27种菌种茯苓中茯苓酸分析比较研究

质量控制提供了基础和方法。对于一个药材需要在总体理化定性的基础上,经过性状鉴别,结合指纹图谱相似性鉴别,最终通过指标成分的量化实现对药材的综合质量评价,这样才可以在整体质量上控制好药材。

参考文献:

[1]中国药典[S]1一部120001

[2]杨云,张晶,陈玉婷1天然药物化学成分提取分离手册

[M]1修订版1北京:中国中医药出版社,20031

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[8]中国药典[S]1一部120051

[9]王文燕,赵强,张铁军,等1川芎药材的H PLC指纹图谱

及模式识别研究[J]1中草药,2009,40(12):1980-19831 [10]王文燕,赵强,张铁军,等1决明子的H PLC指纹图谱及

模式识别研究[J]1中草药,2009,40(10):1638-16411 [11]王文燕,赵强,张铁军,等1白芍的H PLC指纹图谱及模

式识别研究[J]1中草药,2009,40(11):1810-18131

27种菌种茯苓中茯苓酸分析比较研究

徐斌1,昝俊峰1,何丽姗1,苏玮2,王克勤2,刘焱文1*

(11湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,湖北武汉430061;

21湖北省中医药研究院,湖北武汉430073)

摘要:目的建立茯苓中茯苓酸的测定方法,比较不同菌种培育的茯苓中茯苓酸的量,为评价不同菌株培育茯苓的品质提供理论依据,从而确定优良菌种,控制茯苓资源品质。方法采用反相高效液相色谱法(RP-H PL C), Kr omasil100-5C18色谱柱(250mm@416mm,5L m),柱温30e,流动相为乙腈-012%甲酸(80B20),体积流量110 mL/min,检测波长242nm。结果茯苓酸在0148~2140L g与其色谱峰面积呈良好线性关系(r=019997),平均回收率100126%,RSD为1126%。不同菌种培育茯苓中茯苓酸的量有所差异。结论该方法简便、专属、稳定,可用于评价不同菌种培育茯苓中茯苓酸量的研究。

关键词:茯苓;茯苓酸;高效液相色谱法

中图分类号:R28216文献标识码:A文章编号:0253-2670(2010)04-0647-03

茯苓为多孔菌科真菌茯苓P oria cocos (Schw1)Wolf的干燥菌核,寄生于松科植物赤松和马尾松的根茎,埋于土壤下20~30cm,通过菌株繁衍而成。茯苓收载于历年版5中国药典6,具渗湿利尿、和胃健脾、宁心安神的功效;临床主要用于治疗小便不利、水肿、脾胃气虚、食少便溏、体倦乏力及心神不宁、惊悸、失眠等症[1]。现代药理研究表明,茯苓具有抗肿瘤、调节免疫功能、抗炎、抗过敏等方面的生物活性[2]。茯苓为药食两用的传统中药大品种,是诸多中药方剂和中成药配伍组方的重要中药,并大量出口国外。我国是世界上唯一进行茯苓人工栽培的国家,菌种栽培已成为当前全国茯苓的主栽培模式,用于培育茯苓的菌种约有40余种。由于各地使用菌种混乱,加上各菌株多年交叉混用,导致茯苓药材品质差异较大[3]。为了规范栽培茯苓使用的菌种,保证茯苓药材的质量,本研究采用RP-H PLC 对收集的27种菌培育的茯苓药材中主要有效成分茯苓酸(pachy mic acid)进行了分析比较研究,筛选出栽培茯苓药材的优良菌种,并建立了简便、快速、准确可靠的定量测定方法。本项研究对于规范茯苓药材的栽培方法,控制茯苓药材的质量具有重要参考意义。

1仪器与试药

Ag ilent1100液相色谱仪,U V)2401紫外检测器,Ag ilent色谱工作站;KQ3200DE型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);Sarto nus型电子天平(十万分之一)(德国);茯苓酸对照品为本实验室自制,经面积归一化法测定后确认其质量分数大

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中草药C hinese Traditional and Herbal Drugs第41卷第4期2010年4月1收稿日期:2009-05-11

基金项目:国家/十一五0科技支撑计划项目(2006BAI06A15-4-5)

作者简介:徐斌(1984)),男,湖北宜昌市人,硕士,研究方向为中药学。

T el:139********Fax:(027)88920834E-m ail:x ubin2003tcm@1631com

*通讯作者刘焱文

于98%;茯苓药材为全国27种菌种培育的茯苓,茯苓药材由各地方研究机构提供,并经湖北省中医药研究院王克勤教授鉴定,菌种及其来源见表1。乙

腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。2 方法及结果

211 色谱条件:色谱柱:Kro masil 100-5C 18色谱柱

(250mm @416mm ,5L m);柱温:30e ;流动相:乙腈-012%甲酸(80B 20);体积流量110m L/min;检测波长242nm,色谱图见图1。212 对照品溶液的制备:精密称取茯苓酸对照品2140mg,置于10m L 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得01240m g/m L 的茯苓酸对照品溶液。

表1 茯苓菌株与来源

Table 1 Sources of bacterial strains of Poria

编

号菌株名称菌种来源

茯苓酸质量分数/%编号菌株名称菌种来源

茯苓酸质量分数/%15178

中国科学院微生物研究所

01299615

GD 广东广州市微生物研究所0123292ACCC50864中国农业微生物菌种管理保藏中心01252016FJ006福建农业大学生命科学学院0120943ACCC50876中国农业微生物菌种管理保藏中心01201617AH 安徽岳西

0118694ACCC50478中国农业微生物菌种管理保藏中心01226718S 1陕西省洋县天麻研究所0122565A9安徽农大,后经华中农大紫外诱变01163419T 1同仁堂1号(湖北英山)0120026SD(GD)山东济宁光大食用菌科研中心01172320S D(JX)山东金乡县真菌研究所0118177D8黑龙江东北食(药)用菌研究所

01225521J Z28陕西省西乡县古城菌研所0118478SC 四川省农科院食用菌研究开发中心01256922F5湖北武汉华奉食用菌研究所0121089ZJ

浙江云和县象山食用真菌研究所01217123H Z 湖北华中食用菌栽培研究所01163910H BM C 湖北麻城县科委食用菌技术研究所01159924E1华中农业大学菌种实验中心01146211H BS Z 湖北随州厉山镇食用菌技术研究所01156025901福建三明真菌研究所01210912F8

湖北武汉周玉麟食用菌研究所01198626P0

野生,采自大别山01186413protoplast9华中农业大学真菌研究所

01183527

Y1(BS)

云南宝山县

011795

14

GZ

贵州习水县酒镇食用菌研究中心

012217

t /min *-茯苓酸*-pachymic acid

图1 茯苓酸与茯苓药材HPLC 图

Fig 11 HPLC Chromatogram s of pachymic acid (A)

and Poria (B)

213 供试品溶液的制备:精密称取不同菌种培育茯苓粉末(过60目筛)015g,置于50mL 具塞锥形瓶中,准确加甲醇25m L,加塞称定,浸泡25m in,超声

60m in,放置,称质量,用甲醇补足减失的质量,滤过,精密吸取续滤液5mL,置于蒸发皿中,水浴蒸干,残留物用甲醇稀释至2mL 量瓶中,即得。

214 线性关系的考察:分别精密吸取茯苓酸对照品溶液10L L (质量浓度为01048、01096、01144、01196、01240mg /mL),注入液相色谱仪中,测定其峰面积。以进样质量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程:Y =202199X -171185(r =019997),结果表明茯苓酸在0148~2140L g 呈良好线性关系。215 精密度试验:精密吸取同一样品溶液10L L,重复进样6次,测定茯苓酸的峰面积计算得其RSD 为0150%(n =6)。216 稳定性试验:精密吸取同一样品溶液,分别于0、1、2、4、8、24h 各进样10L L,测定茯苓酸的峰面

积值,计算得其RSD 为1107%(n =6)。结果表明供试品溶液在24h 内稳定。

217 重现性试验:精密称定同一批茯苓粉末(015000?010005)g ,共6份,制备供试品溶液,各精密量取10L L 进样,测定茯苓酸量依次为114611、114271、114660、114586、114242、115064L g,RSD 为2106%。

218 加样回收率试验:精密称取9份已知量的茯苓样品各0125g,分别加入0158、0173、0187m g 茯苓

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648#中草药 C hinese Traditional and Herbal Drugs 第41卷第4期2010年4月

酸对照品各3份,按213项下方法制备并测定量,计算得平均回收率为100126%,RSD值为1126% (n=9)。

219样品测定:取不同菌种的茯苓粉末各3份,制备供试品溶液,用0145L m微孔滤膜滤过,滤液密封备用,分别精密吸取各供试品溶液10L L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,计算样品溶液中茯苓酸的量,结果见表1。

3讨论

311采用高效液相色谱分析技术,对我国不同地区使用的27种菌株培育的茯苓的主要有效成分,即茯苓酸的量进行了分析研究,建立了可靠性强的定量测定方法。5中国药典62005年版收载茯苓药材的质量标准中缺少定量测定项,本研究结果为完善茯苓药材的质量标准提供了参考依据。

312茯苓是通过菌种依附松木繁殖的菌类中药材,菌种对茯苓药材质量起着至关重要的作用。27种菌种茯苓中有效成分茯苓酸的量分析比较研究表明,不同菌种培育的茯苓中茯苓酸量有较大差异,其中ACCC50864、5178和SC3个菌种茯苓中茯苓酸的量明显高于其他菌种茯苓。本研究结果为规范茯苓的栽培提供了一定科学依据。

参考文献:

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谱研究[J]1中草药,2004,35(3):273-2751

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[3]王克勤,方红,苏玮,等1茯苓规范化种植及产业化发展对

策[J]1世界科学技术)))中医药现代化,2002,4(3):6911

紫背金盘的生药学鉴定

易刚强,李云耀,陈晓阳,蔡俊龙,王珏

(湖南中医药大学药学院,湖南长沙410208)

摘要:目的对紫背金盘进行生药学鉴定,为其鉴别及应用提供科学依据。方法采用原植物鉴别,显微鉴别,薄层鉴别的方法。结果紫背金盘在原植物,显微,薄层等具有专属性特征。结论通过原植物,显微,薄层能够很好地鉴别紫背金盘。

关键词:紫背金盘;原植物;生药学鉴定;显微鉴定;薄层鉴别

中图分类号:R282121文献标识码:A文章编号:0253-2670(2010)04-0649-04

紫背金盘为唇形科植物紫背金盘Aj ugae nip-p onensis M akino的全草,又名白毛夏枯草,破血丹,筋骨草,石灰菜,九味菜,散瘀草,散血丹,退血草,散血草,具有清热解毒,凉血散瘀,消肿止痛之功效,有收缩血管,降血糖、降脂和降压,抗肿瘤作用,抗炎、抑菌和抗病毒,促进创伤愈合等药理作用,该植物主要分布在我国东部、南部及西南各省,西北至秦岭南坡,此外,日本,朝鲜亦有分布[1,2]。在我国由于紫背金盘、筋骨草A.ciliatae Bunge、金疮小草A. decumbens Thunb.3种植物近缘,均属唇形科筋骨属,统称/白毛夏枯草0的名称,都作为筋骨草使用[3,4],据文献报道筋骨草、金疮小草均含有木犀草素活性成分,而紫背金盘未见其报道,为此笔者将木犀草素作为该植物的鉴别手段[5,6]。本实验主要对紫背金盘性状鉴别、组织、粉末的显微鉴别以及木犀草素薄层色谱鉴别等进行研究,为其资源研究奠定一定的基础。

1实验部分

111材料与方法

11111药材与仪器:紫背金盘由民间赤脚医生在湖南省宁乡县草地、林地及阳坡地采集,经湖南中医药大学药学院彭菲教授鉴定)。普通刀片;植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);数码相机(Sony);数码显微镜(SXJ)2)。

112方法

11211取部分新鲜药材,按常规制片法制作切片,在显微镜下观察,成像系统成像。

11212取部分干燥药材,粉碎成粉末,制成装片,在显微镜下观察,成像系统成像。

11213将硅胶与015%的CM C-Na按3B1的比

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中草药C hinese Traditional and Herbal Drugs第41卷第4期2010年4月1收稿日期:2009-07-16

基金项目:湖南省教育厅科研项目(08C630);2009湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目

作者简介:易刚强(1965)),男,副教授。Tel:(0731)88458227E-mail:yigangqiang2005@yah https://www.wendangku.net/doc/a4947746.html,