ROS测定方法

1.取对数生长期的细胞,以4×105/ ml 密度接种于6 孔细胞培养板上；

2. 培养过夜后，用于相应实验处理；

3. 收集处理后的细胞培养液至流式专用管；

4. 加1ml PBS缓冲液清洗一次，清洗液加入管中；

5. 胰酶消化收集细胞于上述管中；

6. 1ml PBS缓冲液清洗剩余细胞一次，清洗液加入离心管；

注：3－6步都收集于同一流式专用管。

7. 800 g离心6 min，去上清；

8. 加1 ml PBS缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清；

9. 重悬细胞于1ml 的PBS 缓冲液中；

10. 加荧光探针如CM-H2 DCFDA（主要检测H2O2 ，1 min,37℃孵育30

min；

11. 在流式细胞仪上以FS 和SS（侧向散射，指示细胞光透射程度）为参数，选

取活细胞（大FS 值，较小SS 值），将其限定在Gate 内，对Gate 内的细胞

进行ROS 的分析。以相应荧光探针荧光读数的对数为横坐标，细胞数为纵坐

标即可测定活细胞的ROS 的相对强度。