依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织水通道蛋白_9 mRNA表达的影响
?基础研究?
依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织
水通道蛋白29m RNA表达的影响
朱德坤 张小宁
【摘要】 目的 探讨大鼠局灶性脑缺血后脑内水通道蛋白29(AQP29mR2 NA)表达与脑水肿动态变化的关系,评价依达拉奉的干预作用。方法 216只雄性Sp rague2Dawley(S D)大鼠随机分为3组:假手术组(A组,6只),生理盐水组(B 组,大脑中动脉阻断后6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d7个时点,各6只),依达拉奉处理组(C组,同B组),术后即刻予以依达拉奉干预。分别测定脑组织含水量;实时荧光定量PCR(real2ti m e quantitative poly merase chain reacti on,RT2PCR)法检测mRNA表达;用HE染色方法观察病理形态学改变。结果 B组大鼠MCAO 后脑组织含水量呈上升趋势,48h达高峰,各时点均高于与A组(P<0.05)。同时,AQP29mRNA表达量与脑含水量呈相同趋势改变,相关性分析表明AQP29 mRNA表达量(r=0.788,P<0.05)与脑组织含水量呈正相关。B组与C组相比,各时点脑组织含水量明显下降(P<0.05);AQP29mRNA表达显著下调(P< 0.05);组织病理提示脑水肿及神经元损伤程度减轻。结论 大鼠脑缺血后脑内AQP29mRNA表达与脑水肿变化呈正相关,提示AQP29可能参与大脑中动脉阻断后的脑水肿形成。依达拉奉干预可减少AQP29mRNA的表达,从而减轻大鼠大脑中动脉阻断后脑水肿,减少神经元坏死,改善神经功能预后。
【关键词】 脑缺血;水通道蛋白29;实时荧光定量PCR;依达拉奉
Effect of edaravone on the expressi on of AQP29m RNA after foca l cerebra l ische2 m i c i n jury i n ra ts ZHU D e2kun,ZHAN G X iao2ning.D epart m ent of N eurology,the First Affiliated Hospital of X injiang M edical U niversity,U rum qi830000,China Corresponding author:Zhang X iao2ning,Em ail:zxn21960@163.co m
【Abstract】 O bjecti ve To investigate the relati onshi p bet w een dyna m ic chan2 ges of brain eda ma and AQP29mRNA exp ressi on level in rats after m iddle cerebral ar2 tery occlusi on(MCAO),and t o evaluate the effects of Edaravone interventi on.
基金项目:新疆维吾尔自治区科技厅基金项目(项目编号200721112)
作者单位:830000 乌鲁木齐,新疆医科大学第一附属医院神经内科(朱德坤)
通讯作者:张小宁,Email:zxn21960@https://www.wendangku.net/doc/a6297585.html,
M ethods 216Sp rague2Da wley male rats were random ly divided int o three gr oup: shame2operated gr oup(n=6,gr oup A),physi ol ogical saline gr oup including6hours, 12hours,24hours,48hours,72hours,5days and7days afterMCAO(7sub2gr oup s, n=6for each,group B),edaravone2treated group s including the same ti m e points as physi ol ogical saline group s(7sub2group s,n=6for each,gr oup C),with edaravone in2 terventi on after MCAO at once.To weight the water content in rat brain at each ti m e point.The level of AQP29mRNA exp ressi on in brain was detected by real ti m e fluo2 rescent quantitati on poly merase chain reacti on.The pathol ogic changes were observed by HE staining and TTC staining.Results The water content in rat brain of gr oup B increased obvi ously al ong with the p rol ongati on of ti m e foll owingMCAO,and peaked at 48h after MCAO,much higher than that of gr oup A(P<0.05).Meanwhile,the level of AQP29mRNA exp ressi onwere significantly increased in comparis on with gr oup A (P<0.05),which was in consistent with the changes of water content.The correla2 ti on analysis demonstrated that exp ressi on level of AQP29mRNA was(r=0.788,P< 0.05)correlated apparently with the brain water content.I n group C,the brain water content was decreased obvi ously(P<0.05),als o the exp ressi onof AQP29mRNA was downregulated(P<0.05)and pathol ogical damages such as tissue ede ma and neur on necr osis reduced significantly as well.Conclusi on The level of AQP29mRNA ex2 p ressi on was increased greatly in rat brain after MCAO,with the correlati on bet w een AQP29and brain edema,which was suggested AQP29mRNA p layed a role in the for2 mati on of brain ede ma foll owing MCAO.Edaravone was downregulated the level of AQP29mRNA exp ressi onand reduced brain edema after MCAO,t o i m p r ove neur ol ogi2 cal outcome of MCAO in rat.
【Key words】 Cerebral ischem ic;AQP29mRNA;the real2ti m e fluorescence quantitative PCR;Edaravone
缺血性脑血管病(ischem ic cerebr ovascular diseases,I CVD)是神经系统的常见病,致残率和死亡率较高。多年来,脑缺血损伤一直都是研究的热点。大量研究[1]表明,脑缺血损伤主要与氧化应激反应、炎症反应、氧自由基、钙超载、脑水肿和细胞凋亡等多种病理生理机制有关。脑水肿的具体发病机制不是特别清楚。随着水通道蛋白9(Aquaporin29,AQP29)的发现,水通道学说逐渐成为研究的热点,人们试图借此来为脑水肿的防治提供一条新思路。依达拉奉作为一种新型的自由基清除剂,具有捕获羟自由基(?OH)活性的抗氧化剂,化学名为32甲基212苯基222吡唑啉252酮。依达拉奉具有消除自由基、抑制脂质过氧化作用,可抑制脑
细胞的过氧化作用,从而减少梗死体积,改善神经缺损症状,抑制迟发性神经细胞死亡,在临床中取得了良好的效果。对该药是否可通过从调控水通道蛋白9mRNA表达发挥脑保护作用尚无研究见报道。本实验通过大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血损伤模型(m iddle cerebral artery occlusi on,MCAO),探讨了AQP29mRNA表达和与脑含水量变化的关系,以及依达拉奉对缺血再灌注大鼠脑水肿的影响,及其对依达拉奉对脑缺血损伤的保护作用机制。
材料和方法
一、动物及分组
健康成年雄性Sp rague2Dawley大鼠216只,体重(250±20)g,由新疆医科大学基础医学院动物实验中心提供。将大鼠随机分为3组:假手术组(A组,6只);盐水组(B组,MCAO后6h、12h、24h、48h、72h以及5d和7d7个时点,各6只);依达拉奉处理组(C组,同B组)。
二、主要仪器和试剂
Pri m e Scri p t T M RT reagent Kit(Perfect Real Ti m e)(TaKaRa公司);SY BR m Prem ix Ex Taq T M(Perfect Real Ti m e)(TaKaRa公司);Trizol Reagent(美国I nvitr o2 gen);DEPC(美国Sig ma);PCR仪(Syste m9700型)(美国App lied B i osystem s); DYY27C型电泳仪(北京市六一仪器厂);核酸测量仪B i o2Rad.S mart s pec3000 (美国);i Q T M5多重实时荧光定量PCR仪(美国B i o2Rad);依达拉奉注射液(必存)规格:5m l:10mg(批号:802090603)南京先声东元制药有限公司。
三、动物模型的建立
采用改良的Longa等[2]线栓大鼠局灶性脑缺血模型。将各组大鼠麻醉后行右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)。线栓直径约为0.26mm,插入深度约为(18.5±0.5)mm,此时线栓位于大脑中动脉起始端堵塞大脑中动脉。假手术组除不插入线栓外,余操作相同。动物麻醉清醒后参照Longa等评分[3]标准进行神经功能缺陷评分。0分:正常;1分:不能完全伸展左前肢;2分:左侧肢体瘫痪,行走时向左侧转圈;3分:行走向左侧跌倒、不能站立或打滚;4分:无自发活动,有意识障碍。1～3分为模型成功,0分和4分予以剔除。后续试验中补足每组动物数。
四、给药方法
依达拉奉组造模成功术后经腹腔注射给予依达拉奉3mg?kg-1。以后每隔12h予以相同剂量方式给药。缺血组予以等量的生理盐水腹腔注射。假手术组不予给药。
五、脑水含量的测定
采用干、湿重法。动物于规定时点处死后,断头取脑,取病变侧脑组织标本。
首先用电子天平称取湿重。然后,将标本放入105℃恒温烤箱内烘干24～48h至恒重,称取干重。脑水含量用湿重的百分比表示,脑水含量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%。
六、脑组织切片的制作及病理学观察
取缺血侧脑组织冠状切片,进行固定、脱水、包埋成蜡块,连续切片,片厚5μm。HE染色后,光镜下观察脑组织病理变化。
七、总RNA的提取
取缺血侧顶叶大脑皮质约100mg,即冠状面距额极3～9mm大约6mm厚的脑组织块。扇形分出缺血半暗带———大脑纵裂到大脑外侧沟皮层上1/3,立即放进盛有液氮罐中。脑组织快速冷冻3h后,将冻存管放入-80℃超低温冰箱中保存。按试剂盒说明书提取总RNA。提取的总RNA1%琼脂糖凝胶电泳结果(图1:128为随机抽取的待测样本),可见28S、18S、5S三条带(S为沉降系数),确定无DNA污染条带,无明显降解条带,表明提取的总RNA纯度较高,进行下续试验。紫外分光光度计测定总RNA浓度,计算总RNA含量。
图1 提取的总RNA1%琼脂糖胶电泳图
八、总RNA逆转录cDNA的合成
参照Pri m eScri p t T M RT reagent Kit(Perfect Real Ti m e)(TaKaRa Code: DRR037A)试剂盒说明书,在PCR仪上进行逆转录,进行总RNA合成c DNA。具体的操作步骤如下:(1)配制反转录反应液(在冰上进行):5×Pri m eScri p t T M buffer (for Real Ti m e)2μl;Pri m eScri p tT M RT Enzy me M ixⅠ0.5μl;O ligo dT Pri m er(50μM)×10.5μl(25pmol);Random6mers(100μM)×12μl(200pmol);Total RNA500ng(50ng/μl);RNase Free H2O Up t o10μl×2。(2)反转录反应条件如下:42℃60m in(反转录反应);85℃5m in(反转录酶的失活反应);4℃∞(反应结束)。反应产物置于-20℃冰箱保存备用。
九、实时荧光定量PCR法检测AQP29mRNA的表达
AQP29和β2actin引物由TaKaRa公司设计合成。AQP29引物序列为:上游序列:5’2CCAGCTCCATTCAT ATCCAC23’;下游序列:5’2CT AATG ACAACAGGCTC2
CAG23’,扩增的片段长度137bP。β2actin引物序列为:上游序列:5’2GG AG AT2 T ACTGCCCTGGCTCCT A23’;下游序列:5’2G ACTCATCGT ACTCCTGCTTGCTG23’,扩增的片段长度150bp。任意待测cDNA模板按10倍梯度用双蒸水稀释,制成5个标准模板反应管,参照SY BR m Pre m ix Ex Taq T M(Perfect Real Ti m e)(TaKaRa Code:DRR041A)试剂盒说明方法摸索优化反应条件、制定动力曲线和标准曲线。具体的操作步骤如下:(1)配制PCR反应液(在冰上进行):SY BR m Prem ix Ex Taq T M(2×)10μl(1×);PCR For ward Pri m er(10μM)0.5μl(0.2μM×1);PCR Reverse Pri m er(10μM)0.5μl(0.2μM×1);DNA模板2μl(×2);dH2O(灭菌蒸馏水)10μl;Total20μl(×3)。(2)进行Real Ti m e PCR反应(两步法PCR扩增标准程序)条件如下:第1步:预变性,重复1次,95℃3m in;第2步:PCR反应,重复,40次,95℃10s,58.4℃30s;第3步:分离。结果计算以标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得循环阈值(Ct)为纵坐标,绘制标准曲线(图2～7)。常规PCR产物1.5%琼脂糖凝胶电泳结果目的条带清晰,且没有杂带,AQP29扩增片段长度137bp,内参扩增片段长度150bp(图8)。纯化回收的PCR产物送TaKaRa 公司进行测序(图9,10)。测序结果与Genebank中目的基因序列进行比对相符。确定PCR产物为所需的目的基因后,进行下一步实时荧光定量PCR,得出待测样品目的基因AQP29和β2actin表达水平。在PCR反应过程中,设定无c DNA样品空白管作为阴性对照。定量PCR中样本(包括对照及标准品)需要2个重复,并尽可能让各样本扩增效率一致,且接近100±5%。重复间允许的差异小于0.5Ct 值。以管家基因β2actin cDNA为引物的反应管作为内参照,AQP29的结果以AQP29.β2actin的比值表示。
图2 β2actin基因标准品融解曲线图3 AQP9基因标准品融解曲线
图4 β2actin内参基因标准品扩增曲线图5 AQP9内参基因标准品扩增曲线
图6 β2actin基因标准品标准曲线图7 AQP9内参基因标准品扩增曲线
十、统计学处理
统计处理在SPSS16.0统计软件包完成,采用完全随机设计资料单因素方差分析与相关分析,计量资料经过正态性检验和方差齐性检验,计量资料以均数±标准差表示,进一步两两比较采用q检验,P<0.05时统计学差异显著。
结 果
一、各组大鼠不同时间点脑组织含水量(%)比较
从表1可见。制模后6h依达拉奉组与盐水组大鼠脑组织含水量(%)开始上升,至48h达到峰值,而后下降,到7d基本接近6h水平,但仍高于手术组(P <0.05)。依达拉奉组与盐水组在6h,12h,24h,48h,72h以及5d,7d时间点,脑组织含水量(%)均大于假手术组(均P<0.05)。依达拉奉组在这7个时间点脑组织含水量(%)均小于盐水组(均P<0.05)。
图8 RT2PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳图(AQP9片段长度137bp,β2actin片段长度15Obp)左1:假手术组β2actin;右1:假手术组AQP9;左2:盐水组β2actin;右2:盐水组AQP9;左3:依达拉奉组β2actin;右3:依达拉奉组AQP9;左M:DNAmarker;右M:DNAmarker
表1 各组大鼠不同时间点脑组织含水量比较(%,x±s)
组别n 6h 12h 24h 48h 72h 5d 7d
假手术组3678.23±0.0278.32±0.0278.50±0.0178.50±0.0178.60±0.0178.45±0.0178.30±0.01盐水组3679.20±0.02a79.24±0.02a80.30±0.01a83.67±0.01a82.65±0.01a80.76±0.01a79.55±0.01a 依达拉奉组3678.50±0.01ab78.63±0.01ab79.45±0.01ab82.50±0.01ab81.15±0.01ab80.10±0.01ab79.15±0.01ab 注:与假手术组比较,a P<0.05;与盐水组比较,b P<0.05
二、各组大鼠不同时间点脑组织AQP29mRNA表达水平比较
从表2可见,制模6h依达拉奉组与盐水组大鼠脑组织AQP29mRNA表达开始上升,至72h达到峰值,而后下降,7d时表达量小于6h时水平,但仍高于手术组(P<0.05),大鼠在6h,12h,24h,48h,72h以及5d,7d各时间点脑组织AQP29表达水平均大于假手术组(均P<0.05)。依达拉奉组在这7个时间点的脑组织AQP29表达水平均小于盐水组(均P<0.05)。
表2 各组大鼠不同时间点脑组织AQP29mRNA表达水平比较(AQP29/β2actin,x±s)
组别n6h12h24h48h72h5d7d
假手术组363.51±0.243.43±0.183.42±0.203.49±0.163.45±0.123.47±0.053.47±0.05
盐水组3610.51±0.06a14.37±0.06a17.56±0.14a19.75±0.18a20.24±0.08a15.97±0.01a7.15±0.01a 依达拉奉组368.50±0.01ab11.27±0.06ab13.49±0.08ab15.32±0.07ab15.98±0.08ab12.23±0.01ab5.23±0.01ab
注:与假手术组比较,a P<0.05;与盐水组比较,b P<0.05
三、各组大鼠不同时间点脑组织病理学改变的比较
经HE染色光镜观察可见,假手术组各时间点脑皮层组织结构完整,形态正常,神经细胞和胶质细胞排列规则;TTC染色呈红色,为正常脑组织。盐水组脑皮层组织结构不清,组织疏松,神经细胞和胶质细胞排列紊乱,盐水组脑组织病理学改变量进行性发展。建模后7d神经元大量变性坏死,结构消失,组织疏松呈网状,脑组织水肿基本消散,可见胶质细胞增生和新生血管形成。与盐水组比较,依达拉奉组梗死灶明显缩小(图11),各时间点脑组织损伤程度减轻(图11～14)。
图9 AQP9序列
GTTTCTGG AGTCAACATGGCAAAG ACG ATCAG AAGG AGG AACATGGT AG ACACCAC
TTGGT CT ACAAAGGCACCTGGCGTGG AT ATG AATGG AGCTGG A
图10 β2actin序列
G ATCATTGCTCCT CCTG AGCGCAGT ACTCNGT NTGG ATTGG NGGCTCNATCCTGGCCT CA
CTGT CCACCTT CCAGCAG ATGTGG AT CAGCAAGCAGG AGT ACG ATG AGT C
图11 A.假手术组脑皮层组织结构完整,形态正常,神经细胞和胶质细胞排列规则(HE×100);B.假手术组神经细胞、胶质细胞及毛细血管形态正常,结构完整,锥体细胞核大而圆,核仁明显(HE×400);C.缺血组脑皮层组织结构不清,组织疏松,神经细胞和胶质细胞排列紊乱(HE×100);D.假手术组TTC染色呈红色,为正常脑组织;E.盐水组TTC染色呈苍白色为梗死灶;F.依达拉奉组TT C染色梗死灶较盐水组明显减小
图12 1a.盐水组6h胞浆向内缩收,细胞周围出现空隙,伴有轻度细胞内水肿,胞浆着色灰暗,胞核稍增大,染色深,核仁边界清晰,神经纤维正常(HE×400);2a.依达拉奉组6h脑皮层组织早期缺血性改变相对较轻(HE×400);1b.盐水组缺血24h神经细胞周围空隙扩大,伴有中度细胞内水肿,原来稍凹陷的细胞边缘变为向外凸出,胞核缩小并偏位、深染,核仁边界不明显,锥体细胞胞核呈三角形或多角形,神经元轴突轻度肿胀(HE×400);2b.依达拉奉组24h脑皮层组织改变相对较轻(HE×400)
图13 1c.盐水组48h神经细胞周围空隙进一步扩大,伴有重度细胞内水肿,细胞浆透亮,细胞间组织疏松,细胞外间隙增大,胞浆疏松,染色变浅,部分神经细胞变性,细胞膜溶解坏死,胞浆周围空化;核仁消失,核裂解,神经原纤维变性,变粗呈条索状(HE×400);2c.依达拉奉组48h脑皮层组织改变相对较轻(HE×400);1d.盐水组72h神经细胞周围组织更加疏松,细胞外间隙增大呈网状,神经元细胞变性坏死增多,核仁消失,核裂解,神经原纤维变性,呈粗细不等,排列紊乱(HE×400);2d.依达拉奉组72h脑皮层组织改变相对较轻(HE×400)
图14 1e.盐水组5d神经元明显变性坏死,结构消失,组织疏松,核仁消失,核浓染固缩、碎裂,脑组织水肿开始消散,神经细胞空泡变性,可见胶质细胞增生,新生血管形成(HE×400);2e.依达拉奉组5d脑皮层组织改变相对较轻(HE×400);1f.盐水组7d神经元大量变性坏死,结构消失,组织疏松呈网状,脑组织水肿基本消散,可见胶质细胞增生,新生血管形成(HE×400);2f.依达拉奉组7d脑皮层组织改变相对较轻(HE×400)
四、盐水组大鼠不同时间点脑组织脑水含量与AQP29mRNA表达的相关分析
脑水含量与AQP29mRNA表达的变化规律一致,相关分析结果:r=0.788, P<0.05,表明二者具有正性相关。
讨 论
水通道蛋白29(Aquaporin29,AQP29)是水通道蛋白家族中的一员,是一组与水通透有关的细胞膜转运蛋白。目前,从哺乳动物组织内相继分离克隆出至少13种AQP[4],其中脑组织中已发现6种,分别是AQP1、3、4、5、8和9[5]。AQP29是一种特殊亚型,其基本结构同其他AQP一样为跨越细胞膜六次的单肽链。其通透性具有广泛选择性,除了水通透性外,对尿素、多元醇、嘌呤、嘧啶类、单羧基类等中性溶质及类金属物质都具有转运活性[6,7]。最近研究发现,AQP29在脑组织中不仅对与水及溶质的转运平衡、CSF的形成与重吸收、以及渗透压的调节和维持水代谢平衡有关,而且在能量代谢方面亦具有重要作用[9]。近年来,AQP29在缺血性脑血管病中的作用已引起广泛的关注。Badaut等[6]研究发现脑梗死灶周围的皮质、苍白球、杏仁核的星形胶质细胞AQP29免疫标记增强。另外,Manley GT等[14,15]发现缺血梗死灶边界水肿区AQP29表达增强,并和脑水肿的程度呈正相关,提示29可能通过参与水的跨膜转运,参与脑缺血后脑水肿的形成。这些研究均提示AQP29可能在脑水肿的发生和发展中起重要作用。因此,如果能在脑水肿形成的早期及时用抑制剂控制AQP29的过度表达,将有利于减轻脑水肿。依达拉奉是一种新开发的具有捕获羟自由基(?OH)活性的抗氧化剂。研究显示,依达拉奉可通过抑制脑细胞的过氧化,消除自由基作用,而减少脑梗死体积,改善神经缺损症状,抑制迟发性神经细胞死亡,保护血管内皮细胞和神经元[8210]。但是能否通过抑制AQP29的表达抑制缺血性脑水肿的研究国内外还未见报道。
本研究采用定量PCR检测AQP29mRNA的表达。结果显示,脑缺血后AQP2 9mRNA的表达是一个动态的变化过程。脑缺血后6h,AQP29mRNA表达已明显高于正常水平,在第2～3天时达到峰值,以后逐渐回落,第7天时仍比假手术对照组高(P<0.05)。这一期正是细胞内水肿占主导地位的病理阶段,这与Badaut 等[5]实验观察到的结果基本一致。盐水组大鼠缺血后脑组织含水量呈上升趋势,48h达到高峰,各时点均高于假手术组(P<0.05)。同时,AQP29mRNA表达量与脑含水量相同趋势改变,相关性分析表明AQP29mRNA表达量与脑组织含水量呈正相关(r=0.788,P<0.05)。与盐水组比较,本文依达拉奉组干预处理后各时点脑组织含水量明显下降(P<0.05),AQP29mRNA表达量显著下调(P< 0.05),病理学损伤程度减轻。这表明在缺血性脑水肿形成过程中,AQP29基因与脑水肿变化呈正相关,梗死区表达明显增加。结合病理观察结果,AQP29mRNA 表达明显的部位恰好与水肿发生部位相吻合。这些结果进一步证实AQP29mR2 NA表达增强是形成细胞内水肿的关键因素,说明脑缺血后脑水肿的发生发展与
AQP29mRNA的过度表达有密切关系。另一方面表明依达拉奉干预可抑制AQP2 9mRNA表达,从而减轻大鼠MCAO后脑水肿、减少神经元坏死及改善神经功能预后。
目前对AQP29表达调节位点及调节机理仍不清楚。AQP29作为一种糖蛋白,其一级结构与其他AQPs相似,为跨细胞膜6次的单肽链,其氨基和羟基末端均位于细胞内[11]。Kuriyama[12]研究发现,AQP29蛋白细胞内氨基末段(11213,S2 F2K)处、(26229,T2L2S2E)处分别为蛋白激酶C(p r oteinkinase C,PKC)和酪氨酸激酶Ⅱ的结合位点。AQP29基因在启动子区域的2496/2502的位置还包含了TGTTTTC序列。该序列是一种负面胰岛素反应元件(I RE),推测其可能参与了胰岛素抑制AQP29表达的生理过程[11,12],这些分子结构特点提示可能有多条途径调节AQP29的表达。Ya ma mot o等[13]发现,在大鼠星形胶质细胞培养液中加入TP A后,AQP29及其mRNA表达水平下调。这一作用可通过加入PKC后阻断。但是在用蛋白合成抑制剂环已亚胺对细胞进行预处理后,再给予TP A就不会导致AQP29mRNA的表达下调。这说明PKC对AQP29的表达调节发生在转录水平。另外,A ri m a[14]研究发现,在高渗条件下,p38MAPK抑制剂可抑制AQP29 mRNA的表达上调,提示p38MAPK是AQP29表达调节的主要信号通路。Yamamot o等[15]通过培养大鼠星形胶质细胞检测PK A对AQP29的调控作用。结果显示,于星形胶质细胞培养液中加入dbcAMP,AQP29及其mRNA的表达增加;而加入PK A抑制剂———放线菌酮则可抑制dbcAMP诱导AQP29后表达的增加;研究提示PK A、PKC的信号转导途径对AQP29的表达调控均具有重要意义。
总之,本研究的重点发现是依达拉奉干预可减少脑缺血再灌注后AQP29的表达。同时还发现依达拉奉减轻脑水肿,减轻神经细胞损伤方面具有显著脑保护作用。我们推测缺血性脑水肿的形成机制可能为:脑缺血、缺氧所致Na+2K+2 ATP酶活性下降,使细胞内外渗透压失衡,激活了细胞膜外的渗透压感受器,导致AQP29基因表达增强,细胞膜结构发生改变。细胞膜对水的通透性的增加则导致水通道开放,大量水分子流入细胞内形成细胞内水肿。依达拉奉可能是通过下调AQP29mRNA表达,减轻细胞毒性脑水肿,而对脑缺血组织发挥其保护作用的。但是其确切作用机制尚待进一步研究。
参 考 文 献
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(收稿日期:2010202205)
(本文编辑:杨蓓)
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缺血性脑卒中诊疗常规
内二科急性缺血性脑卒中诊疗指南急性缺血性脑卒中（脑梗死）是最常见的脑卒中类型，占全部脑卒中的60%-80%其急性期的时间划分尚不统一，一般指发病后2周内。急性缺血性脑卒中的处理应强调早期诊断、早期治疗、早期康复和早期预防再发。 缺血性脑卒中是指由于脑的供血动脉（颈动脉和椎动脉）狭窄或闭塞、脑供血不足导致的脑组织坏死的总称。有四种类型的脑缺血：短暂性脑缺血发作（TIA）;可逆性神经功能障碍（RIND ）;进展性卒中（SIE）;完全性卒中（CS ）。TIA无脑梗死存在，而 RIND、 SIE和CS有不同程度的脑梗死存在。 急性期诊断与治疗 一、评估和诊断 脑卒中的评估和诊断包括：病史和体征、影像学检查、实验室检查、疾病诊断和病因分型等。 （一）病史和体征 1. 病史采集：询问症状出现的时间最为重要。其他包括神经症状 发生及进展特征，心脑血管病危险因素，用药史、药物滥用、偏头痛、痫性发作、感染、创伤及妊娠史等。 2. 一般体格检查与神经系统体检：评估气道、呼吸和循环功能后，立即进行一般体格检查和神经系统体检。 （二）脑病变与血管病变检查 1. 脑病变检查：（1）平扫CT：急诊平扫CT可准确识别绝大多数颅内出血，并帮助鉴别非血管性病变（如脑肿瘤），是疑似脑卒中患者首选的影像学检查方法。（2）多模式CT:灌注CT可区别可逆性与不可逆性缺血，因此可识别缺血半暗带。但其在指导急性脑梗死治疗方面的作用尚未肯定。（3）标准MRI:标准MRI （T1加权、T2加权及质子相）在识别急性小梗死灶及后颅窝梗死方面明显优于平扫CT可识别亚 临床梗死灶，无电离辐射，不需碘造影剂。但有费用较高、检查时间
脂多糖对人肠微血管内皮细胞水通道蛋白1表达及功能的影响陈信浩
［６］ Ｓｉ ＭＬ，Ｚｈａ Ｓ，Ｗｕ Ｈ，ｅｔ ａｌ．ｍｉＲ－２１－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００７，２６（１９）：２７９９－２８０３． ［７］ ＡｓａｎｇａｎｉＩ Ａ，Ｒａｓｈｅｅｄ ＳＡ，Ｎｉｋｏｌｏｖａ ＤＡ，ｅｔ ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１（ｍｉｒ－２１）ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ＰＤＣＤ４ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００８，２７（１５）：２１２８－２１３６．［８］ Ｚｈｕ Ｓ，Ｗｕ Ｈ，Ｗｕ Ｆ，ｅｔ ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１ｔａｒｇｅｔｓ ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２００８，１８（３）：３５０－３５９． ［９］ Ｍｅｎｇ Ｆ，Ｈｅｎｓｏｎ Ｒ，Ｗｅｈｂｅ－Ｊａｎｅｋ Ｈ，ｅｔ ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＴＥＮ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００７，１３３ （２）：６４７－６５８． ［１０］ Ｇａｂｒｉｅｌｙ Ｇ，Ｗｕｒｄｉｎｇｅｒ Ｔ，Ｋｅｓａｒｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｇｌｉｏｍａ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００８，２８（１７）：５３６９－５３８０． ［１１］ Ｓｅｌａｒｕ ＦＭ，Ｏｌａｒｕ ＡＶ，Ｋａｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１ｉｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ４ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ３［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００９，４９（５）：１５９５－１６０１． ［１２］ 史春梅，陈玲，徐广峰，等．人ｍｉＲ－１７－９２ｃｌｕｓｔｅｒ慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证［Ｊ］．江苏医药，２０１２，３８（６）：６２４－６２７． （收稿日期：２０１２－０６－１１）（供稿编辑：单晓光） ·论著· 脂多糖对人肠微血管内皮细胞水通道 蛋白１表达及功能的影响 陈信浩 纪俊标 吕纯业 戴存才 【摘要】 目的 研究脂多糖（ＬＰＳ）对人肠微血管内皮细胞（ＨＩＭＥＣ）水通道蛋白（ＡＱＰ）１表达及功能的影响。方法 ４０份ＨＩＭＥＣ均分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四组。Ａ、Ｂ、Ｃ组分别经浓度为０．１、１、１０ｍｇ／Ｌ的ＬＰＳ作用；Ｄ组为对照组，只加培养基。各组细胞培养１２ｈ。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＩＭＥＣ ＡＱＰ－１的表达；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＩＭＥＣ ＡＱＰ－１ｍＲＮＡ的表达；放射法测定ＨＩＭＥＣ的摄水功能。结果 随着作用于ＨＩＭＥＣ的ＬＰＳ浓度增加，ＡＱＰ－１蛋白及其ｍＲＮＡ表达和ＨＩＭＥＣ的摄水功能均逐步减少（Ｐ＜０．０５）。结论 ＨＩＭＥＣ ＡＱＰ－１表达与ＬＰＳ浓度呈负性相关。 【关键词】 细菌内毒素；内皮细胞；水通道蛋白１；脂多糖 【中图分类号】 Ｒ３２９ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 ０２５３－３６８５（２０１２）２２－２６４９－０３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ａｑｕａｐｏｒｉｎ １ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ＣＨＥＮ Ｘｉｎｈａｏ，ＪＩ Ｊｕｎｂｉａｏ，ＬＶ Ｃｈｕｎｙｅ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２９，ＣＨＩＮＡ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｏｎ ａｑｕａｐｏｒｉｎ １（ＡＱＰ－１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＨＩＭＥＣ）．ＭｅｔｈｏｄｓＦｏｕｒｔｙ ｐｉｅｃｅｓ ｏｆ ＨＩＭＥＣ ｗｅｒｅ ｅｑｕａｌｌｙ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｉｎｔｏ ４ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ａ（ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＬＰＳ ０．１ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ１２ｈ），Ｂ（ｗｉｔｈ ＬＰＳ １ｍｇ／Ｌ），Ｃ（ｗｉｔｈ ＬＰＳ １０ｍｇ／Ｌ）ａｎｄ Ｄ（ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＱＰ－１ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｉｎ ＨＩＭＥＣ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｗａｔｅｒ ｉｎｔａｋｅｏｆ ＨＩＭＥＣ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｓ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＰＳ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＱＰ－１ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｉｎ ＨＩＭＥＣ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｓｏ ｄｉｄ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｗａｔｅｒ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ＨＩＭＥＣ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＡＱＰ－１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ＬＰＳｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ；Ａｑｕａｐｏｒｉｎ １；ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ［Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１２，３８（２２）：２６４９－２６５１．］ 基金项目：南京市科技计划项目（２０１２０１０８５）；南京市青卫工程资助项目 作者单位：２１００２９ 江苏省，南京医科大学第一附属医院普通外科 （陈信浩、戴存才）；南京医科大学附属江宁医院（陈信浩、纪俊标、吕纯业） 通讯作者：戴存才 Ｅ－ｍａｉｌ：ｄａｉｃｕｎｃａｉｄｙ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ · ９ ４ ６ ２ · 江苏医药２０１２年１１月第３８卷第２２期 Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１２，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．２２
水通道蛋白
水通道蛋白 水通道蛋白是介导水跨膜转运的一大 膜蛋白家族，分布于高等脊椎动物上皮细胞或内皮细胞。结构上由28-KDa 亚单位组成 四聚体，每个亚单位构成孔径约的水孔通道，在渗透压驱动下实现水双向跨膜转运【1】。目前11 种亚型已经在哺乳动物中被确定， 各种亚型的体内分布具有组织特异性，其中水通道蛋白-4 (Aquaporin 4,AQP4)以极化 形式集中分布于中枢神经系统脑毛细血管 周边的星形胶质细胞足突或室管膜细胞【2】。血脑屏障为脑内另一调控水平衡的复合体，由无窗孔的脑毛细血管内皮细胞及细胞间 紧密连接、基底膜、星形胶质细胞等组成，介于血液和中枢神经系统之间，限制血液中某些离子、大分子物质转移到脑实质，此屏障作用为维持CNS 内环境稳定、保障脑功能正常行使提供了重要保障。BBB 分化发育过程中脑毛细血管内皮细胞间紧密连接的形 成虽被认为是其成熟的标志，但BBB 生理功
能的实现有赖于各组成成分间的相互作用。近来对星形胶质细胞调控BBB 物质交换和 脑内水平衡方面的作用日益受到重视，并认为与AQP4 表达有关。 本文就AQP4 与血脑屏障发育及其完整性关系的研究进展作一综述。 分化发育过程中AQP4 的表达 目前由于对鸡胚视顶盖中血管及BBB 分化的研究已较完善，因此常被用于BBB 的研究模型。Nico 及其同事【3】采用免疫细胞化学、分子生物学技术研究了鸡胚视顶盖AQP4 在BBB 分化发育过程的动态表达。免疫电镜显示鸡胚视顶盖发育第9 d，BBB仅由不规则的内皮细胞组成，内皮细胞间紧密连接尚未形成，AQP4 未见表达。待发育至第14 d，Western blot 技术首次在约30 kDa 链附近检测出AQP4 的免疫活性，电镜下显示短的内皮细胞间紧密连接已形成，并串联构成BBB 的微血管，星形胶质细胞间断黏附于血管壁，AQP4 不连续地表达于血管周边，血管周围仍然存在小空隙。发育第20 d BBB 成熟，内皮细胞间紧密连接形成，BBB 微血管
2016急性缺血性脑卒中诊治指南
2016 年中国脑卒中大会发布了《中国急性缺血性脑卒中静脉溶栓指导规范》，现整理如下，供各位参考学习。 急性缺血性脑卒中的发病率、致残率和病死率均高，严重影响人类健康和生活。目前超早期采用重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasmmogen activator, rt- PA) 静脉溶栓是改善急性缺血性脑卒中结局最有效的药物治疗手段，已被我国和许多国家指南推荐，但目前急性缺血性脑卒中溶栓治疗的比例仍然很低。 近期研究显示，约20% 的患者于发病 3 小时之内到达急诊室，12.6% 的患者适合溶栓治疗，只有 2.4% 的患者进行了溶栓治疗，其中使用rt-PA 静脉溶栓治疗为 1.6% 开展急性缺血性脑卒中超早期溶栓治疗的一个主要难点是，大多数患者没有及时送达医院或各种原因的院内延迟。 为使更多急性缺血性脑卒中患者获得溶栓治疗并从中受益，美国等西方发达国家已普遍进行相应的医疗救治体系改革，包括完善院外医疗急救转运网络，组建院内卒中快速抢救小组，开通急诊「绿色通道」，建立卒中中心和卒中中心的认证体系等措施，其核心就是要让公众都知道卒中是急症，卒中发生后应尽快送达有能力进行卒中溶栓治疗的医院，并获得规范性溶栓治疗。 为使溶栓这一有效疗法能更好、更广泛地在我国使用，提高缺血性脑卒中急性期的救治率，脑防委特组织全国脑血管病权威专家制定静脉溶栓指导规范如下，其中的推荐强度和证据等级采用《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014 》的标准。 溶栓相关公众教育 为使急性缺血性脑卒中患者获得及时救治，首先应能够识别脑卒中的发生。研究显示公众对脑卒中临床表现的相关知识仍然十分匮乏。根据加利福尼亚州急性卒中登记(California Acute Stroke Pilot Registry, CASPR) 报告若所有患者能在发病后早期就诊， 则 3 h 内溶栓治疗的总体比例可由 4.3% 上升至28.6%, 因此开展更多的以教育卒中患者更早寻求治疗的宣传活动是必要的。 有效的社区教育工具包括印刷材料、视听节目、网络在线宣传、社区宣讲、板报以及电视广告。卒中教育不应仅针对潜在的患者，也应包括他们的亲属、公共服务部门比如警察以及医护人员，使他们能够在必要时启动急救医疗服务系统。公众教育的关键是当可疑卒中发生时应立即拨打120 等急救电话。 推荐：应积极开展针对大众的科普宣传和对医生进行脑卒中规范化诊治的相关培训，加强全社会脑卒中应尽早救治的意识，减少脑卒中就医的时间延误，尽可能提高急性缺血性脑卒中患者的静脉溶栓使用率。 院前处理
水通道蛋白
水通道蛋白 水通道蛋白（Aquaporin），又名水孔蛋白，是一种位于细胞膜上的蛋白质（内在膜蛋白），在细胞膜上组成“孔道”，可控制水在细胞的进出，就像是“细胞的水泵”一样。 水通道是由约翰霍普金斯大学医学院的美国科学家彼得·阿格雷所发现，他与通过X射线晶体学技术确认钾离子通道结构的洛克斐勒大学霍华休斯医学研究中心的罗德里克·麦金农共同荣获了2003年诺贝尔化学奖。 水分子经过Aquaporin时会形成单一纵列，进入弯曲狭窄的通道内，内部的偶极力与极性会帮助水分子旋转，以适当角度穿越狭窄的通道，因此Aquaporin的蛋白构形为仅能使水分子通过之原因 水通道蛋白的发现 编辑 Agre等(1988)在分离纯化红细胞膜上的Rh多肽时，发现了一个28 kD的疏水性跨膜蛋白，称为形成通道的整合膜蛋白28(channel-forming inte—gral membrane protein，CHIP28)，1991年完成了其cDNA克隆(Verkman，2003)。但当时并不知道该蛋白的功能，在进行功能鉴定时，将体外转录合成的CHIP28 mDNA 注入非洲爪蟾的卵母细胞中，发现在低渗溶液中，卵母细胞迅速膨胀，并于5 min 内破裂。为进一步确定其功能，又将其构于蛋白磷脂体内，通过活化能及渗透系数的测定及后来的抑制剂敏感性等研究，证实其为水通道蛋白。从此确定了细胞膜上存在转运水的特异性通道蛋白，并称CHIP28为Aquaporinl(AQPl)。 水通道蛋白分类 编辑 AQP0 AQP0最初称之为主体内在蛋白(major intrinsic protein，MIP)，在晶状体纤维中细胞中表达丰富，与晶状体的透明度有关．AQpo的突变可能导致晶状体水肿和白内障。小鼠缺乏AQPO将患先天性白内障[61]。 AQP1 AQP1是1988年发现的,开始将这种蛋白称为通道形成整合蛋白(CHIP),是人的红细胞膜的一 种主要蛋白。它可以使红细胞快速膨胀和收缩以适应细胞间渗透性的变化。AQP1蛋白也存在于
水通道蛋白4在中枢神经系统疾病中的研究进展
四综述四 通信作者:曹磊,E m a i l :C a o _L e i 1988@163.c o m 水通道蛋白4在中枢神经系统疾病中的研究进展 吝 娜1,曹 磊2 (1.石家庄心脑血管病医院神经内二科,河北石家庄050000;2.河北医科大学第三医院放射科,河北石家庄050051 ) 摘 要:水通道蛋白(a q u a p o r i n s ,A Q P s )是一跨膜蛋白家族,主要调节体内水的转运,A Q P 4是水通道蛋白家族成员,在中枢神经系统主要表达于星形胶质细胞终足三近年来,A Q P 4在多种神经系统疾病发生发展中的作用机制备受关注,通过深入研究A Q P 4在中枢神经系统疾病中的变化,有助于在分子层面阐明疾病的发生机制,从而为中枢神经系统疾病的诊疗提供新的思路和方法三 关键词:水通道蛋白质4;脑水肿;视神经脊髓炎;阿尔茨海默病;帕金森病;癫痫中图分类号:R 742 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2019)06-0567-05 d o i :10.3969/j .i s s n .1004-583X.2019.06.017 水通道蛋白(A Q P s )是一种膜转运蛋白,它可以转运水分子通过细胞膜,可根据渗透梯度促进双向 水转运三在哺乳动物中,已经有13个水通道蛋白 (A Q P 0-A Q P 12)被发现[1] 三A Q P 的相对分子质量约30000[2],其中A Q P 4是中枢神经系统A Q P s 家 族的主要成员,参与了多种神经系统疾病三 A Q P 4于1994年在同源克隆大鼠的肺组织中发 现三在结构上,A Q P 4存在8个膜嵌入域, 其中包括6个跨膜结构和面向胞质的氨基酸与羧基端三A Q P 4在所有表达的细胞中,主要表现为两种亚型,包括以选择性拼接产生的较长的M 1亚基型,其含有M e t -1位点翻译起始区,由323个氨基酸残基构成; 以及较短的M 23亚型,其含有M e t -23位点翻译起始区,由301个氨基酸残基构成[1] 三A Q P 4分子密集聚集形成正交粒子阵列(O A P s ),其大小取决于A Q P 4-m 1 与A Q P 4-m 23的比例,而A Q P 4-m 23则来稳定O A P 以及促进形成更宽的阵列[3] 三A Q P 4在侧脑室 和导水管的室管膜细胞二脉络丛上皮二软脑膜二下丘脑二视上核二海马齿状回和小脑浦肯野细胞均有显著表达,与神经兴奋二神经元兴奋后细胞外K +清除二细胞迁移和水运动等有关[ 1 ]三1 A Q P 4与脑水肿1.1 脑水肿 脑水肿的特征在于脑组织中水的净增加引发组织肿胀三在头骨的有限空间中脑组织体积的增加直接导致血液灌注减少,导致缺血事件和 颅内压增加[4 ]三目前脑水肿分为3类:细胞毒性脑 水肿,离子性脑水肿,血管源性脑水肿三细胞毒性脑水肿的特点为细胞内水分子聚集而不伴有血脑屏障 破坏三离子性脑水肿是内皮功能障碍的早期阶段,其仍保持血脑屏障的完整三血管源性脑水肿是离子性脑水肿之后内皮功能障碍的第二阶段,其伴有血脑屏障的破坏[ 3 ]三1.2 A Q P 4与脑水肿 尽管在各种脑部疾病中经常观察到脑水肿,但是目前仍然不完全了解水肿形成和消退的分子和细胞机制三虽然脑水肿定义很简单,但脑水肿形成的过程非常复杂,取决于脑部疾病 的类型二严重程度和大脑的发育阶段[5] ,作为位于星形胶质细胞上的水通道,A Q P 4可能在脑水肿过程中起到相关作用,然而,A Q P 4的作用在很大程度上取 决于损伤后的时间和大脑区域等[ 3 ]三在啮齿类动物卒中模型中,A Q P 4早期表达增加与离子性脑水肿和 星形胶质细胞肿胀相一致[ 3] 三在系统性低渗应激后,A Q P 4敲除小鼠显示大脑水摄取减少了31%[6] 三 在大脑中动脉(M C A O )短暂闭塞的卒中小鼠模型中,血管周围星形胶质细胞的A Q P 4表达迅速上调, 其中位于梗死核心和缺血半暗带中的A Q P 4在卒中后1小时达到峰值三但在更严重的卒中模型中没有 观察到A Q P 4表达的增加, 说明在严重缺血情况下,大脑在再灌注早期不能合成A Q P 4[3] 三A k d e m i r 等[7]对全脑缺血模型进行的研究显示,在全脑缺血 后第3天和第5天A Q P 4基因敲除小鼠脑脑含水量显著低于野生型小鼠三说明A Q P 4的表达促进了脑水肿的形成三此外,有研究表明,给予A Q P 4基因敲除大鼠脑内注入生理盐水可以导致颅内压显著升 高[8 ]三然后,增加的A Q P 4表达的时间分布与体内 水肿的消退相关三在大多数脑损伤模型研究中,在损伤发生48小时后检测到A Q P 4表达增加,同时发现A Q P 4表达增多的部位位于损伤部位附近血管周 四 765四‘临床荟萃“ 2019年6月20日第34卷第6期 C l i n i c a l F o c u s ,J u n e 20,2019,V o l 34,N o .6
_依达拉奉治疗急性脑梗死48例
2 症状改善 所有患者随血压下降,临床症状诸如头痛、眩晕、耳鸣、失眠、记忆力减退、心悸等症状明显减轻,生活质量提高。 3 副作用 副作用很少见,2例出现头晕、恶心、乏力等不适无需停药,1例出现血钾浓度下降至 3.2m mol /L,口服补钾后恢复,无1例过敏者。 讨 论 高血压是当今世界上最大的流行病,是脑血管病、冠心病的重要危险因素。血压的急剧升降对靶器官有较大的损害,因此通常所采用的固定剂量1日3次的用药模式,因不能涵盖下半夜及清晨的血压控制,不符合高血压病的治疗,尤其是已有靶器官损害时。理想的药物降压模式应能达到“挫峰、避谷”和恢复昼夜节律的效果[1] ,还要求有利于或不影响糖和脂质代谢,应该全面考虑病人对药物的顺从性、生活质量影响及经济承受能力。利尿剂作为高血压治疗指南推荐的一线降压药物,但一般噻嗪类利尿剂尤其较大剂量时,影响电解质及血脂、血糖代谢,而限制了其应用。吲哒帕胺为非噻嗪类利尿剂,降压作用不仅与钙拮抗剂和利尿作用有关,而且还可以通过降低血磷浓度,降低缩血管前列腺素(TX A 2、PGF 2a )及显著升高舒血管前列腺素(PGI 2、PGE 2)来降压,另外还可以使血浆心钠素升高,肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮降低[2],使血压下降。常规剂量范围是1.25-2.5mg /d 。国外有文献报导,吲达帕胺2.5mg /d 与5mg /d 的降压疗效相仿[3]。在多种降压药物无效 时,该药仍能发挥满意降压效果,并有效逆转左室肥厚,副作用亦小,不增加血糖,不影响血脂。另外还有减少微蛋白尿的作用。其生物利用度高(93%),服用2.5mg 后达到峰值血浆浓度所需的时间为1～2h ,半衰期为14～24h ,故能24h 维持平稳的血浆药物有效浓度,从而减少了血药浓度波动所致的副反应。 本文结果显示,吲哒帕胺是安全、有效、服用方便的降压药物,单独用药有较好的疗效[4],价格便宜,每日晨服药一次,病人有良好的服药顺从性,无血脂、血糖代谢的副作用,对电解质的影响很小,长期应用定期监测血钾[5],但日常剂量下无需另外补钾,适用于轻、中度高血压病的治疗。 参考文献 [1] 钱振环.高血压的靶器官损害时24h 动态血压特征.临床荟萃,1996,12L(1):10. [2] 刘云峰.高血压病的药物治疗.现代诊断与治疗,1998,9(2):125. [3] 叶慧玲,刘嘉眉,曾昭华,等.吲达帕胺合用依那普利治疗老年人单纯收缩期高血压30例疗效评价.陕西医学杂志,2005,34(12):1550. [4] 李起栋,徐江祥,洪钰锟,等.吲哒帕胺和吲哒帕胺联合培哚普利对高血压治疗临床研究.高血压杂志,2002,10(2):124. [5] 李 雷,夏 勇,李东野,等.吲哒帕胺对高血压患者肱动脉血流介导的舒张功能影响.高血压杂志,2006,3(3):222. (收稿:2007-02-15) 依达拉奉治疗急性脑梗死48例 陕西省宝鸡市人民医院神经内科(宝鸡721000) 王秦川 高 英 王惠霞 摘 要 目的:观察依达拉奉治疗急性脑梗死的临床疗效。方法:选择发病72h 内的脑梗死患者94例,随机分为依达拉奉治疗组48例和对照组46例。治疗组应用依达拉奉静脉滴注,剂量为30mg ,2次/d,共计14d,余治疗组与对照组相同。结果:依达拉奉治疗组临床神经功能缺损评分及日常生活活动能力改善均较对照组有显著差异,未见明显不良反应。结论:依达拉奉治疗急性脑梗死安全有效。 主题词 脑梗塞/药物疗法 自由基清除剂/治疗应用 急性脑梗死发病率、致残率、病死率高。目前 主要治疗方法为溶栓、降纤、抗凝、抗血小板聚集 1053 陕西医学杂志2007年8月第36卷第8期
建立大鼠局灶性脑缺血模型的心得
建立大鼠局灶性脑缺血模型的心得 发表时间：2013-05-27T08:40:00.420Z 来源：《中外健康文摘》2013年第15期供稿作者：杨云芳顾玲 [导读] 脑缺血实验动物模型中与临床关系最密切的是局部脑缺血模型，尤其是大中动脉闭塞模型。 杨云芳顾玲（昆明医科大学附属延安医院云南昆明 650051） 【中图分类号】R-33 【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2013）15-0361-02 【摘要】一个理想的标准化动物模型应具有较高的可行性与稳定性,并且应与人类脑梗死的病理状态具有最大的相似程度。而在局灶性脑缺血的动物实验中,动物模型的制作，直接关系到实验研究的意义和价值。参照近年来国内、外有关线栓技术的文献，经过研究，我院成功地制作出大量阻断大鼠大脑中动脉的脑缺血模型,并且对神经功能进行分析评分，积累了一定的经验。 【关键词】局灶性脑缺血模型 随着脑缺血性疾病发病率的升高,越来越多的学者试图通过建立局灶性脑缺血的动物模型来研究脑缺血性疾病的机制和规律,并且已经建立多种制作脑缺血动物模型的方法。我们在进行《神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血的实验研究》的课题研究中，制备了数十例的大鼠局灶性脑缺血模型，由此得出了一定的经验和体会，总结成文与同行共享。 1 现状 脑缺血实验动物模型中与临床关系最密切的是局部脑缺血模型，尤其是大中动脉闭塞模型。传统的方法有手术经颅内闭塞大脑中动脉或通过闭塞颅外颈总动脉来制作局部脑缺血模型[1]。由于所有颅内血管闭塞模型技术要求都较高，促使人们通过闭塞颅外颈总动脉来制作局部脑缺血。然而，由于Willis环能够通过其他未闭塞的颈部血管提供充分的侧枝循环，绝大部分动物如果仅靠闭塞该动脉是不可能产生脑缺血灶的。近来，国外广泛利用大脑中动脉血管内线段栓塞技术制作局灶性脑缺血的模型。线栓技术最先应用在大鼠模型上。1994年Huang等首次将线栓技术应用于大鼠局部永久性脑缺血模型。1997年Hara等线栓技术改进后应用于大鼠局部暂时性脑缺血模型，其操作简便易行，避免开颅，重复性高，尤其因为目前应用最广泛的基因靶向动物是大鼠，且与临床相关的脑缺血模型都可以在大鼠身上制成，这为剖析脑梗死形成的复杂分子机制提供了有力的工具，因此在近来的脑缺血研究中，国内、外学者纷纷采用大鼠线栓模型。 2 建模 2.1实验动物最好选择健康的雄性SD大鼠,体重250～300ｇ。 2.2模型制备：参考ZeaLonga的方法, 制备脑缺血模型（假手术组除不插尼龙线外其余步骤不变）。 2.3神经功能评分参考ZeaLonga的5分制评分标准，在术后2小时及再灌注6小时、1天、3天、7天后进行评分:0分,无神经损伤症状;1分,不能完全伸展对侧前爪;2分,向外侧转圈;3分,向对侧倾倒;4分,不能自发行走,意识丧失。我们发现：永久性脑缺血模型大鼠的模型成功率为75%（有少数大鼠因操作中尼龙线不慎脱出而失血死亡），而暂时性脑缺血模型大鼠成功率更低。 2.4形态学观察术后不同时段在显微镜下脑切片经HE染色后细胞形态的变化，计算梗死灶的大小。 2.5统计学处理各时间点神经功能缺失体征评分数据以均数±标准差(x-±s)表示,各组均数差别采用方差分析进行比较。 2.6模型成功率大鼠经ICA线栓MCA,麻醉清醒后出现神经功能缺损即视为模型制备成功,成功率为75%（少数因操作失误致死者剔除在外）。 3 总结 3.1模型制备 除线栓法外,常用的有颈内动脉注射线段闭塞MCA法、经颞下或经眶入颅电凝或结扎MCA法、光化学诱导MCA血栓形成法等。其中，大鼠大脑中动脉缺血再灌注的腔内线栓法由Koizumi和ZeaLonga首创,该模型将栓线通过颈内动脉一直达到大脑前动脉,阻塞了MCA开口处,并阻断了流向额顶皮质及基底节区的绝大部分血供,留在体外的尼龙线适当拔出后即可复通血流,该法受到了国内外学者的高度重视。 3.2手术切口 目前国内外学者多采用颈部正中切口,我们采用了右侧颈部切口,这样便于肌肉分离（较为顺手），并且出血少、手术视野暴露较好,使颈内外动脉及其分支的分离更易于进行；另外颈部旁侧入口对气管刺激性小,呼吸道分泌物少,手术大鼠的病死率低。 3.3动物品系 我们在实验中采用了SD大鼠,该大鼠MCAO模型产生的梗死灶恒定,变异较小[2]。模型成功率高。 4 心得 4.1应尽量选用雄性大鼠。因为雌性大鼠由于受孕或手术耐受性差等原因病死率很高；并且体重应控制在250～300ｇ之间为宜,因为若体重过重,颅内血管增粗,栓线难以完全阻断MCA血流;体重过轻,栓线则难以插入颅内。 4.2制作栓线的球面应比较光滑。因为粗糙的球面易损伤甚至刺破血管,导致蛛网膜下腔出血,并且可以引起血小板聚集和血栓形成,导致微血管循环的逐渐恶化,加速脑缺血向坏死发展。 4.3手术操作应标准化,并需要一定的外科技巧。我院已用此法制作了大量大鼠局灶性脑缺血模型,组织病理学检查证实该模型产生的基底节区及皮层梗死灶较为稳定,重复性、可靠性及再灌注成功率高,在此模型基础上我们还成功进行了关于脑缺血后干细胞移植的基础研究。因此,该模型在局灶性脑缺血再灌注损伤的研究方面具有较高的价值。 综上所述，令模型可靠和稳定须注意： （1）线段的制备。首先线段的制备要求硅胶树脂涂层要均匀一致，头端要圆钝，避免形成锐尖或弯钩，以防止血管穿破的危险；另外，由于动物血管的个体差异与动物的体质量呈正相关，因此在模型制作中一方面要求个体体质量要尽量一致；另一方面还需要根据体质量的大小选择不同粗细的线段。 （2）动物种系的选择。不同种系的小鼠由于颅底Willis环发育的差异，使得不同模型的要求具有相对的种系选择性。在实验中我们采用相同种系的大鼠。 （3）局限性。准确的栓塞位点较难把握；血管有穿破的危险；由于线段同时闭塞了大脑前动脉及大脑中动脉的起点，因此脑梗死灶过大等。
水通道蛋白的发现及对人体的作用
水通道蛋白的发现及对人体的作用 刘彦成 （渭南师范学院环境与生命科学系陕西渭南 714000）摘要：水通道蛋白(aquaporin，AQP) 是一种对水专一的通道蛋白。具有介导水的跨膜转运和调节体内水代谢平衡的功能。水通道蛋白调节失控与水平衡紊乱等一系列疾病密切相关。 关键词：细胞膜；水通道蛋白（AQP）；跨膜转运；疾病；调节 Abstract:The pass of water protein (aquaporin, AQP) is one kind of adding water single-minded channel protein.Has lies between leads the water the cross membrane transportation and the adjustment body domestic waters metabolism balance function.Pass of water protein adjustment out of control and level balance disorder and so on a series of disease close correlation. Key word:Cell membrane pass of water protein (AQP) cross membrane transportation disease adjusts 1 水通道蛋白的发现 1.1 细胞膜的运输方式 细胞是构成生物的基本单位，细胞与细胞之间则是通过细胞膜来沟通和实现基本的生命活动。细胞膜的主要成分为磷脂和蛋白质，其结构为磷脂双分子层，磷脂双分子层上有糖蛋白，糖蛋白所在一侧为细胞外侧。物质跨膜运输可分为自 图1 细胞膜的立体结构 由扩散（不需能量、载体），协助扩散（不需要能量、需载体），主动运输（要能量、需载体）三种。还有一些大分子物质是通过胞吞、胞吐方式通过细胞膜，它们需要能量、不要载体。另外还有一种很主要的方式就是通道蛋白。 1.2 生物膜水通道的发现【1】 长期以来对于水的运输方式研究者普遍认为主要有两种：即简单的扩散方式和借助离子通道通过磷脂双分子层。 近些年研究者发现某些细胞在低渗溶液中对水的通透性很高, 很难用简单扩散来解释。如将红细胞移入低渗溶液后，很快吸水膨胀而溶血，而水生动物的
缺血性脑卒中的病理机制及药物研究进展
缺血性脑卒中的病理机制及药物研究进展 缺血性脑卒中已成为威胁人类健康的重要因素，其发病率和死亡率呈不断上升趋势，因此探讨缺血性脑卒中的发病机理及其药物研究，对于预防和治疗该病具有重要的意义。本文阐述了缺血性脑卒中的发病机制及治疗药物的研究进展。 标签：缺血性脑卒中；发病机制；治疗药物 脑卒中，又称中风，是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病。脑卒中分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中大约占所有脑卒中的80%，是指局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧而发生病变坏死。缺血性脑卒中具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点，已成为人类健康的一大威胁。通过研究缺血性脑卒中的发病机制，可为临床预防和治疗该病提供有效的理论依据。 1病理机制 缺血性脑卒中发生后，由于大脑血流供应中断，引起能量代谢障碍和兴奋性神经递质的释放。能量代谢障碍①诱导诱导氧自由基的产生和线粒体功能损伤，从而导致细胞膜的完整性遭到破坏；②则导致离子泵功能障碍，使大量的Ca2+、Na+等离子内流，诱导了大量酶及炎症因子的产生，导致DNA断裂和细胞骨架的破坏。大量的兴奋性神经递质丛神经轴突末端释放后与相应的受体作用而产生兴奋性毒性。能量耗竭、Ca2+内流、兴奋性毒性以及炎症反应等机制共同导致了细胞凋亡。 1.1能量耗竭和酸中毒脑组织在缺血、缺氧状态下，细胞的能量代谢转为无氧酵解，使细胞出现能量耗竭。无氧酵解引起脑组织缺血性乳酸酸中毒，细胞Na+-K+泵功能损伤，K+大量外溢，同时Na+、Cl-及Ca2+大量流人细胞内引起细胞损伤；缺血区乳酸堆积还可引起神经胶质和内皮细胞的水肿和坏死，加重缺血性损害。 1.2细胞内Ca2+超载细胞Ca2+超载可通过下述机制导致细胞死亡：①大量Ca2+沉积于线粒体，干扰氧化磷酸化，使能量产生障碍；②细胞内Ca2+依赖性酶类过度激活可使神经细胞骨架破坏；③激活磷脂酶，使膜磷脂降解，？訩通过生成大量自由基加重细胞损害；？訪可激活血小板，促进微血栓形成，在缺血区增加梗死范围；④脑缺血时，脑血管平滑肌和内皮细胞均有明显的Ca2+超载。前者可致血管收缩、痉挛，血管阻力增加，延迟再灌流，从而脑梗死灶扩大；后者可致内皮细胞收缩，血脑屏障通透性增高，产生血管源性脑水肿。 1.3兴奋性氨基酸毒性作用中枢神经系统中主要的神经递质是氨基酸类。兴奋性毒性指脑缺血缺氧造成的能量代谢障碍直接抑制细胞质膜上Na+-K+-ATP 酶活性，使胞外K+浓度显著增高，神经元去极化，兴奋性氨基酸（EAA）在突触间隙大量释放，因而过度激活EAA受体，使突触后神经元过度兴奋并最终死
水通道蛋白的基本结构与特异性通透机理
水通道蛋白的基本结构与特异性通透机理 王晶桑建利 （北京师范大学生命科学学院北京 100875） 摘要水通道蛋白是一个具有跨膜运输水分子功能的蛋白家族。从1988 年Agre 等发现水通道蛋白起，目前在不同物种中已经发现了200 余种水通道蛋白，其中存在哺乳动物体内的有13 种。概述了水通道蛋白的结构、组织特异性分布及特异性通透机理。 关键词水通道蛋白水分跨膜转运 水分子的跨膜转运对维持不同区域的液体平衡和内环境稳态非常重要。水分子作为一种不带电荷且半径极小的极性分子，很早被证实能通过自由扩散穿透脂质双分子层。在发现水通道蛋白以前，人们一直认为这是水分子透过质膜的唯一方式。但通过实验发现，红细胞和肾小管细胞中水的通透速率之快远非简单扩散强度所能提供的，因此猜测，质膜上可能存在某种通道介导水的转运。 1 水通道蛋白的发现 1988年，Agre 等从人类红细胞膜上纯化分离分子量为32×106的Rh 多肽时，偶然鉴定到一种新的分子量为28×106的整合膜蛋白，并且通过免疫印迹发现这类蛋白也存在于肾脏的近端肾小管中［1］，把它称为类通道整合膜蛋白（channel-like integralmembrane protein, CHIP28）。随后，在1991 年Agre 和Preston 成功克隆得到了CHIP28 的cDNA，通过分析其编码的氨基酸序列，发现CHIP28 含有6个跨膜区域、2个N-糖基化位点、且N 端和C 端都位于膜的胞质一侧。另外，对比CHIP28 与早期从牛晶体纤维中克隆得到的主要内源性蛋白（major intrinsicprotein,MIP）的DNA 序列，发现二者具有高度同源性。由于很早以前就证实了MIP 家族的成员蛋白参与形成允许水和其他小分子通透的膜通道，因此，推测CHIP28 可能也具有类似功能［2］。1992 年，Preston 等通过在非洲爪蟾的卵母细胞中表达CHIP28，首次证实它是一种水通道蛋白。非洲爪蟾的卵母细胞对水具有极低的渗透性，当向其中显微注射体外转录的CHIP28 的RNA后，卵母细胞在低渗溶液中迅速膨胀，并于5 min内破裂。这一现象表明注射CHIP28 的RNA 后卵母细胞膜的水通透性有了明显提高。为了进一步确定CHIP28 的功能，将提纯的CHIP28 构建在蛋白磷脂体中，构建后的蛋白磷脂体对水的通透性增长了50 倍，但对尿素却不具备通透性［3］。这些结果最终证实了CHIP28 为水通道蛋白，后来它被命名为水通道蛋白-1（aquaporin-1，AQP1）。水通道蛋白的发现，开辟了一个崭新的领域。随着更多亚型的发现，水通道蛋白相关研究成为了膜转运方向的研究热点，Agre 也因其对水通道蛋白做出的突出贡献而获得2003 年诺贝尔化学奖。 2 水通道蛋白的分子结构 水通道蛋白分布广泛，目前已在哺乳动物、两栖类、植物、酵母、细菌以及各种各样的有机体中发现水通道蛋白的存在。水通道蛋白是一类高度保守的疏水小分子膜整合蛋白，各种亚型之间蛋白序列及三维结构非常相似。哺乳动物水通道蛋白的分子大小在26×106～34×106之间，氨基酸序列同源性为19%~52%［4］。因水通道蛋白的三维结构相似，一般以AQP1的结构作为代表。AQP1 是一条由269 个氨基酸残基构成的单肽链，对比AQP1 分子前后半段的氨基酸序列，发现2 段序列具有相关性，推测AQP1在进化上可能是通过基因复制而来。单肽链
依达拉奉治疗急性脑栓塞的临床效果与不良反应观察
依达拉奉治疗急性脑栓塞的临床效果与不良反应观察 目的观察分析依达拉奉治疗急性脑栓塞的临床效果与不良反应。方法将我院于2016年4月～2017年5月期间收治的80例急性脑栓塞患者，作为对象，采取抽签的方式，分为观察组（n=40）与对照组（n=40）。对照组，血栓通治疗，观察组，联合血栓通与依达拉奉治疗，对比分析临床疗效及不良反应情况。结果观察组，治疗总有效率为92.5%（37/40），对照组为80%（32/40），组间对比，差异显著，存在统计学意义（P＜0.05）。观察组，不良反应率为2.5%（1/40），对照组为5%（2/40），经对比，无明显差异（P>0.05）。结论依达拉奉治疗急性脑栓塞，疗效佳，且无明显的不良反应，安全性高。 标签：依达拉奉；急性脑栓塞；不良反應 急性脑栓塞，起病突然，常见睡眠时，或者安静休息状态下，发病，数小时或1～2天内，病情迅速发展，常伴有眩晕、耳鸣、半身不遂、头痛等症状，加重患者身心负担，严重影响患者日常生活。在此，本文以80例患者为对象，探讨分析依达拉奉治疗急性脑栓塞的临床效果与不良反应。现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 将我院于2016年4月～2017年5月期间收治的80例急性脑栓塞患者，作为对象，采取抽签的方式，分为观察组（n=40）与对照组（n=40）。对照组，21例男性，19例女性，31-65岁，平均（46.2±6.93）岁。观察组，24例男性，16例女性，30～69岁，平均（47.5±5.28）岁。对比分析2组患者的临床资料，如性别、年龄等，组间无明显差异（P>0.05），虽然，不具统计学意义，但存在可比性。 1.2 方法 （1）对照组：血栓通治疗，添加5 mL血栓通至10%葡萄糖溶液中，予以静脉滴注，1次/d，持续用药2周。（2）观察组：联合血栓通与依达拉奉治疗，即在对照组基础上，在250 mL生理盐水中，添加30 mg依达拉奉，予以静脉滴注，持续用药2周。所有患者均接受常规治疗，例如，控制血压及血脂、调控水电解质。 1.3 观察指标及疗效评定标准 1.3.1 观察指标 经2周治疗后，评价患者临床疗效，统计患者治疗期间出现的不良反应情况。
水通道蛋白1在哺乳动物体内的分布及功能_蔡倩倩
解剖科学进展 Progress of Anatomical Sciences 2012 Sep,18(5):469~472 水通道蛋白1在哺乳动物体内的分布及功能 *蔡倩倩，高俊英，谭美芸，肖 明 （南京医科大学人体解剖学系，江苏 南京 210029） 【摘要】 水通道蛋白1（aquaporins1，AQP1）是参与水分子跨膜转运的重要膜通道蛋白家族成员之一，广泛分布于各组织中，在机体物质代谢和水平衡中起着重要的作用。本文就AQP1在哺乳动物各组织中的表达和分布及其参与脑脊液的产生、细胞生物学特性的调节和感觉传导等方面相关功能的研究现况和进展作一综述。 【中图分类号】 Q 469 【文献标识码】 A 【文章编号】 1006-2947（2012）05-0469-04 【收稿日期】 2011-12-05 【基金项目】国家自然科学基金资助项目 ( Ky1010121091111127 )*通讯作者（To whom correspondence should be addressed） Distribution and function of aquaporin 1 in the mammalian body *CAI Qian-qian, GAO Jun-ying , TAN Mei-yun, XIAO Ming ( Department of Anatomy, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China ) 【Abstract】 Aquaporin1 (AQP1), one of the most important water-transport membrane channel protein family members, is extensively distributed in various tissue and contributes to the maintenance of metabolism and water balance. In this review, we summarized the localization and expression of AQP1 in different tissues in the mammalian body and recent progress of its role in the cerebrospinal fluid production, cellular biological characteristic modulation and sensory transduction. Agre研究小组（1988）在分离红细胞膜、纯化RT-PCR、原位杂交，组织化学、免疫电镜、Rh多肽时发现了一个28kDa的疏水性跨膜蛋白，并Western blot等方法的研究从基因和蛋白水平证实于1991年完成了对该蛋白的cDNA克隆，分析得出其AQP1在哺乳动物体内的分布。结果表明AQP1广泛是由269个氨基酸组成的多肽序列，他们将之命名为分布于直接参与液体平衡调节的组织和细胞，如肾[1,2]单位的近端小管和髓袢降支细段上皮细胞的顶质CHIP28（28kDa的通道样整合膜蛋白）。由于其在膜、红细胞膜、肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细红细胞膜表面的表达量较高，而红细胞对水分子有胞、肝胆管、胆囊、睫状体和晶状体上皮以及角膜高度通透性，因而推测该蛋白可能参与水分子的跨内皮细胞的顶侧和基底侧膜以及脉络丛上皮细胞的膜转运。为此，他们将非洲爪蟾的卵母细胞转染[4, 5]CHIP28 RNA后发现其对水的通透性增加，从而证实顶膜。不仅如此，在神经组织中也发现了AQP1的[3]表达与分布。如鼠类的三叉神经节、背根神经节中CHIP28参与水分子的跨膜转运。1997年国际基因组[6]将这种蛋白正式命名为水通道蛋白1（aquaporin 1， 部分初级感觉神经元；人类的脑内星形胶质细胞除[7]AQP1）。Arge也因此获得2003年的诺贝尔化学奖。了表达AQP1 外，也表达AQP4。人类内脏神经丛内[8]的胶质细胞和坐骨神经轴突亦表达AQP1。1 AQP1在组织中的表达与分布 2 AQP1在脑脊液的产生过程中起重要作用 AQP1作为第一个被发现的水通道蛋白，在机体多种组织细胞上均有表达，在与体液产生和循环密大量的研究表明AQP1在脑脉络丛上皮细胞上特切相关的上皮细胞与内皮细胞中含量尤其丰富，在异性分布，并参与脑脊液的产生和循环过程。来自[9]水转运和平衡方面起重要作用。一系列基于免疫、 Oshio等的研究表明AQP1基因敲除小鼠脑脊液的生成较野生型小鼠有所减少，减少量为20%-25%。这一数据表明，脉络丛参与60%-80%脑脊液的生成，脉络丛外的脑实质细胞辅助这一过程，当前者结构