枸杞多糖检测方法科研申报

2010年研究生《科研项目申报技巧与途径》选修课考试题

学号： 200930130439 姓名：王畅所属班级：英语六班

所属专业：药物分析入学年份： 2009 导师姓名：於洪建

一、课题名称：

枸杞多糖质量标准研究

二、关键词：

枸杞多糖;指纹图谱;高效液相色谱法;柱前衍生化

三、中文摘要：

枸杞多糖的单糖组成测定是控制枸杞多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要环节。本实验因单糖存在互变异构体、差向异构体、结构相似等特征 ,而且往往同一待测样品 ,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等 ,可能含有许多类型的单糖。所以采用 PMP柱前衍生化反相高效液相色谱 (HPLC)法,通过梯度洗脱建立了9种常见单糖的分离模式做对照 ,并将95%纯度的枸杞多糖水解用同样的衍生化成功地分离枸杞多糖的单糖组成分,分离效果好，具有良好的重复性。结果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,摩尔比为2.05∶1.20∶1∶0.90∶0.85∶0.38 。该 HPLC方法是简单，快速，灵敏，方便的分析技术 ,可用于枸杞多糖的质量控制。

四、课题立项依据：

1.枸杞多糖单糖组分复杂

枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）简称LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽糖类，是天然存在的大分子物质[1-3]。因为组成多糖的单糖品种繁多，而且即使只有一种单糖组成的多糖，因其连接方式的不同并可能有分支，也有可能得到结构很复杂的多糖，所以多糖结构分析比蛋白质或核酸要复杂得多。此外，由于多糖结构的微观不均一性，或分子量发散，使多糖结构分析很难得出完全准确的结构式。多糖结构的分析包括单糖组成[4-5]，单糖间的连接方式、糖苷键构型、分支位点及分支数目，最终确定其

重复结构单元。多糖结构分析的手段分为物理手段、化学降解法、酶降解和免疫化学法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化学降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖结构的复杂性，目前还没有一种方法可以单独完成其结构分析，必须将多种方法结合使用[6-8]。仪器分析法是在化学分析法的基础上更进一步地了解和研究多糖的结构特性。与化学分析法相比，仪器分析法具有快速、准确、灵敏和操作方便等优点，是糖链分析不可缺少的手段。目前，在此方面应用较多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及电泳等。这些现代分析技术的出现和发展以及仪器的联用，大大促进了糖链结构研究工作的发展。制定统一的质量标准需要结合枸杞多糖本身的实际特点才能得以实施，从而保护消费者的权益。

2.多糖的生物活性

近年来，在对免疫物质以及新药物资源的研究过程中，人们发现糖类参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能。枸杞多糖及其缀合物对多种危害人类健康的疾病，如免疫紊乱、肝炎、高血压、癌症、糖尿病、血栓等，都具有显著的疗效[9-10],其中最引人注目的是它们的免疫修饰和抗肿瘤活性。多糖还具有抗辐射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究与开发已日益引人注目。3.枸杞多糖的研究意义

目前糖生物学及糖工程己成为继基因工程和蛋白质工程之后的第三大生工程，是当今最前沿的生物学科之一[11-13]。由于多糖多种多样的生物活性以及在保健和疾病治疗领域的广泛使用，使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃，成为天然药物、生物化学和生命科学等的研究热点。到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来[14]。

4.国内外枸杞多糖的研究现状

我国近年来对枸杞多糖药物活性已有广泛报道，例如：报道枸杞多糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遗传损伤、抗肿瘤、抗放射、抗突变、等药物活性，但弄清结构说明构效关系尚少见，由于产地的不同全国范围内还没有报道过枸杞多糖质量标准研究，特别是枸杞多糖的HPLC指纹图谱。

中草药作为药物开发及理论研究，我国已落后于日本和韩国。国际上对糖类的研究日新月异，内容包括糖生物学和糖工程等，并且相继多次召开了有关“糖生物学和糖工程”的专题会议。1995年3月，亚洲分子生物学组织(AMBO)还在日本举办了“糖

生物学和糖工程”培训班[15]。欧盟在1994－1998年的研究计划中启动了“欧洲糖研究与开发平台”，旨在协调欧洲的糖研究与开发，强化在糖的研究成果转化成商品与美国和日本竞争的能力。目前，日本、美国及欧盟十分重视糖类的研究[16]，且在糖的研究与开发处于领先地位，并且提出各自的重大科研计划。

5.多糖的应用前景

植物源多糖类化合物由于其独特功能和低毒性，在临床中显示出越来越广阔的前景，值得指出的是我国对于糖的质量标准控制研究尚无重大计划。纵观近十年，有关多糖的研究日益增多。到目前为止，虽然只有云芝多糖、香菇糖、猪苓多糖、裂褶多糖和茯苓多糖等少数应用于临床，但它们在抗凝血、抗肿瘤、降血脂、抗突变、抗衰老和抗病毒等疑难病症的治疗方面已显示了诱人的前景。有关专家预言“21世纪将是多糖的时代”预示着多糖研究的广阔前景[17]。作为重要的植物化学成分，多糖已成为现在科学家研究的重要领域，不断受到人们的关注。多糖正逐渐成为当今新药开发的重要方向之一，但是质量是保证安全使用的根本。

6.指纹图谱的应用前景

通过建立相应指纹图谱来制定质量标准，不仅是时代发展的必然，也是我国中药走向世界的关键。目前中药指纹图谱还处于方法学研究及数据积累阶段，中药指纹图谱的应用也仅限于生产中的质量控制，因此建立中药指纹图谱，应考虑其可操作性。随着分析技术的快速发展，为中药指纹图谱的研究、应用及完善提供了技术

保证。今后应该利用计算机容量大和速度快的特点，开发与分析仪器相配套的解

读指纹图谱的分析软件，使结果分析更科学合理，在中药指纹图谱数据积累的基

础上建立信息数据库，使中药质量管理更加科学化。在此基础上进行化学成分与

药效相关性的研究，使中药的应用更加安全、有效。中药指纹图谱全面地反映了

中药所含化学成分的复杂性和相关性。随着标准、规范的中药指纹图谱的实施和

应用，将会有力地推动中药产业现代化和国际化的进程[18]。

参考文献：

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《枸杞多糖》行业标准简要编制说明

《枸杞多糖》行业标准简要编制说明 一、工作简况 （一）任务来源 根据工业和信息化部行业标准制修订计划（工信厅科[2014]114号），《枸杞多糖》列入2014年轻工行业标准计划，项目编号2014-0881T-QB，由全国食品发酵标准化中心提出并归口。主要起草单位：略；主要起草人：略。 （二）简要起草过程 标准任务下达后，中国食品发酵工业研究院针对制定枸杞多糖行业标准的具体工作进行了认真研究，确定了总体工作方案，于2015年2月发文征集起草单位并于同年5月组建了标准起草工作组，同时开展了相关技术资料的查询及收集。在上述工作的基础上，2015年6月，中国食品发酵工业研究院将拟定的标准草稿下发至各起草工作组成员。根据意见反馈情况，提出标准文本讨论一稿，并于2015年10月在北京召开标准研讨会，对标准中的技术指标、检测方法等内容进行了认真研究和讨论，会后形成标准文本讨论二稿。2015年12月～2016年1月完成样品征集、分发、测定及数据收集汇总工作。2015年4月，经进一步讨论沟通，起草组对标准中涉及的关键性技术内容达成共识，形成标准行业征求意见稿。 二、指标依据和对主要条款的说明 1 标准属性 本标准为推荐性标准 2 制标原则 a)确保食品安全； b)具有科学性、先进性和可操作性； c)结合国情和产品特点； d)与相关标准法规协调一致； e)促进行业健康发展与技术进步。 3 主要条款的说明 本标准规定了枸杞多糖的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存，包括上述各部分内容以及范围、规范性引用文件等七个部分。各部分说明如下 （1）范围：描述了本标准的主要技术内容和适用情况。 （2）规范性引用文件：描述了本标准中引用的标准文件。 （3）术语和定义：对枸杞多糖进行了定义 （4）感官要求：根据本产品的实际性状，确定了本产品的感官指标描述。

枸杞多糖分离纯化及性质研究

第25卷　第3期 2008年6月 黑龙江大学自然科学学报JOURNAL OF NAT URAL SC I E NCE OF HE I L ONGJ I A NG UN I V ERSI TY Vol 125No 13 June,2008 枸杞多糖分离纯化及性质研究 张　晶1,2,　韩喜江1,　李艳波2 (1.哈尔滨工业大学化学系,哈尔滨150001;2.哈尔滨学院生化学院,哈尔滨150080) 摘　要:对东北枸杞中提取的多糖,通过DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱和Sephadex G -100 凝胶色谱柱进行了分离纯化,通过凝胶色谱和液相色谱对其纯度进行了鉴定,并通过红外光谱初步分析了其基团构成。 关键词:枸杞多糖;分离纯化;纯度鉴定 中图分类号:R28412,TS244文献标志码:A 文章编号:1001-7011(2008)03-0377-04 收稿日期:2008-01-16 作者简介:张　晶(1973-),女,实验师,硕士,主要研究方向:应用化学、食品化学 0　引　言 枸杞是一种食药两用植物,具有多种药理作用和生理功能。枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分之一,其中有关枸杞多糖的化学、药理与临床研究十分瞩目,已有不少研究报道枸杞多糖具有增强免疫力、抗癌、防衰 老、抗疲劳、降血压、降血糖、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用[1-2]。鉴于枸杞多糖具有多种药理作用和生理 功能,因此,对其提取分离方法及纯化的研究显得尤为重要[3]。本文重点对牡丹江地区枸杞多糖的分离纯 化及组成结构作了初步探讨。 1　实验材料和方法 111　材料与仪器 牡丹江地区枸杞子;其它试剂均为分析纯。自动部分收集器,台式干燥箱,紫外分光光度计,Perkin -El 2mer 红外光谱仪,Aglilent 1100液相色谱仪等。 112　枸杞多糖提取 称取100g 枸杞子60℃烘干,放置干燥器18h 后粉碎,称取10g 干燥的枸杞粉,用氯仿-甲醇(2∶1)300mL,用索氏回流装置于60℃回流脱脂。残渣风干后,加入适量水,在100℃,料水比1∶15条件下水浴提取4h,抽滤,将滤液蒸发浓缩为原体积的1/4后,将浓缩液滴入3倍体积的95%乙醇中,静置,抽滤,固形物 分别用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤,水浴加热干燥得枸杞粗多糖[4]。 113　枸杞多糖分离纯化 11311　DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱层析 将分离提取的枸杞粗多糖110g 溶于水,上DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱,梯度洗脱法洗脱各级分,洗 脱液分别为蒸馏水、011mo1?L -1,0125mol ?L -1和015mol ?L -1NaCl,011mol ?L -1Na OH 各100mL,流 速为30滴每分钟,自动部分收集器收集洗脱液,将收集到的样品溶液分别在280nm 波长下比色,然后用硫 酸一蒽酮法测定总糖含量。以试管数目为横坐标,以吸光度为纵坐标作DE AE -cellul ose (OH -)色谱柱洗脱 曲线图。分别合并各主峰溶液,浓缩,流水透析,冷冻干燥,得LBP -1,LBP -2,LBP -3和LBP -4.11312　Sephadex G -100凝胶色谱柱。 收集多糖含量最多的组分,进行凝胶色谱分离。流速为013mL ?m in -1,每支试管接收3mL 洗脱液,硫 酸一蒽酮法检测多糖洗脱状况。以洗脱管数为横坐标,吸光值为纵坐标作流出曲线,合并主峰溶液,浓缩,流水透析,冷冻干燥。

枸杞子中多糖含量的测定(1)

枸杞子中多糖含量的测定 柳婷，胡浩斌 (陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000) 摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。 关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计 Detection of Polysaccharide in Lycium barbarum Liu Ting, Hu Hao-Bin (College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility. Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry 枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。表面鲜红色或暗红色，顶端有小凸起状的花柱痕，基部有白色的果梗痕，果皮柔韧，皱缩，果肉肉质，柔润而有粘性，种子多数，类肾形，无臭，味甜，微酸，具有滋肾补肝、润肺明目等功能。 近年来，人们对枸杞子的药理作用进行了深人研究，发现枸杞子能增强机体免疫力[3]、抗肿瘤、抗辐射[4]、抗疲劳[5]、防衰老、增加造血功能等。临床医学研究还表明，枸杞子对糖尿病[6]、高血压[7]、视神经萎缩、肾炎、肝炎[8]等有显著疗效。对于枸杞子的上述功能的重要作用因子，一般认为与枸杞子中存在的枸杞多糖有关。因此，开始研究枸杞多糖，测定枸杞多糖的含量就显的非常重要。 鉴于枸杞多糖的分离纯化[9]困难,有关结构性质方面的研究报道甚少,枸杞多糖的生理活性,还必需从分离纯化、结构特征及药理作用3方面展开深入研究。这样,医学临床应用与保健型枸杞饮品[10]的开发才有坚实的理论基础。本试验主要完成枸杞多糖的分离与提纯，并对

枸杞子多糖含量的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告 篇一：实验三多糖含量的测定 实验三多糖含量的测定 一、实验目的 1、分光光度法测多糖的原理和方法 2、用officeexcel作标准曲线 二、仪器与试剂 1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平 2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o 3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管 三、步骤 1、标准曲线的绘制 ①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。 ②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml

分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。 ③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。 空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸 吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b ④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。 四结果 ①计算浓度（待测液） 本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程 y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为 0.025*25=0.625mg/ml.。②实验主要步骤（记录） 步骤记录： Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、 0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其

枸杞多糖的生化和降血糖活性讲解

枸杞多糖的生化分析和降血糖活性 摘要：本实验研究了枸杞多糖的纯化，表性特征和降血糖活性。通过超滤膜分离获得水溶性多糖（LBP），并通过DEAE纤维素柱和Sephadex的色谱法进一步纯化G-150得到LBP3a和LBP3b。分析表明LBP3b的平均分子量（Mw）为4.92kDa。单糖组成分析显示，LBP3b由摩尔比为5.52：5.11：28.06：1.00：1.70的甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖和木糖组成。并通过UV，FTIR，NMR和SEM研究了LBP3b的初步结构特征。体外细胞实验显示，LBP3b以剂量依赖的方式显著抑制葡萄糖的吸收。研究表明LBP3b具有作为抗糖尿病药物的潜在用途。 1.引言 糖尿病（DM）是指具有异常高水平的血糖的慢性代谢病，已经成为世界上主要的健康问题。它是由胰岛素分泌缺乏或器官对胰岛素的反应减弱引起的。包括1型和2型在内的DM在全球发病率急剧增加，到2030年估计超过4亿。许多口服降糖药，如双胍类和磺酰脲类可用于治疗糖尿病，但这些药物是化学合成的，缺乏多剂量方案，且高成本，具有不良副作用和毒性。因此，研究和发现新型更安全和更有效的替代品是至关重要的，其中传统的食用和药用资源已成为研究低血糖活性的焦点]。 枸杞，属于茄科，是中国著名的草药，已使用了2300多年。目前，枸杞受欢迎的功能食品已被广泛使用，其具有很大功效，如减少血糖和血清脂质，滋养眼睛，肾脏和肝脏，抗辐射，提高免疫力，抗衰老，抗癌，抗疲劳，增强血细胞生成，改善男性不育。据报道，枸杞果干中有胡萝卜素，氨基酸，微量矿物质，维生素，脂肪酸，多糖和甜菜碱与健康相关的生物活性成分。 在枸杞的这些化学成分中，最好研究的组分是水溶性的多糖（LBP）估计占干果的5-8％。许多关于药理学和光化学的研究已经证明LBP是以上的生物活性的主要成分之一[15-17]。然而，由于LBP的结构复杂性，不同的提取和纯化方法得到的LBP具有不同组分，结构和功能。而每种LBP的结构和功能从未进行过全面和深入的讨论。

枸杞多糖提取论文

第一章综述 1前言 1.1枸杞 1.1.1枸杞的自然属性 枸杞(Lycium barbarum)别名苟起子、甜菜子、地骨子等，是茄科植物枸杞(Lycium chinense Miller)的成熟果实。是我国重要的药用植物资源，是我国受原产地保护的药食两用的药材和传统出口创汇产品。早在2000多年前，人们已经开始了对枸杞的利用。《诗经》记载“陟彼北山，言采其杞”。宋?苏轼《小圃?五咏》赞枸杞曰“根茎与花实，收拾无弃物”。《本草纲目》中记：“久服杞子，坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”。《本草汇言》记“枸杞能使气可充，血可补，阳可生，阴可长，火可降，风湿可去，有十全之妙焉”。《保寿堂方》载“春枸杞叶，名天精草；夏采花，名长生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。根据《郭案驼种树书》记载，大约在1200多年前，我国就开始栽种枸杞了。此外，《神农本草经》、《食疗本草》、《本草纲目》和《本草备要》等古书中都有关于枸杞的记载。 枸杞具有滋补肝肾,益精明目的作用。作为我国常用中药，枸杞被广泛应用于临床，主治肝肾阴亏，头晕目眩，腰膝酸软，消渴遗精，目昏多泪，虚劳咳嗽。枸杞子又作为“药食同源”的植物性平补保健食品，被广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分，其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖，其次是枸杞色素和枸杞籽油。 枸杞的生长状况 枸杞属约有80个种，多数分布在南、北美洲。以美国的亚利桑娜州和阿根廷形成两个分布中心，南美洲种类最多。欧亚大陆约有10个种。约在17世纪中叶引到法国，后来在欧洲，地中海国家，韩国以及北美洲国家都有栽种。我国有7个种和3个变种，多数分布在西北和华北。目前我国人工栽培的构祀有宁夏枸杞及北方枸杞。枸杞原产我国北方，河北、内蒙古、山西、陕西、甘肃、宁夏、新疆和青海等省都有野生，而中心分布区域在甘肃河西走廊、青海柴达木盆地以及青海至山西的黄河沿岸地带。常生于土层深厚的沟岸、山坡、田埂和宅旁。据统计我国枸杞种植区面积已经由1996年的45万亩迅速增加到100万亩，年产量达3000万公斤以上，其中新疆、宁夏、内蒙古、河北等省地区的枸杞种植面积和产量居全国前列。有500多年栽培历史的宁夏，所产枸杞以粒大、皮薄、肉厚、营养丰富、药用价值高而享誉国内外，远销港澳、东南亚、西欧及北美等地区和国家。2001年，宁夏省枸杞种植面积达25万亩，占全国枸杞种植面积的17%，年产量达115.5万公斤，全区枸杞干果产量和出口量分别占全

枸杞多糖含量的准确检测

申请科研资助项目申报书 项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测 申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 联系者姓名： 联系者电话： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 二00八年二月

一、申请单位的基本情况： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。 为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。 二、课题研究的目的及意义： 国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。 北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行

枸杞多糖测定

枸杞多糖测定 稀释至刻度，备用。 2.6 样品中多糖的测定 吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml）。 2.7 结果计算 多糖含量%=p?D?F?100 m 式中：p：样液葡萄糖浓度（μg/ml）； D：样品液稀释因素； F：换算因素； m：样品质量（μg）。 测量结果代入得：多糖含量%=12.51% 3 实验讨论 （1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以

丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。 （3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。 （4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。 （5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。 (6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。

紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量

紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量 摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。 关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖 枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。 1 材料与方法 1.1 原理 多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。 1.2 材料与仪器 TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。3种枸杞子分别购于药店、药材集市等，经药品检验所侯惠婵主任药师鉴定，分别编号为枸杞1、枸杞2、枸杞3。 1.3 标准曲线的绘制

多糖检测方法

多糖的检测方法 关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。 一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。这种方法是科研级的多糖测定。 另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。 粗多糖测定 多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。一般说来，比色法的优点是灵敏度高，样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。 滴定法 1.样品预处理 取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水 浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。 2.样品水解 将离心管中醇析物用50ml热水（温度＞90℃)少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中回流2h，冷却，先用40％的氢氧化钠（约15ml）粗调Ph值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于PH计上调整pH在6.8～7.2之间。将中和的酸解液移置至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀,过滤，滤液供滴定用。 3.碱性酒石酸钾钠铜溶液标定 3.1精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及2 粒玻璃珠，用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中。 3.2将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，取其平均值（V1）。 3.3样品溶液预测和测定。 3.3.1 样品溶液的预测 精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，精密加入10ml蒸馏水及2粒玻璃珠，控制在2分钟内加热至沸，保持溶液在微沸状态下以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品水解液液进行滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录葡萄糖标准溶液消耗体积。 3.3.2样品溶液的测定 精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，精密加入蒸馏水10ml 及玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品水解液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用样品水解液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，得出平均消耗体积（V2）。 最后计算结果乘以0.9，此为葡萄糖换算成粗多糖的细数。

枸杞多糖的测定

枸杞多糖的测定 一、实验原理： 用80%乙醇溶液提取以除去单糖，低聚糖等干扰成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度计法于适当波长处测其多糖。 二、仪器设备:可见光分光光度计，电炉，烘箱，回流装置，蒸馏装置等 三、试剂配制： 1.葡萄糖标准溶液:称取0.1g(精确到0.1000)105度混干恒重的样品，溶解后转移到1000ml容量瓶中，定容。 2.苯酚液：称取苯酚100g,铝片0.1g 碳酸氢钠0.05g与蒸馏瓶中，收集172度六份，称取溜出液10g 加入150ml蒸馏水。 四、实验步骤： 1.样品的制备：称取0.4g样品用80%乙醇回流反应一个小时后，过滤，用热乙醇冲洗后用收集残渣，加蒸馏水100ml回流一小时后过滤收集滤液，转移至250ml 容量瓶中定容。 2.标准曲线的绘制：吸取配置好的葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml于试管中，加蒸馏水至2ml，加入苯酚液1ml，迅速加入硫酸5m后水浴锅煮沸15min。等冷却后495纳米处测定吸光度。另吸取2ml蒸馏水做空白试验。 3.试样的测定：吸取一定量的样品溶液，按标准曲线溶液方法配制后测吸光度。 五、测定结果的记录及计算： 1.标准曲线的制定： 葡萄糖标准液吸光度

2.试样的检测： 样品吸光光度值 代入公式得x=59.6 计算公式：W=(ρ×250×∫(3.19)/m×v×106)×100=19.8% (ρ:显色中葡萄糖的含量，单位为μg。) 检测结果：粗多糖含量为19.8%

枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定

枸 杞 多 糖 的 提 取 与 含 量 测 定 2011级药学班 A6组 丁艺兰，冯霞

枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定 一、实验目的： 1、解中药品种品质研究的思路和方法 2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法 3、掌握查阅文献和数据处理的方法 二、实验原理: 枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实，它既可以作为药材，又可以作为保健食品。经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖，主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。现代医学研究证明：它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用，能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。 萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。 三、实验步骤

1、枸杞多糖的提取 称取干燥的枸杞80g，用研钵研成粉末状，放入烧杯内，加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，过滤，得滤渣，再加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，合并滤液，采用旋转蒸发器真空浓缩，得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀，滤布过滤，得滤渣用丙酮。石油醚混合液(体积比1：1)于50～60℃回流0.5h，滤布过滤，得沉淀，烘干，得到枸杞粗多糖。 2、Sevage法脱蛋白 取一定量的粗多糖，加蒸馏水完全溶解，使其浓度约为100mg/m L，用Sevage法脱蛋白，按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇，剧烈振摇20min，使其充分混匀，1000r/min离心，倾出上清液，除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复以上操作直至中间层无变性蛋白，得到脱蛋白多糖。 3、含量测定 （1）对照品溶液制备精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，置500 mL 量瓶中，用适量水溶解后，稀释至刻度，摇匀，即得0．1 mg·mL （2）样品溶液的制备枸杞子样品粉碎，备用。取各种枸杞子粗粉约0．5 g，精密称定。加乙醚100 mL，加热回流1 h，静置，放