气相色谱分析农药残留的基质效应及其解决方法
EP14基质效应的评价
基质效应的评价 1.基质效应的初步认识 基质效应是指检测系统检测样品中的分析物时，处于分析物周围的所有非分析物质对分析物参与反应的影响。产生基质效应的原因与以下四个主要因素的相互作用密切相关：仪器的设计、试剂的组成成分、测试方法的原理、质控材料的组成及处理技术等。通过回收实验可以评估分析方法是否受基质效应的影响，而EP14A文件介绍的方法则是评估经过物理或化学方法处理过的样本在分析过程中是否存在基质效应。 2.基质效应评价的实验步骤 2.1 材料选择 本实验需要如下材料：①待评估检测系统：包括待评估方法的试剂、校准品及仪器系统等。②对比检测系统：包括对比方法的试剂、校准品及仪器系统等。用理想的对比方法检测处理过的校准品或控制品时，其基质效应应尽可能的小，因此可以选择如下方法作为对比方法：国际参考系统（National Reference System，NRSCL）的决定性方法，如胆固醇的同位素稀释质谱法；NRSCL的参考方法，如胆固醇的Abell-Kendall法；NRSCL认可设计的对比方法等。但是在实际实验过程中，选择上述方法作为对比方法并不是绝对要求，选择常用方法作为对比方法即可。③处理过的样本（processed samples）：如待评估的控制品等。④20份新鲜的患者样本：其内含分析物浓度或活性的分布范围应覆盖处理过样本的分析物浓度或活性，但是这些样本不应包含已知含有某些干扰物的样本。此外，如果样本冷冻不影响待评估方法、对比方法的测定，则实验过程中也可以使用冷冻样本。 2.2 实验步骤 按如下步骤进行实验：①按产品说明书的步骤准备处理过的样本。②将处理过的样本随机排列在20份新鲜的患者样本之中，用待评估方法对患者样本、处理过的样本进行检测。再将上述过程重复2次，每个样本共得到3个结果。实验过程中最好将3批次的重复检测连续完成，因为这样可以减少结果漂移等对实验结论的影响。此外，每批检测前都应重新定标。 ③用对比方法对20份新鲜的患者样本、处理过的样本进行检测，步骤同上。④将20份患者样本和处理过的样本冷冻保存（最好是－70℃）以便进行后续研究，如果在数据分析中和分析后出现任何问题，则可用其他对比方法如NRSCL的决定性方法或参考方法检测这些样本。但是应该注意的是，冷冻可能导致粘蛋白、酶结构发生改变而引入基质效应。
基质效应
基质效应、Carry over和Cross-talk 一、定义： 1. 基质指的是样品中被分析物以外的组分。如果分析的是生物样品，那么生物样品中的基质可能会增强或者抑制其响应，从而对我们影响我们检测，这就是基质效应； 2. 如果我们的线性范围很宽，ULOQ很高，那么在分析完ULOQ后，可能在系统中残留一些待测物，这样就会对低浓度的检测有影响，这就是Carry over； 3. 我们进行MRM或者SRM检测时，不同的离子通道间可能存在相互干扰的现象，这就是Cross-talk。 备注：ULOQ是定量上限，定量下限是LLOQ 二、基质效应产生的原因 MS中，一般认为可能源于待测组分与生物样品中的基质成分在雾滴表面离子化过程的竞争。其竞争结果会显著地降低(离子抑制)或增加(离子增强)目标离子的生成效率及离子强度，进而影响测定结果的精密度和准确度。也有人认为基质效应是由于待测组分与基质中内源性物质共洗脱而引起的色谱柱超载所致，这些成分常因在色谱分析中与目标化合物分离不完全或未被检测到而进入质谱后产生基质效应。 三、基质效应的评价方法 比较实际样品和空白溶剂在Ｑ1ＳＩＭ中的响应值。更加一个实际的方法是将被分析物的纯品加入空白基质和纯溶剂中，比较两者的信噪比。如果样品中被分析物浓度已知，则可将分析物加入纯溶剂中，使之达到与样品中分析物的浓度一样。如果样品中分析物浓度未知，或者是纯粹的无分析物的基质无法得到，则可用分析物的同位素内标分别加入到样品和纯溶剂中，比较二者响应差别。通常基质效应可用抑制系数衡量，绝大部分情况下降低信号响应，抑制系数＜1，少数情况下，也能增强响应信号，此时抑制系数＞1． 一般是1）用流动相配制高中低三个浓度的待测物，并加入内标，测得响应 值； 2）空白血浆提取后加入与1)相同浓度的待测物和内标，测响应值 基质效应 ME%=响应值2/响应值1×100％ 这样，不同浓度的待测物的基质效应和内标的基质效应均可得到。（85%-115%之间认为不存在基质效应。） 如果是有机溶剂提取，则很简单，只要把准备作为1）组进样的溶液加到空白血浆提取吹干后的管子里，振荡离心一下进样就可以了，加入的体积就是复溶时的体积； 如果是蛋白沉淀，则复杂一些。就是待测物和内标的混合物加入相同体积生物样品基
血清总蛋白测定的基质效应评价
血清总蛋白测定的基质效应评价 目的评价14种室间质量评价（EQA）材料和3种市售材料在4个检测系统上测定血清总蛋白的基质效应。方法参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP14-A2指南，以美国临床化学协会（AACC）推荐血清总蛋白双缩脲为参考方法，以4个检测系统为待评方法，评价制备物的基质效应。结果9种制备物对各系统均无基质效应，1种制备物对所有系统均存在基质效应，其余样本对不同检测系统存在不同程度的基质效应。结论制备物样本的基质效应可影响血清总蛋白测定的准确性和可比性，在临床检测中应重视其对检验结果量值溯源的影 响。 标签：血清总蛋白；双缩脲反应；参考方法；基质效应 Evaluation of matrix effect for serum total protein HE Mei-lin*, ZHAI Jing*, ZHANG Jie.*The Space Center Hospital of Beijing, Beijing 100049, China 【Abstract】Objective To evaluate the matrix effects of measurement for total protein in serum using 14 materials of external quality assessment(EQA) and 3 commercial reference materials in 4 measurement systems.Methods The matrix effects of 17 processed samples were evaluated by EP14-A2. The biuret method for serum total protein, recommended by the American Association for Clinical Chemistry(AACC), was reproduced as reference method. 4 measurement systems were evaluated as compared method.Results Evaluation of matrix effect: nine processed samples showed no matrix effect at all measurement systems. One processed sample showed matrix effect at all systems. Others showed different matrix effects at different systems.Conclusion The accuracy and comparability for serum total protein measurement is affected by the matrix effects of processed samples. 【Key words】Serum total protein; Biuret reaction; Reference method; Matrix effect
浅析基质效应的评价及消除
?2332?囯际检验医学杂志 2017 年 8 月第 38 卷第 16 期 Int J Lab Med，August2017，V〇1.38，N〇.16?个案与短篇? 浅析基质效应的评价及消除 高雨红 (上海市徐汇区华泾镇社区卫生服务中心检验科，上海200231) 关键词：基质效应；互换性；EP14-A2;《基质效应与互通性评价指南》 D O I：10. 3969/j.issn. 1673-4130. 2017. 16. 063 文献标识码：C文章编号：1673-4130(2017)16-2332-02 20多年如，国内开始关注基质效应在检验准确性中的意 义。目前国内使用的定标品及质控品多是由纯品水溶液制备，由于其基体问血样基体存在差异，纯水溶液中缺少血样中存在 的小分子、脂类等成分，导致测试结果与实际结果产生偏差。这种检测成分以外的物质对检测结果的影响，即基质效应[1]。本院在实验过程中也对基质效应进行了探讨。 1日常分析中的基质效应 由于某些项目没有合适的商业质控品，若使用混合血清作 内控品则稳定性与储存条件都受限，因此，本中心决定自行制 备质控品用于实验室内控E d D 脂蛋白易变质且变质后冻融易产生沉淀，使用葡聚糖硫酸 钠沉淀法可去除脂蛋白。在制备过程中[34，本科室先去除样 本中的脂蛋白，得到的血清制品没有沉淀，并添加检测物纯品。对其进行回收实验时，发现回收率低于90%，未能达到要求。 经过反复测试排除可能的误差，但这种现象并未消除。经 讨论本科室认为回收率过低的原因是基质效应。这种现象，在 不少国内外文献中都有体现。制备品失去蛋白作检测基质，在 进行回收率检测时，其可靠性受到了影响。由于本中心所制备 的质控品只用于内控，不牵涉到准确性控制[5_6]。故本科室通 过消除基质效应实验，修正质控值后用于实验室内精密度控制。 2关于基质效应的评价 为便于日常使用及储藏，经过处理的样品（processed sam-ple)被广泛运用。但经过处理的样品其成分同 新鲜血样有差 异，由于基体(分析样品中，除了分析物以外的所有其他物质及 组分称为该分析物的基体）的不同，导致基质效应。 使用纯物质以水配置成校准品在国内广泛使用，但如上所 述，基质效应是不可避免的。针对该情况，避免基质效应的最 佳方法是一个被检测样品对应一个校准品[7]。即以该样品为 基体加人纯品制成校准品，校准该测试项目后再检测该样品。可见，该方法过于费时，不适于医院的常规工作，这种方法只用 于部分实验室科研。近年由各种文献可见，这种纯品配置的校 准品如何定值也被很多试剂公司重视。 由于基质效应很难被避免，所以基质效应的评价方法也逐 步被重视。20世纪90年代，美国临床病理学会针对临床化学 的基质效应和准确度评估召开会议。由于当时众多实验室使 用处理过的校准品进行日常检测工作，该会议便围绕其中产生 的基质效应，对仪器和试剂厂商包括实验室提出验证要求。其 后为了解决强生干片分析仪所使用的聚乙酸酯片基的基质效 应问题，美国国家临床实验室标准委员会出台了EP14-P文 件，对基质效应的评价有了规范。目前，该文件已更新为EP14-A3,针对处理后样本的互通性评价。 在这方面国内起步较晚，于2011年底我国发布的卫生行业标准中有了《基质效应与互通性评价指南》这一标准。在该 指南中对基质效应及其相关术语有了明确的规定，并且给出了 针对基质效应评价的实验方法。 《基质效应与互通性评价指南》的实验方法同EP14-A2中所给出的基本相同，将实验制备样品与至少20个新鲜临床样 品随机穿插排列，分别使用评估方法与比对方法进行检测。对 所有样品重复测定3批，每批每个样品测定一次，每批测定前 都需要校准。最佳实验方法是评估方法与比对方同步进行，如不能实现也应当在最佳环境下储存测定样品，并且尽快进行 测定。 《基质效应与互通性评价指南》与EP14-A2文件在数据分 析方法上有一定区别，但两者主要都根据美国临床实验室标准 委员会文件EP6针对定量测定方法的线性评估的统计方法[8]。运用多项式回归分析[9]，以Y轴作为评估方法的结果、X轴作为比对方法的结果，判断是否成立二项式或其以上的多 项式。制作直线回归，如处理样品的检测结果在95%的分布 范围之内，则表示处理过样品在方法学比较中与新鲜患者样品 间没有显著差异。以上方法可判定评估方法是否存在基质效 应，并判断正向或负向基质效应。 3互通性及基质效应的消除 纯品制备校准品依旧是现阶段普遍运用的方法，因此，为了应对基质效应带来的问题，研究者在不断研究如何消除基质 效应。当然，最佳的方案即使用血样基质进行检测，但其成本 过高，很难推广，在这过程中研究者发现了互通性。 所谓互通性也被称为互换性，是指一个物质的能力，以显 示患者标本的检测间性质是可比较的。而通过“互换性”得到 了消除基质效应的方法[1°]。 由于比对方法与评估方法之间存在一定关系，研究者认为 基质效应即可如干扰一般，被当作一个误差来进行修正。由此 衍生出目前较为常用的消除基质效应的方法。将评估方法与 参考方法进行比较可得一个转换数量因子，它应与患者血清在 方法间的转换因子一致。得到转换因子修正基质效应后，再次 进行评价，如所有检测结果都能在95%的分布范围内，则说明 基质效应已被消除[11]。 但这一方法在近些年的研究中被认为有缺陷，即是对于 “互换性”这一概念的问题。有越来越多的文献提出了 ：处理过 样品与天然新鲜样品间的不可互换性[12]。基质效应是由于物 理及化学的不同性所导致的复杂问题，被简单地当作误差来处 理，利用数学关系来消除这一 “误差”是过于粗糙的做法。因此，关于利用互换性消除基质效应这一课题，目前仍是处于存 疑的阶段。 参考文献 [1]张传宝，闫颖，周伟燕，等.基质效应与互通性评估指南
气相色谱分析农药残留的基质效应及其解决方法
2008年1月J a n u a r y 2008 色谱 C h i n e s e J o u r n a l o f C h r o m a t o g r a p h y V o l .26N o .1 98～104 收稿日期:2007-07-18 第一作者:贺利民,副研究员.E -ma i l :l i m i n o k h e @s c a u .e d u .c n . 通讯联系人:曾振灵.T e l :(020)85284896,E -m a i l :z l z e n g @s c a u .e d u .c n . 基金项目:农业行业标准制定项目(070106-69)及华南农业大学校长基金(2007B 003)资助项目. 气相色谱分析农药残留的基质效应及其解决方法 贺利民, 刘祥国, 曾振灵 (农业部畜禽产品质量监督检验测试中心(广州)华南农业大学兽医学院,广东广州510642) 摘要:对于相同浓度的农药,其在基质溶液中的色谱响应会比其在纯溶剂中的响应高。通过减少热不稳定农药的分解,以及屏蔽进样口的活性位点而减少极性农药在活性位点的吸附或分解,基质效应可增加从进样口传输到色 谱柱中的农药残留量。各种进样方式和基质净化方法都可以减少但不能完全消除基质效应;基质匹配校准法和分析保护剂法是避免基质效应最有效的方法;在实际检测中,所采用的消除或补偿基质效应的方法应考虑减少仪器系统的维护。本文概述了农药残留分析检测中的基质效应及其解决方法。 关键词:气相色谱;农药残留;基质效应;解决方法中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000-8713(2008)01-0098-07 栏目类别:专论与综述 S o l u t i o n s t om a t r i x -i n d u c e dr e s p o n s ee n h a n c e m e n t i n p e s t i c i d er e s i d u e a n a l y s i s b yg a s c h r o m a t o g r a p h y H EL i m i n ,L I UX i a n g g u o ,Z E N GZ h e n l i n g (T e s t i n g C e n t e r o f A n i ma l a n d P o u l t r y P r o d u c t s Q u a l i t yC o n t r o l I n s p e c t i o n(G u a n g z h o u )o f M i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e ,C o l l e g e o f V e t e r i n a r yM e d i c i n e ,S o u t h C h i n aA g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,G u a n g z h o u 510642,C h i n a ) A b s t r a c t :T h e s a m p l e m a t r i xc a nc a u s ea ne n h a n c e m e n t i nt h e o b s e r v e dc h r o m a t o g r a p h i c r e -s p o n s e f o r p e s t i c i d e r e s i d u e s i n a m a t r i x e x t r a c t c o m p a r e d w i t h t h e s a m e c o n c e n t r a t i o n i n a m a -t r i x -f r e e s o l u t i o n .T h e m a t r i x i n c r e a s e s t h e t r a n s f e r o f p e s t i c i d e s f r o m t h e h o t v a p o r i z i n g i n j e c -t o r s b y r e d u c i n g t h e t h e r m a l s t r e s s f o r l a b i l e c o m p o u n d s a n db y m a s k i n g t h e a c t i v e s i t e s i n t h e i n j e c t o r r e s p o n s i b l e f o r t h e a d s o r p t i o no r d e c o m p o s i t i o no f p o l a r p e s t i c i d e s .T h e u s e o f d i f f e r -e n t i n j e c t o r t y p e s a n dm a t r i x s i m p l i f i c a t i o n p r o c e d u r e s c a n r e d u c e m a t r i x -i n d u c e d e n h a n c e m e n t b u t d on o t e l i m i n a t e i t .T h e m o s t e f f e c t i v e s t r a t e g y i s t o u s e m a t r i x -m a t c h e d c a l i b r a t i o ns t a n d -a r d s o r a n a l y t e p r o t e c t a n t s w h i c he q u a l i z et h e r e s p o n s ee n h a n c e m e n t f o r c a l i b r a t i o ns t a n d a r d s a n d s a m p l e e x t r a c t s .F r o m a p r a c t i c a l p o i n t o f v i e w ,i t i s i m p o r t a n t t h a t t h e m e t h o du s e dt o c o r r e c t f o r m a t r i x -i n d u c e de n h a n c e m e n t i s c o m p a t i b l e w i t hl o w s y s t e m m a i n t e n a n c e .T h e d i f -f e r e n t a p p r o a c h e s f o r c o r r e c t i n gm a t r i x -i n d u c e de n h a n c e m e n t f o r c a l i b r a t i o ni np e s t i c i d er e s i -d u e a n a l y s i s a r e d i s c u s s e d a n dc o m p a r e d i n t h i s r e v i e w .K e y w o r d s : g a s c h r o m a t o g r a p h y (G C );p e s t i c i d e r e s i d u e ;m a t r i x -i n d u c e dr e s p o n s e e n h a n c e -m e n t ;s o l u t i o n s 在20世纪90年代,人们就发现在用气相色谱分析有机磷农药时,无论是采用填充柱还是毛细管柱,检测信号的强度与试样基质的特性都非常相关。E r n e y 等 [1] 首先成功地解释了这种现象。他致力于 含脂高的食品(如黄油、牛奶、植物油等)中农药残留检测的固相萃取净化技术研究 [2,3] 。从脂肪基质 中有效地将农药残留分离提取出来,使进样口和色谱柱免受难挥发物和后流出物的影响是十分重要 的,而固相萃取技术可以显著地减少基质干扰成分,因而非常适合这种应用,但基质效应依然存在。在农药残留检测中,食品检验实验室通常采取开始进几针空白基质标准溶液,以获得重现性好的响应值,在随后的分析过程中,采取纯溶剂标准溶液与样品溶液交替进样,标准溶液的响应将缓慢而非常显著的增加。用纯溶剂标准溶液计算,有些农药的空白 基质加标回收率可能比理论值高几倍,有些农药却
临床检验方法学评价
临床检验方法学评价 目前，临床实验室中所使用的检验方法，多为常规分析方法，一般使用商品试剂，基本上可以满足临床检验的要求。由于作为常规分析方法的商品试剂种类繁多，其检验结果的质量也不相同，因此，临床实验室在建立新的检验方法时，应对该方法的基本性能进行评价，以掌握方法的特征，判断其能否满足使用要求。在选择方法并对其进行评价时，可主要考虑以下几个方面： 检验结果的可溯源性 检验结果的准确性，是临床医生对疾病进行诊断和治疗的重要依据。在临床实验室中如何确保检验结果的准确，是每个检验人员必须关心的问题。通常，在检验过程中使用可溯源性校准品是保证检验结果准确性的前提，而参加室间质评价活动，可以发现实验室结果准确性的偏倚。 检验方法学分类包括：决定性方法（definitive method ）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法；参考方法（reference method ）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法；常规方法（routine method ）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。 标准物质又称参考物质（reference material ），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，用以校准仪器设备、
评价测量方法，或给其它物质赋值。标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度。“标准物质证书“是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质（certified reference material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序确定，使可溯源至准确复现的表示该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。 一级标准物质（primary reference material ）：稳定、均一，采用高度准确、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国内最高水平的有证标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如：人血清无机成分分析标准物质（GBW09135 ）和血清胆固醇标准物质（GBW 09138 ）。 二级标准物质（secondary reference material ）：用一级标准物质校准，参考方法定值。如：红细胞微粒标准物质—GBW （E ）090001 、胆红素标准物质—GBW （ E ）090002 、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质—GBW （E ）090004 和纯化血红蛋白标准物质—GBW （E ）090011 。 校准物（calipator ）：用二级标准物质校准，常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。 质控物（control material ）：具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质控物，其瓶间变异必须小于监测系统预期的变异，其常规检测应有助于确
室间质量评价结果分析及整改
室间质量评价结果分析及整改 一、临床化学：1 、方法监测项目为钾、钠、氯、钙、磷、血糖、尿素、尿酸、肌酐、总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯、总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、淀粉酶、肌酸激酶及胆固醇,共20个项目。 2 结果我院使用临床化学标本批号为，我院开展并提供的六项数据血糖3、56为（预期检测结果为3、65），白蛋白为 26、3（预期检测结果为 23、2），胆固醇为2、3（预期检测结果为2、2），甘油三酯为0、84（预期检测结果为0、71），丙氨酸氨基转移酶为38（预期检测结果为36），天门冬氨酸氨基转移酶为32（预期检测结果为 31、8）。3不合格原因分析能力比对检验(PT)不合格数最多的项目白蛋白（Alb），原因为质控物的基质效应和测定方法的固有特征所导致的；其他项目不合格的原因是由于这些项目都是使用电极法测定,由于电极法检测原理特性而导致的。 2、临床尿液质评：1 、方法监测项目为PH值、比重、蛋白、葡萄糖、隐血、酮体、胆红素、亚硝酸盐、尿胆原、白细胞、维生素C，共11个项目。2 结果我院使用临床尿液标本批号为，我院提供的数据为PH值5、0（预期检测结果为5、6）、比重1、010（预期检测结果为1、021）、蛋白阴性（预期检测结果
为+）、葡萄糖阴性（预期检测结果为++）、隐血阴性（预期检测结果为+++）、酮体+（预期检测结果为+++）、胆红素+++（预期检测结果为++）、亚硝酸盐阴性（预期检测结果为+）、尿胆原阴性（预期检测结果为++）、白细胞阴性（预期检测结果为阴性）、维生素C为0（预期检测结果为++）。3不合格原因分析经推断认为，我院尿液分析仪存在设备老化，误差较大的情况。临床化学检验及临床尿液室间质量评价情况整改报告根据济宁市临床检验中心反馈的《xx年度检验医学室间评价第一次质评结果》，我院认真查找不合格原因，依据查找出的原因，做出了以下几点改进措施： 1、加强对医护人员的培训，要求检验科室的工作人员均熟练掌握相关知识，使工作人员能够提高对标本质量影响因素的防范意识。 2、要求医护人员在进行标本采集前，向患者传达医嘱，详细介绍标本采集的各项要求，如：标本的量、采集的方法，提醒患者采样前切忌服用任何会对检验结果有影响的药物或食物，要求患者务必要使用检验科提供的容器采集标本，并使用正确的方法进行采样，尽可能降低标本被污染的几率。女性患者在进行尿液采样时，医护人员应确定患者不处于经期，可在条件允许的情况下，要求患者清洗外阴后，再进行尿液标本的采集。 3、建立健全的样本送检制度。建立健全的样本采集、送检管理制度并严格执行。要求检验科工作人员务必遵守相关制度，
基质效应(matrix effect)
基质效应（matrix effect） 化学分析中，基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性。例如，溶液的离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响和干扰被称为基质效应（matrix effect）。 什么是基质效应？ 基质是指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性。 目前最常用的去除基质效应的方法是，通过已知分析物浓度的标准样品，同时尽可能保持样品中基质不变，建立一个校正曲线（calibration curve）。固体样品同样有很强的基质效应，对其校正也尤为重要。 对于复杂的或者未知组分基质的影响，可以采用标准添加法（standard addition method）。在这一方法中，需要测量和记录样品的响应值。进一步加入少量的标准溶液，再次记录样品的响应值。理想地说来，标准添加应该增加分析物的浓度1.5到3倍，同时几次添加的溶液也应该保持一致。使用的标准样品的体积应该尽可能小，尽量降低过程中对基质的影响。评价方法 较简单的采用相对响应值法A：在纯溶剂中农药的响应值B：样品基质中添加的相同含量农药响应值
基质效应Matrix Effect (%)=B/A×100 比较复杂的标准曲线测定法配制3组标准曲线。第1组用有机溶剂配制成含系列浓度待测组分和内标的标准曲线，可以做5个重复。第2组标准曲线是将5种不同来源或不同品种的的空白样品经提取后加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后制得。第3组标准曲线采用与第2组相同的空白样品在提取前加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后再经提取后制得。 通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。第1组测定结果可评价整个系统的重复性。第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。对第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因样品来源不同而产生的 共同影响。 稀释样品时稀释物不对为何有基质效应？ 我们在稀释样品时要考虑到基质效应的影响，稀释必须在适当的基质中进行，对于大多数测定而言，适当的基质就是零校准品，如果分析物稀释基质效应中所含成分浓度不正确，稀释回收率就不能对它们进行准确的测定，因为它们稀释后会与Bing agent形成新的平衡
基质效应的评估
ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 中华人民共和国卫生行业标准 XX/T XXXXX—XXXX 基质效应的评估 （本稿完成日期：2010.6.10 Evaluation of Matrix Effects 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会发布
目次 前言................................................................................ II 引言............................................................................... III 1 范围 (1) 2 规范性引用文件 (1) 3 术语和定义 (1) 4 评估原理 (2) 5 试验方法 (2) 5.1 材料 (2) 5.2 步骤 (3) 5.3 数据分析 (3) 5.4 可能的变异 (5) 附录A（资料性附录）数据分析-酶法肌酐测定试剂盒基质效应评估-直线回归 (6) 附录B（资料性附录）制备样品基质效应评估 (7)
前言 本标准参考NCCLS EP14-A2 基质效应的评估（Evaluation of Matrix Effects）本部分的附录A、附录B为资料性附录。 本部分由卫生部医政司提出。 本部分由卫生部标准委员会下属临床检验标准分委员会归口。 本部分起草单位：卫生部临床检验中心。 本部分主要起草人：张传宝、闫颖、周伟燕、张天娇、赵海舰、陈文祥 本标准由卫生部委托卫生部临检中心负责解释。 本部分于200X年X月首次发布
基质效应的评估
基质效应的评估
————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：
ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 中华人民共和国卫生行业标准 ＸX／T XXXXX—XＸXX 基质效应的评估 Evalｕation oｆＭａtｒix Eｆfects 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 错误!未定义书签。 (本稿完成日期:２0１０.6．10 XXXX-XＸ－XX发布ＸXXX－XX-ＸＸ实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会发布
目次 前言............................................................................... ＩI 引言?III 1 范围?１ 2 规范性引用文件 (1) 3 术语和定义?１ 4 评估原理2? 5 试验方法 (2) ５.1 材料 (2) 5.2 步骤3? 5．3 数据分析3? 5.４可能的变异 (5) 附录Ａ（资料性附录）数据分析-酶法肌酐测定试剂盒基质效应评估-直线回归 ............... ６附录B（资料性附录）制备样品基质效应评估7?
本标准参考NCCLS EP14-A２基质效应的评估(Evaｌuａｔion oｆ Matrｉx Efｆects）本部分的附录A、附录Ｂ为资料性附录。 本部分由卫生部医政司提出。 本部分由卫生部标准委员会下属临床检验标准分委员会归口。 本部分起草单位：卫生部临床检验中心。 本部分主要起草人: 张传宝、闫颖、周伟燕、张天娇、赵海舰、陈文祥 本标准由卫生部委托卫生部临检中心负责解释。 本部分于200X年X月首次发布
液质联用技术中基质效应的评价方法(卓宏)
发布日期20110118 栏目化药药物评价>>临床安全性和有效性评价 标题液质联用技术中基质效应的评价方法 作者王凌王鹏卓宏 部门审评五部 正文内容 1. 前言 在人体生物等效性或临床药代动力学试验中，液质联用（LC/MS，LC/MSn）技术被广泛用于生物样品中药物及其代谢物浓度的检测。液质联用技术具有高灵敏度和高特异性的显著特点，研究者往往会认为采用该技术可以简化或者省去样品的前处理和色谱分离步骤。但由于质谱检测是基于化合物离子化并通过特定的核质比来检测和定量，因此任何干扰待测物离子化的物质都可能影响检测方法的灵敏度和选择性，即引入了基质效应（Matrix Effect，ME）的概念。基质效应是指在样品测试过程中，由待测物以外的其他物质的存在，直接或间接影响待测物响应的现象[1]。由于质谱检测的高选择性，基质效应的影响在色谱图上往往观察不到，即空白基质色谱图表现为一条直线，但这些共流出组分会改变待测物的离子化效率，引起对待测物检测信号的抑制或提高。这些基质成分包含了生物样品中的内源性成分和样品前处理过程中引入的外源性成分。内源性组分包括无机盐或者胆汁中的有机盐、各种有机化合物（糖类、胺类、尿素、类脂类、肽类）和分析目标物的同类物及其代谢物。外源性组分尽管在生物样品中不存在，但同样会产生基质效应，包括处理样品的塑料管中残留的聚合物、离子对试剂、有机酸、缓冲液、SPE柱材料、抗凝管中的抗凝剂如EDTA或肝素锂等[2]。FDA在生物分析方法建立的指导原则中明确提出对于基于LC/MSn的方法，在整个分析过程中需通过适当的方法减少基质效应的影响，从而保证方法的灵敏度和选择性[1]；EMEA在《生物分析方法的验证指导原则（草案）》中更加细化了基质效应的评判标准[3]。 2. 评价方法 目前评价基质效应的方法主要有两种：（1）柱后灌注法（Post-column infusion method）和（2）提取后加入法（Post-extraction spiking method）[4,5]。其中柱后灌注法能直观的显示基质效应对被测物色谱保留时间的影响范围和影响程度，适合在色谱方法筛选过程中评估基质效应的影响情况，为色谱条件的优化提供信息。而提取后加入法不仅能量化绝对基质效应的程度，也能提供相对基质效应的数据，因此广泛运用于方法学验证过程。 2.1 柱后灌注法（Post-column infusion method）[4] 柱后灌注法属于动态分析基质效应的方法，将针泵及液相色谱系统通过T型进样阀与质谱仪相连。将空白样品按待测样品的处理方法提取后，利用待测样品的洗脱条件通过HPLC进行色谱洗脱，同时用针泵将特定浓度的被测物以恒定速度注入，两种溶液一并通过T型进样阀进入质谱仪，进行待测物离子信号强度检测。被测物信号响应的变化将直接反应生物基质对于被测物的影响，同时信号强度随时间的变化关系也有助于色谱条件的优化。
基质效应
基质效应: 化学分析中，基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性。例如，溶液的离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响和干扰被称为基质效应(matrix effect)。 目前最常用的去除基质效应的方法是，通过已知分析物浓度的标准样品，同时尽可能保持样品中基质不变，建立一个校正曲线(calibration curve)。固体样品同样有很强的基质效应，对其校正也尤为重要。 对于复杂的或者未知组分基质的影响，可以采用标准添加法（standard addition method）。在这一方法中，需要测量和记录样品的响应值。进一步加入少量的标准溶液，再次记录样品的响应值。理想地说来，标准添加应该增加分析物的浓度1.5到3倍，同时几次添加的溶液也应该保持一致。使用的标准样品的体积应该尽可能小，尽量降低过程中对基质的影响。 基质效应的评价方法 一种是较简单的采用相对响应值法 A：在纯溶剂中农药的响应值B：样品基质中添加的相同含量农药响应值基质效应Matrix Effect (%)=B/A×100 另一种方法是比较复杂的标准曲线测定法.配制3组标准曲线。 第1组用有机溶剂配制成含系列浓度待测组分和内标的标准曲线，可以做5个重复。 第2组标准曲线是将5种不同来源或不同品种的的空白样品经提取后加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后制得。 第3组标准曲线采用与第2组相同的空白样品在提取前加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后再经提取后制得。 通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。第1组测定结果可评价整个系统的重复性。第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。对第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因样品来源不同而产生的共同影响。
液质联用技术中基质效应的评价方法
液质联用技术中基质效应的评价方法 王凌王鹏卓宏 1. 前言 在人体生物等效性或临床药代动力学试验中，液质联用（LC/MS，LC/MSn）技术被广泛用于生物样品中药物及其代谢物浓度的检测。液质联用技术具有高灵敏度和高特异性的显著特点，研究者往往会认为采用该技术可以简化或者省去样品的前处理和色谱分离步骤。但由于质谱检测是基于化合物离子化并通过特定的核质比来检测和定量，因此任何干扰待测物离子化的物质都可能影响检测方法的灵敏度和选择性，即引入了基质效应（Matrix Effect，ME）的概念。基质效应是指在样品测试过程中，由待测物以外的其他物质的存在，直接或间接影响待测物响应的现象[1]。由于质谱检测的高选择性，基质效应的影响在色谱图上往往观察不到，即空白基质色谱图表现为一条直线，但这些共流出组分会改变待测物的离子化效率，引起对待测物检测信号的抑制或提高。这些基质成分包含了生物样品中的内源性成分和样品前处理过程中引入的外源性成分。内源性组分包括无机盐或者胆汁中的有机盐、各种有机化合物（糖类、胺类、尿素、类脂类、肽类）和分析目标物的同类物及其代谢物。外源性组分尽管在生物样品中不存在，但同样会产生基质效应，包括处理样品的塑料管中残留的聚合物、离子对试剂、有机酸、缓冲液、SPE柱材料、抗凝管中的抗凝剂如EDTA或肝素锂等[2]。FDA在生物分析方法建立的指导原则中明确提出对于基于LC/MSn的方法，在整个分析过程中需通过适当的方法减少基质效应的影响，从而保证方法的灵敏度和选择性[1]；EMEA在《生物分析方法的验证指导原则（草案）》中更加细化了基质效应的评判标准[3]。 2. 评价方法 目前评价基质效应的方法主要有两种：（1）柱后灌注法（Post-column infusion method）和（2）提取后加入法（Post-extraction spiking method）[4,5]。其中柱后灌注法能直观的显示基质效应对被测物色谱保留时间的影响范围和影响程度，适合在色谱方法筛选过程中评估基质效应的影响情况，为色谱条件的优化提供信息。而提取后加入法不仅能量化绝对基质效应的程度，也能提供相对基质效应的数据，因此广泛运用于方法学验证过程。2.1 柱后灌注法（Post-column infusion method）[4] 柱后灌注法属于动态分析基质效应的方法，将针泵及液相色谱系统通过T型进样阀与质谱仪相连。将空白样品按待测样品的处理方法提取后，利用待测样品的洗脱条件通过HPLC进行色谱洗脱，同时用针泵将特定浓度的被测物以恒定速度注入，两种溶液一并通过T型进样阀进入质谱仪，进行待测物离子信号强度检测。被测物信号响应的变化将直接反应生物基质对于被测物的影响，同时信号强度随时间的变化关系也有助于色谱条件的优化。2.2 提取后加入法（Post-extraction spiking method） 提取后加入法在评定LC-MSn基质效应中使用的最多，而且，此法还可用于评价绝对基质效应（absolute ME，基质效应影响分析的程度）和相对基质效应（relative ME，样品间基质效应大小的差异）。 2.2.1 绝对基质效应的评价[5] 利用下述方法制备两组待测样品。 Set 1：将被测物溶于非生物基质的空白溶液，如：配制成甲醇、乙腈等标准溶液。 Set 2：提取空白生物基质，浓缩复溶形成溶液，将被测物加入此溶液中。 将上述Set1和Set2样品引入LC/MSn系统进行分析，获得待测物和内标的信号强度，其中待测物或内标在Set2和Set1中信号强度的比值(Set2/Set1)为绝对基质效应，可以用基质效应因子(matrix factor，MF)来表示，待测物与内标MF的比值称为内标归一化基质效应因子(IS-normalized MF)[3]。绝对基质效应结果主要影响分析方法的准确度。 2.2.2 相对基质效应的评价[3]
基质效应的总结
基质效应的总结 基质效应
基质效应是指检测系统检测样品中的分析物时，处于分析物周围的所有非分析物质对分析物参与反应的影响。产生基质效应的原因与以下四个主要因素的相互作用密切相关:仪器的设计、试剂的组成成分、测试方法的原理、质控材料的组成及处理技术等。通过回收实验可以评估分析方法是否受基质效应的影响，而EP14A文件介绍的方法则是评估经过物理或化学方法处理过的样本在分析过程中是否存在基质效应。 一、克服基质效应的方法 克服基质效应的方法包括下面几种: (1)选择合适的样品预处理方法:常用的样品的处理方法包括蛋白沉淀，液液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)。通常利用LLE或 SPE制备的样品内源性杂质较少，有助于降低绝对基质效应。但样品前处理过程的复杂会降低分析检测的效率，增加污染的风险，并可能带来待测组分的损失，也直接影响待测组分的提取回收率。因此在样品制备方法的选择中要兼顾基质效应和提取回收率两方面的因素，选择合适的样品制备方法。 (2)改变被测物的色谱分离条件:即通过优化色谱分离条件使得内源性杂质与待测物分离。采用反相色谱法分离时，最初流出的主要是基质中的极性成分，而这些极性成分往往是引起基质效应的主要原因。当待测组分的色谱保留时间较短时(<3min)，其受基质效应影响较大。因此，改善色谱分析条件，适当地延长待测组分的保留时间(但要兼顾样品运行时间延长带来的峰展宽、灵敏度下降的问题)，有利于减少基质对测定的影响。 (3)采用性质相近或稳定同位素内标:如果绝对基质效应影响较大，但内标和被测物的绝对基质效应接近，仍可认为方法可行。但需注意的是，如果绝对基质效应太大，通常会造成方法的变异很大。而且当多个分析物同时检测时，由于存在极性差异，即使是同类物的同位素内标也很难抵消基质效应，从而造成定量结果偏差。