猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展_刘运超

河南农业科学，

2015，44（10）：12-16Journal of Henan Agricultural Sciences

doi ：10．15933/j．cnki．1004-3268．2015．10．003

收稿日期：2015－05－21

基金项目：中国博士后科学基金（2013M541980）；河南省重大科技专项（141100110100）；河南省基础前瞻类项目（20141644）作者简介：刘运超（1982－），男，河南周口人，助理研究员，博士，主要从事动物疫病与疫苗研究。

E －mail ：yunchaoliu2012@163．com

*通讯作者：张改平（1960－），男，河南内黄人，研究员，博士，主要从事动物疫病免疫机制与疫苗研究。

E －mail ：zhanggaiping2003@163．com

猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展

刘运超1，陈玉梅1，2，姬鹏超1，赵宝磊3，王聚财3，邓瑞广1，张改平

1，3*

（1．河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；

2．郑州大学基础医学院，河南郑州450001；3．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002）

摘要：猪细小病毒（PPV ）感染可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪多系统衰弱综合征和肠炎性腹泻等疾

病，给养猪业造成巨大的经济损失。临床防控以接种疫苗为主，常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。随着生物技术的发展，新型PPV 疫苗的研究工作成绩显著。VP2蛋白是PPV 主要的衣壳蛋白，对研究新型PPV 疫苗至关重要，综述了猪细小病毒VP2蛋白及病毒样颗粒疫苗的研究进展，以期为新型PPV 疫苗的研究提供参考。

关键词：猪；猪细小病毒；VLP ；疫苗；VP2蛋白中图分类号：S852．65文献标志码：A 文章编号：1004－3268（2015）10－0012－05

Ｒesearch Progress of Virus Like Particles Vaccine Against PPV

LIU Yunchao 1，CHEN Yumei 1，2

，JI Pengchao 1，

ZHAO Baolei 3，WANG Jucai 3，DENG Ｒuiguang 1，ZHANG Gaiping 1，

3*

（1．Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology ，Henan Academy of Agricultural Sciences /Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture ，

Zhengzhou 450002，China ；2．College of Basic Medical Science ，Zhengzhou University ，Zhengzhou 450001，China ；3．College of Animal Science and Veterinary Medicine ，Henan Agricultural University ，Zhengzhou 450002，China ）

Abstract ：Porcine parvovirus （PPV ）is the major causative agent in swine ，which usually causes

reproductive failure ，weaned piglets multiple system weak syndrome ，inflammatory diarrhea and other

diseases ，

causing serious economic losses in the swine industry．The vaccination is the most effective method for preventing PPV infection and its complications ，which including attenuated vaccine and

inactivated vaccine．With the development of genetic engineering ，

the research work of the novel vaccine against PPV has a remarkable progress．The VP2protein is a main target for neutralizing antibodies ，which is very important for the novel vaccine against PPV．This paper reviewed the research progress of parvovirus VP2protein and virus like particles vaccine against PPV ，which would be helpful for the novel vaccine against PPV．

Key words ：swine ；porcine parvovirus ；VLP ；vaccine ；VP2猪传染病对我国养猪业危害严重，防治猪传染病对养猪业发展至关重要。猪细小病毒（porcine parvovirus ，PPV ）是一种极为常见的病原体，常引起猪的繁殖障碍，怀孕母猪的死胎和“木乃伊胎”、断奶仔猪多系统衰弱综合征等。PPV 属于细小病毒科细小病毒属，无囊膜病毒，平均直径20 26nm ，分

子质量为5．3?103

ku ，是目前动物病毒中最小的一

类单链线状DNA 病毒。PPV 流行极为广泛，95%的猪场检测为病毒阳性，给养猪业造成巨大的经济损失

［1］

。PPV 可在病猪心脏、肺脏、脾脏和性腺中复

制，

但其主要靶器官是母猪子宫，子宫内病毒含量最高可达1012

拷贝/mL 。PPV 在母猪和仔猪体内的致

第10期刘运超等：猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展

病位置略有差异，主要感染母猪的繁殖器官，同时也破坏肺脏等呼吸器官和脾脏等免疫器官；而对仔猪的损伤主要是破坏脾脏和性腺等生理功能，同时破坏心脏等中枢器官，从而造成死亡［2］。Bachmann 等［3］研究表明，PPV感染妊娠55d以下的母猪可引起死胎，但是感染妊娠72d以后的母猪却不影响胎儿正常分娩与存活。

1猪细小病毒基因组结构特点

1967年Cartwright在流产母猪体内首次分离到PPV。该病毒属于细小病毒科，成熟的PPV病毒基因组大小约5kb，3'－端有折叠形成Y形结构的102bp的回文序列，5'－端有一个折叠形成U形结构的127bp的回文序列［4-5］。研究［5-7］显示，PPV基因组包括2个开放阅读框（open reading fragment，OＲF），OＲF1编码非结构蛋白NS－1、NS－2和NS－3；OＲF2主要编码结构蛋白VP1、VP2和VP3；另外PPV基因组还包含一个小的OＲF，编码非结构蛋白SAT［8］。PPV的NS序列在进化上相对保守，其编码的非结构蛋白在调控PPV DNA复制方面发挥作用。PPV结构蛋白经过规则的排列组装形成病毒衣壳蛋白，能够包裹病毒DNA入侵宿主细胞。Molitor 等［9］采用SDS－PAGE方法鉴定了PPV的3个结构蛋白VP1、VP2和VP3，且证实这3种蛋白质均能诱导兔产生抑制红细胞凝集抗体。VP1蛋白C－端氨基酸与VP2N－端氨基酸序列相互重叠，该区域富含碱性氨基酸残基，能增强PPV与宿主DNA的结合，稳定病毒的单链基因组DNA，在病毒侵染细胞过程中起重要作用［10-11］。VP3可能是VP2翻译后加工的产物，只出现在衣壳装配和病毒基因组包装后［12］。VP2蛋白是构成病毒衣壳的主要成分，约占病毒衣壳蛋白总量的80%，包含PPV主要的B细胞和T细胞抗原表位［11，13］。目前，发现VP2上有9个线性B细胞表位，在其N末端区域发现有病毒中和表位［8，11，13-15］。Sedlik等［16］研究发现，VP2蛋白C末端的完整性对于病毒衣壳的形成是必不可少的。

重组表达的PPV VP2蛋白能自我装配成病毒样颗粒（virus-like paritcles，VLP）（图1），是良好的免疫原，能够刺激机体产生高滴度抗PPV抗体，保护机体免遭病毒的攻击［17］。同时，PPV VLP能够在VLP表面展示其他病毒来源的抗原蛋白，也是良好的抗原转运载体［18］。因此，研究VP2蛋白和VLP 的形成对发展PPV新型疫苗具有很高的价值

。

图1PPV VP2及其形成的VLP的结构

2猪细小病毒传统疫苗

PPV的传统疫苗主要以弱毒苗和灭活苗为主。

最早用于临床的PPV疫苗是NADL－2弱毒株疫

苗。Paul等［19］将PPV强毒株经过50次的细胞连续

传代，获得可用作疫苗的PPV弱毒株。但进一步的

研究结果显示，在对母猪经口鼻接种PPV致弱苗

后，致弱的PPV不能经胎盘感染胎儿，但当在子宫

内接种PPV致弱苗后，致弱苗可以感染胎儿甚至导

致胎儿死亡，因此，PPV弱毒苗应限于非怀孕母猪使

用，安全性有待提高。国内研究者对PPV弱毒疫苗

也进行了一些研究。广西兽医研究所蒋玉雯等［20］

分离到1株自然弱毒株（PPV－N株），并于2006年

用PPV－N株弱毒疫苗进行区域试验，结果显示，

PPV－N株弱毒疫苗能有效抵抗PPV强毒攻击，在

猪场应用取得了明显的经济和社会效益。

由于PPV弱毒疫苗有毒力返强的危险，各国研

究者开始采用更为安全的灭活疫苗。20世纪80年

代，PPV灭活苗在美国、澳大利亚以及法国等国家得

到了普遍的应用。在中国，从国产兽用生物制品的

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河南农业科学第44卷

批签发数据来看，目前使用的PPV疫苗主要是灭活疫苗，包括WH－1株、CP－99株和BJ－2株3种毒株。PPV疫苗的应用大大降低了因PPV感染引起的母猪繁育失败，目前仍是预防猪细小病毒感染的主要手段［21］。PPV疫苗经历了弱毒苗到灭活苗的发展过程，安全性有了很大提高。但是，灭活疫苗存在灭活不彻底和散毒的可能，而弱毒疫苗存在毒力返强及重组的危险，故研制一种安全、高效的新型PPV疫苗迫在眉睫。猪细小病毒结构蛋白VP2由于其良好的免疫原性及其可自行装配成病毒样颗粒（VLP）的特性，给PPV的免疫预防带来了广阔的应用前景。

3猪细小病毒VLP疫苗的研究

3．1PPV VP2形成的VLP疫苗

Martinez等［17］将PPV VP2基因成功克隆到杆状病毒表达系统中，利用VP2蛋白自我组装的特性，成功地制备了PPV类病毒粒子（VLP），试验结果显示，其免疫效果与商品化的PPV疫苗相当。Antonis等［22］应用杆状病毒表达载体系统成功制备出PPV类病毒粒子，并对豚鼠、仔猪和怀孕母猪进行了免疫试验。该研究小组利用杆状病毒表达的PPV VP2蛋白能自行装配成VLP，电镜下呈球形颗粒，直径20 30nm，形状大小与PPV病毒粒子相似［23］。该研究以多种佐剂混合PPV VLP后免疫豚鼠，每只免疫0．2μg，在免疫后28d和49d分别采用血凝抑制试验（hemagglutination inhibition assays，HI）、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosor-bent assay，ELISA）和病毒中和试验检测豚鼠抗体变化。检测结果显示，VLP免疫的豚鼠产生较高的特异性抗体和中和抗体，未免疫组没有产生抗体，且PPV VLP免疫组豚鼠产生的中和抗体显著高于商品化灭活疫苗免疫组。研究者在怀孕的母猪中进行了类似的试验，未免疫的阴性母猪没有抗体反应。在免疫的各组中，PPV VLP免疫后28d PPV抗体的HI效价在101．6 2．4，在免疫后49d HI效价可以达到103 3．5。灭活疫苗免疫组产生的PPV特异性抗体滴度和HI滴度与VLP免疫组相当，但是中和抗体效价显著低于VLP免疫组。这一结果与豚鼠试验结果一致，表明VLP疫苗在刺激机体产生中和抗体方面比PPV灭活疫苗更有优势。进一步的攻毒保护试验验证了这种VLP疫苗的免疫保护效力。试验分为VLP免疫组和未免疫组。PPV VLP免疫组16头母猪，每头免疫剂量0．7μg，免疫28d后HI平均效价达到103．5以上，免疫后77d HI均效价达到104以上，未免疫组10头母猪未检测到HI效价。免疫后77d进行PPV攻毒试验，观察2组母猪产仔的情况。免疫组有10头母猪产仔，平均每头产仔量为5 18头，对照组有7头母猪生产69头仔猪。在未免疫组生产的69头仔猪中，HA检测为PPV病毒阳性的仔猪有54头，占总数的78%；ELSIA检测为PPV阳性的仔猪有69头，占总数的91%。但是，采用同样的检测方法，免疫组母猪生产的仔猪中均未检出PPV病毒。这表明PPV VLP疫苗具有很好的免疫保护效力，能够保护怀孕母猪和仔猪免受PPV 病毒侵袭。

随后，又有多位研究者将PPV VP2基因克隆到杆状病毒表达系统中进行蛋白质表达，成功获得了PPV类病毒粒子，且能在豚鼠和猪体内诱导高滴度的抗体产生［24-25］。另有研究者在酵母表达系统中将PPV VP2蛋白进行成功表达，并在体外装配形成VLP，且具有良好免疫效果，诱导动物体产生高滴度的抗体［26-27］。以上研究表明，真核表达系统表达的PPV VP2能够形成PPV VLP，并且能够在豚鼠和猪体内诱发B细胞免疫反应，产生高滴度的针对PPV 的抗体。

杆状病毒表达的PPV VLP疫苗的免疫效果在试验中得到肯定，但是受制于杆状病毒表达系统的高昂成本，这种疫苗的推广具有很大的难度。原核表达系统产量高、成本低、技术难度较低，具有明显的成本优势。司艳红等［23］利用PCＲ方法将扩增的PPV VP2完整基因克隆到原核表达载体pET－32a 中，在大肠杆菌中成功表达了VP2与Trx－His－tag 的融合蛋白，但是重组蛋白以包涵体形式表达，经过复性处理后未能得到VLP。试验结果显示，PPV VP2包涵体虽然能够引起针对PPV的免疫反应，但是没有证据显示这种免疫反应具有足够的保护力，而PPV－VLP疫苗能够诱发足够的免疫保护抵抗PPV的感染。

不同表达系统表达的VP2蛋白在组装VLP和免疫活性上的差异与VP2蛋白的结构有重要关系。上述研究结果显示，杆状病毒表达的PPV VP2蛋白能够组装成VLP并诱发足够的免疫反应，但是大肠杆菌表达的VP2蛋白不能组装VLP，免疫效果不佳。这表明PPV VLP的形成与免疫保护效果密切相关，进而受到蛋白质来源的影响。另外，Qi等［28］应用pET－32a载体系统利用大肠杆菌Ｒosetta菌株成功表达了可溶性的PPV VP2重组蛋白，提示原核表达的VP2蛋白也有形成VLP的可能性。

PPV VLP疫苗与传统灭活疫苗相比有几个显

41

第10期刘运超等：猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展

著的优点：其构象表位更类似于病毒，易产生类似于病毒的抗体反应或免疫系统反应；由于VLP疫苗不包含病毒基因组，不含有潜在的病毒致病基因，因此能诱导抗体应答而无感染危险性，安全性较高；由于VLP制备的产率比猪细小病毒组织培养要高得多，其生产成本明显较低，这可以提供一种更为经济有效的疫苗。

3．2基于PPV VP2形成的VLP嵌合疫苗

Sedlik等［16］研究发现，在PPV VP2N端引入脊髓灰质炎病毒的T、B细胞表位并不影响VLP结构的形成，且引入的T细胞表位能够在体内诱导T细胞免疫应答，同时引入的B细胞表位多肽并没有引起相应特异性抗体产生。随后，该课题组又将淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（lymphocytic choriomenin-gitis virus，LCMV）的CD8+T细胞表位引入PPV VP2 N端制备成嵌合VLP疫苗，免疫注射或鼻内给药途径免疫猪，结果显示，嵌合VLP疫苗能够引起机体产生高滴度的抗PPV的抗体，同时鼻内免疫也引起了强烈的肽特异性细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell，CTL）的免疫应答［29］。Moron等［30］将鸡卵清白蛋白（chicken egg ovalbumin，OVA）的257—264表位多肽插入侧翼序列（LEQLESIINFEKLTE），并引入到PPV VP2N末端，用杆状病毒表达系统表达并制备成嵌合VLP疫苗PPV－VLP－OVA，结果表明PPV－VLP－OVA可以经由树突状细胞呈递给CD8+T细胞，引起相应的免疫应答。随后Ｒueda 等［31］研究了引入仅仅插入OVA表位肽及引入不同侧翼序列的外源OVA表位肽制备成不同类型的嵌合疫苗，结果显示，侧翼序列的正确插入有助于MHC I对PPV－VLP－OVA的递呈。Ｒodriguez 等［32］将疟原虫虫株环子孢子蛋白（circumsporozoite protein，CSP）的CD8+T cell表位多肽（SYVPSAEQI）引入PPV VP2N末端，用杆状病毒表达系统表达，制备成嵌合疫苗PPV－PYCS VLP并免疫动物，结果表明，嵌合PPV－PYCS VLP可以明显增强CD8+ T细胞的免疫应答。有研究者将合成的4拷贝的生长抑素（Somatostatin）多肽（SS4）引入PPV VP2N末端用杆状病毒表达系统表达，制备成嵌合疫苗PPV－VLPs－SS4并免疫动物，结果表明该疫苗效果同灭活苗一样，均能够引起机体产生高滴度抗PPV VP2的抗体，同时也能产生特异性中和抗体，另外，该嵌合苗也刺激机体产生了抗SS抗体［33］。

上述研究结果显示，PPV VP2蛋白N端引入部分氨基酸并不影响其VLP的形成，也不影响该嵌合VLP引起机体PPV抗体的产生；且经引入T细胞表位多肽序列，可引起相应的T细胞免疫应答反应，增强VLP疫苗的T细胞免疫应答效果。这些研究成果为PPV疫苗的研制提供了新思路，为PPV VLP 疫苗及多价疫苗的研制提供了理论基础。

4展望

PPV在我国猪场广泛流行，造成养猪业巨大的经济损失。PPV的防控主要依靠接种PPV疫苗，因此，疫苗的质量与效果对PPV的防控有着重要的影响。PPV疫苗经历了弱毒疫苗到灭活疫苗的发展过程，但是由于病毒灭活不彻底、弱毒株毒力返强和病毒基因重组等危险的存在，传统PPV疫苗在应用中暴露出越来越严重的问题。因此，研制一种安全、高效的新型PPV疫苗对PPV的防治至关重要。PPV VLP疫苗具有高效的免疫原性，而且不存在散毒和基因重组的威胁，给PPV的免疫防控带来了新的希望，成为各国研究的焦点。随着对PPV新型疫苗研究的深入，PPV VLP疫苗必将在PPV防治中发挥重要作用。

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猪圆环病毒的研究进展

猪圆环病毒的研究进展 引自--华中农业大学黄青伟 一、PCV 的发现 猪圆环病毒(porclne Circovirus) 于1974 年在PK 一15 细胞中发现，当时认为是一种细胞污染物，后证实为一种新的病毒。该病毒是一种环状、无囊膜、单链DNA 病毒；在ICTV 第6 次病毒分类报告中，将猪的圆环病毒(PCV) 、鸡贫血病毒(cA V) 、鹦鹉喙羽病毒(PBFDA V)3 个病毒归类于网环病毒科，圆环病毒属成员。 病毒的理化特性 PCV 粒子为20 面体对称结构，其直径人小为17nm ，CsCL 浮密度l 37g ／era3 。无囊膜，含有单股负链环状DNA 。基因组长 1 ．7kb ，分子量5 8 × 102 。PCV 不具凝血活性，可抵抗PH3 ．0 的环境，经氯仿作用不失活，该病毒只在猪源和VERO 细胞培养物中才能完全复制，并且依赖细胞周期s 期表达的细胞蛋白。可在PK —15 细胞上增殖但不引起明显的细胞病变。Tischer 等发现，用a 一氨基葡萄糖处理细胞培养物后可促进病毒的复制。PCV 有两种基因型：PCV 一 1 和PCV 一 2 。前者基因组为1759bp ，后者基因组为1768bp 。PCV 一1 有7 个0RF ，编码大于5KD 的蛋白质。其巾ORFl 编码的蛋质与植物矮小病毒(plant nanovirus) 和喙羽病毒(heak and featherdisease ViruS)ORFL 码的蛋白质有较高的同源性。PCV 一2 有11 个ORF 预计分别编码36 — 2KD 的蛋白，但目前只有 6 个得到证实。PCV 一1 和PCV 一2_ 干相，ORFI 核苷酸和编码的蛋白质的同源性分别为83 ％、86 ％．而ORF2 分别为67 ％、65 ％。二者的主要结构蛋白均由ORF2 编码。 从发病猪的淋巴组织发现了PCV 病毒颗粒，说明发生了病毒传染。用PCR 方法从发病猪淋巴组织中和人工感染仔猪的鼻腔分泌物和粪便中检测到了PCV 和DNA 。 二、流行病学 PCV 的来源现在还不清楚，但它广泛存在于猪源肾细胞中已经得到证实。免疫荧光和免疫酶组化法也证明，PCV 抗原广泛存在于不同代次的PK — 15 、猪源原代、继代细胞以及1 ～19 日龄的猪体内。Gills 等(1988) 还证实，美国菌种收藏中心PK 一15 细胞亚系CCL 一33 ，存在PCV 抗原。 Tischer(1986) 证实，在德国柏林和德国北部两个地区的屠宰场，发现有77 ％～95 ％的猪存在PCV 抗体。另外，还发现柏林地区野猪也存在PCV 抗体。Edwards 等(1994) 证实，他们收集的血清样品86 ％(75 ／87) 存在PCV 抗体，Hines 等(1995) 证实，在美围佐治亚州的11 个猪群、北卡罗来纳州的 1 个猪群、衣阿华州均存在PCV 抗体，抗体阳性率为53 ％(208 ／399) 。此外，加拿大、澳大利亚、新西兰等国家也有猪群中存在PCV 抗体的报道。但以上报道均未发现感染猪有临床症状，因此可以断言PCV 一 1 的流行是世界性的。 随着PCV 一 2 概念的提出，目前在德国、法国、新西兰、美国、加拿大、爱尔兰、印度、日本、中国台湾等国家和地区已有从PMWS 猪中检测到PCV 一 2 的报道。我国郎洪武等通过ELISA 方法在可疑猪群中也大量的检测到了PCV 一 2 抗体。这些资料说明PCV － 2 也已在世界范围内流行。Allen 指出PCV 一 1 可能在猪的育肥期间发生感染，北爱尔兰的一项纵向研究指出仔猪在出生8 ～9 周龄后，血液中PCV — l 盼母源抗体消失，但在13 ～15 周龄时PCV 一1 的抗体又出现。这说明PCV 一1 感染主要发生在第11 ～13 周龄期间，而这恰好是仔猪从保育舍向育肥舍转移的时期。

高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R

高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株）在广东小范围试用效果良好 高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的一种急性高致死性传染病。2006年5～12月，该病在我国南方部分地区暴发流行，给养猪业造成极大损失。农业部随后组织专家开展流行病学、病原学和活疫苗研制等科技攻关，证实疫情主要由猪繁殖与呼吸综合征变异病毒引起。2008年以来疫情得到有效遏制。为进一步巩固防控成果，保障养猪业健康发展，今年7月，农业部兽医局决定在广东等6省，对广东大华农动物保健品股份有限公司、中牧实业股份有限公司成都药械厂、吉林元亨生物技术有限公司、扬州威克生物工程有限公司生产的高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株），进行小范围试用和效果评价试验。我省的试验结果表明，4个厂家的活疫苗免疫效果总体比较理想，免疫安全性较好，但也存在一定的差异。 一、小范围试验情况 试验用的高致病性猪蓝耳病活疫苗，由上述4个厂家提供。试验前，撕掉疫苗标签，分别用A、B、C、D编号代替进行盲样试验。为顺利开展这项试验工作，我所（中心）组织制定了《广东省高致病性猪蓝耳病活疫苗使用和效果评价方案》，选择惠州、江门市的9个猪场的560头猪，组成12个试验组，分本底调查、试验评估两个阶段进行。 （一）本底调查阶段（6月30日至7月18日）。 试验前，对参试猪场的饲养规模、猪的品种、饲养管理、猪群健康状况、蓝耳病疫苗免疫背景、疫病发生状况等进行调查摸底，并对参试猪进行血清学检测。结果显示，9个参试猪场存栏生猪50～13225头，猪群生长状况良好，未发生猪蓝耳病等疫病，其中，有7个猪场的能繁母猪和3个猪场的仔猪曾注射猪蓝耳病普通株弱毒疫苗。参试猪的猪蓝耳病抗体阳性率在0～92%之间，有4个场6份血清样品检出猪蓝耳病普通株病毒，但均未检出高致性猪蓝耳病病毒。 （二）试验评估阶段（7月20日至9月20日）。 1.小范围免疫试验。为符合养猪生产实际情况，每种疫苗分别选择管理水平有一定差异的1个场规模较大和1个规模较小的猪场进行一次性免疫试验。每场接种50头猪，其中，25头作为免疫对照，25头跟踪采样并用法国LSI公司试剂监测免疫效果。结果显示，4个厂家活疫苗的抗 —1—

大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗_李少伟

收稿日期：2013-12-24 基金项目：国家自然科学基金项目(30925030；81172885)*通信作者：E-mail ：nsxia@https://www.wendangku.net/doc/aa1642332.html, 夏宁邵，男，1964年7月生，教授，厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任，公共卫生学院院长，全国体外诊断产业技术创新战略联盟理事长。 长期致力于病毒性疾病的应用基础及转化研究。主持研制出全球第一个商品化重组戊型肝炎疫苗及30余种传染病诊断试剂盒并均实现产业化，研制的重组人乳头瘤病毒16/18型二价疫苗正在进行三期临床试验。所主持项目获国家技术发明二等奖、国家科技进步二等奖、中国专利金奖各1项，获授权专利22项，在Lancet 、PNAS 等SCI 刊物发表论文90余篇。 大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗 李少伟，夏宁邵 * (厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门 361102) 摘要：重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式，形态结构与天然病毒高度相似，位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别，可激发机体产生保护性免疫反应，且不含有病毒基因，因此，是一种理想的疫苗形式，也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产，具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点，在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展，特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。 关键词：疫苗；病毒样颗粒；大肠杆菌；戊型肝炎病毒；人乳头瘤病毒；重组蛋白 Virus-like particle-based vaccine development using Escherichia coli expression system LI Shaowei, XIA Ningshao * (National Institute of Diagnostics and Vaccine Development in infectious disease, Xiamen University, Xiamen 361102, China ) Abstract: Virus-like particles (VLPs) are generated by the self-assembly of viral structural protein using various expression systems. VLPs ensemble native virus particles in morphology and maintain key immune epitopes as authentic virus. In light of nanometer-sized particles with diameters of 20- 60 nm, VLPs were shown to be a passport to immune recognition, thus being capable of eliciting strong protective immune responses. Recombinant VLP-based vaccines have superior safety profiles due to lack of any viral genome. There are several licensed and highly successful VLP-based vaccines produced using recombinant DNA

猪冠状病毒病

猪冠状病毒病 ?秋末初冬是猪的冠状病毒病高发期。引起猪拉稀的冠状病毒病主要有：猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻；前者是由冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒引起以呕吐和腹泻为主的传染病。临床上各种年龄的猪都易感染，但以10日龄以内的乳猪发病率和死亡率最高，可高达100%。后者是由猪流行性腹泻病毒引起猪的一种肠道传染病。以水泻、呕吐和脱水为主要症状。 一、病原对外界的抵抗力：冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒在 阳光下曝晒6小时即被灭活，但放在阴暗处7天还能感染。病毒不耐干燥和腐败，在PH值4—9时稳定，PH值3时死亡。常用消毒药： 0.03%甲醛、1%苯酚、0.1—0.3%次氯酸钠、0.5—1%氢氧化钠、0.3 —0.5%过氧乙酸以及碘制剂等均可杀灭。猪流行性腹泻病毒对外界抵抗力不强，常用碱性消毒药能很快将病毒杀死。 二、流行特点病猪和带毒猪是主要传染源，病毒从粪便排出污染 环境而散播传染，感染途径主要是健康猪采食了含有病毒的饲料、水，经呼吸道吸入了带病毒的空气、尘埃而感染。密闭式猪舍，在秋末初冬湿度较大、温度低及高密度饲养的猪群更易感染本病，几天之内使全场的猪只发病。 三、预防①加强饲养管理，在晚秋至初冬及寒冷季节注意天气变 化，保持猪舍内温度相对恒定，尤其是产房和育成猪舍，产房昼夜温度要在25℃左右，护仔箱内温度要在30℃以上，育成猪舍温度要在22℃以上。在保暖的基础上做好通风换气，保持室内空气新鲜，地面

干燥，防止贼风侵袭，防潮湿，室内湿度保持在70%以下；②加强兽医卫生防疫工作：饲养人员进入猪舍要更衣，换工作鞋，踏消毒池。洗净双手，经消毒后方可以进入猪舍工作。猪舍内每天认真清扫洗刷，每3天带猪消毒1次，药物可选用0.3—0.5%次氯酸钠和过氧乙酸。环境及猪舍内地面可以用2%的火碱消毒。严禁从疫区、疫场引猪。当猪群受到感染威胁时，防止因人员、车辆及狗、猫或苍蝇流动以及用具造成传播。疫苗接种，妊娠母猪于产前45、15天分别注射传染性胃肠炎疫苗和猪流行性腹泻疫苗免疫1头剂。初生仔猪通过初乳获得足够的免疫抗体，或者乳猪生后注射疫苗1头剂。应用康复猪抗凝血或高免血清，每日口服10毫升，连用3天对新生猪也有一定的预防效果。也可以在疫情流行时给病猪注射免疫血清，小猪2—3毫升，中猪3—5毫升，大猪5—7毫升。 四、治疗这两种病尚无特效疗法，对症治疗可以缓轻症状，防止继发感染；加强护理可以减少死亡。具体做法如下：①当猪群发病后，应马上采取隔离、消毒措施，对被病猪污染的猪舍、用具、彻底清扫消毒；②对病猪可以试用抗菌素等药进行治疗，对脱水严重的病猪可以用10%葡萄糖盐水加适量抗菌素进行腹腔补液或口服补液盐水。口服补液盐水配方：氯化钠3.5克、碳酸钠3.5克、碳酸氢钠2.5克、氯化钾1.5克、葡萄糖20克，加凉开水至1000毫升。供猪自饮或灌服，可以较好地纠正体内脱水。

小麦抗病育种最新研究进展

TILLING技术的形成和发展及其在麦类作物中的应用 TILLING(Targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变技术)是一种高通量的等位变异创制和突变体快速鉴定技术,其实质是将传统的化学诱变方法和突变的高效筛选有效结合的反向遗传学研究方法.其技术原理是将传统的酶切技术与PCR技术相结合后采用红外双色荧光系统进行结果鉴定,从而筛选出相应的突变体.传统的TILLING技术主要用于筛选由人工诱导产生的突变体.Ecotilling技术由TILLING技术延伸而来,主要用于鉴定自然界中已经存在的突变体,其与传统的TILLING技术的区别主要为构建DNA池时略有差异.随着该项技术在拟南芥等模式植物中的成功应用,越来越多的人开始将其用于基因组较大的植物之中.本文对近年来TILLING技术在麦类作物中的应用进行了分析,并通过比较不同植物突变体库中的突变频率发现,经EMS处理的小麦等麦类作物突变体库中的突变频率显著高于其他植物,因此相信,TILLING技术将会作为一种常规手段在麦类作物尤其是普通小麦改良中得到越来越广泛的应用. 4 小麦抗赤霉病转基因研究 目前报道的抗赤霉病转基因研究多集中在对一些病程相关蛋白的研究上。如Chen等利用共转化技术将来源于水稻的类甜蛋白基因转入感赤霉病的小麦品种Bobwhite中，转基因植株的抗性鉴定结果表明，与非转基因植株相比，转基因植株可以延迟赤霉病的发生。Anand等从受赤霉病菌侵染的苏麦3号cDNA文库中获得了编码葡聚糖酶、几丁质酶及类甜蛋白的基因，将这些基因转入到感病品种Bobwhite中，并对转基因植株进行了温室及大田的抗性鉴定。在温室条件下，一个共表达几丁质酶及葡聚糖酶基因的株系可以延缓病菌侵染的扩散(Type II resistance)，但在大田条件下，没发现转基因株系对病菌的最初侵染(Type I resistance)有明显作用。Rs-AFP2是一种来源于萝卜的抗菌肽，体外试验表明该抗菌肽可以强烈地抑制小麦赤霉病菌的菌素生长。廖勇等通过基因枪介导的方法将该基因转入小麦扬麦12中，目前已经获得转基因植株，进一步的抗性鉴定工作还在进行中。 除了转一些抗菌蛋白外，一些与抗性相关的基因也被用来进行抗赤霉病转基因研究。如拟南芥的NPR1基因(Nonexpresser of PR genes)可以调节植物的系统获得抗性(Systemic acquired resistance)，Makandar等将此基因转入了小麦Bobwhite中，实验结果显示，NPR1基因在转基因小麦中的表达可以加快小麦在病原菌侵染时的内源防卫反应。 在进行植物源抗性基因研究的同时，研究者还对一些来自于微生物的基因进行了植物转基因研究，期望能够获得可提高赤霉病抗性的转基因植株。TrilO1基因是单端孢霉烯族毒素中T-2毒素的弱毒基因，该基因编码3-O-乙酰转移酶可将单端孢霉烯族类毒素(如T-2)的羟基氧化为羰-乙酰基，使其活性减弱。Okubara等将TrilO1基因转入感病的小麦品种中，共获得四个转基因株系，这些株系的胚乳和颖壳里都检测到TrilO1转录物的积累，温室的抗性鉴定表明转基因植株可在一定程度 上减轻病症。 5 展望

国内猪细小病毒疫苗及免疫程序

畜牧兽医科技信息 2011年第8期国内猪细小病毒疫苗及免疫程序 尹子静 （山西省吕梁市动物疫病预防控制中心，吕梁033000） 猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV ）为DNA 病毒，可以引起猪的繁殖障碍性疾病。该病的主要特征为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等，尤其以产木乃伊胎为主，而母猪本身并不表现除流产之外的临床症状，其他猪感染后也无明显的临床症状。血清反应阴性的母猪主要在妊娠的前半期经口鼻感染病毒，结果免疫机能不全的胎儿经胎盘受到感染，从而导致疾病。猪细小病毒在世界各地普遍存在，在已报道的猪群中呈地方流行性，该病毒还可以和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪伪狂犬病毒(PRV)等许多病毒发生混合感染；同时还可以与附红细胞体原虫、沙门氏菌和大肠杆 菌等某些细菌、 寄生虫发生混合感染，混合感染导致疾病更加难以控制，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。目前， 疫苗免疫是控制猪细小病毒病的主要手段。 1猪细小病毒疫苗的分类 猪细小病毒的防治主要以免疫预防为主。由于PPV 血清型单一及其高免疫原性，使得疫苗接种成为控制PPV 感染的一种行之有效的方法。目前用于防治猪细小病毒的疫苗主要有弱毒活疫苗和灭活疫苗，这两种疫苗使用最为广泛，在世界范围内取得了较好的效果。随着分子生物学技术的发展，猪细小病毒的新型疫苗正在研究与开发之中。包括基因工程亚单位疫苗、基因工程活病毒载体疫苗、基因疫苗等。 1.1灭活疫苗 灭活疫苗又称死苗，是将病原体经理化方法灭活后，但仍保持其免疫原性而制成的疫苗。灭活疫苗具有安全性好，诱导产生抗体时间长，不需要低 温保存等优点。但是灭活疫苗产生抗体慢， 不能诱导细胞免疫反应，抗体水平相对活疫苗较低，需重 摘要：猪细小病毒（PPV ）可以引起猪的繁殖障碍性疾病，控制该疾病最为行之有效的方法就是 疫苗免疫。本文概述了猪细小病毒的基本概况，并对国内市场上生产的PPV 疫苗、种类及免疫程序进行了综述。 关键词：猪细小病毒；疫苗；免疫程序 DOI:10．3969/J.ISSN ．1671-6027．2011．08.008专论与综述 7.2注意霉变饲料对猪体免疫造成的侵害诱因,应 长期在饲料中添加除霉剂。 7.3预防免疫，用灭活菌苗按说明免疫母猪，对本病能起到一定的预防作用。 7.4每月在饲料中添加上述敏感药物,按预防量连 用5～7d 。 我们相信如果养殖户对该病有了充分的了解，严格按照科学的饲喂方式进行科学养殖，副猪嗜血杆菌病对猪场所造成的损失将会大大降低，养殖户们将会得到更高的收益！ 参考文献 [1]容国允，等.副猪嗜血杆菌病的综合防治[J].湖北畜牧兽医，2008（9）：24-25. [2]谭干郊.副猪嗜血杆菌病的综合防治对策[J].广西畜牧兽 医,2009(4):227-229.[3]吴位珩,等.副猪嗜血杆菌病的检测与防治研究进展[J].贵州畜牧兽医,2010(3):10-12.[4]林美芳.猪副嗜血杆菌病的诊断及其综合防治[J].福建畜 牧兽医,2006(5):31-32. [5]郑太荣,等.规模化猪场副猪嗜血杆菌病的诊断与综合防 治[J].中国畜禽种业,2009(2):113-115. [6]李文兰.副猪嗜血杆菌病的综合防治[J].畜牧兽医科技信息,2010(2):10-12. [7]王勇.猪繁殖与呼吸障碍综合征继发副猪嗜血杆菌病的 诊断和防治防治[J].国外畜牧学-猪与禽,2009(6):88-89.[8]陈建明,等.浅析猪副嗜血杆菌病的诊治[J].养殖与饲料， 2008（7）：44-45. [9]孔德江,等.一起规模化猪场副猪嗜血杆菌病的诊治与体 会[J].中国动物检疫，2009（6）：59-60. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!18

猪蓝耳病免疫程序-文

猪蓝耳病免疫程序 ————深圳市安多福收集整理 蓝耳病，又称猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，猪蓝耳病是最难控制的一种病情。接种蓝耳疫苗能刺激猪体产生保护性免疫反应，养猪场需要根据当地蓝耳病流行情况，并且通过抗体监测来制定猪蓝耳病免疫程序。 一、猪蓝耳疫苗情况 1）蓝耳灭活苗：安全性好，不存在散毒危险。如果疫苗抗原与野毒的基因序列相似，有很好的保护作用。同时，灭活疫苗使用注射剂量大、免疫抗体产生慢。如果疫苗抗原与野毒的基因序列不相似，则保护力比较差。 2）蓝耳弱毒苗：抗体产生快，有毒力返强的危险。疫苗抗原与临床野毒在传播方式、存留时间、经胎盘传播和先天性感染和精液外排及诱导免疫反应的时间等方面极其相似。此外蓝耳病毒株众多，根据疫苗株与野毒株之间的同源性高低而效果不一。同时免疫后抗体监测无法与野毒感染相区分。 二、蓝耳病疫苗怎样注射 1、蓝耳病弱毒活疫苗：

1）仔猪：14日龄首次，每头肌注1头份；2周后2次，每头1头份。 2）后备种猪：第一次发情前3周加强免疫1次，每头肌注2头份。 3）生产种猪：每四个月免疫1次，每次于配种前15天免疫，每头肌注2头份。妊娠母猪不准接种蓝耳病弱毒活苗。 2、蓝耳病灭活疫苗 1）保护力低、产生抗体时间长，蓝耳病免疫效果不佳，尽可能不使用。 2）免疫时注意：蓝耳病弱毒活疫苗能干扰猪瘟疫苗产生抗体，影响猪瘟疫苗的免疫效果。两个活疫苗不能同时接种，应间隔5-7天分别接种，即可避免其干扰作用。同时蓝耳病弱毒疫苗又受圆环病毒的干扰，当猪群中存在隐性感染猪圆环病毒时，接种蓝耳病弱毒疫苗，其免疫效果也受到影响。 在猪场的猪都做好猪蓝耳病免疫时，也应该相应的加强猪场的环境卫生与消毒，日常也应有必要的消毒设备和消毒药品，猪场消毒应订立制度以保证实施。 场区内消毒地面每周用安多福万金水1：2500倍稀释消毒一次，猪栏、墙壁、棚顶每周用百毒杀等消毒药喷雾消毒一次，产房每天载猪消毒1次。 消毒工作看起来不太芜杂，但它是屏障，消毒工作做好了，可以防患未然。 做好猪蓝耳病免疫程序，做好环境卫生消毒，就能有效的预防蓝耳病等各种疾病。

猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展

猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展 猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一，造成猪场损失惨重，疫苗免疫成了救命的稻草。从2011年猪圆环疫苗上市至今，已有17家圆环产品先后上市，目前，出现严重供大于求的现象，同时，养殖场也面临着幸福的烦恼，大量产品的上市，产品价格可能下降，但是，面对玲琅满目的产品，如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题，针对这些烦恼，本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助，避免走弯路，为养殖场服务。 1.PCV-2国内外最新流行动态 由PCV-2引发的疾病已成全球流行之势，在加拿大首次报道该病原引起PMWS后[1]，学者通过调查本国包括SPF猪、部分散养猪以及育肥猪发现，猪群中PCV-2血清中抗体普遍存在，但目前该病在加拿大仍然只是散发。在英国和北爱尔兰，猪群血清中PCV-2抗体阳性率分别为86％和92％。美国、法国、丹麦、意大利、西班牙、荷兰、新西兰、日本、韩国、墨西哥等国家也相继报道猪群中存在PMWS。在我国猪群中PCV-2感染情况也不容乐观。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22个猪群采集了559份血清，用ELISA 方法检测PCV-2抗体，其阳性率高达5l％，表明我国猪群中存在PCV-2的感染。王忠田等[3]用PCR方法对我国北京、山东、河北、深圳、山西、天津、广东等省(市)的12个规模化猪场发病猪群进行猪圆环病毒2型感染的流行病学调查，结果表明猪圆环病毒2型感染情况在我国猪群中相当严重。李超等[4]在2010年对安徽省PCV-2流行病学调查，结果表明安徽省14个市(县)的PCV-2抗体阳性率平均为74.36％，表明安徽省猪群中普遍存在着PCV-2的感染。从上述报道表明PCV-2在我国猪群中广泛存在。根据流行病学调查显示，虽然猪群中PCV-2抗体阳性率较高，但很大比例的抗体阳性猪群并不表现出临床症状。PCV-2与其他多种病原混合感染较为严重，调查发现沙门氏菌、大肠杆菌等细菌性病原与PCV-2混合感染率达到了20％[5]。陕西省PCV-2与PRV混合感染率是21.7％[6]。2005年陈义祥等对广西地区197份组织病料检测发现，PCV-2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染占总病料数量的57.73％。2003年王文军等[7]对黑龙江地区PCV-2阳性猪群的病料调查发现，蓝耳病和猪瘟的阳性率也较高。 哈尔滨兽医研究所刘长明[8]在2007年采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验（IPMA）对来自与黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地的健康猪群480份血清和发病猪群424份血清，抗体阳性率分别为79.2%和91.7%，表明PCV-2在猪群中感染率非常高。 山东农科院畜牧兽医研究所吴家强博士检测结果也证实PCV-2防控比较糟糕，PCV-2，2010年检出率为34.66%（124/357），2011年检出率为25.59%(174/588)；2012年检出率为 21.38%(147/683)，圆环病毒病依然严重，但有下降趋势，这个和使用圆环疫苗免疫有关系。 2.PCV-2病毒特点

猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展_刘运超

河南农业科学， 2015，44（10）：12-16Journal of Henan Agricultural Sciences doi ：10．15933/j．cnki．1004-3268．2015．10．003 收稿日期：2015－05－21 基金项目：中国博士后科学基金（2013M541980）；河南省重大科技专项（141100110100）；河南省基础前瞻类项目（20141644）作者简介：刘运超（1982－），男，河南周口人，助理研究员，博士，主要从事动物疫病与疫苗研究。 E －mail ：yunchaoliu2012@163．com *通讯作者：张改平（1960－），男，河南内黄人，研究员，博士，主要从事动物疫病免疫机制与疫苗研究。 E －mail ：zhanggaiping2003@163．com 猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展 刘运超1，陈玉梅1，2，姬鹏超1，赵宝磊3，王聚财3，邓瑞广1，张改平 1，3* （1．河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州450002； 2．郑州大学基础医学院，河南郑州450001；3．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002） 摘要：猪细小病毒（PPV ）感染可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪多系统衰弱综合征和肠炎性腹泻等疾 病，给养猪业造成巨大的经济损失。临床防控以接种疫苗为主，常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。随着生物技术的发展，新型PPV 疫苗的研究工作成绩显著。VP2蛋白是PPV 主要的衣壳蛋白，对研究新型PPV 疫苗至关重要，综述了猪细小病毒VP2蛋白及病毒样颗粒疫苗的研究进展，以期为新型PPV 疫苗的研究提供参考。 关键词：猪；猪细小病毒；VLP ；疫苗；VP2蛋白中图分类号：S852．65文献标志码：A 文章编号：1004－3268（2015）10－0012－05 Ｒesearch Progress of Virus Like Particles Vaccine Against PPV LIU Yunchao 1，CHEN Yumei 1，2 ，JI Pengchao 1， ZHAO Baolei 3，WANG Jucai 3，DENG Ｒuiguang 1，ZHANG Gaiping 1， 3* （1．Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology ，Henan Academy of Agricultural Sciences /Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture ， Zhengzhou 450002，China ；2．College of Basic Medical Science ，Zhengzhou University ，Zhengzhou 450001，China ；3．College of Animal Science and Veterinary Medicine ，Henan Agricultural University ，Zhengzhou 450002，China ） Abstract ：Porcine parvovirus （PPV ）is the major causative agent in swine ，which usually causes reproductive failure ，weaned piglets multiple system weak syndrome ，inflammatory diarrhea and other diseases ， causing serious economic losses in the swine industry．The vaccination is the most effective method for preventing PPV infection and its complications ，which including attenuated vaccine and inactivated vaccine．With the development of genetic engineering ， the research work of the novel vaccine against PPV has a remarkable progress．The VP2protein is a main target for neutralizing antibodies ，which is very important for the novel vaccine against PPV．This paper reviewed the research progress of parvovirus VP2protein and virus like particles vaccine against PPV ，which would be helpful for the novel vaccine against PPV． Key words ：swine ；porcine parvovirus ；VLP ；vaccine ；VP2猪传染病对我国养猪业危害严重，防治猪传染病对养猪业发展至关重要。猪细小病毒（porcine parvovirus ，PPV ）是一种极为常见的病原体，常引起猪的繁殖障碍，怀孕母猪的死胎和“木乃伊胎”、断奶仔猪多系统衰弱综合征等。PPV 属于细小病毒科细小病毒属，无囊膜病毒，平均直径20 26nm ，分 子质量为5．3?103 ku ，是目前动物病毒中最小的一 类单链线状DNA 病毒。PPV 流行极为广泛，95%的猪场检测为病毒阳性，给养猪业造成巨大的经济损失 ［1］ 。PPV 可在病猪心脏、肺脏、脾脏和性腺中复 制， 但其主要靶器官是母猪子宫，子宫内病毒含量最高可达1012 拷贝/mL 。PPV 在母猪和仔猪体内的致

猪蓝耳病的防控现状及其免疫

猪蓝耳病的防控现状及其免疫 曾亮明 （福州大北农生物技术有限公司福建福州350014） 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductiveand respiratory syndrome PRRS)是当今国内乃至世界养猪业的主要杀手，如何有效地控制猪繁殖与呼吸综合征带来的危害，保证养猪业的健康发展，一直以来是全球性的猪病热点。 针对本病，笔者就近年来防控PRRS的工作经验、教训和学习心得谈几点不成熟的看法，谨与同行交流。 1 当前PRRS对猪群危害的主要表现 1.1 繁殖障碍时有发生 母猪繁殖障碍主要表现为妊娠后期母猪的流产、早产、难产、产死胎；围产期母猪的持续高热；初生仔猪的大批死亡；公猪精液受损、母猪返情率高，发病猪场的病程约4个月，围产期母猪的病死率3％～5％不等，哺乳仔猪的全群死亡率高达40％左右，母猪返情率高达50％。 由蓝耳病导致的繁殖障碍现象在很多情况下都能发生。首先在PRRS阴性或无临床危害的阳性（感染低毒力毒株或感染率较低）猪场。若很难长时间地与外界切断所有的联系，如果一旦强毒株入侵，势必暴发PRRS。 其次，许多免疫了蓝耳病疫苗的猪场，仍然存在严重的繁殖障碍现象，即使种猪群加强蓝耳病疫苗的免疫，该现象仍不能得到有效解决。 1.2 致死性呼吸道障碍随处可见 致死性呼吸道障碍多发生在阳性（毒力偏强，感染率高）猪场。尽管之前有研究发现，在阳性猪场内，母乳抗体可使大部分初生仔猪获得3～4周的被动免疫保护，但从目前国内的情况看，母乳抗体的保护是极其有限的，甚至许多早期（14日龄左右）免疫过PRRS弱毒疫苗的仔猪仍然发病，主要表现为保育猪继发感染（副猪嗜血杆菌、链球菌等）严重，发病高峰多出现在40～60日龄，药物防制无明显效果，死淘率15％～40%不等。 1.3 蓝耳病导致的免疫抑制日趋严重 1.3.1 影响猪瘟免疫质量 猪瘟免疫检测不达标的现象越来越普遍，许多猪场的母猪猪瘟抗体阳性率徘

凡尔灵 流行性感冒病毒裂解疫苗说明书

［药品名称］ 通用名：流行性感冒病毒裂解疫苗 商品名：凡尔灵V AXIGRIP 英文名：Inactivated Split Influenza V accine 汉语拼音：Liuxingxing Ganmao Bingdu Liejie Yimiao ［成份和性状］ 本品为乳白色液体，主要成份： 每0.5g含： —流感病毒在鸡胚中培养，用三硝基甲苯-Ｘ-100裂解，福尔马林灭活，纯化，抗原等效于：A/布里斯班/59/2007(H1N1)-类似株15μg血凝素 A/布里斯班/10/2007 (H3N2)-类似株15μg血凝素 B/布里斯班/60/2008-类似株15μg血凝素 —赋形剂成份: 钠盐: (氯化钠、磷酸氢二钠二水化合物) 钾盐: (氯化钾、磷酸二氢钾) 本疫苗成份符合世界卫生组织推荐(北半球)和欧盟决议的2009/2010季节流感毒株。 ［接种对象］ 尤其推荐用于易发生相关流感并发症的人群，由于流感季节性发生，建议每年接种流感疫苗。温带地区秋季开始时接种，热带地区流行高峰到是前或开始时接种。 ［作用与用途］ 用于流行性感冒的预防。 ［规格］ 0.5ml/支（成人剂量） ［免疫程序和剂量］ 成人及36个月以上的儿童：接种一剂，每剂0.5ml。 用前应将该疫苗置于室温并充分摇匀，然后肌肉或深度皮下注射。 ［不良反应］ 同任何其它制剂一样，该疫苗可能在某些人中引起或轻或重的不良反应。 临床实验中发生如下不良反应： 常见： - 局部反应：红，肿，疼，瘀癍，硬结。 - 全身反应：发热，头晕，寒战，虚弱，头疼，出汗，肌痛，关节痛。 上述反应无需治疗，一般一至两天会自然消失。 上市后监测期，有下列不良反应报告： 少见：一般的皮肤反应，如瘙痒，风疹或皮疹。 罕见： - 神经痛（疼痛沿神经通络分布），感觉异常（对触，疼，热，冷或振动的感觉异常），惊厥，—过性血小板减少

当前猪蓝耳病的流行特点及防控策略

当前猪蓝耳病的流行特点及防控策略 自2006年初以来，在我国大部分省区暴发性流行“猪高致病性蓝耳病”，该病传播之快、牵涉面之广、发病率死亡率如此之高前所未有，不但给养殖户造成恐慌，甚至使兽医科研单位及相关管理部门手忙脚乱。此病在近代中国养猪业从未有过，给我国养猪业造成灾难性的巨大损失。 下面就“当前猪蓝耳病的流行特点”、“猪蓝耳病毒（PRRSV）感染的发病机理”以及“猪蓝耳病防控策略及方法”逐一作简要阐述： 一、当前猪蓝耳病的流行特点 大部分猪场执行免疫蓝耳疫苗或感染过蓝耳野毒，蓝耳阳性场几乎遍布全国。临床特征不明显，表现为种猪流产、死胎，出现母猪并发感染细菌、治疗不当致死，产房腹泻、仔猪关节肿及保育猪链球菌\呼吸道疾病增多，整体猪群抗病力低，肉猪难养。个别猪群中大猪发生较典型蓝耳病。 从病原学上看呈现多毒株分布，并不断出现新毒株，但以高致病性蓝耳病毒株为主，危害也最严重。广泛存在、地方流行性 从疫苗使用上看，多毒株弱毒疫苗获批应用使疫情更加复杂化，免疫方法混乱。高致病性弱毒苗（JXA1）毒力强，造成猪体免疫力下降，继发并发感染严重！ 二、PRRSV感染的发病机理 通过吸入、吃入、交配、咬伤或针头传播 在粘膜、肺或局部的巨噬细胞中复制 局部淋巴结和病毒血症（感染后24h内） 分布到全身的单核细胞和组织巨噬细胞 临床疾病（症状依年龄而定） 亚临床症状 口咽分泌物 中排出病毒

三、猪蓝耳病防控策略及方法 目前对于蓝耳疫苗的免疫存在争议，笔者认为：基于当前疫情形势和压力，用还是比不用好，用蓝耳病弱毒疫苗控制蓝耳病是当前最简单经济手段。 不过免疫蓝耳疫苗前一定要对猪场情况做到全面的把控，同时选择适合本场的疫苗。同步加强营养特别是种猪的营养改进提升饲养管理（减少应激、特别注意季节交替气候剧变的时候）水平及改进栏舍结构与流程。 首先种对猪群的临床观察，尽量在种猪群健康和猪场稳定的情况下使用疫苗，如果猪场存在不稳定因素（种猪高热不退、产房腹泻、关节肿及呼吸道问题），慎重使用；如果怀疑场内发生了蓝耳疫情，可以咨询相关兽医单位和疫苗厂家进行紧急接种。 对疫苗选择：鉴于目前蓝耳疫苗的现状，建议选择蓝耳弱毒活疫苗，而且同一场内一定只使用用一种弱毒疫苗；同时选择毒力低、副作用小、体内带毒时间短与本场毒株同源性好的疫苗。在这方面蓝耳天津株（TJM-F92）活疫苗满足以上全部要求。 当前大部分PRRS活疫苗的特点： 1、疫苗病毒可持续感染几周或几月，可以从接种猪传播到易感猪，可通过胎盘引起先天感染并可在公猪持续感染并通过精液散布，疫苗病毒从接种群传到未接种群，可引起繁殖障碍； 2、疫苗引起的保护性免疫产生慢，有些疫苗免疫猪血清不能转阳； 3、某些高致病性毒株和毒力较强的毒株生产的疫苗，在免疫一秒以后甚至引起猪场的不稳定。【有专家提到：2012年上半年，PRRSV的检出率较高(约60%)，其中变异野毒的检测有所增加，可能与免疫JXA1疫苗有关；普通PRRSV仍然有检出(12.6%)。】蓝耳天津株（TJM-F92）活疫苗是一种防制猪蓝耳病的新型双基因缺失疫苗，具有高度安全性（可以用于紧急接种）、可以鉴别诊断而且不存在免疫抑制的问题，这些都是当前国内大部分蓝耳活疫苗所不具备的优势。 在使用方面，可以参照如下程序： 1、对于稳定猪场：3~4周龄首免，8~9周龄二免； 2、对于不稳定猪场：出生后24小时内滴鼻免疫，4~5周二免； 3、后备母猪在配种前3~4周加强免疫一次。

病毒活疫苗与灭活苗的优缺点

病毒活疫苗与灭活苗的优缺点病毒疫苗的主要效果是预防或降低病毒病的严重程度。目前使用的抗感染疫苗可以分为三类：减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗。其它类型疫苗还有：核酸疫苗、合成肽疫苗和抗独特型疫苗。 减毒活疫苗 通过不同的手段，使病毒的毒力减弱或丧失，机体在接受该疫苗后不发生或出现很轻的临床症状，刺激机体的免疫系统产生针对该病毒的免疫反应，使之在以后接触该病毒时，保护机体不患病或患病的临床过程较轻。 突出的特点表现在以下几个方面： 1)诱导包括体液免疫、细胞免疫的免疫方式，具有较强保护作用。 2)由于是活病毒，病毒可以在体内增殖，长时间和机体细胞发生作用，诱导较强的免疫力。 3)只需接种一次，即可以达到满意的效果。 4)可以通过自然感染途径接种（点眼、滴鼻、口服等），这样不仅可以产生全身免疫反应，而且可以诱导产生局部免疫反应。 5)可以通过病毒所有抗原（病毒包括多种抗原，其中一种或两种就能引起反应）刺激机体产生反应。 6)一般采用真空冻干工艺，需冷冻保存（-15℃～-20℃）。 其主要缺点： 1)既然是活病毒制剂，有可能污染其它活的病原体； 2)一些减毒活疫苗仍保留有一定的毒力；

3)传统的减毒活疫苗可能出现病毒毒力回复； 4)在一些免疫缺陷的个体中可能诱发严重疾病； 5)在某些时候，野毒株感染可以导致活疫苗效果降低； 6)缺损颗粒可以干扰疫苗的免疫效果； 7)对保存和运输的要求较高。 灭活疫苗 由完整的病毒组成，使其致病性丧失或减弱，但是仍然保持病毒的全部或部分免疫原性，接种后病毒抗原可以刺激机体产生免疫应答，达到保护作用。灭活疫苗和减毒疫苗的差别在于疫苗中的病毒不具有感染性，在体内不能增殖。 其主要优点： 1)由于不存在有感染性病毒存在，比较安全； 2)保存方便，无须冻干保存； 3)其它活病原体污染问题较少； 4)生产相对简单。 主要缺点： 1)免疫效果一般低于减毒活疫苗，虽然能够诱导产生包括中和抗体在内的免疫反应，但不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应。 2)诱导产生的免疫反应持续时间较短，需要多次接种。 3)灭活剂对病毒抗原有影响，而且对不同的抗原成分影响不同。 4)由于诱导的免疫反应水平较低，以及各个抗原成分之间的疫苗应答不平衡，可能诱发疾病。

猪流行性腹泻病毒

猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)都是冠状病毒。轮状病毒(RV)呈车轮状外观，是一种人畜共患病。这三种病毒均可被醛威TM和巨碘灭活，福尔马林、氢氧化钠亦可有效将其杀灭。 诊断要点 1. PED和TGE有严格的季节性。冬春季节(11月至下年4月)尤其是春节前后是发病高峰期。 2. 呕吐，水样的喷射状腹泻，有一股很特别的臭味。 3. 大小猪均发，日龄越小死亡率越高。 4. 轮状病毒7日龄以下不发病，多发生于13～39日龄。 5. 粪便呈酸性(细菌性腹泻的粪便一般为碱性)，在普通显微镜下观察，肠绒毛缩短。 治疗原则： 1. 猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒是我国猪群中危害最严重的三种病毒性腹泻。 2. 这三种病毒性腹泻用抗生素和化学抗病毒药治疗无效。重在管理，重在疫苗注射，重在增强体质和免疫力。冬春季节的“病毒性腹泻”危险期，在注射疫苗的基础上定期饮水或拌料添加健力源或瘟毒力克，是未病先防的明智之举。 3. 在该病的治疗上，补液的同时应用免疫增强剂和消毒剂(可饮水消毒的巨碘)是关键，可以考虑使用抗生素防止继发感染(杆菌消、立速健是目前治疗肠道感染较好的敏感药物)。 4. 母猪发病时，新生仔猪由于严重脱水，加上母猪发病时无奶，死亡率可达100%，可采取人工奶或寄奶。 人工奶配方：500ml鲜奶+500ml10%葡萄糖水+1粒VC+2粒复合VB+2粒乳酶生。治疗 该病的发生目前尚无特效疗法，对症治疗可以缓解症状，防止继发感染;加强护理可以减少死亡。具体做法如下：

1、治疗病情较轻病猪。用新城疫I系苗，每支0.5克加生理盐水10毫升，每头猪不论大小注射2毫升;注射三氮唑核苷每公斤体重0.2毫升，每日注射一次。 2、治疗病情较重病猪。用恩诺沙星注射液，防止继发感染，按猪体重每千克用药0.1毫升(含恩诺沙星25毫克)，肌肉注射，每日2次，连用3天。或用肠炎灵注射液，按猪体重每千克用药0.3～0.5毫升，肌肉注射，每日2次，连注2～3日为一个疗程。在注射的同时，尽早在饮水中添加口服补液盐。口服补液盐的配制方法是：精制氯化钠35克、碳酸氢钠25克、氯化钾15克、葡萄糖200克、水10千克，混合溶解即成。无饮欲的小猪，用金属注射器每次灌服40～80毫升，每日服5～6次。可静脉注射5%～10%的葡萄糖生理盐水和5%碳酸氢钠注射液，各500～1000毫升，每日2次，连用2～3天。限食喂给营养丰富、好消化的饲料。 防治措施： (1)对发病猪舍及饲养用具用0.1%百毒杀溶液进行全面彻底消毒。将病死猪及污染物远离猪场焚烧后挖坑深埋。(2)发病猪肌肉注射四黄素注射液。注射液制作方法：取黄芩、黄柏、黄连、大黄各750克，将药研碎，加水浸过药面，煎煮2～3次(煮出药液为原水量的1／3～1／2)，将药液用4层纱布过滤去渣，加入适量白矾，搅拌，静置沉淀，取上清液用滤纸过滤2次，用注射用水稀释至3升，分装、消毒、备用。用量为每头仔猪每次8毫升，每天1次，连用3天。(3)为防止继发感染，全群猪喂服磺胺脒，每天用量为0.2克／公斤体重，分2～3次内服，连用3天。为吸附胃肠道内有害物质和收敛，在猪空腹时给服矽炭银，用量为每头猪每天5克，连用3天。(4)同时供给充足的含有电解质和营养成分的饮水。配制方法是：每1000毫升水中加氯化钠3.5克、氯化钾1.5克、磷酸氢钠2.5克、葡萄糖20克。跟胎次免疫 采用跟胎次免疫方法，这种免疫效果让他出乎意料，今年以来尽管周边不少养殖场损失连连，他的猪场却幸免于难。具体的免疫方式是，母猪配种后60天、90天各免疫一次，同时对后备母猪加强免疫，第一次配种前一周左右免疫一次。 防控腹泻的思路： 海纳川药业动保事业部技术总监孙雪梅则认为，防控腹泻应采取以下思路：第一步，母猪产前控制体内病毒、消除毒素，生出健康仔猪，保证母乳质好、量足，以此保护新生仔猪的安全。第二步，新生仔猪尽可能避免感染病毒，增强体质。第三步，对已经出现腹泻的仔猪，以抗病变、解毒保肝为主，同时补充能量、水分、电解质，确保不发生脱水与酸中毒;适量使用抗生素，避免继发感染。 2009年2月上旬，乐安县公溪镇某猪场突然发病，10日龄仔猪个别出现呕吐、水样腹泻，很快波及全群。半数左右有短暂的体温升高(40．2℃～40．6℃)；粪便呈淡黄、黄白色等，内含未消化的凝乳块和泡沫，腥臭，但不见有血液，严重Vl渴，精神沉郁，很快脱水消瘦，病情严重的仔猪仅2—3d后死亡。架子猪、育肥猪和母猪的症状轻重不一，食欲不振或废绝，个别猪有呕吐，出现灰色、褐色水样喷射状腹泻。母猪泌乳减少。