生物化学实验常用缓冲液的配制方法

生物化学实验常用缓冲液的配制方法

1、0.2mol/L 磷酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L （pH 6.0）*配制量1L

*配置方法1.称取磷酸氢二钠.12水8.82 g。

2.称取磷酸二氢钠.2水27.34g。

3.用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L （含0.15mol/L 氯化钠的0.005mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液）

*配制量10L

*配置方法1.称取氯化钠87.66g。

2.用0.2mol/L pH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。

3.用去离子水稀释至10L。室温保存。

3、0.3mol/L 磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L （pH7.8）*配制量0.5L

*配置方法1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。

2.磷酸二氢钠.2水2.000g。

3.用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释10 倍使用。

4、0.2mol/L 乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L （pH4.6）

*配制量2L

*配置方法1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。

2.加入23mL冰乙酸，溶解。

3.用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。

5、0.2mol/L 磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 2.

6、4.6、6.6）*组份浓度0.2mol/L

*配制量各1L

*配置方法1.母液A（0.2mol/L 的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4.12 水143.256g，用去离子水定容至2L。

2.母液B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸.1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。

3. pH2.6、

4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：

pH值A（mL）B（mL）

2.6 109.0 891.0

4.6 467.5 532.5

6.6 72

7.5 272.5

4.按上表混匀后，4℃保存。

6、20×SSC 缓冲液*配制量1L（pH7.0）

*配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。

2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。

3.溶解于800mL去离子水中。

4.加入数滴10mol/L 氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.加去离子水定容至1L。

注意：按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC 可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L 氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0）*组份浓度0.15mol/L

*配制量1L

*配置方法1.准确称取氯化钠8.77g。

2.称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。

3.溶于800mL去离子水中。

4.用固体的氢氧化钠调pH 值为8.0。

5.加去离子水定容至1L。

8、1/15mol/L 的磷酸盐缓冲液（pH7.6）*组份浓度0.15mol/L

*配制量1L

*配置方法1.溶液甲（1/15mol/L 的KH2PO4溶液）：称取KH2PO49.078g，用去离子水溶解定容至1L。

2.溶液乙(1/15mol/L 的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4. 2水11.876g（或磷酸氢二钠.12水2

3.894g）用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。

9、5×TrisGlycineBuffer （SDSPAGE电泳缓冲液）

*组份浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS

*配制量1L

*配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tris 15.1g

Glycine 94g

SDS 5.0g

2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10、5×SDSPAGE Loading Buffer

*组份浓度250mM TrisHCl（pH6.8）

10％（W/V）SDS

0.5％（W/V）BPB

50％（V/V）甘油

5％（W/V）β巯基乙醇

*配制量5mL

*配置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1M TrisHCl1.25mL

SDS 0.5g

BPB 25mg

甘油2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2M-E的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右

1、1M TrisHCl * 组份浓度1M TrisHCl （pH7.4，7.6，8.0）* 配制量1L * 配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH 值。

pH值浓HCl

7.4 约70mL

7.6 约60mL

8.0 约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度

的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5M TrisHCl *组份浓度1.5M TrisHCl （pH8.8）*配制量1L

*配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH 值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随

温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer *组份浓度100 mM TrisHCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）

*配制量1L

*配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1M TrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500 mM EDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3 M 醋酸钠*组份浓度3M 醋酸钠（pH5.2）*配制量100mL

*配置方法1.称取40.8gNaOAc.3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer

*组份浓度137mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4

*配制量1L

*配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl 8 g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.42 g

KH2PO4 0.27g

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCl将pH 值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2 和0.5mM MgCl2。

6、10 M 醋酸铵*组份浓度10M 醋酸铵*配制量100mL

*配置方法1.称量77.1g 醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30mL

的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、TrisHCl平衡苯酚*配置方法

1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇*配置方法

1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：将TrisHCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS *组份浓度10％（W/V）SDS *配制量100mL

*配置方法1.称量10g高纯度的SDS 置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2 N NaOH *组份浓度2N NaOH *配制量100mL

*配置方法1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程

中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5N HCl *组份浓度2.5 N HCl *配制量100mL

*配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5 M NaCl *组份浓度5M NaCl *配制量1L

*配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose *组份浓度20％（W/V）Glucose *配制量100mL

*配置方法1.称取20gGlucose 置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的

去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、Solution I *组份浓度25mM TrisHCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （质粒提取用）*配制量1L

*配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1M TrisHCl（pH8.0）25mL

0.5M EDTA（pH8.0）20mL

20％Glucose（1.11M）45mL

dH2O 910mL

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的Soliution I中加入2mL的RNase A （20mg/mL）。

15、Solution II *组份浓度250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用）*配制量500mL *配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS 50mL

2N NaOH 50mL

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、Solution III *组份浓度3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用）*配制量500mL *配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc 147g

CH3COOH 57.5mL

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5M EDTA *组份浓度0.5M EDTA (pH8.0) *配制量1L

*配置方法1.称取186.1g Na2EDTA.2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH 值值8.0（约20gNaOH）。

注意：pH 值至8.0时，EDTA 才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1 M DTT *组份浓度1M DTT *配制量20mL

*配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，20℃保存。

19、10mM ATP *组份浓度10mM ATP *配制量20mL

*配置方法1.称取121mg Na2ATP.3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mM TrisHCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，20℃保存。