免疫学检测法汇总
免疫学检测法
免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。
第一节抗原或抗体的检测
一、检测的原理
借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
（1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品
中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于类方法。
（2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工
作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另反应
成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度（如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。
二、抗原或抗体检测的实用意义
1．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。
2．抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可以下四类：
（1）各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
（2）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白（如各类免疫球蛋白、补体的各种成分）、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
（3）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原（如CD抗原）、同种异型抗原（血型抗原或MHC抗原）、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。
（4）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。
三、抗原或抗体检测的方法
由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：
（一）沉淀反应
可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应（prec ipitation neaction）。
1．环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm 的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验（ring precip itationtest）,此法简便易行，需用材料较多是其缺点。
2．单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验（single immunodiffusion）是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度（最低浓度）约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA 和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果（图20-1）
图20-1 单向免疫扩散试验示意图
3．免疫比浊法当抗体浓度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物，它可使通过液体的光束发生散射，随着加入抗原增多，形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。免疫比浊法（immunonephe lomytry）就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品，经过一段时间，用光散射浊度计（nephelometry）测量反应液体的浊度，来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。
4，双向免疫扩散试验双免疫扩散试验（double immunodiffusion）是在琼脂板上按一定距离打数小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析（图20-2）。
图20-2 双向免疫扩散试验示意图
5．对流免疫电泳对流电泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。
6．免疫电泳免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形
成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义（图20-3）。
图20-3 免疫电泳法基本步示决图
7．免疫印迹法免疫印迹法（immunoblotting）又称为Western印迹法，用于AIDS的血清抗体检测。第一步，为电泳分离HIV抗原，在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。第二步，将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上（电印迹），然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话，则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗体后，在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体，此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应，最后加入显
色底物（如果抗人Ig是用酶标记的）或做放射自显影（抗人Ig用125Ⅰ标记）以显示结果（图20-4）。
图20-4 用免疫印迹法检查血清中的HIV病毒抗体
第一步：经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离；
第二步：将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上；
第三步：将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上；
第四步：加入标记的第二抗体使之覆盖膜上；
第五步：加入显色底物（或放射自显影）显现第二抗体
（二）凝集反应
细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即称为凝集反应（agglutination）。
1．直接凝集直接凝集（direct agglutination）是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。可用于传染病诊断如肥达氏反应（W idal reaction）诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。
2．间接凝集间接凝集（indirect agglutination）是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子，用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原，如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒，一旦与含有相应抗原的脑脊液混合，便可发生凝集，可进行快速诊断。故凝集反应即可测定抗原，也可测抗体，方法简便、敏感。
3．抗球蛋白试验抗球蛋白试验（antiglobulin test,coombs test）的原理为间接凝集试验。例如应用于诊断自身免疫溶血性贫血症时，Rh+红细胞与抗Rh血清间的反应。因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价，分子较小（不如IgM结合价多，分子大）很难直接引起Rh+红细胞凝集。如果加入抗IgG的抗体，就可帮助抗Rh的IgG的抗体凝集红细胞。也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的灵敏度。
（三）补体参与抗原抗体反应
这一类反应主要包括溶血反应（hemolytic assay）、补体介导的细胞毒试验（complement mediated cytotoxicuty test）及补体结合试验（complement fixatio n test）。
1．溶血反应抗体与红细胞表面抗原相遇，形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应中的补体活化，导致红细胞溶解，此方法可用于红细胞的各种抗原或相应抗体的检测，此法比凝集反应敏感。溶血反应也是用于抗体分泌细胞即空斑形成细胞（PFC）检测的原理。
2．补体介导的细胞毒试验各种有核细胞与针对其表面抗原的抗体相遇，所形成的免疫复合物能活化反应中的补体，引起细胞膜穿孔，在一定时间内，细胞仍能维持一定的形态不破碎，加入水溶性染如伊红Y（eosin Y）或台盼蓝（try pan blue）后，染料即可进入被活化补体穿孔的细胞，不带相应抗原细胞膜保持完整的活细胞不着色。此方法可用于带各种抗原的细胞的检测，如进行细胞MH C抗原的鉴定，和进行淋巴细胞中T细胞总数或其亚类的计数。在一些免疫学实验中也可用这种方法，根据需要特异地消除带某种抗原的细胞。
3．补体结合试验当抗原（可溶性或颗粒性）与相应抗体结合，由于浓度低不出现可见反应时，应用补体结合试验可检出此抗原抗体反应，它比凝集反应或沉淀反应灵敏度高。本法包括两个抗原抗体系统。一为检测系统由待检样品与已知抗原（或抗体）组成；另一为指示系统，由绵羊红细胞（SRBC）和抗SRBC 组成。另加入作为补体的新鲜豚鼠血清。试验时试管中先加入检测系统和补体，混合经37℃30分钟使抗原、抗体、补体形成复合物，再加入指示系统，如出现溶血现象，说明检测系统中没有相对应的抗原抗体，补体是游离的指示系统的S RBC和抗体结合而出现溶血，即为反应阴性。如不出现溶血，表明检测系统中有抗原抗体复合物并结合补体，则指示系统无多余的补体作用而没有溶血现象，即为阳性。
在敏感的抗原、抗体检测方法（如酶标方法）出现之前补体结合试验曾广泛用于检测各种细菌、病毒或螺旋体（如梅毒）的抗原或抗体，由于本试验影响因素多，结果不稳定现已被新检测方法所代替。
四、用标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应
用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原，用于抗原或抗体检测是广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。
1．免疫荧光技术免疫荧光技术（immunofluorescence techni）是用化学方法使荧光素标记的抗体（或抗原）与组织或细胞中的相应抗原（或抗体）结合，进行定性定位检查抗原或抗体的方法。
（1）直接荧光法：把荧光抗体加到待检的细胞悬液，细胞涂片或组织切片上进行染色，经抗原抗体反应后，洗去未结合的荧光抗体，将待检标本在荧光显微镜下观察，有荧光的部位即有相应抗原存在，此法可用于病毒感染细胞、带某种特异抗原的细胞（如T细胞和B细胞）或病原菌的检查，也可用于组织中沉着的免疫复合物的检查。本法的缺点是检查多种抗原，就需分别制备相应的多种标记抗体。
（2）间接荧光法：可克服直接法需制备多种荧光抗体的复杂操作。将组织或细胞上的抗原直接与相应抗体（不标记荧光）结合，此为第一抗体，再把能与第一抗体特异结合的荧光标记的抗免疫球蛋白抗体加入，此为荧光标记的第二抗体，观察结果与直接法相同。间接法比直接法敏感性高，如果用于检查抗原的第一抗体是人或动物的只需制备一种抗人或动物的免疫球蛋白荧光抗体（图20-5）。
图20-5 免疫荧光直接法及间接法原理示意图
免疫荧光技术在传染病诊断上有广泛的用途，如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病，检查抗原或抗体，如查出IgM抗体，可做为近期接触抗原的标志，所以使用荧光标记抗IgM可诊断近期感染。除微生物学方面的应用外，还可利用单克隆抗体鉴定淋巴细胞的亚类。使用流式细胞仪(fluorescene-activated cell sor ting,FACS)，能自动检测细胞的大小、荧光强度。针对细胞表面不同抗原，可以使用两种不同的荧光染料，如用异硫氰荧光素（FITC）发黄绿荧光，用罗丹明（TMRITC）发红色荧光。由于荧光颜色不同标记两种不同的抗体，对同一细胞进行双标记染色。对淋巴细胞亚类鉴定起着巨大推动作用。应用间接荧光法也用于自身免疫病的抗核抗体检查。
2．放射免疫分析法放射免疫分析法（radioimmunoassay RIA）应用竞争性结合的原理，应作放射性同素标记抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）结合，通过测定抗原抗体结合物的放射活性判断结果，本方法可进行超微量分析，敏感性高，可用于测定抗原、抗体、抗原抗体复合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。
放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种：
（1）液相法：将待检标本（例如含胰岛素抗原）与定时的同位素标记的胰岛素（抗原）和定时的抗胰岛素抗体混合，经一定作用时间后，分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原，测定这两部分的放射活性，计算结合率。在反应系统中，待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战性与胰岛素抗体结合。非标记的抗原越多，标记抗原与抗体形成的复合物越少。非标记抗原含量与标记抗原抗体复合物的量呈一定的函数关系。预先用标准的非标记抗原作成标准曲线后，即可查出待检标本中胰岛素的含量（图20-6）。
图20-6 液相放射免疫分析法原理及标准曲线
（2）固相法：将抗原或抗体吸附到固相载体表面，然后加待检标本，最后加标记抗体。测定固相载体的放射活性，常用的固相载体有溴化氰（CNBr）海豹化的纸片或聚苯乙烯小管（图20-7）。
图20-7 固相放射免疫分析法原理
放射免疫分析法应用范围广泛，包括多种激素（胰岛素、生长激素、甲状腺素等）维生素、药物、IgE等。
3．酶联免疫分析法酶联免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA）是当前应用最广泛的免疫检测方法。本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作
用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析，敏感度可达ng水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horser adish peroxidase)、碱性磷酶（alkaline phosphatase）等。它们与抗体结合不影响抗体活性。这些酶具有一定的稳定性，制成酶标抗体可保存较长时间。目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者主要测定可溶性抗原或抗体。本法既没有放射性污染又不需昂贵的测试仪器，所以较放射免疫分析法易推广。
图20-8生物素－酶标亲合素系统反应示意图
（1）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:是与上述固相RIA相似的原理，将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行政区。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。
（2）夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗
快速免疫学系列检测临床意义
快速免疫学系列检测临床意义 一、甲状腺系列： 检测项目： FT3（游离三碘甲状腺原氨酸）、FT4（游离甲状腺素）、hTSH（促甲状腺激素）、TGAb（抗甲状腺球蛋白抗体）、TMAb（抗甲状腺微粒体抗体） 临床意义： FT3：是循环中具有活性的甲状腺激素，能敏感而直接地反映甲状腺的功能。 增高：见于甲状腺机能亢进症； 降低：见于甲状腺机能减退症； FT4：是具有生物活性的甲状腺激素，可以更灵敏、更准确地反映甲状腺的功能状态。 增高：见于甲状腺机能亢进症； 降低：见于甲状腺机能减退症； hTSH：是由垂体前叶特异细胞合成和分泌的，是诊断原发性甲状腺功能减退最灵敏的指标，这种患者由于甲状腺和垂体间的负反馈作用减少，因此TSH常明显升高。 增高：见于原发性甲状腺机能减退症、异源促甲状腺激素综合征、垂体促甲状腺激素细胞肿瘤、地方性缺碘性或高碘性甲状腺肿、单纯性弥漫性甲状腺肿等； 降低：见于甲状腺功能亢进症、下丘脑性甲状腺机能减退症、肢端肥大症、非促甲状腺激素所致的甲状腺机能亢进症等。 TGAb：阳性见于桥本甲状腺炎、自家免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进患者等，桥本甲状腺炎患者阳性检出率高达80％--90％；某些肝脏病、各种胶原性疾病和重症肌无力；正常妇女随年龄的增长，阳性检出率增加，40岁以上妇女阳性率达18％。 TMAb：阳性见于桥本甲状腺炎、自家免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能减退。有些患者TG阴性，但TM阳性，因此两种抗体周时检测可提高抗甲状腺自身抗体的阳性检出率。 二、肿瘤系列： 检测项目： CEA（癌胚抗原）、AFP（甲胎蛋白）、PSA（前列腺特异性抗原） CA-125（肿瘤抗原125）、CA-153（肿瘤抗原CA-153）、CA-199（糖类抗原CA-199）临床意义： CEA：增高：见于原发性结肠癌（45％--80％）、直肠癌、胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤等。也见于肠梗阻、胆道梗阻、尿毒症、胰腺炎、肝硬化、溃疡性结肠炎、消化性溃疡等，但均为暂时性增高。 AFP：显著增高：原发性肝癌； 明显升高：生殖腺胚胎癌；
免疫学检验试题(附答案)
免疫学检验试题（一） 1. 免疫监视功能低下时易发生（）。 A．自身免疫病 B．超敏反应 C．肿瘤 D．免疫缺陷病 E．移植排斥反应 答案C 解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。2. 免疫自稳功能异常可发生（）。 A．病毒持续感染 B．肿瘤 C．超敏反应 D．自身免疫病 E．免疫缺陷病 答案D 解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。 3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。A．树突状细胞 B．巨噬细胞
C．中性粒细胞 D． B细胞 E． T细胞 答案B 解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。 4. 免疫应答过程不包括（）。 A． T细胞在胸腺内分化成熟 B． B细胞对抗原的特异性识别 C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈 D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化 E．效应细胞和效应分子的产生和作用 答案A 解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。 5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。 A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织 B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官 C．是免疫应答发生的场所 D．是免疫细胞发生和成熟的场所 E．是所有淋巴细胞定居的场所 答案D
解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。 5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。 A． C1 B． C3 C． C4 D． C5 E． C4Bp 答案B 解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。 7. 细胞因子不包括（）。 A．单核因子 B．淋巴因子 C．生长因子 D．抗体 E．集落刺激因子 答案D 解析细胞因子是生物活性的小分子多肽，抗体不是。 8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为（）。 A． IgM B． IgA C． IgG D． IgE
免疫学检验复习考试重点总
2017 年免疫学检验复习重点总结如下 0、免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应。 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B 细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（Smlg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B 细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B 细胞的mlg 主要 为mlgM和mlgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能、。 5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T 细胞的标志是CD4;杀伤T细胞的标志是CD8; T细胞受体二TCR T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2 （绵羊红细胞受体）； CD3+ CD4+ CD8-=辅助性T 细胞（Th） CD3+ CD4- CD8+ =细胞毒性T细胞（Tc或CTL （T细胞介导的细 胞毒试验） CD4+ CD25+ =调节性T细胞（Tr或Treg
T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA刺激T细胞增 殖。增殖试验有：形态法、核素法 T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验； 6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志：CD16（ADCC）、CD56。 测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS,表面标志CD14,包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MHC H类分子） 8人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a CD11c和CD83. 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sig,主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mig，作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白）10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG> lgA> IgM > lgD> IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL）
临床免疫学检验 名词解释整理
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。 亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。 抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。 带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。 免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。 载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。 单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。 多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 凝集反应（agglutination reaction）：是指细菌和红细胞或红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。 ①直接~：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象，称为~。 ②间接~：可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在适宜的电解质存在条件下出现特异性凝集现象，称为~。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。 正向间接凝集反应：用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。 反向间接凝集反应：用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。 间接凝集抑制反应：用抗原致敏的载体颗粒及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本中是否存
免疫学检验复习考试重点总
2017年免疫学检验复习重点总结如下 0、免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应。 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B 细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T细胞的标志是CD4；杀伤T细胞的标志是CD8；T细胞受体=TCR。T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋CD4＋CD8－= 辅助性T细胞（Th） CD3＋CD4－CD8＋= 细胞毒性T细胞（Tc或CTL）（T细胞介导的细胞毒试验） CD4＋CD25＋= 调节性T细胞（Tr或Treg） T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T细胞增
殖。增殖试验有：形态法、核素法。 T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验； 6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志：CD16（ADCC）、CD56。 测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS，表面标志CD14，包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sIg，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mIg，作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL）
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理 免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T 细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）。由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体）。免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。 最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。 利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开。然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体）的鉴别。上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限。比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原（或抗体）的含量。该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
医学检验免疫学检验归纳总结
医学检验免疫学检验归纳 总结 -标准化文件发布号：（9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 方针滴定法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫：
免疫放射： 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 竞争法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术 固相膜免疫测定试验IFA
免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：.......... 吞噬细胞...............
免疫学及免疫学检验学+题库答案
名词解释第1 章概论 1. 免疫学： 2. 免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学：第2 章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9. 抗原抗体反应的等价带( zoneofequivalence ) 10.最适比( optimalratio ) 11.带现象( zonephenomenon) 第3 章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 13.半抗原 14.免疫佐剂 15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb) 第5 章凝集反应 16.凝集反应 17. 直接凝集反应 18. 间接凝集反应 19. 明胶凝集试验第6 章沉淀反应 20.沉淀反应 21. 絮状沉淀试验 22. 免疫浊度测定 23. 凝胶内沉淀试验
24. 单项扩散试验 25. 双向扩散试验 26. 免疫电泳技术 27. 对流免疫电泳 28. 火箭免疫电泳 29.免疫电泳 30. 免疫固定电泳第19 章补体检测及应用 31. 补体 32. 免疫溶血法 33. 补体结合试验第22 章感染性疾病与感染免疫检测 34. 感染 第23 章超敏反应性疾病及其免疫检测 35.超敏反应 36.I型超敏反应 37.U型超敏反应 38.川型超敏反应 39.W型超敏反应 第24 章自身免疫性疾病及其免疫检测 40.自身耐受 41.自身免疫 42. 自身免疫病 43.自身抗体 44.抗核抗体 第25 章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45. 免疫增殖性疾病 46. 免疫球蛋白增殖病 47. 本周蛋白
48. 血清区带电泳 49. 免疫电泳 50. 免疫固定电泳第26 章免疫缺陷性疾病及其免疫检验 51. 免疫缺陷病 52. 获得性免疫缺陷综合征第27 章肿瘤免疫与免疫学检验 53. 肿瘤免疫学 54. 肿瘤抗原 55. 肿瘤标志物第28 章移植免疫及其免疫检测 56. 移植 57. 主要组织相容性复合体 58. 移植排斥反应 59. 移植物抗宿主反应(GVHR) 60. 血清学分型法 、填空题。 第1 章概论 1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学 2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现 代免疫学时期 3.为保持机体内环境稳定，免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫 自稳、免疫监视。 4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段 5.免疫系统的组成包括三部分，分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子。 6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途 径。 第2 章抗原抗体反应 7.在抗原抗体反应中，主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作
免疫学检验
1简述双抗体夹心法的原理。 DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。 2何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。 DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。 3简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。 单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。 4简述抗原抗体反应的原理。 答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合 5简述抗原抗体反应的类型。 答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。 6什么是带现象? 答：在抗原抗体反应等价带前后，由 于抗体或抗原过量(形成前带或后 带)，上清液中可测出游离的抗体或 抗原，形成的沉淀物少，不出现可见 反应，这种现象在做血清学试验时称 为带现象。 7影响抗原抗体反应的环境条件有哪 些?在实验中如何控制这些条件因 素? 答：环境条件包括：电解质，酸碱度 和温度。稳定条件：①电解质：常用 O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原 及抗体的稀释液及反应液；②酸碱 度：pH过高或过低都将影响抗原与抗 体的理化性质，抗原抗体反应一般在 pH为6～8时进行；③温度：一般以15， 40℃为宜，最佳反应温度为37℃。 8试述免疫血清应如何进行纯化。 免疫血清的纯化主要是指提纯免疫 血清中的IgG并去除无关的杂抗体。 提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐 析法粗提、离子交换层析法和亲和层 析法，采用亲和层析法提取IgG时， 可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交 联sephamse 4B制成层析柱。另外， 还可通过吸附法获得单价特异性抗 血清。方法是将不含特异性抗原的杂 抗原与戊二醛等双功能试剂混合制 成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的 杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。 9叙述杂交瘤技术的基本原理。 杂交瘤技术是在细胞融合技术的基 础上，将具有分泌特异性抗体能力的 致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨 髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种 杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特 性，即既能够分泌抗体又能在体外长 期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞 克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。 10简述间接血凝试验的基本原理。 间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗 体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家 兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞， 与相应抗体(或抗原)作用，在有电解 质存在的条件下，经过一定时间可出 现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称 被动血凝试验 11何谓间接凝集反应？ 将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶 联于与免疫无关大小适当的颗粒表 面，使之成为致敏载体颗粒，然后与 相应抗体（或抗原）作用，在适宜电 解质存在条件下，出现特异性的凝 集现象，称为间接凝集反应 12间接凝集反应如何进行分类？各 试验的原理是什么 根据致敏载体用的是抗原或抗体分 为正向间接凝集试验和反向间接凝 集试验；根据载体种类，分为间接血 凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反 应方式分为间接凝集试验、间接抑制 凝集试验和协同凝集试验,间接凝集 试验是用抗原致敏载体检测标本中 的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗 粒结合，再与标本中的抗体反应，通 过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗 粒或凝集块，为阳性反应。反向间接 凝集试验选用已知特异性抗体致敏 载体检测标本中的相应抗原。用特异 性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗 原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可 见的凝集为阳性。临床上用于检测 HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验 诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载 体及相应的抗体，用于检测标本中与 致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体 试剂相反应，然后加入致敏抗原，若 出现凝集现象，说明标本中不存在相 应抗原;如未出现凝集现象，则说明 待检标本中含有相应抗原，凝集反应 被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒 及相应抗原作为诊断试剂，检测标本 中的抗体，称为反向间接凝集试验。 协同凝集试验与间接凝集反应的原 理相似，但所用载体为金黄色葡萄球 菌，该菌细胞壁上的SPA 能与特异性 抗体的IgG 的Fc 段结合（IgG3除 外），抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡 萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异 性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体 连接时，就成为抗体致敏的载体颗 粒，若与相应抗原接触，即出现反向 间接凝集反应。间接血凝试验是以红 细胞作为载体的间接凝集试验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与 样品中的抗体或抗原在适宜条件下 反应，出现红细胞凝集者为阳性。根 据红细胞凝集的程度判断阳性反应 的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯 胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。 13 HAT培养基筛选杂交瘤细胞的机 制是什么？ 答：1.淋巴细胞：不能生长，5到7 天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断 2.骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死 亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经 受阻3.骨髓瘤细胞和脾细胞融合形 成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利 用淋巴细胞的HGRT将Ｈ合成为嘌呤 碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋 巴细胞获得产生某种抗体的遗传信 息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能 力 14 简述免疫系统的三个生理功能。 答：免疫系统的三个生理功能为免疫
免疫学检测原理
第二十一章免疫学检测原理 第一部分学习习题 一、填空题 1．抗原抗体反应的最大特点是_________。 2．颗粒性抗原与相应抗体结合后，可以发生_________反应；可溶性抗原与相应抗体结合后，在比例合适的情况下，可以发生_________反应。 3．细胞因子的检测可以分为_________、_________、_________三类。 二、多选题 [A型题] 1．抗原-抗体反应所不具有的特征是： A．分子表面的可逆结合 B．具有高度特异性 C．出现肉眼可见的反应需要适当的比例 D．二者结合后，立即出现可见反应 E. 二者反应受电解质、酸碱度和浓度的影响 2．检测可溶性抗原不能用： A．ELISA B．单向琼脂扩散 C．直接凝集反应 D．反向间接凝集反应 E．协同凝集试验 3.不属于抗原抗体反应的是： A. 酶联免疫吸附试验（ELISA） B．锡克试验
C．抗球蛋白试验 D．放射免疫分析法（RIA） E．E花环试验 4．乳胶妊娠诊断试验属于： A．协同凝集反应 B．反向间接凝集反应 C．直接凝集反应 D．间接凝集反应 E．间接凝集抑制反应 5．下列免疫学测定方法敏感性最高的是： A．沉淀反应 B．凝集反应 C．ELISA D．放射免疫测定 E．补体结合试验 6．抗原抗体反应最适宜的PH值为： A. 5—4.5 B．4.5—5 C．5—6 D．6—8 E．8—9 7．用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记： A. 抗原 B相应抗 C．抗免疫球蛋白抗体 D．抗原-抗体复合物 E．抗C3抗体 8．用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是： A. 酶标抗A抗体 B．未标记的抗A抗体 C．酶标抗原A D．未标记的抗球蛋白抗体 E．酶标抗球蛋白抗体 9．用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在： A. 微生物上 B．抗人Ig抗体上 C．抗原-抗体复合物上 D.抗微生物抗体上 E．抗C3抗体上 10．诊断DTH的皮肤试验，在前臂内注射少量可溶性抗原后，观察时间为：
重金属免疫学快速检测技术研究进展
重金属免疫学快速检测技术研究进展 本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ 摘要：重金属免疫学检测技术作为一种新型检测技术，与传统检测方法相比具有灵敏、快速、携带方便、费用低的优点，可用于现场快速检测。概述近年来免疫学检测技术的最新研究进展，并对该类方法的发展趋势和在食品安全检测中的应用前景进行了展望。 关键词：重金属；免疫检测；酶联免疫吸附反应；胶体金免疫层析法；荧光偏振免疫分析法 随着全社会对食物安全和环境保护问题的关注不断提高，重金属污染已成为全球性的问题。环境污染方面所指的重金属主要指生物毒性显著的汞、镉、铅、铬以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属铜、钴、镍、锡、钒等污染物[1]。这类有毒物质通过经由食物链浓缩且在身体不断累积，主要以慢性中毒和远期效应显出毒性，存在巨大的潜在危害。据国家环保局不完全统计，全国每年因重金属污染的粮食达×106万kg，造成的直接经济超过200亿元，受不同程度重金属污染的耕地约有2000万hm2，约占耕地总面积的
1/5[2]。中国水体重金属污染问题也十分突出，江河湖库底质的污染率高达%。重金属一旦污染环境，很难自然修复，且随食物链畜积和传递，对食品安全与群众的健康造成严重威胁[3]。 因此，近年来重金属污染越来越受到到人们的重视，针对重金属常用的传统检测方法包括电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、石墨炉原子吸收光谱法(GF-ASS)、火焰原子吸收法(FASS)以及紫外分光光度法(UV)等。传统检测方法具有省时、快速、准确、灵敏的优点，是的国家重金属安全检测的金标准。传统的检测方法准确、可信度高，但往往需要大型设备仪器和专业人员操作，有一定的时间地点局限性，不适合用于快速、现场定量检测。在突发性环境污染事件检测和大范围取样实时监测时，需要建立一种灵敏、高效、快速、方便的检测方法。因此，基于单克隆抗体的制备与应用[4]的免疫学检测技术，为实现环境及食品样品中重金属的快速定量或半定量检测提供了一个有效途径。本文综合论述了近几年来重金属检测中的样品前处理及免疫学检测技术，并对今后的研究发展方向做出展望。 1 样品前处理 重金属在实际样品中往往以化合物的形态存在，
免疫学作业-食品的免疫学检测方法范文
食品的免疫学检测方法免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法,其基本原理是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。随着学科间的相互渗透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。免疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法，也为众多学科的研究提供了方便。 免疫学检测技术是食品检测技术中的一个重要组成部分，特别是三大免疫技术———荧光免疫技术、酶免疫技术和放射免疫技术在食品检测中得到了广泛应用。利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等，还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等的检测，其检测方法简便、快速、灵敏度高、特异性强，特别是单克隆抗体的发展，使得免疫检测方法特异性更强，结果更准确。 一、免疫荧光技术 免疫荧光技术是一种将免疫反应的特异性与荧光标记分子的可见性结合起来的方法。在一定条件下，用化学方法将荧光物质（荧光素）与抗体结合，但不影响抗体与抗原结合的活性，与相应抗原结合后，在荧光显微镜下观察抗原的存在与部位，可定位，亦可用荧光计定量。但荧光标记信号较弱，因而检测灵敏度不是很高。 免疫荧光分析(Immuno Fluorescence Assay,IFA)始创于20世纪40年代初，1942年Cons等首次报道用异硫氰酸荧光素标记抗体，检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗体，但此种荧光素标记物的性能较差，未能推广应用。20世纪50年代，Riggs等合成性能较为优良的异硫氰酸荧光素。Mashall等对荧光抗体的标记方法又进行了改进，从而使得免疫荧光技术逐渐推广应用。 免疫荧光技术在实际应用上主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。免疫荧光直接法可清楚地观察抗原并用于定位标记观察。间接法是在检测样品上滴加已知的细菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标记的第二抗体。 1．底物标记荧光测定法
医学检验免疫学检验归纳总结
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫： 免疫放射：
二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术 固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA
免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：.......... 吞噬细胞...............
免疫学检验名解
免疫学检验：是利用免疫学的理论、技术，结合分子生物学及细胞生物学等的原理和技术，对样本中抗原、抗体、免疫细胞以及细胞因子等进行定性或定量检测的一门学科。 免疫学（Immunology)：是通过研究免疫系统的结构与功能，阐明免疫应答反应中机体的防卫功能和病理损伤的机制，为预防、诊断和治疗疾病提供理论基础的一门现代医学学科。 免疫系统（immune system):是执行免疫功能的组织系统，包括免疫器官、免疫细胞、免疫分子。 外周免疫器官：是成熟免疫细胞定居的场所，也是淋巴细胞针对外来抗原启动免疫应答的主要部位。包括：淋巴结、脾脏、扁桃体及粘膜免疫系统。 抗体（antibody，Ab）：是体液免疫应答产生的效应分子；免疫系统在Ag刺激下，由B淋巴细胞或记忆B细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布于血清、组织液等体液中。 补体（complement,C）：包括30余种组分，其广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面，是一个具有精密调控机制的蛋白质反应系统。血浆中补体成分在被激活前无生物学功能，经活化后具有酶活性和多种生物学效应。机体抗感染防御的主要机制。 细胞因子（cytokine）：是由免疫细胞及组织细胞分泌的在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子可溶性多肽蛋白，通过结合相应受体调节细胞生长分化和效应，调控免疫应答。细胞因子和受体的检测对应了解集体的免疫状态和细胞功能具有重要意义。 免疫应答:是指机体免疫系统受到抗原刺激后识别和清除异物的整个过程。分为：固有免疫，适应性免疫。 固有免疫（Innate Immunity）：是生物体在长期种系进化过程中逐步形成的天然免疫体系,非特异性免疫。主要由组织屏障、固有免疫细胞、固有免疫分子组成。 适应性免疫（adaptive immunity)：是指体内T淋巴细胞和B淋巴细胞在接受抗原刺激后产生的免疫应答。又称获得性免疫或特异性免疫。具有特异性、耐受性和记忆性等特点。 ※抗原抗体反应（antigen-antibody reaction)：是指抗原与抗体之间发生的特异性结合反应。可发生在体内，也可发生在体外。 ※抗原表位（epitope)：指存在于抗原分子表面的，能与T/B细胞抗原受体或抗体特异性结合，决定抗原特异性的特殊化学基团。 ※共同抗原表位（common epitope ）：某些抗原分子中含多个抗原表位，而不同抗原之间可能含相同或相似的抗原表位。 ※共同抗原：含共同抗原表位的不同抗原。 ※交叉反应（cross-reaction）：某些抗原诱生的特异性抗体或活化淋巴细胞，不仅可与该抗原的表位特异性结合，还可与相应的共同抗原中相同或相似表位反应。 ※亲和力（affinity)：指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力。 ※亲合力（avidity)：指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度，可表示抗原和抗体复合物的整体稳定性。 ※颗粒性抗原的制备：主要指细胞抗原、细菌抗原和寄生虫抗原，通过分离或纯培养既可获得。 ※可溶性抗原：具有免疫原性的各种可溶性物质，如蛋白质、细菌毒素、酶、补体等皆为良好的可溶抗原。但因这些蛋白质多为复杂的蛋白组分，免疫前需进行纯化。 ※多克隆抗体（polyclonal，Ab）：由机体的多个B细胞克隆产生的针对多个表位的混合抗体。一般是用Ag免疫动物获得的抗体，又称抗血清或免疫血清。 ※免疫佐剂（adjuvant）：指同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质，简称佐剂。 ※单克隆抗体（monoclonal Ab, mAb）：是利用B淋巴细胞杂交瘤技术获得的，由识别一种抗原表位的B细胞杂交瘤克隆合成和分泌的，在理化性质、分子结构、遗传标记和生物学特性等均完全相同的特异性抗体。也称第二代抗体。（1975年Kohler和Milstein首先报道）
免疫学检验试卷试题.doc
免疫学检验试题
章免疫学检验试题 一、选择题 1.SPA 能特异性与下 述哪种 Ig 的 Fc 段结合？ ( ) A.IgG B.IgA C.IgM D.IgD 2.在人类血清的 Ig 中，κ链和λ链之比为？ ( ) A.1:1 B.1:2 C.1:3 D.2:1 3.56℃ 30 分钟可使下列哪种I g 丧失生物学活性？ ( ) A.IgG B.IgA C.IgM D.IgE 4.胎血中出现抗风疹 病毒的何种 Ig，则表示子宫内感染？ ( ) A.IgG B.IgA C.IgM D.IgD 5.补体系统的激活必须有下列哪种成分参与？ ( ) A.C2 B.B因子 C.C1q D.C3 6.补体不具备的作用是？ ( ) A.中和作用 B.促进中和及溶解病毒 C.调理作用 D.溶菌作用 7.补体含量增高见于下列哪种疾病？ ( )
A.肿瘤文含义错误的是： ( ) B.系统性红斑狼疮 A.IL ——白细胞介素 C.血清病 B.EPO ——血小板生成 D.肾小球肾炎素 8. 关于旁路途径正确 C.SCF ——干细胞生长的叙述是： ( ) 因子 A. 需要抗原抗体的识别 D.TNF ——肿瘤坏死因和反应子 B.膜攻击单位与经典途11. 关于 MHC Ⅰ类分径相同子，下列哪项是正确 C.首先被活化的补体成的？ ( ) 分是 C5 A. 存在于一切有核细胞D.需要经典途径的识别上 单位和活化单位的参与 B.只存在于白细胞上 9.能引起恶液质的细 C.只存在于淋巴细胞上 胞因子是： ( )D.只存在于巨噬细胞上 A.TNF- α12. 下列哪种疾病与 B.TGF- βHLA-B27 抗原相关性 C.IFN- α显著： ( ) D.IL-2 A. 系统性红斑狼疮 10. 下列英文缩写的中 B.类风湿性关节炎
免疫学检测法
免疫学检测法 免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。 第一节抗原或抗体的检测 一、检测的原理 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。 1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。 2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。 对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。 （1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品