当前位置：文档库 › 蛋白酶切位点

蛋白酶切位点

Enzymes E.C.Number Cleavage sites Serine proteases E.C.3.4.21.

α-chymotrypsin(胰凝乳蛋白酶，糜蛋白酶)E.C.3.4.21.1Tyr-|-Xaa,Trp-|-Xaa,Phe-|-Xaa,and

also Leu-|-Xaa,Met-|-Xaa,

Trypsin(胰朊酶，胰蛋白酶) E.C.3.4.21.4Arg-|-Xaa,Lys-|-Xaa,

Pancreatic elastase(胰弹性蛋白酶) E.C.3.4.21.36Ala-|-Xaa,and also Gly-|-Xaa,

Val-|-Xaa,Ser-|-Xaa,

Thrombin(凝血酶) E.C.3.4.21.5Arg-|-Gly,

Plasmin(胞质素，胞浆素) E.C.3.4.21.7Lys-|-Xaa,>Arg-|-Xaa

Prolyl oligopeptidase,or prolyl

endopeptidase

E.C.3.4.21.26Pro-|-Xaa,>>Ala-|-Xaa

Plasma kallikrein(血浆激肽释放酶) E.C.3.4.21.34Arg-|-Xaa,Lys-|-Xaa,including

Arg-|-Ser,Lys-|-Arg,

Leukocyte elastase(白细胞弹性蛋

白酶

),or neutrophil elastase(中性白细

胞弹性蛋白酶),or lysosomal

elastase(溶酶体弹性蛋白酶)

E.C.3.4.21.37Val-|-Xaa,Ala-|-Xaa,

Cysteine proteases E.C.3.4.22.

Cathepsin B(组织蛋白酶) E.C.3.4.22.1Arg-Arg-|-Xaa,and also Leu-|-Xaa,

Ala-|-Xaa,Phe-|-Xaa,Trp-|-Xaa,

Clostripain(梭菌蛋白酶),or endoproteinase Arg-C E.C.3.4.22.8Arg-|-Xaa including Arg-|-Pro,but not

Lys-|-Xaa

Calpain(钙激活中性蛋白酶)-1,or μ-calpain E.C.3.4.22.52Met-|-Xaa,Tyr-|-Xaa and

Arg-|-Xaa(with Leu or Val as the P2

residue)

Aspartic acid proteases E.C.3.4.23.

Pepsin(胃朊酶，胃蛋白酶) E.C.3.4.23.1Preferentially Phe-|-Xaa,Tyr-|-Xaa,

and also Leu-|-Xaa,and

Trp-|-Xaa,,ideally with Xaa=

Phe,Trp,or Tyr

Cathepsin(组织蛋白酶)D E.C.3.4.23.5Preferentially Phe-|-Xaa,Tyr-|-Xaa,

and also Leu-|-Xaa,ideally with Xaa

≠Ala or Val

Metalloproteases E.C.3.4.24.

Neprilysin(脑啡肽酶),or enkephalinase(脑啡肽酶),or neutral endopeptidase E.C.3.4.24.11Xaa-|-Tyr,Xaa-|-Phe,Xaa-|-Trp,and

Xaa-|-Leu,

Thimet oligopeptidase(甲拌磷寡肽酶),or endo-oligopeptidase A,or endopeptidase(肽链内切

酶)24.15,or pz-peptidease(肠促胰酶素)E.C.3.4.24.15Xaa-|-Arg,Xaa-|-Ser,Xaa-|-Ile,

Xaa-|-Ala,Xaa-|-Gly,

Aminopeptidases E.C.3.4.11.N-term

Leucyl-aminopeptidase E.C.3.4.11.1Preferentially Leu-|-Xaa,but not

Arg-|-Xaa,and Lys-|-Xaa,

Aminopeptidase M or N,or alanyl-aminopeptidase,or membrane alanine aminopeptidase E.C.3.4.11.2Preferentially Ala-|-Xaa,and

Tyr-|-Xaa,if Yaa-Pro-|-Xaa in term

with Yaa=Ala,Val,Leu,Ile,Phe,Tyr or

Trp,then the dipeptide Yaa-Pro could

be released

Aminopeptidase B E.C.3.4.11.6Arg-|-Xaa,Lys-|-Xaa, Aminopeptidase A,or

angiotensinase,or

glutamyl-aminopeptidase

E.C.3.4.11.7Glu-|-Xaa>>Asp-|-Xaa,

Dipeptidyl-peptidases and

tripeptidyl-peptidases

E.C.3.4.14.N-term(di-and tripeptides)

Dipeptidyl-peptidase I,or cathepsin(组织蛋白酶)C or J E.C.3.4.14.1Xaa-Yaa-|-Zaa,if Xaa≠Arg or Lys,or

Yaa≠Pro,or Zaa≠Pro

Dipeptidyl-peptidase IV E.C.3.4.14.5Preferentially Xaa-Pro-|-Zaa,(but also

Xaa-Ala-|-Yaa)with Yaa≠Pro or Hyp Prolyl tripeptyl-peptidase E.C.3.4.14.12Xaa-Yaa-Pro-|-Zaa,if Zaa≠Pro Peptidyl-Dipeptidases E.C.3.4.15.C-term

Peptidyl-depeptidase A,or angiotensin-converting enzyme E.C.3.4.15.1Xaa-|-Yaa-Zaa,if Yaa≠Pro or Zaa≠

Asp or Glu

Metallo-carboxypeptidases E.C.3.4.17.C-term

Carboxypeptidase A E.C.3.4.17.1Xaa-|-Yaa if Yaa≠Asp,Glu,Arg,Lys

or Pro

Carboxypeptidase B,or E.C.3.4.17.2Xaa-|-Arg and Xaa-|-Lys

protaminase

Carboxypeptidase N,or

Lysine(arginine),

Carboxypeptidase(羧基肽酶),or

kininase I(激肽酶)

E.C.3.4.17.3Xaa-|-Lys>>Xaa-|-Arg Carboxypeptidase U or R E.C.3.4.17.20Xaa-|-Arg and Xaa-|-Lys

Glutamate Carboxypeptidase II,or folate hydrolase E.C.3.4.17.21Xaa-|-Glu,preferentially with Xaa=

Asp or Glu

蛋白酶酶切位点

蛋白酶酶切位点木瓜蛋白酶巯基蛋白酶具有广泛特异性TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白,烷化剂胃蛋白酶酸蛋白酶广泛特异性胃蛋白酶抑制素胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶在K或R之后TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,α巨球蛋白人体20种氨基酸及其英文缩写

名称三字符号单字符号丙氨酸Ala A 精氨酸Arg R 天冬氨酸Asp D 半胱氨酸Cys C 谷氨酰胺Gln Q 谷氨酸Glu/Gln E 组氨酸His H 异亮氨酸Ile I 甘氨酸Gly G 天冬酰胺Asn N 亮氨酸Leu L 赖氨酸Lys K 甲硫氨酸Met M 苯丙氨酸Phe F 脯氨酸Pro P 丝氨酸Ser S 苏氨酸Thr T 色氨酸Trp W 酪氨酸Tyr Y 缬氨酸Val V 【生化】特异性蛋白酶的酶切位点胰蛋白酶arg、lys，得到以arg、lys为C末端残基的肽段。胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr 等疏水aa。胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。木瓜蛋白酶arg、lys。葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。CNBr断裂Met。羟胺断裂asn—gly间的肽键。二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。木瓜蛋白酶（Papain），又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，约占可溶性蛋白质的20%；及纤维素酶等不同的酶。番木瓜未成熟果实中含有木瓜蛋白酶(Papain)、木瓜凝乳蛋白酶A(Chymopapain A )、木瓜凝乳蛋白酶B(Chym opapain B )、木瓜肽酶B (PapayaPeptidase B ) 等多种蛋白水解酶。且已知四种半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性。其中，木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。

常用限制性内切酶酶切位点汇总

Acc65I识别位点AccI识别位点AciI识别位点AclI识别位点AcuI识别位点 AfeI识别位点AflII识别位点AflIII识别位点AgeI识别位点AhdI识别位点AleI识别位点AluI识别位点AlwI识别位点AlwNI识别位点ApaI识别位点ApaLI识别位点ApeKI识别位点ApoI识别位点AscI识别位点AseI识别位点AsiSI识别位点AvaI识别位点AvaII识别位点AvrII识别位点BaeI识别位点BamHI识别位点BanI识别位点BanII识别位点

BbvCI识别位点BbvI识别位点 BccI识别位点BceAI识别位点BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点 BlpI识别位点 Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点BmtI识别位点BpmI识别位点Bpu10I识别位点BpuEI识别位点BsaAI识别位点BsaBI识别位点BsaHI识别位点BsaI识别位点BsaJI识别位点BsaWI识别位点BsaXI识别位点BseRI识别位点BseYI识别位点

BsiEI 识别位点BsiHKAI 识别位点BsiWI识别位点BslI 识别位点BsmAI识别位点 BsmBI识别位点BsmFI识别位点BsmI识别位点BsoBI识别位点Bsp1286I识别位点BspCNI识别位点BspDI识别位点BspEI识别位点BspHI识别位点BspMI识别位点BspQI识别位点BsrBI识别位点BsrDI识别位点BsrFI识别位点BsrGI识别位点BsrI识别位点BssHII识别位点BssKI识别位点BssSI识别位点BstAPI识别位点BstBI识别位点BstEII识别位点BstNI识别位点

常用限制性内切酶酶切位点保护残基

酶切位点保护碱基-PCR引物设计用于限制性内切酶发布: 2010-05-24 20:19| 来源:生物吧| 编辑:刘浩| 查看: 161 次本文给出了分子克隆中常用限制性内切酶的保护碱基序列，如AccI，AflIII，AscI，AvaI，BamHI，BglII，BssHII，BstEII，BstXI，ClaI，EcoRI，HaeIII，HindIII，KpnI，MluI，NcoI，NdeI，NheI，NotI，NsiI，PacI，PmeI，PstI，PvuI，SacI，SacII，SalI，ScaI，SmaI，SpeI，SphI，StuI，XbaI，XhoI，XmaI，为什么要添加保护碱基？在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相临的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边的酶切位点切割。该如何添加保护碱基？添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的。添加什么保护碱基，如果严格点，是根据两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量。如果某条引物Tm值偏小，GC%较低，添加时多加G或C，反之亦反。为了解不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求，NEB采用了一系列含识别序列的短双链寡核苷酸作为酶切底物进行实验。实验结果对于确定双酶切顺序将会有帮助（比如在多接头上切割位点很接近时），或者当切割位点靠近DNA末端时也很有用。在本表中没有列出的酶，则通常需在识别位点两端至少加上6个保护碱基，以确保酶切反应的进行。实验方法：用γ-[32P]ATP在T4多聚核苷酸激酶的作用下标记0.1A260单位的寡核苷酸。取1μg已标记了的寡核苷酸与20单位的内切酶，在20°C条件下分别反应2小时和20小时。反应缓冲液含70mM Tris-HCl (pH 7.6), 10 mM MgCl2, 5 mMDTT及适量的NaCl或KCl（视酶的具体要求而定）。20%的PAGE（7M尿素）凝胶电泳分析，经放射自显影确定酶切百分率。本实验采用自连接的寡核苷酸作为对照。若底物有较长的回文结构，切割效率则可能因为出现发夹结构而降低。

不同的酶切位点

ApaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5'GGGCC^C 3' BamHI（类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^GATCC 3' BglII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^GATCT 3' EcoRI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^AATTC 3' HindIII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^AGCTT 3' KpnI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GGTAC^C 3' NcoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^CATGG 3' NdeI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' CA^TATG 3' NheI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^CTAGC 3' NotI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GC^GGCCGC 3' SacI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GAGCT^C 3' SalI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^TCGAC 3' SphI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GCATG^C 3' XbaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' T^CTAGA 3' XhoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^TCGAG 3'

常用限制性内切酶酶切位点

AatII 识别位点 Acc65I 识别位点 AccI 识别位点 AciI 识别位点 AclI 识别位点 AcuI 识别位点 AfeI 识别位点 AflII 识别位点 AflIII 识别位点 AgeI 识别位点 AhdI 识别位点 AleI 识别位点 AluI 识别位点 AlwI 识别位点 AlwNI 识别位点 ApaI 识别位点 ApaLI 识别位点 ApeKI 识别位点 ApoI 识别位点 AscI 识别位点 AseI 识别位点 AsiSI 识别位点

AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI 识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点 BbsI识别位点 BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点BcgI识别位点BciVI识别位点BclI识别位点 BfaI识别位点BfuAI识别位点BglI识别位点BglII识别位点BlpI识别位点Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点

BmtI 识别位点 BpmI 识别位点 Bpu10I 识别位点 BpuEI 识别位点 BsaAI 识别位点 BsaBI 识别位点 BsaHI 识别位点 BsaI 识别位点 BsaJI 识别位点 BsaWI 识别位点 BsaXI 识别位点 BseRI 识别位点 BseYI 识别位点 BsgI 识别位点 BsiEI 识别位点 BsiHKAI 识别位点 BsiWI 识别位点 BslI 识别位点 BsmAI 识别位点 BsmBI 识别位点 BsmFI 识别位点 BsmI 识别位点

蛋白酶专一性酶切位点地影响因素分析报告

蛋白酶专一性酶切位点的影响因素分析摘要：生物活性肽(bioactive peptides)是具有特殊生理功能的肽。酶法水解蛋白质广泛用于制备生物活性肽，但酶解法存在目标肽得率低、副产物过多的缺点。蛋白酶和蛋白质的选择是关键步骤，局部构象、三维结构、实验条件以及其它偶然因素也会影响蛋白水解酶的酶切效果。本文综述了温度、pH值、温度和pH值共同作用、金属离子对酶切位点的影响，旨在为研究酶切规律、制备高得率活性肽提供理论基础。关键词：生物活性肽；蛋白酶；水解条件；酶切位点 Influencing Factors Analysis of Protease Specific Cleavage Sites Abstract:Bioactive peptides are fragments with specific amino acid sequences that exert a positive physiological influence on the body. Many reported Bioactive peptides are produced by enzymatic hydrolysis,but there are disadvantages of by-product and low yield.The choice of protease and protein source is a key step,and many factors such as local conformation,tertiary structure, experimental conditions and causal interference can influence the protease hydyolysis.This article presents the influencing fators,temperature,pH values,temperature combined pH values and metal ions included,to provide theoretical basis for enzymatic law analysis and higher yield bioactive peptides production. Key words:bioactive peptides;protease;hydrolysis conditions;protease cleavage sites 1.前言生物活性肽(bioactive peptides)是具有特殊生理功能的肽，是氨基酸以不同组成和排列方式构成的不同肽类的总称（氨基酸数目一般小于100）。生物活性肽有的是天然存在的，如谷胱甘肽、催产素、加压素、舒缓激肽、部分抗菌肽等，有的生物活性肽是以非活性的状态存在于某些蛋白质中，当用特定的蛋白酶水解后被释放出来，才成为有特定生理活性的肽。同种蛋白质经不同的蛋白酶酶解后，可以产生具有不同氨基酸序列、不同生理功能的生物活性肽，如大豆蛋白、

南极磷虾胰蛋白酶的结构分析及适冷性机制研究

南极磷虾胰蛋白酶的结构分析及适冷性机制研究周婷婷，王锡昌，李燕（上海海洋大学食品科学与工程学院，上海 201306）摘要：本文基于酶的纯化鉴定、动力学分析、序列比对和结构预测，对南极磷虾胰蛋白酶的结构及适冷性进行研究，通过与其他几种适冷、中温胰蛋白酶进行差异性分析，探讨南极磷虾胰蛋白酶等适冷酶在催化反应过程中应对低温环境的机制。结果显示适冷胰蛋白酶和中温胰蛋白酶的催化中心严格保守，遵循一致的催化机制；但南极磷虾胰蛋白酶等适冷酶为了适应低温环境，各级结构都表现出一定的应对机制：疏水性残基含量偏高、带正负电荷残基含量偏低，分子内部疏水作用增强、盐桥减少，这些因素致使适冷胰蛋白酶蛋白质分子内的相互作用减弱，分子柔性增强。适冷胰蛋白酶具有更高比例的呈松散状的无规卷曲结构，一定程度提高了其柔性；底物专一性口袋周围空间位阻更小，底物更容易接近活性中心，这也是加快催化反应的关键因素。关键词：胰蛋白酶；适冷性；酶动力学参数；南极磷虾；结构预测文章篇号：1673-9078(2016)5-27-33 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.5.05 Structure and Cold-adaptation Mechanism of Trypsin Purified from the Krill (Euphausia superba Dana, 1852) ZHOU Ting-ting, W ANG Xi-chang, LI Y an (College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China) Abstract: The molecular characterization of trypsin purified from Euphausia superba (Dana, 1852) was investigated in this research. Aspects such as thermodynamic activation parameters, sequence alignment, and molecular model allowed an in-depth understanding of its activity at low temperatures. Conserved residues were compared between cold-adapted trypsin and its warm-adapted counterparts, and the results showed that their active cores were almost identical. Strategies adopted by trypsin for molecular adaptation to low temperatures may be as follows. A higher proportion of hydrophobic residues and lower proportion of charged residues in the enzyme probably diminish the number of intramolecular interactions, resulting in improved structural flexibility. Increased number of loose random coils may also contribute to improve structural flexibility. Reduced steric hindrance is also a key factor that allows the substrate to easily access the active site, thus promoting the catalytic reaction. Key words: trypsin; cold-adapted; enzyme kinetic parameters; Euphausia superba ; molecular modeling 南极磷虾生活于南极冰下，资源丰富，我国于20世纪80年代中期开始对南极磷虾进行调查和研究，于2009年开始进行大规模的商业捕捞。南极磷虾生活的水域温度一般维持在-1.7 ℃至-3 ℃，属于嗜冷水性动物，体内的酶普遍具有适冷性，在催化反应过程可能遵循着一定的应对低温环境的机制。其体内高效的蛋白质降解酶系统主要分布于南极磷虾的胃和肝脏中，在较低温度下仍具有活性，能够迅速降解各种蛋白质， 27 收稿日期：2015-05-03 基金项目：国家高新技术研究发展（863）计划海洋技术领域主题项目（2011AA090801）作者简介：周婷婷（1985-），女，博士研究生在读，研究方向：食品科学与工程通讯作者：王锡昌（1964-），男，教授，博士研究生，研究方向：食品科学与工程对复杂蛋白质的降解活性比所有的商品酶均高[1]；南极磷虾死亡后，即使在低温环境保存，虾体也易于自溶、变质、腐败，这些现象可能都与南极磷虾体内蛋白酶的适冷性有着密切的关系。胰蛋白酶是甲壳动物体内主要的蛋白酶之一，能够专一性地切断多肽链中赖氨酸和精氨酸残基羧基端的肽键，Osnes 等[2]的研究表明，南极磷虾蛋白酶具有的高效催化性，大约40%来源于胰蛋白酶的作用。适冷酶通过特殊的应对机制能够在低温环境下保持一定的活性，相对中温酶表现出了更加优越的催化性能，已被广泛地应用于食品加工和化工领域。有研究表明适冷酶的某些氨基酸含有比例与其适冷性有着密切的关系；适冷酶关键氨基酸残基的取代可能会改变其局部区域分子间的作用力，使分子结构的紧密程度发生变化，从而影响到其在低温环境中的催化能力

(完整版)常用限制性内切酶酶切位点汇总,推荐文档

Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点 AsiSI识别位点 AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点

BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点 BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点 BlpI识别位点 Bme1580I识别位点 BmgBI识别位点 BmrI识别位点 BmtI识别位点 BpmI识别位点 Bpu10I识别位点 BpuEI识别位点 BsaAI识别位点 BsaBI识别位点 BsaHI识别位点 BsaI识别位点 BsaJI识别位点 BsaWI识别位点 BsaXI识别位点 BseRI识别位点 BseYI识别位点

BsiEI识别位点 BsiHKAI识别位点 BsiWI识别位点 BslI识别位点 BsmAI识别位点 BsmBI识别位点 BsmFI识别位点 BsmI识别位点 BsoBI识别位点 Bsp1286I识别位点 BspCNI识别位点BspDI识别位点 BspEI识别位点 BspHI识别位点 BspMI识别位点 BspQI识别位点 BsrBI识别位点 BsrDI识别位点 BsrFI识别位点 BsrGI识别位点 BsrI识别位点 BssHII识别位点 BssKI识别位点 BssSI识别位点 BstAPI识别位点 BstBI识别位点 BstEII识别位点 BstNI识别位点

蛋白酶专一性酶切位点的影响因素分析

蛋白酶专一性酶切位点的影响因素分析内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

蛋白酶专一性酶切位点的影响因素分析摘要：生物活性肽(bioactive peptides)是具有特殊生理功能的肽。酶法水解蛋白质广泛用于制备生物活性肽，但酶解法存在目标肽得率低、副产物过多的缺点。蛋白酶和蛋白质的选择是关键步骤，局部构象、三维结构、实验条件以及其它偶然因素也会影响蛋白水解酶的酶切效果。本文综述了温度、pH值、温度和pH值共同作用、金属离子对酶切位点的影响，旨在为研究酶切规律、制备高得率活性肽提供理论基础。关键词：生物活性肽；蛋白酶；水解条件；酶切位点 Influencing Factors Analysis of Protease Specific Cleavage Sites Abstract: Bioactive peptides are fragments with specific amino acid sequences that exert a positive physiological influence on the body. Many reported Bioactive peptides are produced by enzymatic hydrolysis,but there are disadvantages of by-product and low yield.The choice of protease and protein source is a key step,and many factors such as local conformation,tertiary structure, experimental conditions and causal interference can influence the protease hydyolysis.This article presents the influencing fators,temperature,pH values,temperature combined pH values and metal ions included,to provide theoretical basis for enzymatic law analysis and higher yield bioactive peptides production. Key words:bioactive peptides;protease;hydrolysis conditions;protease cleavage sites

测序级胰蛋白酶(液体)

Cat.No.：SRT0202 CAS:9002-07-7 EC:3.4.21.4 储存温度：-70℃ 别名：重组修饰胰蛋白酶；重组甲基化修饰胰蛋白酶；重组甲基化修饰突变胰蛋白酶来源：重组胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达蛋白序列：氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。 1.产品简介雅心重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致，无糜蛋白酶等杂酶污染，不含有且不需要TPCK抑制其他酶活性，活性高，酶切特异性高。胰蛋白酶容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果，甲基化修饰和突变保证其不自切，从而也去除了因自切而产生的假糜蛋白酶的活性。 2.产品特性来源重组大肠杆菌外观澄清，无色液体比活（单位/mg蛋白）≥4500USP units/mg pro. 蛋白浓度0.5mg/ml溶于50mM HAC 蛋白电泳单一主条带电泳（分子量）24.0±2.4kDa 纯度（HPLC）≥95% 3.推荐使用方法建议使用50mMHAc或1mM HCl溶解或稀释。使用时，稀释在50mM NH4HCO3或者ph7.0-8.0的缓冲溶液中。在酶切缓冲液中建议使用1mM CaCl2，重组胰蛋白酶：目的蛋白=1：20-1：100，最适PH为7.0-8.0。 4.储存和运输稳定性储存稳定性：液体储存于-70℃，24个月稳定；在4℃或者25℃条件下24小时内可保持90%以上的活性；反复冻融5次，无活性损失；在含有50mM NH4HCO3稀释液0.05mg/ml溶液浓度中，37℃条件下孵育3小时，95％以上的活性被保持，对于长期如20小时孵育，建议加入1mM CaCl2。运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。 5.产品优势 ●序列分析纯蛋白酶：特异性高，稳定性好。 ●无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 ●质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 ●纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 ●符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。 ●质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

蛋白酶的分类及酶切位点

氨基酸0.ppt 氨基酸的名称与符号

alanine 丙氨酸Ala A arginine 精氨酸Arg R asparagine 天冬酰氨Asn Asx N aspartic acid 天冬氨酸Asp Asx D cysteine 半胱氨酸Cys C glutamine 谷氨酰胺Gln Glx Q glutamic acid 谷氨酸Glu Glx E glycine 甘氨酸Gly G histidine 组氨酸His H isoleucine 异亮氨酸Ile I leucine 亮氨酸Leu L lysine 赖氨酸Lys K methionine 甲硫氨酸Met M phenylalanine 苯丙氨酸Phe F proline 脯氨酸Pro P serine 丝氨酸Ser S threonine 苏氨酸Thr T tryptophan 色氨酸Trp W tyrosine 酪氨酸Tyr Y valine 缬氨酸Val V 血清终止胰酶消化的原理血清终止的原理其实是竞争抑制。就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。不给胰

酶消化细胞蛋白的机会。细胞传代时，血清为什么能终止胰酶消化？胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键，血清的加入可使酶饱和，严格上说不是竞争性抑制，因为血清蛋白不是抑制剂，还是底物！什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化植物细胞不能用胰酶-EDTA消化，要用纤维素酶消化。应该是肿瘤细胞吧。正常的细胞，貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。 EDTA-胰酶，只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。 EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。一般和胰蛋白酶配合使用。原因在于，钙，镁等金属离子会降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。它可以螯合这些离子，消除对胰酶的抑制。干细胞饲养层制作中，胰酶—EDTA消化成纤维细胞（MEF）时，EDTA的作用是什么？应该是胰酶分散细胞，EDTA鳌合金属离子使金属酶失活《军医进修学院学报》1992年02期加入收藏投稿正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。体外研究发现,NHP的细胞粘附性可达90％;而NHP-EP的细胞粘附

重组胰蛋白酶

重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS:9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.简介胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。如：蛋白质酶解生产多肽；各种组织的细胞分离；蛋白质的酶解、测序；重组胰岛素生产等等。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。酶切特异性相同。分子量为24kD，最适pH为7-10。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。纯度高：无其它杂酶污染；酶切反应无其它副反应。稳定：冻干粉，易于储存和运输；批量生产，产品质量稳定。 3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC 性状白色冻干粉比活≥3800 USP u/mg pro 纯度(RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤20% α-胰蛋白酶其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染

活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.用途重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法使用1mMHCl溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。 6.相关产品重组羧肽酶B

蛋白酶切位点

蛋白质序列分析

肽和蛋白质的直接测序法目前，肽和蛋白质的测序有三种策略：①根据基因测序的结果，从cDNA演绎肽和蛋白质序列，这种策略简单、快捷，甚至可以得到未分离出的蛋白质或多肽的序列信息。但是，用这一策略得到的一级结构不含蛋白质翻译后修饰及二硫键位置等信息；②直接测序策略；③质谱测序与生物信息学搜索相结合的策略。第①种策略可参考分子生物学的有关专著，第③种策略将在本书蛋白质组与蛋白质组分析一章中介绍，本章介绍直接测序策略。 1953年，Frederick Sanger在对牛胰岛素的研究中首先提出氨基酸直接测序的概念，迄今为止，已通过直接测序阐明了几千种蛋白质的氨基酸序列。在蛋白质序列测定中，因为可以得到的蛋白质样品十分有限，而且蛋白质包含的20种不同的氨基酸表现出不同的化学功能和化学活性，在测序过程中每一次变性或裂解所发生的一系列副反应，将使测定过程变得十分复杂，在蛋白质序列测定中由于没有类似于DNA序列测定中采用的PCR技术可应用，因此，与DNA 序列测定相比，蛋白质序列测定在许多方面要复杂得多。其基本的测序过程如下所述。确定不同的多肽链数目首先应该确定蛋白质中不同的多肽链数目，根据蛋白质N-端或C-端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量可确定蛋白质分子中的多肽链数目。如果是单体蛋白质，蛋白质分子只含一条多肽链，则蛋白质的摩尔数应与末端残基的摩尔数相等；如果蛋白质分子是由多条多肽链组成，则末端残基的摩尔数是蛋白质的摩尔数的倍数。肽链的裂解当蛋白质分子是由二条或二条以上多肽链构成时，必须裂解这些多肽链。如果多肽链是通过非共价相互作用缔合的寡聚蛋白质，可采用8 mol L-1尿素，6 mo1 L-1盐酸胍或高浓度盐等变性剂处理，使寡聚蛋白质中的亚基裂解；如果多肽链之间是通过共价二硫键交联的，可采用氧化剂或还原剂断裂二硫键。然后再根据裂解后的单个多肽链的大小不同或电荷不同进行分离、纯化。太长的多肽片段不能直接进行序列测定，一般肽片段长度不超过50个左右残基的肽段，当肽段超过这个长度时，由于反应的不完全以及副反应产生的杂质积累将影响测定结果，因此，必须通过特定的反应将它们裂解为更小的肽段。通过两种或几种不同的断裂方法（即断裂点不同）将每条多肽链样品降解成为两套或几套重叠的肽段或肽碎片，每套肽段分别进行分离、纯化，再对纯化后的每一肽段进行氨基酸组成和末端残基的分析。使肽链中某些特殊位置上的肽键发生断裂，可采用化学反应或酶反应裂解产生若干能够进行测序的小片段。一般将蛋白质样品分为两等份，采用不同的试剂裂解产生两套不同的片段，两套片段在测序完成后，根据他们之间的重叠情况即可重新排序。 1 酶解法蛋白质通过蛋白水解酶的裂解后将产生若干能够代表每个蛋白质特性的肽片段，用于特定的蛋白质裂解的蛋白水解酶包括外肽酶和内肽酶，裂解肽链的N-端或C-端的氨基酸可采用外肽酶，而内肽酶则用于切断肽链中某个特定部位。表10.5为常用的蛋白水解酶。表10.5 用于蛋白质部分裂解的蛋白酶蛋白酶酶切位点内肽酶：胰蛋白酶R n-1=Arg，Lys R n≠Pro 胃蛋白酶R n=Leu，Phe，Trp，Tyr，Val R n-1≠Pro 糜蛋白酶R n-1=Phe，Trp，Try R n≠Pro 内肽酶GluC R n-1=Glu

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)

The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5-phosphates and 3-hydroxyls. Usually they require Mg 2+ ions as a cofactor, although some have more exotic requirements. The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous. Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R-M systems forming either C5-methylcytosine, N4-methylcytosine or N6-methyladenine. ApaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5'GGGCC^C 3' BamHI（类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^GATCC 3' BglII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^GATCT 3' EcoRI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^AATTC 3' HindIII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^AGCTT 3' KpnI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GGTAC^C 3' NcoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^CATGG 3' NdeI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' CA^TATG 3' NheI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^CTAGC 3' NotI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GC^GGCCGC 3' SacI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GAGCT^C 3' SalI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^TCGAC 3' SphI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GCATG^C 3' XbaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' T^CTAGA 3' XhoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^TCGAG 3' 当然，上面总结的这些肯定不全，要查找更多内切酶的识别序列，你还可以选择下面几种方法： 1. 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站；NEB网站上提供的识别序列图表下载 2. 用软件如：Primer Premier5.0或Bioedit等，这些软件均提供了内切酶识别序列的信息；

序列分析纯胰蛋白酶

Cat.No.：SRT0201 CAS:9002-07-7 EC:3.4.21.4 储存温度：2-8℃ 别名：重组修饰胰蛋白酶；重组甲基化修饰胰蛋白酶；重组甲基化修饰突变胰蛋白酶来源：重组胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达蛋白序列：氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。 1.产品简介雅心重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致，无糜蛋白酶等杂酶污染，不含有且不需要TPCK抑制其他酶活性，活性高，酶切特异性高。胰蛋白酶容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果，甲基化修饰和突变保证其不自切，从而也去除了因自切而产生的假糜蛋白酶的活性。 2.产品特性来源重组大肠杆菌外观白色、类白色粉末比活（单位/mg蛋白）≥4500USP units/mg pro. 蛋白电泳单一主条带电泳（分子量）24.0±2.4kDa 纯度（HPLC）≥95% 3.推荐使用方法建议使用50mMHAc或1mM HCl溶解或稀释。使用时，稀释在50mM NH4HCO3或者ph7.0-8.0的缓冲溶液中。在酶切缓冲液中建议使用1mM CaCl2，重组胰蛋白酶：目的蛋白=1：20-1：100，最适PH为7.0-8.0。4.储存和运输稳定性储存稳定性：重组胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；使用50mMHAc或1mM HCl溶解后储存于-20℃，反复冻融5次，无活性损失。运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。 5.产品优势 1序列分析纯蛋白酶：特异性高，稳定性好。 2无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 3质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 4纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 5冻干粉：易于储存和运输。 6符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。 7质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。