钇配合物荧光猝灭法测定姜黄素含量

实验一,二 原子荧光光谱法测量条件的选择和水样中总砷的测定

实验一原子荧光光谱法测量条件的选择 一、实验目的 1．了解原子荧光光谱仪的基本结构及使用方法； 2．掌握原子吸收光谱分析测量条件的选择方法及测量条件的相互关系及影响，确定各项条件的最佳值。 二、方法原理 原子荧光光谱仪工作原理： 在一定工作条件下，荧光强度I F与被测元素的浓度c成正比，其关系如下： I F = K c 氢化物发生原理： BH4- + H++ 2As3+ +3H2O →2AsH3↑+H2↑+ BO33-生成的AsH3蒸汽在载气的带动下，经过火焰原子化，As原子接受由低压砷灯发出激发光照射，基态砷原子被激发到高能态，当返回到基态时辐射出共振荧光，此荧光经聚光镜聚焦于光电倍增管，实现光电转换，最后得到信号。 在原子荧光光谱分析中测量条件选择得是否正确，直接影响到分析方法的检出限、精密度和准确度。本实验通过砷的原子荧光光谱分析测量条件的选择，如灯电流、载气流量等，确定这些测量条件的最佳值。 三、仪器设备与试剂材料 1．PF6型原子荧光光谱仪（北京普析通用），砷高强度空心阴极灯。 2．试剂： （1）砷标准贮备液（1000u g?mL-1）：国家标准。 （2）砷实验工作溶液（1u g?mL-1）：由砷标准贮备液1000u g?mL-1逐级稀释得到。 （3）硫脲溶液（100g?L-1）：称取硫脲10g，加入80mL蒸馏水，水浴加热溶解，蒸馏水稀至100mL，摇匀。 （4）硼氢化钠-氢氧化钠溶液（15g?L-1）：称取5g氢氧化钠溶于200mL蒸馏水，加入15g硼氢化钠并使其溶解，用蒸馏水稀至1000mL，摇匀。 （5）2% 盐酸溶液（v/v）：移取20ml HCl（GR）,用蒸馏水稀释至1000mL，摇匀。 （6）（1+1）盐酸溶液（v/v）。 四、测量条件的选择 1．10ng?mL-1标准溶液的配制

姜黄素的抗氧化及抗肿瘤活性研究_陈建平

姜黄素的抗氧化及抗肿瘤活性研究 陈建平，李琳，苏健裕 （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640） 摘要：本文采用分光光度法测定姜黄素对ABTS和DPPH自由基的清除能力；运用AAPH诱导红细胞氧化性溶血考察姜黄素对AAPH诱导人血红细胞损伤的抑制作用。通过MTT方法考察姜黄素对A375恶性黑色素瘤生长状态的影响，并用流式细胞仪检测细胞凋亡数量；运用Western blot测定姜黄素对JNK和Akt蛋白表达的影响。结果表明，姜黄素对DPPH和ABTS自由基具有较好的清除能力，呈浓度和时间依赖性；同时，姜黄素能有效抑制AAPH诱导红细胞溶血，当姜黄素为40 μM时，溶血抑制率达到52.78±1.03%。MTT结果表明，随着姜黄素浓度的升高，A375细胞存活率逐渐下降，当姜黄素为40 μM，A375的细胞存活率仅为21.50±1.60%。流式分析发现，随着姜黄素浓度的提高，细胞凋亡峰（SubG1）的含量逐渐增加。当姜黄素为40 μM时，细胞内SubG1峰的含量达到了63.30%。进一步Western blot分析发现姜黄素诱导A375细胞凋亡与上调JNK磷酸化的水平和下调AKt磷酸化的水平有关。 关键词：姜黄素；抗氧化；抗肿瘤 文章篇号：1673-9078(2014)12-11-15 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.12.003 Antioxidant and Antitumor Activities of Curcumin CHEN Jian-ping, LI Lin, SU Jian-yu (College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology,Guangzhou 510640, China) Abstract: In this paper, spectrophotometric method was employed to determine the ability of curcumin to scavenge 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radicals, and the oxidative hemolysis of erythrocytes induced by 2, 2′-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) was used to investigate the inhibitory effect of curcumin on AAPH-induced damage to human erythrocytes. The effect of curcumin on the viability of A375 malignant melanoma cells was measured by MTT assay, and the population of the apoptotic cells was detected by a flow cytometer. The effect of curcumin on the expression levels phosphorylated JNK and Akt was analyzed via Western blot assay. These results showed that curcumin exhibited strong scavenging effects on ABTS and DPPH free radicals in a dose- and time-dependent manner. Meanwhile, curcumin also effectively inhibited the AAPH-induced hemolysis of erythrocytes. The hemolysis inhibition rate of curcumin increased to 52.78 ± 1.03% at a concentration of 40 μM. The MTT assay showed that an increasing concentration of curcumin decreased the viability of A375 cells gradually. The cell viability after treatment with curcumin (40 μM) was only 21.50 ± 1.60%. Further flow cytometric studies showed that the SubG1 peak (apoptotic cells) increased in response to increasing curcumin concentrations. The SubG1 peak (apoptotic cells) reached 63.30% when the curcumin concentration was 40 μM. Further studies by Western blot assay demonstrated that the curcumin-induced apoptosis in A375 cells was related to upregulation of JNK phosphorylation and downregulation of Akt phosphorylation. Key words: curcumin; antioxidant activity; antitumor activity 近年来，越来越多的研究表明，细胞内自由基产生的损伤可以导致癌症、动脉粥样硬化、心血管疾病、收稿日期：2014-05-31 基金项目：高等学校博士点基金新教师项目（20110172120033）；国家自然科学基金青年基金项目（31101278）；广东省产学研结合项目（2012B091100075）；“扬帆计划”引进创新创业团队专项资助（201312 H05）；华南理工大学中央高校基本科研业务费（2013ZZ0069）资助 作者简介：陈建平（1986-），男，博士研究生，研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用 通讯作者：苏健裕（1979-），男，博士，副研究员，研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用 免疫系统衰退和细胞衰老等多种疾病[1,2]，摄入外源性的抗氧化剂能有效地预防或抑制这些疾病的发生。目前由于人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，可能会导致癌症或损伤肝脏，因此寻找天然有效的抗氧化剂成为目前研究的热点问题[3~4]。姜黄素（curcumin）是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种脂溶性酚类物质[5]。研究表明，姜黄素的结构中含有酚羟基，在细胞膜发生脂质过氧化反应时，其酚羟基可以发生氧化反应，能有效终止自由基反应，因而其表现出诸多生理活性，比如抗氧化、抗肿瘤、防止衰老等诸多功效[6]，成为近年来天然药物中的研究热点。尤其是姜黄 11

HPLC法测定姜黄_郁金_广西莪术中姜黄素的含量

m in,然后置冷水浴中冷却30m in[3],随行空白,在490nm波长处测定吸光度,得回归方程为:C= 143185A-1113,r=019995。 21313　样品的制备:按表5,6的设计,精取相当于5g白术的水提液,在平行条件下浓缩至20mL,分别加5%ZnSO4约2mL与饱和B a(OH)2溶液约8 mL,以沉淀蛋白等杂质,振摇静置,上清液加几滴B a(OH)2溶液,直至沉淀产生,滤入100mL量瓶中,加水稀释至刻度[4]。 21314　结果:各正交实验组的白术多糖含量见表6。其方差分析结果见表7。 表7　方差分析表 方差来源离均差平 方积(SS) 自由度 (Μ) 方差 (M S) F值P A　011943 2010971　785104<0101 B0121182011059855184<0101 C0100682010034271655<0101 D0144012012201177811<0101误差01003327010001 总变异018564 F0105(2,29)=3133,F0101(2,29)=5142 结果表明:白术等6味药物的水提工艺优选A3B2C1D2。3　讨论 胃安冲剂的制备工艺中水提醇沉部分选择厚朴酚作为定量检测指标,是因为厚朴为方中君药,具有行气除满之功,适用于里实气滞之证,可以治疗胃动力低下等症,其有效成分之一厚朴酚已有测定其含量的大量报道,实验条件成熟,故选择其作为衡量制剂有效成分的控制指标之一。 水提部分选择白术多糖作为定量检测指标,是因为白术为方中臣药,具有健脾运脾之功效,而其水溶性成分白术多糖具有重要生理活性,测定方法简便可靠。 黄连有清胃热,健脾胃的作用,故选择盐酸小檗碱作为控制制剂有效成分的另一指标。 通过成选胃安冲剂的制备工艺,提高了该制剂有效成分的得率,保证了其内在质量。 参考文献: [1]　寇俊萍,宣圆圆,严永清1影响厚朴三物汤厚朴含量因素的初 步研究[J]1中成药,2001,23(6):41024031 [2]　常增荣,周富荣1高效液相色谱法测定保济丸中厚朴酚及和厚 朴酚含量[J]1中国中药杂志,1995,20(10):6051 [3]　储秋萍1壳聚糖用于黄芪口服液澄清的工艺探讨[J]1中成 药,1998,20(12):2231 [4]　陈柳蓉,邵　青,陆　蕴1白术及炮制品的多糖含量测定[J]1 中成药,1997,28(4):21422151 HPLC法测定姜黄、郁金、广西莪术中姜黄素的含量 戚爱棣Ξ (天津中医学院中药系,天津　300193) 摘　要:目的　测定不同产地姜黄、郁金、广西莪术中姜黄素的含量。方法　采用超声提取法,色谱柱Supelco sil T M L C18柱(5Λm,416mm×250mm),流动相为甲醇2异丙醇2015%醋酸溶液(19∶25∶56),流速016mL m in,测定波长420nm,柱温35℃。结果　姜黄素在14～56Λg范围内线性关系良好(r=019995),平均回收率99182%,R SD 为1157%。结论　本法准确、快速,为控制中药原料药姜黄、郁金、莪术的内在质量提供了依据。 关键词:姜黄;郁金;广西莪术;姜黄素;H PL C 中图分类号:R286102 文献标识码:B 文章编号:02532670(2002)06051003 Ana lysis of curcu m i n i n Cu rcum a longa,C.wenyuj in,C.kwangs iens is by HPLC Q IA i2di (D epartm ent of Ch inese M ateria M edica,T ianjin Co llege of TC M,T ianjin300193,Ch ina) Key words:Cu rcum a long a L.;C.w eny uj in Y1H1Chen et C1L ing;C.kw ang siensis S1G1lee et C1 F1L iang;cu rcum in;H PL C 姜黄、郁金、广西莪术属姜科植物,其根、茎中的主要活性物质为姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素[1]。现代药理研究表明姜黄素具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血脂、降压、保肝、护肝等多种功能的 ? 1 5 ?中草药　Ch inese T raditi onal and H erbal D rugs　2002年第33卷第6期 Ξ收稿日期:2001210220 基金项目:天津市科委重大科技攻关基金项目

分子荧光法测定水杨酸乙酰水杨酸1

分子荧光法测定水杨酸和乙酰水杨酸 一、实验目的 1、学习荧光分析法的基本原理。 2、掌握应用分子荧光法测定乙酰水杨酸、水杨酸的分析方法。 3、了解F-3501型荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握其正确的使用方法。 二、实验原理 某些物质经紫外光或波长较短的可见光照射后，会发射出较入射波长更长的荧光。荧光光谱反映了物质的特性，建立在测量荧光光谱基础上的分析方法称为荧光分析法。当进行荧光测定时，总要选择不同波长的光波进行测定，即一个为激发光——物质所吸收的光；另一个为物质吸收后发出的光称为发射光或荧光。 对同一物质而言，在稀溶液（即A = abc < 0.05）中，荧光的强度F与该物质的浓度C 有以下关系： F = 2.3φabcI0 式中φ为荧光过程的量子效率，a为荧光分子的吸光系数，b为试样的吸收光程，I0为入射光的强度。当I0及b 不变时，上式变为： F= KC 其中，K为常数。 荧光分析法具有灵敏度高（一般超过分光光度法2~3个数量级）、取样少、方法快速等特点，现已成为食品、生物医药、天然产品、农业、环境保护、化工等领域中的重要分析方法之一。但由于许多物质本身不会发生荧光，故在使用范围上受到一定的限制。 乙酰水杨酸（ASA，即阿司匹林）水解能生成水杨酸（SA），而在乙酰水杨酸中，或多或少都存在着水杨酸。由于两者都有苯环，也有一定的荧光效率，因而在以三氯甲烷为溶剂的条件下，可用荧光法进行测定。从乙酰水杨酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱中可以发现：乙酰水杨酸和水杨酸的激发波长和发射波长均不同，利用此性质，可在各自的激发波长和发射波长下分别测定。 三、仪器与试剂 1、仪器 F-3501型荧光分光光度计、电子天平、离心机、真空泵、石英比色皿、移液管、棕色容量瓶、比色管、烧杯、砂芯抽滤装置、量筒、洗耳球、洗瓶等。

实验40 微波消解-原子荧光光谱法分析测定电池中汞

原子荧光分析法测定电池中的汞 实验目的 (1).了解原子荧光光谱法测定汞的基本原理和实验方法 (2).掌握原子荧光光度计的基本构造和操作 实验原理 在酸性介质中,用强还原剂硼氢化纳将试样中的汞离子还原为汞原子,其反应方程式为Hg(NO3)2+3NaBH4+HNO3+6H2O → Hg+3HBO2+3NaNO3+11H2 由于汞的挥发性,用氩气将汞蒸气带入原子化器进行测定. 汞空心阴极灯发射出特征光束,照射在汞蒸气上,使汞原子激发而发射荧光.在合理条件下,荧光强度与汞原子浓度呈线性关系. 仪器试剂 仪器 AF2-2202a行双道原子荧光光度计（北京）25mL比色管 试剂 (1).汞标准储备液（1.0mg/mL) (2).中间液（含Hg2+10μg/mL):吸取0.50mL储备液于50mL容量瓶中，用５％HNO3稀释至刻度，摇匀． (3).使用液(含Hg2+ 0.01 μg/mL):吸取中间液0.25mL 于25容量瓶中，用5%HNO3稀释至刻度，摇匀．然后吸取此溶液2.5 mL于２５mL容量瓶中，用５％HNO3稀释至刻度，摇匀．(４).１％NaBH4 (５). ５％HNO3 仪器工作条件 AF2-2202a行双道原子荧光光度计仪器测量参数

仪器条件 元素光电倍增 管负高压 /V 原子化器 温度/℃ 原子化器 高度/mm 灯电流/mA 载气流量 /ml.min-1 屏蔽气流 量ml.min-1 Hg 300 200 8 30 400 1000 测量条件 读数时间/s 10 标准校正点 1 延迟时间/s 0.5 标准频率 0 注入量/mL 0.5 测量方式 Std.Cure 重复次数 1 读数方式 Peak area 空白判别值 10 分析液单位 mg.L-1 (μg.mL-1) 断流程序 步骤时间/s 泵转速/rpm 读数 1 6 0 No 2 10 100 No 3 6 0 No 4 16 130 Yes 实验步骤 (1).分析校准曲线制作：分别吸取1.0mL、 1.5mL、 2.0mL、 2.5mL汞标准使用液于４个２５mL的比色管中,用５％HNO3稀释至刻度，摇匀．按前表中的参数进行测量，以荧光强度对浓度作图制作分析校准曲线． (２).样品测定：在与分析校准曲线相同条件下分别测定试剂空白和样品的荧光强度．

硼的测定姜黄素分光光度法

HZHJSZ00155 水质硼的测定姜黄素分光光度法 HZ-HJ-SZ-0155 水质姜黄素分光光度法 1 范围 本方法规定了测定水中硼的姜黄素分光光度法 地下水和城市污水中硼的测定 用20mm比色皿时测定上限浓度为1.0 mg/L 当钙和镁浓度(以CaCO3计)超过100mg/L时的乙醇中生成沉淀产生干扰 水样中即使有600mg/L的CaCO3也不干扰测定 本法可用于600mg/L以上硬度水中硼的测定 与姜黄素共同蒸发该络合物可溶于乙醇或异丙醇中其颜色深度与硼的含量成正比 ９５分析纯 密度为1.18g/mL 3.3 草酸(H2C2O4) 3.4 姜黄素-草酸溶液 称取0.040g粉末状姜黄素和5.0g草酸(3的乙醇中(3.1) 仔细观察可用滤纸过滤于100mL容量瓶中乙醇稀释至刻度也可贮存在4μ?×?3¤2?3?1y1周 溶解于去离子水中硼酸应保存于密封的瓶中配制时直接取用 用水稀释至刻度 聚乙烯或其他无硼材料 带20mm比色皿 4.3 离心机 100~150mL2??ò?????T?e2?á??ù?éD?×′?°o??è?ùó|ò???±í??ó??êó|1a?óá?o? ?ü±?à?2? 清洁地面水或地下水可直接取1.00mL水样测定 若水样含硼量大于1.0mg/L 6 操作步骤 6.1 显色 吸取1.00mL水样于蒸发皿(4.4)中轻轻转动蒸发皿使其混合均匀水浴上蒸发至干取下蒸发皿用移液管准确加入25.00mL95用聚乙烯棒搅拌

合物完全溶解或用少量乙醇溶解后用乙醇稀释至刻度 6.2 测定 用20mm比色皿以去离子水为参比 6.3 空白试验 用与试料相同体积的去离于水代替试料　 ６．４ 校准曲线的绘制 向一系列与样品测定相同的蒸发皿(4.4)中０．４００．８０ 并分别加入0.800.40ê1èüòo×üá??a1.00mL 2Y?áèüòo(3.4)????D￡×??ú?? 注样品蒸发时蒸发皿底部一定要浸入水面下 蒸发皿取下后如不能及时测定可放置48个小时 用乙醇溶解后的样品否则由于乙醇的蒸发损失如不能及时测定至少可稳定6个小时 m c = v 式中ìg mL 8.1 重复性 实验室内相对标准偏差 3.3 8.2 再现性 实验室间相对标准偏差 5.3 8.3 准确性 回收率为91.8 1999 è￥3y??ó2?è?éè?2ù×÷2??è A1 仪器及试剂 A1.1 离子交换柱内径1.3cm A1.3 硝酸3mol/L ?ù?óè?10cm左右阳离子交换树脂 用100 mL 3mol/L硝酸 然后用去离子水仍以每分钟2mL流速冲洗柱子　 用后的离子交换柱按上述步骤处理以备下次再用 调整流速为每秒2滴左右通过阳离子交换树脂柱 用去离子水淋洗交换柱至流出液达到刻度

阿司匹林的检查

阿司匹林片剂的检测 一.阿司匹林体外含量测定 1.两步滴定法测定阿司匹林片的含量： 取阿司匹林片样品10片，精密称定，研磨细，精密称取片粉适量(约相当于阿司匹林0.3g)，放在锥形瓶中，加入中性乙醇20mL，振摇，使阿司匹林充分溶解，加 入3滴酚酞指示剂，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液呈粉红色。 在上述供试品溶液中，精密加入氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40mL，在水浴上边振摇边加热15min后，迅速放冷至室温，用硫酸迪斯尼工业（0.05mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验进行校正。每1mL的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4(阿司匹林)。 标示量%=（V0-V）*F*T*W平/（W*标示量）*100% V0为空白实验消耗的硫酸滴定液的体积（mL）；V为样品测定时消耗的硫酸滴定液的体积（mL）；F为硫酸滴定液的浓度校正因子；T为氢氧化钠滴定液的滴定度（mg/mL）；W为供试品片粉的取样量（g）；W平为供试品的平均片重（g）；标示量为片剂的规格（mg/片）。 2.仪器分析法 2.1 Hplc法测定阿司匹林片的含量 色谱条件：ODS Cl8 Hypersil(150 mm*4．6mm，5 um)色谱柱，以水一乙腈一磷酸(76：24：0.5)为流动相；检测波长为276 nm；流速1.3 mL/min；进样量20μL；理论板数不低于10 000。 溶液的制备：供试品制备精密量取样品适量置50 mL容量瓶中，加流动相适量，超声使其溶解，用流动相稀释至刻度（得到200μg/mL的溶液），备用。 对照品的制备：精密称取阿司匹林对照品100mg于50 mL容量瓶中，加流动相适量，超声使其溶解，用流动相稀释至刻度（得2 000μg/mL的溶液）+-，备用。空白溶液制备除阿司匹林外，精取处方量的辅料，配置空白样品溶液。按供试品制备方法制备对照品溶液。通过外标法计算样品浓度。 C=A*Co*D/Ao C为样品浓度（mg/mL）；A和Ao分别为样品和对照品溶液的峰面积；D为稀释倍数 （mL）。 2.2 紫外分光光度计法测量阿司匹林片的含量 2.2.1标准溶液系列和样品溶液的配制 分别取0.5g/ml乙酰水杨酸标准溶液0.00mL(空白溶液)，0.50mL，1.00mL，1.50mL，2.00mL和阿司匹林样品溶液 1.00mL置于25mL的容量瓶中，分别加入7%

原子荧光光谱仪操作步骤及原理分析2012

氢化物（蒸气）发生 -原子荧光 原子荧光的发展史 ●原子荧光谱法(AFS)是原子光谱法中的一个重要分支。从其发光机理看属于一种原子发 射光谱(AES)，而基态原子的受激过程又与原子吸收(AAS)相同。因此可以认为AFS是AES和AAS两项技术的综合和发展，它兼具AES和AAS的优点。 ●1859年Kirchhoof研究太阳光谱时就开始了原子荧光理论的研究，1902年Wood等首 先观测到了钠的原子荧光，到20世纪20年代，研究原子荧光的人日益增多，发现了许多元素的原子荧光。用锂火焰来激发锂原子的荧光由BOGROS作过介绍，1912年WOOD 年用汞弧灯辐照汞蒸气观测汞的原子荧光。Nichols和Howes用火焰原子化器测到了钠、锂、锶、钡和钙的微弱原子荧光信号，Terenin研究了镉、铊、铅、铋、砷的原子荧光。 1934年Mitchll和Zemansky对早期原子荧光研究进行了概括性总结。1962年在第10次国际光谱学会议上，阿克玛德(Alkemade)介绍了原子荧光量子效率的测量方法，并予言这一方法可能用于元素分析。1964年威博尼尔明确提出火焰原子荧光光谱法可以作为一种化学分析方法，并且导出了原子荧光的基本方程式，进行了汞、锌和镉的原子荧光分析。 ●美国佛罗里达州立大学Winefodner教授研究组和英国伦敦帝国学院West教授研究 小组致力于原子荧光光谱理论和实验研究，完成了许多重要工作。 ● 20世纪70年代，我国一批专家学者致力于原子荧光的理论和应用研究。西北大学杜 文虎、上海冶金研究所、西北有色地质研究院郭小等均作出了贡献。尤其郭小伟致力于氢化物发生(HG)与原子荧光(AFS)的联用技术研究，取得了杰出成就，成为我国原子荧光商品仪器的奠基人，为原子荧光光谱法首先在我国的普及和推广打下了基础。 幻灯片3 国外AFS仪器发展史 ＊1971年Larkins用空心阴极灯作光源，火焰原子化器，采用泸光片分光，光电倍增管检测。测定了A u、B i、Co、H g、M g、N i 等20多种元素； ＊1976年Technicon公司推出了世界上第一台原子荧光光谱仪AFS-6。该仪器采用空心阴极灯作光源，同时测定6个元素，短脉冲供电，计算机作控制和数据处理。由于仪器造价高，灯寿命短，且多数被测元素的灵敏度不如AAS和ICP-AES，该仪器未能成批投产，被称之为短命的AFS-6。 ＊20世纪80年代初，美国Baird公司推出了AFS-2000型ICP-AFS仪器。该仪器采用脉冲空心阴极灯作光源，电感耦合等离子体(ICP)作原子化器，光电倍增管检测，12道同时测量，计算机控制和数据处理。该产品由于没有突出的特点，多道同时测定的折衷条件根本无法满足，性能/价格比差，在激烈的市场竞争中遭到无情的淘汰。 ＊20世纪90年代，英国PSA公司开始生产HG-AFS。

原子荧光光谱法测定奶粉中的硒含量-东西分析

原子荧光光谱法测定奶粉中的硒含量 一、方法提要 硒是人体健康的必需元素,具有重要的生理功能,现代医学已经证明:硒对抗病菌,保肝益肝等起了重要作用,每日补充200微克硒对健康人是安全和有效的,但人体摄入过多的硒对健康也有很大的危害，目前原子荧光光谱法为测Se的通用方法。 本文根据国标GB/T5009.93-2003 《食品中硒的测定第一法氢化物原子荧光光谱法》，并结合本公司仪器使用说明书测定了奶粉中Se的含量。 本方法采用湿消解的方法进行样品前处理后，在6 mol/L盐酸（HCl）介质中，将试样中的六价硒还原成四价硒，用硼氢化钾（KBH4）作还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢（SeH2，）由载气（氩气）带入原子化器中进行原子化，在特制硒空心阴极灯的发射灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比，与标准系列比较定量。 二、试剂及标准溶液配制 2.1 试剂 盐酸（HCl）：优级纯； 硝酸（HNO3）：优级纯； 高氯酸（HClO4）：优级纯； 硼氢化钾（KBH4）：分析纯； 氢氧化钾（KOH）：优级纯； 高纯氩气（99.99 %）； Se单元素标准溶液（国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院） 2.2 溶液配制 2.2.1 硝酸-高氯酸混合酸配制：取16mL硝酸与4 mL高氯酸混合，得到硝酸-高氯酸（4+1）混合酸。 2.2.2 还原剂(硼氢化钾+氢氧化钾) 配制：称取6.0 g硼氢化钾，溶于含有0.5%氢氧化钾的水溶液500 mL中，此溶液现用现配。 2.2.3 载液（盐酸）配制：取250mL浓盐酸稀释至500 mL，配成浓度为50%的盐酸溶液。 2.3 标准溶液配制 2.3.1 硒标准使用溶液配制：吸取50 μL浓度为1000 μg·mL-1的Se单元素标准溶液置于50 mL 容量瓶中，用载液定容至刻度，即为硒标准使用溶液，浓度为1000 ng·mL-1，现用现配。 2.3.2 硒标准系列配制：取5支50 mL容量瓶，分别加入1000 ng·mL-1硒标准使用液0、50、150、250、350 μL，用载液定容到刻度，各相当于硒浓度为0、1、3、5、7 ng·mL-1。

姜黄素的提取技术及含量测定

姜黄素的提取技术及含量测定 宋雪梅 0901 化学制药 [摘要] 姜黄素是人们生命活动中必不可少的物质之一，它既可以预防和治疗人们的某些疾病，又可以作物一种生物着色剂。目前，姜黄素的研究方法多种多样，本文主要介绍紫外分光光度法、微波提取法、酶提取法、超临界CO2萃取技术等方法。在生产工艺过程中，对姜黄素进行提取必定要考虑到它的含量测定问题，它可以帮助我们选择更加合理的生产方案。 [关键词] 姜黄素提取技术含量测定应用 The extraction technology and curcumin content determination Song XueMei 0901 chemical medicines Abstract : Curcumin is one of the necessary material in people life activities, it can prevent and treat people's certain diseases, and can crop a biological coloring. At present, the research methods of curc- umin variety, this paper mainly introduces the ultraviolet spectrophotometry and microwave extraction, enzymatic extraction, supercritical CO2 extraction technology In the production process of extraction curcumin, must be considered in the determination to it, it can help us choose more reasona- ble produ- ction plan. Key words : curcumin Extraction technology Content determination application 姜黄素是从姜科植物的根茎中提取出来的一种物质，尤以姜黄中含量最多，约占姜黄总量的3%～6%，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。各项

荧光光谱法研究亚甲基蓝与蛋白质的结合反应

荧光光谱法在生物分析中的应用 ---亚甲基蓝与蛋白质的结合反应 刘超-生物化工-2009010236 荧光光谱法是研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要手段。荧光测试中的发射峰特征、荧光偏振、能量转移及荧光寿命等指标可以对蛋白质分子中荧光生色基团的结构及其所处的微环境提供有用的信息。在生物体中，蛋白质是必不可少的生命物质，有关蛋白质的各类研究，是目前生命科学、化学和临床医学中共同关注和感兴趣的课题。亚甲基蓝是一种具有平面结构（结构式见图1）的碱性生物染色剂，在医学临床诊断及化学分析中已有较长的应用历史，且可用于亚硝酸盐、磺氨类、氰化物及一氧化碳等中毒的解毒药。近年来又发现MB对DNA具有插入作用，MB可被用于抗癌药物的体外筛选；此外MB的光化学性质及作用机理与血卟啉很相似，被认为可能成为一种新型光敏剂而用于癌症的光化学治疗。新近的研究还表明MB在溶液中分子的聚集状态与溶剂及介质有关。本文应用荧光光谱法研究了人体生理pH值条件下，亚甲基蓝与牛血清白蛋白间的相互作用，测定了结合常数、结合位点数及结合距离，从而由分子水平的角度认识蛋白质分子与小分子之间相互作用的机理，为生命科学研究提供有用的信息和数据。 实验方法：配制0.05mol/L的Tris-HCl并含0.10mol/LNaCl的缓冲溶液 (pH=7.0),恒定体系pH值和离子强度，以此缓冲溶液分别配制MB溶液和BSA贮备液。测定方法：在10ml的容量瓶中，依此加入一定量的BSA,MB溶液，以缓冲溶液稀释至刻度，混匀后室温下测定荧光光谱、同步荧光光谱及与蛋白质分子比为1:1的MB吸收光谱，测定中固定BSA的浓度而改变MB浓度。 结果与讨论:MB对BSA荧光猝灭的机理外加分子与荧光体分子相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭，并有动态和静态猝灭之分。通过观察MB对BSA 猝灭曲线（图2）可知，对于MB 从低到高整个浓度范围内曲线都呈现出好的线性，表明室温下MB 对BSA 的荧光猝灭为静态过程。为进一步证实此猝灭特征，把此过程按动态猝灭处理，即式(1) 为双分子猝灭过程速率常数，为动态猝灭常称为Stern-Volmer猝灭方程，K Q 数，为猝灭剂不存在时荧光体分子平均寿命，猝灭剂的浓度。而 ，由于生物大分子荧光平均寿命约为，故可由猝灭曲线的斜率求得猝灭常数。由图2实验数据，按式（1）可以求得MB对BSA 猝灭的，而各类猝灭剂对生物大分子的最大扩散碰撞猝灭常数为，显然MB对BSA荧光的猝灭过程速率常数远大于扩散控制的，可见其猝灭过程确

阿司匹林中乙酰水杨酸含量的测定[详实参考]

荧光光度法测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量 一、实验目的 1.掌握用荧光法测定药物中的乙酰水杨酸含量的方法。 2.掌握970CRT 型荧光分光光度计的操作方法。 3.加深对荧光光度法原理的理解。 二、实验原理 1.荧光光度法原理 （1）常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度I F 与物质的浓度c 成线性关系： 即Kc I F （这是荧光光谱法定量分析的理论依据）。 （2）荧光光谱 激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的 关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。 发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。 固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进 荧 光强度 波长

行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。 2. 荧光光度法测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量 通常称为ASA 的乙酰水杨酸（阿司匹林）水解即生成水杨酸（SA ）（如下式）。而在阿司匹林中或多或少存在一些水杨酸，用醋酸—氯仿作为溶剂，然后用荧光法可以分别测定其含量，少许醋酸还可以增加二者的荧光强度（本次实验只测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量）。在1%的乙酸—氯仿中乙酰水杨酸的激发光谱和荧光光谱如图所示：（为了消除药片之间的差异，可以取几片一起研磨，然后取部分由代表性的样品进行分析） 三、仪器与试剂： 仪器：970CRT 型荧光分光光度计及附件；容量瓶：1000mL 2只，100 mL 2只，50mL 8只；l0mL 吸管2支；铁架台；研钵；称量瓶；玻璃棒；烧杯；定量滤纸；电子天平。 试剂：冰醋酸；氯仿；乙酰水杨酸；阿司匹林；丙酮。 四、实验步骤： 1. 接通电源，打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器，预热30min 左右。 2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数。 3.配置溶液： （1）配置1%的醋酸—氯仿溶剂：在1000ml 容量瓶中，将冰醋酸与氯仿以1:99的比例配制。 （2）配置储备液：准确称取0.4000g 乙酰水杨酸溶于1%的醋酸—氯仿溶剂中制成溶液，在1000ml 的容量瓶中定容备用。（400ug|ml ） （3）配置4.00 ug|ml 的ASA 溶液：在100 ml 容量瓶中将（2）中的标准液稀释100倍.(扫光谱) (CH 3CO)2O H 2O (ASA) (SA)

原子荧光光谱法测定茶叶中的se含量

原子荧光光谱法测定茶叶中的se 含量 1 实验目的 ①握茶叶前处理的方法 ②进一步掌握原子荧光光度计的使用方法 2. 实验原理 3 实验仪器及试剂 AF-610A 原子荧光光度计一台Se 空芯阴极灯一个烘箱 浓HNO3 高氯酸20%HCl 铁氰化钾2%KBH4 （混酸为浓盐酸与高氯酸体积比为4:1） 100ml 容量瓶4 个烧杯若干表面皿一个25ml 比色管9 个（0-6 号标准系列，两个样品，测平行） 4 样品配置过程: 4.1 样品处理 前处理：取一定的茶叶，在60 C烘箱内烘干，用研钵研磨研碎，称取约 0.5 克的粉末，两份，分别放入两个小烧杯中，分别加入8ml 浓硝酸和2ml 高氯酸，另外设置一个空白样，即不加茶叶，只加8ml 浓硝酸和2ml 高氯酸，放置，过夜。 样品的消解：将放置过夜的三个小烧杯放在加热板上加热消解，直到冒出高氯酸的白烟，在加入少量硝酸和双氧水将残渣溶解，在加热沸腾，直到没有气泡。将三个小烧杯的溶液进行过滤，除掉不溶的残渣，将过滤后的溶液分别转移至25ml 容量瓶中标号为样品1 、样品2 和样品空白。 移取10ml 的样品1 放入25ml 的比色管中，定容，移取两份，作为对照。样品2 也是移取两份10ml 于两个25ml 的比色管中，样品空白移取一份。 4.2 标准样系列已经配置好。

4. 3测定标准系列按从小到大的浓度顺序进行测定，然后记录荧光信号值, 在测定样品空白，记录信号值，在分别测定样品，记录荧光信号。 5数据处理及分析. 实验数据如下表 样品信号记录表

结论：实验所用茶叶硒元素含量很低为ng 级，因此可忽略不计，故认为该茶叶中不含硒元素。 总结：此次实验过程我们小组设计的标准系列有点大，应该缩小系列间的浓度梯度，这样可能得出的结果更准确。但是不可否认，这次我们的标准系列做得还是比较好的，这点可以从曲线上看出来。

荧光分光光度法在药物分析中的应用

荧光分光光度法在药物分析中的应用 【摘要】荧光分光光度法属于药物分析法中光化学分析法其中的可见分光光度法，它是利用物质所产生的荧光特性来定性或者定量分析物质样品的分析方法，其具有选择高、灵敏度高、检测限低以及信息量丰富等优点。由于许多有机药物（如芳香化合物等）都具有特征性的荧光吸收光谱，因此荧光分光光度法在药物分析中得到了极广泛的应用。 【关键词】荧光分光光度法荧光分光光度计药物分析定量分析 一、荧光分光光度法的原理及荧光分光光度计简介 荧光是指物质分子接受紫外-可见光光子的能量被激发之后，从激发态返回基态时所发 射出来的光，任何荧光物质分子均具有两个特征光谱，分别是激发光谱和发射光谱，根据斯托克斯位移可知，荧光发射波长永远大于激发光波长。荧光强弱用荧光效率来表示，即发射荧光的光子数与基态吸收激发光的光子数之比。 由上述可知，物质能发射荧光所必须具备的条件是：1、有较强的紫外-可见吸收；2、 有一定的荧光效率。所以，物质能否发射荧光以及荧光强度与以下几个方面有关：1、有π-π跃迁的长共轭结构（较强的紫外-可见吸收）；2、具有刚性平面结构（具有较高的荧光效率）；3、具有给电子取代基（助色团，增加紫外吸收，提高荧光效率）。而大多数的化学合成药物均具有以上结构，因此具有发射荧光特性，所以可以利用荧光分析法进行药物分析。 目前广泛使用的荧光分光光度计是由激发光源（常采用氙灯，发射谱线强度较大且连续），激发单色器（置于样品池前，与光源成90°），发射单色器（置于样品池后），样品池和检 测系统组成，使用前需进行包括灵敏度、波长、激发光谱和发射光谱的校正。 二、利用荧光分光光度法进行药物分析实例 1.应用定量分析法测定样品含量 1.1工作曲线法 以系列中某一对照品溶液为基准以荧光强度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，将空白溶液荧光强度读数调为0，将对照品溶液荧 光强度读数调至100%或50%，之后测定待测样品的荧光强度。在测定中药巴戟 天中蒽醌含量时，以，1, 8-二羟基蒽醌为对照品（丙酮做溶剂，在最大激发波 长425nm，最大发射波长513nm处测定）[1]。 1.2比例法 当标准工作曲线通过原点时，可以任选两个浓度用比例法测定，例如《中国药典》中对利血平含量的测定就采用了比例法进行荧光定量分析 1.3联立方程式 用于分析多组分的混合物。 2.应用其他荧光分析技术提高灵敏度和选择性 2.1激光诱导荧光分析 采用单色性极好、强度更大的激光作为光源，灵敏度提高，可进行单分子检测。 2.2同步荧光分析 同步荧光光谱法中恒定波长法使用较为广泛，指的是在扫描过程中保持发射波长和激发波长固定间距的分析方法，具有灵敏度高、干扰少等优点，用来 测定多环芳烃[2]并可以同时对氨基酸以及蛋白质等进行测定。

硼的测定姜黄素光度法

HZHJSZ00145 水质硼的测定　姜黄素光度法 HZ-HJ-SZ-0145 水质姜黄素光度法 1 范围 本方法的最低检出浓度为0.02mg/L适用于饮用水生活污水和废水中硼的测定 产生干扰可取适量水样 在水浴上蒸发至干再用一定量的0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣吸取1.00mL溶液进行测定 分析结果可能偏高经试验ＣｕＫＭｇＰＯ43-等对1mg的硼未观察到干扰现象 Curcuminò?íaDíoí??′?Dí′??úμ??üèüóú?×′??ú?áD??é?ê?D òò·′ó|ì??t2?í??éD?3éá???óDé???o???Rosocyanin Rubrocurmin前者是两个姜黄素分子和一个硼原子络合而成其摩尔吸光系数 1.8 红色姜黄素则为一个姜黄素分子灵敏度较低( 4.0最大吸收峰在540nm?úêò????1~2h内稳定 准确称取1.4111g硼酸(H3BO3)溶于去离子水中 此溶液每毫升含1.00mg的HBO2 óéé?ê?±ê×??ü±?èüòo??êí200倍移入聚乙烯瓶中贮存 称取0.040g姜黄素(C21Hg20O5)和5.0g革酸(H2C204ó?95%乙醇分次溶于100mL容量瓶中以95%乙醇定容姜黄素容易分解 3.4 95%乙醇 10mm比色皿 温度为55 50mL??′óD??a?üá?èY?÷ ?üá?°??ò?ú2￡᧰?íaì×ò???òò??1ü??3¤?ìoí??·￠?ó?àêêó| è?1.00mL?òó|?èDD??êí?é?üè????àμ????ù?óéùDí±￥oí?a???ˉ??èüòo ?ú????é???·￠?á?é?üè?1.00mL进行测定可过滤之 吸取1.00mL水样于50mL聚乙烯杯内轻轻的旋动聚乙烯杯使之混合３继续在水浴上保留15min ó?95%乙醇将杯内固体物溶解将溶液移入25mL容量瓶内 1

实验阿司匹林肠溶片的鉴别

实验三阿司匹林肠溶片的鉴别、检查与含量测定 一、目的要求 1．复习并掌握比色法检查阿司匹林片剂中游离水杨酸的实验原理。 2．复习并掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂含量的实验原理。 3．掌握水杨酸类药物的鉴别、检查与含量测定的操作方法。 二、基本原理 （一）鉴别（三氯化铁反应） 阿司匹林为水杨酸酯类药物，加热水解后产生水杨酸，水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下（适宜pH为4.0~6.0），会与三氯化铁试液反应，生成紫堇色的铁配位化合物。 （二）检查——游离水杨酸 阿司匹林为水杨酸酯，不能直接与高铁盐作用，而其杂质游离水杨酸含酚羟基，可与高铁盐反应显紫堇色，因此，将适量阿司匹林供试品溶液与一定量水杨酸对照品溶液生成的色泽对比，即可控制阿司匹林中游离水杨酸的含量。（三）含量测定——两步滴定法 片剂中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，制剂工艺过程中又可能有水解产物（水杨酸、醋酸）产生，因此不能采用直接滴定法，而采用先中和供试品共存的酸，再将阿司匹林在碱性条件下水解后测定的两步滴定法。 第一步为中和： COOH O O CH3+NaOH COONa O O CH3 +H2O 第二步为水解与测定 +NaOH COONa OH +CH3COONa COONa O O CH3 2NaOH + H2SO4 →Na2SO4 + 2H2O （剩余）

三、仪器及试药 电热恒温干燥箱，万分之一分析天平，托盘天平(精度0．01g)，称量瓶，称量纸，药匙，量筒(10ml、50m1、100m1)，电炉，研钵，烧杯(25m1)，胶头滴管，容量瓶(100 m1)，玻璃漏斗，滤纸，纳氏比色管(50m1)，锥形瓶(250m1)，酸滴定管，碱式滴定管，水浴锅，温度计，阿司匹林肠溶片，纯化水，乙醇(分析纯)，水杨酸(分析纯)，酒石酸(分析纯)，中性乙醇(分析纯)，三氯化铁(分析纯)，盐酸(分析纯)，硫酸铁铵(分析纯)，酚酞(分析纯)，氢氧化钠(分析纯)，邻苯二甲酸氢钾(基准试剂)，硫酸(分析纯)，无水碳酸钠(基准试剂)，甲基红(分析纯)，溴甲酚绿(分析纯) 四、实验内容与方法 （一）鉴别（三氯化铁反应） 取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。 （二）检查——游离水杨酸 取本品5片，研细，用乙醇30ml分次研磨，并移入100ml容量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取滤液6ml，置50ml纳氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀，30秒内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5ml，加乙醇3ml，0.05％酒石酸溶液1ml，用水稀释至50ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深。 （三）含量测定——两步滴定法 取本品30片，研细，用中性乙醇70ml分数次研磨，并移入100ml容量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于100ml容量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液10ml(约相当于阿司匹林0．3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇20mL，振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)40mL。置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05 mol／L)滴定，并将滴定结果用空白实验校正。每l ml氢氧化钠滴定液(0.1 mol／L)相当于18.02mg的C9H804。