SOD活性的测定-邻苯三酚自氧化法

SOD活性的测定-邻苯三酚自氧化法

定义：25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%时所需的SOD量为一个活力单位。

按照GB/T5009.171-2003中邻苯三酚自氧化的方法测定酶活力，

利用邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物。反应开始后先变成黄绿色，几分钟后转为黄色，线性时间维持在3~4min。加入酶液则抑制其自氧化速度，在325nm处测定溶液的

吸光度。酶活性单位采用1mL反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化速

率达50%时的酶定量为一个活力单位。

一、试剂：

1、pH 7.8, 0.05mol/L的磷酸缓冲液：

A液: 称取17.9g Na2HPO4?12H2O于容量瓶中定容至1L；

B液: 称取 7.8g NaH2PO4?2H2O于容量瓶中定容至1L；

取A液91.5mL和B液体8.5mL混匀得到pH 7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液。

2、C液: pH 8.20 ，0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)- 盐酸缓冲液(内含1mmol/L EDTA?2Na)：

称取1.2114gTris和37.2mg EDTA?2Na溶于62.4mL 0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100mL。

3、 0.lmol/L盐酸溶液:量取2.lmL 12mol/L盐酸，蒸馏水定容至250mL。

4、.10mmol/L盐酸溶液:量取10mLO.lmol/L盐酸，蒸馏水定容至l00mL。

5、D液:4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液：

称取邻苯三酚(A.R)56.7mg溶于少量的10mmol/L的盐酸溶液，并定容至100mL。

二、仪器：

1.冷冻离心机

2.水浴锅；

3．电子天平；

4．紫外-可见分光光度计；

5．精密酸度计，精确到0.01pH；

6．10mL比色管；

7．10mL离心管；

8．玻璃乳钵。

三、实验步骤

1．SOD粗酶液的提取

称取叶片1g，置于研钵中研磨，加入3mL 0.05mol/L磷酸缓冲液，加入少量石英砂，继续在冰浴中的研钵内研磨成匀浆，取4mL至离心管中，于4℃10000r/min离心20min，上清液即为SOD粗提液。

2.1 邻苯三酚自氧化速率测定

在25℃左右，于10mL比色管中依次加入C液体2.35mL，磷酸缓冲液2.00mL,D液0.15mL。加入D液后立即混合均匀并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值，二者之差即邻苯三酚自氧化速率ΔA325(min-1)。

2.2 样液抑制邻苯三酚自氧化速率测定

样液抑制邻苯三酚自氧化速率测定按照2.1步骤分别加入一定量样液使抑制邻苯三酚自氧化速率约为1/2ΔA325(min-1)，即ΔA'325(min-1)。

SOD活性测定加样表

式中:

U/mL一SOD酶活力单位;

△A325一邻苯三酚自氧化速率;

△A`325一样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率; V一所加酶液或样液体积，单位为毫升(mL);

D一酶液或样液的稀释倍数;

V1一样液总体积，单位为毫升（mL）；

m一样液质量，单位为克（g）

4.5一反应液总体积，单位为毫升(mL)。

计算结果保留三位有效数字。

邻苯三酚自氧化法简易操作图解-测量SOD活性方法

连苯三酚自氧化法测定·O2-自由基的清除能力简介（适用于：SOD及各种抗氧化剂） 文献来源 [1] Xican Li. Improved Pyrogallol Autoxidation Method: A Reliable and Cheap Superoxide-scavenging Assay Suitable for All Antioxidants. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60:6418-6424. 操作图解 具体方法 1 溶液配制 1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。 1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。 1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA） 40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH 计测量，pH应为7.4。用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。 1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中） 取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。 2 测试液 2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl 缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0。 3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。此时的ΔA为ΔA样。 3 计算公式

05-05-18邻苯三酚改进

邻苯三酚法测定超氧阴离子自由基的清除作用 1. 邻苯三酚自氧化改进： 1.1 试剂的配制 1. pH8.2 50mM Tris-HCl（含EDTA）缓冲液 500mL： 称取 3.028g Tris固体溶于250mL蒸馏水中，溶解后加入0.9542mL浓盐酸，加入0.1gEDTA后定溶到500mL，装入棕色瓶备用。 2. HCl配0.1mM 邻苯三酚： 称取62.22mg邻苯三酚（即焦性没食子酸），溶于5mL10mM HCl（吸取0.0833mL浓盐酸稀释到100mL），吸出100μL溶于10mL同样的HCl中，装入棕色瓶备用（室温一般保存3天）。 1.2 试验方法 按下表取50mM Tris-HCl缓冲液、蒸馏水、多糖，混匀后在25℃水浴保温20分钟，取出后立即加入25℃预热过0.1mM 邻苯三酚（用10mM HCl配），迅速摇匀后倒入比色杯（1cm），325nm下测OD，30秒记录一次数据。实验重复三次。抑制率AI（％）＝（A对照－A样品）×100%/A对照。 举例： 反应体系Tris-HCl (ml) 蒸馏水或者 10mMHCl(ml) 多糖(ml) 邻苯三酚 (ml) 空白 2 1 0 0 对照 2 0.6 0 0.4 处理组1 2 0.5 0.1 0.4 处理组2 2 0.4 0.2 0.4 处理组3 2 0.3 0.3 0.4 处理组4 2 0.2 0.4 0.4 处理组5 2 0.1 0.5 0.4 注意事项： 1．多糖母液浓度最好选在1~2mg/ml 2．邻苯三酚一般现用现配，放置一般放3天， 3．A325nm/分的读数一般为0.7~1之间，实验系统才比较准确， 4．用蒸馏水代替HCl配制邻苯三酚是可以的，只是放置时间不能太长 2. 试验结果 2.1 虎乃菇水提多糖对超氧阴离子自由基的清除作用 从图21和表26实验结果看，虎乃菇水提多糖对超氧阴离子自由基有清除作用，且清除作用的大小随多糖浓度增加而增加，表现出一定的线性关系。分别加入100μL、200μL、300μL、400μL、500μL多糖后，对超氧阴离子的清除率分别为14.167%、34.286%、54.762%、70.592%、85.714%。从方差分析可知，虎乃菇水提多糖的清除作用的影响则十分显著。

抗氧化性方法

取0.2mL 甲醇，加入0.3 mL样品溶液（浓度50-800ug/mL ,甲醇配制），混匀，加入2.5mL 75uM DPPH（甲醇溶解）溶液，室温放置30min ,于517nm处测吸光值。 清除率=[A0-（A-A b）/A0]×100% A0：不加入样品，DPPH吸光值（对照） A：样品和DPPH吸光值 A b：样品，不加DPPH吸光值 2 O2-· PMS吩嗪硫酸甲酯 NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NBT氯化硝基四氮唑蓝 0.1mL 样品溶液，加入1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)---78uM NADH, 1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --10uM PMS ，1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --50uM NBT, 25min保温5 min后于560 nm 处吸 光值。清除率=（1-A 样品/A 对照 ）×100%。 3 邻苯三酚自氧化 0.1mL 样品溶液，加入2.8mL 0.05M Tris-HCl (pH 8.0)---1mM EDTA,加入0.2mL 6mM 邻苯三酚。室温迅速振摇，于325nm处每30s 测吸光值至4min。 清除率=（1-样品斜率/对照斜率）×100% 4 FRAP reagent： 10体积300 mmol/L pH3.6醋酸缓冲液,1体积10 mmol/L TPTZ---40 mmol/L HCl 溶液，1体积20mmol/L FeCl3. 1.5mL 新配制FRAP reagent加热至37℃,于593 nm处测空白吸光值。然后加入50uL 样品溶液和150uL去离子水。8min后测吸光值。 FRAP值=A样品-A空白 2.1 清除羟基自由基（HPLC法） 2.1.1色谱条件 色谱柱：Angilent HC-C18柱（(4.6×250mm，5um); 流动相：甲醇：0.1% H3PO4=30:70;流速： 1ml/min;柱温：35℃；紫外检测波长：254nm;进样量：20ul。

间苯三酚

间苯三酚 中文名称：间苯三酚 英文名称：m-trihydroxybenzene 中文名称2：1,3,5-三羟基苯 英文名称2：1,3,5-trihydroxybenzene CAS No.：6099-90-7 结构式： 分子式：C6H6O3.2H2O 分子量：162.14 理化特性 外观与性状：白色或淡黄色结晶粉末。 熔点(℃)：218-221 oC 沸点(℃)：升华 相对密度(水=1)： 1.46 燃烧热(kJ/mol)：2657.2 溶解性：（略溶于水）微溶于水，溶于乙醇、乙醚、苯。 主要用途：用作生物试剂、染料，及用于检验香草素、木质素，测定糖醛、多缩戊糖等。 健康危害：急性中毒：能引起呕吐、体温低、无力、共济失调、紫绀、昏迷、窒息，甚至死亡。长期接触可出现贫血、黄疸等；对皮肤有致敏性，引起湿疹。

燃爆危险：本品可燃，有毒，具致敏性。 危险特性：遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体。与强氧化剂接触可发生化学反应。 药理毒理：间苯三酚能直接作用于胃肠道和泌尿生殖道平滑肌，是亲肌性非阿托品非罂粟碱类纯平滑肌解痉药。与其它平滑肌解痉药相比，其特点是不具有抗胆碱作用，在解除平滑肌痉挛的同时，不会产生一系列抗胆碱样副作用，不会引起低血压、心率加快、心率失常等症状，对心血管功能没有影响。动物药理试验显示，它只作用于痉挛平滑肌，对正常平滑肌影响极小。各种毒性试验结果证明本品是非常安全的药物。亚急性毒性和慢性长期毒性试验表明该药对动物生长、重要器官的宏观和微观组织学、血液和生化指数没有不良影响；特殊毒性试验研究表明，间苯三酚没有致畸、致突变（致癌）性，所有试验结果显示本品没有任何毒性，用药极为安全。 适应症：消化系统和胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛；急性痉挛性尿道、膀胱、肾绞痛；妇科痉挛性疼痛；怀孕期间子宫收缩的辅助治疗。 避免与吗啡及其衍生物类药同用，因这类药有致痉作用。 药物剂型有：注射用无菌粉末和口崩片 较常用的合成路线： 1、以2,4,6-三硝基甲苯(TNT)为原料,Na2Cr2O7氧化,铁粉还原,然后水解得间苯三酚： 2、以1,3,5-三异丙基苯为原料,经氧化生成过氧化物,再加热分解得到均苯三酚:

SOD活力测定法(连苯三酚自氧化法)-操作图解

SOD活力测定法（连苯三酚自氧化法）简介 （适用于：SOD及各种抗氧化剂） 操作图解 具体方法 1 溶液配制 1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。 1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。 1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA） 40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH 计测量，pH应为7.4。用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。 1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中） 取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。 2 测试液 2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl 缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0。 3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。此时的ΔA为ΔA样。 3 计算公式 清除率＝(ΔA0-ΔA样)/ΔA0 *100

邻苯三酚法测定SOD酶活

邻苯三酚法测定SOD酶活—修改的Marklund方法 1、本方法检出限1.17U/ml. 2、定义：25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%时所需要的SOD酶量为一个酶活力单位。 3、原理：在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化生成红橘酚，同时生成O2-，连苯三酚的 自氧化速率与O2-的浓度有关。SOD能催化O2-发生歧化反应生成H2O2和O2，从而抑制连苯三酚的自氧化。样品对连苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映样品中的SOD的含量。 4、试剂 4.1 A液：pH 8.20、0.1mol/l Tris-HCl缓冲溶液（内含1mmol/L Na2EDTA）。称取1.2114gTris和37.2mg Na2EDTA溶于62.4ml的0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100ml。 4.2 B液：4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚（A.R）56.7mg 溶于少量10mmol/l 盐酸溶液，并定容至100ml。 4.3 10mmol/l 盐酸溶液。 4.4 0.200 mg/ml 超氧化物歧化酶。 4.5 蒸馏水。 5、样品制备样品测定前需离心，取上清液测定。 6、分析步骤 6.1 邻苯三酚自氧化速率测定：在25℃左右，于10ml比色管中依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.00ml，B液0.15ml，加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值，二者之差即邻苯三酚自氧化速率△A325（min-1），本实验确定△A325（min-1）为0.060。 6.2 样液和SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率测定按以上步骤分别加入一定量样液或酶液使抑制率约为1/2 △A325（min-1），即△A’325（min-1）为0.030。 SOD活性测定加样程序见表1。 表1 SOD活性测定加样表 7、结果 式中：U/ml——SOD酶活力单位； △A325——邻苯三酚自氧化速率； △A’325——样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率； V——所加酶液或样液体积，单位为毫升（mL）； D——酶液或样液的稀释倍数； 4.5——反应液总体积，单位为毫升（mL）。 计算结果保留三位有效数字。 8、精确性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

邻苯三酚自氧化法

1、目的 采用邻苯三酚自氧化法测定大蒜不同部位的SOD酶活性 2、原理 根据国际酶学委员会规定，酶的比活性（specific activity）用每mg蛋白质具有的酶活性单位（U∕mg蛋白）来表示。因此，测定样品的比活性必须测定：每mL样品中的蛋白质mg数（m g∕mL）;每ml 样品中的酶活性单位数（U∕mL）。酶的纯度越高酶的活性也就越高。 SOD酶活性测定方法很多，如邻苯三酚自氧化法、肾上腺素自氧化法、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法等。在一般情况下，SOD酶活性只能应用间接活性测定法，本实验采用邻苯三酚自氧化法测定。 利用邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物。反应开始后先变成黄绿色，几分钟后转为黄色，线性时间维持在3~4min。加入酶液则抑制其自氧化速度，在325nm[1]处测定溶液的吸光度。酶活性单位采用1mL反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%时的酶定量为一个活力单位。邻苯三酚自氧化速率随其浓度的升高而增加[1,2]。 3、仪器、试剂和材料 1)仪器 UV-260紫外分光光度计（或其他型号），比色杯，样品管，自氧化管 2)试剂和材料

a)取培育的大蒜等量的须根，茎，叶； b)所用试剂邻苯三酚、聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)、 EDTA-2Na、NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、 30%H2O2、三(羟甲基)氨基甲烷、浓HCl,均为分析提纯。 c)Tris-HCl 缓冲液 4、操作步骤 4.1SOD粗酶液的提取 称取鲜重3.00 g的样品,加入少量预冷的pH=7.8的磷酸缓冲液(含0.1 mmol/L的EDTA、质量浓度为4 %的聚乙烯吡咯酮烷),冰浴研磨.将匀浆液于4 000 r/min下离心20 min.取其上清液,于60℃水浴15 min,待其冷却后,于4 000 r/min离心20 min,弃去沉淀,将上清液定容到10 mL容量瓶,4℃冰箱中保存备用[3,4]。 4.2SOD酶活性测定 采用邻苯三酚自氧化法测定[5,6].取两支试管按表1的试剂用量,将缓冲液加入试管并在25℃保温25 min,加入定量预热的邻苯三酚,倾入1 cm比色杯中,迅速摇匀,在波长325 nm处每隔30 s测定吸光度一次,测定3 min内每分钟光吸收值的变化,要求自养化速率控制在每分钟吸光度的变化速率在0.070(±0.002)左右(可增减邻苯三酚的加入量,以控制吸收值)。 SOD酶活测定方法与邻苯三酚自氧化测定相同.样品管取代自氧化管,样品管测定时先加入预热的待测酶液,再加邻苯三酚.其余步骤同邻苯三酚自氧化速率的测定,控制加酶后每分钟吸光度的变化速率在0.035(±0.001)左右.然后计算SOD酶活。

间苯三酚理化性质

间苯三酚 白色或淡黄色结晶粉末。微溶于水，溶于乙醇、乙醚、苯等有机溶剂。在沸点升华并分解，商品常有2分子结晶水。用于化学分析。由间苯二酚经碱熔法或用三硝基甲苯为原料制得。 间苯三酚结构式 中文 名： 间苯三酚 外文 名： m-trihydroxybenzene 别1,3,5-三羟基苯 相对分子质量： 126.11 化学品类别： 有机物--苯的衍生物 管制类不管制

名： 分子 式： C6H6O3 型： 储存： 密封保存 物理性质 外观与性状：白色或淡黄色结晶粉末。 熔点(℃)：117 相对密度（水=1）：1.46 沸点(℃)：升华 分子式：C6H6O3 分子量：126.11 燃烧热(kJ/mol)：2657.2 溶解性：微溶于水，溶于乙醇、乙醚、苯。[1]

危险性概述

健康危害：急性中毒：能引起呕吐、体温低、无力、共济失调、紫绀、昏迷、窒息，甚至死亡。长期接触可出现贫血、黄疸等；对皮肤有致敏性，引起湿疹。 燃爆危险：该品可燃，有毒，具致敏性。[1] 急救措施 皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗至少15分钟。就医。 眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。就医。[1]

消防措施 危险特性：遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体。与强氧化剂接触可发生化学反应。 有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳。 灭火方法：采用雾状水、抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳、砂土灭火。[1] 泄漏应急处理 应急处理：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。 小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。也可以用大量水冲洗，洗水稀释后放入废水系统。

邻苯三酚比色法测定土壤多酚氧化酶活性

邻苯三酚比色法测定土壤多酚氧化酶活性 试剂配制 (1)1%邻苯三酚溶液 (2)乙醚。(3)0．5N盐酸。(4)重铬酸钾标准溶液——o．75g重铬酸钾溶于1升0.5N HCl(相当于50mI醚中含5mg紫色没食子素)。 (5)pH4．5柠檬酸——磷酸缓冲液。标收曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用o．5N HCI稀释成各种不同浓度。定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。以光密度位为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。 2。投作步骤取1g土样(过o．25mm筛)，置于50ml三角瓶中，然后注入10ml 1％邻苯三酚溶液，将瓶内含物摇荡后放在30度恒温掐小培养2h。取出后加4mlpH 4．5柠檬酸——磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，用力摇荡数次，萃取30min。最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。比色时用波长为430nm的滤光片。为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用元水乙醇洗涤比色液槽一次。为了消除土壤中原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正 没食于酚的纯度，需设无基质的土壤和无土壤的基质作对照。在 无基质的土壤的对照中，用水代替基质进行培养。 3．活性表示紫色没食子索的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。 多酚氧化的活性，以2h后1g土壤中紫色没食子素的毫克 数表示。 我不知道找个“紫色没食子素”是什么意思？是不是要找个试剂啊？我问了几个老师，他们都没有听说过这个试剂。我的有的药品冯老师本来说他那有，可是我做的时候去找了，缺了几个，王老师说想办法买了，已经给李老师说了，买了后做，这几天榆林大风降温，那个移栽没有办法进行，上面红颜色的我不知道怎么做了，萃取不知道是萃取什么，看不太懂，还有测那个中性磷酸酶时的酚溶液是苯酚加水就可以了么？我这几天在图书馆查了很多资料，可是都没有啥结果（ 配制方法：在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，

体外抗氧化实验操作步骤,包括配制试剂

3.2.5 体外抗氧化实验 发酵液的预处理：将摇瓶结束的发酵液装入无菌的10ml 离心管里，在天平上仔细平衡到10g ，在4℃，10000rpm ，离心10min ，小心转移上清液到新管子里标记备用。 （1）对超氧阴离子的清除作用 利用邻苯三酚自氧化体系测定样品对超氧阴离子的清除作用。取50 mmol·L -1的Tris-HCI 缓冲液3 mL (pH=8.2，含有2 mmol·L -1的Na 2EDTA)，加入l mL 待检样品，于25℃保温10 min ，然后加入25 ℃预温的5 mmol·L -1的邻苯三酚0.3 mL(预先用10 mmol·L -1的盐酸配制)，精确反应4 min ，用0.5 mL 浓盐酸终止反应，测定其在320 nm 下的吸光度。以10 mmol·L -1的盐酸作为空白调零，按如下公式计算清除率： () %100A A A -A ?-=对照样品空白样品对照清除率 (1) 式中A 对照为未加待检样品的邻苯三酚反应体系的吸光度（用1mL 10 mmol·L -1的盐酸替代样品）；A 样品为加入待检样品后的邻苯三酚反应体系的吸光 度；A 样品空白为加入待检样品后的无邻苯三酚的反应体系的吸光度（用0.3mL 10 mmol·L -1的盐酸替代邻苯三酚溶液）。 注意事项： 1、 所用的两个比色皿杯子必须是石英的，上面会写着“Q ”,或“S ”， 不得使用玻璃的，玻璃比色皿要么什么都不写，要么写着 “G ”。 2、 测定前要用100g 砝码和天平标定所用的移液枪插上枪头后是否精 准，要求误差不超过5‰，不是5％。 3、 测定大量数据前，使用者先配制10g/L 的Vc ，做三个平行测定，精 准度达到5%以内再开始正确的测定。 4、 测定时由于每个人有使用习惯和误差，中间不得换人换枪。 （2）对DPPH ·的清除作用 DPPH·溶液的配制：准确称取47 mg DPPH·，用无水乙醇溶解并定容至100 mL ，避光保存(0～4℃)，使用时稀释至120 μmol·L -1。

邻苯三酚自氧化法测定sod活性及含量

邻苯三酚自氧化法测定sod活性及含量 一、实验原理: 邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min 的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过测定光 吸收即可求出SOD的酶活性。 二、实验试剂： 大宝sod蜜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根 这个液体貌似是不能研磨的，而且本身就是酶，正常的生物体内的酶不都是可溶的？研磨是为了破碎细胞的。我觉得应该是通过加水——打碎胶体，把抗氧化剂全都搞到水中（这个拜托查下）——分液——乙醇-氯仿沉淀（用来鉴别是带Mn还是CuZn）（不知道会不会有另外两种抗氧化剂干扰）——透析（去离子电泳用） 乙醇-氯仿的浓度比 酶的保存问题：测一下大宝pH应该可以作为参考，但是这个酶种类太多了，要点就是pH至少不能小于6，关于最适合pH是否也要测量？还是说我们是为了测量大宝里面SOD的活性所以就按照大宝的pH保存。 还有一个小小的想法就是。这部分是1次做完还是两次做完？

EDTA二钠：几乎不溶于乙醇、乙醚，其水溶液pH值约为5.3。用于络合金属离子和分离金属。干扰物，但是没有氧化性 三、实验步骤： （1）SOD提取： 取大宝sod蜜加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录) （2）除杂蛋白： 提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积） （3）SOD酶的沉淀分离： 剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。6000rpm离心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL备用，其余量取体积。 （4）粗酶液活性测定： 提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。 加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸光值。

抗氧化实验方法

附录 抗衰老实验 实验一：对超氧阴离子清除作用的测定（邻苯三酚自氧化法）一实验原理： 超氧阴离子自由基产生体系模型:邻苯三酚在弱碱性(Tris-HCl 缓冲液，pH8.2)溶液中自身氧化分解产生超氧阴离子的反应为： 在一定条件下，随着反应的进行，生成的超氧阴离子在体系中会不断积累，导致反应液的吸光度(299nm波长)在反应开始后5min之内随时间变化而线性增大。因此在该时间内，于299nm处测定含被测物反应液的吸光度随时间的变化率, 并与空白液比较便可得出被测物抑制 超氧阴离子积累的作用能力。抑制率可根据下式计算： 式中F O和F X分别表示空白液和被测液的吸光度随时间的变化率 二实验仪器和试剂： 1 主要仪器： 紫外可见分光光度计，恒温水浴锅，10mL试管,分析天平。 2 主要试剂： 待测液，弱碱性(Tris-HCl)缓冲液，邻苯三酚溶液，HCL溶液。三试剂配制： 1、Tris碱溶液：6.05g定容于500mL水中，形成0.1mol/L的Tris 碱溶液。 2、0.1mol/L HCL溶液：1.0mL浓盐酸（36%，11.6mol/L）加入91.4mL

水中。 3、Tris-HCL缓冲液（0.05mlo/L,pH8.2）：50mL的0.1mol/L的Tris 碱溶液与22.9mL的0.1mol/L HCL溶液混合，定容至100mL。 4、25mmol/L 邻苯三酚溶液（焦性没食子酸）：将0.0315g邻苯三 酚定容于10mL水中。现配现用，4h内有效。 四实验方法： 1、取0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml于试管中，置于 25℃水浴中预热20min； 2、分别加入1ml不同浓度的试样和0.4mL,25mmol/L的邻苯三酚溶 液（2.5 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl配制)0.4 ml），混匀后于25℃水浴中反应5min； 3、加入8mol/L 盐酸1.0ml终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比， 空白组以0.1 ml蒸馏水代替样品试液，在299nm处测定吸光度，计算清除率。空白对照组以1ml试样溶剂代替样品，每个处理均做三个重复。 五数据处理: 超氧阴离子自由基清除率(%)=100%(A1-A2)/A1， 其中A1为空白的平均吸光度，A2为试样的平均吸光度。

邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性

邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的研究 摘要：目前超氧化物歧化酶(SOD)活性测定结果混乱，为提高测定结果的可比性, 对邻苯三酚自氧化法测定SOD 活性的方法进行了研究，就该活力测定体系中缓冲溶液的介质组成、浓度、pH 及所含的EDTA 量等因素对测定结果的影 响进行了探讨，根据实验结果，提出了新的改良方法. 超氧化物歧化酶(SOD)是一种特殊的金属酶, 它能催化超氧阴离子自由基(O2—)发生歧化反应, 从而能有效清除机体内超氧阴离子自由基(O2—), 是生物体重要的细胞防御系统之一, 具有防御氧毒、抗辐射、防衰老以及防治肿瘤和抗炎等药用功效[1]，超氧化物歧化酶(SOD)这一独特的生理功能使其在医药领域具有良好的应用前景,激起了人们广泛的研究热情. 自1969 年McCord 等首次发现具有活性的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase简称SOD) 以来，众多测定SOD的方法已逐步建立起来，其中以化学法最为常用. 经典的邻苯三酚法是Marklund等[2]于1974 年发表的一种通过比色测定SOD 的简便方法. 此后，邻苯三酚法在国内外得以广泛应用. 与其他方法相比，邻苯三酚自氧化法具有操作简便，快速，试剂便宜且用量小，重复性好等优点；但文献报道的邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的测定条件各不相同，这就造成了测定结果的混乱和缺乏可比性. 为此我们对邻苯三酚自氧化法测定SOD 活性的方法进行了研究，就该测活体系中缓冲溶液的介质组成、浓度、pH 及所含的EDTA 量等因素对测定结果的影响进行了探讨. 1 原理 在碱性条件下, 邻苯三酚迅速氧化释放出超氧化物阴离子，生成有色中间产物，吸光度随之增加，使吸光度值与反应时间呈良好的线性关系. SOD 加入邻苯三酚自氧化反应体系后，催化超氧化物阴离子生成过氧化氢，使有色中间产物的生成受阻，导致吸光值下降，邻苯三酚自氧化速率降低，可作为测定SOD 活性的理论依据. 2 材料与方法（1） 2.1 试剂和主要仪器 一.试剂 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH8.2，内含2mmol/L EDTA)：0.2mol/L Tris(内含4mmol/L EDTA)100ml 与0.2mol/L HCl44.76ml 混合，加双蒸水至200ml，调pH8.2±0.01;邻苯三酚(45mmol/L)：以10mmol/LHCl 配制成6mmol/L 溶液，存放于冰箱备用; 所用试剂均为国产分析纯; 实验用水为自制双蒸水; 二、仪器: 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂) 操作方法 2.2 方法 2.2.1 邻苯三酚自氧化速率的测定 在试管中按表1加入缓冲液和双蒸水，于25℃恒温20min后加入25℃预热过的邻苯三酚(对照管用10mmol/L盐酸代替)，迅速摇匀，立即倾入比色杯中，在波长325nm 处每30s 测定一次吸光值A0 2.2.2 SOD 活力的测定 SOD 活性测定法按上述表1 操作，加入邻苯三酚前，先加入一定量SOD，并减少同体积双蒸水，其它操作均与上述2.2.1 相同，所测吸光度为 方法2： 一、试剂及其配制:

抗氧化性的测定‘

1.邻苯三酚自氧化法 参考张强和汪建斌例发表的文献。其主要原理是：邻苯三酚在碱性条件下，能迅 速自氧化释放出02-，生成带色的中间产物。反应开始后，反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿色，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。邻苯三酚自氧化过程的初始阶段，中间物的积累在滞留30s-55s后，与时间成线性关系，一般线性关系维持在4min的范围内。经实验证明，中间物在320nm波长处有强烈光吸收。当有类似超氧化物歧化酶的抗氧化活性物质存在时，能催化02-与H+结合生成02和 H202，从而阻止了中间产物的积累。因此，通过计算就可求出抗氧化活性。 试剂的配制 (1)Tris-HCl-EDTA缓冲液：Tris 1.2114g，EDTA 116.9mg，加80mL双蒸水，用 0．2mol／L HCl调pH=8．2士O．1，最后用双蒸水定容到100mL。 (2)lOmmol／L的HCl：用0．1mol／L的标准HCl配制成lOmmol／L的HCl。 (3)10mmol／L的邻苯三酚(PR)：取31．5275mgPR用10mmol／L的HCl溶解定容到 25mL。 测定方法：按表2．2所示在试管中加入Tris-HCl缓冲液和超纯水，并将邻苯三酚一起在25℃下水浴孵育10min后，将邻苯三酚加入试管迅速摇匀并倾入比色杯中，0.5min后在320nm波长扫描4min，求出邻苯三酚自氧化速率(0.6A／min)，用抗氧化肽替换超纯水测定抗氧化肽的超氧阴离子淬灭能力。 2 油脂POV值的测定采用传统的碘量法。具体做法是：吸取2．5 ml油脂(精确称其质量)于碘瓶中，加30 ml氯仿一冰乙酸(2：3)混合液溶解样品，加1．00 ml饱和KI溶液，立即加塞摇匀，放置暗处5min，然后取出样品，加水100 ml，加1％淀粉指示剂1 ml(后期可增至1．5 rnl)，以0．002 mol／L硫代硫酸钠标准溶液滴定，至无色为终点。以试剂空白消耗的硫代硫酸钠为参比，按下式计算POV值： POV(%)=126.9*C*(V1-V2)*100/(1000*m) 式中：V1一样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(m1)； V2一试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(m1)，实际测得为0.00mL C一硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol／L)，实际为0．002 mol／L； m一样品质量(g)； 126．9一碘的摩尔质量(g/mo1)。 将数据带入，可得简化的计算公式：POV(％)=0.02538*V/m

改良后的邻苯三酚自氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性

改良后的邻苯三酚自氧化法 A.1试剂的制配 A.1.1A液：pH8.200.1mol/l三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸缓冲溶液（内含1mmol/L EDTA·2Na）。 称取1.2114g Tris和37.2mg EDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100ml。 A.1.2B液：4.5mmol/l邻苯三酚盐酸溶液。 称取邻苯三酚（A.R）56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液，待邻苯三酚完 全溶解后，用10mmol/L盐酸溶液定容至100ml。 A.1.310mmol/l盐酸溶液。 A.1.4供试品溶液： 取1ml于500ml容量瓶中，用蒸馏水定容到500ml。即得供试液。 A.1.5蒸馏水：双重石英蒸馏水。 A.2仪器 紫外-可见分光光度仪，精密酸度计（精密度0.01pH），试管数支，100μl 移液枪，1000μl移液枪，10ml移液枪。 A.3方法 A.3.1调零在25℃左右，取2支试管，分别依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.15ml；在325nm波长条件下，调零。 A.3.2邻苯三酚自氧化速率测定△A325在25℃，取2支试管（A管和B管），A 管中依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.00ml；B管中分别加入B液0.15ml，把A 管倒入B管中，迅速摇匀，倾入比色皿，以A液2.35ml+蒸馏水2.15ml作为空 白对照，在325nm波长下每隔30s记录一次A值，共测6次，要求自氧化速率控制在0.060（±0.003）OD/min。 A.3.3酶活测定在25℃，在试管中加入A液2.35ml，蒸馏水1.8ml，在25℃ 的水浴中预热5min,然后加入Vml的样液，再加入0.15mlB液，迅速摇匀，倾入比色皿，以A液2.35ml+蒸馏水2.15ml作为空白对照，在325nm波长下每隔30s 记录一次A值，共测6次。在此条件下，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率50%的酶量定为1个活力单位，即△A′325=1/2△A325。 A.4结果计算

苯直接氧化合成苯酚的研究进展及几种方法的比较

苯直接氧化合成苯酚的研究进展及几种方法的比较 0942032102 郭峻嘉 摘要综述了由苯直接氧化合成苯酚的国内外研究进展。其主要方法有N 2 O 氧化法、H 2O 2 氧化法、O 2 氧化法，并对各种方法的原理及催化剂的应用进行了简 单的介绍。最后还通过分析各种方法的工业化前景对它们进行了比较。 关键词苯苯酚氧化催化剂一氧化二氮过氧化氢氧气 苯酚是一种重要的、基本的有机 化工原料，在工业上具有非常广泛的 应用。近几年来，世界苯酚的需求量 持续增长，而国内生产力还不能满足 要求，需要大量进口。 目前，苯酚在工业生产上的工艺 有异丙苯法、甲苯-苯甲酸法、磺化 法等。其中异丙苯法是苯酚生产最主 要的，也是比较成熟的方法，世界上 近90%的苯酚都是通过异丙苯法生产 的。但是该工艺需要三步化学反应， 流程长，消耗战略性资源丙烯，生产 成本受副产物丙酮的价格的影响，且 生产过程中有含酚废水排出，污染环 境。直接催化氧化苯合成苯酚是一条 绿色的、原子经济性高的合成路线， 受到国内外研究者的广泛关注，一直 是苯酚合成工艺的研发热点。 在热力学上，苯具有高度的稳定 性，难以进行加成和氧化，不利于[OH] 或[O]的亲核反应，易发生深度反应 生成二酚或醌。因此，将羟基引入苯 环合成苯酚被认为是合成化学中最 难解决的问题之一。解决的方法和思 路就是认识苯环上羟基化过程的规 律，探索苯环上C-H键活化和氧化的 方法，从而提高反应过程的原子经济 性和资源利用率，减轻环境污染。 多年来，国内外致力于研究和探 索高选择性地直接催化苯合成苯酚 的方法和途径，并取得很大的进展。 苯直接催化氧化制苯酚的方法主要 有N 2O氧化法、H 2 O 2 氧化法和O 2 氧化 法。1 N 2 O氧化法 以N 2 O作为氧化剂，在催化剂作用下，将苯在气相中直接氧化生成苯酚是在1983年由日本学者IwamotoM 首先提出的。这是一条典型的清洁合 成路线，副产物主要是氮气；而且N 2 O 是生产己内酰胺的副产物，也是变废为宝的合成工艺。 此方法所采用的催化剂主要有两类：金属氧化物和ZSM-5分子筛。 1.1金属氧化物催化剂 IwamotoM等分别将过渡金V,Mo 和W的氧化物担载在硅胶、α-Al 2 O 3 、γ-Al2O3、MgO和TiO2等载体上作为催化剂，将苯直接氧化成苯酚。当以 V 2 O 5 /SO 2 作为催化剂时，苯的转化率为10%，苯酚的选择性为71%。IwamotoM还发现向反应体系中引入适量的水有利于提高苯酚的选择性。原因可能是加入水后，加快了苯酚从催化剂上的扩散速度，同时阻止苯酚的进一步氧化。 1.2ZSM-5分子筛催化剂 1988年，SuzuskiE发现酸性的 ZMS-5分子筛对N 2 O氧化合成苯酚反应有较高的活性和选择性，在573-673 K的反应条件下,苯酚的产率为8% -16%,选择性接近100%。在相同的条件下,酸性的ZSM-5分子筛引入Na后,苯的转化率显著降低,甚至完全失去活性。这些结果说明沸石 分子筛催化剂中的酸性位是活性中

SOD活性测定(连苯三酚自氧化法)

SOD(超氧化物歧化酶)活性测定 连苯三酚自氧化法 (邓碧玉，袁勤生，李文杰．改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法[J]．生物化学与生物物理进展．1991，18(2)：163) 一、原理 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)普遍存在动、植物的体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下面的反应： o 2.-H+ +HO 222+ O 反应产物H 2O 2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料 植物器官(花瓣、叶片等) (二)仪器设备 冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL 、20μL 、 100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子 (三)试剂 (1) A ：Tris(三羟甲基氨基甲烷)0.2mol/L (121.14)：取24.228g 定溶至1000mL (2) B ：HCl (分析纯36-38％) 12当量：即12mol/L 取8.3mol/L 定溶至1000mL (3) 250mL A +200mL B 定溶至1000ml PH=8.3 三、试验步骤 (一)酶液的制备 (1)称取植物材料0.2g ，加50mmo·L -1的Tris-HCl 缓冲液(pH=8.3)1mL(分三次加) (2)2~4℃下研磨，12000r/m 离心15min ，制备粗酶液(每个样品设三个重复) (3)在25℃保温20min 的8mL50mmol/L(PH=8.3)Tris-Hcl 缓冲液中加入25℃预热的10μL 50mmol/L 的连苯三酚(对照管用10mmol/L 的Hcl 代替)先加酶液再加连苯三酚 (二)酶活力的测定 酶活性单位的定义：在1mL 反应液中每分钟抑制连苯三酚自氧化速率达50﹪的酶量

抗氧化实验

抗氧化实验：, 1，熊果酸对超氧阴离子自由基（O-2·）的清除实验 本实验采用邻苯三酚自氧化法，即采用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子，生成有色中间产物，吸光度随之增加，使吸光度值与反应时间呈良好的线性关系。但是加入抗氧化性物质后会对其产生清除作用，从而对其进行抗氧化性能的评价。取试管，加入不同浓度的熊果酸溶液（5mg/10mL）各50、100、200uL以及200uL Vc 进行阳性对照，同时分别取相同体积的甲醇做对照。在试管中分别加入50mmol/L，pH8.3K2HPO4-KH2PO4缓冲液4.5mL.在25℃水浴锅保温10min，加入预热至25℃的50mmol/L邻苯三酚的盐酸溶液10uL迅速摇匀，倾入1cm的比色杯中，以缓冲液调零，在325nm处，每隔30s测吸光度1次，连续测定15min。 2熊果酸对羟自由基（·OH）的清除实验 (1) 本实验采用Feton体系法产生羟自由基，即:H2O2+Fe2+ OH +H2O+Fe3+。然后在体系中加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收，可以利用该吸光度值来表示羟自由基的含量。取不同的试管分别加入0.5mg/mL熊果酸标准品各50、100、200uL以及200uL甘露醇作为阳性对照。再分别加入1mL9mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL9mmol/L FeSO4，1mL8.8mmol/L H2O2, 用双蒸水补齐至5mL，充分摇匀，迅速倒入1cm的比色杯中，于510nm处测定其吸光度值，以甲醇调零。可以根据吸光度值判断样品对羟自由基的清除作用。 （2）羟基自由基清除能力的测定。 量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml和1.0ml样品溶液于试管中，用蒸馏水补齐至1ml，依次加入0.15mol/L FeSO41ml、2mmol/L水杨酸1ml，最后加6mmol/L H2O2 1ml启动反应，37℃反应1h，测510nm的吸光度。不加样品的阴性对照 管吸光值为A0，样品管的吸光值为A，清除率（%）=（A0-A）×100/A0。 3,DPPH自由基清除能力的测定 量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml样品溶液于试管中，用蒸馏水补齐至1ml，依次加入6.5×10-4mol/L DPPH溶液2.5ml、70%乙醇0.5ml，摇匀，避光30min后于517nm下测吸光度值。不加样品的为阴性对照吸光值为A0，样品的吸光值为A。清除率（%）=（A0-A）×100/A0。 4，还有那个事清除H2O2的，我查不到实验方法。你看看吧，谢啦啊

超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(邻苯三酚法)产品技术要求赛诺普

胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法） 适用范围：用于体外定量测定人体血清或血浆中胃蛋白酶原Ⅰ的含量。 1.1 试剂盒包装规格 试剂1：1×15mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×30mL，试剂2：2×10mL； 试剂1：2×54mL，试剂2：2×18mL；试剂1：3×45mL，试剂2：3×15mL； 试剂1：4×54mL，试剂2：4×18mL；试剂1：2×300mL，试剂2：1×200mL； 试剂1：1×9L，试剂2：1×3L。 校准品（选配）：5×0.5mL(五水平)，5×1mL(五水平)。 质控品（选配）：1×0.5mL，1×1mL。 1.2 试剂盒主要组成成分

注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。 2.1 外观 液体双试剂：试剂1无色澄清液体；试剂2白色悬浊液。 校准品：无色至淡黄色液体。 质控品：无色至淡黄色液体。 2.2 净含量 净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 在37℃、570 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于1.8。 2.4 分析灵敏度 测定浓度在50ng/mL附近的样本时，吸光度变化值应>0.01。 2.5 线性 在（10，200）ng/mL范围内，线性相关系数r不小于0.990。在（70，200）ng/mL 区间内线性相对偏差不大于±10%；在（10，70]ng/mL区间内线性绝对偏差不大于± 7ng/mL。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于8%。

2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。 2.8 准确度 与已上市产品进行比对试验，在（10，200）ng/mL范围内，与比对系统的相关系数r 不小于0.975；在（70，200）ng/mL区间内与比对系统的相对偏差应不大于±15%，（10，70] ng/mL区间内与比对系统的绝对偏差应不大于±10.5ng/mL。 2.9 质控品赋值有效性 测定结果在靶值范围内。 2.10 校准品溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程及测量不确定度。校准品溯源至企业工作校准品。 2.11 稳定性 效期稳定性：试剂盒在2℃～8℃储存，有效期为12个月，取失效期的试剂盒进行检测，试验结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8、2.9要求。