RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南讲解学习

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南

准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。

操作步骤：

1. 匀浆处理

a. 植物组织:

以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.

b. 动物组织:

以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.

c. 单层培养细胞.

直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.

注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.

d.细胞悬液:

离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。

e.血液处理:

直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。弃上清，收集白细胞沉淀。每1ml血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。

2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。

如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。

5. 4 ℃10 000rpm离心10-15min，样品会分成三层：红色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。（如要分离蛋白质和DNA，可保留黄色的有机相）

6. 在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，混匀，-20℃放置20-30min。

植物或动物组织RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，导致电泳检测时看不到RNA。可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇，1/2体积的RNA助沉剂，然后进行以下操作。

7. 4 ℃10 000rpm离心10min，去上清。

离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

8. 加入1ml 75%乙醇（DEPC水处理过的水配制）洗涤沉淀。每使用1ml Trizol至少加1ml 乙醇。

9. 4 ℃10 000rpm离心2min，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。

10. 室温放置晾干（不要晾得过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3min左右即可）。加入适量DEPC水（根据实验需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用枪头吸打几次，充分溶解RNA。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲

酰胺溶解，-70℃保存。

注意事项：

1. 从少量样品中提取RNA(1-10mg组织或102-104细胞) ：

加800ul Trizol，样品裂解后加氯仿，分层，沉淀RNA前，加5-10ug RNase-free糖原，糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成，也不影响PCR反应。

2. 匀浆后，加氯仿前，样品可在-70 ℃放置一个月以上：

RNA沉淀可以保存在75%酒精中，2-8 ℃一个星期或-20 ℃一年以上。如果要长期保存，RNA可以溶解于100%去离子甲酰胺中，-70 ℃长期保存。

预防RNase污染，应注意以下几个方面：

1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

3. RNA在Trizol试剂中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4. 配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至中浓度0.1%(v/v)，放置过夜，高压灭菌。注：DEPC有致癌之嫌，需小心操作）。

不同组织或细胞RNA提取预期得率

植物叶片100-200ug/g叶片

动物组织200-400ug/g肝脏组织

动植物培养细胞5-10ug/106细胞

大肠杆菌2-10ug/mlDH5α过夜菌

血液3-5ug/ml人全血

问题指南：

低得率

A. 样品裂解或匀浆处理不彻底

B. 最后得到的RNA沉淀未完全溶解

A260/A280<1.65

A. 检测吸光度时，RNA样品不是溶于TE，而是溶于水。低离子浓度和低pH条件下A280会较高。

B. 样品匀浆时加的试剂量太少。

C. 匀浆后样品未在室温放置5min。

D. 水相中混有有机相。

E. 最后得到的RNA沉淀未完全溶解。

RNA降解

A. 组织取出后没有马上处理或冷冻。

B. 样品或提取的RNA沉淀保存于-5~-20℃，未在-60~-70℃保存。

C. 细胞在胰蛋白酶处理时被破坏。

D. 溶液或离心管未经RNase去除处理。

E. 电泳时使用的甲酰胺pH低于3.5。

DNA污染

A. 样品匀浆时加的试剂体积太少。

B. 样品中含有组织溶剂（如乙醇，DMSO等），强缓冲液或碱性溶液。

蛋白和多糖污染

A. 样品中蛋白、多糖含量高。

B. 样品量太大。

C. 水相中混有有机相。

D. 第6步中加入RNA助沉剂可以帮助去除这些污染。

RNA提取一般步骤总结

RNA提取原理：

通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。

RNA提取的一般步骤

所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA 和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。

第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。

实验步骤：

破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。

1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。

2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。

3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或异丙醇。

4、洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。

5、融解RNA一般使用TE。

6、保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于- 70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。

氯化锂法提取总RNA：

本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA丢失的缺陷。

试验试剂：

1、氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌】

2、悬浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】

试验步骤：

1、对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿

实验操作注意事项

实验操作注意事项 一．使用温度计测量水温（三年级下册） 1.手拿温度计时正确的位置是提环，不要触摸到玻璃泡位置。 2.测量时温度计玻璃泡应放置于液体中间位置，不要碰到容器壁或容器底部。 3.当温度计放置液体中大约一分钟，温度计液柱稳定不再上升时才能读数，读数时温度计 仍放置在液体内，视线应平视，切记不能仰视或俯视。 二、量筒量液体体积。（三年级下） 1.先弄清楚每一小格的单位体积。 2.量筒放置于水平台上，当测量液体较多时应先用烧杯慢慢加液体，当接近要求测量的体积时，再改用滴管慢慢添加，不要一开始就一直用滴管加。 3，读数时视线应与液体的凹处平视。 三、食盐的溶解实验（四年级上） 1、定量的水，加食盐时用药匙慢慢添加，不要一次添加太多，避免食盐过多时无法溶解完。 2、为了加快溶解使用玻璃棒慢慢搅拌，尽量不要碰到容器壁。 四、酒精灯的使用 1.使用时首先揭开灯帽，灯帽应立放在桌面，避免灯帽滚落。点酒精灯只能用火柴点，不能用燃着的酒精灯去点另一盏酒精灯。 2、熄灭酒精灯时不能用嘴吹，只能用灯帽盖灭，当盖灭以后应将灯帽揭开再重新盖一次。3，使用酒精灯加热物体时应使用外焰加热，因为外焰温度最高。 五、天平的使用。（五年级上） 1、准备测量前，用双手托住底座把天平放在水平台上，使用前弄清楚测量的最大值（天平底座标有），标尺上每一小格所表示的质量值。读游码应看游码左侧对的刻度线。 2、准备测量时先取下两边托盘下的橡胶垫，游码放在标尺左端零刻度线处，再调节平衡螺母，使指针指在分度盘的中线处，（如果指针偏向左侧，螺母向右拧：指针偏向右，则螺母向左拧。） 3、测量物体放左盘（如果测量物体是化学药剂类应用纸垫），砝码放右盘。添加砝码遵循先重后轻，不足再用游码补足，直至再次平衡为止。添加砝码时不能用手拿，必须要用镊子夹。 4、物体的质量是砝码加上游码读数。 六、简单电路连接（四年级下） 1.电池盒放电池时，注意分清正负极。 2、连接开关时，开关应是断开状态，当整个电路连接好时才能闭上开关。（使用开关控制电流时，手不能触摸到金属部分） 3、当连接好整个电路时，闭上开关但是小灯泡不亮时，要会找原因。首先检查连接处是否连接好，小灯泡是否是坏的等等。 七、食盐与水的分离实验（四年级上） 1、注意正确使用酒精灯。 2、加热后期为了防止结出食盐晶体飞溅，用玻璃棒不停搅拌。 八、过滤实验（四年级上） 1、三靠：1、漏斗口靠紧烧杯壁。 2、玻璃棒靠紧滤纸最厚处。 3、倒液体时，烧杯口靠紧玻璃棒。 2,、两低：滤纸低于漏斗边缘；液面低于滤纸边缘。 3、一贴：滤纸紧贴漏斗壁。（可以用水打湿）

RNA试剂盒提取步骤

常规植物样品总RNA小量抽提 1. 植物样品的研磨。 ?收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。 注：研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。 ?快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。 注：在加入裂解液之前，不要让样品解冻。初次使用时，推荐先使用50mg，待取得理想结果后， 再酌情提高用量。 2. 立即加入500μlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60 秒 充分打散样品，室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。 注：使用前分装适量的Buffer RL，每1ml Buffer RL 加入20μl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。 若植物用量增加超过100mg，按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。 3. 室温下，14,000 x g 离心5 分钟。 4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 x g 离心1 分钟。 5. 弃去gDNA 过滤柱。加入0.5倍体积无水乙醇(~250μl)至滤液中。用移液枪吸打3-5次混匀。 6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。转移第5 步的混合液至RNA柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。 7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。(请另外订购DNase On Column Kit 进化 膜上DNase 消化)。 8. 倒弃滤液，把柱子装在收集管中。加入500μl Buffer RW1 至柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。加入600μl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g 离心30-60 秒。 注：在使用Buffer RW2 之前，必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。 10. 倒弃滤液，把柱子重新装回收集管中。加入600μl Buffer RW2(已用乙醇稀释)至柱 子中。10,000×g 离心30-60 秒。 11. 倒弃滤液，把柱子套回空的收集管。10,000 ×g 离心空柱2 分钟甩干柱子。 12. 将柱子转移至新的1.5ml 离心管。加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 13. (可选)再加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 注：HiPure RNA Column 最小的洗脱体积是30μl，小于30μl 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果RNA 产量超过30μg，推荐按第13 步进行第二次洗脱。 14. 弃去柱子，把RNA 保存于-80oC。

植物RNA提取步骤

植物RNA提取步骤（附图） 实验步骤 1. 在eppendorf管中加入700ul 提取液（配方见后面）和10 ul巯基乙醇（在有褐化现象的时候再加就行，否则推荐不加），65度预热（可选）。 2. 研钵液氮预冷，取适量材料加入过量液氮，迅速研磨成均匀的粉末（有滑腻感），加入到预热的eppendorf管中水浴6min（可选）.取出后加入氯仿、酚各350ul，振荡20min。 3. 4℃13000rpm 离心15min，同时在另外的eppendorf管加入氯仿、酚各350ul。 4. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10 min。 5. 4℃13000rpm 离心8min。同时在另外的eppendorf管加入氯仿700ul。 6. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10min。 7. 4℃13000rpm 离心8min。同时在另外的eppendorf管加入350ul的75％乙醇、350ul的8MLiCl。 8. 吸取上清，加入到上述离心管中，－20℃沉淀30min，13000rpm离心20min。 9. 弃上清，75％乙醇清洗两次。 溶于30ul 的水（DEPC水），直接进行测定浓度和电泳，CTAB结果如下(左侧四个）：0.155ug/ul 260/280=2.11 260/230=2.20 SDS结果如下（右侧四个） 0.102ug/ul 260/280=1.78 260/230=2.05 电泳结果如下： 加入DNase和buffer（promega）,37度消化30min,氯仿抽提两次,用1/10体积NaAc 和二倍体积无水乙醇沉淀15min,13000rpm离心10min.75%酒精洗两次, 溶于30ul 的水（DEPC水）中.

土壤学实验--土壤剖面的野外观察

实验一土壤剖面的野外观察（3课时） 实验内容及步骤： 一、选择土壤剖面点 选择原则： 1、要有比较稳定的土壤发育条件，即具备有利于该土壤主要特征发育的环境，通常要求小地形平坦和稳定，在一定范围内土壤剖面具有代表性。 2、不宜在路旁、住宅四周、沟附近、粪坑附近等受人为扰动很大而没有代表性的地方挖掘剖面。 二、土壤剖面的挖掘

土壤剖面一般是在野外选择典型地段挖掘，剖面大小自然土壤要求长2米、宽1米、深2米（或达到地下水层），土层薄的土壤要求挖到基岩，一般耕种土壤长1.5米，宽0.8米，深1米。 挖掘剖面时应注意下列几点： （1）剖面的观察面要垂直并向阳，便于观察。 （2）挖掘的表土和底土应分别堆在土坑的两侧，不允许混乱，以便看完土壤以后分层填回，不致打乱土层影响肥力，特别是农田更要注意。 （3）观察面的上方不应堆土或走动，以免破坏表层结构，影响剖面的研究。 （4）在垄作田要使剖面垂直垄作方向，使剖面能同时看到垄背和垄沟部位表层的变化。 （5）春耕季节在稻田挖填土坑一定要把土坑下层土踏实，以免拖拉机下陷和折断牛脚。 三、土壤剖面发生学层次划分： 土壤剖面由不同的发生学土层组成，称土体构型，土体构型的排列入其厚度是鉴别土壤类型的重要依据，划分土层时首先用剖面刀挑出自然结构面，然后根据土壤颜色、湿度、质地、结构、松紧度、新生体、侵入体、植物根系等形态特征划分层次，并用尺量出每个土层的厚度，分别连续记载各层的形态特征。一般土壤类型根据发育程度，可分为A、B、C三个基本发生学层次，有时还可见母岩层（D），当剖面挖好以后，首先根据形态特征，分出A、B、C层，然后在各层中分别进一步细分和描述。 土层细分时，要根据土层的过渡情况确定和命名过渡层： （1）根据土层过渡的明显程度，可分为明显过度和逐渐过度。 （2）过渡层的命名，A层B层的逐渐过程可根据主次划分为A B或B A层。 （3）土层颜色不匀，呈舌状过渡，看不出主次，可用AB表示。 （4）反映淀积物质，如腐殖质淀积B h，粘粒淀积B t，铁质淀积B ir等。 四、土壤剖面描述

提取细胞RNA的步骤

提取细胞RNA的步骤 提取细胞RNA的步骤： 1) 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。 2) 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12，000g，15min）。 3) 离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中。 4) 加入等体积异丙醇，0.4－0.5ml，混匀，15-30℃下孵育10－30min，离心（4℃，12，000g，10min）。其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。 5) 去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩涡振荡30s，离心（4℃，7，500g，5min）。 6) 小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。最好是用枪头吸取上清，尽量除去。 7) 加入20ul DEPC水溶解，分装5ul/管，-70℃冰箱保存。 8) 细胞总RNA的鉴定：0.9-1.2％琼脂糖电泳鉴定细胞总RNA，观察出现条带及各条带亮度。紫外分光光度计测定：分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的光密度值(OD),并计算RNA的含量和纯度。 1、实验目的 提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂 1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件， 2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂， 3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管, 4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇， 5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN。

《机能实验学》教学大纲

《机能实验学》教学大纲 课程编码：03230010。 学分：4.5。 总学时：80学时。 先修课程：人体解剖学、生物化学、生理学、病理学、病理生理学、药理学。 适应专业：临床医学、口腔医学、预防医学。 教材： 1、《生理科学实验教程》，丁报春主编，2006年版，人民卫生出版社. 参考教材: 2、胡还忠. 医学机能学实验教程，北京：科学出出版社，2007年, 3、秦晓群，邓汉武，邓恭华等. 机能实验学.北京：世界图书出版公司，2002. 4、郑恒. 医学机能实验学. 北京：中国医药科技出版社，2003. 5、尢家騄，朱新裘，马建中. 机能实验学.长沙：湖南科技出版，2004. 一、课程地位、目的和任务 （一）课程的地位机能学科包括生理学、病理生理学及药理学，将此三门学科的实验内容有机融合起来形成的一门综合实验学科——机能实验学，是我校教学改革的重要成果。机能实验学包括三部分：机能学基础实验、机能学综合实验和学生创新性实验。机能学基础实验是通过经典的生理学、病理生理学及药理学实验，培养学生掌握基本实验技术和方法，熟悉和掌握各种实验仪器和手术器械的使用，独立完成实验操作、结果分析、实验报告等，为学习机能综合实验打下坚实的基础；机能学综合实验是以消化系统、循环系统、呼吸系统和泌尿系统为主线，将每一系统的生理、药理、病理生理的内容有机融合成为综合性实验，通过观察动物在正常状态下其功能活动规律、复制某些疾病的急性动物模型后观察其病理状态下功能活动的改变并探讨分析疾病发生发展过程和机制、自行选择和利用某些药物及手段进行治疗并分析其药物学作用原理及其作用机制等，这一贴近临床和理论联系实际的实验模式，以达到培养和提高学生综合全面分析解决问题的能力，求实、严谨的科学作风和基本科研素质，及协作、互助的团队精神。 （二）课程的目的 1．人体机能学是研究人体机能活动规律的科学，机能实验学的主要目的是通过了解机能实验学的任务、内容、研究方法与发展，加强学生对机能实验学基本知识的认识，重点培养学生基本技术和基本技能，增加学生自己动脑、动手的机会，培养学生基本科研素

土壤学实验指导书

土壤样品的采集与处理 一、目的意义 土壤样品的采集与处理，是土壤分析工作的一个重要环节，直接关系到分析结果的正确性、可靠性。土壤是一个不均一体，受自然因素（包括地形高度、坡度、母质等）和人为因素（耕作、施肥等）影响，土壤养分分布不均匀。正确的采样方法是保证少量分析样品正确反映一定范围内土壤的真实情况的前提条件。 土壤样品的采集要求选择有代表性的地点和代表性的土壤，避免一切主观因素的干扰，根据采样目的及分析项目确定采样方法。土壤形成与土体发生研究，按土壤发生层次采样；土壤物理性质研究，需采原状土样品：农业土壤的理化性质、养分状况研究，则应选择代表性田块，在耕作层多点采取混合样品。 采集到的土样，应当场记好标签，带回室内后要逐袋进行登记，立即进行风干处理。处理样品的目的是：（1）使分析样品可较长期地保存，以防止微生物作用引起土壤生化性状发生变化；（2）挑去非去部分，使分析结果能代表土壤本身组成；（3）将样品适当磨细和充分混匀，使分析时所取的称样具有较高的代表性，减少称样的误差；（4）将样品磨细，增大土粒的表面积。使制备待试溶液时分解样品反应能够完全和匀致。 二、仪器设备 （1）土样采集使用工具 铁锹、小铁铲、小钢卷尺、剖面刀、样品袋(布袋、纸袋或塑料袋)、标签、铅笔。 （2）土样制备使用工具 牛皮纸、硬木板、木棒、台称、镊子、玛瑙研钵、广口瓶(或纸袋)、标签、土壤筛(孔径2mm、1mm 和0.25mm)等。 三、实验步骤 （一）土壤形成发育与土壤分类研究（土壤剖面样的采取) 1.采样点确定 在野外首先确定区域地形部位，及具体剖面位置，除在调查范围的草图上注明采集位置外，并在样

实验课管理规定

实验课管理规定 GE GROUP system office room 【GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-

实验课管理办法 实验教学是高校本科教学的一个重要环节，为规范我院实验教学，加强我院实验课管理，提高实验教学效果，特制定本办法。 一、实验预习 1.学生在每次实验课之前，应仔细阅读实验指导书，查阅相关的资料，写出预习报告； 2.预习报告的具体内容包括：实验目的，实验设备，实验原理，实验步骤及数据记录。实验课前由指导教师检查，未写预习报告者不予做实验。 二、考勤制度 1.学生必须按时到实验室做实验，不得迟到早退，未经老师批准不得中途离开。凡迟到者，应给予批评并作适当扣分。无故缺席者视为旷课，旷课者不予补做实验，本次实验以0分计； 2.学生因病或特殊情况不能按时到实验室做实验时，应办理正常请假手续；请病假必须有医生签字的病假条，请事假必须有班主任签字的事假条。不符合请假手续的，以旷课论处，请假缺做实验的学生由指导教师安排补做实验； 3.对于未做实验的学生，取消其实验课程的考核资格，按规定重修。 三、实验过程

1.学生必须严格遵守实验室的规章制度及操作规程，爱护公物，正确操作仪器设备，节约实验材料，如发现异常情况应及时向指导教师报告，有违反操作规程或不听从指导或疏忽大意而导致实验仪器设备损坏或事故者，按照学校和实验室的有关规定予以赔偿，并按校纪校规严肃处理； 2.实验过程中，学生应听从指导教师的指导和管理，严格遵守操作规程，独立操作完成整个实验过程，仔细观察实验现象，如实记录实验数据，严禁冒替、抄袭、伪造实验数据等行为，一经发现上述行为，视情节轻重给予批评、扣分，直至取消本次实验成绩； 3.自觉养成良好的科学习惯。始终保持桌面布局合理、环境整洁，保持安静的学习环境，做到文明、安全实验； 4.学生应按指定方式整洁地记录原始数据。实验后，所有数据应经指导教师检查并签名，将用过的仪器用品及实验现场整理好，经指导教师同意后方能离开实验室； 5.值日生应协助指导教师维护实验纪律，做好实验安全工作，并负责搞好环境卫生及实验后的实验室整理，经教师验收合格后方可离开实验室。 四、实验报告 1.每次实验后学生必须写出符合要求的实验报告，并在课后按时交给指导教师，迟交、缺交者由指导教师酌情扣分；

(完整版)总RNA提取的原理、步骤

总RNA提取的原理、步骤 1.原理及方法（异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法） TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。 2.简易步骤 细胞或组织，加入0.4ml TRIZOL试剂后匀浆 ↓ 室温静置5分钟 ↓ 加入1/5 TRIZOL试剂体积量的氯仿，剧烈震荡混匀 ↓ 室温静置5分钟，12000g 4℃离心l5分钟 ↓ 将上清液转移至新的离心管中，加入与上清液等体积的异丙醇，颠倒混匀 ↓ 室温静置10分钟，12000g 4℃离心l0分钟，弃上清 ↓ 向沉淀中加入1ml的75%乙醇清洗沉淀，12000g 4℃离心5分钟 ↓ 弃上清保留沉淀，干燥 ↓ 沉淀物溶解于11μl的DEPC处理水中 ↓ 注意：以上操作应在生物安全柜内完成，以防止污染。 注意事项 ①全程配戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。 ②使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。

③在TRIZOL中，RNA是隔离在RNA酶污染之外的。而对样品的后续操作会要求用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C的烘箱中烘烤4小时。塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 ④用TRIZOL抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，所有的操作应该在15 -30°C的条件下完成，试剂亦在 15 -30°C的条件下。 ⑤75%乙醇(用DEPC处理过的水配制：将水加入无RNA酶的玻璃瓶中，加入DEPC至 0.01% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。) ⑥每50—100 mg组织加1ml的TRIZOL。匀浆化时组织样品容积不能超过TRIZOL容积的10%。 ⑦单层生长的细胞直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TRIZOL溶解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIZOL 量（每10 cm2加1 ml）。当TRIZOL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。 ⑧在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在–60—–70°C保存至少一个月。RNA沉淀（RNA 洗脱）溶于75%的乙醇在2—8°C至少可以保存一周，在–5—–20°C下至少可保存一年。 逆转录cDNA及注意事项 如果cDNA当天不使用，则要保存在-20℃或-70℃。 RNA逆转录成cDNA操作流程简图如下：（在冰盒上操作） 1.将提取的RNA溶解于11 μl DEPC-t净化水中，加入1ul引物，1ul模板RNA，1uldNTP 轻微震荡后离心3-5秒。 2.在PCR扩增仪上70℃ 5分钟。 3.冰上冷却1分钟，并短暂离心，向反应体系中加入5×reaction buffer 4μl，RibolockTM Ribonuclease inhibitor (20 u/μl) 1μl，10 mM dNTP mix 2μl。 4.轻微震荡后离心3-5秒，在PCR扩增仪上37℃ 5分钟。 5.向反应体系中加入RevertAidTM M-MuLV Reverse Transcriptase (200u/ul) 1μl，在PCR 扩增仪上42℃ 60分钟进行逆转录，70℃ 10分钟灭活逆转录酶。 6.收集反应产物，冰上冷却

《土壤学》实验指导

《土壤学》实验指导 （适用专业：农业资源与环境专业）黑龙江八一农垦大学植物科技学院资环系

目录 实验一分析样品的采集和制备 (1) 实验二土壤吸湿水含量的测定——室内烘干法 (5) 实验三土壤有机质含量测定——丘林法 (7) 实验四土壤水稳性团粒结构的测定 (10) 实验五土壤多种理化性状分析 (11)

实验一分析样品的采集和制备 样品的采集，是决定分析工作是否可靠的重要环节。由于耕地土壤、肥料（尤其是有机肥料）、作物的不均一性，很容易造成采样误差，而采样误差要比分析误差大若干倍，即使室内分析结果再准确，也难以反映客观实际情况。因此样品的采集与处理，则是土壤农化分析工作中一项非常重要的工作。 一、土壤样品的采集和制备 （一）土壤样品的采集 土壤是一个不均匀体，同一地块上这一点和那一点土壤有差异，垂直剖面上不同土层之间也有差异。造成这些差异的原因是多方面的，如气候、地形、母质、土壤中的生物活动、人们的生产活动等等。对于农业土壤来说，各种农业技术措施（不同的施肥方式和耕作制度等）造成土壤的局部差异尤为显著。因此耕地土壤的不均匀性远比未耕种土壤大。要使分析结果符合客观实际情况，所采集的土壤样品就必须有代表性、均匀性和典型性。 1、划分采样区 为使土壤样品真正具有代表性，采样前首先需要了解全区土壤类型、地型部位、作物布局、耕作施肥、历年产量等情况，然后根据土壤的差异划分若干采样区，每一个采样区的土壤尽可能均匀一致。在每一个采样区内取一个混合土样。采样区的面积，视研究目的和要求的精确度而定。试验区采样，每一个试验小区为一个采样区。生产田一个采样区面积可为10ha。 2、采样 土壤农化分析一般只采耕层（0～20cm）土样。传统农业采样时，通常采取蛇形线或对角线等距离布置样点，精准农业通常采用网格法采样。采样点应避开特殊的地点，如粪底盘、地边、沟边等。采样点数根据采样区的面积而定，一般为15～20个。 采样方法随采样工具而不同。常用的采样工具有小土铲和土钻。用土铲取土时是在采样点上根据采土深度斜向采取上下一致的薄片。用土钻取土则是将土钻钻入土中，在一定土层深度处，取出一均匀土柱。各样点样品集中混匀，一个混合样品量为0.5～1kg。若土量太多，可将土样放在塑料布上，用手捏碎混匀，用四分法取出一部分，装入样品袋，内外附上标签，注明采样地点、深度、前茬或施肥情况、采样人和

怎样上好初中化学实验课

怎样上好初中化学实验课 化学实验是进行科学探究活动的重要方式，要适应教育改革和新世纪社会对人才的要求,在教学中发展学生智力,培养能力是提高教学质量的重要一环,尤其在当前深化教育改革全面推进素质教育的新形势下,加强实验教学是提高化学教学质量,提高学生素质的重要一环。 化学是一门以实验为基础的学科，以实验的魅力来吸引学生，抓住学生，才能使化学教学立于不败之地。观察老师演示实验的操作、现象；上好实验课，独立地做好学生实验，是学好化学的基础。物质的性质要通过实验来验证，一些物质的制取要通过实验来完成，上好化学实验课，对巩固所学知识，培养学生的动手操作能力和创新意识是很有帮助的。 步骤/方法 1. 一、演示实验，设疑激思 演示实验教学，在演示之前向学生交待清楚实验内容、目的及观察的现象，告诉学生应该观察什么，从什么角度去观察，怎样捕捉稍纵即逝的现象，通过实验现象的观察，认真铺设一些必要的阶梯设下疑问，激发学生思考。例如在做化学变化的演示实验时，先让学生观查用沙纸打磨后镁条的色态及燃烧过程中的现象、此实验说明了什么问题？等，再如在讲“金属活动性顺序前面的金属能把后面的金属从它的盐溶液里置换出来”时设下疑问：能否所有金属都符合这一规律？学生犹豫，不能正确回答，这时便补充钠与硫酸铜溶液的反应实验，实验前先让学生按一般规律设想，说出实验现象，很快有的学生就说出“钠表面覆盖一层铜”，因在金属活动性顺序中钠排在铜的前面，所以钠能置换硫酸铜中的铜。接着教师开始演示，并要求学生认真观察钠的变化，溶液的颜色变化。实验结果表明：钠漂浮在硫酸铜溶液表面，迅速旋转产生火球并消失，溶液中出现蓝色沉淀，这精彩的现象，瞬间的变化，学生凝神观察，猜测被推翻，为什么会出现以上现象呢？你从而发现了钠有哪些性质？这一个一个的疑问激发了学生的思维活力，经讨论和教师点拨，对金属钠学生有了初步了解，再通过教师解释，写出钠与水反应的化学方程式和氢氧化钠与硫酸铜反应的化学方程式，学生便明确了实验现象的产生和盐与金属的反应规律中应除去“K、Ca、Na”三种活泼金属，这样以生动的实验探索，不断的设置疑问，使学生思维活跃，求知欲望逐渐增加。

RNA提取步骤

1. 组织样品：称取20mg-50mg 样品，使用液氮研磨或者匀浆器匀浆，加入RNA-Solv ? Reagent裂解 2. 室温静置2-3 分钟。 3. 加入200μl 氯仿(氯仿的使用量为1/5 RNA-Solv ? Reagent 的使用量），涡旋混匀15 秒，冰浴10 分钟。 4. 4℃，12,000×g 离心15min。 5. 小心转移不大于80%的水相层至新的离心管，加入1/3 倍体积的无水乙醇，涡旋混匀15 秒。 6. 将HiBind RNA 结合柱套在2ml 离心管中，转移不大于700μl 混合液至HiBind RNA 结合柱中。 室温下10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。 7. 重复步骤六，直至所有的混合液全部离心，结合到HiBind RNA 结合柱上。 8. 将HiBind RNA 结合柱套在新的2ml 离心管中，加300μl RNA Wash Buffer I 至HiBind RNA 结合柱中，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液； 9. （选做）DNase I 消化: a. 配制DNase I(Digestion Buffer, 73.5μl; RNase-Free DNase I,1.5μl),混匀。 b. 将上述75μl DNase I 溶液转移至HiBind RNA 结合柱膜的正中央，不要将消化液转移至柱子内 壁。 c. 室温静置15 分钟。 10. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入400μl RNA Wash Buffer I 洗涤，如做了DNase I 消化，需室温静置 5 分钟，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。 11. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入500μl RNA Wash Buffer II 洗涤，10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。 12. 重复步骤11 一次，＞10,000xg 离心空甩2min 干燥HiBind RNA 结合柱基质。 13. 将HiBind RNA 结合柱套在干净的1.5ml 离心管中，加30-50μl DEPC Water，室温静置2min。≥10,000xg 离心1min 洗脱RNA。

土壤学实验报告(总共)

) 总共(土壤学实验报告 土壤学实验报告

2 1512040006 蒲家庆土壤学实验 学院：农业科学学院 专业：土地资源管理 年级：15级 班级：15级土管一班

学号：1512040006 姓名：蒲家庆 土壤学实验报告（实验一）填写日期：201604 教师评分教师签名 日期 实验课名称：土壤学实验 实验项目名称：土壤样品的采集与处理 学生班级：15级土地资源管理一班学生姓名：蒲家庆学号：1512040006 一、实验目的 通过土壤样品的采集、处理和全磷含量的分析测定，了解生态学和环境科学的研究中，实验样品的采集、处理和分析测定过程中的注意事项，掌握土壤样品的采集、处理和分析的一般流 3 1512040006 蒲家庆土壤学实验 程，领会控制测定精度的措施。 二、实验原理 土壤样品的采集是土壤分析工作中的

一个重要环节，是关系到分析结果和由此得出的结论是否正确的一个先决条件。由于土壤特别是农业土壤的差异很大，采样误差要比分析误差大若干倍，因此必须十分重视采集具有代表性的样品。此外，应根据分析目的和要求采用不同的采样方法和处理方法。 三、仪器与药品 仪器：土钻、小土铲、米尺、布袋（盐碱土需用油布袋）、标签、铅笔、土筛、广口瓶、天平、胶塞（或圆木棍）、木板（或胶板）等。小土铲：任何情况下都可应用，但比较费工，多点混合采样，往往嫌它费工而不用它。管形土钻：下部系一圆形开口钢管，上部系柄架，根据工作需要可用不同管径的管形土钻。将土钻钻入土中，在一定土层深度处，取出一均匀土柱。管形土钻取土速度快，又少混杂，特别适用于大面积多点混合样品的采取。但它不太是用于沙性大的土壤，或干硬的粘重土壤。普通土钻：普通土钻使用起来也是比较方便的，但它一般只是用于湿润土壤，不适于很干的土壤，同样也不适用于砂土。另外普通土钻容易混

小学科学基本实验操作及注意事项

小学科学基本实验操作及注意事项 1用托盘天平测物体的质量 1. 旋动调节螺丝调节零点。 2.左托盘放称量物，右托盘放砝码。根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。 3.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。托盘天平只能称准到0.1克。 4.过冷过热的物体不可放在天平上称量。应先在干燥器内放置至室温后再称。 5.取用砝码必须用镊子，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。 2怎样正确使用温度计 (1)温度计的玻璃泡要全部浸入被测液体中; 不要碰到容器底或容器壁; (2)温度计玻璃泡浸入被测液体后要稍候一会儿, 待温度计的示数稳定后再读数; (3)读数时玻璃泡要继续留在被测液体中, 视线与温度计中的液柱上表面相平. 3怎样正确使用测力计 1.被测物体重力不能超过弹簧测力计的量程； 2.读数时，视线应垂至于刻度； 3.在测量前，迎先调零； 4.不用刻度已被损坏的弹簧测力计； 5.待示数稳定后才读数。 如果是测摩擦力，要匀速拉动弹簧测力计。 4实验室制取氧气 排水集气法制取的氧气纯度比排气法要高的多。 分解过氧化氢这个成本太高，而且在加热分解过程中会有水蒸气产生，高锰酸钾由于是固体，加入催化剂二氧化锰很容易分解制得氧气。 注：①试管口略向下倾斜（防止因加热时药品所含湿气变为水蒸气，至管口冷凝成水滴而倒流，使试管破裂）；②用排水法收集氧气，导管口开始有气泡放出时不宜立即收集，当气泡连续地较均匀地放出后再收集（因为开始放出的气泡不纯，含有空气）③排水法收集氧气结束时，应先撤去导管，后停止加热（防止水倒吸入试管，导致热的试管破裂。） 5实验室制取二氧化碳 首先检查气密性:大试管,导管,烧杯(用手捂试管) 再连接装置:铁架台,大试管,导管,集气瓶 再装大理石(石灰石),加入适量稀盐酸,迅速用单孔胶塞盖紧试管,导管通入试管底部,开始收集 接着收集完毕,用玻璃片盖紧集气瓶. 若要验证是二氧化碳,则向集气瓶内加入适量澄清石灰水. 至于你说的顺序排列,我认为并不详细准确. 大致顺序:连(连接装置)-检(气密性)-装(药物)-塞-收(收集)-盖(玻璃片)-验(验

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品

的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。 （液氮既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。终止细胞内外一切生物反应，防止RNA酶的降解反应） 2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol。另外，组织体积不能超过Trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 五、从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。 六、操作步骤 1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。

土壤学实验指导书

土壤学实验指导书（农业资源与环境专业） 华中农业大学

目录

实验一土壤质地的测定 土壤质地是土壤的重要特性，是影响土壤肥力高低、耕性好坏、生产性能优劣的基本因素之一。测定质地的方法有简易手测鉴定法、比重计法和吸管法。本实验介绍比重计法，要求掌握比重计法测定土壤质地的原理，技能和根据所测数据计算并确定土壤质地类别的方法。 一、司笃克斯定律在土壤颗粒分析中的应用 土壤颗粒分析的吸管法和比重计法是以司笃克斯定律为基础的，根据司笃克斯(Stokes,1845)定律，球体在介质中沉降的速度与球体半径的平方成正比，与介质的粘滞系数成反比，关系式为： V：半径为r的颗粒在介质中沉降的速度(厘米/秒)； g：物体自由落体时的重力加速度，为981厘米／秒2； r：沉降颗粒的半径(厘米)； dl:沉降颗粒的比重(克/厘米3)； d2:介质的比重(克／厘米3)； η:介质的粘滞系数(克／厘米.秒)。 这是由于小球在广大粘滞液体中作匀速的缓慢运动时，小球所受阻力(摩擦力)： (π为圆周率)，而球体在介质中作自由落体沉降运动时的重力(F)是由本身重量(P)与介质浮力即阿基米德力(FA)之差： Fˊ=P－FA= 333 1212 444 () 333 r gd r gd r g d d πππ -=- 当球体在介质中作匀速运动时，球体的重力(Fˊ)等于它所受到的介质粘滞阻 力(F)，即 3 12 4 () 3 r g d d π- =6r v πη 又球体作匀速沉降时S=vt(S－距离，厘米；V-速度，厘米/秒；t一时间.秒)。由上式，可求出不同温度下,不同直径的土壤颗粒在水中沉降一定距离所需的时间。 二、方法原理： 将经化学物理处理而充分分散成单粒状的土粒在悬液中自由沉降，经过不同时间,用甲种比重计<即鲍氏比重计)测定悬液的比重变化，比重计上的读数直

土壤学实验

土壤学实验指导 实验一土壤样品的采集制备 一、实验目的 要求学会耕作土壤混合样品采集与处理方法。 二、实验原理 土壤分析样品的采集与处理是土壤分析工作中的一个重要环节，是关系到分析结果及结论是否正确、可靠的先决条件。为使分析的少量样品能反映一定范围内土壤的真实情况，必须正确采集与处理土样。本实验介绍耕层土壤混合样品的采集与制备。 三、材料、仪器与试剂 小铁铲、土壤筛、木棒、广口瓶、标签等。 四、实验步骤 （一）土样的采集 1．采样原则土壤样品的采集是决定土壤分析结果是否可靠的重要环节。由于土壤的不均一性，采样时必须重视土样的代表性，遵循一定的原则和方法。第一，采样时必须避免一切主观因素的干扰，随机采样；第二，为便于样品间的相互比较，应采集等量个体。另外，采样时还要考虑自然因素和人为因素的影响，以减少采样误差。 2．混合样品的采集为研究作物生长期内耕层养分供应情况或了解土壤肥力状况，常直接采集耕层（20cm左右）混合土样，既把多个样点的土样等量的混合均匀，组成一个混合样品进行测定。采样点数及样点分布依地块大小、地形、肥力状况而定。一般采样点至少 5 点以上，通常为 5—20点。样点分布方式有以下三种： （1）对角线法适合于地块小、肥力均匀、地势平坦的田块，采样点约为 5 点； （2）棋盘式法适合于地块大小中等、肥力不匀、地势较平坦的田块，采样点约为 10 点以上； （3）蛇形法适合于地块面积较大、肥力不匀、地势不太平坦的田块，采样点数较多。 采样时，首先将采样点处地面落叶杂物除去，将采样工具垂直入土至采样深度，若用小铁铲可稍斜向下。各点采样深度、重量尽可能均匀一致，并将各点所取样品集中混匀。采样量一般 1kg左右，过多土量用四分法弃去。 （二）土样的制备 1.样品的风干将采回的土样放在木板或塑料布上摊成薄层，置于室内阴凉、干燥、通 风处风干。风干时要经常翻动，捏碎大块，同时挑出石粒、砖块、植物根等非土部分和新生体。切忌阳光下直接曝晒，防止灰尘、酸碱等污染。 2.研磨过筛取适量风干土样，平铺在木板或塑料板上，用木棒辗碎过筛。过筛时先通 过大孔径筛（根据分析项目确定），筛上部分重新研磨直至全部通过，混匀，分成二部分，一部分装瓶待用，另一部分继续研磨全部通过小孔径筛后混匀装瓶。

RNA提取一般步骤总结

RNA提取一般步骤总结 RNA提取原理： | 通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。 RNA提取的一般步骤 所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA 与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。 实验步骤： 破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。 1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。 3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或异丙醇。 4、洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。 5、融解RNA一般使用TE。 6、保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA 时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。 I氯化锂法提取总RNA： 本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。 试验试剂： 1、氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌】 2、悬浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】 试验步骤： 1、对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中。

土壤学实验指导

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实验一土壤样品的采集处理 一、目的： 土壤分析工作中，样品采集是一个极其重要的环节，要求采集的土壤样品必须具有代表性。如果取样缺乏代表性，任何良好的分析工作也得不到可靠的结果，甚至会得出错误的结论。因此，正确地采集样品是土壤分析工作的一个前题，是一项十分细致和重要的工作。 二、土壤样品的采集和制备 土壤采样最基本的要求是采集有代表性的土壤，但代表性的具体要求，应根据实际和研究的目的不同而有所区别。 1、土壤剖面样品 分析土壤基本理化性质，必须按土壤发生层次采样，在选择好挖掘土壤剖面的位置后，现挖一个1×1.5m（1×2m）的长方形土坑，长方形较窄的向阳一面作为观察面，挖出的土壤应放在土坑两侧，土坑的深度根据具体情况确定，一般要求达到母质或地下水即可，大多在1-2m间。然后根据土壤剖面的颜色、结构、质地、松紧度、湿度、植物根系分布等，自上而下的划分土层，进行仔细观察，描述记载，将剖面形态特征逐一记入剖面记载簿内，也可以作为分析结果审查的参考。观察记载后，就自下而上的逐层采集分析样品，通常采集各发生土层中部位置的土壤，而不是整个发生层都采。随后将所采样品放入布袋或塑料袋内，一般采集土样1kg左右，在土袋的内外应附上标签，写明采样地点、剖面号数、土层深度、采样深度、采样日期和采样人。 2、土壤物理性质样品 如果是进行土壤物理性质的测定，须采原状样品，如测定土壤容重和孔隙度等物理性质，其样品可直接用环刀在各土层中部取样。对于研究土壤结构的样品，采样时须注意土壤湿度，不宜过干或过湿，最好在不粘铲的情况下采集。此外，在取样过程中，保持土块不受挤压，不使样品变形，并须剥去土块外面直接与土铲接触而变形的部分，保留原状土样，然后将样品置于铁盒中保存，带回室内进行处理。 3、盐分动态样品 研究盐分在剖面中的分布和变动时，不须按发生层次采样，而自地表起每10cm或20cm采集一个样品。 4、耕作土壤混合样品 为了研究植物或苗木生长期内土壤耕层养分供求状况，采样一般不需挖土坑，只需取耕层土壤20cm左右，最多采到犁底层的土壤。对作物根系较深的（如小麦）土壤，可适当增加采样深度，为了正确地反映土壤养分动态和植物长势间的关系，可根据试验区的面积确定采样点的多少，通常为5-20个点，可采用蛇形取样方法进行采样，每个点上采集的样品集中起来混合均匀。 二、土壤样品的数量