新型血管抑制因子纤溶酶原 Kringle1 -5蛋白

综

述

新型血管抑制因子纤溶酶原Kringle1-5蛋白

闫　妍

董晓光　(山东省眼科研究所山东青岛266071)

[中图分类号]　R737.33 [文献标识码]　A [文章编号]　1672-4208(2007)011-0061-02

肿瘤是目前医学界面临的最棘手的疾病之一,关于肿瘤的治疗的研究从未中断。上世纪70年代初,Folk man 发现[1]肿瘤组织生长与血管生成密切相关,因而提出了抑制肿瘤血管生成治疗肿瘤的假说。纤溶酶原(p las m inogen,PG )包含5个称为kringle 的结构域,其多种形式的kringle 水解片段都有抑制内皮细胞增殖、抑制新生血管增生和肿瘤生长的作用,近年发现的kringle 1-5(K1-5)是其中活性最强的一种[2]。下面就近年对K1-5这一新型血管抑制因子的研究情况做一综述。

1　纤溶酶原Kringle 结构域水解片段及其生物学活

人纤溶酶原是分子量为96k D 的糖蛋白,由1个丝氨酸蛋白酶结构域和5个kringle 连环结构域构成。Kringle [3]是由3个二硫键连接起来的、具有三螺旋的1个独立的功能结构,包含大约80个氨基酸,对赖氨酸有较高的亲和力,因为其形似一种叫做kringlers 的丹麦馅饼而得名。Kringle 结构存在于多种参与凝血和纤维蛋白溶解调节蛋白酶的非催化区域内,参与膜结合、分子识别等作用。1994年,O ’

Reilly 等[4]

从携带Lewis 肺癌小鼠的尿液和血液中提纯出第一个具有内皮细胞增殖抑制活性的纤溶酶原krinlge 片段,命名为血管抑素(angi ostatin,AS )。序列分析表明血管抑素包含纤溶酶原的前4个kringle 结构,即K1-4。在体内外试验中,它能特异性的抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,并能抑制多种肿瘤的生长和转移[5]。随后发现的具有类似活性的kringle 片段有K1-3、K1、K2、K3、

K2-3、K4和K5等。1999年,Cao 等[2]

报道了尿激酶激活水解人纤溶酶原产生包括Kringle l -4及部分Kringle 5结构的片段,称为Kringle 1-5(K1-5),分子量55k D,酶切位置N -末端在Lys76和Lys77之间,C -末端在A rg529和Lys530之间。

2　Kringle1-5的生物学活性

2.1　特异性抑制内皮细胞增殖和迁移新生血管形成是从现有的血管系统由内皮细胞芽生形成毛细血管的过程[6],成年哺乳动物的内皮细胞在生理条件下是静止的。当受到某些刺激,内皮细胞会降解基底膜,变形、增生、迁

移、形成新的内腔,变成微管[7]

。K1-5可以显著抑制此过程[2]

。K1-5对1ng/m l 的碱性成纤维细胞生长因子(bas 2ic fibr oblast gr owth fact or,bFGF )刺激的牛毛细血管内皮细胞(bovine cap illary endothelial,BCE )的E D50约为50p M ,是血管抑素的1/50,抗内皮增殖作用明显强于血管抑素。高浓度的K1-5不引起内皮细胞形态的明显异常;清除K1-5后内皮细胞可以恢复增殖能力;说明K1-5对内皮细胞没有毒性作用。K1-5对BCE 细胞外的其他细胞系都没有抑制作用[2],说明其抑制增殖作用是内皮细胞特异性的。因此K1-5能特异、高效的作用于增殖旺盛的肿瘤血管内皮细胞。2.2　抑制新生血管形成和增殖目前研究认为,新生血管形成在体内受正、负双重信号的严格控制,新生血管形成取

决于血管生成抑制因子和促进因子之间的平衡。K1-5能在特异性抑制内皮细胞的增殖和迁移基础上抑制新生血管的形成和增殖。Cao 等[2]证明对小鼠全身低剂量使用K1

-5(2mg -1?kg -1

?day,皮下注射)可以明显地抑制bFGF 诱导的角膜新生血管化,而相同剂量的血管抑素则无此作用。2.3　抑制肿瘤生长　体内实验证明,全身低剂量应用K1-5可以有效抑制荷瘤小鼠移植肿瘤的生长及肿瘤血管的形成[2]。K1-5虽然能明显抑制肿瘤生长,却不能使肿瘤生长完全停滞。与血管抑素相似,它只能延缓肿瘤的生长速度,不能改变肿瘤长大的最终结果。

3　K1-5的作用机制

研究表明K1-5能特异地作用于内皮细胞表面的ATP 合酶,并激活半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cys teinyl as partate s pecific p r otease,cas pase )调控的凋亡通路诱导内皮细胞凋亡,从而发挥其抗内皮细胞增殖和血管生成作用[8]。

K1-5在浓度1μM 时与BCE 细胞共同孵育24小时后

可以明显检测到BCE 细胞的凋亡。cas pase 调控的凋亡通路在调控细胞生长和死亡中起关键作用[9],其中cas pase -3被认为是细胞凋亡的主要效应因子。实验证明[8]

K1-5可以呈剂量依赖性的激活cas pase -3。应用cas pase -3阻滞剂能阻断K1-5诱导的内皮细胞凋亡,并呈剂量依赖性地阻断K1-5的抗新生血管生成作用。cas pase -3阻滞剂可以显著削弱K1-5的抗肿瘤活性,再次证明K1-5抗肿瘤作用是与它诱导肿瘤血管内皮细胞凋亡相联系的。利用特异性抗体逐个封闭cas pase -3、-8、-9以检测其活性及激活顺序,发现cas pase 激活的顺序依次是cas pase -8、3、9,然后又是3。

研究发现[8]内皮细胞表面同时表达ATP 合酶的α-和β-亚单位,且这种膜表面分子仅存在于内皮细胞上,这应该是K1-5作用特异性的机制。将两种亚单位的中和抗体分别加入培养的内皮细胞中,并加入K1-5,结果表明两种抗体都有效的阻断了K1-5诱导的cas pase -3,8,9的激活。曾有报道血管抑素结合于内皮细胞表面整合蛋白-αv β3。研究者为检测整合蛋白-αv β3能否在K1-5诱导cas pase 激活或内皮细胞凋亡中起调控作用,用抗整合蛋白

-αv

β3的中和抗体与内皮细胞和K1-5共同孵育。结果表明抗整合蛋白-αv

β3中和抗体对K1-5诱导的cas pase -3激活仅有一点效果(<17%),而它对K1-5诱导的内皮细胞凋亡没有任何作用。但是关于内皮细胞表面ATP 合酶激活cas pase -8的过程还需要研究。

4K1-5基因重组制备与基因治疗

周庆玮等[10]利用RT -PCR 方法从人肝癌细胞株

HepG2内获得K1-4及部分K5的c DNA,将其克隆到表达载体pH I L -S1并转化到毕赤酵母GS115中,得到的蛋白质纯度大于95%。该重组K1-5(周等学者称其rhK1-4,5)

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综

述

测定其活性与血管抑素相近。同时周庆玮等[10]还用同样

方法以完整的人纤溶酶原K1-5cDNA 重组获得完整的K1-5(rhK1-5),测定其活性略低于血管抑素。rhK1-4,5的活性略低于报道可能与其经过宿主的糖基化有关。侯卫红[11]等通过PCR 扩增人K1-5c DNA,克隆重组得到了纯度约为96%的K1-5蛋白。K1-5分子量约为61k D 。

包括K1-5在内的各种生长因子大都存在半衰期短、需反复多次给药、治疗周期长和费用高的缺点,致使患者不易接受或长期坚持治疗。据报道[5],K5在玻璃体内的半衰期小于2天,单次眼内注射持续时间较短。除了提高药效、增加体内半衰期外,寻找新的给药途径如缓释载体、基因治疗等也不失为一个好的选择。

Rooney 等构建了一种携带人K1-5基因的慢病毒载体,能独立翻译K1-5和eGFP 蛋白。用该病毒转染兔角膜能一过性抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管形成。Ga 2laup 等利用一种复制缺陷的腺病毒携带表达完整的人K1-5蛋白(aa 1-566),在实验小鼠中应用可以抑制肿瘤的生长与转移。Martel -Renoir 等报道了利用一种包含三种质粒的四环素诱导系统转染骨骼肌来传递可分泌形式的K1-5和K1-3-HS A (K1-3和人血清蛋白结合),在体内多西霉素可以严密控制其表达,并且表达迅速、稳定,至少可以持续3周。另外,Murthy 等也建立了一种携带K1-5的慢病毒载体pHR’-I RES -eGFP,可以抑制缝线法诱导的兔角膜新生血管形成。H sieh 等报道一种E1B -删除腺病毒联合表达K1-5病毒载体对膀胱癌具有较好的治疗作用。

近年来各种新生血管抑制因子的发现,给肿瘤和眼部新生血管性疾病的治疗带来了希望。K1-5作为一种内源性的血管抑制因子,具有活性高,内皮细胞高度特异性、毒副作用小等特点,有着极佳的治疗新生血管性疾病的潜能。但是K1-5的具体作用机制还有待进一步研究。此外,基因工程药物开发、寻找有效的药物缓释系统和安全的基因治疗途径,是开拓其广阔应用前景的必要步骤。

参　考　文　献

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(收稿日期:2007-04-11)

肿瘤坏死因子-a 在肺间质纤维化发病机制中的作用

李曰玉

刘景艳　(临沂市人民医院　山东临沂276002)

[中图分类号]　R563.9 [文献标识码]　A [文章编号]　1672-4208(2007)11-0062-03

肺间质纤维化是多种炎症细胞因子参与的疾病。本文

就肿瘤坏死因子-a (T NF -a )在肺纤维化发病中的作用机制作了阐述。(T NF -a )是一种炎症细胞因子,通过其诱导核转录因子活化,与其他多种炎症介质和炎症细胞相互作用,在硅尘,石棉纤维和博来霉素等因素的影响下参与肺纤维化的发病过程。

肺间质纤维化是一组多因素参与以肺组织的慢性炎症、胶原沉积、结构重塑和慢性纤维组织增生为病理特征的疾病。肺间质纤维化发病原因多种多样,多数与化疗药物、

放射损伤、粉尘等有关,目前肺纤维化的发病机制尚未明确,多种因素参与其发病过程。对于肺纤维化发病因素的研究中细胞因子的研究较为深入,其中多种炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-a (T NF -a )、白细胞介素4、6、8、10、12、13(I L -4、6、8、10、12、13)等,生长因子如转化生长因子-β(TGF -β)、血小板源生长因子(P DGF )等广泛认为参与肺纤维化发病机制。本文主要就T NF -a 在肺纤维化发病机制中的作用作一阐述。

T NF -a 是一种单核吞噬细胞来源的对于炎症反应具

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常见蛋白酶抑制剂

当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期：2012-06-13 来源：互联网 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要 : 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;

肿瘤血管生成与血管生成抑制因子的研究进展

肿瘤血管生成与血管生成抑制因子的研究进展 摘要：肿瘤血管生成在肿瘤的生长和转移中起着重要的作用，是肿瘤生长、侵袭、转移和复发的先决条件。肿瘤的血管生成是一个复杂的生物学过程,包括血管内皮细胞的增殖、出芽和迁移等。这一过程中有众多肿瘤血管生成因子和抑制因子参与调节和激活血管生成的开关。因此, 研究肿瘤血管生成相关分子在肿瘤血管生成中的作用机制, 及其对肿瘤血管生成的调控,形成一种抗血管生成疗法，来达到控制肿瘤血管生长和转移的目的, 对肿瘤的治疗具有重要意义。 关键词：肿瘤血管生成；血管生成因子；血管生成抑制因子；血管生成开关恶性肿瘤的生长和转移依赖于血管生成。当肿瘤体积超过2-3mm3后局部缺血缺氧[ 1] , 需要产生新的毛细血管以维持肿瘤的生长, 丰富的血管可向肿瘤提供足够的营养物质, 清除各种降解产物, 肿瘤细胞亦经血管进入血液循环发生血行转移, 否则肿瘤将发生退行性坏死[ 2].新血管的形成发展取决于血管生成生长因子和血管生成抑制因子之间的动态平衡，当血管生长因子与血管抑制因子达到平衡时，血管生成不被启动; 当此平衡趋向于血管生成时，血管开关被开启，新生血管开始生成。在正常组织中, 由于缺少血管生成生长因子或生长因子被高水平的血管生成抑制因子严格控制,血管生成的开关处于关闭状态;但在肿瘤组织中, 生长因子过度表达, 抑制因子表达过低, 改变了这个平衡, 开启了肿瘤血管生成的表型, 导致新血管的生长。因此，有学者认为肿瘤血管形成的始动因素是血管生长因子和血管抑制因子失衡，并且这种失衡会持续出现在肿瘤生长过程中，并提出了通过抑制血管生长因子信号通路，来抑制肿瘤生长和转移。［3］1．肿瘤血管生成开关机制 实验和临床数据表明，大多数人类肿瘤生成早期不诱导血管生成和并存在于原位，在无血供数月至数年后，肿瘤中的一些细胞向血管生成的表型转变，这种现象称为血管生成开关。这一机制的分子基础可能是血管生成抑制剂的减少以及血管生成因子产量增加所致[4]。因此，血管生成表型的开关是由血管生成因子与血管生成抑制因子的动态变化来调节。

基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系

基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，MMP7、TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。 标签：盆底功能障碍性疾病（PFD）；基质金属蛋白酶（MMPs）；组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs） 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，是威胁妇女健康的慢性疾病之一，随着社会老龄化的到来，发病率逐渐升高。PFD以女性压力性尿失禁（SUI）、盆腔器官脱垂（POP）和生殖道损伤为常见问题，是一组由于盆腔支持结构缺陷或退化、损伤及功能障碍而导致的疾病。PFD的发病危险因素有妊娠、阴道分娩损伤、长期腹压增加、先天缺陷及盆底肌肉退化薄弱，而支持盆底器官的盆底肌肉组织结构功能异常为主要因素[1]。 骨盆底由多层肌肉和筋膜构成，封闭骨盆出口，承托并保持盆腔脏器于正常位置[1]。细胞外基质（ECM）是由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质，构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。ECM是盆底结缔组织的主要成分，其合成与分解处于动态平衡中，以维持组织形态结构及功能的稳定。因此，其含量及结构的改变与PFD的发生发展关系密切。目前已经发现多种作用于ECM不同成分的酶，其中胞外基质降解最重要的蛋白水解系统由结缔组织及肿瘤组织合成、分泌的基质金属蛋白酶（MMPs）构成。MMPs是一个依赖锌离子的内肽酶类，在细胞外基质中其活性可被内源性抑制剂—组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs）家族所调节。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员MMP1～26，分为6类。其中MMP3、7为基质溶解素类，不仅可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白还能降解纤维连接蛋白和层粘连蛋白等，它们的内源性抑制剂TIMP1可以抑制MMP3、MMP7的活性。由此可见，MMP7，TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。现就MMP7，TIMP1与PFD之间关系的相关研究做一综述。 盆腔肌肉群与盆底结缔组织共同作用支撑着阴道与子宫。盆底结缔组织主要由胶原构成，胶原蛋白是盆底韧带、筋膜的主要成分。盆底的阴道上皮、肌纤维组织与结缔组织的胶原构成主要是Ⅰ型与Ⅲ型。 1 PFD患者盆底结缔组织中胶原含量改变 许多文献报道女性SUI及POP患者，膀胱阴道筋膜，主韧带组织中胶原含量减少。2009年李萍等[2]在研究中发现PFD患者宫颈组织中1型蛋白含量减小。2009叶明等[3]在研究中发现POP患者韧带和盆底筋膜组织Ⅲ型胶原含量减少。 2 胶原代谢情况改变 2.1 胶原分解代谢增加

肺癌血管生成以及抗血管生成治疗(一)

肺癌血管生成以及抗血管生成治疗(一) 【摘要】肺癌与其它实体瘤一样，其发生、发展和转移均依赖于血管生成，当肿瘤直径达到一定大小时，就会启动“血管生成开关”，促进新的血管生成，以保证肿瘤生长的血供需要。肺癌血管生成是一个极其复杂的过程，受多种正性和负性血管生成因子的调控。因此，抑制血管生成过程中关键步骤阻断肿瘤血管生成，从而切断肿瘤的营养来源和迁移通道，已成为近年来癌症治疗的新策略。本文就近年来此领域的最新研究进展做一综述。 【关键词】肺癌血管生成抗血管生成 肺癌（Lungcancer）是最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的生命和健康，它已经成为全世界癌症死亡的最主要原因之一。1971年，Folkman等提出了肿瘤生长依赖于血管生成的假说，他认为一些来源于肿瘤细胞的化学信号可以通过打开“血管生成开关”而使肿瘤从静止期转换到快速生长期。静止期的肿瘤没有血管生成，肿瘤直径被限制在大约0.2mm-2mm，如果超过这一时期，肿瘤细胞就可以作用于周围的血管，引起血管扩张、扭曲、通透性增加，从而引起血管的发芽。许多研究都表明血管生成对肺癌的发生起着非常关键的作用，而且癌前病变或者肺癌早期也存在微血管密度的增加1]，后者是非小细胞肺癌术后预后非常重要的一个指标，因此针对血管生成治疗肺癌很可能成为一种非常有效的方法。 一肺癌血管生成调控 1.VEGF血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）家族是一个以二硫键或非共价键连接的同源二聚体的糖蛋白，目前所知的VEGF家族成员包括：VEGF-A（VEGF），VEGF-B，VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E和胎盘生长因子（PIGF）。其中VEGF被证明是内皮细胞特有的一种生长因子，在血管生成中起到非常重要的作用2]。VEGF为低氧诱导的生长因子，分子质量为34～46Ku，由于其mRNA拼接不同，其有五种形式：VEGF121，VEGF145，VEGF165，VEGF183，VEGF189，VEGF206，其中以VEGF165较为常见，而且生物学活性最强。VEGF和其两个高亲和力受体VEGFR-1或者Flt-1（Fms-liketyrosinekinase），及VEGFR-2或者Flk-1（Fetalliverkinase）/KDR（kinaseinsertdomain-containingreceptor）结合，结合以后其受体通过自身二聚化、磷酸化激活而介导信号转导。VEGF可以使血管床的通透性增加，促进内皮细胞分裂、增殖、迁移和运动，刺激新生毛细血管生成，协助肿瘤细胞进入脉管系统，促进肿瘤侵袭转移。 2.EGFR表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）是ErbB家族成员之一，分子量为170kDa，是一种跨膜糖蛋白，由细胞外区、跨膜区和细胞内区构成。EGFR通过细胞外区结合特异性的配体诸如EGF、TGF-α等而被激活，配体与EGFR结合导致细胞内区的自动磷酸化，以及细胞内酪氨酸激酶活性的激活。酪氨酸激酶磷酸化常伴随下游信号传导蛋白分子的激活，介导下游不同信号通路，比如ras–raf–MAPK，STAT，PI3K–Akt等通路的激活，从而引起肿瘤细胞的增殖、扩散转移及凋亡的抑制。 3.蛋白水解酶与血管生成和肿瘤生物学行为有关的蛋白水解酶主要有基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）、纤维蛋白溶酶原激活物（plasminogenactivator,PA）、尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinasetypeplasminogenactivator,uPA）和组织金属蛋白酶抑制物（tissueinhibitorofmetalloproteinase,TIMP）等。MMP家族成员众多，但以间质胶原酶(MMP1)、明胶酶A（MMP2）、基质分解素–1（MMP3）和明胶酶B（MMP9）最为常见。MMP参与细胞外基质的降解，促使内皮细胞的迁移，血管生成，并在肿瘤的侵袭性生长和转移方面，发挥了至关重要的作用3]。纤维蛋白溶酶原激活物除与MMP的作用基本一致外，尚有促进VEGF、bFGF和TGFβ的血管生成调节作用。TIMP能促进细胞增殖，但对血管内皮细胞的迁移和新生血管的生成有抑制作用。 4.COX-2环氧合酶（Cyclooxygenase,COX）是催化花生四烯酸生成前列腺素和血栓戊烷的关键酶，它包括两种异构体COX-1和COX-2。COX-1在所有的细胞内几乎都持续表达，并且在许

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组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维 化 (作者：__________ 单位：___________ 邮编：___________ ) 【摘要】基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase ，MMP) 是体内重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular matrix ，ECM的所有成分；基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue in hibitor of metalloprote in asas ，TIMPs )是MMP 啲内源性抑制 系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方面影响肝纤维化的形成。通过干扰MMP与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs;肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合 成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4 ］，肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMP是最重要的一种［5］。MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分，而其天然抑制剂-基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性⑹。二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMP与TIMPs基因的表达

来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。本文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋白酶。M MPs在肝内主要由肝星状细胞（HSC）和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋白水解酶家族，因其需要Ca2+ Zn 2+等金属离 子作为辅助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMP家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 1. 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-1 MMP-8 MMP-13和MMP-18它们能够降解间质胶原（I、H、皿型胶原），也能消化许多别的ECM及可溶性蛋白［5］。 MMP-1又称成纤维细胞型，是人类主要的间质胶原酶，结缔组织细胞、肝内HSC肝细胞、枯否氏细胞均有分泌，分解底物为胶原蛋白（皿I II）。而MMP-13 是鼠类主要的间质胶原酶。MMP-取称中性粒细胞胶原酶，主要降解I型胶原。（2）明胶酶类（gelatinases）。包括MMP-2阴胶酶A）及MMP-9明胶酶B）。它们可降解明胶（变性胶原）和W、V和幻型胶原、层粘连蛋白、蛋白聚糖等。MMP-2和胶原酶类以相似的方式可以降解I, I,和皿型胶原，但其活性较MMP-1弱［8］。（3）基质分解素（strogylisin）。主要包括MMP-3 MMP-1（和MMP-11 仅有MMP-3在肝脏中存在。底物广泛，包括蛋白多糖、层粘蛋白、纤维连接蛋白、

血管内皮因子综述

血管内皮生长因子与肿瘤治疗的研究进展 【摘要】肿瘤生长和转移依赖于血管生成,肿瘤血管生成是受多种细胞因子、生长因子及其受体调控,其中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)被认为是最关键的调控因子, 以VEGF及其受体作用途径中的任一环节为靶点,阻断VEGF对肿瘤血管的作用,都可以达到遏制肿瘤生长和转移的目的。VEGF靶向抗肿瘤血管生成成为抗肿瘤的新策略。 【关键词】VEGF 肿瘤靶向治疗 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),也叫做血管通透因子(vascular permeability factor,VPF),在正常胚胎发育时有广泛的表达,但正常成年者的组织中呈低水平表达,在肿瘤等病理情况下其表达异常升高。VEGF是一种高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂因子,通过与其特异性受体(VEGFR)结合,引起一系列的信号转导,释放多种细胞因子与生长因子,刺激血管内皮细胞增殖和迁移,促进新生血管生成,在肿瘤的生长和转移中起重要作用。 1．VEGF生物学功能 VEGF的功能包括:①诱导内皮细胞钙浓度短暂升高、形态改变、分裂及运动,影响内皮细胞基因表达,加快基底膜降解,从而发挥促血管生成功能。②增加血管通透性,使血浆蛋白外渗,形成血管化纤维蛋白基质,为内皮细胞迁移形成网架。血管内物质外漏也为肿瘤转移提供基质,这对于肿瘤发展和转移可能比促内皮细胞增生更重要。另外,肿瘤细胞分泌的VEGF弥散作用于肿瘤周围组织的毛细血管,使其通透性增加造成瘤周水肿。③改变内皮细胞基因表达,诱导其合成大量蛋白水解酶,加速血管构建。④抑制宿主抗原呈递细胞成熟,使肿瘤细胞得以逃避免疫监视。⑤诱导血管内皮细胞bcl-2基因表达,提高诸如放射损伤细胞、血管内皮细胞抗凋亡的能力。 2．VEGF促进肿瘤生长、侵袭、转移的机制 肿瘤的侵袭、转移涉及到多个步骤:包括在局部生长到一定大小后瘤细胞从原发灶脱落,细胞外基质和基底膜的降解,瘤细胞进入血循环后逃脱宿主的免疫监控而存活下来, 瘤细胞达远处组织器官后粘附, 继而新生血管形成, 最后继发成瘤。VEGF几乎参与了此过程中的各个步骤，而不仅仅只作为促血管生成因子和血管通透性因子。 2．1 VEGF通过对内皮细胞的增殖、迁移、粘附的调节而促进新生血管的形成。 2．2 肿瘤细胞分泌的VEGF通过自分泌机制与瘤细胞上的VEGFR-2(KDR)结合，调控下游基因的表达而促进瘤细胞的生长、侵袭、转移。 2．3 VEGF通过抑制树突细胞的分化、成熟，减少树突细胞的生成从而降低宿主免疫功能。3．VEGF肿瘤治疗中的应用 3．1 基因治疗 3．1．1 反义寡核苷酸 反义寡核苷酸可抑制VEGF基因水平的分泌,也可特异性降低细胞中VEGFR mRNA水平。高渝等利用超声微泡介导VEGF反义寡核苷酸转染作用于人膀胱癌裸鼠移植瘤模型，

赤魟软骨血管生成抑制因子的制备【开题报告】

开题报告 药学 赤魟软骨血管生成抑制因子的制备 一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义 作为拥有1.8万公里海岸线的国家，我国的渔业资源非常丰富，赤魟就是这丰富资源中的一种。 魟鱼[1] (Ray)俗称鯆鱼，草帽鱼，蒲扇鱼，黄貂鱼。英文名：Red stingray。它属暖温类底层鱼，属于脊椎动物门Verterata，软骨鱼纲Chondrichthyes，板鳃亚纲Elasmobranchii，鳐目(或魟目)Rajiformes，魟科Dasyatidae和燕魟科Myliobatidae。全世界共有六个科158种。赤魟主要分布于我们南海和东海，长江口咸谈水中亦有分布。浙江沿海拥有丰富的海洋资源，其中以赤魟（Dasyatis akajei）资源最为丰富。 魟软骨味尚佳，皮厚实，无血有光泽，含丰富的胶质，水发后烹制成“大扒鱼皮”，味道鲜美，是宴席上的珍品。此外，作为药用，其肉性味甘、咸平，无毒，具有健脾补气、滋补强身之功效。用其熬油，主治小儿疳积。尾毒的毒液是一种氨基酸和多肽类的蛋白质，其药性咸、寒，有小毒，对于中枢神经和心脏具有一定的效应，有清热消炎、化结、除癥之功效。尾刺研末入药，对治疗胃癌、食道癌、肺癌、乳腺炎、咽喉炎、疟疾、牙痛、魟鱼尾刺刺伤均有一定疗效。其肝除作为制作鱼肝油的原料外，煮食后能治夜盲症。 但是，国内外对赤魟的生物活性研究还处于起步阶段，其应用研究和应用基础几乎空白，资源量丰富、营养药用价值高的赤魟仅处于被人们日常食用的阶段。上文所述赤魟的药用价值大多都是对赤魟尾刺提取物、赤魟肝脏活性蛋白、赤魟软骨多糖或其软骨活性蛋白的研究。 如肖湘等对赤魟肝脏活性蛋白体外抗氧化作用的研究[2]，采用硫酸铵沉淀、Sephadex-G150柱层析的方法从赤魟肝脏分离活性蛋白，测定活性蛋白清除超氧阴离子自由基、羟自由基和抑制脂质过氧化作用，结果显示分离得到的三个蛋白峰均具有很强的抗氧化作用。 罗红宇等对赤魟软骨黏多糖的制备研究[3]，探索利用碱浸提和酶法去蛋白从赤魟

凋亡蛋白抑制因子5在牙周炎中的作用和机制的初步探索

目录 中文摘要 ....................................................................................................................... I Abstract ........................................................................................................................ I II 缩略语/符号说明 ....................................................................................................... IX 前言 . (1) 研究现状、成果 (1) 研究目的、方法 (2) 一、慢性牙周炎患者和健康人牙龈成纤维细胞细胞活性和凋亡相关因子Bcl-2、Bax的比较 (4) 1.1对象和方法 (4) 1.1.1主要设备和仪器 (4) 1.1.2主要试剂 (5) 1.1.3主要试剂的配制 (5) 1.1.4研究对象和方法 (6) 1.2 结果 (9) 1.2.1人牙龈成纤维细胞的原代培养 (9) 1.2.2健康组与慢性牙周炎组HGFs细胞活性的比较 (10) 1.2.3健康组与慢性牙周炎组HGFs中凋亡相关因子的比较 (10) 1.3讨论 (11) 1.4小结 (13) 二、健康人及慢性牙周炎患者牙龈组织中API5及其他凋亡相关因子的差异性比较 (14) 2.1对象和方法 (14) 2.1.1主要设备和仪器 (14) 2.1.2主要试剂 (15) 2.1.3研究对象和方法 (15) 2.2 结果 (17) 2.2.1各组间年龄、性别统计学分析 (17) 2.2.2 real-time PCR检测API5及其他凋亡相关因子的表达 (17) 2.3讨论 (18) VI

血管生成(Angiogenesis)信号通路图

本实验技术来源于SciMall科学在线 血管生成（Angiogenesis）信号通路图 血管生成是通过人体中存在的诸多互补和复杂的信号途径调节的.血管内皮生长因子(VEGF)-血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管生成素(Ang)-Tie2轴和Dll4-Notch这3个复杂的、相辅相成的信号传导通路可在调节血管生成中发挥重要作用. VEGF与内皮细胞上的两种受体KDR和Flt-1高亲和力结合后，直接刺激血管内皮细胞增殖，并诱导其迁移和形成官腔样结构；同时还可增加微血管通透性，引起血浆蛋白（主要是纤维蛋白原）外渗，并通过诱导间质产生而促进体内新生血管生成。VEGF在血管发生和形成过程中起着中枢性的调控作用，是关键的血管形成刺激因子。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。TNF-α是一类具有血管活性的细胞因子，可诱导异位子宫内膜炎性细胞因子MCP-1，IL-6和IL-8等的释放，促进异位内膜及基质细胞增殖及炎性细胞浸润，新生血管形成，组织粘连，从而形成异位病灶。 （来源：Scimall科学在线） 本信号转导涉及的信号分子主要包括： HIF1α，PHDs，HIF1β，PI3K，Akt，mTOR，S6K，4E-BP1，eIF4E1，elF4E1，Ras，MEK1，MEK2，Erk1，Erk2，MNK，CBP，P300，TCEB1，TCEB2，Rbx1，Cul2，VHL，MMP，Cox2，PAI-1，VEGF，PDGFR-β，VEGFR2，Tie2，FGFR，IGFR，TGFα-R，SLIT，ROBO，Src，FAK，p38，MAPK，Smad2，Smad3，PLCγ，NOS等。 点击图中信号分子，自动寻找相关试剂

组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化【摘要】基质金属蛋口酶(matrix metalloproteinase> MMP)是体内 重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular raatrix> ECM)的所有成分;基质金属蛋口酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinasas^ TIMPs )是MMPs的内源性抑制系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方而影响肝纤维化的形成。通过干扰MMPs与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs：肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4］,肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMPs是最重要的一种［5］° MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分,而其天然抑制剂-基质金属 蛋口酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性［6］。 二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMPs与TIMPs基因的表达来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。木文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋口酶。MMPs在肝内主要由肝星状细胞(HSC) 和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋口水解酶家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅 助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMPs家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 L 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-K

大豆胰蛋白酶抑制因子(TI)-NEWA

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大豆胰蛋白酶抑制因子（TI）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大豆胰蛋白酶抑制因子（TI）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大豆胰蛋白酶抑制因子（TI）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。 2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。 3. 植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。 4. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注 微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无 标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无 样本稀释液6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液6mL 3mL 无 封板膜2张2张无 说明书1份1份无 自封袋1个1个无 注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、50、100、200、400、800 ng/mL 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的

血管生成实验模型研究进展

血管生成实验模型研究进展 吴家明1 ,陆　茵 1,2 ,郜　明1,张伟伟 1 (1.南京中医药大学中医药研究院,江苏南京　210029;2.江苏省方剂研究重点实验室,江苏南京　210029) 收稿日期:2007-09-21,修回日期:2007-11-01 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30371727,30772766);江 苏省自然科学基金资助项目(No BK2003113) 作者简介:吴家明(1980-),男,硕士生,研究方向:肿瘤血管生成与 抗肿瘤转移研究,E 2mail:nj w ujia m ing@https://www.wendangku.net/doc/a23347795.html,; 陆　茵(1963-),女,教授,博士生导师,研究方向:肿瘤血管生成与抗肿瘤转移研究,通讯作者,Tel:0252 86798154,E 2mail:luyingreen@https://www.wendangku.net/doc/a23347795.html, 中国图书分类号:R 205;R 332;R 3632332;R 36413 文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2008)01-0011-04摘要:抗血管生成已经成为治疗肿瘤转移、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的重要策略之一。血管生成模型作为一种研究工具在探讨血管形成机制、发现促进或抑制血管生成药物等研究中发挥十分积极的作用。如何寻找适合的血管生成模型是研究人员在研究中常遇到的问题。该文就主要常用模型做较全面的介绍,并对其优缺点进行评价。关键词:血管生成;模型 血管生成(angi ogenesis )是指在原有的毛细血管和(或)微静脉基础上通过血管内皮细胞的迁移和增殖,从已存在的血管处以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛细血管为主的血管系统过程 [1] 。血管生成是许多促进或抑制血管 生成的分子参与调节的一个平衡过程[2]。血管生成过多与肿瘤、糖尿病性视网膜病变等疾病有关[3],抑制血管生成已经成为治疗这些疾病的重要策略。因此寻找血管生成抑制剂成为研究热点。血管生成研究需借助血管生成模型进行,血管形成的许多过程都可以在血管生成模型中模拟完成,包括内皮细胞增殖、迁移、毛细血管网状结构的形成等。本文就常用体内、体外及整体模型进行综述。 1　体外模型 体外模型主要分为细胞水平及组织学水平两类,常用的体外模型有以下4种。 1.1　内皮细胞增殖实验(cell proli fera ti on a ss ay)　内皮细 胞活化增殖是血管生成的起始阶段。目前主要有两种测定细胞增殖的方法即净细胞数测定和细胞周期分析。 1.1.1　净细胞数测定　M TT 法(四甲基偶氮唑比色法)是 测定活细胞数的化学定量方法,操作简便,价格低廉。但它不适合测定对细胞代谢有影响的药物,因为这类药物能影响 MTT 测定的活细胞数。另外通过胸腺嘧啶核苷参入法测定DNA 合成来测定细胞增殖能力。抑制细胞增殖可能是由于 药物的抑制作用,也可能是药物的毒性作用引起。因此,这种方法常需要结合细胞凋亡实验的数据才可以更好地评价药物对细胞增殖的影响。 1.1.2　细胞周期分析　近年来有报道通过细胞周期分析来 评价药物对细胞增殖的影响,细胞短时间暴露到溴脱氧尿苷 (B rd U )中可以促使B rdU 参入细胞DNA 中。碘化丙啶(P I ) 染色后测定细胞的总DNA 量,再用荧光激活细胞分析仪测定细胞中B rd U 和P I 的量可得出细胞周期信息[4]。但实验用的内皮细胞处于增殖状态,与体内静止状态的内皮细胞是不同的,实验结果与体内还是存在一定差异。 1.2　内皮细胞迁移实验(cell m i gra ti on a ss ay)　常用迁移 模型有两种:①细胞损伤模型:在培养血管内皮细胞的培养皿上用刀片划出#形区,经P BS 洗涤后再用含011%明胶的 ME M 培养20h,细胞用甲醇固定,Gie m sa 染色。在光镜下计 数从损伤边缘迁移出的细胞数,需要注意的是划出的损伤区域一定要精确。②Boyden 室模型,Boyden 室由两层组成,两层之间为胶原包被的多孔的多聚碳酸盐滤膜;血管内皮细胞放于上层,同时加入待测药物,共同培养6h 后,除去上层的细胞,下层细胞用甲醇固定,HE 染色,光镜下计算下层的血管内皮细胞数。龙淼云等[5]采用本模型研究证明了血管生成抑制因子arresten 对huvec 迁移有抑制作用。Boyden 室模型优点在于它对药物浓度梯度差异很敏感。但对实验技术要求较高且计数方法不同可能会造成统计结果误差较大。因此有必要建立一个严格的计数标准以减少因方法不同产生的误差。 1.3　小管形成实验(tube for ma ti on a ss ay)　小管形成实验 能模拟人体内毛细血管生成的过程,包括内皮细胞出芽增殖和毛细血管网结构形成等步骤,接近人体内血管生成的实际过程。内皮细胞在基质胶、纤维蛋白胶、胶原等基质上培养时能形成网状结构。用电子显微镜来分析小管间的紧密连接,从而定量血管生成情况[6]。需要指出的是似乎所有的内皮细胞都能在细胞外基质上形成管状结构,有些非内皮细胞也能在基质胶上形成管腔结构[7]。实验一般采用24孔培养板,但它底面积大,Matrigel 用量多,计数区域大只能随机选择几个典型区域且数据分析耗时长。Sanz 等[8]采用384孔和1536孔培养板培养可节约胶的用量,借助计算机可以计算整个孔的小管及小管之间的连接数及小管的长度和面积。改进方法后减少了原来分析困难及重现性差的缺点。 1.4　大鼠动脉环实验(ra t aorti c r i n g a ss ay)　1990年N ic 2osia 等首次将此模型应用于血管生成研究中。取下大鼠主 动脉后,剪成1mm 宽的血管环,再用纤维蛋白胶或胶原蛋白胶包埋,然后以无血清的MC DB131培养液培养。培养过程中每天计算主动脉环产生的新生微血管数并进行定量分析。用不同胶培养的大鼠主动脉环新生血管的生长曲线不同。胶原包埋的主动脉环,培养1wk 时血管数达到顶峰,第 2wk 开始萎缩。用纤维蛋白胶包埋时能使血管数顶峰期维 ? 11?中国药理学通报　Chinese Phar m acological B ulletin 2008Jan;24(1):11～4

肝癌中基质金属蛋白酶及其抑制因子的研究进展

怂鑫妻盏豁翳要）Ｅｄｉ，２０?ｏ，Ａ叭２９（２）：２，５—２均．２，５． ｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎ［Ｐ］．２００４．［６４］ＣＵＩ Ｈ，ＣＵＩＹ．ＣＮｌｌ３４２３４一Ａ，ＣＮｌ０７３３６２一Ｃ：Ｔｅａｆｏｒｅ．ｇ． ［５７］ＭＡＢ．ＣＮｌ０１４７４３１１。Ａ：Ｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｆｏｒｕｓｅａ８ａｎ ａｎｆｉｏｘｉ－ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｉｎｖｉｇｏｒａｔｉｎｇｓｐｌｅｅｎ［Ｐ］．１９９８．ｄａｎｔｆｏｒａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｅｙｅｓｔｒａｉｎ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｓｈｅｌｌ，［６５］ＰＡＮＧＹ．ＣＮｌｌ２４１０８－Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｖｅｈｅａｌｔｈ．ｃａ弛ｓ锄ｓａｇｅ［Ｐ］．ｘａｎｔｈｉｎｉｎｍａｒｉｇｏｌｄｅｘｔｒａｃｔ，ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎｂｌｕｅｂｅｒｒｙ１９９７． ｅｘｔｒａｃｔ，ｂｅｔａ。ｃａｒｏｔｅｎｅ，ａｎｄｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅｉｎＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ６－［６６］ＢＡＲＴＯＮＢ，ＡＮＴＯＮＥＬＬＩＪ．ＵＳ２００７２６９５７６．Ａ１：ＮｕｔｒｉｔｉｏＩｌａｌ ｔｒａｃｔ［Ｐ］．２００９．ｆｒｕｉｔｄｒｉｎｋｆｏｒ ｕｓｅｉｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ．ｈｅａｌｔｈｓｃｉｅｎｃｅｓａｒｌｄｍｅｄｉ． ［５８］ＸＩＡＰ，ＢＥＩＳ，ＦＥＮＧＹ．ＣＮｌ０７５８７８。Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｏｕｓ ｌｉｑｕｉｄｃｉｎｅｆｉｅｌｄｓ，ｃｏｎｔａｉｎｓｆｒｕｉｔｉｕｉｃｅ，ｅ．ｇ．ｄｕｒｉａｎ。ａｎｄｓｉｌｖｅｒ ｆｏｒｅｙｅｓｉｇｈｔｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｃａｓｓｉａｓｅｅｄ，ｆｒｕｉｔｏｆｌｙｃｉｕｍ￥ｏｎｌ＇ｅｅ［Ｐ］．２００７． ｂａｒｂａｒｕｍ，ｍｕｌｂｅｒｒｙｆｌｏｗｅｒｈｅａｄ，ｖｉｔａｍｉｎＡ，ｖｉｔａｍｉｎＣｅｔｅ［６７］ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．ＤＥ２０２００８０１１７２１．Ｕ１：ｃ砌．［Ｐ］．１９９４．ｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｔｏｔｒｅａｔｃ帅ｃｅｒ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｅ】【－ ［５９］ＹＵＢ．ＣＮｌ０１０７７３７４一Ａ：ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｆｏｒｔｒａｃｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ ｅ．ｇ．Ｒａｄｉｘｇｉｎｓｅｎｇ．Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄ． ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｌｙｃｉ一哪，Ｃｏｒｄｙｅｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｐｉｌｏｓｕｌａ，Ｌｙｃｉｕｍｂａｒ－ ｕｎｌｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ，ｇｉｎｓｅｎｇｐｏｗｄｅｒ，２‘ａｍｉｎｏｅｔｈ．ｂａｌ＇ｕｍ，ＬｉｇｕｓｔｒｕｍｌｕｃｉｄｕｍａｎｄＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｅａｃｉｄａｎｄｖｉｔａｍｉｎＥ［Ｐ］．２００８．［Ｐ］．２００９． ［６０］ＭＡＪＥＷＳＫＩＧＰ，ＳＨＡＨＡＲ，ＧＯＲＭＬＥＹＪＬ，ｅｔａ１．［６８］帆ＬＧ．ＥＰｌ５３２８６８－Ａ１，ＤＥｌ０３５８３２８一Ａ１。ＥＰｌ５３２８６８．ＵＳ２００７１６６２６７’ＡＩ：ＣｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｆｉｎｅＢ１，ＤＥ５０２００４００９１２２?Ｇ：Ｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔ．ａｓａｆｏｏｄｓｕｐｐｌｅ．１ｉｎｅｓａｎｄｗｒｉｎｋｌｅｓｉｎｆａｃｉａｌｓｋｉｎｂｙｉｍｐｒｏｖｉｎｇｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏ－ｍｅｎｔ，ｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｗｏｌｆｂｅｒｒｉｅｓａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒａｂｌａｓｔｍａｔｒｉｘ，ｃｏｎｔａｉｎｓａｃｙｌａｔｅｄｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅａｎｄＬｙｅｉｕｍｂａｒ－ｂｅｒｒｉｅｓｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｍａｇｎｏｌｉａｂｌｏｓｓｏｍ［Ｐ］．２００５． ｂａ／ｌｌｍｅｘｔｒａｃｔｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｖｅｈｉｃｌｅ［Ｐ］．２００７．［６９］ＳＯＫ，ＹＵＥＮｗ，ＣＨＡＮＧＲＣ，ｅｔａ１．ＵＳ２００５１９６４７８．Ａ１． ［６１］ＧＯＤＤＩＮＧＥＲＤ，ＫＲＵＥＧＥＲＭ．ＤＥｌ０２００８０１２０５９’Ａ１，Ｗ０２００５０８２３８７－Ａ２，ＤＥｌ １２００５０００３４５．Ｔ５，ＣＮｌ９５３７６１．Ａ：Ｗ０２００９１０９４２６‘Ａ１：Ｃｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｅ．ｇ．ｔｏＲｅｄｕｃｉｎｇｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓｄｅａｔｈｅ．ｇ．ｇｌａｕｃｏｍｉｎｖｏｌｖｅｓｔｒｅａｔｋｅｒａｔｉｎｆｉｂｅｒｓ，ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙｈｕｍａｎｈａｉｒｓ。ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ锄ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇａｇｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｗａｔｅｒｆｒｏｍｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｍｍｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｆｒｕｉｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｍｎ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒ蛐ａｃｔｉｖｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ［Ｐ］．２００５． ａｇｅｎｔｅ．ｇ．ｎｏｎ。ｓｕｒｆａｃｅａｃｔｉｖｅｂｅｔａｉｎｅ，ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ，ａｎｄＣＯ－［７０］ＰｈｙｔｏｖｉｓｉｏｎｓＧｍｂｈ＆ＣｏＫＳ．ＤＥ２０２００４０１８００５一Ｕ１．ＤＥｌ０３ｅｎｚｙｍｅＱ１０［Ｐ］．２００９．５４６６７－Ａ１：ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍａｎｄ［６２］ＣＨＵＣ．ＣＮｌｌ２２７１２。Ａ：Ｎｏｕｒｉｓｈｉｎｇａｎｄｈｅａｌｔｈ－ｃａｒｅｍｅｄｉｃｉ．Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ，ｕｓｅｆｕｌｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，ｆｏｏｄｓａｎｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ｎａｌｗｉｎｅ［Ｐ］．１９９７．ｈａｖｅａｎｔｉｓｔｒｅｓｓａｎｄａｎｔｉ．ａｇｅｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．１ａｃｋｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ［６３］ＷＡＮＧＤ．ＣＮｌ１０８０４７－Ａ，ＣＮｌ０３８３８３一Ｃ：Ｉｎｓｔａｎｔｎｏｏｄｌｅｓｈａｒｍｆｕｌ ｌｉｇｎａｎｓ ａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎｓ［Ｐ］．２００５．ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＣｈｉｎｅｓｅｗｏｌｆ－ｂｅｒｒｙ［Ｐ１．１９９７． 肝癌中基质金属蛋白酶及其 抑制因子的研究进展 程桂丹１，陆枫林２ （１．东南大学临床医学院，江苏南京２１０００９；２．东南大学附属中大医院消化科，江苏南京２１０００９） ［摘要］基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）家族是降解细胞外基质的重要酶类，组织金属蛋白酶抑制因子（ＴＩＭＰ）是［收稿日期］２００９—０５—１８［修回日期］２００９?１Ｉ一１７ ［基金项目］江苏省自然科学基金资助项目（ＢＫ２００６１００） ［作者简介］程桂丹（１９８３一），女，湖北咸宁人，在读硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｇｄｋｌｚ２１９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｉｎ．ｃｎ ［通讯作者］陆枫林Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｆｅｎｇｌｉｎｍｙｔｕｔｏｒ＠１６３．ｃｏｍ

神经生长因子与血管生成的相关性研究进展.

．１３８? 中国现代医药杂志２００９年８月第１１卷第８期ＭＭＪＣ，Ａｕｇ２００９．Ｖｏｌ１１，Ｎｏ．８ 神经生长因子与血管生成的相关性研究进展 于一凡综述孙晋民审校 神经生长因子ｆ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）作为一种传统 意义上的神经营养因子，具有多方面的作用，它能促进中枢及外周神经系统的 发育与分化．维持神经系统的正常功能，促进神经维的再生，并对神经元有保护作用。有两种膜受体介导ＮＧＦ的信号，即高亲和性的ＴｒｋＡ受体。和低亲和性的 ｐ７５受体。近来研究表明ＮＧＦ还具有促周围再生神经…和非神经组织１２ｔ３１的血管生成作用。研究发现ＮＧＦ不仅可以通过调节血管内皮细胞生长因子（ｖ ａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ， ＶＥＧＦ）的表达间接地促进血管形成１４１，ＮＧＦ还具有直接促进血管形 成的作用阁。１血管生成的机制 血管生成是新血管形成的主要过程。它在机体胚胎发育中起着重要作用，参与 人体正常的生理活动，而且血管生成也是很多病理情况的重要标志．包括糖尿病和 癌症．在创伤修复、缺血缺氧、慢性炎症和癌症等情况下，原有微血管内皮细胞经

过生芽、迁移、增殖及基质重塑等形成新毛细血管问．血管生成受促血管生成因子和相应受体间的相互作用调节。在新血管形成过程的不同阶段中均有参与。 ２ ＮＧＦ促进血管生成的作用 ２．１ ＮＧＦ与血管内皮细胞的相互作用Ｔａｎａｋａ等同研究发 现，大鼠主动脉内皮细胞可产生并释放ＮＧＦ，从而确认血管内皮细胞是ＮＧＦ的又一重要来源。Ｄｏｌｌｅ７等【｛Ｉ用人类主动脉内皮细胞ｈｕｍａｎ ａｏｒｔｉｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．ＨＡＥＣｓ）Ｉ羞行全方位迁 移分析．发现ＮＧＦ刺激了ＨＡＥＣｓ的迁移，这和血管内皮生长因子ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｅｔｏｒ，ＶＥＧＦ）．基本成纤维 细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧｎ的作用相 似。ＮＧＦ介导的ＨＡＥＣ迁移可被ＮＣ胁ｋＡ受体拮抗剂 Ｋ２５２ａ阻断。而不被ＶＥＧＦ，Ｆ１ｋ受体拮抗剂ＳＵ一５４１６阻断，说明了ＮＧＦ通过ＴｒｋＡ受体直接激活了ＨＡＥＣ迁移，数据还显示ＨＡＥＣ表达ｐ７５ＮＴＲ。此外，有研究显示ｍＧＦ促进血管内皮增生，提高了胰岛移植的