天根中量血液DNA提取

产品简介

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取得率

常见得率（抗凝血样本）：20-60 μg/ml

产品特点

简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。

超纯：所得DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2．若缓冲液GE中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

4．步骤1-5涉及的15ml离心管需要自备，目录号：24-1500-1（仅限标准15ml离心管，使用前请确定吸附柱与离心管匹配）。

5．若提取血凝块样本，请自备血凝块液化柱CX2，目录号：RK166。操作步骤

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 向15 ml离心管加入200 μl Proteinase K (20 mg/ml)溶液。

2. 处理材料：

a. 如果提取血液样本，直接加入0.5-3 ml血液样本，混匀。

b. 如果提取血凝块样本，将一个血凝块液化柱CX2（选配组分，目录号：RK166）放入

上述装有Proteinase K溶液的15 ml离心管中，再向过滤柱加入0.5-3 ml血凝块样本，8,000 rpm（~8,228×g）离心1 min。

注意：也可以先将血液样本加到离心管中，或者先将处理后的血凝块样本离心收集到离心管中，再加入ProteinaseK，但要保证彻底混匀。在少数情况下，血凝块1 min离心后没有被完全剪碎，在这种情况下，可以延长1 min继续离心。

3. 向装有血液样本的离心管中加入2.4 ml缓冲液GE，振荡30 sec混匀。

注意：若提取2-3 ml样本，可以增加缓冲液GE用量至3.6 ml。

4. 65℃放置10 min，每隔3 min振荡一次，以助裂解。简短离心以收集管盖内壁的水珠（如

遇特殊样本，未能很好裂解，请适当延长孵育时间）。

5. 向样本中加入2 ml无水乙醇，混匀，此时可能出现絮状沉淀。

注意：若从水浴锅取出的样本温度过高，请在室温冷却后再加入无水乙醇。

若提取2-3 ml血液样本，可以增加无水乙醇量至3 ml。

6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀的一半转移至一个吸附柱CB5中（吸附柱放入15 ml收集管

中），3,000 rpm (~1,850×g)离心3 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。

7. 将步骤6剩余的溶液再转入同一个吸附柱中，重复步骤6操作。

8. 向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5,000 rpm

(~4,500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。

9. 向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5,000 rpm

(~4,500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。

Order: 010-********

Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

10. 向吸附柱CB5中加入2 ml 缓冲液PW ，5,000 rpm (~4,500×g)离心15 min ，丢弃收集管，

将吸附柱CB5放到一个新的15 ml 离心管中。

注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验，此步骤目的是将剩余的乙醇清除。

11. 向吸附膜的中间部位悬空滴加300 μl 洗脱缓冲液TB ，室温放置5 min ，5,000 rpm (~4,500×g)

离心2 min ，将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于200 μl ，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB5中，室温放置2 min ，5,000 rpm (~4,500×g)离心2 min 。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH 2O 做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5范围内，pH 值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。

DNA 浓度及纯度检测

得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA 应在OD 260处有显著吸收峰，OD 260值为1相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml 单链DNA 。

OD 260/OD 280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH 2O ，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

版本号: DP130520

产品内容

产品组成

DP332-01

(10 preps)

缓冲液GE （Buffer GE ） 40 ml 缓冲液GD （Buffer GD ） 13 ml 漂洗液PW （Buffer PW ） 15 ml 洗脱缓冲液TB （Buffer TB ）

15 ml Proteinase K 2×1 ml 吸附柱CB5 （Spin Columns CB5）

10个 收集管（15 ml ）

（Collection Tubes 15 ml ）

20个

选配组分

液化柱 CX2（Liquefaction Columns CX2 目录号：RK166）

储存条件

该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min ，以溶解沉淀。

TIANamp Blood DNA Midi Kit 中量血液基因组DNA 提取试剂盒

（离心柱型）目录号：DP332