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非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值

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中国肺癌杂志2010年7月第13卷第7期Chin J Lung Cancer, July 2010, Vol.13, No.7

·临床研究·非小细胞肺癌患者中Survivin抗体

的临床意义及诊断价值

马丽岳文涛张丽娜王玥张春彦杨学惠

【摘要】背景与目的在世界范围内，恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因，且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入，肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin

自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应

用价值。方法采用RT-PCR方法获得Survivin cDNA，构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin，亲和层析方法纯化蛋

白，SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定，建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法，对89例健康志愿者、215例非

小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21(DE3)中以包

涵体形式高效表达，间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19.5%，特异性为

88.9%，Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性（P<0.05），Survivin自身抗体与

CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率，这

大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin，并建立检测Sur-

vivin自身抗体的间接ELISA方法，Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联

合检测中的重要作用，为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。

【关键词】原核表达； Survivin自身抗体；肺肿瘤；间接ELISA；联合检测

【中图分类号】 R734.2 DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2010.07.09

Clinical Significance and Diagnostic Value of Survivin Autoantibody

in Non-small Cell Lung Cancer Patients

Li MA, Wentao YUE, Lina ZHANG, Yue WANG, Chunyan ZHANG, Xuehui YANG

Department of Cellular and Molecular Biology, Beijing TB and Thoracic Tumor Research Institute, Beijing 101149, China

Corresponding author: Wentao YUE, E-mail:yuewt2000@https://www.wendangku.net/doc/aa14744821.html,

【Abstract】Background and objective Lung cancer is one of the most common cancers worldwide and causes more deaths per year than other cancers. Autoantibody was one hotspot in tumor marker research. But the clinical value of

Survivin autoantibody is not clear in lung cancer patients at present. The aim of this study is to dertermine whether Survivin au-

toantibody could be used as a diagnostic factor of lung cancer and what the clinical value of Survivin autoantibody was in non-

small cell lung cancer (NSCLC). Methods Survivin cDNA sequence was obtained by RT-PCR and inserted into prokaryotic

expression vector pET30a(+). Fusion protein of Survivin was expressed in E.coil BL21(DE3). SDS-PAGE and Western blot

were used to confirm the fusion protein. The Survivin protein was purified by Ni-NTA agarose affinity chromatography. At last,

indirect ELISA was used to detect Survivin autoantibody level in the serums of 215 samples from NSCLC patients and serums

from 20 samples of nonmalignant lung disease patients as well as 89 samples of healthy persons were also detected as control.

Results The recombinant vector pET30a(+)/Survivin was contructed and the Survivin protein is successfully expressed in

E.coil BL21(DE3) as inclusion body. Indirect EILSA was done to detect Survivin autoantibody in these serums using purified

Survivin protein. It was shown that the positive rate of Survivin autoantibody was 19.5%, with a specificity of 88.9% in NSCLC

patients. The expression of Survivin autoantibody has correlation with the volume of tumor and the metastasis of tumor in

NSCLC patients (P<0.05). In our research, positive detection rate of NSCLC was much improved by detecting Survivin au-

toantibody combined with CEA compared to other tumor markers combined with CEA. Conclusion In this study, purified

fusion protein of Survivin was successfully obtained. Indirect ELISA for detecting Survivin autoantibody in serum of NSCLC

patients using purified Survivin protein was established. Our results indicated that Survivin autoantibody as a latent value of

本研究受北京市科技新星基金（No.2006B34）、教育部出国留学回国启动基金和北京市优秀人才培养基金(No.20061D03)资助

作者单位：101149 北京，北京市结核病胸部肿瘤研究所，北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室（细胞生物学研究室）（通讯作者：岳文涛，Email: yuewt2000@https://www.wendangku.net/doc/aa14744821.html,）

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tumor marker could be used for clinical diagnosis in NSCLC patients.

【Key words】 Prokaryotic expression; Anti-survivin antibody; Lung neoplasms; Indirect ELISA; Combined detection

This study was supported by the grants from Beijing Novel Program (to Wentao YUE)(No.2006B34), Scientific Re-search Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars and the State Education Ministry and Beijing Research Foun-

dation for Excellent Talents (to Wentao YUE)(No.20061D03).

Survivin作为凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins, IAP）家族的重要成员，在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。Survivin几乎表达于所有的恶性肿瘤，但在人体正常终末分化的组织细胞中不表达或低表达。肿瘤自身抗体产生的机制虽然还不明确，但是同肿瘤相关抗原一样，其与肿瘤的发生发展存在密切的联系。据研究显示在多种癌症血清中可以检测到Survivin自身抗体的存在，如头颈癌、卵巢癌[1]以及消化系统肿瘤胃癌[2]、结肠直肠癌[3]、肝癌[4]等。在肺癌患者血清中同样可以检测到Survivin自身抗体[3,5]，但Survivin自身抗体能否成为具有肺癌诊断价值的肿瘤标志物以及与肺癌病理参数是否存在相关性，目前尚不统一。本研究旨在以Survivin融合蛋白原核表达为基础，建立肺癌患者血清中Survivin自身抗体的间接ELISA方法，探讨Survivin自身抗体在215例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者中可能存在的临床意义及诊断价值。

1材料与方法

1.1细胞系及菌株肺癌细胞系A549、E.c o i l菌株BL21(DE3)以及pET30a(+)载体为北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学实验室冻存。

1.2材料 pGEM-Teasy、T4 DNA连接酶、高保真酶PCR试剂盒购自NEB公司；限制性内切酶Nde I和Xho I购自宝拓科技发展有限公司；逆转录酶、Oligo(dT)15 Primer购自Promega公司；镍离子亲和层析柱购自威格拉斯生物技术（北京）有限公司；Survivn单克隆抗体购自优宁维公司；PCR引物合成及DNA测序由上海生工北京分公司生物技术有限公司完成。

1.3研究对象本研究使用的血清标本于2008年3月-2009年12月由北京市结核病胸部肿瘤研究所标本库收集并提供。89例健康志愿者，20例肺部良性疾病，包括10例肺结核、6例肺炎、2例支气管扩张症、2例错构瘤；215例NSCLC患者，男性147例，女性68例，平均年龄59.25岁，其中<60岁106例，≥60岁109例，年龄最大84岁，最小30岁。鳞癌83例，腺癌132例，临床分期：依据1997年国际抗癌联盟（UICC）TNM分期标准，其中I期-II期44例，III期-IV期161例。全组血清收集标准：健康对照组均身体健康，体检无异常表现，临床各项生化指标正常；肺癌患者血清标本以及肺部良性疾病患者血清标本均采集自首次到北京市胸科医院就诊，未经任何化疗和治疗，且肿瘤类型均经组织病理学证实，标本分装后于-80 o C冻存。

1.3方法

1.3.1 RT-PCR 取5×106对数生长期肺腺癌细胞系A549细胞，Trizol一步法提取总RNA，使用Access RT-PCR System （Promega A1280）反转录试剂盒，按照说明书操作获得cDNA。

根据Survivin基因组序列用primer premier 5软件设计引物，在正、负链的5’端分别引入Nde I和Xho I酶切位点，正义链：5’-TTAACTCGCGATCCATGGCAGCCAGC-3’，反义链：5’-AATACATATGATGGGTGCCCCGACG -3’）。取cDNA模板2 μL、2 U/μL高保真DNA聚合酶1 μL、10 mmol/L dNTP 1 μL、10 mmol/L上、下游引物各1 μL、10×PCR buffer 5 μL，补水至50 μL。热启动95 o C、5 min，循环参数为94 o C、30 s，56 o C、45 s，72 o C、1 min，共30个循环，72 o C延伸10 min，4 o C终止反应。1.3.2表达载体pET30a(+)/Survivin的构建和鉴定 PCR 产物克隆入载体pGEM-Teasy中，转化感受态细胞E.coli DH5α，蓝白斑筛选，限制性内切酶Nde I/Xho I双酶切初步鉴定重组质粒，挑选阳性克隆菌株，扩增并提取pGEM-Teasy/Survivin质粒。Nde I/Xho I双酶切pGEM-Teasy/ Survivin和pET30a(+)，65 o C、20 min酶灭活，切胶回收酶切片段。pET30a(+) 1 μL、pGEM-Teasy/Survivin 3 μL、T4连接酶1 μL、2×T4连接buffer 5 μL，4 o C连接过夜，构建表达载体pET30a(+)/Survivin，并转化感受态细胞E.coli DH5α，挑取克隆菌株，扩增提取质粒，PCR及双酶切鉴定的阳性克隆菌株送往上海生物技术有限公司北京分公司进行测序，将测序结果正确的pET30a(+)/Survivin转化入E.coli BL21(DE3)中，用含45 μg/mL卡那青霉素LB固体培养基37 o C过夜培养。

1.3.3 pET30a(+)/Survivin在E.coli BL21(DE3)中的诱导表

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达挑取pET30a(+)/Survivin/E.coli BL21(DE3)克隆菌斑，37 o C、250 rpm过夜振荡培养，按照1:100比例接种于LB-kan+液体培养液（含30 μg/mL卡那青霉素的LB），37 o C、250 rpm培养至OD600约0.6-0.8时，以终浓度为0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.8 mmol/L、1 mmol/L IPTG诱导菌液3 h，分别取1 mL菌液，12 000 rpm离心1 min收集菌体，取50 μL 2×loading buffer与菌体充分混匀、100 o C水浴5 min，离心后取10 μL上清用于12% SDS-PAGE电泳分析，筛选最适IPTG诱导浓度，同时设空载体pET30a(+)以及未诱导pET30a(+)/Survivin作为阴性对照。

1.3.4 Survivin融合蛋白的Western blot鉴定取最适IPTG 诱导菌液样本10 μL，经12% SDS-PAGE电泳分离后，电转移至硝酸纤维膜上，5%脱脂奶粉4 o C封闭过夜，分别用1:500抗His抗体、1:1 000 Survivin单克隆抗体37 o C孵育2 h，PBST洗涤3次×10 min，1:10 000羊抗小鼠抗体-HRP 37 o C孵育1 h，PBST洗涤3次×10 min，ECL显色，Western blot分析。

1.3.5 包涵体的制备及蛋白纯化利用细胞分层分级技术，确定Survivin融合蛋白的表达形式。500 mL细菌培养液在最适IPTG浓度下诱导培养，收集菌体，冰浴超声破碎，7 000 rpm、4 o C离心20 min，收集沉淀，溶解于含15 mL 6 mol/L盐酸呱、10 mmol/L Tris?Cl（pH7.0）、10 mmol/L DTT的变性液中，4 o C过夜。次日7 000 rpm、4 o C离心20 min，收集上清，0.45 μm滤膜过滤，4 o C下以0.5 mL/min速度加入镍离子亲和层析柱中，而后分别用20 mmol/L、30 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L咪唑溶液洗脱目的蛋白。收集各洗脱峰流出液，分别取10 μL样本100 o C水浴5 min，经12% SDS-PAGE电泳确定并回收含有Survivin融合蛋白的洗脱液，4 o C下PBS （pH7.4）透析3 h，冷冻干燥所得的蛋白干粉于-20 o C保存。

1.3.6间接ELISA方法的建立和血清样本的检测 Survivin蛋白（纯度>95%）以15 μg/mL溶于0.05 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6）中，100 μL/孔，4 o C静置过夜；弃去板孔内液体，200 μL PBST洗板3次；100 μL 5%脱脂奶粉37 o C封闭1 h；肿瘤患者血清1 μL/孔，37 o C孵育2 h；200 μL PBST 洗板3次；100 μL 1:10 000稀释的羊抗人IgG-HRP， 37 o C 孵育1 h；200 μL PBST洗板4次；100 μL TMB显色液，37 o C避光显色5 min；100 μL终止液终止显色反应，自动酶标仪上读取450 nm处OD值。PBS作为阴性对照孔，1:400 Survivin单克隆抗体作为阳性控制孔，10份健康人血清标本作为阴性控制孔，帮助评价不同孔板间的差异以减少板间误差，空白孔调零。

1.3.7数据处理本实验中血清样品OD值均取复孔均值；采用SPSS 13.0软件进行数据整理和统计分析，χ2检验用于计数资料统计分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1 RT-PCR的结果Survivin基因RT-PCR扩增产物及阴性对照（PBS作为模板）分别取5 μL样本，经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图1示：在250 bp-500 bp DNA marker （上海生工DL2000）之间显示的DNA条带与人Survivin基因的cDNA 429 bp相符合，阴性对照无条带出现。

2.2重组质粒的鉴定重组质粒pGEMT-Teasy/Survivin双酶切后得到500 bp左右大小的片段，亚克隆至pET30a(+)中，Nde I及Nde I和Xho I酶切pET30a(+)/Survivin重组质粒，10 μL酶切产物样本经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析结果如图2示，单酶切产物与线型pET30a(+)/Survivin质粒的位置大小一致，双酶切产物在400 bp-500 bp之间有一条明显片段。酶切产物测序结果经BLAST比对，与GenBank上所报道的人Survivin基因相一致，pET30a(+)/Survivin表达载体构建成功。

2.3 Survivin蛋白的表达及鉴定菌液经不同浓度IPTG诱导，收集并制备样本，点样于12%SDS-PAGE电泳，分析结果如图3示，在约19 kDa处出现一新蛋白条带，其含量约占菌体总蛋白的50%，而空载体转化的菌株无相应蛋白条带出现，说明新生蛋白条带非空载体pET30a(+)重组到E.coil BL21(DE3)所表达的蛋白；pET30a(+)/Survivin 未诱导菌株同样无相应蛋白条带出现，说明在无IPTG 诱导情况下，重组至E.coil BL21(DE3)中的Survivin基因是不能在E.coil BL21(DE3)中表达；而在IPTG诱导下，重组至E.coil BL21(DE3)中的Survivin基因可成功表达Survivin蛋白；由于诱导蛋白表达的IPTG浓度的不同，导致Survivin 蛋白表达量不同，以0.4 mmol/L IPTG浓度诱导E.coil BL21(DE3)时，Survivin蛋白表达量最高，为最优蛋白表达条件。Western blot分析结果如图4示：抗His标签抗体和抗Survivin单克隆抗体孵育的新生蛋白条带处，均可见与Survivin蛋白分子量大小相一致的特异性抗原、抗体反应条带，进一步证实新生条带为Survivin蛋白。

2.4 Survivin融合蛋白的纯化利用细胞分层分级技术确定Survivin蛋白在E.coil BL21(DE3)中是以包涵体形式大量表达。Survivin融合蛋白的C端含有6×his标签，采用镍离子

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亲和层析方法纯化蛋白，利用不同浓度咪唑洗脱液洗脱蛋白，并将超声后的上清液及不同浓度的咪唑洗脱液收集行12% SDS-PAGE 电泳如图5示，菌体冰浴超声后上清中未见Survivin 蛋白条带，说明Survivin 蛋白未表达在细菌的周质腔中；而在含有20 mmol/L 、30 mmol/L 、50 mmol/L 咪唑的洗涤液中可见大量的杂蛋白，说明低浓度咪唑起到了去除杂蛋白的作用；而当洗脱液中的咪唑浓度为100 mmol/L 时，可将Survivin 蛋白洗脱下来，经透析、浓缩获得纯度在95%以上Survivin 蛋白。

2.5 NSCLC 患者血清中Survivin 自身抗体的检测及临床意义利用间接ELISA 方法检测血清中Survivin

自身抗体的含

2 000 bp 1 000 bp 750 bp 500 bp 250 bp

100 bp

图 1 Survivin 基因PCR扩增的结果。M ：DNA marker ；1：Survivin RT-PCR 产物；2：阴性对照。

Fig 1 PCR amplification of Survivin. M: DNA marker; 1: RT-PCR product of Survivin; 2: Negtive control.

M 1 2

图 2 重组质粒的酶切鉴定。M：DNA marker；1：pET30a(+)/Survivin质粒；2：单酶切产物；3：双酶切产物。

Fig 2 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmid. M: DNA Marker; 1: pET30a(+)/Survivin plasmid; 2: Single

restriction enzyme digestion; 3: Double restriction enzyme digestion.

M 1 2 3

10 000 bp

8 000 bp 5 000 bp 2 000 bp 1 600 bp 1 000 bp 750 bp 500 bp 400 bp 300 bp 200 bp

100 bp

M 1 2 3 4 5 6 7 8

116 kDa 66.5 kDa 45 kDa 35 kDa 25 kDa 18 kDa

图 3 不同浓度IPTG诱导的Survivin的表达。M：Protein marker；1：空载体pET30a(+)；2：0 mmol/L IPTG；3：0.1 mmol/L IPTG；4：0.2 mmol/L IPTG；5：0.3 mmol/L IPTG；6：0.4 mmol/L IPTG；7：0.8 mmol/L IPTG；8：1 mmol/L IPTG。

Fig 3 The expressions of pET30a(+) and pET30a(+)/Survivin induced at different IPTG concentraions. M: Protein marker; 1: pET30a(+); 2: 0 mmol/L IPTG; 3: 0.1 mmol/L IPTG; 4: 0.2 mmol/L IPTG; 5: 0.3 mmol/L IPTG; 6: 0.4 mmol/L IPTG; 7: 0.8 mmol/L IPTG; 8: 1 mmol/L IPTG.

图 5 Survivin蛋白的纯化。M：Protein marker；1：超声后上清；2：溶解的包涵体；3：20 mmol/L咪唑洗脱液；4：30 mmol/L洗脱液；5：50 mmol/L咪唑洗脱液；6：纯化的Survivin蛋白。

Fig 5 Purification of Survivin protein. M: Protein marker; 1: Supersonical supernatant; 2: Solved inclusion; 3: 20 mmol/L iminazole eluention; 4: 30 mmol/L iminazole eluention; 5: 50 mmol/L iminazole eluention; 6:

The purificationof Survivin protein.

M 1 2 3 4 5 6

116 kDa 56.5 kDa 45 kDa 35 kDa 25 kDa 18 kDa 14 kDa

图 4 Survivin蛋白的Western blot的鉴定。M：Protein marker；1：抗his单克隆抗体孵育；2：抗survivin单克隆抗体孵育。

Fig 4 The Western blot result of Survivin. M: Protein marker; 1: Anti-his

monoantibody; 2: Anti-Survivin monoantibody.

M 1 2

116 kDa 66 kDa 45 kDa 35 kDa

25 kDa

18 kDa 14 kDa

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表 1 临床病理参数与Survivin自身抗体表达之间的关系

Tab 1 The relationship between clinicopathological parameters and the expression of anti-Survivin antibody in NSCLC 量，其中89例健康志愿者的A 450最高值为0.683，最低值为0.162，平均值为0.427，标准差为0.115。以Mean+2SD 作为阳性血清样品的评判标准，A 450≥0.657即可判为Survivin 自身抗体阳性；反之，则判为阴性。Survivin 在215例NSCLC 患者血清的阳性率为19.5%，特异性为88.9%。而在20例肺部良性疾病患者血清中Survivin 抗体检测均为阴性，由于良性疾病的标本例数太少，统计学分析结果不能充分代表肺部良性疾病患者情况，只能以此作为参考。

Survivin 自身抗体与NSCLC 患者病理参数之间是否存在统计学意义上的相关性，目前还存在着争议，本实验认为Survivin 自身抗体在NSCLC 患者血清中的含量与肺部原发肿瘤的大小存在着明显的统计学意义上的相关性（P <0.05），即NSCLC 患者血清中Survivin 自身抗体检测为阳性时，肺部原发肿瘤体积≥3 cm 的可能性越

大。Survivin 自身抗体在NSCLC 患者中血清中的含量与肺部肿瘤存在远处转移也具有统计学意义上的相关性（P <0.05），即NSCLC 患者血清中Survivin 自身抗体检测为阳性时，NSCLC 患者的肿瘤易发生远处转移。而Survivin 自身抗体在NSCLC 患者中血清中的含量与NSCLC 患者的年龄、性别、是否吸烟、病理类型、淋巴结转移以及临床分期均无相关性，具体数据见表1。

2.6 肿瘤标志物的联合检测本实验通过对215例NSCLC 患者病历资料的整理及Survivin 自身抗体在NSCLC 患者血清中表达情况进行统计分析发现，CEA 与Survivin 自身抗体联合检测的阳性率为42.79%，明显高于癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA ）与神经元特异性烯醇化酶（neuronspecific enolase, NSE ）、鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma, SCC ）、细胞角蛋白（cytokeratin, CYFRA ）、胃泌素释放肽前体（pro-gastrin releasing peptide, ProGRP ）的联合检测的阳性率，具体数据见表2。

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中国肺癌杂志2010年7月第13卷第7期 Chin J Lung Cancer, July 2010, Vol.13, No.73 讨论

Survivin 是凋亡抑制蛋白家族中的最强的凋亡抑制因子。人Survivin 基因定位于17q25，全长1 447 kb ，含有4个外显子和3个内含子，编码142个氨基酸，蛋白相对分子质量约16.5 kDa 。Survivin 蛋白几乎表达于所有恶性肿瘤，而在成人终末分化组织不表达或低表达。肿瘤相关的自身抗体同肿瘤相关抗原一样与肿瘤的发生、发展存在着密切联系。目前研究显示在许多种癌症中均可以检测到Survivin 自身抗体的存在。为了探索Survivin 自身抗体在NSCLC 患者中可能存在临床诊断价值，本实验成功构建了原核表达载体pET30a(+)/Survivin ，诱导表达、纯化纯度在95%以上的Survivin 融合蛋白，并建立间接ELISA 方法对215例NSCLC 患者、89例健康对照以及20例肺部良性疾病患者进行Survivin 自身抗体的血清学检测，结果显示Survivin 自身抗体在NSCLC 患者血清中检测的阳性率为19.5%，特异性为88.9%，与目前的研究结果相类似。Yagihashi 等[6]利用间接ELISA 方法检测31例NSCLC 患者血清中Survivin 自身抗体，其阳性率为58.1%；在Rohayem 等[7]

研究显示51例肺癌患者的血清中Survivin 自身抗体的阳性率为21.6%；而Karanikas 等[8]

研究结果显示Survivin 自身抗体在76例NSCLC 患者血清中的阳性率为7.7%。几个实验组所得的Survivin 自身抗体的阳性率均与本实验的Survivin 自身抗体在肺癌患者血清中检测的阳性率不一致，分析其原因可能是由于样本来源、样本大小以及使用的评判标准不同，在实验结果上可能存在着一些差异，但在肺癌的研究中Survivin 自身抗体仍是个比较有意义的肿瘤标志物。到目前为止，Survivin 自身抗体在NSCLC 患者血清中表达量至今仍未能得到一个公认的阳性定量标准，还需大量实验进一步研究。

Survivin 自身抗体与癌症患者病理参数之间是否存在统计学意义上的相关性，目前还存在着争议，Karanikas 等[8]

研究结果显示，Survivin 自身抗体与NSCLC 患者的病

理参数之间的相关性无统计学意义上，仅能作为一个预后及药效评价的参考指标。而本实验认为NSCLC 患者血清中Survivin 自身抗体检测为阳性时，肺部原发肿瘤体积≥3 cm 的可能性越大，NSCLC 患者的肿瘤更易发生远处转移。肿瘤的转移与原发肿瘤的大小的联系紧密，原发肿瘤体积越大，肿瘤易发生转移。但是本实验经相关分析得出原发肿瘤大小与远处转移未存在明显相关性（r =0.167, P >0.05），因此本实验认为NSCLC 患者血清中的Survivin 自身抗体为阳性时，NSCLC 患者的肿瘤更易发生远处转移。这一结论为今后Survivin 自身抗体能否成为术前评估、肿瘤恶化程度及肿瘤远处转移的参考指标提供了潜在的研究价值。

20例肺部良性疾病患者血清中Survivin 抗体检测均为阴性，由于肺部良性疾病的标本例数太少，不能充分说明Survivin 自身抗体特异性较高这一优势，还需大量实验进一步证实。

Survivin 自身抗体在215例NSCLC 中的阳性检出率不是很高，为提高肿瘤的检测的敏感性，肿瘤标志物的联合检测成为肿瘤临床检测的趋势。目前以CEA 、NSE 、SCC 、CYFRA 、ProGRP 的联合应用最为广泛，但是这种组合并非是针对NSCLC 的临床检测所设计，敏感性不是很高。为了提高诊断的质量、寻找特异性和敏感性较高的肿瘤标志物，肿瘤标志物的不同组合的联合检测成为新的研究热点。本实验通过对215例NSCLC 患者病历资料的整理及Survivin 自身抗体在NSCLC 患者血清中表达情况进行统计分析发现，CEA 与Survivin 自身抗体联合检测的阳性率为42.79%，明显高于CEA 与NSE 、SCC 、CYFRA 、ProGRP 的联合检测的阳性率，大大提高了肿瘤标志物在NSCLC 检测的敏感性，为Survivin 自身抗体可能应用于肺癌的临床检测提供了广阔的应用前景。

总之，Survivin 自身抗体作为NSCLC 诊断的新亮点，其潜在价值越来越引起肿瘤研究者的广泛关注。Survivin 自身抗体与其它肿瘤标志物的联合检测在肿瘤临床诊断上具有广阔的研究前景，尤其是对于高危人群的筛选和肿瘤的早期诊断上，Survivin 自身抗体潜在的应用价值还需不断的探索。

参考文献

Taylor DD, Gercel-Taylor C, Parker LP. Patient-derived tumor-reactive antibodies as diagnostic markers for ovarian cancer. Gynecol Oncol, 2009, 115(1): 112-120.2

Koziol JA, Zhang JY, Casiano CA, et al . Recursive partitioning as an

Combinations of tumor markers Positive cases (n )

Positive rate (%)

CEA+Anti-Survivin 9242.79CEA+NSE 6630.70CEA+NSE+SCC 7333.95CEA+NSE+SCC+CYFRA 7735.81CEA+NSE+SCC+CYFRA+ProGRP

36.28

表 2 几种肿瘤标志物在NSCLC患者中的联合检测的结果

Tab 2 The combined detection result of tumor markers in NSCLC

中国肺癌杂志2010年7月第13卷第7期Chin J Lung Cancer, July 2010, Vol.13, No.7·712·

approach to selection of immune markers for tumor diagnosis. Clin Cancer Res, 2003, 9(14): 5120-5126.

3 Zhang JY, Casiano CA, Peng XX, et al. Enhancement of antibody detection

in cancer using panel of recombinant tumor-associated antigens. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2003 ,12(2): 136-143.

4 Zhang JY, Megliorino R, Peng XX, et al. Antibody detection using tumor-

associated antigen mini-array in immunodiagnosing human hepatocellular carcinoma. J Hepatol, 2007, 46(1): 107-114.

5 Megliorino R, Shi FD, Peng XX, et al. Autoimmune response to anti-

apoptotic protein survivin and its association with antibodies to p53 and c-myc in cancer detection. Cancer Detect Prev, 2005, 29(3): 241-248.6 Yagihashi A, Asanuma K, Kobayashi D, et al. Detection of autoantibodies

to livin and Survivin in sera from lung cancer patients. Lung Cancer, 2005, 48(2): 217-221.

7 Rohayem J, Diestelkoetter P, Weigle B, et al. Antibody response to the

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lung cancer. Cancer Lett, 2009, 282(2): 159-166.

（收稿：2010-03-08 修回：2010-03-29）

（本文编辑丁燕）

《中国肺癌杂志》所刊载王金万等作者论文被遴选为“2008年中国百篇最具影响国内学术论文”

2009年11月27日中国科学技术信息研究所在北京召开新闻发布会，向外界公布了2008年度中国科技论文

统计结果，同时公布了“2008年中国百篇最具影响国际和国内论文”。中国医学科学院肿瘤医院王金万、孙燕

等联合25家临床科研机构在《中国肺癌杂志》所刊发题为“重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC

随机、双盲、对照、多中心III期临床研究”一文［王金万, 孙燕, 刘永煜, 等. 重组人血管内皮抑素联合NP方案

治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心III期临床研究. 中国肺癌杂志, 2005, 8(8): 283-290.］被遴选为2008

中国年百篇最具影响国内学术论文之一。

该结果是由科技部直属的中国科学技术信息研究所公布的，代表了我国科技论文发展的最高水平。2007

年中国科学技术信息研究所首次发布我国百篇最具影响的优秀学术论文，受到学术界的广泛关注，2008年该

所重新修订了论文评定指标，力求做到客观、公平、公正、准确、可靠。论文学术影响的主要文献计量指标

为：论文的创新性；发表论文的期刊水平；是否处于研究前沿，是否属于研究热点；论文的合作强度；论文

的文献类型；论文的完整性；论文的参考文献情况；论文他引量。

王金万等在《中国肺癌杂志》所载论文入选“中国百篇最具影响国内学术论文”，标志着本刊学术影响力

的提高，本刊已成为肺癌相关领域重要科研临床成果的展示平台。

《中国肺癌杂志》编辑部

2009年12月

·消息·

凋亡相关基因Survivin在非小细胞肺癌中的表达及意义

凋亡相关基因Survivin 在非小细胞肺癌中的表达及意义张晓燕蒋军广翟展艺郑元元刘瑞芬张婧雯杨超孙曼（郑州大学第一附属医院河南省呼吸疾病研究所河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室，河南郑州450052）〔摘要〕目的研究Survivin 在非小细胞肺癌（NSCLC ）中的表达及临床生物学意义。方法采用免疫组化S- P 法检测Survivin 在NSCLC 及癌旁正常肺组织中的表达情况。采用TUNEL 法检测凋亡细胞，计算凋亡指数（AI ）。结果60例NSCLC 组织中Survivin 的阳性表达率为46.7%，20例正常肺组织的阳性表达率为10.0%，差异有统计学意义（P ＜0.01）。Survivin 的阳性表达与有无淋巴结转移、肿瘤的分化程度及TNM 分期有关（P ＜0.05），与NSCLC 患者的年龄、性别、肿瘤直径、病理分型、是否吸烟及有无胸膜转移无关（P ＞0.05）。结论Survivin 基因的异常表达可能在 NSCLC 的发生、发展中起到一定作用。检测Survivin 可能有助于临床TNM 分期和有无淋巴结转移的判断。〔关键词〕Survivin ；非小细胞肺癌；细胞凋亡；免疫组织化学〔中图分类号〕R734 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1005-9202（2012）11-2227-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.11.004 基金项目：河南省科技攻关重点项目（No.102102310133）通讯作者：蒋军广（1963-），男，教授，主任医师，主要从事老年呼吸疾病研究。第一作者：张晓燕（1985-），女，在读硕士，主要从事老年呼吸疾病研究。肺癌是当前发病率和死亡率极高的恶性肿瘤之一，在老年人群中高发。多项研究表明肺癌的发生不仅与原癌基因的激活、抑癌基因的失活导致细胞增生过度和分化异常有关，还与细胞凋亡异常有关。生存蛋白（Survivin ）是凋亡抑制基因，在肺癌的发生、发展中可能发挥重要作用。本实验探讨Survivin 的临床生物学意义及在非小细胞性肺癌（NSCLC ）的发病机制中的作用，以期为NSCLC 的早期诊断、治疗和预后评估提供实验依据。1对象与方法 1.1 一般资料2008年1月至2009年11月在我院胸外科手术切除且病理证实为NSCLC 的肺癌组织标本60例，男35例，女25例，年龄30 78〔平均（54?22.5）〕岁。鳞癌22例，腺癌38例，按组织学分级：高分化10例、中分化30例、低分化20例；按照2002年美国联合癌症分类委员会和国际抗癌联盟制定的TNM 分期标准：Ⅰ期17例、Ⅱ期19例、Ⅲ期18例、Ⅳ期6例；伴淋巴结转移27例，不伴淋巴结转移33例；病理学或影像学检查有胸膜转移26例，无转移34例。所有入选的肺癌病人术前均未接受任何抗肿瘤治疗。取20例NSCLC 癌旁正常肺组织（距肿瘤边缘大于3cm 并经病理切片证实为正常的肺组织）作为对照。1.2方法1.2.1 主要试剂末端转移酶标记技术（TUNEL ）凋亡试剂盒购于美国Promega 公司，植物过氧化物酶（POD ）转换剂购自美国罗氏公司，兔抗人Survivin 单克隆抗体、生物素-链霉亲合素复合物（S-P ）免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺（DAB ）显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.2.2 免疫组化染色采用S-P 法，主要步骤：石蜡切片脱蜡水化，于柠檬酸缓冲液中行微波抗原修复，双氧水阻断内源性过氧化物酶活性，非免疫性动物血清封闭山羊血清阻断非特异性反应，滴加一抗兔抗人Survivin 单克隆抗体，滴加生物素标记的二抗，滴加S-P 制剂，DAB 显色后自来水充分冲洗，苏木素复染，稀盐酸分化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜观察。1.2.3 细胞凋亡的检测采用TUNEL 法，主要步骤：石蜡切片脱蜡水化， 4%多聚甲醛固定，1?500蛋白酶K 工作液通透组织切片， 4%多聚甲醛后固定，缓冲液平衡切片，加入孵育缓冲液标记DNA 断裂链，载玻片浸入2倍柠檬酸缓冲液（SSC ）终止反应，荧光显微镜下分析样品，加入POD 转换剂转换，DAB 显色后自来水充分冲洗，苏木素复染，稀盐酸分化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜观察。1.2.4 Survivin 阳性结果判定及凋亡指数（AI ）的计算在 200倍视野下，随机选取5个有阳性细胞存在的视野进行计数，每个视野计数100个细胞，共500个细胞。Survivin 以胞质/胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。判定方法：（1）按阳性细胞所占百分数评分：0分：0%， 1分：＜10%，2分：10% 50%，3分：＞50%。（2）按细胞染色深浅评分：无棕黄色颗粒，与背景无区别为0分；有棕黄色颗粒，明显高于背景底色为1分；有染色较清晰的棕黄色颗粒，介于强弱之间为2分；有大量的深棕色颗粒，染色强为3分。综合染色强度和阳性细胞所占百分数进行判定，即（1）+（2）：最后得分≥4分为阳性表达（+），＜4分为阴性表达（－）。在40?10高倍视野下随机选取10个视野观察，计算凋亡细胞与所计数细胞总数的比值，即AI =凋亡细胞数/细胞总数?100%。1.3 统计学方法应用SPSS17.0统计软件进行分析，数据资料以x ?s 表示，采用χ2 检验的连续性校正及直线相关分析。2结果 2.1 Survivin 在NSCLC 中的表达及与临床病理特征的关系 Survivin 主要定位于胞质或胞核。60例NSCLC 组织中Survivin 的阳性表达率为46.7%（28/60）， 20例正常肺组织的阳性表达

TRIM29基因表达在非小细胞肺癌临床病理诊断中的意义

TRIM29基因表达在非小细胞肺癌临床病理诊断中的意义目的研究TRIM29在非小细胞肺癌中的表达情况并探讨其临床诊断价值。方法采用免疫组化检测依兰县人民医院2011年1月～2015年1月间收治的113例非小细胞肺癌手术治疗患者癌组织中TRIM 29 表达情况。结果TRIM 29 在肺鳞癌与肺腺癌中阳性率较高，均有明显高表达，差异具有统计学意义（P＜0.05），并且TRIM 29 在肺鳞癌中表达强度明显高于在肺腺癌中表达，差异显著，具有统计学差异（P＜0.05）。TRIM 29 表达与肺鳞癌组织分级、TNM 分期及淋巴结转移呈密切正相关性（P＜0.05），与肿瘤大小无关（P>0.05）。TRIM 29 表达与肺腺癌肿块大小、组织分级、TNM 分期及淋巴结转移呈密切正相关性（P ＜0.05）。且在非小细胞肺癌中TRIM 29 表达与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。结论TRIM29基因表达在非小细胞肺癌病理诊断中有重要意义，可提高病理诊断的正确率。 [Abstract] Objective To investigate the expression of TRIM29 in non small cell lung cancer and to investigate its clinical diagnostic value. Methods The expression of TRIM 29 in 113 patients with non small cell lung cancer，who treated by the people’s hospital of Yilan county from January 2011 to January 2015，was detected by immunohistochemistry. Results The positive rate of TRIM 29 in lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the lung was significantly higher，and the difference was significant （P＜0.05 ）. The expression of TRIM 29 in lung squamous cell carcinoma was significantly higher than that in lung adenocarcinoma，and the difference was statistically significant （P＜0.05 ）. The expression of TRIM 29 was closely related to the histological grade，TNM stage and lymph node metastasis （P ＜0.05 ），and was not associated with tumor size （P>0.05）. In lung squamous cell carcinoma，TRIM 29 expression was closely related to the histological grade，TNM stage and lymph node metastasis （P＜0.05 ），which was not related to tumor size （P>0.05）. And the expression of TRIM 29 in non small cell lung cancer was not related to the gender and age of the patients （P>0.05）. Conclusion The expression of TRIM29 gene in non small cell lung cancer is of great significance，which can improve the correct rate of pathological diagnosis. [Key words] Tripartite motif-containing 29（TRIM29）；Non-small cell lung cancer；Pathology；Diagnosis 肺癌是目前世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤，且近几年来呈逐年上升趋势，虽然近年来肺癌的治疗方法有了很大的进步，5年总生存率仅为10%[1]。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）约占肺癌的80%，主要包括腺癌及鳞癌，半数以上肺癌患者在确诊时已至晚期，临床主要以内科治疗联合化疗为主，但治疗效果一直不理想，大部分病人却忍受效果不佳的化疗所带来的毒性反应[2]，严重威胁着人类健康[3]。随着分子生物学技术的发展，越来越多的研究证实肺癌预后与许多分子标志物密切相关，对肺癌发生、发展分子机制的研究能为肺癌的治疗提供新的靶点。有研究者[4]发现TRIM29在NSCLC中表达有差

非小细胞肺癌免疫组化指标

非小细胞肺癌免疫组化指标非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）占所有肺癌的80%，可以分为不同的组织学类型，主要包括腺癌（≥ 40%）和鳞癌（30%），以及较为少见的大细胞癌（large cell carcinoma，LCC）（10%）。随着肺腺癌和鳞癌个体化治疗方案的日趋不同，临床强烈要求对不同组织学类型的NSCLC 明确诊断。对于绝大多数手术切除病例而言，经充分取材均能够正确诊断，但病理医师在实际工作中经常面临的是小活检标本（占70%）的诊断，此时有效的免疫标志物在辅助诊断和鉴别诊断中尤显重要。免疫标志物的重要性不仅体现在NSCLC 不同组织学类型之间的诊断和鉴别诊断，肺原发癌与诸多类型转移癌之间的鉴别诊断，还在于明确特征性的分子学改变（如EGFR、EML4-ALK），用于满足NSCLC 个体化治疗和预后判断的需要。在越来越多的免疫标志物中，如何选择简单而有效的抗体（组合）达到对NSCLC，特别是小活检标本的病理诊断和鉴别诊断目的，本文综合国内外权威文献形成以下共识。NSCLC 常用免疫标志物 1. 肺腺癌常用免疫标志物（1）TTF-1 TTF-1 是肺腺癌最常用的免疫标志物之一，75%-85% 的肺腺癌表达TTF-1，且常呈弥漫一致性的强阳性，约20% 的肺腺癌不表达TTF-1。TTF-1 在肺腺癌中的表达与分化程度和组织学类型有关，总体而言，肿瘤分化程度越差，TTF-1 越可能表达缺失，具有Ⅱ型肺泡上皮细胞/Calar细胞特征的腺癌几乎全部表达TTF-1，泌黏液性腺癌（浸润性黏液腺癌、胶样腺癌等）呈不同程度表达（表1）。 TTF-1 也表达于肺神经内分泌肿瘤（neuroendocrinetumors，NETs）、部分典型类癌（typical carcinoid，TC）、非典型类癌（atypical carci-noid，AC）、约50% 的大细胞神经内分泌癌（large cell neuroendocrine carcinoma，LCNEC）及90% 的小细胞肺癌（small cell lung carcinoma，SCLC）。通常认为肺鳞癌不表达TTF-1。因此，TTF-1 主要用于肺腺癌和鳞癌的鉴别，不能鉴别肺腺癌和肺NETs。在非肺源性肿瘤中，除了甲状腺癌几乎全部表达TTF-1 以外，少量子宫内膜、子宫颈、卵巢、乳腺和结直肠的腺癌也表达TTF-1。与Napsin A 不同，所有类型的肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）均不表达TTF-1。表1. TTF-1 和Napsin A 在不同组织学类型肺腺癌中的表达

Survivin表达与非小细胞肺癌预后关系的Meta

Survivin 表达与非小细胞肺癌预后关系的Meta 分析王洪河李林田辉（山东大学齐鲁医院，山东济南250012）〔摘要〕目的探讨细胞凋亡抑制蛋白存活素（Survivin ）的表达与非小细胞肺癌预后的关系。方法检索PubMed 以及CNKI 中文数据库中研究Survivin 表达与非小细胞肺癌预后关系的文献，并根据纳入和排除标准进行筛选，收集纳入文献的生存率，应用RevMan5软件对文献进行Meta 分析。结果共入选10篇文献，累计病例980例。对入选10篇文献进行一致性检验，P ＜0.01，适用随机效应模型，合并相对危险度（RR ）为1.55， 95%可信区间为1.21 1.97，P ＜0.001。结论 Survivin 的阳性表达可能是非小细胞肺癌不良预后的一个标志。〔关键词〕非小细胞肺癌；Survivin ；预后；Meta 分析〔中图分类号〕R734.2 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1005-9202（2012）04-0694-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.04.011第一作者：王洪河（1953-），男，主管药师，主要从事老年肿瘤辅助药物治疗的研究。肺癌分子生物学预后因素是近年来肺癌研究领域的热点。Survivin 是凋亡抑制蛋白（IAP ）家族的新成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子。Survivin 基因蛋白在成人正常组织不表达或低表达而在大多数肿瘤和胚胎组织明显表达〔1〕，这一特点为肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点。研究证实Survivin 在肺癌中以高水平表达〔2〕。目前，有多项临床研究分析了Survivin 的表达与非小细胞肺癌（NSCLC ）预后的关系，由于存在实验方法、样本含量、人群和研究统计学方法的差异，单项研究结果难以推广，而且结论存在争议。为了更科学地评估Survivin 与NSCLC 预后的关系，减少各个研究间的偏倚和差异，本文运用 Meta 分析方法对以往研究结果进行综合定量分析，评价Sur-vivin 表达与NSCLC 预后的关系。1材料与方法1.1 文献检索以PubMed 及CNKI 中文数据库作为文献检索的主要来源。发表年限截止于2010年11月10日。以“Sur-vivin ”、“NSCLC ”或“Non-small cell lung cancer ”和“prognosis ”为检索词在PubMed 中检索，检索语种为英语。以关键词“非小细胞肺癌 ”、“Survivin ”、“预后”在CNKI 中文数据库中检索公开发表的文献，检索语种为中文。对于同一作者的多次报道文献，采用最新或最完整的报道，避免队列重叠。1.2选择标准1.2.1 文献纳入标准（1）研究Survivin 与NSCLC 预后的关系；（2）有完整的随访5年以上的预后指标如生存率、生存曲

小细胞肺癌治疗

小细胞肺癌治疗方法小细胞肺癌（SCLC）在肺癌中所占的比例约20~25%，据近年流行病学资料显示该类型已有下降的趋势。SCLC由肺Kulchitsky细胞恶变而来，WHO将其又分为燕麦细胞型、中间细胞型和混合细胞型三种。该病男性多发于女性；发病部位以大支气管（中心型）居多。临床特点为：肿瘤细胞倍增时间短，进展快，常伴内分泌异常或类癌综合征；由于患者早期即发生血行转移且对放化疗敏感，故小细胞肺癌的治疗应以全身化疗为主，联合放疗和手术为主要治疗手段。综合治疗系治疗小细胞肺癌成功的关键。小细胞肺癌手术治疗通常认为，所有经组织学、细胞学或临床诊断肺癌的患者，只要病期在Ⅱ期以前，且无绝对禁忌症，都可列为手术适应对象。但由于小细胞癌恶性程度高、转移早，一般认为不宜手术治疗。也有人提出，对于早期发现的年青人原发性肺癌，应当采用根治性外科治疗。小细胞肺癌化疗治疗小细胞肺癌的主要方法是化疗，化疗的疗效大多出现在治疗开始后的12周以内，其后很少能看到疗效的进一步增加。一般的说，使用中度强化化疗比常规计量化疗效果要好；但使用大剂量强化治疗并不能进一步提高疗效，反而使更多的病人需要住院治疗。对局限性小细胞肺癌的最佳治疗方案是否应为联合化疗在加胸步放疗，目前还有不同认识。关于化疗-放疗联合治疗方案中的最佳放疗时间问题，目前尚无定论。研究表明，使用对小细胞肺癌有效的化疗药物组成联合化疗方案，所达到的有效率及生存率均优于单药化疗。近年来许多单位使用支气管动脉造影灌注药物化疗治疗小细胞肺癌，普遍报道效果好，副作用较小。小细胞肺癌放射疗法由于单纯用化疗治疗小细胞肺癌的胸腔局部复发率高，所以主张在化疗过程中，辅以胸腔原发灶的放疗，以提高胸内肿瘤的局部控制率。放疗范围：原发灶及已有的淋巴转移灶，并包括较广泛的邻近淋巴引流区；近年来亦有人建议缩小照射范围，仅照射诱导化疗后临床的影像学诊断可发现的肿瘤。小细胞癌中医治疗中药治疗的优势在于扶正祛邪，标本兼治，能够根据肿瘤的形成原因，从根本上抑制消除肿瘤，并提高患者的免疫功能和体质，患者在治疗过程中痛苦

小细胞肺癌研究进展及与鳞癌和其他非小细胞肺癌(NSCLC)的鉴别诊断

小细胞肺癌研究进展及与鳞癌和其他非小细胞肺癌（NSCLC）的鉴别诊断 Update on small cell carcinoma and its differentiation from squamous cell carcinoma and other non-small cell carcinomas. William D Travis. Modern Pathology (2012) 25, S18–S30 小细胞肺癌（SCLC）占所有肺癌的14%，美国每年新诊断的病例超过30 000。基于其特征性的临床特点、对特定化疗的反应，遗传学特征和非常可靠的病理学诊断，SCLC是肿瘤学领域中非常独特的恶性肿瘤之一。一、SCLC分类的历史教训自从1962年Kreyberg提出燕麦细胞和多角形细胞类型以来，SCLC的组织学亚型分类发生了重要变化。其中，1981年WHO分类创造的“中间型”这一亚型是个失败。因为（1）临床医生无法明确到底是SCLC或者NSCLC；（2）病理专家之间的诊断重复性很差；（3）不清楚与这一类型相对应的临床应用。一直有少数疑难SCLC病例难以分类，而目前的分类只有两种亚型：纯粹的SCLC和复合性SCLC。病理学家需要尽可能做出SCLC或NSCLC的诊断。如果在一个疑难病例中存在诊断困难，该疑问应该反映在诊断附加的评论中。二、SCLC组织学特征光镜下，SCLC细胞体积小，圆至梭形，缺乏胞浆，精细的颗粒状核染色质，核仁缺乏或不明显，常见核型。挤压的人工假象可导致核染色质的拖尾或流水样

改变，常见广泛坏死。核分裂指数高，平均80/2 mm2。在小活检中，由于样品有限可能难以确定核分裂，也可能缺少坏死。肿瘤常呈弥漫片状，或菊形团样、外周栅栏状、器官样巢状、流水状和缎带状排列。在坏死区域常见由于坏死瘤细胞的DNA溢出，呈嗜碱性膜状附着于血管壁上(Azzopardi effect)。松散的生长模式可能提示恶性淋巴瘤，尤其浸润至纵膈脂肪组织时。罕见情况下可出现假乳头状生长模式，这是由于血管旁瘤细胞仍然存活，而其余瘤组织已经坏死所导致的假象。如果出现非常显著的神经内分泌癌形态，并不能排除SCLC的诊断。如果SCLC的形态学很单一，就被简单的分类为小细胞癌。小活检和细胞学标本也可以确诊SCLC。事实上，在某些病例中，细胞学比活检组织能更可靠的做出诊断。在活检组织中，最重要的染色是高质量的HE染色。三、复合性小细胞癌在组织学上，定义一个肿瘤为复合性小细胞和大细胞癌，指的是肿瘤含有SCLC和至少10%较大的细胞（形态学上可明确为非小细胞癌）。在复合性SCLC 和大细胞癌（要求大细胞的数量最少不低于10%）之外，可有复合性SCLC和鳞状细胞癌以及腺癌（不要求最低限度的比例）、梭形细胞或巨细胞癌。复合性SCLC 的检出率取决于肿瘤大小、组织切片的数量、标本类型（尸检、外科切除或小活检）和判断的差异。在一系列外科切除的病例中，Nicholson发现有28%为复合性SCLC，其中16%为大细胞癌，9%为腺癌，3%为鳞状细胞癌。在切除的标本里因为得到了更好的固定，SCLC肿瘤细胞比小标本的肿瘤细胞显得要大一些。四、免疫组化

小细胞肺癌治疗过程

论持久战 ------小细胞肺癌的抗争之路沈阳糖果儿 “语不惊人誓不休”---话说借用如此高大上的标题只是为了在众多的文章、帖子当中能引起你的注意，希望这篇文章被你看到是因为我确信，当你收敛起此时或许悲痛欲绝，或许愤懑绝望，或许欲哭无泪的各种纷繁复杂的情绪，静静的读完这篇文章之后，你会发现上帝在为你关上房门的时候，真的悄悄的为你打开了一扇窗…… 小细胞肺癌——恶性程度高，复发转移快的低分化神经内分泌癌，曾经有人形容它就好似野草的种子，随风飘到哪里，就会在哪里生根发芽，听起来的确让人毛骨悚然…….不过，小细胞肺癌确是所有的肺癌之中唯一可能治愈的肺癌类型，是的，你没有看错，可以治愈！当然，这个结论并不是我得出的，而是父亲确诊之初，我的主治医生告诉我的，也正是这简简单单的一句话，让当时已经绝望的我重新升腾起了希望，看到了黎明的曙光。父亲于2015年九月二十八日因咳痰有血丝，到当地市医院做肺部CT平扫，医生感觉问题严重，于是我第二天立刻安排父母来沈阳，并于中国医科大学附属盛京医院做相关检查，肺部增强CT诊断提示：左肺上叶占位，注意中心性肺癌，伴远端阻塞性肺炎，左肺上动脉受侵；右肺中上叶小结节，性质待定；纵膈及左肺门肿大淋巴结；右肺散在炎症；左侧少量胸腔积液；双肺弥漫肺气肿。当天下午气管镜失败，没有取出组织，无法做病理。在我茫然无措之际，一位医生提醒我，可以拿着现有的检查结果让医生做经验性判断。第二天，我和先生带着仅有的两个检查结果（肿瘤标志物，肺部增强CT）跑了沈城几家三甲医院的肺科，肿瘤科，几位主任专家的结论基本是相同的，依据肿瘤标示物NSE的数值和病灶的位置，推测是中心型小细胞肺癌！当时临近十一长假，无论是穿刺，气管镜，PETCT都要等到十一之后，如果我们要继续做检查，取组织，做病理，那么我们至少还要二十天之后才能开始治疗，等还是不等？感谢网络，虽然它虚无缥缈，虽然它有太多的不可信，不确定，但是就是那一晚，它让我对小细胞肺癌这个我之前从未听过的名词有了一个大致的了解——恶性程度高，复发转移快，化疗、放疗敏感——这一切信息让我做出了一个在当时看来很冒险很激进的决定：马上开始化疗！是的，我们不能等，我们等不起，我选择相信几位专家主任的经验推测，小细胞肺癌---化疗。简述一下父亲的整个治疗过程：一化入院（2015.10.1—10.9） EP方案：奈达铂30mg, D1-3 依托泊苷100mg D1-5 10.01 化验：白细胞5.8 （3.5—9.5）红细胞4.75 （4.3—5.8）血小板164 （125-350） 10.08 化验白细胞4.8 （3.5—9.5）红细胞4.52 （4.3—5.8）血小板157 （125-350）二化（2015.10.22—10.28） EP方案：奈达铂30mg, D1-3 依托泊苷100mg D1-5 10．22 化验白细胞3.0 （3.5—9.5）红细胞4.36 （4.3—5.8）血小板126 （125-350） NSE 9.49 (0-20 ng/ml)

小细胞肺癌最前沿治疗综述剖析

小细胞肺癌最前沿治疗综述一、小细胞肺癌总论小细胞肺癌（SCLC）约占所有新发病肺癌总数的15%～20%。美国监测、流行病、最终结果（SEER）数据库的流行病学调查显示，在过去的30年中，SCLC的年发病率呈下降趋势。中国SCLC发病率虽然没有经过系统的调查，但总体上没有明显下降趋势，并存在着治疗不规范、重视程度不够的问题，与非小细胞肺癌（NSCLC）相比基础和临床研究较少，缺少循证医学证据。与其他恶性肿瘤相似，SCLC的治疗也秉承分期治疗的原则，手术仅适用于早期患者，能实施手术的患者仅占全部患者的5%。因此，化疗、放疗仍是SCLC治疗的主要策略。近年来胸部放疗使局限期SCLC 患者的3年生存率大约提高了5%，使胸部复发风险降低约25%，而预防性全脑照射（PCI）治疗也进一步改善了SCLC的临床预后。在20世纪60年代前，SCLC的治疗以手术为主，但远期疗效欠佳。此后两项随机临床试验的结果否定了手术治疗的地位，化放疗成为SCLC的主要治疗手段。近年来，多项研究显示，包括外科治疗的多学科综合治疗可改善患者生存。目前的共识是，对确定为临床I期（TN）的SCLC患者可行外科切除术治疗，但术前需要进行纵膈01-2分期。目前，前瞻性临床研究的方向主要围绕Ⅱ～Ⅲ期SCLC患者接受手术治疗能否获益，以及新辅助治疗和辅助治疗孰优孰劣等。胸部放疗既往局限期SCLC单独行化学治疗的胸部复发率高达 1

75%～90%，上世纪90年代的两项荟萃分析结果显示，在化疗中加入胸部放疗能够延长局限期SCLC患者的生存期。目前化疗联合胸部放疗已成为局限期SCLC的标准治疗。目前认为，联合胸部放疗的化疗方案以依托泊苷联合顺铂（EP）方案最具生存获益优势。2002年有随机Ⅲ期临床试验直接对比了EP与环磷酰胺联合表柔比星、长春新碱（CEV）方案的疗效，入组患者中有214例局限期SCLC患者，结果显示EP方案联合胸部放疗的生存获益优于CEV方案。随着化疗药物研究的不断深入，伊立替康联合顺铂（IP）方案已被美国国立综合癌症网络（NCCN）采纳为广泛期SCLC的一线方案。对于IP方案是否也能够与放疗联合用于局限期SCLC的治疗，有多项研究初步证实其具有较好的耐受性及疗效。日本西部胸部肿瘤协作组的一项Ⅱ期临床研究显示，EP方案联合同步胸部放疗序贯IP方案巩固化疗是局限期SCLC患者的可选治疗方案，但仍需Ⅲ期研究进一步证实。2010年美国临床肿瘤学会（ASCO）年会的一项回顾性研究显示，IP序贯IP联合放疗治疗局限期SCLC,与EP联合放疗相比有更好的中位生存期（MST）和2年生存率，且毒性可耐受。虽然该研究仅为回顾性研究，病例数较少，尚需头对头前瞻性随机临床试验来验证，但为我们未来的研究方向带来启示。据统计，广泛期SCLC胸部复发率超过50%。既往单中心临床试验显示，对于化疗后达到胸外病灶完全缓解及胸部病灶至少部分缓解的患

小细胞肺癌的治疗原则

小细胞肺癌的治疗原则小细胞肺癌的治疗 | 小细胞肺癌如何治疗 | 小细胞肺癌吃什么好小细胞肺癌（SCLC）占所有肺癌的20%~25%,其生物学行为与非小细胞肺癌明显不同，与吸烟密切相关，97%的病例有多年、大量吸烟史，临床特点是恶性程度高，容易转移，对化疗和放疗敏感，需采取以化学治疗为主的综合治疗。化疗是小细胞肺癌的主要治疗手段之一。临床上使用多药联合化疗的疗效达70%左右。对于局限期的小细胞肺癌，目前的标准治疗为化疗联合放疗。已有两个Mate分析结果表明：化疗联合放疗与单纯化疗相比，可明显改善患者的局部症状控制和生存期。化疗和放疗联合的方式有同期、序贯和夹心方法。随机试验显示对于局限小细胞肺癌，综合治疗过程中早期给予胸部放疗优于晚期放疗和巩固性胸部放疗。另一个随机临床试验初步分析了每日一次常规分隔放疗（180cCy/次；5次/周，持续5周，总量45Gy）与化疗[DDP60mg/（㎡.d），第1天+VP16 120mg/（㎡.d）共3天]同步治疗的疗效，显示2年生存率为42%。对于放疗使用的时机，从目前的临床研究结果来看，早期放疗或化疗与放疗同时进行，疗效优于晚期放疗或先化疗后放疗。一般认为对PS较好的局限期患者（PS＜2）应尽早开始放疗（化疗2~3个疗程后）或化疗、放疗同步进行，但对PS较差的局限期患者仍应采用先化疗后放疗的方法。对广泛期患者和局限期经化疗仍无法达到PR的患者以单纯化疗为主。此外，姑息放疗常有助于控制咳血、上腔静脉综合征、起到阻塞、喉神经受压和其他局部并发症。小细胞肺癌的一线治疗方案（1）　EP方案 PR依托泊苷80~120mg/㎡，ivggt，第1~3天顺铂60~80 mg/㎡，ivggt，第1天每3周重复1次。（2）　EC方案 PR依托泊苷100mg/㎡，ivggt，第1~3天卡铂AUG=5，ivggt，第1天每3周重复1次（3）　C A V方案 PR环磷酰胺800mg/㎡，ivggt，第1天多柔比星40~50mg/㎡，iv，第1天

非小细胞肺癌诊断治疗指南

非小细胞肺癌诊断治疗指南【概述】原发性支气管肺癌(简称肺癌)是起源于支气管上皮的肺部最常见的恶性肿痛。肺癌的发病率和死亡率是恶性肿瘤中连续60年来唯一逐年明显上升的肿瘤，约占我国全年恶性肿瘤死亡人数的1／4。从20世纪70年代到90 年代这20年中，肺癌死亡率上升了147.4％，成为我国城市人口中四大恶性肿瘤死亡原因之首。过去，肺癌发病率上升主要见于男性，但现在，女性患者急剧增加，男女之比由8：1降到2：1。能获得手术治疗机会的肺癌，仅占就诊肺癌患者总数的15％～20％，这些都说明肺癌威胁人类健康的严重性。

病因烟草和大气污染是引起肺癌的重要因素。另外，职业关系、饮食因素和遗传因素等也是引起肺癌的因素。病理以肺癌发生的解剖部位分为中心型肺癌和周围型肺癌。组织类型分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类，其中非小细胞肺癌包括鳞癌、腺癌和大细胞癌等。肺癌的播散方式有：直接提润、淋巴转移和血行转移。远处器官转移以肝脏、肾上腺、脑、骨骼和肾脏较多见。【临床表现】 1．支气管肺部表现①咳嗽：约有70％的肺癌患者主诉为咳嗽，刺激性咳嗽是肺癌最常见的症状。②咯血：约有50％的肺癌患者痰中带血丝或小血块．大口咯鲜血者少见。③胸痛；肿瘤累及壁层胸膜而引起胸痛，当肺尖

Pancoast瘤压迫臂从神经并累及颈交感神经时，不但发生上肢的剧烈疼痛，而且可出现Horner综合征。④发热：多因肿瘤阻塞支气管，发生阻塞性肺部炎症和肺不张所致。周围孤立性肺癌，有时也有高热，这可能为瘤体本身所引起，即所谓“癌性热”。 2. 肺外表现①胸内表现：如大量胸水可造成气短；声音嘶哑说明喉返神经受累引起了声带麻痹；患侧膈肌明显升高，呼吸时有反常运动，则为肿 18 第三章师部疾病19 瘤侵犯膈神经所致；上腔静脉受压造成上腔静脉综合征。②胸外表现：肺癌最多见的胸外表现是杵状指(趾)和增生性骨关节病，常累及手指、腕、膝

NCCN非小细胞肺癌临床实践指南2017

NCCN非小细胞肺癌临床实践指南2017.4版目录 ●肺癌的预防和筛查(PREV-1) ●临床表现和风险评估(DIAG-1) ●实性肺结节的随访（DIAG-2） ●亚实性肺结节的随访（DIAG-3） ●诊断评估原则（DIAG-A） ●初始评估和临床分期(NSCL-1) ●评估与治疗: ??I期(T1ab-2a，N0)，II期(T1ab-2ab，N1；T2b，N0)，IIB期(T3，N0)和IIIA期(T3，N1) (NSCL-2)??IIB期(T3侵犯，N0)和IIIA期(T4外侵，N0-1；T3，N1) (NSCL-4) ??IIIA期(T1-3，N2)和分散的肺结节(IIB、IIIA、IV期) (NSCL-7) ?肺多发癌(NSCL-10) ??IIIB期(T1-3，N3) (NSCL-11) ??IIIB期(T4，N2-3)和IV期(M1a): 胸腔或心包积液(NSCL-12) ?IV期(M1b): 有限病灶(NSCL-13) ●根治性治疗完成后的监测(NSCL-15) ●复发和转移的治疗(NSCL-16) ●转移癌的全身治疗(NSCL-17) ●病理评估原则(COL-A) ●手术治疗原则(NSCL-B) ●放射治疗原则(NSCL-C) ●新辅助及辅助化疗方案(NSCL-D) ●同步化放疗方案(NSCL-E) ●晚期或转移性肿瘤的全身治疗(NSCL-F) ●癌症幸存者护理(NSCL-G) ●针对基因变异患者的新兴靶向药物(NSCL-H) ●分期(ST-1) （杰）肺癌的预防和筛查（PREV-1）

●肺癌是一种独特的疾病，主要的致病因素是某个行业生产和推销的成瘾性产品。大约85%- 90%的肺癌是由于主动吸烟或被动吸烟(二手烟)所致。降低肺癌的死亡率需要有效的公共卫生政策以避免开始吸烟，美国食管和药品管理局(FDA)监管烟草产品以及其他控烟措施。 ●长期吸烟容易导致第二原发癌、治疗并发症、药物相互作用、其它吸烟相关疾病、生活质量降低和生存期缩短。 ●根据美国外科总医师的报告，主动吸烟 (https://www.wendangku.net/doc/aa14744821.html,/tobacco/data_statistics/sgr/2004/pdfs/executivesummary.pdf)和被动吸烟都可以导致肺癌。有证据表明，和吸烟者生活在一起从而吸二手烟的人群罹患肺癌的风险上升20%到30%(https://www.wendangku.net/doc/aa14744821.html,/books/NBK44324/)。每个公民都应被告知吸烟和暴露于烟雾环境可对健康产生危害、导致成瘾并可威胁生命，政府需要采取恰当的、有效的措施如立法、行政、管理或其他手段以保护所有的公民免于烟草的危害 (www.who.int/tobacco/framework/final_text/en/)。 ●肺癌的致癌物中还含有高度成瘾性物质尼古丁，这使问题进一步复杂化。降低肺癌死亡率需要广泛贯彻卫生保健研究和质量机构(AHRQ)指南 (https://www.wendangku.net/doc/aa14744821.html,/professionals/clinicians-providers/guidelines-recommendations/tobacco/i ndex.html)，以发现、劝告和治疗尼古丁成瘾患者。 ●吸烟者或有吸烟史的人发生肺癌的风险明显增高；对于这些患者，尚无可用的化学预防药物。如有可能，应该鼓励这些人参加化学预防研究。 ●推荐对选定的高危嗜烟者和有吸烟史者采用低剂量CT（LDCT）进行肺癌筛查（见《NCCN 肺癌筛查指南》）。 ●参见NCCN戒烟指南。临床表现和风险评估（DIAG-1）注解： a.多学科评估包括胸外科医生、胸部放射学家和肺科医生共同确定癌症诊断的可能性以及最佳诊断或随访策略。

免疫组化在纤支镜活检标本小细胞肺癌病理诊断中的应用

免疫组化在纤支镜活检标本小细胞肺癌病理诊断中的应用目的探讨纤支镜活检标本小细胞肺癌的临床、病理形态学和免疫组化特征。方法对31例纤支镜活检确诊的小细胞肺癌进行回顾性分析，以经典型类癌、不典型类癌、转移性肾细胞癌及恶性淋巴瘤各1例作为对照，复习其临床病理资料及免疫组化结果。结果小细胞肺癌细胞常阳性表达TTF1、AE1/AE3、SY、CgA、CD56，KI67核增殖指数多在50%以上，余抗体LCA、CD20、CD3、ALK、CD30、RCC、VIM、CD10阴性。结论免疫组化对纤支镜活检标本小细胞肺癌的病理诊断很有帮助，并能与其他肺原发或转移小细胞性恶性肿瘤进行鉴别。标签：纤支镜；活检；小细胞；肿瘤；免疫组化；病理诊断肺癌是我国最常见恶性肿瘤之一，近年来其发病率和病死率不断上升。小细胞肺癌（SCLC）占全部肺癌的15%～20%，是一种高度恶性肿瘤，生长迅速，可早期发生转移，目前主要采取以化疗和放疗为主的综合治疗措施[1]。随着医学科学的不断进步和临床需求，纤支镜活检技术在肺部疾患如肿瘤病理诊断中的应用越来越广泛。多数情况下，SCLC经过病理医师光镜下阅片就能得到确诊。少数情况下因肿瘤细胞量少、坏死及受机械挤压变形等因素的影响，难于仅凭HE切片确诊，此时需借助免疫组化标记进行辅助诊断，并与肺原发系列小细胞性恶性肿瘤及转移瘤鉴别。 1资料与方法 1.1一般资料选择2010年1月～2012年1月我院收治的经纤支镜活检确诊的小细胞恶性肿瘤患者，共35例，其中住院患者33例，门诊2例，男性25例，女性10例。确诊为SCLC的31例，经典型类癌1例，不典型类癌1例，转移性肾透明细胞癌（RCC）1例，ALK+间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）1例。临床表现根据发生频率高低依次为咳嗽、气促、痰血或咯血、胸痛、胸闷，个别伴发热、声嘶，无明显肺部症状2例。临床首诊为肺癌的22例，结核3例，炎症6例；”高血压病”、”四肢乏力”、颈部肿块各1例，因反复上腹痛伴黑便而诊断为”消化性溃疡”1例。上述所有不同类型肺原发癌的患者年龄40～78岁，平均60.53岁，伴有不同程度胸腔积液的5例。肺癌TNM分期，30例处于Ⅲ、Ⅳ期，3例Ⅱ期（含经典型和不典型类癌各1例）；RCC和ALCL患者均为男性，年龄分别76和49岁。胸部CT：多表现为肺部团块状、斑片状或大片密度增高影或占位，伴或不伴支气管闭塞或狭窄及肺不张。部分病例纵膈或肺门淋巴结增大考虑转移；影像学提示肝转移的2例，其中1例同时伴右肾上腺转移。支气管活检部位：右上叶3例，右中叶2例，右下叶6例，右中下叶3例，右主1例，左上叶3例，左下叶6例，左舌叶4例，左主4例。表现为新生物生长的20例，其中伴支气管堵塞者8例，伴管腔狭窄者12例；粘膜颗粒状或粗糙者11例。活检易出血者14例。

NCCN 2020.02 小细胞肺癌(中文)

肿瘤临床实践指南(NCCN Guidelines?) 小细胞肺癌（2020.v2） 1、NCCN小细胞肺癌指南2.2020版从1.2020版更新包括: SCL-E 1 of 4 度伐单抗联合化疗(依托泊苷联合卡铂或顺铂)已被作为首选一线治疗方案(第1类)，其次对于广泛的SCLC患者使用度伐单抗维持治疗 2、NCCN小细胞肺癌指南1.2020版（2.2019版）中的更新包括： 1.初始评估和分期（SCL-1） ●对于原发灶或转移灶活检或细胞学检查确诊小细胞癌或小细胞/非小细胞混合型腺癌的患者，初始评估内容作了2点修改和1点补充： ?CT平扫加增强扫描的检查部位在“胸部/腹部”基础上增加了“盆腔”；?PET-CT检查的指征，在原来“如果疑似局限期”基础上增加了一个指征：如果需要鉴别分期； ?新增“行分子谱分析（仅适用于未曾吸烟的广泛期患者）”，以帮助鉴别诊断和评估潜在的靶向治疗选择。 2.广泛期小细胞肺癌的初始治疗（SCL-5） ●对于在全脑放疗前接受系统性治疗的无症状脑转移患者，在每2个周期全身治疗后以及在治疗结束后应该复查脑MRI（首选）或CT平扫加增强扫描（SCL-6）。如果在系统性治疗期间出现疾病进展，则开始行全脑放疗。 3.初始治疗后的疗效评估和监测（SCL-6） ●新增1条对“预防性脑照射（PCI）”的脚注： ?在已经进行完全切除、病理分期为I-IIA（T1-2,N0,M0）的SCLC患者中，接受PCI的获益情况尚不清楚。参见“手术切除原则”（SCL-C）。 4.病理学检查原则（SCL-B） ●病理学评估中新增1条“复合型SCLC的定义”： ?复合型小细胞肺癌含SCLC和NSCLC两种组织学（鳞状细胞癌、腺癌、梭形/多形性、和/或大细胞）成分。不要求说NSCLC组织学成分的百分比最少需要多少；当有任何比例的NSCLC与SCLC一起出现时，就可称为复合型SCLC。 5.手术切除原则（SCL-C） ●有淋巴结转移的患者，术后辅助治疗方案根据淋巴结分期作了修改：