HPLC法测定不同产地荞麦中芦丁的含量

HPLC 法测定不同产地荞麦中芦丁的含量

卢丽霞,李娆玲,周宏兵*(广东药学院药科学院广州510006)

摘要:目的 比较不同产地荞麦中芦丁的含量,为选择药用荞麦提供参考。方法 采用H PLC 法,C 18色谱柱,甲醇-水-冰乙酸(40 60 1)为流

动相,流速1 0mL min -1,检测波长360nm,柱温30 测定。结果 芦丁对照品溶液在8~180 g mL -1的范围呈线性关系,标准曲线方程为Y =46374X+59420(r=0 9997),平均加样回收率为97 9%。通过比较不同产地荞麦样品的测定结果,可知品种来源对芦丁的含量有着相当大的差别,其中黔西北所产芦丁含量最高。结论 实验方法稳定,可靠。试验结果为荞麦的药用研究、产品的开发提供了依据。

关键词:高效液相色谱;荞麦;芦丁

中图分类号:R927 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2010)-06-0061-03

作者简介:卢丽霞,女(1969-),本科,职称:实验师,从事药学专业。联系电话:020-********,E-mail:luli x i a7@https://www.wendangku.net/doc/aa2273130.html, 。

通讯作者:周宏兵,男(1948-),本科,职称:教授,从事药物分析方面的研究。联系电话:020-********。

Determ ination of rutin from buckwheat originated from different regions by HPLC

LU L-i xia,LI R ao -ling,ZHOU H on g -bing *

(Guangdong pharmaceutical college,Guangzhou 510006,China)ABSTR ACT :OBJEC TIVE To supply the reference for choosing medicinal buckw heat by com paring the content of rutin originated from different regions METHODS HPLC is employed,which chromatographic colunm is H y -persil BDS C 18(4 6mm 250m m,5 m),mobile phase is methano-l w ater -glacial acetic acid(40 60 1),flow rate is 1mL min -1,detection w ave is 360nm and column temperature is 30 RESULTS A good linear correlation w as obtained when rutin s content rang ed from 8 g mL -1to 180 g mL -1(r=0 9995) Standard curvilinear equa -tion is Y=46374X+59420(r=0 9997) Average recovery is 97 9% Comparing the results obtained by buck -w heat originated from different regions,different regions have appreciable impact on rutin s content The content of rutin orig inated from the northw est of guizhou is the highest C ONCLUSION This method is stable,rel-i

able The ex perimental results supply the basis for medicinal investigation and the product development of buck -w heat

KE Y WORD S:HPLC;Buckw heat;Rutin;

荞麦,又名三角麦、乌麦、花荞,是蓼科荞麦属的双子叶作物,我国栽培的主要有甜荞(普通荞麦common buckwheat)和苦荞(鞑靼荞麦T atar buckw heat)两个栽培品种。荞麦在我国种植的历史十分悠久,公元前五世纪的 神农书 中就有关于荞麦是当时栽培的八谷之一的记载。荞麦的适应性很强,生育期短,一般60~80天就能成熟,且耐瘦耐旱,在新垦地和瘦薄地上都能良好生长,除了冬季其它三季均可种植,因此人们又把荞麦称为救荒作物。除我国外,原苏联、尼泊尔、朝鲜、日本及美洲和欧洲等地的人也喜欢食用荞麦,尤其是日本,至今仍然把荞麦食品列为保健食品。荞麦含有丰富的赖氨酸;其中铁、锰、锌等微量元素含量比一般谷物高;而且含有丰富的维生素E 和可溶性膳食纤维;同时还含有烟酸和芦丁(Rutin,又称芸香苷),烟酸能促进机体的新陈代谢,增强解毒能力,还具有扩张小血管和降低血液胆固醇的作用,芦丁为维生素P

属的一种,是一种重要的黄酮类多酚生物活性物质,其化学式

为C 29H 30O 16。芦丁能促进细胞增生,防止血细胞的凝集,有抗炎,降血脂、强心等作用 1 ;荞麦还含有丰富的镁,能促进人体纤维蛋白溶解,使血管扩张,抑制凝血块的形成,具有抗栓塞的作用,也有利于降低血清胆固醇。荞麦既能食用,又能防病治病,是一种独特的药食两用粮食作物,其营养价值,药用价值越来越受到人们的重视。由于荞麦中芦丁的含量是评价荞麦功能性优劣的重要指标之一,本文以芦丁作为质量指标,建立了用高效液相色谱法测定荞麦中芦丁含量的方法,并测定了多个不同地区生长的荞麦品种,其芦丁含量有显著不同。可作为荞麦开发药用参考。1 实验部分

1 1 仪器与设备 福立2000高效液相色谱仪,N2000色谱工作站,H ypersil BDS C 18(250mm 4 6mm,5 m)色谱柱,电子天平(赛多利斯BC110S),紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司T U -1810)。

1 2 试剂 甲醇(一级色谱纯,天津四友精细化学品有限公司,批号080901101),冰醋酸(AR,9066工厂),二次蒸馏水,

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微孔滤膜0 45 m 。

荞麦样品收集来源有黔西北(M e1)、川西凉山(M e2、M e3)、湘西吉首(M e4)、黔南都匀(M e5)等;芦丁对照品(广东药学院天然药物化学教研室王定勇博士提取并纯化,纯度在98%以上)。

1 3 色谱条件 固定相:H ypersil BDS C 18色谱柱(250mm 4 6mm,5 m);流动相:甲醇-水-冰乙酸(40 60 1);检测波长360nm;温度:30 ;流速:1 0mL min -1;进样量20 L,外标法计算。

1 4 对照品溶液的制备 精密称取已干燥至恒重的芦丁对照品10mg ,用甲醇溶解,定容至25mL 的容量瓶中,制得400 g mL -1的对照品溶液,备用。

1 5 供试品溶液的制备 精密称取已干燥至恒重的,并粉碎过100目筛网的1g 荞麦粉,加40mL 甲醇,在超声波提取器中提取30min,过滤,残渣加40mL 甲醇,再次超声提取30min,过滤,合并两次滤液,置于容量瓶(100mL)中,加甲醇定容至刻度,摇匀,取适量用0 45 m 微孔滤膜过滤,即得供试品溶液,备用。

1 6 系统适用性和标准曲线 精密吸取芦丁对照品溶液0 2、1 0、1 5、

2 0、2 5、4 0、4 5mL,置10mL 容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,精密吸取各对照品溶液20 L ,注入液相色谱仪,按1 3色谱条件进行测定,芦丁峰的保留时间约8min,与其它杂质峰能很好分离,分离度4,拖尾因子1 1,理论塔板数按芦丁峰计为1000。芦丁对照品色谱图(见图1)。以芦丁含量(X)为横坐标,峰面积(Y )为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程:Y =46374X +59420(r=0 9997)。结果表明,芦丁对照品在8~180 g mL -1范围内线性关系良好(见图2)

。

图1

芦丁对照品色谱图

图2 芦丁对照品的标准曲线

1 7 样品含量测定 按1 5方法制备供试品溶液,精密量取

5mL,置10mL 容量瓶中,用流动相加至刻度,进样20 L 。按1 3色谱条件进行测定,结果(见表1),样品色谱图(见图3)。

表1 不同地区、不同品种荞麦样品中芦丁含量的测定结果

序号取样量峰面积含量(%)M e11 00162599844 8332 73M e20 98706193333 0001 34M e30 9802839707 3330 17M e40 98366531740 8331 42M e5

0 9838

5010486 250

1

09

图3 样品M e1色谱图

2 结果与讨论

2 1 芦丁提取方法的选择 分别以水、稀乙醇、甲醇为提取溶剂,提取时间0 25、0 5、1 0、1 5h(提取两次),考察了加热回流、超声提取两种提取方法对芦丁提取影响。结果表明,超声波提取法与热回流提取法所得的芦丁含量相当,无显著性差别,而采用超声波法30min 两次从荞麦中提取,已提取完全,无需加热,样品处理简单、快速,提取杂质少,缩短了提取时间。故本文采用甲醇作为提取溶剂,超声处理30min,2次的提取方法。

2 2 检测波长的选择 在200~400nm 下对芦丁对照品甲醇溶液进行紫外扫描,208、256、360nm 处都有吸收峰,但由于在208、256nm 检测波长下杂质峰有干扰,360nm 处干扰少,故选择360nm 为检测波长。扫描图谱(见图4)

。

图4 芦丁对照品扫描图谱

2 3 流动相的选择 单纯使用甲醇为流动时,峰的保留时间过短,吸收峰拖尾严重,分离度不好。改用甲醇-水(30 70)为流动相时样品中的各组分能达到基线分离,但保留时间延长,

峰扩散严重。改变甲醇与水的比例(40 60),保留时间相对缩短,节省了分析时间,但峰仍有严重拖尾。改换成甲醇-水-冰

62 海峡药学 2010年 第22卷第6期

乙酸(40 60 1)为流动相后,样品可以获得较好的分离,峰形良好,重现性也较好。所以本实验以甲醇-水-冰乙酸(40 60 1)作为流动相,控制pH=3~4。

2 4 精密度试验 取40、100、180 g mL -1芦丁对照品溶液,按1 3色谱条件连续进样5次,每次20 L ,测定峰面积,RSD 分别为1 1%,0 71%和0 70%。

2 5 稳定性试验 取同一M e 2样品溶液,按1 3色谱条件分别在0、2、4、6、8h 各进样1次,测定芦丁峰面积,其RSD 为0 23%(n=5),表明供试品溶液在8小时内稳定。

2 6 重现性试验 取M e 2样品,按上述方法平行制备5份供试品溶液,分别进行含量测定,每份测定3次,其R SD 为1 7%(n=5),表明该方法重复性较好。

2 7 加样回收率试验 精密称取已知含量的M e 3样品5份,分别精密加入芦丁对照液1mL(取18 0mg 芦丁对照品置10mL 容量瓶中,用甲醇定容,分别取1mL 加入5份样品中),按1 5方法平行制备供试品溶液,分别进行含量测定,其平均回收率为97 9%,RSD 为1 9%(n=5),结果(见表2)。

表2 加样回收率实验结果(n=5)

取样量(g)样品含量(mg)加入对照品量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RS D (%)

0 98601 6761 80003 42196 90 98141 6681 80003 44198 50 98301 6711 80003 473100 10 98661 6771 80003 45098 50 9838

1 672

1 8000

3 390

95 4

97 9

1 93 结论

从表1可以看出,M e1具有较高的芦丁含量,通过比较不同产地,不同品种荞麦样品的测定结果,可知品种来源对芦丁的含量有着相当大的差别,因此荞麦的应用应注意产地及品种。本实验建立的荞麦中芦丁含量测定的高效液相色谱方法,简便、快速、重现性好,为荞麦药用产品的开发提供了参考依据。

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活骨胶囊的薄层鉴别研究

禹建春,许 冠,方贺宾,张利群(浙江台州市博爱医院台州318050)

摘要:目的 采用薄层色谱法对活骨胶囊进行鉴别测定。方法 根据活骨胶囊的成分特点,选用适当的展开剂系统,对该制剂中的川芎、补骨

脂、黄芪分别进行定性鉴别。结果 川芎、补骨脂、黄芪药材的特征斑点清晰,分离度良好,阴性样品无干扰。结论 所建立的薄层色谱方法

能有效地对活骨胶囊进行定性鉴别。

关键词:活骨胶囊;定性鉴别;薄层层析法

中图分类号:R927 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2010)-06-0063-03

作者简介:禹建春,男(1969 8-)。毕业于河南中医学院。职称:主管中药师。联系电话:137********

Study on Living Bone Capsule by TLC

YU Jian -chu n,XU Guan,FANG H e -bin ,Z HANG L-i qun(Zhejiang Boai Hospital,Taizhou City,Taizhou,318050,C hina)

ABSTR ACT :OBJEC TIVE living bone capsules by TLC METHODS According to the characteristics of living bone capsule of the composition,choose the appropriate developing agent systems,the preparation of the Chuanx -iong,psoralen,Astragalus w ere qualitative identification RESULTS Chuanx iong,psoralen,the characteristics of

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