初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器

编制：日期：

审核：日期：

批准：日期：

江西狼和医疗器械股份限有限公司

目录

初始污染菌实验方法验证方案1．概述

2．验证目的

3．职责与验证申请

4．验证依据

5．验证计划

6．验证内容

初始污染菌实验方法验证方案

1.概述：

初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的：

通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请：

3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品

初始污染菌实验方法验证申请表

4.依据：

《中国药典》2015版 5.验证计划：

5.1实验操作人员确认；

5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。

6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备

6.1.1 菌种

试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），

验证组 姓名 职务 单位

黄燕 组长 质量管理部经理

江西狼和医疗器械股份有限公司 龙章宏 组员 化验员 苏俊 组员 化验员 胡梓鹏

组员

化验员

批 准

经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。

批准人： 年 月 日

并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

6.1.2菌液制备

接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。

菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。

6.2计数培养基适用性检查

6.2.1需氧菌的计数

分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

6.2.2霉菌和酵母菌的计数

分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

6.2.2结果判定

被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。

6.3计数方法适用性试验

6.3.1供试液的制备：

洗脱液用0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。

6.3.2 接种和稀释

按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

（1）试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

（2）供试品对照组取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。

（3）菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。

6.3.3 抗菌活性的去除或灭活

供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。

⑴增加稀释液或培养基体积。

⑵加入适宜的中和剂或灭活剂。

6.3.4 微生物的回收

按照6.2的计数培养基所用的试验菌逐一进行微生物回收试验，回收试验采用平皿法和薄膜过滤法。

6.3.4.1 平皿法--倾注法

取6个直径90mm 的无菌平皿。2个分别注入照上述“试验组”制备的供试液1ml；

2个分别注入照上述“供试品对照组”制备的供试液1ml；2个分别注入照上述“菌液对照组”制备的供试液1ml。每个平皿注入15～20ml 温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。

6.3.4.2 薄膜过滤法

薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于 0.45μm,直径一般为50mm,若采用其他直径的滤膜,冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。

取照上述“试验组”、“供试品对照组”和“菌液对照组”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml 或10cm2 的供试品, 若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液中,混匀,过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。

若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案 产品名称：一次性包皮环切缝合器 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期： 江西狼和医疗器械股份限有限公司 目录 初始污染菌实验方法验证方案 1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容 初始污染菌实验方法验证方案 1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请： 3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据： 《中国药典》2015版 5.验证计划： 5.1实验操作人员确认； 5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备 6.1.1 菌种

试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2计数培养基适用性检查 6.2.1需氧菌的计数 分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2霉菌和酵母菌的计数 分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3试验结果见表1 6.3计数方法验证 6.3.1供试液的制备：

初始污染菌检查

初始污染菌检查 生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份 1:1000，……) 初始污染菌检测结果计算公式: 平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或 g) ――――――――――――――――――― 件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次，外部?100cfu/件次，非管道类?100cfu/件次，敷料类?100cfu/g; 消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度

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初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期：…………医疗器械股份限有限公司

目录 初始污染菌实验方法验证方案1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容

初始污染菌实验方法验证方案 1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。 3.职责与验证申请： 3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据： 《中国药典》2015版 5.验证计划： 5.1实验操作人员确认； 5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备 验证组 姓名 职务 单位 黄燕 组长 质量管理部经理 …………医疗器械股份有限公司 龙章宏 组员 化验员 苏俊 组员 化验员 胡梓鹏 组员 化验员 批 准 经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。 批准人： 年 月 日

6.1.1 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至 沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养 后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数 小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上， 20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2计数培养基适用性检查 6.2.1需氧菌的计数 分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃， 培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2霉菌和酵母菌的计数 分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3试验结果见表1 6.3计数方法验证 6.3.1供试液的制备： 洗脱液用0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。 6.3.2 接种和稀释

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1.?目的? 检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。? 2.?适用范围? 适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。? 3.职责? 由质检部负责执行实施。 4.技术要求 产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g 5.引用标准 GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准 中华人民共和国药典（2015版） GB/T 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法 6.试剂和培养基 洗脱液 %Nacl 称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±， 灭菌分装。 玫瑰红钠琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±， 灭菌分装。 7.仪器设备 锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球

8.操作方法 样品处理 无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。? 对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。 接种 需厌氧菌 取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 霉菌 取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 培养 需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d 9.观察计数 达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数 10.结果计算与报告 公式 污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重 菌落计数基本规则? 选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。??菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100 时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。 在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。? 如果样品菌落总数超过标准的规定，则按10N逐批稀释?

初始污染菌数检测

一、目的：为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。 二、适用范围：本厂产品以及包装袋。 三、引用标准：GB15980-1995 四、所用的仪器和设备 1、高压消毒锅：使用时严格按照仪器说明书操作。 2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 3、培养皿：一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。 4、生理盐水：浓度为0.9% 5、灭菌规格板：5×5cm；玻璃试管：13×150mm 6、培养基：普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见试剂说明书 五、、操作步骤 1、对敷料类可用无菌手续取10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分震荡80次后。取 各管洗液进行检测。 2、对导管类:选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀剪成大 约1厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加50毫升生理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。将每一样本洗液充分均匀后，接种2个平皿，每个平皿加入1ml 洗液。当估计含菌量过高时（每个平板生长菌落数超过300个），应对洗液进行稀释倍数再接种，一般需2-3个不同稀释度，每吸取一个稀释度洗液，更换一支无菌吸管。 3、将凉至45℃普通琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿约15-20ml培养基。 4、将培养基与样液小心摇匀，待琼脂凝固后倒置平皿，置37℃培养箱内培养48h， 计算最终结果菌落数。 六、采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。 七、结果计算 计算公式为： 菌数/每件次（或g）= 平均菌数×稀释倍数---------------------(C2) 件次或重量（g）

初始污染菌实验方法验证审批稿

初始污染菌实验方法验 证 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期： 江西狼和医疗器械股份限有限公司

目录 初始污染菌实验方法验证方案1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容

初始污染菌实验方法验证方案 1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。 3.职责与验证申请： 质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 生产技术部负责按验证方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据： 《中国药典》2015版 5.验证计划： 实验操作人员确认；

实验室实验设备及器材的确认； 产品取样及方法确认。 6.验证内容： 菌种和菌液制备 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养 基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物 至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培 养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 计数培养基适用性检查 需氧菌的计数 分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉 各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄 球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉 在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相 应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 霉菌和酵母菌的计数 分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围 内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基

初始污染回收率及检测记录

初始污染回收率测定记录 生产批号：型号规格：样品数量：培养皿 个数样品号 培养皿编号 空白 对照 阴性 对照 平均菌落数 （cfu/ml） 初始污染菌 （cfu/件） （平均菌落 数÷SIP） 回收率1 2 3 4 5 1-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-5

4-1 4-2 4-3 4-4 4-5 5-1 5-2 5-3 5-4 5-5 平均回收率修正系数

初始污染菌检测原始记录 生产批号：型号规格：样品数量：培养皿 个数样品号 培养皿编号 阴性 对照 空白 对照 平均菌落数 （cfu/SIP） 初始污染菌 （cfu/件）1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

17 18 19 20 平均初始污染菌 各样品平均菌落 ——————数总和÷样品 数 校正后初始污染 菌 ————（平均初始污染 菌*校正因子） 注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌 2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。

初始污染检测记录 文件编号： 样品名称： 生产批号：型号规格：样品数量：培养皿 个数样品号空白 对照 阳性 对照 培养皿编号 平均菌落数 （cfu/SIP） 初始污染菌 （cfu/件） 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均初始污染菌 （cfu/件） 校正后初始污染 菌 注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌 2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。

初始污染菌检验标准操作规程

1 目的：建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。 2 责任：质量检验人员负责执行此规程。 3 范围：适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。 4 内容： 4.1 初始污染菌检测 4.1.1 器材与试剂 4.1.1.1 器材 （1）生化培养箱、霉菌培养箱 （2）立式灭菌柜 （3）超净工作台 （4）无菌过滤装置 （5）无菌镊子、无菌剪子 （6）电子天平 （7）移液器 （8）接种环 4.1.1.2 稀释液、冲洗液 pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液 4.1.1.3 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 4.1.2 检验方法：平皿法 4.1.2.1 供试液的制备 供试品是纱布可用无菌手续称取10g,放入100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。 供试品是液体取样10ml加至100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。 4.1.2.2 供试液操作方法 每个稀释级各吸取1ml至直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每个稀释级注2个平皿。 4.1.2.3 阴性对照 取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。 4.1.2.6 培养条件 将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。 4.1.2.7 计数

将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。 4.1.2.7.1 菌落计数基本规则 ①选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。 ②如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数 比值=———————————————————— 低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数 当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ③如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ④如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ⑤如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为<10个/g或ml。 ⑥如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。 ⑦菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 4.1.3 清场 检验完毕，将使用的试剂归位，清理台面，并将用过的工具进行清洗。检测人员应及时填写《初始污染菌数检测记录》，并对检验结果进行判定。 4.1.4 注意事项 4.1.4.1 产品取样应在完成整个灌装或包装过程以后，而又在灭菌前取样； 4.1.4.2 本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 4.1.4.3 无菌操作台必需定期进行洁净度检测，试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。 4.1.4.4 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备使用前应进行灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 5 依据标准及相关文件 2010版《中华人民共和国药典（二部）》附录Ⅺ J微生物限度检查法 GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分：产品中微生物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》

初始污染菌方法验证精编版

初始污染菌方法验证公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]

1.目的 验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围 适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责 质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生 物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项 本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内 进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 无菌操作台必需定期进行洁净度检测?试验前提前开紫外灯15min 后方可 进行实验操作。 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌?使用时应保证滤 膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂 器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环 稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 %无菌氯化钠溶液。 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验 当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： 以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进 行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的 冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学 特性。

初始污染菌方法验证

初始污染菌方法验证-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围 适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责 质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生 物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项 本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内 进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 无菌操作台必需定期进行洁净度检测?试验前提前开紫外灯15min 后方可 进行实验操作。 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌?使用时应保证滤 膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂 器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环 稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 %无菌氯化钠溶液。 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验 当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： 以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进 行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的 冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学

(019)初始污染菌检验规程

1、目的 通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。 2、范围 本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。 3、依据 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 中华人民共和国药典2010版第二部 GB 8368 一次性使用输液器 GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计 GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准 4、要求 灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。 5 检验方法 5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制： 成份： 蛋白胨 20 g 牛肉膏药 3 g 氯化钠 5 g 琼脂 15 g 卵磷脂肪 1 g 吐温80 7 g

蒸馏水 1000 g 制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。 5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。 5.3 供试液制备 5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。 5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。 5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。作为1：10的供试液。 5.3.4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2005年规定进行) 5.3.5 供试品为输液器（或袋式输液器）及注射器（或配药注射器）产品的供试液制备 5.3.5.1内腔供试液制备：每套输液器内腔注入20mL（袋式输液器注入量为280 mL）灭菌生理盐水,振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。每支注射器抽取灭菌生理盐水至公称容量，振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。 5.3.5.2外部供试液制备：按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗（可用无菌棉拭子沾无菌生理盐水在输液器表面往返涂抹10次后，将棉试子放入10ml灭菌生理盐水的试管中,将试管震打80次混匀作为供试液），汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。 5.3.6 供试品为注射针或溶药针产品的供试液制备 除去单包装，内外表面积每10cm2用10mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中[或将1支注射针直接完全浸入10mL无菌、无热原的生理盐水中每支注射针内外表面积约5cm2）]。作为1：20的供试液。 5.3.7 供试品为输液针产品的供试液制备 5.3.7.1内腔供试液制备：每支输液针内腔缓慢注入5 mL灭菌生理盐水，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：5的供试液。 5.3.7.2 外部供试液制备：除去单包装，外表面积每10cm2用10mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：10的供试液。 5.3.8 供试品为扩张器产品及无菌产品初始包装的供试液制备 按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗（可用无菌棉拭子沾无菌生理盐水在产品内表面往返涂抹10次后，将棉试子放入10ml灭菌生理盐水的试管中,将试管震打80

初始污染菌方法验证修订稿

初始污染菌方法验证 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

1.目的 验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围 适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责 质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生 物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项 本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内 进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 无菌操作台必需定期进行洁净度检测?试验前提前开紫外灯15min 后方可 进行实验操作。 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌?使用时应保证滤 膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂 器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环 稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 %无菌氯化钠溶液。 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验 当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： 以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进 行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的 冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学 特性。

初始污染菌方法验证[参考内容]

1.目的 验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围 适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责 质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生 物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项 6.1 本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内 进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 6.2 无菌操作台必需定期进行洁净度检测 验前提前开紫外灯15min 后方可 进行实验操作。 6.3 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌 用时应保证滤 膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂 7.1 器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环 7.2 稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 7.0 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 0.9%无菌氯化钠溶液。 7.3 培养基 营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。 改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验 当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： 以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进 行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 8.1 菌种

2015初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案 产品名称:一次性包皮环切缝合器 编制：日期： 审核: 日期： 批准: 日期： 江西狼与医疗器械股份限有限公司 目录 初始污染菌实验方法验证方案 1。概述 2。验证目得 ３.职责与验证申请 4.验证依据 5．验证计划 6。验证内容 初始污染菌实验方法验证方案 1、概述： 初始污染菌得数量可以反映出车间环境卫生得清洁度,与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系,故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性,从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品得安全性. 2、目得:?通过实验验证检测方法得适用性及计数用培养基得适用性。 3、职责与验证申请: ３、1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 ３、2生产技术部负责按验证方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表

４、依据: 《中国药典》2０15版 5、验证计划： 5、１实验操作人员确认； 5、2实验室实验设备及器材得确认; ５、３产品取样及方法确认。 6、验证内容: 6、1菌种与菌液制备 6、1、1 菌种 试验用菌株得传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0 代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性. 6、１、２菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,３0?35℃培养18?２4小时;接种白色念珠菌得培养物 至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20?25℃培养2—３天，上述培 养后得新鲜培养物用PH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或０、9％无菌化钠溶液制成每ｌ ｍl菌数小于１0０cfu（菌落形成)得菌悬液.接种黑曲霉得培养物至沙氏葡萄糖琼脂面 培养基上,20?2５℃培养5?7天,加人３?５ml 0、05%（ml/ml) 聚山梨酯80得pH7、 ０无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后,采用适宜得方 法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0、0５％（ml／mｌ)聚山梨醋80得pＨ7、0无菌化 钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成每lｍl孢子数量小于1０0cfｕ得孢子 悬液. 菌悬液若在室温下放置,应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在２4h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在2?８℃,在验证过得贮存期内用.

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1. 目的 检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。 2. 适用范围 适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。 3.职责 由质检部负责执行实施。 4.技术要求 产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g 5.引用标准 GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准 中华人民共和国药典（2015版） GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法 6.试剂和培养基 6.1洗脱液0.9%Nacl 称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。 6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基 取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH 为7.3±0.2， 灭菌分装。 6.3玫瑰红钠琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2， 灭菌分装。 7.仪器设备 锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球 8.操作方法 8.1样品处理 8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。 8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。 8.2接种 8.2.1需厌氧菌 取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 8.2.1霉菌 取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 8.3培养 需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证 Revised by Jack on December 14,2020

初始污染菌实验方法验证方案 产品名称：一次性包皮环切缝合器 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期： 江西狼和医疗器械股份限有限公司 目录 初始污染菌实验方法验证方案 1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容 初始污染菌实验方法验证方案 1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。 3.职责与验证申请：

质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 生产技术部负责按验证方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据： 《中国药典》2015版 5.验证计划： 实验操作人员确认； 实验室实验设备及器材的确认； 产品取样及方法确认。 6.验证内容： 菌种和菌液制备 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养1824小时；接种白色念珠菌的培养物至沙 氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2-3天，上述培养后的 新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌 落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2025℃培养57 天，加人35 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1、准备工作 1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。 2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品. 3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。 4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。 2、试验步骤： 1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。 2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。 3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。 阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。制备2个平板均不得有菌生长。 3、注意事项： 1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。 2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。 编制：审核：批准：

ZC-14-8 初始污染菌监测操作规程 1范围 适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。 2职责 质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。 3生物负载测定方法 A.1概要 A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。负责进行测定的人员应运用原材料、部件、生产环境、生产过程和产品的特性方面的知识为每一步选择适当的方法。 A.1.2图A.1给出了生物负载测定程序主要步骤和顺序。建议负责人员在决定取样率、培养基范围和培养条件以及方法开发和确认水平时要根据情况而定。 样品选择 试验样品的收集 送人实验室 处理(如果需要)TREATMENT TEBHNIQUES 移人培养基