底物的高度专一性是立体异构专一性中的一种，称为“旋光异构专一性”，它是酶反应中相当普遍的现象。例如L-氨基酸氧化酶只能催化L-氨基酸氧化，而对D-氨基酸无作用。
酶的特异性(专一性)及影响酶活性的因素
酶的特异性（专一性）及影响酶活性的因素 实验目的 1.掌握检查酶特异性的方法和原理。 2.了解温度对酶活性的影响。 3.了解激活剂、抑制剂对酶活力的影响。 实验原理 1. 酶的专一性 酶是生物体中一种具有催化功能的特殊蛋白质（传统酶的概念），也常称为生物催化剂。它与一般催化剂的最主要区别就是具有高度的特异性，即专一性。根据各种酶对底物的选择程度不同，可分为绝对专一性、相对专一性、立体异构专一性，。例如唾液淀粉酶属于相对专一性酶，它只能随机作用于淀粉链内部的a——1，4糖苷键，使其分子迅速断裂成较短的链，称为糊精，糊精分子量递减，淀粉——大分子糊精——中分子糊精——小分子糊精——简单分子糊精——麦芽糖和a——糊精（含a——1，6糖苷键的短链聚糖，平均分子量为8个残基）。 由于淀粉酶催化所形成的产物都是还原糖，故可用灵敏度较高的Benedict试剂检测和观察。 2.温度对酶促反应速度的影响 酶的催化作用受温度的影响很大，与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度，通常温度每升高10℃，反应速度加快一倍左右。另一方面酶是一种蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37—40℃，植物酶的最适温度为50—60℃。但一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用的时间称短有关，反应时间增长时，最适温度向数值较低的方向移动。最适温度不是酶的特征性物理常数。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。大多数酶在干燥的固体状态与比较稳定，能在室温下保存数月至一年，溶液中的酶，易被微生物污染，常难长期保存，在高温的情况与，如100℃即可失活。低温降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 3.激活剂和抑制剂对酶活力的影响 酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能增加酶的活性，称为酶的激活剂；另一些物质则会降低酶的活性，称为酶的抑制剂。例如氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子则为该酶的抑制剂。通常情况下，很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性，但是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质对不同的酶所起的作用不同，如镁是脱羧酶烯醇化酶的激活剂，但是肌球蛋白ATP 酶的抑制剂，同一种酶也可因激活剂的浓度不同而作用不同，如CL-在低浓度时是激活剂，达三分之一饱和度时则变为抑制剂。 器材和试剂 1.配制的溶于0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液： 2.新配制的溶于0.3％氯化钠的0.1％淀粉溶液： 3.新配制的溶于0.3％氯化钠的0.2％淀粉溶液：
蔗糖酶的提取、分离、纯化及活性检测
蔗糖酶的提取、分离、纯化及活性检测 摘要 随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究还是其他研究，越来越需要纯度更高的酶制剂，这就要求我们熟悉酶提纯的一般操作步骤及酶的提纯及活力测定等重要的生物实验技术。本次实验主要通过提取啤酒酵母中的蔗糖酶并经过两次纯化测定其活力与Km。在实验过程中用乙醇分级分离法，DEAE-Cellulose柱层析，分子筛（凝胶过滤）层析提取纯化蔗糖酶。在实验过程中，虽然我们很努力,但由于我们对实验的程序不熟悉，因此在实验的一些过程中有一些明显的操作失误，使得实验的最后测定结果与理论值有一定出入。关键词 啤酒酵母蔗糖酶乙醇分级分离 DEAE-Cellulose柱层析分子筛层析Km 前言 生物体内所发生的一切化学反应，几乎都是在专一性酶的催化下进行的，因此酶的研究对了解生命活动的规律以及生命本质的阐述具有十分重要的意义。随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究以及分子生物学其他重要课题的研究都越来越多地需要使用作用专一，纯度高的酶制剂。这就要求人们建立各种方法，以便从各种生物来源的材料中分离提纯酶。 由于酶本身也是蛋白质，因此酶分离提存的方法大体上与蛋白质纯化方法相同，一般来说，没有一种固定的方法，而往往根据实验者所要分离提纯酶的取材以及酶本身的物理﹑化学及生物学性质来确定分离提纯方法。各种酶的纯化通常有五个阶段：①材料的选择与预处理；②细胞破碎；③抽提；④纯化；⑤浓缩﹑干燥及保存。 酶分离纯化成功与否的重要标志：一是要有较高的收率；二是达到所要求的纯度，这两个指标通常是矛盾的，可根据需要来有所侧重，一般来说，好的方法
与步骤应该是简单易行，最终的酶制剂有较高的收率和纯度。 就单独的每种分离提纯的方法而言，有盐析法、有机溶剂分级法、调PH分级沉淀法、选择变性法、吸附法、层析法（纸层析、薄板层析、柱层析等）。其中盐析法是用于蛋白质和酶分离提纯的最早而且最广泛的一种方法，该方法是根据蛋白质和酶在一定浓度的溶液中溶解度的降低程度的不同而达到彼此分离的方法盐析法常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等，其中用得最多的是硫酸铵，因为它具有温度系数小而溶解度大的优点。在一定的溶解度范围内许多蛋白质和酶均可盐析出来。其次，它的价格便宜，分级效果好且不容易引起蛋白质变性，在一定程度上还有稳定作用。有机溶剂沉淀法能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的斥力，导致溶解度的降低。另外，有机溶剂与水作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶液中便沉淀析出。在分离纯化的过程中，往往需要几种方法的合理结合，方法选择的好，前后串联得当，可大大提高整个分离提纯过程的速度和收效。 在分离提纯过程中，应该尽量避免引起蛋白质变性的各种因素，此外，在分离提纯前，必须建立对酶的分析鉴定方法，以正确指导分离提纯地进行。 材料与方法 1.材料 啤酒酵母（兰州黄河啤酒有限公司） 2．方法及步骤 2.1葡萄糖浓度标准曲线的制作： 取22支编号的试管（两个平行）按下表的顺序加入0.2%Glc溶液，水及3,5-二硝基水杨酸试剂。然后在沸水浴中加热5分钟，然后立即用自来水冷却并用蒸馏水定容至25ml，摇匀，于540nm测光密度，结果如下表所示：