高效液相色谱在四溴双酚中的应用

高效液相色谱—串联质谱分析方法在四溴双酚A中的应用四溴双酚 A(TBBPA tetrabromobisphenol A)化学名为4,4'-(1-甲基亚乙基)双( 2,6-二溴)苯酚, 现阶段最主要的反应型阻燃剂,其总用量约占全球阻燃剂用量的1/3,年消耗量达120000T。它广泛应用于环氧树脂、聚酯树脂、酚醛树脂及 ABS等树脂中,可使制品具有良好的阻燃性和自熄性。尽管它是反应型阻燃剂,但是在产品中仍然有大量的非聚合的TBBP- A存在,并且有可能释放,污染环境。由于TBBP-A与甲状腺荷尔蒙(thyroxin,T4)的结构相似,所以现阶段被认为是一种潜在的内分泌干扰物。有研究表明,TBBP-A能够与人类的转甲状腺素蛋白

(transthyretin)(前白蛋白 )紧密结合,是一种免疫毒素。

通过消费品的生产、应用等途径, TBBPA可释放到土壤、水体、沉积物和大气等环境中。研究表明, TBBPA是一种潜在的环境内分泌干扰物, 具有潜在的持久性、细胞毒性、免疫毒性、甲状腺素干扰性以及雌激素干扰性, 尤其对水生生物产生严重毒害作用。目前世界范围内对 T BBPA 及其衍生物或代谢产物在水生生态系统中的迁移转化规律及环境暴露水平的研究还处于起步阶段。由于TBBP- A具有低水溶性( 0. 72 g /L)和较高辛醇- 水分配系数(lgKow = 4 .5), 一旦排放进入水体,它就会与某些有机体结合或沉积于水体底泥中。目前,不同国家的土壤和底泥中TBBP-A含量已有报道, Sain-tLouis等在加拿大魁北克省圣劳伦斯河口处底泥中检测出TBBP-A,浓度为300ng/g(干重)；Oberg等报道了瑞典市政污水处理厂底泥中TBBP-A的浓度达 220ng/g(湿重)；在瑞典一家使用TBBP-A的塑料工厂附近河流的沉积物样品中均检出TBBP-A,其浓度分别是50ug/kg和430ug/kg。在人体血浆和室内空气中均检测出TBBP-A。

在我国TBBPA主要用于纺织、家电以及工业产品中来降其燃烧性能。随着我国工业的发展,含 TBBPA产品的使用越来越广泛,而 TBBPA在含有其产品的生产、使用和废弃过程中均可能进入环境。目前已有研究表明,BBPA对藻类、软体动物、甲壳动物和鱼体有明显的毒性作用。是一种潜在的具有持久性的有机污染物( POPs), 它能在环境和生物体内累积,对环境和生物体产生严重影响, 其害已经引起该领域科研工作者及学者的普遍关注。

现阶段检验环境样品中痕量TBBPA 的方法基本有气相色谱-质谱联用 ( GC /MS )、液相色谱- 电喷雾离子阱质谱法、微波辅助萃取-衍生气相色谱-电子捕获检测器法( GC-ECD )、高效液相色谱 ( HPLC )、液相色谱- 质谱串联、高效液相色谱- 质谱串联(HPLC- MS /MS)等。但是, 测定 TBBPA的方法由于环境中不可能只有一种污染物存在, 而

是几种污染物同时存在, 测定TBBPA时干扰物比较多用GC测定需要繁琐的预处理和对样品进行衍生化以及对温度的严格控制, 加大了测定的难度和条件要求。为此，本研究在上述前人工作的基础上建立了高效液相色谱- 串联质谱 ( HPLC- MS /MS)测定环境水体中TBBPA的分析方法,对样品前处理方法和质谱条件进行优化,使样品不需要衍生,而且检出限低, 随着对HPLC 方法不断摸索,使得TBBPA 的测定日益变得简单易行。本方法在综合已有方法基础上进行了优化改进, 建立了HPLC分析湖泊环境样品中TBBPA的方法,并将此方法运用到环渤海地区水体中TBBPA的检测。为我国环境水体中 TBBPA的含量检测提供了方法和依据。

1、材料与方法

1.1仪器与试剂

带自动进样器的 Finnigan Surveyor液相色谱系统( Thermo Electr on ,USA )和Finnigan TSQ Quantum Discovery MAX 三重四极杆质谱分析仪。W ater Symme try -C18 ( 150 mm* 2.1 mm . id. , 3.5u m,USA )。氮气吹干仪 (北京康林 )。RE-52C 旋转蒸发仪(巩义市予华仪器公司)。甲醇(HPLC级)、氨水 (HPLC 级)均购自美国Tedia；水(Millipore系统产生的超纯水) ;二氯甲烷(HPLC级) ; TBBPA (纯度 97 %, Sigma公司 ), 用甲醇溶解并配制成 0 . 1mg /mL的标准储备液。

1.2样品的前处理

以 CH2C l 2为萃取溶剂进行萃取。具体步骤如下:待测水样经 0.45um滤膜过滤, 准

确量取 800mL置于1L的分液漏斗中,加入50mL的CH

2Cl

2

,充分振荡, 静置分层,取CH

2

Cl

2

层于100mL旋转蒸馏瓶中,再用 30mL的 CH2C l 2 重复上述步骤,合并萃取液,经过无水

硫酸钠除水, 旋转蒸发浓缩至近干。1mL甲醇定容,并过0.22um的水相和有机相滤膜到进样瓶中, 4℃下保存待测。

1.3 液相色谱和质谱条件

1.3.1 色谱条件

液相色谱柱: Waters Symmetry-C18 ( 150 mm*2.1mm . id. , 3.5u m, USA )。流动相甲醇、 0.1 %氨水;采用梯度洗脱,梯度洗脱条件如表 1所示;柱温:

25℃ ; 进样量: 10uL。

1.3.2 质谱条件

采用电喷雾电离 (ESI)负离子模式进行检测,选择反应监测模式( SRM )扫描。喷射电

压3100 V,鞘气压力 25 A r b,辅助气压力 12 A rb ,离子传输管温

度 320℃ ,源内碰撞诱导解离电压 (CID)5V。TBB-PA的SRM质谱条件如表2所示。

2.2质谱条件的优化

仪器在电喷雾电离(ESI)负离子检测模式下对母离子进行全扫描, 确定其质子化分子离子 [M-H]-, 通过优化离子传输管电压、喷射电压、鞘气压力、辅助气压力使母离子丰度及稳定性最佳,再以确定的分子离子作为母离子对其子离子进行全扫描,得到碎片信息。为得到更好的响应信号,在流动相中添加氨水,浓度分别是: 0.01%、0.05 %、0.1 %、0.2 % 和 1 % ,经比较氨水浓度在 0.1 %时离子化效应最好。

2.3 线性范围和检出限

将储备液稀释成5个不同浓度的标准使用液200、 100、 50、 10和 1ug/L)。上机检测并绘制标准曲线,标准曲线为 y= - 48665.1+ 10523.2x, 相关系数为 0.9968。以信噪比为3来估算仪器检出限,结合回收率计算方法检出限, TBBPA的仪器检出限为0.005ng 方法检出限为1.2ng/L。

2. 4方法的回收率和精密度

采用标准加入法向800mL的水样中加入低、中、高3种加标量的TBBPA混合标准液,按1.2方法进行萃取,然后采用液质联用法进行测定,每个加标量平行 3次。由表3可知,对于3种不同的加标量, TBBPA 具有良好的回收率和精密度, 其平均回收率和相对标准偏

差见表3。

2. 5 实际样品的分析

在环渤海地区选择了20个采样点,采集水样对其进行了检测。采样点见图2 ,每个采样点采集4L水样,装入带有聚四氟乙烯盖的棕色玻璃瓶中,用6mol/L的HCl调整pH为2-3。将样品保存在装有冰块的保温箱中运回实验室,及时分析。

经分析,各采样点水中TBBPA的含量如表4所示。

应用本方法对环渤海地区20个样品的TBBPA进行了检测。TBBPA普遍存在于各采样点中, 其中人造河 TBBPA的含量高达79.15ng/L,经调查在人造河上下游造纸企业多达25家,造纸厂中添加TBBPA来降低火灾,这些企业排放的污水中含一定量的TBBPA。渌汶河(龙口)TBBPA的含量高达96.95ng/L,其河流流域内有小造纸厂、果脯厂、多家小粉丝生产企业和铸造业等,长期污水的排放使得这里TBBPA的含量比其他地方高。在检测的 20个水样中潍坊弥河的TBBPA的含

量最高为672.64ng/L。其河流上下游有多家工业厂,包括印刷厂、造纸厂和化工厂等, TBBPA作为阻燃剂在印刷厂、化工厂中应用比较多,这些工厂排出的废水中TBBPA的含量高,导致潍坊弥河中TBB-PA的含量高。

在20个采样点处, 除了人造河、渌汶河(龙口)、潍坊弥河和五里河排污口以外, 其余16个地区的水样中 TBBPA的含量在 35-50 ng/L。这些采样点中TBBPA的主要来源是生活污水的排放和一些小型企业废水的排放。与人造河、潍坊弥河、渌汶河(龙口)和五里河排污口中TBBPA的含量相比较,这些地区水体中 TBBPA的污染相对较轻。本研究建立了TBBPA的HPLC-MS /MS检测方法,通过对仪器色谱条件和质谱条件各项参数的优化,使得方法的灵敏度、精确度有所提高, 并且分析过程耗时短、准确度高。应用本方法检测环渤海地区20个采样点的水样,结果均检测出 TBBPA,在所检测的 20个水样中,TBBPA含量最低的是38.97

ng/L，本方法的检出限是1.2 ng/L ,足以满足环境水体中TBBPA的检测,说明本方法完全

适于环境水体中TBBPA的分析检测。

高效液相色谱原理及应用

高效液相色谱原理及特点 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 一、高效液相色谱仪有哪些特点？ 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350 ×105Pa。 2．高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。3．高效：近年来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4．高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。5．适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离 能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而技术平台〉〉〉 高效液相色谱仪原理 不需要汽化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70%～80%。 二、高效液相色谱法可分为哪几种主要类型？各自的分离原理是什么？高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换 液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型：

高效液相色谱的发展及其应用

高效液相色谱的发展及其应用 摘要：了解高效液相色谱[1]的发展历史，知道高效液相色谱的组成结构、操作 原理以及方法等等。掌握它的分类方法，通过比较得出高效液相色谱分析方法的优点与缺点。明确高效液相色谱的应用，最终分析结果。 关键词：高效液相色谱；发展历史；应用 高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 1、高效液相色谱的发展历史 1.1高效液相色谱的历史 高效液相色谱作为色谱分析法的一个分支，是在二十世纪60年代末期，在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上，发展起来的新型分离分析技术。1960年中后期，气相色谱理论和实践的发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了高效液相色谱。 1.2高效液相色谱与其它色谱的比较[2] 1.2.1与经典液相色谱的比较 经典液相色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，柱效低，分析时间冗长。 高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。 1.2.2与气相色谱法的比较 高效液相色谱法与气相色谱法有许多相似之处。气相色谱法具有选择性高、分离效率高、灵敏度高，分析速度快的特点，但它仅适于分析蒸气压低、沸点低的样品，而不适用于分析高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及生物活性物质，因而使其应用受到限制。在全部有机化合物中仅有20%的样品适用于气相色谱分析。高效液相色谱法却恰可弥补气相色谱法的不足之处，可对80%的有机化合物进行分离和分析。 2、高效液相色谱 2.1高效液相色谱的特点 2.1.1高效液相色谱的优点 1.分辨率高于其它色谱法，可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果； 2.速度快，十几分钟到几十分钟可完成； 3.重复性高、样品不被破坏、易回收； 4.高效相色谱柱可反复使用； 5.自动化操作，分析精确度高；

高效液相色谱法的应用

高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展 摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。 关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术 Abstract:Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete application and the prospect of the high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis application prospect. Keywords: high performance liquid chromatography，HPLC ,pharmaceutical analysis，hyphenated techniques 引言： 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。HPLC 在药物的分析中的应用主要是鉴别、有关物质的检查、有效成分及含量的测定[1]；本文对高效液相色谱法（HPLC）技术在药物分析中的应用进行概述并展望其应用前景。 1 在药物分析中的应用 1.1 在药物鉴别中的应用 在HPLC 法中，药物组分的保留时间与其结构和性质有着直接的关系，不同的药物由于结构和性质的差异在色谱图上的出峰顺序不同，是定性的重要参数，

高效液相色谱分析法在各领域的应用及发展前景

高效液相色谱分析法在各领域的应用及发展前景 摘要：高效液相色谱分析是一种高效、快速、准确的分离分析方法，在石油化工、生命科学、环境、医药及食品安全等领域有着广泛的应用。本文旨在简要介绍液相色谱分析法在不同领域的应用情况，并从使用频度、应用范围、检测效率、检测准确度及在本领域分析方法中的重要性等角度进行阐述。 关键词：高效液相色谱仪；石油化工；食品安全 中图分类号： O657.7+2 文献标识码：A 高效液相色谱在20世纪70年代获得迅猛的发展，是一种常规的分离技术色品分析仪的应用最广是在化学领域上，食品与环境的领域上也出现多方面的应用。其中，化合物的分析就包括高分子化合物，离子型化合物，热不稳定化合物以及生活性的化合物等都可以用不同的方式进行离子交换色谱和离子色谱，体积排除法，亲和色谱法等，进行离子分析。 一、高液相色谱分析仪发展现状 随着高效液相色谱分析仪的转换，高效液相色谱仪器成为国际分析化学界发展较快的学科，高效液相色谱是由液相系统组成，分别是检测器，色谱柱，记录仪等三个方面的部分组成，为了取得更好的效果，科研工作者需要提升准确度以及精确度和灵敏度显示科研工作的重要性。 经常采用薄层色谱法(TLC)和气相色谱法(OC)进行含量测定，而液相色谱法(LC)只是用于对组分标样的测定和分离的可能性研究。色谱法是一

种分类和混合的开发技术，是在1913年由俄国植物学家在实验中发现并且命名的技术，将植物的叶色素和石油醚，通过装有白色的碳酸钠颗粒的玻璃管，再用石油醚进行全面的冲洗，玻璃管的内壁出现不同颜色的色带，随着冲洗剂的不断转变，色带以不同的颜色进行冲洗，不同的色带以不同的速度向下移动并且分离，色谱法由此得名。 二、色谱分析仪的使用及工作原理 色谱柱通称为不锈钢柱，内装填充剂，常用的是硅胶作为填料，用于正相色谱，化学键固定相，根据色谱化学键的固定相，可以用来作为反相或者是反高的要求。输液系统要为 HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，同时还要提供精度好、准确度高的多元溶剂梯度。早在2003年国家标准中就已经规定了液相色谱法检测食品中糖精钠和安赛蜜的检测方法，在质检机构中已经将之作为一种常规检验项目的基本检测方法来进行操作。近几年随着色谱柱填充制备技术的高速发展，已经可以一次性分离糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、柠檬黄、日落黄、胭脂红。 （一）、高效液相色谱仪的工作原理 储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程高的要求。 储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相

高效液相色谱在生物制药中的应用

高效液相色谱在生物制药中的应用 高效液相色谱法是近35年发展起来的一项高效、快速的分离分析技术，是现代分离测试的重要手段[1]。高效液相色谱法已经被广泛用在各种领域，它是以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域发展最快、应用最广的现代分析技术之一。于此同时，高效液相色谱法成为环境污染物检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。鉴于其简便、快速、灵敏、准确的特点，目前，在医药、卫生、食品、环保等各个领域已得到广泛应用。随着色谱技术的不断发展，在世界许多科学领域中，色谱法已成为世界许多科学领域中普及的一种分离分析手段，色谱仪也呈多样化、高精化、自动化、联用技术化等方向发展。高效液相色谱仪具有柱效高、分析速度快、流动相和被测组分的体积流量小等特点，广泛应用于临床工作[2]。 1.高效液相色谱的介绍 高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。高效液相色谱法有以下五个特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱受到的阻力比较大，为了能够快速的通过柱子，必须对流动相加很高的高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是强极性、热稳定性差、高沸点、大分子化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：分析所需时间一般小于1小时，和传统经典液体色谱法相比速度快得多。高效液相色谱有5种类型： 1、吸附色谱（Adsorption Chromatography） 2、分配色谱（Partition Chromatography） 3、离子色谱（Ion Chromatography） 4、体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography）

高效液相色谱的应用与发展前景

高效液相色谱的应用呵发展前景 液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过 改进填料的粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快. 分离效率高和操作自动化,这种色谱技术被称为高效液相色谱法(HighperformanceliquidchromatographyHPLC) HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪结构。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。 对于高效液相色谱的发展前景应该是非常乐观的，现在的社会的发展节奏很快，各个领域对于分析检验的需求很多，而分析检验中，HPLC所占的比重是不言而喻的，已成化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。所以她的发展情景很乐观。理由有几点 1，随着科技的发展，技术的日臻完善，较之以前色谱分析的方法有了很大程度的提高，很多科学家在对于一些分析上的难点有了新的突破，这样一个 不断完善的技术在以后的社会发展中一定会扮演着一个重要的角色。 2，最近,一些先进的检测仪器成功的用在了高效液相色谱分析法上,使得高效液相色谱的应用更广泛,并充分利用高效快速.选择性好.灵敏度高等优 点,建立更加系统的成分分析方法.通过与质谱联用.梯度洗脱.柱切换技 术.配合先进的检测技术,以及与分子生物学.现代分子药理学相结合,必

高效液相色谱的日常使用和维护

高效液相色谱的日常使用和维护 高新科技与现代产业的迅猛发展，促进了以高效液相色谱（HPLC）为代表的复杂样品的分离分析和分离纯化仪器的飞速发展。HPLC以它定量分析结果准确、分析周期短、分析范围广、分析检测限低等优势，在食品添加剂、药物成分分析等多领域得到了广泛的应用。高效液相色谱仪是一种高端检测仪器，它精密快速，有效准确检测的同时就要求我们一定要严格正确使用仪器，定期科学有效地维护仪器，只有这样仪器才能长久持续有效使用。但是从目前实际使用情况看，与高效液相色谱仪的应用及产品技术升级的发展速度相比，其使用和维护则相对比较滞后，从而造成对仪器的滥用和对耗材不必要的浪费。主要原因是由于对于仪器使用操作者的培训侧重于仪器的初步使用，忽略了仪器的后续培训及维护操作学习；其实很多高效液相色谱都是国外进口仪器，英文版本软件对于大多数理工科毕业的仪器操作者也是一个障碍。笔者根据自己的工作经验，以岛津LC-20AT液相色谱仪为例，阐述液相色谱仪在使用时应注意的几个问题及日常使用后的仪器维护基本事项，并对仪器使用过程中容易遇到的问题进行分析，提出解决方法。 1、高效液相色谱仪的组成 高效液相色谱仪主要是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和色谱软件数据处理系统组成。 1.1输液系统 输液系统主要包括溶液贮器、在线脱气装置、高压输液泵、梯度洗脱装置。 溶液贮器用于存放符合HPLC要求的流动相。在线脱气装置主要功能是流动相在进入柱子前排除气泡。高效液相色谱柱的填料颗粒较小，通过2～5mm的色谱柱受到的流动阻力很大，因此需要通过高压输液泵抽取流动相输送至色谱柱。 高压泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵两种。按机械结构又可分为液压隔膜泵、气动放大泵、螺旋注射泵和往复柱塞泵四种，前两种为恒压泵，后两种为恒流泵。恒压泵可以输出稳定不变的压力。在一般的分析仪器中，由于系统阻力不变，恒压亦可达到恒流的效果。但是当系统阻力发生变化时，输入压力即使不变，流量却可随阻力而变化。恒流泵则无论系统阻力如何变化都可保证其流量基本不变。在色谱实际操作中，系统阻力可能随着运行时间的增加产生微小的改变，因此恒流泵比恒压泵更优越。然而在泵和柱系统所允许的最大压力下操作时，恒压泵较为安全方便。

高效液相色谱法在生命科学中的应用

高效液相色谱法在生命科学中的应用 高效液相色谱在生命科学中的应用范围越来越广，高效液相色谱由于具有高选择性、高灵敏度，并可同时用于有关物质检查与含量测定的特点，已成为医药研究的有力工具。如在中草药有效成分的分离和纯度测定、人工合成药物成分的定性和定量测定、新型高效手性药物中手性对映体含量的测定以及药物代谢物的测定等方面都需要用到HPLC的不同测定方法予以解决。而目前高效液相色谱的蒸发现了它在生命科学中的重要地位。光散射检测器的应用更体现了它在生命科学中的重要地位。1天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行分离鉴定，再测定有效成分的含量；通过指纹图谱建立识别模式，可以判定药材的质量高低。 2 天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑血管疾病、神经衰弱、

慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％以上的速度增长。HPLC分析必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。 3 抗生素分析 抗生素是由微生物或其他方法产生的化学物质，在高度稀释的情况下仍具有抑制或杀灭其他微生物的性能。抗生素的分离、分析和定量测定是药物分析中较困难的领域。采用较多的方法是微生物法、分光光度法和化学方法，但所需时间较长、专一性较差。 HPLC分析技术近年来在抗生素的质量控制中已广泛应用。对结构、组分等较清楚的药物，HPLC分析将逐步取代传统的生物测定。目前，各国药典中应用HPLC技术对抗生素进行质量控制的项目包括鉴别、组分分析、含量测定和相关物质测定等。 4 在鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含 量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别.

高效液相色谱的应用与发展前景

[Abstract] The common problems and relevant treatment measures of high performance liquid chromatography(HPLC)were introduced，which 高效液相色谱的应用呵发展前景 液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过改进填料的粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础 上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固 定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快.分离效率高和操作自 动化,这种色谱技术被称为高效液相色谱法(HighperformanceliquidchromatographyHPLC) HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪结构。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。 对于高效液相色谱的发展前景应该是非常乐观的，现在的社会的发展节奏很快，各个领域对于分析检验的需求很多，而分析检验中，HPLC所占的比重是不言而喻的，已成化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。所以她的发展情景很乐观。理由有几点 1，随着科技的发展，技术的日臻完善，较之以前色谱分析的

高效液相色谱在环境分析中的应用

高效液相色谱法在环境分析中的应用 摘要 高效液相色谱（HPLC)是现代分析化学中最重要的分离方法之一。近几年由于化学工业的发展和天然化合物的开发,使得环境污染越来越严重。高效液相色谱由于其高灵敏度、高效、分析速度快等优点而广泛应用于环境中各物质的监测。本文介绍了高效液相色谱的组成、基本原理，列举了目前利用高效液相色谱法测定环境样品中多环芳烃、酚类化合物、多氯联苯、邻苯二甲酸脂、有机农药等有机污染物的测定条件及分离结果。展示了这项技术在该领域的应用并展望了液相色谱分析技术的发展前景。 关键词:高效液相色谱；有机污染物；环境分析；发展前景 Abstract High performance liquid chromatography ( HPLC ) is one of the most important separation methodsis in the modern analytical chemistry. In recent years because of the development of chemical industry and natural compounds , the environment pollution is more and more serious. High performance liquid chromatography with its high sensitivity, high efficiency, and fast analysis speed has widely applied in the monitoring environment substance. The composition of high performance liquid chromatography and basic principle are introduced in the paper.And at the moment, high performance liquid chromatography method is used in the organic pollutants determination conditions and separation results of environmental samples,such as phenolic compounds, PCBs, phthalic acid ester, organic pesticides and so on.It shows the application of this technique in the field and the development prospects of liquid chromatography analysis technology . Keywords :HPLC ; Organic Pollutants ;Environmental analysis; Development prospect 1.前言 目前，由于化学工业的发展和天然化合物的开发,使得环境污染越来越严重。据报道,被确认为环境污染物的已超过350 种[1],人们能在水中、空气中、污泥里、鱼、禽体内发现这些污染物。通过食物链,它们将进一步污染肉类、蛋类、粮食、蔬菜等。环境

高效液相色谱习题及答案

高效液相色谱法习题 一、思考题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理 14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 二、选择题 1．液相色谱适宜的分析对象是（）。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相粘度较大 D 柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL－1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（）。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（）。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（）最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）。 A 异构体 B 沸点相近，官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样

高效液相色谱法的应用综述

HPLC法的应用综述 摘要：在手性药物研究中手性药物拆分的作用越来越重要，已成为 国际上分析科学中的难点。HPLC法是通过将手性药物引入手性环 境使对映异构体间呈现物理特征的差异而进行分离的，一般分为直 接法和间接法，前者直接以手性流动相（chiral mobile phase，CMP）或手性固定相（chiral stationary phase，CSP）进行分离；后者是对 映体混合物用手性试剂作柱前衍生，形成一对非对映体，然后以常 规固定相分离，该法亦称作手性衍生化试剂法（chiral derivatization reagent，CDR）。本文综述了HPLC法在手性药物拆分中的应用。 关键词：HPLC（高效液相色谱）；手性药物；对映异构体； 色谱法是利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动 相推动样品中的组分通过固定相时，在两相中进行连续反复多次分配，从而形成差速移动，达到分离的方法。根据流动相的状态可分 为气相色谱法和液相色谱法。在液相色谱中，采用颗粒十分细的高 效固定相并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成。这 种色谱称为高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)。 气相色谱适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物， 而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。如今，HPLC因其独特的优点广泛应用于食品安全检测，药物含量测定、组成分析、质量 控制等方面，成为分析化学中最重要的分析方法之一。 1.HPLC在食品安全中的应用 在食品检测中应用较广泛的是HPLC，近几年发展起来的高效液相色谱—质谱联用技术（HPLC-MS），集液相色谱对复杂基体化合 物的高分离能力和质谱独特的选择性、灵敏度、相对分子质量及结 构信息于一体而广泛应用于食品检测方面，为食品工业中原材料筛选、生产过程中质量控制、成品质量检测等提供了有效的分析检测 手段[1]。 （1）食品中残留农药的检测 HPLC-MS日益广泛地应用于不同类型兽药、农药及毒素类有毒 有害物质的检测分析, 与其他液相色谱应用不同的是, 食品及农产品

高效液相色谱法在药品质量分析中的应用进展

高效液相色谱法在药品质量分析中的应用进展 [摘要]高效液相色谱法一种能够对较为复杂的混合进行分离的技术，因此，被广泛应用于药品质量分析中。本文主要对高效液相色谱法的分离原理、高效液相色谱技术的发展及其在药品质量分析中的应用等进行阐述。 [关键词]高效液相色谱法；药品质量分析；灵敏度

目录 引言 (2) 1.高效液相色谱法的分离原理及特点 (3) 2 高效液相色谱技术的发展 (3) 3 高效液相色谱法在药品质量分析中主要应用 (4) 3.1 药品有效成分含量的检测。 (4) 3.2 药品中杂质含量的检测。 (4) 3.3 抗生素含量的检测。 (4) 4 高效液相色谱法在药品质量控制中的应用进展 (5) 5超高效液相色谱的到来 (5) 参考文献 (6) 引言 高效液相色谱是一种具有迅速和高度分辨能力的柱色谱技术。它是20世纪70年代以来迅速发展起来的分离分析生化样品最有效的技术手段。是在经典的液相柱色谱的基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种柱色谱技术被称为高效液相色谱法或称高压液相色谱法、高速液相色谱法、现代液相色谱法等。( highperformance liquid chromatography，HPLC)。虽然气相色谱的应用领域十分广泛，但仍不能解决大量的恢复性差和热不稳定的化合物的分离难题。经典的

液相色谱仍然是用于分析这类化合物的手段。直到20 世纪60 年代后期，由于新型柱填料高压输液泵和高灵敏度检测器的出现，才使液相色谱快速发展起来，并发展成为高效液相色谱。高效液相色谱可分为多种，按照固定相的不同可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型[1]。高效液相色谱在药品质量分析的应用中具有分离快速、分离效果好及灵敏度高等优势[2]，本文主要对高效液相色谱法的分离原理、高效液相色谱技术的发展及其在药品质量分析中的应用等进行阐述。 1.高效液相色谱法的分离原理及特点 高效液相色谱法是根据混合物中的各个组成成分在固定相和流动相之间的分配比例的不同，实现成分之间的分离的[3]。高效液相色谱仪根据检测器的不同，分为紫外检测器、示差检测器、蒸发光散射检测器、二极管阵列检测及荧光检测器等[4]，适用于不同特点混合物的分析，扩大了高效液相色谱法的分析范围，使此方法应用更加广泛。此外，由于可以通过改变流动相的种类、配比、调节流动相的酸碱度达到改善色谱峰峰型的目的，进一步提高高效液相色谱的分离效果、提高检测灵敏度，保证检测结果准确性。高效液相色谱检测器由于可以保证被分离物质的完整性，可以作为分离、纯化的手段，进一步与质谱仪连用，互为优势，为药品质量分析提供更加可靠、方便的检测方法。 2 高效液相色谱技术的发展 高效液相色谱法是一种新近发展起来的一种分离检测方法，通过近些年的不断发展，可以作为一种稳定的分离技术广泛应用于制药领域及其他多个领域。经统计，已知化合物的70%-80%都可用于液相色谱法进行分析[5]，理论上适用于高沸点、热稳定性差及分子量较大的化合的分析。随着技术的不断完善，自动化、高效能、高灵敏度、高选择性等方向的发展已经逐渐成为高效液相色谱技术的主

气相色谱法与高效液相色谱法

气相色谱法与高效液相色谱法 比较气相色谱法与高效液相色谱法分离原理、仪器构造及应用范围的不同 点。 一、分离原理： 1.气相：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相 间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行 反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到 分离。 2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理 论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达 4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米 塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连 续检测。 二、应用范围： 1.气相：气相色谱法具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等 优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气 相色谱法进行分析。一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍 生化法或裂解法。 2.液相：高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不 受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的 约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。

三、仪器构造： 1.气相：由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。 1.1 柱箱：色谱柱是气相色谱仪的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离，从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。 由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。 柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱，并且操作方便。 色谱柱（样品）需要在一定的温度条件下工作，因此采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。 对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。 1.2 进样器： 进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化，因此采用微机对进样器进行温度控制。 根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供 选择： 1.填充柱进样器 2.毛细管不分流进样器附件