酒石酸水解人参总皂苷提取稀有人参皂苷Rg3 大论文
摘要
人参为五加科Araliaxeae植物Panax ginseng C. A. Meyer的根，是最负盛名的中药材之一。近年来，几种稀有人参皂苷，特别是人参皂Rg3在抗肿瘤方面的研究已经引起人们的广泛注意。
目前，人参皂Rg3单体的制备方法的缺点是环境污染严重，成本高，产物收率低。本文利用人参皂苷20-羟基上葡萄糖基在酸性环境中的稳定性低于3-羟基上葡萄糖基的特性,通过控制固液比、控制反应时间、控制反应温度和酸浓度等措施,解决了人参皂苷在酸解条件下定向水解的问题,由人参皂苷直接酸水解制备Rg3。使用本方法简单、方便、低成本，可以大大减轻环境污染。
进行了酒石酸水解人参二醇组皂苷制备人参皂苷Rg3的研究,确定了最佳的反应条件:即反应温度60℃, 固液比1：0.5，反应时间3h, 反应浓度0.8mol／L酒石酸。
关键词：人参皂苷Rg3 酒石酸人参总皂苷水解
Abstrsact
Ginseng is the root of Panax ginseng C.A .Meyer Araliaxeae which is the most famous one of the Chinese herbal medicines. In recent years, minor ginsenoside Rg3 has attracted more attention in the anti-tumor research.
At present, the preparation of the minor ginsenoside Rg3 is a serious environmental pollution, high-cost and low yield. In this paper, we use the stability of the ginsenoside 20 - hydroxy is less than 3 - hydroxy to reslove the direct acid hydrolysis of the crude ginseng root saponins . This method is simple, convenient, low-cost and the environmental pollution can be greatly reduced.
We finally determine the best conditions of the PPD saponins :the concentration of the tartaric acid is 0.8mol / L ,the reactive temperature is 60 ℃, the solid-liquid ratio is 1:0.5, the reactive time is 3h.
The best conditions of the crude ginseng root saponins : the concentration of the tartaric acid is 0.8mol / L ,the reactive temperature is 70 ℃, the solid-liquid ratio is 1:0.5, the reactive time is 3h.
Keywords: Ginsenoside Rg3 tartaric acid crude ginseng root saponins hydrolysis
目录
摘要.................................................... I ABSTRSACT ............................................... II 1 绪论.. (1)
1.1课题背景 (1)
1.1.1人参及其资源分布 (1)
1.1.2人参的化学成分 (1)
1.1.3人参的药效 (2)
1.2人参皂苷简介 (4)
1.2.1人参皂苷的分类 (4)
1.2.2主要人参皂苷的药性及结构 (5)
1.2.3稀有人参皂苷的药性及结构 (9)
1.2.4稀有人参皂苷的转化方法 (10)
1.2.5人参皂苷的吸收 (12)
1.3课题的研究目的意义 (12)
1.3.1课题的研究目的 (12)
1.3.2课题的研究意义 (12)
1.4课题的研究内容 (13)
2 实验部分 (14)
2.1实验原理 (14)
2.2实验材料 (14)
2.2.1实验仪器及设备 (14)
2.2.2实验药材及试剂 (15)
2.3稀有人参皂苷Rg3的制备 (15)
2.4 TLC分析方法 (15)
2.5 HPLC分析方法 (15)
3 实验结果与讨论 (16)
3.1 原人参二醇组皂苷和人参总皂苷的TLC分析 (16)
3.2原人参二醇组皂苷制备稀有人参皂苷Rg3 (16)
3.2.1酸浓度对反应的影响 (16)
3.2.2固液比对反应的影响 (17)
3.2.3温度对反应的影响 (17)
3.2.4时间对反应的影响 (18)
3.2.5添加亚硫酸氢钠对反应的影响 (19)
3.3人参总皂苷制备稀有人参皂苷Rg3 (19)
3.3.1固液比对反应的影响 (19)
3.3.2反应时间对反应的影响 (20)
3.3.3酸浓度及温度对反应的影响 (20)
3.3.4双向展开 (21)
3.3.5 HPLC分析 (21)
4 结论 (24)
参考文献 (25)
致谢： (26)
1 绪论
1.1 课题背景
1.1.1人参及其资源分布
人参为五加科Araliaxeae植物pannx ginseng C.A.Meyer的根，是多年生草本植物[1]。人参的名称“panax”源于希腊语“panacea”，意思是“万能药和长寿”[2]。人早记载于中国最古老的药学专著《神农本草经》，被列为上品。人参高３０－６０cm，根须短，直立，每年增生一节，通称芦头，有时其上生少数不定根，习称“兰”。主根粗壮，肉质，纺锤形或圆柱形，下部有分枝，外皮淡黄色。茎直立，单一，不分枝，有纵纹，无毛，基部有宿存鳞片。人参的根是由芽苞、根茎、主根、侧根、支根、不定根以及根毛所组成[3]。参根的形状因似人形，故得名人参[4].
人参主要分布在亚洲大陆东部中高纬度的山林地带，即东经117o -137o ，北纬40o 。-48o 的各种类型的山地。其生长的地形，大都呈微坡或斜坡，坡度为30o -50o ，一般不易生长在局部洼地。我国是人参的主产国，此外仅朝鲜和前苏联有少量的分布。我国野生人参的主产区是东北长白山各县，其中以抚松、长白、靖宇、敦化、桦甸为多，这里为举世公认的“人参之乡”[5]。近年来，河北、陕西、云南、四川等省也引种人参获得成功。1.1.2人参的化学成分
由于人参具有重要的药理作用，故其化学成分的研究也一直是热点，国内外学者对此进行了大量的研究。目前认为，人参除含有各种人参皂苷成分外，还含有挥发油、脂肪酸(软脂酸、硬脂酸、油酸和亚油酸)、植物多醇和胆碱、各种氨基酸、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果胶、维生素A、BI、BZ和C等以及人体必需无机元素等成分[6]。
1.挥发性成分
人参挥发油的化学成分主要有三类:第一类为倍半菇类，第二类为长链饱和梭酸，此外还有少量芳香烃类。倍半菇类是异戊二烯(isoPrene)衍生的一类化合物，是人参挥发油的主要成分。在倍半菇类化合物中以反式-p-金合欢烯、p-芹子烯、以古芸烯、p-榄香烯、p-古芸烯、p-愈创烯等含量较高。人参根、茎叶及花蕾各部分挥发油不仅含量不同而且性状和化学组成也各不相同。到目前为止，已从人参挥发性成分中鉴定了90余种化合物。
2.人参多糖
人参含有的糖类成分主要有单糖、低聚糖和多糖。有一定生理活性的人参糖类成分为人参多糖，人参果胶中分出的有生理活性的多糖有sA、s。.PA、PN等。
3.生物碱类.
人参中含有12种以上生物碱，如harman、norharman、腺昔、胆碱等。
4.氨基酸和人参多肽类成分
人参中含有20种以上的氨基酸，如天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸等，其中包括7种人体所必需的氨基酸。此外人参中还含有具有生物活性的多肽等成分。
5.微量元素
除上述成分外，人参中还含有多种对人体有益的微量元素锰、镁、锌镍、硒。
6.其它
人参还含有维生素及酶类物质。人参茎叶中还含有山蔡酚、三叶豆若、人参黄酮营等黄酮类化。
1.1.3人参的药效
人参是我国传统的名贵中草药材。上古，神农氏将人参载入《神农百草经》中列为上品，是人参药用历史最早的记载。在中医经典之作《伤寒论》的113方中，有21处方中使用了人参[5]。在《景岳全书》的2218个处方中，含人参的处方有509个[6.7]。人参素有“百草药王”、“稀世珍宝”之美誉，由此可见其在我国中药中的重要地位。人参不仅在中国，而且在远东和其他国家的民族医学中也占有重要的地位。日本江户时代的《药徽》、朝鲜的《东医宝鉴》等，都有人参的记载[8]。自《神农百草经》问世，经各代名医的临床验证:人参味甘，微寒，制后微温，无毒，归脾，肺经。有补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智，疗肠胃中冷、心腹鼓痛、胸肋逆满、霍乱吐逆，调中，止消耗，通血脉，破坚疾，久服有延年益寿之功效[9]。
现代临床验证，人参是一种滋补强壮药物，具有镇静大脑、调节神经、刺激血管、增进食欲、促进代谢、恢复疲劳、增强肝脏解毒功能、改善骨髓造血能力、调节内分泌系统、加强机体免疾反应等功效。
1．提高机体的适应性
人参可改变机体的反应性，与刺五加、北五味子等相似，具有“适应原”样作用，即能增强机体对各种有害刺激的反应能力，加强机体适应性。作为机体功能的调节剂，人参茎叶皂苷和根皂苷对物理性的（寒冷、过热、剧烈活动、放射线）、生物学性的（异体血清、细菌、移植肿瘤）、化学性的（毒物、麻醉药、激素、抗癌药等）种种刺激引起的应激反应均有保护作用，能使紊乱的机能恢复正常，有人称其为适应原性物质（一种增强人体非特异性抵抗能力的物质）。
2．对心血管系统的作用
（1）对心脏功能的作用：人参对多种动物的心脏均有先兴奋后抑制、小量兴奋，大量抑制的作用。其对心脏的作用与强心甙相似，能提高心肌收缩力。大剂量则减弱收缩力并减慢心率。
（2）对心肌的作用：人参对心肌有保护作用。人参皂苷能降低小鼠在严重缺氧情况下大脑和心肌的乳酸含量，能恢复缺氧时心肌cAMP/cGMP 比值，并具有保护心肌毛细血管内皮细胞及减轻线粒体损伤的作用。从人参茎叶、芦头、果及主根等部位所
提取的皂苷，对异丙基肾上腺素造成的大鼠心肌坏死，均有明显的心肌保护作用，可使病损减轻，尤以人参果皂苷作用为佳。人参不同部位皂苷与心得安有相似的作用效果。人参芦头总皂苷能促进体外培养乳鼠心肌细胞的DNA合成，对缺糖缺氧损伤性培养的心肌细胞有一定的保护作用。研究认为，人参总皂苷抗心肌缺血和再灌注损伤的机制，是促进心肌生成和释放前列腺素，抑制血栓素A2 的生成，并通过抗氧自由基和抗脂质过氧化作用而保护心肌细胞。
（3）对血管的作用：人参对血管的作用，一般认为其为血管扩张药，但亦有小剂量收缩，大剂量扩张或先收缩后扩张的报告。人参对血管的作用因血管种类不同或机体状态而表现不同。人参对兔耳血管和大鼠后肢血管有收缩作用。但对整体动物冠状动脉、脑血管、眼底血管有扩张作用。静脉注射总皂苷能降低犬后肢血管和脑血管阻力，但却能增加大鼠肾血管阻力。人参皂苷Rg1、Re对犬血管亦呈扩张作用，效果分别为罂粟碱的1/20和1/50，Rc、Rb2 的作用很弱，而Rb1无效。人参影响血管功能的有效成分和作用机制的研究表明：人参皂苷Rb1和 R0 对血管的扩张作用是非选择性的，而Rg1仅选择性对抗 Ca+ 引起的血管收缩，其作用机制尚有待进一步研究。有人认为，人参对不同类别、不同生理状态下血管的不同的调节作用可能是人参双向调节血压的原因。
3．抗衰老作用
近年来的寿命实验证明，人参皂苷可使家蚕生长期明显延长。细胞的衰老是机体衰老的基础，目前多数学者认为体外人胚肺二倍体细胞的培养，可作为研究细胞水平衰老的模型[10]。有人报道，在适当浓度人参提取物的培养介质中，二倍体细胞的有丝分裂活性和生长速度增加[11] 。人参茎叶中的总皂苷在一定剂量下对不同代龄人胚肺二倍体细胞的DNA合成皆有促进作用，对衰老现象有一定的延缓作用[12]。
4．益智作用
一般认为，中枢胆碱能和儿茶酚胺能对提高学习记忆产生有利影响。张均田教授等证明人参皂苷Rgl和Rb 1是人参促进提高学习记忆力的主要有效成分，它们可以增强胆碱能系统功能，增加脑突触体对胆碱的摄取，增加乙酞胆碱(Ach)合成和释放，同时提高中枢M胆碱受体的密度[13]。CAMP第二信使系统与学习记忆有关，人参皂苷对CAMP有双向调节作用[14]，一般认为RNA和蛋白质是长期记忆的内在物质基础。长期记忆通过细胞中特殊RNA结构变化的密码而经久保存，新事物产生的新蛋白质在儿分钟内可构成记忆系统的新内容。人参对蛋白质的合成和RNA的合成均有促进作用。人参皂苷提高记忆的作用可能主要与脑内核酸核蛋白质的合成有关，摄取人参皂苷Rb2和Rgl增加脑内M胆碱受体，很可能与受体蛋白的合成加速有关。人脑的供氧系统对脑功能起着重要的保证作用。成年男子脑重约占体重的2%，但它对O:的需耗量却高达25%学习记忆是复杂精密的脑力活动，需要充足的血液供应和能量供应，而人参皂苷对脑血液循环和脑能量代谢也有明显影响。人参皂苷对脑缺血/再灌注损伤具
有保护作用，对急性脑缺血、脑内能量代谢紊乱具有一定的改善作用[16]。己有学者证实人参皂苷及其单体Rb 1、Rgl、Re、Rd。能协同神经生长因子促进神经细胞的分化和增殖，这可能是人参皂苷促进动物学习记忆、增强神经系统功能的基础。
5.人参皂苷的免疫调节作用
大量研究表明，人参皂苷对网状内皮系统(RES)吞噬功能有刺激作用。其机理可能与人参皂苷使巨噬细胞内cAMP含量显著下降，cGMP含量显著升高有关[17]。人参皂苷能使抗原刺激后动物的抗体产生明显增加。人参皂苷对丁细胞、B细胞的分裂有不同程度的促进作用[18]。人参三醇组皂苷对辐射所致的免疫器官损伤有保护作用，可增强机体的防御能力。天然杀伤细胞(NKC)除参与抗感染和抗肿瘤的免疫作用外，还具有广泛免疫调节功能。NKC活性受许多因素影响，主要有干扰素(IFN)和白细胞介素一2 (IL-2)等。人参皂苷可对NKC-IFN-IL-2表现出正调节作用[19 20]。细胞内环核昔酸水平的变化是细胞调节免疫功能的一种机制。人参皂苷可以通过升高cAMP促进淋巴细胞的分化成熟，从而增强淋巴细胞的功能。在植物血凝素(PHA)活化淋巴细胞前提下，人参三醇皂苷可明显促进各种白细胞介素(interleukins, ILs)的生成[21]。。
1.2人参皂苷简介
1.2.1人参皂苷的分类
人参皂苷（ginsenoside）是人参、西洋参、三七等的主要有效成分。Sanada等从人参根的乙醇提取物的薄层层析谱上检出十二个皂苷斑点，按照Rf值增大的顺序称为R0、Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rg3和Rh1。Koizum和Besso使用Sephadex 柱分离获得含量甚微的人参皂苷Ra1和Ra2，矢田等又分得人参皂苷Ra3。川北等从红参中分离得20(R)-人参皂苷Rg2、20（S）-人参皂苷Rg3。随着对人参属植物化学成分的深入研究，到目前为止，约有30多种各类人参皂苷被分离获得[21]。
人参皂苷按照苷元的结构不同分为：二醇型人参皂苷(图1)、三醇型人参皂苷（图2）和齐墩果酸型人参皂苷（图3）。二醇和三醇型人参皂苷都属于四环三萜的达马烷型，是达马烯二醇的衍生物，结构特点是C8上有一角甲基取代，C13为β-H，C20的构型多为S型，两者的不同在于二醇型母核上有三个羟基取代（C3、C12和C20），而三醇型皂苷母核上有四个羟基取代（C3、C6、C12和C20）；成苷的位置二醇型主要在C3和C20，糖多为葡萄糖、阿拉伯糖和木糖，而三醇型第一章概述皂苷成苷的位置主要在C6和C20，糖多为葡萄糖、鼠李糖和木糖。Octotillol型人参皂苷是达马烷型人参皂苷侧链20、24位氧化环化而成的呋喃环，仅分布于西洋参和越南人参中。齐墩果酸型皂苷是五环三萜型皂苷，结构特点是C28为一羧基，并与糖成酯苷键，C3连接的糖链中有葡萄糖醛酸，该类人参皂苷目前仅发现人参皂苷R0一种。
图1二醇型人参皂苷
图2三醇型人参皂苷
图3齐墩果酸型人参皂苷
1.2.2主要人参皂苷的药性及结构
1.人参皂苷Rb1（Ginsenoside Rb1）
【结构式】
图4 人参皂苷Rb1的结构式
CH O OH
HO
HOCH 2 O
OH
【分子式】 C 54H 92O 23 【相对分子质量】1108
【理化常数】白色粉末状固体，mp 197~1980C ，[a]27D +21.1
o
(c 0.61，MeOH) 【生物活性与毒性】
1.抗心律失常活性
2.钙通道阻滞剂
3.抑制cAMP 磷酸二酯酶（IC 50: 137μmol/L ）
4.抗中枢神经紧张作用
5.脂质调节作用
6.促肾上腺酮分泌作用（ED 50: 112μmol/L ）
7.神经保护作用：延长神经元生命
8.增强柔红霉素和长春碱的细胞毒性
【药性】具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆作用。
2.人参皂苷Rb2（Ginsenoside Rb2）
【结构式】
图5 人参皂苷Rb2的结构式
【分子式】 C 53H 90O 22 【相对分子质量】1078
【理化常数】白色粉末状固体，mp 200~2030C ，[a]15D +10.20
o
(c 0.90，MeOH) 【生物活性与毒性】
1.抗心律失常活性
2.抗血小板凝集
3.抗HSV-1病毒，明显抑制其复制
4.抗HSV-1病毒，明显抑制其复制
5.钙通道阻滞剂
6.降胆固醇作用
7.促肾上腺酮分泌作用（ED 50: 20μmol/kg ）
8.抑制cAMP 磷酸二酯酶活性（IC 50: 199μmol/kg ）
O OH
HO
HOCH 2 O
OH
【药性】具有抑制中枢神经，促进DNA 、RNA 合成作用；降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用；促进刺激副肾皮荷尔蒙分泌作用。
3.人参皂苷Rc （Ginsenoside Rc ）
【结构式】
图6 人参皂苷Rc 的结构式
【分子式】 C 53H 90O 22 【相对分子质量】10788
【理化常数】白色粉末状固体，mp 199~2010C ，[a]22D +1.9
o
(c 1.0，MeOH) 【生物活性与毒性】
1.抗心律失常活性
2.钙通道阻滞剂
3.促血浆肾上腺酮分泌作用（ED 50: 44μmol/kg ）
4.抑制cAMP 磷酸二酯酶活性（IC 50: 264μmol/L ）
【药性】具有抑制中枢神经，抑制DNA 合成作用，促进血清蛋白合成作用。
4.人参皂苷Rd （Ginsenoside Rd ）
【结构式】
图7 人参皂苷Rd 的结构式
O OH
HO
HOCH 2 O
OH
HOH 2
O OH
HO
HOCH 2 O
OH
【分子式】 C 48H 82O 18 【相对分子质量】946
【理化常数】白色粉末状固体，mp 206~2090C ，[a]22D +19.4
o
(c 1.0，MeOH) 【生物活性与毒性】
1.抗心律失常活性
2.抗HSV-1病毒活性，抑制病毒复制能力弱于Rb 族
3.促血浆肾上腺酮分泌作用（ED 50: 7.1μmol/kg ）
4.抑制cAMP 磷酸二酯酶活性（IC 50: 84μmol/L ）
5.增强柔红霉素和长春碱的细胞毒性
【药性】具有促进副肾皮质荷尔蒙分泌作用。 5.人参皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1） 【结构式】
图8 人参皂苷Rg1的结构式
【分子式】 C 42H 72O 16 【相对分子质量】800
【理化常数】白色粉末; [a]15D
+24.8o
(c 0.93，MeOH) 【生物活性与毒性】 对绵羊红血球 2-脱氧- D-葡萄糖的运输具有刺激作用（在0.01~10μmol/L 的浓度范围内，使绵羊红血球中的载体2-脱氧- D-葡萄糖的运输提高15%~30%）
【药性】可快速恢复疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经、抑制血小板凝集作用。
6.人参皂苷Ro （Ginsenoside Ro ） 【结构式】
图9 人参皂苷Ro 的结构式
O OH
HO
HOCH 2 O
OH
【分子式】 C 48H 19O 76 【相对分子质量】956
【生物活性与毒性】 对绵羊红血球 2-脱氧- D-葡萄糖的运输具有刺激作用（在0.01~10μmol/L 的浓度范围内，使绵羊红血球中的载体2-脱氧- D-葡萄糖的运输提高15%~30%）
【药性】具有消炎、解毒、抗血栓作用，抑制酸系血小板凝结以及抗肝炎和活化巨噬细胞作用。
1.2.3 稀有人参皂苷的药性及结构
1.人参皂苷Rh2（Ginsenoside Rh2）
【结构式】
20(S)-ginsenoside Rh2: R 1=OH, R 2=H
20(R)-ginsenoside Rh2: R 1=H, R 2=OH
图10 人参皂苷Rh2的结构式 【药性】Rh2具有明显的抗癌和抗癌转移作用。研究发现人参皂苷Rh2对黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑胶质瘤和骨髓癌细胞有显著的抑制和杀灭作用，且不同于传统的具有细胞毒的抗癌药物，对患者几乎无毒副作用。也是“供给好药，服务社会”的最好注释。另外人参皂苷Rh2还可以增强机体免疫力，配合手术服用时可增强手术后伤口的愈合及体力的恢复[29]。 2.人参皂苷K （compound K ） 【结构式】
图11 人参皂苷compound K 的结构式
【药性】人参皂苷
compound K 是天然的二醇型人参皂苷在人肠道内的代谢产物，是人参在体内发挥活性的实体。生物活性研究表明C-K 是一个多靶点、高活性化合物，其不但在抗肿瘤、抗炎、保肝和抗过敏方面体现了良好的活性，而且在神经系统及免疫系统方面也具有很好的调节作用。
O
glc
3.人参皂苷Rg3（Ginsenoside Rg3）
【结构式】
；
20(R)-ginsenoside Rg3: R1=H, R2=OH
图12 人参皂苷Rg3的结构式
【分子式】C
42H
72
O
13
【分子量】785.02
【物理化学性质】密度 1.30 熔点 315-318°C
【药性】人身皂苷Rg3是一种人参二醇类四环三萜皂苷,Rg3具有较好的抗癌、抗癌转移作用，近年来国内外医学工作者进行大量研究，取得了可喜的成绩。药理研究表明，Rg3能显著提高荷瘤小鼠的免疫功能；抑制肿瘤内新生血管形成；阻止脱落癌细胞在血管壁的着床；抑制肿瘤细胞对血管壁基底膜的浸润，有显著抗浸润、抗转移作用。临床实验证实Rg3能有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌生长，明显改善临床症状、提高生存质量、预防和治疗癌症、改善心脏血管功能、抗血小板凝集、保护脑神经细胞、提高机体免疫力。发现20(R)-ginse- noside Rg3可抑制肿瘤细胞的增殖，主要作用于G2期，可有效抑制肿瘤细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使肿瘤细胞增殖速度减慢。
1.2.4稀有人参皂苷的转化方法
1.酸水解
依条件不同，酸水解产物分为完全水解和部分水解。C-20 位的构型极易受酸的影响转位，发生互变异构现象，形成处于平衡状态的二种异构体的混合物（图14）。当酸性比
较强时，如将人参皂苷 Rb
1、Rb
2
和 Rc 与 7％HCl 的稀乙醇液共热，由于水解条件比较激
烈，可断裂所有的糖苷键，同时发生互变异构作用，生成处于平衡状态的 20（S，R）-人参二醇的混合物，以 20（R）-体占优势。同时发生C-20 羟基和侧链双键的脱水环合，形成 C-20 手性不同的一对异构体 20（S）-人参二醇和 20（R）-人参二醇。三醇型皂苷也和二醇型皂苷一样，在强酸作用下苷键完全水解，侧链异构化及环合，形成 20（S，R）-
人参三醇的混合物。若将人参皂苷 Rb
1、Rb
2
和 Rc 与浓 HCl 在室温下反应 24h 则发生侧
链的加氯化氢反应，同时引起 C-20 转位，形成二种 C-20 手性不同的皂苷元氯化氢加成物，再用正丁醇钠、叔丁醇钾或二乙胺处理脱去氯化氢，生成 20（S）和 20（R）－原人参二醇的混合物[22]。
图13（水解反应历程）
在温和酸条件下，可保留一部分糖苷键，得到次级皂苷，如用 0.7％H
2
SO
4
或 0.1N HCl 等进行水解 Rg1，生成次生苷人参皂苷 Rh1及其 C-20 位差向异构体20(R)-人参皂苷 Rh1 和它们的 C-24-C-25 水合产物。Rb1、Rb2 在温和酸性条件下可能的水解途径（0.1mol/L HCl 37℃）
Rb1→20（R，S）-Rg3→C25-OH-20(R，S)-Rg3
Rb2→20（R，S）-Rg3→C25-OH-20(R，S)-Rg3
其中 Rh1、Rg2和 Rg3均为相应皂苷水解掉 C20位糖基后的产物[23]。
2.碱水解
Cui 等将 3g 人参总皂苷加入 3ml 正丁醇、0.2g NaOH 中，90℃进行水解。24h后人参皂苷 Ro 水解成齐墩果酸，Rg1、Re 则大部分水解成 20（S）-原人参三醇，还有少量的 20（S）-人参皂苷 Rh1和人参皂苷 F1[24]；而 Rb1、Rc、Rd 则水解为 20（S）-原人参二醇。用含 5％NaOH 的正丁醇溶液 50℃处理人参皂苷 Rg1，5h 后得到 20（S）-原人参三醇、20（S）-人参皂苷 Rh1和人参皂苷 F1。用 5％NaOH的正丁醇溶液 70℃处理 Rb1，5h 后得到 20（S）-人参皂苷 Rg3和 20（S）-原人参二醇[25]。和酸水解比较，碱水解中间产物少，水解较完全，20 位异构化程度低。
3.酶解与微生物降解
酶解为选择性水解反应。不同种类的酶可作用于不同构型和不同组成糖的苷键，达到定向水解的目的。酶水解发生在原人参二醇型皂苷的 C-3 位与 C-20 位糖基部分，原人参三醇型皂苷 C-6 位糖基部位。Kohada 报道用粗橙皮苷酶、柚皮苷酶、果胶酶水解人参
(a)
+
(b)+
(1)
2
+
H+H+
+
S-form R-form
(1)(2)
皂苷 Rb1、Rb2 和Rc，其主要产物为化合物 C-K 和少量的原人参二醇[2-4]。Karikura 研究了 Rb1、Rb2 被橙皮苷酶水解的情况[2-5]。人参皂苷 Rb1 及其橙皮苷酶水解产物的结构C3-位糖基 C20-位糖基人参皂苷 Rb1 -Glc-Glc -Glc-GlcGypenoside-VII -Glc -Glc-Glc 人参皂苷 F2 -Glc -Glc人参皂苷 C-K -H -GlcOdan i 用橙皮苷酶水解人参皂苷 Rg1 得到人参皂苷 F1(失去 C6-位糖基) [26]。Ko 筛选了多种苷水解酶水解人参皂苷制备 Rg2, Rh1, 和 F1，包括来自于青霉属中的一种橙皮苷酶（酶 H）、米曲霉中的一种β-半乳糖苷酶（酶 G）、青霉属中的一种乳糖酶（酶 L）和斜卧青霉菌中的一种柚苷酶（酶 N）。结果表明，酶 H、L、N 具有α-鼠李糖酶活性，能够对抗-O-β-D-葡萄糖-(2→)- α-L-鼠李糖链与 Re、Rg2苷元中 C-6-位羟基的连接；酶 G 对 Re 中 C-20-O-β-D-葡萄糖苷链具有选择性的β-葡萄糖苷酶活性，但不具有α-鼠李糖酶活性；酶 L 具有较强的β-葡萄糖苷酶活性，不仅对 Rg1中的 C-20-O-β-D-葡萄糖苷链具有部位选择性，同时对 Re 和 Rg2具有很高的α-鼠李糖苷酶活性，可以从原人参三醇型皂苷混合物中获得大量的 Rh1。除α-鼠李糖苷酶活性外，酶 N 对 Rg1中的 C-6-O-β-D-葡萄糖苷链的连接具有较强的β-葡萄糖苷酶活性，可得到高产量的 F1；酶 N对 Rh1中的 C-6-O-β-D-葡萄糖苷链具有β-葡萄糖苷酶活性，可以得到 20（S）-原人参三醇[27]。
1.2.5人参皂苷的吸收
人参中的各类人参皂苷是它们的主要有效成分。研究表明，人参皂苷口服经消化吸收，吸收率很低，例如人参皂苷Rb1的吸收率仅为1%，Rb2为3.4%，Rg1为1.9%。而用放射性同位素标识的人参皂苷做研究，则在血清中测出3倍以上的放射活性，表明大量吸收的是人参皂苷的代谢物[28]。其中Rg3在人体内分布快与消除快，口服后在血浆中的浓度很低。人参皂苷在肠道中的代谢主要是被肠道微生物和肠酶降解或者是次级的皂苷被吸收（通过糖基修饰转变为次级皂苷吸收），很多学者研究了它们的降解途径并得到了大致相近的结果。
1.3课题的研究目的意义
1.3.1课题的研究目的
利用资源丰富的低抗肿瘤活性的人参二醇组皂苷，研究人参皂苷中苷键裂解机制，进行选择性水解制备高抗肿瘤活性的人参皂苷Rg3的研究。
1.3.2课题的研究意义
瘤的生长离不开新生血管为其提供营养和排出代谢废物，肿瘤血管同时也是肿瘤细胞转移的物质基础。因此，抗肿瘤新生血管形成是癌症治疗的一个有效的新靶点，开发肿瘤血管生成抑制剂已成为国内外抗肿瘤药物研究的热点。目前在恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，但迄今尚无理想的抗肿瘤药物。传统的放疗和化疗方法瞄准癌变部位，在杀灭癌细胞的同时，也使正常细胞受到损伤。国内外最新研究结果证明，恶性肿临床上广泛使用的
抗肿瘤药物，如生物碱类和顺铂类，由于毒副作用大，因而疗效有限。又如紫杉醇，但是其来源困难、价格昂贵，普通肿瘤患者承担不起。人参服用的历史已有四千多年，其安全低毒的特点已经为世人所认可。因此人参皂苷Rg3作为天然、价廉、低毒的抗肿瘤药物，必将有很大的市场，创造出巨大的经济效益。但Rg3在新鲜的或自然干燥的人参药材中并不存在或微量存在，在红参中的含量也仅为十万分之三，制备工艺复杂，花费巨大。如果能通过对低活性人参皂苷进行结构修饰与改造，从而得到活性更强的化合物，这样不仅能改善某些人参皂苷的性质，增加其生物利用度，降低其生产成本，而且会有很好的社会效益。
本课题将资源丰富的低抗肿瘤活性的人参二醇组皂苷，通过选择性水解，高效地转化为高抗肿瘤活性的人参皂苷Rg3。故本课题的研究具有巨大的经济价值和重要的社会效益。本课题的开展，将会促进人参产业的发展，为中药现代化，将中药扩展到国际市场起到一定的促进作用。
1.4课题的研究内容
本课题主要是以酒石酸代替传统的无机酸硫酸和盐酸水解人参皂苷制备稀有人参皂苷Rg3，通过单因素条件实验优化反应条件，并通过TLC和HPLC进行分析。
本文的主要研究内容是:
1. 酒石酸浓度对反应的影响。
2. 固液比对反应的影响。
3. 温度对反应的影响。
4. 时间对反应的影响。
2 实验部分
2.1实验原理
人参皂苷20-羟基上葡萄糖基在酸性环境中的稳定性低于3-羟基上葡萄糖基的特性：SN1反应，H离子与苷键结合脱糖，生成C正离子，然后水作为亲核试剂可从平面上下进攻C正离子，然后脱去H离子，生成两种构型的R-构型与S构型产物(如图15)，其中以R-构型为主。
2.2实验材料
2.2.1实验仪器及设备
表1（实验仪器及设备）
设备名称型号生产厂家双频数控超声波清洗器KQ-250VDE 昆山市超声仪器有限公司电子天平FA2104A 上海精天电子仪器有限公司高速台式离心机H-1650 长沙湘仪离心机仪器有限公司电吹风1221 广州市金霸企业电热恒温鼓风干燥箱DHG-9075A型上海—恒科学仪器有限公司旋转蒸发器RE-52 巩义市予华仪器有限责任公司
微量移液器25250 1000 lμ上海求精生化试剂仪器有限公司
微量进样器10 25lμ上海安亭微量进样器厂电热恒温水浴锅DK-91-Ⅱ天津市泰斯特仪器有限公司
2.2.2实验药材及试剂
药品名称规格生产厂家
酒石酸分析纯天津市恒兴化学试剂有限公司
三氯甲烷分析纯洛阳市华东试剂厂
甲醇分析纯天津市北方天医化学试剂厂
正丁醇分析纯天津市永大化学试剂开发中心
乙酸乙酯分析纯天津永大化学试剂开发中心硫酸分析纯哈尔滨化学化工试剂厂
人参总皂苷吉林辉南宏久生物科技股份有限
公司人参皂苷对照品北京嘉信众义科技有限公司
2.3 稀有人参皂苷Rg3的制备
将原人参二醇组皂苷（PPD）和人参总皂苷(或PPD)用蒸馏水分别配成5mg/ml和10mg/ml，加入一定浓度的酒石酸，在水浴锅中反应，然后用饱和正丁醇萃取,离心机离心5min。取反应液样品，用1/2体积水饱和正丁醇萃取5次，40℃下用旋转蒸发仪蒸发至干，残留物用甲醇溶解，进行HPLC分析。
2.4 TLC分析方法
薄层条件：以薄层层析硅胶G为固定相，以氯仿-甲醇-水(65: 35：10, v/v/v)为展开剂，取下层；正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5），取上层，10％硫酸喷雾显色。
将点好样的薄层板放入的展开剂中，侵入展开剂的深度为距薄层板底边5-10㎜（勿将样点侵入展开剂中），密封盖，待展开至规定距离后取出，用电吹风吹干，喷10％硫酸，等风干后，放置150℃恒温箱中显色。
2.5 HPLC分析方法
色谱柱（250×4.60 mm，5μm）；
人参皂苷Rg3的HPLC色谱条件:采用Phenomenex C
18
流动相A：乙腈, 流动相B水.梯度洗脱程序：0min～18min,A:23%～23%,B:77%～77%；18min～30min,A:23%～31%,B:77%～69%；30min～45min,A:31%～33%,B:69%～77%；流速1.0 mL·min-1；检测波长为198 nm；柱温为室温；进样量20μL。
人参皂苷的提取教学文稿
人参皂苷的提取
第一章综述 1.1 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始 载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢 冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、 心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究 证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约 有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为 Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其 他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱 导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤 发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机 制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 1.2 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止， 文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、- Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50 余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。 对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制 血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的 合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促 进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。 Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎 发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用.
人参皂苷的神奇功效
人参皂苷的神奇功效 人参提取物及其衍生物事人参发挥抗致癌作用的物质基础。研究人员对人参皂苷Rh1、Rh2、Rg3、Rg5成分进行了筛选： 1、人参皂苷Rh1预防和抗肿瘤： 人参通过醇类萃取人参总皂苷，再分离人参二醇皂苷和人参三醇皂苷，其中三醇组通过固定话醇素水解分离纯化稀有皂苷Rh1。 单体Rh1具有促进肝细胞增值的作用，治疗和预防肝癌、肝硬化的作用，促进DNA合成。 2、人参皂苷Rh2预防和抗肿瘤： 人参皂苷Rh2是从人参中分离得到的原人参二醇型低糖链皂苷单体。它是生晒参加工红参时,由于某些原人参二醇组人参皂苷受热分解，配基上糖链断裂降解产生的次皂苷人参皂苷Rh2的提取次级人参皂苷，通常只有降解的办法才能得以实现。 人参皂苷 Rh2单体对癌细胞的生长有抑制作用,能诱导肿瘤细 胞凋亡，逆转肿瘤细胞异常分化，抗肿瘤转移，与化疗药物联用能起到增效减毒的作用。 除去抗肿瘤作用外，人参皂苷具有提高机体免疫力、抗菌、改善心脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等作用。
3、人参皂苷单体Rg3预防和抗肿瘤： Rg3对肿瘤细胞的抑制，首先是通过抑制肿瘤新血管生成。此作用在小剂量应用时即可产生，最适合预防肿瘤发生和肿瘤的复发、转移，并且无其他抗癌药物常见的毒副作用，完全可以长期使用。 Rg3在较大计量时还能抑制肿瘤瘤细胞的增殖、浸润，诱导肿瘤细胞凋亡。因此，Rg3常常和放疗、化疗同时使用，可明显增强放疗、化疗效果，大大减轻其毒副作用，提高患者生活质量。 4、人参皂苷单体Rg5预防和抗肿瘤： 人参皂苷单体Rg5是二醇皂苷经过水解的产物。人参皂苷Rg5 可以显著降低肺癌的发生率。被认为是红参中抗癌的活性物质。
提取人参皂苷并且检验以及在过程的一些注意事项
1.人参皂苷提取 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参皂甙和稀HCl在醇液中进行温和酸水解，可得到三种皂甙元，齐墩果酸、人参二醇和人参三醇。而不能得到原人参二醇和原人参三醇，这是因为在酸水解过程中侧链的20－位碳原子上的羟基（－OH）与该链上的双键（C＝C）易闭环，而形成带有三甲基四氢吡喃环的人参二醇和人参三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物经硅胶柱层析分离即可得到三种单体皂甙元，经重结晶获得纯品，分别与已知皂甙的红外光谱相一致。 2.人参皂甙提取和甙元分离工艺流程 ①人参皂甙提取工艺： 人参茎叶粗粉20g 热水提取1小时，粗滤，（棉花） 提取液药渣 加0.6g是会乳沉淀，并调至PH9－10，放置10分钟，抽滤 沉淀物滤液 浓硫酸调PH7，放置10分钟。 中性提取液 回收后，上大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用 70％氨性醇洗至绿色。 乙醇洗脱液 回收乙醇 人参总皂甙（黄白色） a)人参皂甙元的水解和甙元的分离流程 人参总皂甙 加含5％HCl的50％乙醇液， 加热回流2小时 沉淀水解液 （酸性皂甙元部分）加水稀释，水浴蒸去醇，氯仿萃取 3次（10，5，5ml）
水层氯仿层 干燥， 无水NaSO 4 回收氯仿 总皂甙元 少量苯溶解，硅胶柱 层析，用苯－乙酸乙脂 （8：2）洗脱 组分Ⅰ组分Ⅱ组分Ⅲ95％乙醇重95％乙醇重丙酮结晶 结晶3次结晶3次2次 齐墩果酸人参二醇人参三醇 mp299-301℃mp245-250℃mp244-246℃ 1.操作方法 人参总皂甙的提取：取人参茎叶粗粉20g，放入烧杯用热水（80℃－90℃）提取1小时，然后用棉花粗滤，在所得滤液中加入0.6g水石灰乳除杂并调PH9－10放置10分钟左右，过滤，再将滤液用浓硫酸（少量）调PH7，放置10分钟左右，回收提取液至少量（5－10ml），再上大孔树脂柱（注：此柱应提前洗好，清洗办法略）先用蒸馏水洗至无色，再用70％的乙醇洗至无色，分别用小瓶接收。便得到了乙醇洗脱液，回收乙醇，便得到了人参总皂甙（黄白色）。 人参皂甙的水解 称取人参皂甙（）4－5g（不足时由老师提供），加20倍量含5％HCl的50％乙醇溶液，加热回流2小时，放冷，加倍水，水浴去醇，转入分液漏斗中，用氯仿萃取3此（10，5，5ml），合并氯仿层，加少量无水硫酸钠干燥，回收氯仿即得总皂甙元。 甙元柱层析分离 称取100－200目硅胶（105℃活化30分钟）50g，用苯做洗脱剂湿法装柱，柱顶放一层脱脂棉，压上数个玻璃球，放出多余的苯（至高于吸附剂1cm），计算保留体积。总皂甙元用少量苯溶解上柱，用苯－乙酸乙脂（8：2）洗脱，薄层检识（与甙元标准品对照）相同组分合并，回收溶剂。齐墩果酸、人参二醇用95％乙醇重结晶，人参三醇用丙酮重结晶，纯品80℃干燥，收集于小瓶中。 2.人参皂甙的检验 （一）显色反应
人参皂甙体内代谢综述
人参皂甙体内代谢综述 方松 学号：201261930 人参又名人衔、棒锤，首载于《神农本草经》，被列为上品。系五加科植物人参Pana ginseng C．A．Mey．的干燥根。在我国的医药学中应用广泛，素有“中药之王”之称。主要产于吉林省长白山一带，是我国“东北三宝”之一。具有抗肿瘤、降血脂、促进细胞再生等多种生理活性。现就人参皂甙在体内代谢作简要综述。 1、人参皂甙分类 现代研究表明，人参中含有人参皂甙、多种氨基酸、糖类、低分子肽类、脂肪酸、有机酸、维生素B、维生素C、菸酸、胆碱、果胶、微量元素等。皂甙是人参生物活性的物质基础，从其皂甙元母核结构上主要分为以下三大类：（1）以原人参三醇为母体的糖甙，以Rg1为代表，为人参的主要成分。（2）以原人参二醇为母体的糖甙，以Rb1为代表，为西洋参的主要成分。（3）以齐墩果醇酸为母体结构的五元环皂甙Ro。 2、人参皂甙的药理活性 （1）对中枢神精系统的双向调节作用：人参能加强大脑皮质的兴奋过程和抑制过程，使兴奋和抑制二种过程达到平衡，使由于紧张造成紊乱的神经过程得以恢复，人参皂甙小剂量主要表现为对中枢的兴奋作用，大剂量则转为抑制作用。从人参所含的有效成分分折、人参皂甙Rb类有中枢镇静作用Rg类有中枢兴奋作用。 （2）人参的适应原样作用：人参对物理的、化学的、生物的各种有害刺激有非特异性的抵抗能力，可以使紊乱的机能恢复正常、主要表现为对血压、肾上腺、甲状腺机能和血糖等方面的双向调节作用。 （3）对免疫功能的用作：人参能增强机体的免疫功能。 在临床上人参主要用于休克、冠心病、心律失常、贫血、白细胞减少症、充血性心力衰竭，还常用于慢性阻塞性肺病、糖尿病、肿瘤、血小板减少性紫癜、早衰、记忆力减退等辅助治疗。 3、Rg1的体内代谢 早在1983年，日本学者Odani等在无菌大鼠灌胃实验中发现，原人参三醇型皂甙Rg1
人参皂苷的提取与分离材料
人参皂苷的提取与分离 学生姓名 专业 班级
学院 摘要 首先认识人参和人参皂苷，了解人参皂苷的详细作用和功效，接着研究了人参茎叶总皂苷含量提取方法，用详细的工艺提取人参皂苷，并且用对显色反应和薄层层析对提取物进行鉴定，为以后的人参茎叶的开发利用奠定基础。 关键词：皂苷；人参茎叶；鉴定。 Abstract The first ginseng and ginseng saponin, understanding the role and efficacy of ginseng saponin in detail, then study the effect of ginseng stem leaf total saponin extraction method, with the detailed process of extraction of ginseng saponin, and used for color reaction and thin-layer chromatography to extract were identified, for the future of ginseng stem and leaf development lays a foundation. key words: saponin; ginseng stems and leaves; appraisal;
目录 摘要 (1) Abstract ..................................... 错误!未定义书签。 1 绪论 (3) 1.1 ............................................. 人参概述 错误!未定义书签。 1.2 ........................................ 人参的化学成分 1 1.2.1人参皂苷 (1) 1.2.2人参蛋白 (1) 1.2.3人参多糖 (1) 1.2.4无机元素 (2) 1.2.5其他成分 (2) 1.3 ................................ 人参的生理功能及药理活性 2 1.3.1增强免疫功能 (2) 1.3.2抗衰老 (2) 1.3.3抗肿瘤 (3) 1.3.4增强学习和记忆能力 (3) 1.3.5保护心血管系统 (3) 2 实验部分 (5) 2.1 ............................................ 实验材料 5 2.2 人参皂苷的提取分离 (5) 2.2.1 人参皂苷的提取分离原理 (5) 2.2.2 人参皂苷提取和苷元分离工艺流程 (5) 2.3 ........................................ 人参皂苷的检识 7 2.3.1 显色反应 (7)
人参稀有皂苷的研究
万方数据
万方数据
万方数据
人参稀有皂苷的研究 作者：张乐， 宋凤瑞， 王琦， ZHANG Le， SONG Feng-rui， WANG Qi 作者单位：张乐,ZHANG Le(吉林农业大学,中药材学院,吉林,长春,130118;中国科学院长春应用化学研,究所,吉林,长春,130022)， 宋凤瑞,SONG Feng-rui(中国科学院长春应用化学研,究所,吉 林,长春,130022)， 王琦,WANG Qi(吉林农业大学,中药材学院,吉林,长春,130118) 刊名： 长春中医药大学学报 英文刊名：JOURNAL OF CHANGCHUN UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 年，卷(期)：2010,26(2) 被引用次数：2次 参考文献(15条) 1.唐斌人参皂苷药理作用研究进展[期刊论文]-西南军医 2005(03) 2.高爽;汤淳;刘乃侨论人参的成分及人参皂苷的药用价值[期刊论文]-辽宁经济职业技术学院辽宁经济管理干部学院学报 2008(01) 3.张萍;王金东;肖新月人参化学成分分析方法的研究进展[期刊论文]-中草药 2004(12) 4.罗登林超临界CO2反相微乳萃取人参中人参皂苷的研究[期刊论文]-中草药 2007(07) 5.张乐;宋凤瑞;王琦不同加工方法对人参皂苷转化的影响 2009(07) 6.宋凤瑞;张语迟;王淑敏一种增加人参总皂苷提取物中稀有皂苷含量的方法 7.吕永俊;徐绥绪人参皂苷的化学研究方法[期刊论文]-沈阳药学院学报 1985(01) 8.Cha B C;Lee S G Preparation of ginsenoside-Rh2 from dammarane saponins of Panax ginseng leaves 1994(04) 9.郑长龙;鱼红闪;金凤燮人参稀有皂苷C-K的分离与纯化[期刊论文]-大连轻工业学院学报 2003(03) 10.田京伟;傅风华;杨建雄20(S)-人参皂苷Rg3对脑缺血大鼠脑线粒体损伤的保护作用[期刊论文]-中国药理学通报 2006(02) 11.王庭富;孟正木人参皂甙Rg3对免疫功能的影响[期刊论文]-中国药科大学学报 1999(02) 12.梅少林;袁红艳;曹湘博人参皂苷Rg3对HSE模型鼠的治疗作用及免疫调节效应[期刊论文]-吉林大学自然科学学报 2007(01) 13.张晶;王世荣;陈全成人参皂苷Rg3(R),Rg3(S),Rg5/Rk1对乙醇致小鼠记忆阻碍改善作用的影响[期刊论文]-吉林农业大学学报 2006(03) 14.宋志英;李兆艾;智明春人参皂苷Rg3对大鼠子宫内膜异位症异位囊肿抑制作用的观察[期刊论文]-中国药物与临床 2006(04) 15.倪劲松;辛颖;王心蕊20(S)-人参皂苷Rg3对Lewis肺癌生长及转移的抑制作用[期刊论文]-肿瘤防治研究 2006(05) 引证文献(2条) 1.郑培和.王英平.肖盛元人参皂苷高效液相-质谱测试条件优化[期刊论文]-人参研究 2010(4) 2.卢新生.苟如虎.刘伯渠.王亚玲.张海玲人参果的药理活性研究进展[期刊论文]-安徽农业科学 2010(24) 本文链接：https://www.wendangku.net/doc/a99218104.html,/Periodical_cczyxyxb201002071.aspx
人参总皂苷
人参总皂苷 Renshen Zongzaogan TOTAL GINSENOSIDE GINSENG ROOT 本品为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根茎经加工制成的总皂苷。 【制法】取人参，切成厚片，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，煎液滤过，合并滤液，通过D101型大孔吸附树脂柱，水洗脱至无色，再用60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，滤液浓缩至相对密度为1.06～1.08(80℃)的清膏，干燥，粉碎，即得。 【性状】本品为黄白色或淡黄色的粉末；微臭，味苦；具吸湿性。 本品在甲醇或乙醇中易溶，在水中溶解，在乙醚或石油醚中几乎不溶。 【鉴别】(1)取本品0.1g，置试管中，加水2ml，用力振摇，产生持久性泡沫。 (2)取本品0.1g，加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材1g，加水100ml煎煮2小时，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1cm，柱高为15cm)，用水洗至无色，弃去水液，再用60％乙醇20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇10ml 使溶解，作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品与人参皂苷Re 对照品，加甲醇溶解制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点。 【检查】粒度依法检查(附录ⅪB第二法)，能通过120目筛的粉末不少于95％。 干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(附录ⅨG)。 总灰分不得过6.0％(附录ⅨK)。 炽灼残渣不得过6.0％(附录ⅨJ)。 重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法(附录ⅨB)测定，铅不得过百万分之三；镉不得过千万分之二；砷不得过百万分之二；汞不得过千万分之二；铜不得过百万分之二十。 有机氯农药残留量照农药残留量测定法(附录ⅨQ有机氯农药残留测定)测定：六六六(总BHC)不得过千万分之一；滴滴涕(总DDT)不得过百万分之一；五氯硝基苯(PCNB)不得过千万分之一。 【特征图谱】照高效液相色谱法（附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，载碳量11％)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为每分钟1.3ml；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷’Re峰计算应不低于6000，按人参皂苷Rd峰计算应不低于200 000。 时间（分钟）流动相A(%) 流动相B(%) 0～30 30～35 35～60 19 19→24 24→40 81 81→76 76→60 参照物溶液的制备取人参皂苷Rg l对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rd对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg、人参皂苷Re 0.5mg和人参皂苷Rd 0.2mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品30mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇超声处理使溶解
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究 发表时间：2014-08-26T15:20:35.077Z 来源：《医药前沿》2014年第20期供稿作者：张高飞于玥邬晓鸥李军 [导读] 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 张高飞于玥邬晓鸥李军 (深圳市药品检验所 518057) 【摘要】目的建立保健食品中人参总皂苷含量的测定方法。方法用水提取人参总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的人参皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，在560nm下测定吸光度。结果人参总皂苷在0.0722～0.2165mg质量范围内与吸光度线呈良好的线性关系，平均回收率为95.9%。结论本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 【关键词】保健食品人参总皂苷分光光度法 【中图分类号】R93 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）20-0217-02 皂苷类成分是参类中的主要活性物质, 具有滋补强壮，增强免疫，抗疲劳的功效[1]，常用的检测方法为紫外分光光度法[2-5]。目前市售含参类的保健食品有片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等，均是以总皂苷含量来评价其产品的质量和功效。其测定方法大多都是按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的方法检测[6]，在实际应用中，主要存在以下问题：1、固定的树脂柱载样量与不确定的样品总皂苷含量之间的矛盾，部分样品存在柱容量超载的情况，测定结果偏差严重。2、部分样品经过大孔树脂柱除杂后，仍存在干扰比色测定的杂质。3、操作步骤欠规范，导致测定结果重现性差。本文针对总皂苷的提取方式、以及测定过程中的参数进行研究，建立了保健食品中人参总皂苷的测定方法。 1 仪器、材料与试药 岛津UV2450紫外分光光度计；瑞士梅特勒XS105DU电子天平；上海一恒电热恒温水浴锅；人参皂苷Re(中检所，批号110754-200822，含量88.8%)；儿童装高丽红参液，舒灵胶囊，舒慰快牌胃肠液均购自市场；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1供试品溶液的制备 固体试样：称取1 g样品，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超声提取30 min，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，进行萃取。 液体试样：吸取试样10 mL至分液漏斗中(含乙醇的保健食品，水浴挥尽乙醇)，加水至约25 mL，进行萃取。 在已处理好的试样中加入20 mL水饱和正丁醇，振摇萃取3次，取正丁醇层(必要时可离心)，合并提取液，用20 mL氨试液洗涤3次，置蒸发皿中100℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，甲醇定容，即得。 2.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取人参皂苷Re标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于10 mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，再加入0.8 mL高氯酸，使残渣溶解，于60℃水浴加热10 min，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5 mL，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度。取供试品溶液1 mL于10 mL具塞比色管中，自“水浴挥干溶剂”起操作。 3 方法学考察 3.1线性关系 取人参皂苷Re对照品0.01804 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为标准溶液，精密量取标准溶液0.4、0.6、0.8、 1.0、1.2 mL分别置10 mL比色管中，水浴蒸干，显色，以对照品的质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：y=4.4807x－ 0.0886，r=0.9997。结果表明，人参皂苷Re对照品质量在0.0722～0.2165 mg之间与吸光度呈良好的线性关系。 3.2 萃取次数 取舒灵胶囊、儿童装高丽红参液，按2.1制备样品水提取液，用水饱和正丁醇分别萃取3、4、5次，结果表明，萃取3次可将人参总皂苷提取完全(表1)。 表1 萃取次数比较结果 3.3热稳定性考察 由于正丁醇沸点较高，为此对人参皂苷的热稳定性进行考察，以便选取合适的水浴温度。取人参皂苷Re标准溶液0.6 mL，分别按60℃、100℃水浴蒸干、100℃水浴蒸干后继续放置30 min处理，测定结果分别为0.663、0.658、0.653，表明人参皂苷的热稳定性良好，因此水浴温度选为100℃。 3.4显色稳定性 取人参皂苷Re标准溶液0.3 mL，显色后每隔10 min测定其吸光度，结果表明，显色后的紫红色溶液不稳定，吸光度呈下降趋势，因此显色完成后需在10 min内完成测定。 3.5重复性试验 取舒灵胶囊按2.1下方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果表明本方法重复性良好(表2)。
稀有人参皂苷对癌症的放化疗副作用的改善
癌症放化疗所伴随而来的食欲不振、疲劳、呕吐恶心等副作用，往往让癌友们苦不堪言！其实，想要有效降低化疗后常见的不适症状、维持癌友体力并不难，只要在三餐之余，吃人参皂苷就可以有效改善这种情况。 一、放化疗好难熬？三大副作用成治疗阻碍。 为什么放化疗药物，会造成癌友诸多不适反应？放化疗是利用化学药物、放射线，来破坏器官内快速分裂的癌细胞，达到消灭癌细胞的一种治疗方式。但在这样的过程中，正常细胞也会受到药物的刺激干扰，而遭受破坏。特别是，人体内分裂快速的表皮、黏膜细胞，如骨髓、肠胃道、口腔及毛囊细胞等部位影响程度更大。甚至可能引起三大副作用的发生，成为癌友抗癌之路上的一大考验。 副作用一：口腔内部疼痛：化疗时，常会造成口腔粘膜充血、溃疡和水肿等问题，造成吞嚥困难、疼痛难耐的情况发生，使患者的进食意愿大幅降低。若未加以留意改善，不仅有营养摄取不足的疑虑，更可能造成体力不足，而无法应付下次疗程。 副作用二：肠胃道粘膜损伤：除了口腔部位的黏膜可能遭受放化疗刺激外，肠胃道黏膜也会受到一定的影响，出现噁心、上腹疼痛、呕吐等症状；同样容易降低患者的进食意愿，造成营养补给不足的问题出现。 副作用三：抵抗力下降。、化疗时因化学药物的关系，有可能会造成骨髓功能的受损，通常病患在化学治疗后7至14天中，白
血球指数大幅下降，虽然21至28天会逐渐恢复正常。但在这过渡期间，患者往往会有抵抗力下滑的情况发生，导致遭受细菌、病毒感染的机率会相对提高，若感染后处理不善，更有恶化的可能。 癌友食欲差？癌症治疗期间如何缓解上述三大常见的副作用，成为亲友们照护过程中的首要重点。想要减缓这些难缠的问题，究竟该怎麽做才正确呢？ 除了提醒癌友谨记进食后刷牙、保持口腔清洁的原则；注意避免生食，如生鱼片、生菜沙拉、泡菜等，水果也尽量洗淨削皮后再汆烫食用。并以高蛋白、高热量饮食为首要，加速体内蛋白质的合成及利用，有效增加肌肉质量才是饮食调理的重要关键。
细胞色素P450在人参皂苷生物合成途径中的研究进展
收稿日期：2012-01-13修回日期：2011-02-13＊ 人事部留学人员择优资助项目（2009-2011）：三七皂苷生物合成关键酶基因克隆及功能分析，负责人：黄林芳；国家自然基金重点项目（81130069）：道地药材形成的生物学实质，负责人：陈士林；国家自然科学基金（30900113）：基于宏量ESTs 的蛇足石杉转录组分析及石杉碱甲合成酶（HAS ）基因的鉴定研究，负责人：罗红梅。 ＊＊通讯作者：陈士林，本刊编委，教授，博士，中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所所长，主要研究方向：中药资源学，E-mail ：slchen@https://www.wendangku.net/doc/a99218104.html, 。 摘 要：细胞色素P450（CYP450）是一类超基因家族编码的单加氧酶，参与萜类、生物碱和甾醇 类等多种次生代谢产物的合成与代谢。CYP450对人参皂苷三萜碳环骨架进行羟基化和氧化等一系 列复杂修饰作用，是人参皂苷生物合成途径中的关键酶。近年来利用新一代测序技术及生物信息学分析等方法，从CYP450家族中筛选出参与人参皂苷生物合成的相关CYP450s ，并对候选基因 （CYP716A47） 进行了生物功能验证，进一步阐明了人参皂苷合成途径。本文对人参皂苷生物合成途径做简要介绍，并对近年来CYP450在人参皂苷生物合成途径中的研究进行综述，为阐明人参皂苷合成 途径及通过基因工程手段合成人参皂苷提供理论依据。 关键词：细胞色素P450氧化酶 人参皂苷 生物合成途径 doi:10.3969/j.issn.1674-3849.2012.01.007 细胞色素P450（Cytochrome P450monooxygenas －es ，CYP450）是一类超基因家族编码的含有血红素的 氧化酶类，分布于各种需氧生物体内，如植物、动物、真菌以及细菌等。在植物体内催化多种初生和次生代谢反应，参与萜类、生物碱类、脂肪酸、甾醇类、植物激素、信号分子、色素及植物抗毒素防御等合成与 代谢反应[1，2] 。CYP450具有多种催化机制，对多种底 物表现出催化活性，参与的反应可归为羟基化、环氧化和脱烷基化反应等[3]。CYP450根据氨基酸序列相 似性及系统进化关系，划分为不同家族与亚家族：同源性大于40%的为同一家族的基因成员；大于55%，则为同一亚族成员；并用数字和字母分别代表CYP450家族与亚家族的名字[4]。截止2011年，植物中共有5100个CYP450s 被分类和命名[5]。 人参皂苷是五加科人参属植物人参（Panax gin －seng C.A.Mey.）、西洋参（P.quinquefolius ）和三七（P.notoginseng ）的主要活性成分[6]，属于萜类化合物中的 细胞色素Ｐ４５０在人参皂苷生物合成途径中的研究进展＊ □牛云云 罗红梅 黄林芳 陈士林＊＊ 何顺志 （贵阳中医学院药学院贵阳550002） 中国医学科学院北京协和医学院 （药用植物研究所/濒危药材繁育国家工程实验室北京 100193）
稀有人参皂苷的制备方法及其抗过敏活性研究
稀有人参皂苷的制备方法及其抗过敏活性研究人参皂苷是五加科人参属植物（人参、西洋参、三七等）的主要药效成分,具有增强免疫、调节中枢神经、保护心脑血管、抗肿瘤以及抗疲劳等多种药理作用。人参皂苷分为常见人参皂苷和稀有人参皂苷,其中常见人参皂苷是指在人参属植物中含量较高的人参皂苷（如人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1等）,而稀有人参皂苷则是指在人参属植物中含量较低或不存在的人参皂苷,大都属于常见人参皂苷脱去部分糖基,或脱去糖基的同时母核侧链结构发生改变所产生的次级人参皂苷（如人参皂苷20（R/S） -Rg3、20（R/S）-Rh2、20（R/S）-Rh1、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3、 F4、Rg6、Rk3、Rh4等）。 药理研究表明,相比于常见人参皂苷,稀有人参皂苷具有更为突出的抗肿瘤、抗疲劳、抗氧化等生物活性。关于稀有人参皂苷抗过敏活性的研究进展较为缓慢,仅有的几篇关于稀有人参皂苷单体抗过敏活性的研究报道也只是停留在活性验证阶段,鲜少有关于稀有人参皂苷抗过敏活性的构效关系以及作用机制方面的研究,更没有利用稀有人参皂苷混合物（有效部位）或单体研制开发抗过敏中药新药的报道。 目前稀有人参皂苷的制备方法有酸催化降解法、碱催化降解法、酶降解法、微生物降解法等,但这些方法存在制备效率低、副产物多、制备成本高、环境污染等诸多缺点。因此,对稀有人参皂苷的新制备方法及其抗过敏活性进行深入研究,不仅具有重要的学术意义,亦对发掘稀有人参皂苷新的医药用途具有推动作
总皂苷的测定方法
总皂苷的测定方法（分光光度法） 本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。 本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。 一、方法提要 样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。 二、仪器 1.722分光光度计。 2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。 3.超声波振荡器。 三、试剂 1.甲醇（分析纯）。 2.乙醇（分析纯）。 3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。 4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。 5.高氯酸（分析纯）。 6.冰乙酸（分析纯）。 7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。 8.重蒸水。 四、测定步骤 1.样品处理： （1）固体样品 称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。 （2）液体样品 含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。 2.柱层析
以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。 3显色 在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。 4标准曲线的绘制： 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/mL）0、20、40、60、80、100μL（相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg），于10mL比色管中，用氮气吹干，同4.（3）显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。 人参总皂苷浓度为20～200μg/mL之间与吸光度值呈线性关系，相关系数（r）0.999。 五、结果计算 式中X——样品中总皂苷（以人参皂苷Re计）（g/kg或g/L）； m——试样质量或试液体积（g或mL）； V1——样品提取液总体积（mL）； V2——样品提取液测定用体积（mL）； m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量（μg）。
实验六 人参中人参皂苷的提取分离及鉴定
实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A 型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。
[目的要求] 1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。 2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。 [实验原理] 人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人参总皂苷无溶血作用，分离后，B型和c型人参皂苷有显著的溶血作用，而A型人参皂苷有抗溶血作用。 人参中除含有皂苷外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、甾体
人参皂苷Rk3的抗食管癌作用及机制研究
人参皂苷Rk3的抗食管癌作用及机制研究人参皂苷是人参、三七和西洋参等人参属植物的主要活性成分。近年来人参皂苷由于其良好的抗肿瘤活性及低毒副作用而被广泛研究。 稀有人参皂苷Rk3具有良好的水溶性,已被证明对非小细胞肺癌表现出显著的抗肿瘤活性。然而,有关人参皂苷Rk3对食管癌的抗肿瘤作用鲜少报道。 本实验旨在利用制备纯化得来的人参皂苷Rk3,通过一系列体内外的实验来探究其对食管癌细胞增殖的影响及其潜在的作用机制。主要研究结果如下:1.以70%Re的转化产物为原料,利用大孔吸附树脂分离出三醇组人参皂苷的混合物,再用制备液相色谱仪分离纯化得到Rk3的单体,浓缩干燥后检测Rk3纯度。 结果表明60%乙醇作为洗脱剂时,洗脱得到的三醇组人参皂苷的混合物含量最高,检测最终制备出的人参皂苷Rk3单体的纯度为97.8%。2.利用制备的人参皂苷Rk3进行实验,研究了Rk3对食管癌细胞Eca109和KYSE150以及正常人食管上皮细胞HET-1A细胞增殖和集落形成的影响。 另外,构建食管癌KYSE150细胞的荷瘤裸鼠模型考察Rk3在体内的抗肿瘤效果。采用腹腔注射给药治疗后,检测荷瘤裸鼠的体重和肿瘤体积的变化,并分析肿瘤、心、肝、脾、肺和肾等病理变化。 结果表明Rk3能在体外显著抑制食管癌细胞的增殖及降低细胞集落形成能力,但对HET-1A细胞没有明显影响。同时发现Rk3能明显抑制食管癌在体内的生长且毒副作用低。 3.考察了人参皂苷Rk3对细胞Eca109和KYSE150的周期分布、凋亡和自噬的影响。通过细胞周期分布分析、Hoechst 33342染色、透射电镜、AV/PI染色、western blot及免疫组化等分析表明,Rk3阻滞Eca109和KYSE150细胞周期于
参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量测定(精)
参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量测定 【摘要】目的用高效液相色谱（HPLC）法测定参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量。方法色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶,流动相为乙腈0.05%磷酸。结果人参皂苷Rg1在0.251～ 2.15 μg之间呈良好的线性关系；制剂中人参皂苷Rg1的平均回收率为98.73 % (RSD=2.7 % ) 。结论该方法简便、准确、分离效果好 ,无干扰 ,可用于参黄口服液的质量评价。 【关键词】参黄口服液; 人参皂苷Rg1；高效液相色谱 Abstract：ObjectiveTo establish the quantitative method of ginsenoside Rg1 in Shenhuang Oral Liquid by HPLC. Methods The column was packed with 5 μm Diamonsil C18 stationary phase. The mobile phase consisted of acetonitrile-water.ResultsThe linear range was 0.251～ 2.15 μg.The average recovery was 98.73%(RSD was 2.7%).ConclusionThe method was convenient and accurate. It can te used as a method of quality evaluation for Shenhuang Oral Liquid. Key words：Shenhuang Oral; Ginsenoside Rg1； HPLC 参黄口服液是以人参、黄芪、柴胡等8味药材制成的中药复方制剂，系中药6类新药，具有健脾益气、解郁提神的功效。方中人参为主药，本实验以高效液相色谱法对参黄口服液中人参皂苷Rg1进行含量测定研究。 1 仪器与试剂 仪器：高效液相色谱仪：日本岛津公司（LC-2010A）,乙腈为色谱纯，Dikma 公司。对照品人参皂苷Rg1（批号0703－200118），为中国药品生物制品检定所提供。 2 方法与结果 2.1 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；Dikma（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈0.05%磷酸（20∶80）；检测波长203 nm。 2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1 0.2 mg的溶液，即得。 2.3 供试品溶液制备精密量取本品10 ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，10 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，10 ml/次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，取正丁醇液蒸干，残渣加1%氢氧化钠溶液2 ml使溶解，置已处理好的D101大孔吸附树脂柱（直径1 cm，长10 cm）上，用1%氢氧化钠溶液50 ml洗脱，再用水50 ml洗脱，继用40%甲醇50 ml洗脱，最后用80%甲醇80 ml洗脱，收集80%甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，得到参黄口服液的色谱分离图。见图1。 2.4 精密度实验取人参皂苷Rg1对照品溶液，按样品测定法测定，共进样5次，结果RSD＝0.7%。结果表明，本法的精密度良好。
人参皂苷的提取
第一章综述 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。