卵胞浆内单精子显微注射技术的临床应用
#临床医学#
文章编号:1002-0217(2008)03-0194-03
收稿日期:2007-08-30
作者简介:祁 强(1955-),男,安徽合肥人,副主任医师,(电话)0551-*******,(电子信箱)cw j929.1@https://www.wendangku.net/doc/ac8283835.html, 1
卵胞浆内单精子显微注射技术的临床应用
祁 强,朱健生,姚桂东,季 钢
(合肥市妇幼保健院 泌尿外科,安徽 合肥 230001)
C linical application of intracytoplasmic sperm injection in treating oligozoospermia,azoospermia and teratozoospermia
QI Qiang ,Z H U Jian -sheng,Y A O G ui -dong,JI G ang
Department of U rological Surgery,Hefei M aternal and Ch i ld Health Care Hospital,Hefei 230001,China
=Abstract >Objective:To study the cli nical effect of intracytoplasmic sperm i n jecti on (ICSI)i n treatment of oligozoospermia,azoosperm i a and teratozoospermia.Methods :T he data w ere gathered from 36male infer -tility cases w ith oligozoospermia,azoospermia or teratozoospermia within 44ICS I treatment cycles an d studied retrospectively.Re s u lts :In 44treatment cycles,450oocytes were obtai ned,among w hich 353w ere in m etaphase II (M II).The normal fertilization rate of M II oocytes w as 83%an d the cleavage rate,89.5%.There w ere 15cases of the clinical pregnancy and the rate w as 34%per cycle.Conclusion :ICSI i s an effec -tive m ethod i n treating infertility of oligozoospermia,azoospermia and teratozoospermia.
=Key words >i nfertility;in vitro fertilization (IVF);intracytoplasmic sperm injection (ICSI);embryo transfer;pregnanc
=摘 要>目的:探讨采用卵胞浆内单精子显微注射(I CSI)治疗少、弱、畸精子不育症的临床效果。方法:对36例少、弱、畸精子症不育者共计44个I CSI 治疗周期进行了回顾性分析。结果:44个I CSI 治疗周期共取卵450个,M ò期卵母细胞353个,M ò期卵母细胞正常受精率83%,卵裂率89.5%,临床妊娠15例,周期临床妊娠率为34%。结论:ICSI 对少、弱、畸精子不育症是一种有效的治疗方法。
=关键词>不育症;体外受精;卵胞浆内单精子显微注射(ICSI);胚胎移植;妊娠
=中图号>R 69812 =文献标识码>A
据医学统计表明,不孕症患者约占育龄夫妇的10%~15%,其中男方因素约占30%或更高,男方因素中大部分为少、弱、畸精子症患者,除少数因促
性腺激素缺乏、某些精索静脉曲张、逆行性射精等原因可用药物或手术给予纠正外,对大多数男性不育
缺乏特异、有效的治疗。自1992年Palermo 等采用卵胞浆内单精子显微注射(intracy toplasmic sperm injection,ICSI)治疗严重精液异常的男性不育症获得成功以来,该技术作为治疗男性不育的方法,在全世界被广泛应用
[1]
。国内首例ICSI 试管婴儿于
1996年10月在广东诞生[2]
。我们于2000年12月
至2005年12月采用ICSI 技术对36例男性因素不育症者进行了44个周期的治疗,报道如下。1 材料与方法
1.1 临床资料 我们采用ICSI 技术进行治疗的少、弱、畸精子不育症患者为2000年12月至2005年12月本院不孕门诊求诊者,不育年限2~13年。ICSI 治疗指征为:1少、弱、畸精子症,诊断标准参考1993年版5WH O 不育夫妇标准化检查与诊断手册6
[3]
。o严重少、弱、畸精子症的诊断则参照卢光
王秀的标准[4]:
一次射出的精液中精子密度[2@106
/
ml;精子密度>2@106
/ml ,但活动率<40%;精子密度>2@106
/ml,但畸形率>85%。同时夫妇双方染色体检查必须正常。采用ICSI 技术进行治疗的44个周期中,少、弱、畸精子症18个周期,严重少、弱、畸精子症26个周期。1.2 方法
1.2.1 卵巢超排卵及卵子收集 采用GnRH a+FSH 或HM G 长或短方案控制性排卵,至主导卵泡达18mm 时,肌注hCG 10000U 后36h 在B 超下经阴道取卵,并将卵细胞置于80IU/ml 透明质酸酶溶液中,反复吹打,消化去除卵丘颗粒细胞,然后移入胚胎培养液中清洗,将获得的M II 成熟卵子行ICSI 。
1.2.2 精子制备 所有男性患者取精前禁欲5~7d,于取卵当日取精液。采用密度梯度离心分离法处理精液,调整精子至适宜密度后,置37e 、5%CO 2培养箱备用。
1.2.3 ICSI 显微操作 采用Nikon 公司显微操作
仪。显微固定针及注射针由Cook公司或HUMAN-GEN公司提供。显微注射前在Falcon l006培养皿中加4排共12个培养液微滴,并加矿物油覆盖。1、2排4个PVP微滴加入处理后上游的精子悬液,3、4排中间6个培养液微滴加入M II卵母细胞,两侧微滴分别用于冲洗显微固定针及注射针。用显微注射针在PVP微滴中选取形态正常的活动精子并制动精子尾部,再从尾部将精子吸入注射针内,用显微固定针固定卵子。使第一极体位于6或12点钟位置,把注射针内的精子轻轻回推至针尖,从卵母细胞3点钟位置进针刺入胞浆内,并回吸胞浆直至破膜,可见胞浆和精子出现快速回流,再将回吸的胞浆与精子注入胞浆内,退出显微注射针。重复以上步骤直至全部的MII成熟卵子均被注射为止。
1.2.4胚胎培养与胚胎移植显微注射后的卵母细胞经冲洗后移入胚胎培养液,置37e、5%CO2培养箱培养,培养14~18h后换液并观察有无原核形成,38~42h有无2~4细胞胚胎形成,取卵后48~ 60h左右再次观察胚胎情况,并进行评分,选取最优的2~3枚胚胎移植至宫腔。移植后常规用黄体酮和(或)hCG黄体支持治疗。术后14~16d后行尿hCG检查,阳性者则14~16d后行B超检查,有孕囊、胎芽及胎心搏动者为临床妊娠。
2结果
44个周期共获卵450个,平均获卵数10.2个/周期,其中M II成熟卵子353个,成功进行了ICSI 的卵子为323个,双原核受精卵为269个,Mò期卵母细胞正常受精率为83%,其中卵裂241个,卵裂率为89.6%,优质胚胎127个,优质胚胎率为53%,优质胚胎为1~2级胚胎,即卵裂球大小相等、碎片少于20%[5],移植胚胎128个,平均移植2.9个/周期,临床妊娠15例(周期临床妊娠率为34%),3胎3例(均予以减胎),双胎3例,流产4例,共分娩婴儿14个,男婴6个,女婴8个,均未发现畸形。
少、弱、畸精子症患者中,严重少、弱、畸精子症26个周期,非严重少、弱、畸精子症18个周期,比较两者受精率、卵裂率及临床妊娠率无显著差异(P> 0.05),见表1。
表1不同的少、弱、畸精子症组ICSI治疗结果的比较
精液异常程度周期数(n)M II/ICS I卵数(个)受精率(%)卵裂率(%)临床妊娠率(%)非严重少、弱、畸精子症组18152/13980.58(112/139)89.29(100/112)33.33(6/18)严重少、弱、畸精子症组26201/18485.33(157/184)89.81(141/157)34.61(9/26) V2 1.280.020.01
P值>0.05>0.05>0.05
3讨论
严重少、弱、畸精子症患者,因精子穿透透明带及卵细胞膜的能力会明显的减弱而导致不育。临床上也发现正常的精液发生受精失败。对这些患者采用常规IVF治疗已不能满足临床需要。ICSI技术将精子人工穿越卵子透明带,加上制动精子时损伤精子膜,去除精子膜的稳定性便于物质渗透,同时对卵子的机械性刺激和卵胞浆的回吸从而激活卵母细胞,完成受精。本文治疗例数有限,仅44个治疗周期,研究结果有一定的局限性,但初步的研究结果显示严重少、弱、畸精子症患者,进行ICSI后其受精率、卵裂率、临床妊娠率与非严重少、弱、畸精子症患者进行ICSI的结果相比,均无显著差异(P> 0.05),ICSI受精不受精子密度、活动度及畸形率的影响,对少、弱、畸精子不育症是一种有效的治疗方法。
ICSI的操作是影响结局的重要因素之一。减少纺锤体损伤,是ICSI操作的关键步骤。多项研究表明,90%左右的卵母细胞纺锤体位于第一极体附近,故显微注射时多用第一极体作为卵母细胞纺锤体位置的定位参数。目前大多数实验室在行ICSI时,将极体放在6点或12点的位置,使注射针从3点处刺入,尽量减少对纺锤体的损伤,以利于提高受精率;但也有研究者将极体放在7点或11点的位置所得结果也相同[6],也有人认为极体放在7点或11点位置的效果会更好[7,8],如果能在纺锤体观察仪下行ICSI,有可能减少对纺锤体的损伤。近来有人采用激光制动精子,获得成功妊娠,这是一种新的制动方法[9]。曾勇等[10]报道,行ICSI后再行电激活可以提高受精率。
(下转第203页)
血症,呼吸道、腹腔或切口感染,甚至切口裂开,本组术后发生呼吸道感染3例,其中1例右半结肠切除术于术后咳嗽时突发切口裂开。故手术后要继续维持水电解质及酸碱平衡,加强支持治疗(如TPN),应用有效抗生素,咳嗽或腹压仍高者应予多头腹带包扎。远端肠管是否通畅是影响吻合口愈合的因素之一,术后肠功能恢复前自胃管注入液体石蜡和扩肛,有利于肠功能的恢复和吻合口的愈合。
总之,对结肠癌合并肠梗阻,无论是左半结肠还是右半结肠切除术,只要病人情况许可,施行一期切除吻合术是安全的,但要加强围手术期处理,特别是术中应行有效肠减压和清洁灌洗。否则,行分期手术较为安全。
=参考文献>
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(上接第195页)
ICSI术后所分娩的新生儿中先天性畸形的发生率与自然妊娠相近。ICSI绕开了正常受精的过程,也逃避了透明带对精子的自然选择与淘汰过程。性染色体畸形及易位,Y染色体微缺失是引起男性无精子症及严重少精子症的原因,通过ICSI技术可能会将来自父源性异常染色体的精子注射到正常卵子中,从而遗传给子代,故其遗传风险也相应增加。由于ICSI技术存在一定的遗传风险,因此我们认为少、弱、畸精子症患者应首先考虑人工授精(IU I)或常规体外受精(IVF);近年来也采用了一半常规体外受精,一半卵胞浆内单精子显微注射,优先使用常规体外受精胚胎的/HALF ICSI0方法;仅对严重少、弱、畸精子症才考虑ICSI。ICSI治疗前应进行严格的遗传学检测,目前主要有染色体核型分析、Y染色体微缺失的分子检测等,再结合种植前遗传学检测和产前诊断,以确保ICSI技术的安全性。
=参考文献>
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卵胞浆内单精子显微注射技术的临床应用
#临床医学# 文章编号:1002-0217(2008)03-0194-03 收稿日期:2007-08-30 作者简介:祁 强(1955-),男,安徽合肥人,副主任医师,(电话)0551-*******,(电子信箱)cw j929.1@https://www.wendangku.net/doc/ac8283835.html, 1 卵胞浆内单精子显微注射技术的临床应用 祁 强,朱健生,姚桂东,季 钢 (合肥市妇幼保健院 泌尿外科,安徽 合肥 230001) C linical application of intracytoplasmic sperm injection in treating oligozoospermia,azoospermia and teratozoospermia QI Qiang ,Z H U Jian -sheng,Y A O G ui -dong,JI G ang Department of U rological Surgery,Hefei M aternal and Ch i ld Health Care Hospital,Hefei 230001,China =Abstract >Objective:To study the cli nical effect of intracytoplasmic sperm i n jecti on (ICSI)i n treatment of oligozoospermia,azoosperm i a and teratozoospermia.Methods :T he data w ere gathered from 36male infer -tility cases w ith oligozoospermia,azoospermia or teratozoospermia within 44ICS I treatment cycles an d studied retrospectively.Re s u lts :In 44treatment cycles,450oocytes were obtai ned,among w hich 353w ere in m etaphase II (M II).The normal fertilization rate of M II oocytes w as 83%an d the cleavage rate,89.5%.There w ere 15cases of the clinical pregnancy and the rate w as 34%per cycle.Conclusion :ICSI i s an effec -tive m ethod i n treating infertility of oligozoospermia,azoospermia and teratozoospermia. =Key words >i nfertility;in vitro fertilization (IVF);intracytoplasmic sperm injection (ICSI);embryo transfer;pregnanc =摘 要>目的:探讨采用卵胞浆内单精子显微注射(I CSI)治疗少、弱、畸精子不育症的临床效果。方法:对36例少、弱、畸精子症不育者共计44个I CSI 治疗周期进行了回顾性分析。结果:44个I CSI 治疗周期共取卵450个,M ò期卵母细胞353个,M ò期卵母细胞正常受精率83%,卵裂率89.5%,临床妊娠15例,周期临床妊娠率为34%。结论:ICSI 对少、弱、畸精子不育症是一种有效的治疗方法。 =关键词>不育症;体外受精;卵胞浆内单精子显微注射(ICSI);胚胎移植;妊娠 =中图号>R 69812 =文献标识码>A 据医学统计表明,不孕症患者约占育龄夫妇的10%~15%,其中男方因素约占30%或更高,男方因素中大部分为少、弱、畸精子症患者,除少数因促 性腺激素缺乏、某些精索静脉曲张、逆行性射精等原因可用药物或手术给予纠正外,对大多数男性不育 缺乏特异、有效的治疗。自1992年Palermo 等采用卵胞浆内单精子显微注射(intracy toplasmic sperm injection,ICSI)治疗严重精液异常的男性不育症获得成功以来,该技术作为治疗男性不育的方法,在全世界被广泛应用 [1] 。国内首例ICSI 试管婴儿于 1996年10月在广东诞生[2] 。我们于2000年12月 至2005年12月采用ICSI 技术对36例男性因素不育症者进行了44个周期的治疗,报道如下。1 材料与方法 1.1 临床资料 我们采用ICSI 技术进行治疗的少、弱、畸精子不育症患者为2000年12月至2005年12月本院不孕门诊求诊者,不育年限2~13年。ICSI 治疗指征为:1少、弱、畸精子症,诊断标准参考1993年版5WH O 不育夫妇标准化检查与诊断手册6 [3] 。o严重少、弱、畸精子症的诊断则参照卢光 王秀的标准[4]: 一次射出的精液中精子密度[2@106 / ml;精子密度>2@106 /ml ,但活动率<40%;精子密度>2@106 /ml,但畸形率>85%。同时夫妇双方染色体检查必须正常。采用ICSI 技术进行治疗的44个周期中,少、弱、畸精子症18个周期,严重少、弱、畸精子症26个周期。1.2 方法 1.2.1 卵巢超排卵及卵子收集 采用GnRH a+FSH 或HM G 长或短方案控制性排卵,至主导卵泡达18mm 时,肌注hCG 10000U 后36h 在B 超下经阴道取卵,并将卵细胞置于80IU/ml 透明质酸酶溶液中,反复吹打,消化去除卵丘颗粒细胞,然后移入胚胎培养液中清洗,将获得的M II 成熟卵子行ICSI 。 1.2.2 精子制备 所有男性患者取精前禁欲5~7d,于取卵当日取精液。采用密度梯度离心分离法处理精液,调整精子至适宜密度后,置37e 、5%CO 2培养箱备用。 1.2.3 ICSI 显微操作 采用Nikon 公司显微操作
夫精宫腔内人工授精(IUI)
夫精宫腔内人工授精（IUI） 夏天成14307130052 IUI适应于睾丸性无精子症、梗阻性无精子症、严重的少精子症、弱精子症和畸精子症；输精管复通失败；射精障碍；男方和（或）家族有不宜生育的严重遗传性疾病；母儿血型不合不能得到存活的新生儿。其中，除睾丸性无精症外，其他需行供精人工授精技术的患者，医务人员必须向其交代其可以通过卵胞浆内单精子显微注射技术（ICSI）获得自己血亲关系的后代。 IUI禁忌为急慢性全身性疾病及生殖道炎症；女方因输卵管因素造成的精子和卵子结合障碍；女方患有遗传病、严重躯体疾病、精神心理障碍；有先天缺陷婴儿出生史并证实为女方因素所致；女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期；女方具有酗酒、吸毒等不良嗜好。 男方弱精症可以IUI的精液条件为精子密度≥1500万/ml，前向运动精子（a+b）≥15%；精液处理后可以IUI的条件：上游后a级精子≥70%，精子≥20个/HPF，至少有一侧输卵管通畅。供精人工授精方法可在自然周期或促排卵周期中进行，具体时机同夫精宫腔内人工授精。 按照原卫生部技术规范的要求，解冻后精液用于宫腔内人工授精治疗时，要求复苏后精液前向运动精子总数不得低于10×106/ml，前向运动的百分率不得低于35%，并且实施供精人工授精技术的机构应建立严格的保密措施，确保患者的个人隐私安全；建立切实可行的随访机制，保证及时准确地向精子库反馈妊娠及子代情况；建立可靠的运行机制，配合计算机辅助管理系统，严格控制每一位供精者的冷冻精液最多只能使5名妇女受孕。 诊疗流程为（1）女方准备①自然周 期IUI：月经规律者可自然周期IUI。 患者于月经周期第8～10天开始监 测卵泡的生长。②促排卵周期IUI： 对于有排卵障碍者，需进行促排卵。 患者于月经周期第2～3天返诊，排 除妊娠，B超检查除外卵巢囊肿，可 以给予促排卵药物。③当主导卵泡
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用 杨彩荣 魏延昌张 岩郑可佳 李 宁严云勤* (东北农业大学动物细胞与发育生物学教研室，哈尔滨150030) 摘要哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ，mTOR)是一种Ser/Thr 激酶，属于PIKK 超家族，对调节细 胞周期、蛋白质合成等具有重要作用，是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器，但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以小鼠卵母细胞为研究对象，采用免疫荧光为主要研究方法，对mTOR 在小鼠卵母细胞中的表达进行研究，并通过mTOR 的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin ，RAPA )对卵母细胞进行处理，对mTOR 在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究．结果显示：小鼠卵母细胞成熟过程中，生发泡(germinal vesicle ，GV )期mTOR 主要集中在核膜处表达，生发泡破裂(germinal vesicle breakdown ，GVBD )后mTOR 伴随染色体分布，第二次减数分裂中期(second metaphase ，M Ⅱ期)mTOR 伴随纺锤体分布；雷帕霉素处理后，小鼠卵母细胞的成熟受到抑制，且这种抑制作用具有浓度依赖性，同时其mTOR 的表达部位和形态也发生变化．研究表明，在小鼠卵母细胞成熟过程中，mTOR 在各个时期的表达及分布具有阶段特异性，并对小鼠卵母细胞GVBD 的发生和第一极体的排放都具有重要作用． 关键词雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，小鼠卵母细胞，雷帕霉素，免疫荧光学科分类号 Q2 DOI:10.3724/SP.J.1206.2009.00446 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2009,36(10):1334~1339 https://www.wendangku.net/doc/ac8283835.html, 研究报告 Research Papers *通讯联系人. Tel:0451-********,E-mail:yanyunqin@https://www.wendangku.net/doc/ac8283835.html, 收稿日期：2009-07-23，接受日期：2009-09-04 雷帕霉素靶蛋白(mTOR)结构与功能上高度保守，是一种存在于哺乳动物细胞中的Ser/Thr 激酶，属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶(phosphatidylinositol kinase-related kinase ，PIKK)家族成员．mTOR 信号通路可以汇聚和整合来自于营养、生长因子、能量和环境胁迫对细胞的刺激信号[1～3]，通过其下游的靶蛋白核糖体蛋白S6激酶1(ribosomal protein S6kinase 1，S6K1)和蛋白质翻译起始因子eIF4E 结合蛋白1(eIF4E binding protein 1,4EBP1)调控蛋白质的翻译，加快细胞G1期/S 期的转换，促进细胞生长和增殖，抑制细胞凋亡[4～6]．mTOR 信号通路紊乱与肿瘤的形成及细胞的恶性转化密切相关[7]． 雷帕霉素(rapamycin ，RAPA ，RPM)是一种大环内酯类抗生素和免疫抑制剂，它进入体内后与胞浆受体FKBP12结合形成复合物，此复合物能够结合在mTOR 蛋白羧基端的FRB 结构域内，形成三元复合物，使得mTOR 的激酶催化域失去接近并磷酸化下游靶蛋白的能力，从而抑制mTOR 的生物学功能[8～10]． mTOR 在卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的研究较少，且大多集中在海星、海胆等动物中[11,12]， 而在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以往的研究表明，mTOR 与一些蛋白质的合成有关[12]，而特定蛋白质的合成对卵母细胞成熟具有重要的作用，因此我们推测，mTOR 可能在哺乳动物卵母细胞成熟过程中有重要作用．所以本研究以小鼠卵母细胞为研究对象，观察了mTOR 在卵母细胞成熟各个阶段的表达及分布情况，同时通过雷帕霉素的处理观察mTOR 对卵母细胞成熟的重要作用，为进一步探索mTOR 在小鼠卵母细胞成熟过程中的分子机制提供实验依据． 1材料与方法 1．1 实验材料 本实验选用昆明白品系6～8周龄性成熟雌鼠，购自哈尔滨肿瘤医院实验动物中心． 1．2 主要试剂 α-MEM 购自Gibco 公司；雷帕霉素购自江苏碧云天生物技术研究所；孕马血清(pregnant mare
单精子卵胞浆内注射操作常规
单精子卵胞浆内注射(ICSI)操作常规 显微操作糸统 显微操作系统是由NIKON-TE2000倒置显微镜、NARISHIGE显微操作系统、Eppendorf液压显微注射臂和NARISHIGE气压持卵臂组成。 显微操作系统配备恒温台，其设置温度应使ICSI注射器中的液滴保持37℃。 显微注射针和持卵针内的压力由操作器控制，显微注射臂连接的管中充满矿物油．使整个管路中不含空气，持卵臂连接的管中为空气。 显微注射针 ICSI显微注射针对于成功的ICSI是非常重要的，采用的是Origio公司生产的Humagen ICSI针和Holding针。 精子处理 1. 将Isolate“upper”和“lower”和sperm washing medium平衡至室温。 2. 制备梯度：在离心管中各加入1.5 ml -2.0 ml“upper”和“lower”，“upper”在上，“lower”在下，注意加样时动作轻柔，避免产生气泡及将二者充分混匀，两者之间应形成明显的界面。在制好的密度梯度上加1.5 ml -2.0 ml的液化的精液。 3. 离心300g×15min。 4. 弃上清液，用吸管将离心管底层的白色沉淀转移至另一支含2 ml -3 ml sperm washing medium的离心管中，转移沉淀时应避免过多地将洗液吸上来，同时还要保证能尽量多地吸取沉淀。 5. 离心200g×10min。 6. 弃上清液，留沉淀0.3ml-0.5 ml备用，同时取样镜检。 卵细胞准备，颗粒细胞（放射冠）去除（拆蛋）： 1. 选用透明质酸酶和PVP均为商品化试剂，提前预温，透明质酸酶需在使用前1小时放置于二氧化碳培养箱中平衡。 2. 拉制口径200～300μm毛细管数根。准备两个3037皿，分别标上ICSI前和ICSI后以及患者姓名和日期。两个3037皿中间均加入1ml G1并覆盖矿物油，移入培养箱备用。 3. 在已预热的4孔板1、2和3号孔、中间孔中加入G-MOPS液各1ml。在1号孔中加入透明质酸酶工作液3μl。4号孔中加入G1液1ml。
小鼠精子和球形精子细胞显微注射受精研究
小鼠精子和球形精子细胞显微注射受精研究 小鼠精子和球形精子细胞显微注射受精研究 解剖学报 1999年第2期第0卷论著 作者：李子义谭景和孙兴参刘忠华周琪贺桂馨 单位：李子义谭景和孙兴参刘忠华周琪贺桂馨东北农业大学生物 工程系，哈尔滨150030 关键词：精子；球形精子细胞；显微注射；电活化；电融合；小鼠 【摘要】目的研究动物受精机理。方法以昆明白鼠为实验动物，利用显微注射技术，对精子和球形精子细胞的显微注射受精进行了研究。结果1. 带下注射受精，注射4～6个精子的卵的受精率(32.5%)和卵裂率(25.0%)显著高于注射单个精子的卵的受精率和卵裂率(分别为12.5%和6.3%)(P＜0.05)。 2. 带下注射4～6精子后，有第1极体卵母细胞的存活率(69.6%)、受精率(32.5%)和卵裂率(25.0%)分别高于无第1极体卵母细胞的存活率、受精率和卵裂率(分别为64.4%、20.7%和1 3.8%)，但两者无显著差异(P＞0.05)。3.胞质内精子注射卵的存活率(21.4%)极显著低于带下注射卵的存活率(69.6%)(P＜ 0.01)；而胞质内精子注射卵的受精率(35.5%)、卵裂率(32.3)%和囊胚率(20.0%)则高于带下注射卵的受精率(33.3%)、卵裂率(25.0%)和囊胚率(10.0%)，但无显著差异(P＞0.05)。4.将球形精子细胞注入经电活化处理的卵母细胞的透明带下，注射卵的存活率为90.5%，电融合率为34.6%，2-细胞分裂率为28.3%。 结论 1.注射精子的数量对小鼠带下注射的受精率和卵裂率有显著影响。2.卵母细胞中第1极体存在与否对小鼠带下注射的受精率和卵裂率无显著影响。3. 不同注射方法对小鼠卵的存活率有极显著的影响，而对受精率、卵裂率和囊胚
卵泡浆内单精子显微注射(ICSI)知情同意书
卵泡浆内单精子显微注射（ICSI）知情同意书我们（妇）：（夫）为合法夫妻，因患不育症授权医院生殖医学中心使用辅助生殖技术治疗，不育病因 是。 医生已经向我们介绍了卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)治疗的适应症，如：1、严重的少、弱、畸精子症；2、不可逆的梗阻性无精子症；3、生精功能障碍(排除遗传缺陷疾病所致)4、体外受精失败；5、免疫不育；6、精子顶体异常：7、需行植入前胚胎遗传学检查的。根据我们的病情，医生建议我们采用卵胞浆内单精子显微注射的方法治疗。此外，还有其它比较合适的治疗方法可供选择，如供精人工授精等。经过慎重考虑．我们自愿选择卵胞浆内单精子显微注射的治疗方法。 医生已告知我们：卵胞浆内单精子显微注射作为一种治疗手段并不能保证妊娠完全成功，根据我们的年龄、不育病因等，如果选择该方式，目前的临床妊娠率为。该中心去年的临床妊娠率为。 医生已经向我们介绍了卵胞浆内单精子显微注射的治疗过程，包括术前常规检查，药物诱发排卵，B超监测卵泡发育，超声引导下经阴道取卵，精液采集与处理，显微镜下用显微注射针将单个精子直接注射进卵细胞使之受精，并发育为胚胎，再将胚胎植入宫腔内，而后以药物支持黄体。适时验血和B超监测胚胎生长及发育情况等。 我们还了解到，如果取卵当天未能得到足够的精子行卵胞浆内单精子显微注射，我们同意／不同意使用卫生部批准的精子库提供的匿名冷冻精液进行卵胞浆内单精子显微注射。 我们已知道目前这一技术在大多数情况下是安全的，但与常规体外受精-胚胎移植一样存在发生副反应和并发症的风险，不同的是该技术还存在其他风险如：显微注射可能对卵子造成不可知的损伤；虽然男性染色体检查正常，但仍可能将我们携带的致病基因通过这一过程传递给下一代。使用这一技术胎儿畸形率的发生同自然受孕没有显著差别．但不能保证每一个出生的试管婴儿都是健康的。 我们知道：我们可以在治疗的任何阶段放弃或退出该治疗，而且将不会影响我们在本医疗机构今后的继续治疗。 医生已经向我们介绍了完成一个卵胞浆内单精子显微注射周期治疗所需要的费用较常规体外受精一胚胎移植大致增加元，而且不论治疗成功与否所需费用完全相同。如在治疗过程中因各种原因需终止治疗时，则收取已经完成的检查及治疗费
精子和卵子的形成过程
姓名：谭克强 专业：生物技术 学号：2009211803 比较精子和卵子的形成过程。 答：人体的基本构造是由数以百万亿计的细胞组成的，人类的繁衍同样靠细胞支持。人类具有两种细胞，一种是体细胞，如构成心、肝、肺、肾、肌肉、骨骼等人体器官的都是体细胞，而另一类则生衍后代性细胞。性细胞又叫生殖细胞，在男性，就是精子；女性则为卵子。 精子是在男性睾丸内生成的。其生殖的基础，是由几百万条曲细精管内产生的。曲细精管生精上皮的精原细胞，是生殖的基础。 曲细精管生精上皮的精原细胞经过多次分裂，最后成熟为精子，这个过程也需要一定的时间，一般需要75天左右。 男性青春发育以后，睾丸便拥有延续不断的生精能力。成年男人的睾丸重约10--20克，而平均每克睾丸组织每天可产生约1千万个精子。一般到40岁后，生精能力逐渐减弱。 精原细胞经过前期的染色体复制进入减数第一次分裂，同源染色体分离，变成两个次级级精母细胞，进入减数第二次分裂，类似有丝分裂，着丝体分离，变成4个精细胞，然后变形为4个精子，每个精子之含有体细胞染色体数的一半。
女人的生殖基础是卵子，卵子由卵巢产生，但卵巢常常受多方面的影响。 卵子是由卵巢生卵上皮的原始卵母细胞发育成熟而成。原始卵母细胞和它周围的一层颗粒细胞构成一个原始卵泡，胎儿卵巢内原始卵泡多达二百万个。 但是，这些数量的原始卵泡在出生后大部分退化，到青春期仅仅剩下三万个左右。卵巢的生卵作用是不连续的。一个妇女一生约排出400个卵子，最多也不过500个。 卵原细胞经过前期的染色体复制进入减数第一次分裂，同源染色体分离，变成1个次级卵母细胞和一个集体，一个大一个小，进入减数第二次分裂，类似有丝分裂，着丝体分离，变成4个细胞，由次级卵母细胞分裂的大的为卵细胞，小的和另一个集体分裂成的两个集体构成3个集体，每个卵子之含有体细胞染色体数的一半。
精子是如何进入卵子透明带的
精子是如何进入卵子透明带的？ 伏维阁主发表于 2014-06-16 15:14 从相遇到结合，精子与卵子之间要经历许多复杂的相互作用。在卵子受精之前，精子首先需要与名为“透明带”的卵子外层结构结合，并穿过它进入卵子。但在经过数十年研究之后，这一过程背后的生物学机制仍然悬而未决。而最近，终于有研究者在《细胞生物学期刊》（The Journal of Cell Biology）上发表论文，首次确定了精子究竟依靠结合哪种蛋白质来穿过透明带。 透明带的作用是保护卵子，并在受精卵着床之前保护早期胚胎。透明带的结构似乎非常简单——人类的卵子透明带上共有4种糖蛋白，而小鼠只有3种。但研究者一直不知道精子会与透明带上的哪种糖蛋白结合，不过他们也逐渐把目标锁定在了ZP2和ZP3这两种糖蛋白上。 美国国家糖尿病、消化和肾脏疾病研究所的学者朱利恩?迪恩（Jurrien Dean）和他的同事们打算一探究竟。他们利用基因工程手段让小鼠的卵子表达各种人类和小鼠透明带糖蛋白的组合。研究者发现，如果透明带上没有表达ZP2，小鼠的精子就不会与透明带结合，缺乏ZP2的雌鼠也不会受孕。研究者还发现，如果ZP2蛋白质端点上缺失了某个特殊结构，精子也不会与卵子结合。这一新发现与先前的研究结果一致——过去曾有研究者发现，卵子在受精后会释放出一种酶，切掉那个位于ZP2端点上的特殊结构，阻止其他精子再与透明带结合。
精子（蓝色）与对照组卵子结合（左图），但不会与缺少ZP2糖蛋白的卵子结合（右图）。图片来自：Eurekalert 研究小组还用人类的精子与表达了人类透明带糖蛋白的小鼠卵子进行了测试。结果发现，如果小鼠透明带上携带有人类ZP2，那么人类精子就会与它结合；但如果它上面携带的是人类ZP3蛋白，人类精子就不会结合。这一结果再次验证了ZP2在受精过程中的重要性。（编辑：窗敲雨） 信息来源：Eurekalert-How sperm get into the zona
精子卵细胞的形成及受精作用(精)
精子卵细胞的形成及受精作用 开课教师：胡彬 开课班级：高二（5）班 开课时间：2006年12月21日教学目标 知识与技能 1．掌握精子和卵细胞的形成过程； 2．减数分裂和受精作用的意义。 过程与方法 1．通过学习精子和卵的形成过程，进一步掌握减数分裂过程中染色体行为的变化； 2．通过对精子和卵形成过程的比较，提高自身的归纳、总结、比较能力。 情感态度与价值观 通过本节课的学习，明白世界上的每一个人都是一个独立而又唯一的个体，能够健康的来到这个世界是多么的幸运和不容易，要尊重和珍爱自己、他人的生命。 教学重点 精子和卵细胞的形成过程 教具准备 多媒体课件、自制染色体磁性贴 教师结合减数分裂图讲 述精子形成过程，及各分裂 段细胞的名称。
知识介绍：在变形的过程中，精细胞的细胞核集中在精子的头部，部分细胞质集中在精子的颈部和长长的尾部， 教师介绍卵巢是形成卵细胞的场所。卵巢中的卵原细胞，通过减数分裂产生卵细胞。请学生观察书上卵细
学生任务
课后反思 比较满意的地方 1．制作了染色体磁性贴，传统与现代教学技术有机结合。本节课将“减数分裂各时期细胞内染色体行为变化”在学习“精子和卵细胞形成过程”之前作为复习引入。一方面要求学生在练习纸上画出减数分裂各时期细胞内染色体的行为，另一方面由一位学生用磁性贴到黑板上排出，目的是为了检查学生是否掌握好了此内容。通过教学发现磁性贴的好处是便于修改，而用多媒体课件就无法做到这点。 2．利用“受精作用及胎儿在母体内孕育过程”录象来激发学生对生命的感悟，学生对此录象非常感兴趣，课上有的学生说：“生命太奇妙了”，有的说：“人真是太强大了”，有的说：“要珍惜自己的生命”。通过学生谈观后体会，在无形中渗透了生命教育。 3．整节课思路比较清晰，各知识点之间过渡衔接较好。通过设疑—思考—回答、课上画或排染色体行为变化和归纳总结精卵形成过程不同点来落实重点，引导学生积极主动参与到教学中。 不足之处 课堂气氛沉闷。一方面教学内容较难，本人也发现科普类的课简单与生活较贴近，学生总能说出点什么，容易调动气氛。而知识点较复杂的课，课堂气氛总是不尽人意。另一方面由于听课教师、家长太多（整整塞满了一个教室，还有很多老师搬着凳子坐在外面，通过窗户听课），在这样的一个环境中，开课班级学生出现了与平时截然不同的反应，甚至是很奇怪的现象，本来观看录象是本节课的高潮部分，很多班级看到此内容，都会发出感叹忍不住要议论纷纷，而开课的班级学生竟然只是仰着头看，没有发出任何的声音，教室里异常地安静。这又使我发现了两个值得探究的地方，一个是教学内容既然很难，那么教师如何来调动学生的课堂气氛；另一个是我觉得教师应当在开课之前关心学生的心理，因为每次开课我们似乎都只考虑到教师会紧张，而学生呢？其实学生也会很紧张，怕说错了丢教师和自己的面子，所以作为老师应当在开课之前关心一下你的学生，帮助他们减减压，对学生进行适当的心理辅导也是一种生命的教育。最后使学生能够明白：区级公开课不光是在提高教师的专业
小鼠卵母细胞的孤雌激活
卵母细胞的孤雌激活 将体外成熟卵母细胞（COCs要提前脱卵丘）分别用M2液及含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液洗3遍，然后将卵母细胞置于含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液中培养2.5小时，之后转入不含SrCl2的无糖CZB液中继续培养3.5小时，即在激活处理6小时后观察原核统计激活率。为了维持孤雌激活胚胎的二倍性，激活液和6小时检查原核前短期培养的培养液中均添加5μg/ml的CB。 激活的判定：2原核或2-细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活；卵质膜破裂者判断为死亡；胞质分裂一次或多次但不出现原核者判断为碎裂（fragmentation）。本实验将碎裂卵均归为未激活卵。对照组为未经激活处理，但与激活组培养相同时间的卵母细胞。每次实验，只有当对照组卵母细胞无一激活时，实验组数据才有效。 实验原理：利用氯化锶抑制第二极体的排出 实验用品：培养12小时并老化12小时，即24小时后的卵【要提前脱卵丘】，透明质酸酶，M2操作液，10摩尔每毫升的氯化锶，含钙CZB, 孤雌激活实验步骤 1,，第一天上午杀鼠取卵，培养卵。假设只有一个培养孔的卵，一个孔里最好有20至30个卵，留置第二天孤雌激活。 2,，第二天上午，算好时间，用紫外线照射两个培养孔，15分钟后加液，一个孔里放激活液，【激活液的组成是CB加氯化锶加无钙CZB】，
配置激活液的方法问师兄。另一个孔里放培养液【含钙的CZB】。3，注意激活液不能预热太长时间，CB热时间长会影响效果，【君佐师兄的加法是无钙CZB450微升加上氯化锶50微升平衡20分钟，然后加上氯化锶做滴平衡20分钟就可以放卵了】，在配置激活液时最后应该用枪打一打，好充分混匀。至于放培养液的孔可以以后考虑，激活需要6个小时。把握好时间，脱卵丘后就马上激活。同时预热上需要的药品，包括M2，含钙的CZB，再照上两个中平皿。 4，开始做时先用透明质酸酶处理培养的卵1至3分钟，脱卵丘。再用M2洗3至4遍，再用激活液洗3至4遍，再移入含有激活液的培养孔中。移入培养箱中激活6个小时。 5，假设上午9点做完，下午3点就可以观察。激活的判断方法是2原核或2细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活。卵质膜破裂者判断为死亡。胞质分裂一次或多次，但不出现原核者判断为碎裂，本实验将碎裂卵均归为未激活卵。 6，将激活成功的卵母细胞用含钙的CZB培养液洗5至6遍，再转移如含钙CZB的培养孔中培养，理论上48小时后就可以看到4细胞期，此时再转入含糖含钙CZB胚胎培养液中培养，即可以到达囊胚期。
卵内精子输入法
卵内精子输入法 (ICSI) 什么是卵内精子输入法？ 卵内精子输入法是体外受孕的一种专门形式，用于治疗某些由于男性因素而导致的不孕症。具体做法是将一个精子直接注射到一个成熟的卵子里。 什么时候使用卵内精子输入法？ 大约30%的不孕症是由男性问题所引起的，卵内精子输入法的出现彻底改变了男性不孕症的治疗。在1992年首宗成功的怀孕个案之前，男性不孕的夫妇除了选用捐精之外，并无它计可施。较有可能受惠于卵内精子输入法的包括普通体外授精法效果不佳的夫妇以及有下列情况的男性： 精子輸入之後 精子輸入 卵内精子输入法是怎么做的？ 在能够进行卵内精子输入法之前，我们首先得通过普通的体外受精法取得成熟的卵子。男伴侣的精液在实验室里经过处理，尽量分离出多个健康的、有活力的精子。卵子在实验室里休息了4-6个小时之后，我们会将它们的硬外膜除去，从而鉴定出它们是否成熟，不成熟的卵子不能接受输入。 我们会用一个特殊的仪器将卵子固定，仪器小到它的尖端肉眼几乎看不见。我们再用一根更细小的针（输入针）将一个外表正常的精子吸起，以极高的准确性将针穿过卵子的外壳（透明带）直达卵子的内部。精子被慢慢地注射到卵子里头，针管被拔出来，精子被留在卵子里。 输入后的卵子被放在保温箱里过夜，第二天早上我们会检查看有没有受精的迹象。再过24小时之后我们便能断定有多少受精卵已经分裂，并进一步形成胚胎。并非每个卵子都会受精，也并非每个受精卵都会形成胚胎。跟标准的体外受精法一样，植入多少个胚胎取决于几个因素包括妇女的年龄。如果胚胎看上去健康的话，用剩的胚胎可用于冷藏。 ● 精子形态差 ● 精子活力差 ● 精子数目过低 ● 睾丸或附睾阻塞，妨碍精子的释放。 ● 体内出现抗精子抗体，妨碍精子的正常 功能。 ● 输精管结扎后重新接驳，但不成功，或 接驳后导致精子的数量和质量极低。
供精知情同意书附人工采集精子流程图
病历号: 体外受精-胚胎移植知情同意书 我们〔妇〕：〔夫〕：为合法夫妻，因患不育症授权医院生殖医学中心诊治，不育病因是。 医生已经向我们介绍了体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的适应症，如：1.女方各种因素导致的配子运输障碍；2.排卵障碍；3.子宫内膜移位症；4.男方少、弱精子症；5.不明原因的不育；6.免疫不育。根据我们的病情，医生建议我们采用体外授精-胚胎移植治疗。此外，还可选择其它的治疗方法，如_____________等。 经过慎重考虑，我们自愿选择体外授精-胚胎移植。 我们已被告知：体外受精-胚胎移植作为一种治疗手段并不能保证妊娠完全成功，根据我们年龄、不育病因等，目前临床妊娠率为。去年该中心临床妊娠率为________。 医生已经向我们介绍了体外受精-胚胎移植的治疗过程，包括术前常规检查，药物诱发排卵，B超监测卵泡发育，超声引导下经阴道取卵，精液采集与处理，体外授精，胚胎培养，胚胎移植和移植后药物支持黄体，适时验血和B超监测胚胎生长及发育情况等。 医生还明确告诉我们：治疗过程中还可能出现下列不良反应及副作用，有时甚至还会出现一些严重并发症，并可能导致治疗失败。医生同时也向我们介绍了针对这些副作用所采取的预防及治疗措施，由此可导致治疗费用增加，对此我们表示理解。 1.卵巢过度刺激：严重者可有恶心、腹痛、腹水、胸水、血液浓缩、少尿，个别极严重者可有血栓形成、肝肾功能损害，甚至危及生命。一旦发生，可用药物或穿刺引流胸腹水等治疗。 2. 取卵手术中可能发生麻醉意外，其他脏器损伤，腹腔内出血，必要时需手术治疗。 3.卵巢反应不良：需调整用药剂量，甚至放弃本周期治疗。 4.取卵、移植手术有可能导致感染，需抗感染治疗。 在胚胎培养和移植过程中，还可能出现以下情况，如： 1.卵泡穿刺未取出卵子，只能中止治疗；丈夫精液采集失败，同意/ 不同意改用供精体外受精。 2.由于精子卵子本身的异常可能导致受精失败或胚胎停止发育无可移植胚胎； 3.如果培养过程中胚胎质量差，我们同意/ 不同意放弃移植；
不同来源精子应用于ICSI治疗的早期临床结局
不同来源精子应用于ICSI治疗的早期临床结局目的：比较不同来源精子应用于卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗的 胚胎发育及早期临床结局。方法：回顾性分析2014年1月-2016年6月因男性因素在郑州大学第三附属医院生殖中心行ICSI治疗的1 732个新鲜移植周期。根据精子来源分为：A组射精组（n=1 253），B组经皮附睾精子抽吸（PESA）组（n=418），C组经皮睾丸精子取精（TESA）组（n=61）。比较三组正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、异位妊娠率、流产率、活产率及早产率。结果：C组的正常受精率、正常卵裂率均低于A组和B组（P＜0.05），B组优质胚胎率高于A组和C组（P＜0.05），B组临床妊娠率高于A组（P＜0.05），三组异位妊娠率、流产率、活产率及早产率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：PESA和TESA均可以用于梗阻性无精子症患者的助孕，但就早期胚胎质量和临床妊娠率综合考虑，经皮附睾取精行卵胞浆内单精子显微注射术更优。 近年来，不孕不育发病率大幅上升，有资料显示全球不孕不育夫妇比例占15%，其中男性因素约占50%[1]。自Palermo等[2]首次用卵胞浆内单精子显微注射术（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）使体外受精（in-vitro fertilisation，IVF）或者透明带下人工授精（subzonal insemination，SUZI）不能妊娠的女性成功生育后，该技术便受到国内外学者的关注和研究。ICSI技术是借助显微操作系统将单个精子直接注射入卵母细胞质内使其受精，它对精子数量和质量的要求大大降低，这对重度少弱精以及因梗阻性无精子症需要睾丸或者附睾取精的男性不育症患者具有重大意义。目前应用于ICSI治疗的精子来源主要有三种：一种是射出精子，另外两种是经皮附睾精子抽吸术（percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA）和经皮睾丸精子取精术（testicular sperm extraction，TESA）获得的精子[3]。不同来源的精子在结构、成熟度、活动力等方面均存在差异，而这种差异是否会影响早期胚胎质量和妊娠结局，国内外文献结果不一，值得进一步研究。本研究回顾性分析因男性因素在郑州大学第三附属医院进行ICSI治疗的临床病例，旨在比较不同精子来源应用于ICSI治疗的胚胎发育情况及早期临床结局，现报道如下。1 资料与方法 1.1 一般资料回顾性分析2014年1月-2016年6月因男性因素在郑大三附院行ICSI治疗的1 732个新鲜移植周期。根据精子来源分为射精组（A组）、PESA 组（B组）及TESA组（C组）。男方为单纯性的重度少弱精子症（精子浓度0.05），具有可比性，见表1。 2.2 三组胚胎发育情况比较C组2PN受精率和2PN卵裂率均低于A组与B 组，B组优质胚胎率高于A组和C组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。 2.3 三组妊娠结局比较B组临床妊娠率高于A组，差异有统计学意义（P ＜0.05）；三组异位妊娠率、流产率、活产率、早产率比较，差异均无统计学差异（P>0.05）。见表3。 3 讨论
生命的开始 精子和卵子相遇全过程
生命的开始精子和卵子相遇全过程 【摘要】生命的开始是一个神奇的过程，同房后，精子开始走上了漫漫寻爱之旅。精子同卵子要“相会”，至少要过４关：即通过阴道，穿过子宫颈，在宫腔内运行，最后进入输卵管同卵子“相会”。一起来直击卵子与精子相遇过程。 生命的开始是一个神奇的过程，当精子遇上了卵子，它不早不晚，时机刚刚好，才有了受精卵，受精卵在子宫里发育为胎儿，妈妈十月怀胎，直到新生命降临。 看起来这个过程都是那么顺理成章，但是大家知道吗？要让精子与卵子的相遇时机刚刚好，却不是一件随随便便就可以实现的事情。因为正常女性一个月只排出1个卵子，而卵子的存活时间只有1~2天，如何让精子在卵子最美的时候相遇？抓住排卵期和排卵日就变得很 有必要哦。
什么是排卵期？ 正常育龄女性每个月来1次月经，从本次月经来潮开始到下次月经来潮第1天，称为1个月经周期。 排卵发生在两次月经中间。女性的月经周期有长有短，但排卵日与下次月经开始之间的间隔时间比较固定，一般在14天左右。所以排卵日推算法就是从下次月经来潮的第1天算起，倒数14天就是排卵日。卵子排出后在输卵管内能生存1-2天，精子在女子的生殖道内可维持2-3天受精能力，故在卵子排出的前后几天里性交容易受孕。为了保险起见，将排卵日的前5天和后4天，连同排卵日在内共10天称为排卵期。
找准排卵日比推算的排卵期更靠谱 为什么卵子的生存时间只有1~2天，但是排卵期却有10天那么 长呢？那是因为排卵也会受到环境、心情、饮食等因素的影响而发生改变（这就是为什么我们的月经周期不会永远都固定为30天或28天），因为排卵日会有小幅的浮动，就只能用一个大概的时间段来推算排卵期，卵子排出后有1~2天的存活时间。精子在女性生殖道里可存活2～3天，而受精能力多在排卵后的24小时之内，超过2～3天精子即失去与卵子结合的能力。因此，在排卵前2～3天和排卵后1～2天同房，才更有机会受孕。所以，利用辅助工具（例如排卵测试笔等）找准排卵的那2天，比推算出来10天的排卵期更加靠谱。 在排卵期的相爱精子和卵子相遇全过程 排卵之后同房了，精子开始走上了漫漫寻爱之旅。精子同卵子要“相会”，至少要过４关：即通过阴道，穿过子宫颈，在宫腔内运行，最后进入输卵管同卵子“相会”。 在排卵期，宫颈粘液助精子一臂之力：在排卵期，子宫粘液量多而稀薄，便于精子通过；同时宫颈粘液中白细胞数量减少，从而减少了吞吃精子的机会；另外，此时子宫颈粘液碱性增强，而精子正是喜碱厌酸，故起到了保护精子的作用。而在其他时期，子宫颈粘液少而
人工授精操作规程
人工授精操作规程 一、人工授精的基本条件 1. 女方具有排卵能力。 3. 精子与卵子遇合间没有机械障碍。 4. 子宫具备接收胚胎的能力。 二、适应症 （1）夫精人工授精（AIH）适应症 1.宫颈因素不育：性交后试验（PCT阴性患者），性交后试验检测方法：围排卵期进行，同房后8-12小时2支1ml空针分别吸取阴道后穹窿和宫颈分泌物，涂抹于载玻片上，盖上盖玻片，立即送检验科，如400倍镜下宫颈有前向活动精子，为阳性；无前向活动精子，为阴性。若阴道后穹窿和宫颈均未查到精子，需考虑同房失败。（门诊系统上开单为体内试验，收费为60元） 2.轻度排卵障碍；（如自然周期无排卵，HCG或GnRh-a诱导后有排卵） 3.轻度子宫内膜异位症； 4.轻中度少弱畸精子症、液化异常、性功能障碍、生殖器畸形等不育； 5.生殖道畸形及心理因素导致性交不能等不育； 6.不明原因不育； 7.男方和女方的免疫性不育。(如抗精子抗体阳性) （2）供精人工授精适应症（AID） 1.不可逆的无精子症、严重的少精症、弱精症和畸精症 2.输精管复通失败； 3.射精障碍； 4.男方和/或家族有不宜生育的严重遗传性疾病； 5.母儿血型不合不能得到存活新生儿。 适应症1、2、3中，除不可逆的无精子症外，其他需行供精人工授精技术的患者，医务人员必须向其交代清楚，通过卵胞浆内单精子显微注射技术也可能使其有自己血亲关系的后代，如果患者本人仍坚持放弃通过胞浆内单精子显微注射技术助孕的权益，则必须签署知情同意书后。方可采用供精人工授精技术助孕。 三、禁忌症
（1）AIH 禁忌症 1.男方或女方患有生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病； 2.男方或女方患有严重的遗传、躯体疾病或精神心理疾患； 3.男方或女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期； 4.男方或女方有吸毒等严重不良嗜好。 5.女方因输卵管因素造成的精子和卵子结合障碍。 （2）AID 禁忌症 1.女方患有生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病； 2.女方患有严重的遗传、躯体疾病或精神心理疾患； 3.女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期； 4.女方有吸毒等严重不良嗜好。 四、诊疗流程图 夫精人工授精（AIH ）诊疗流程
睾丸穿刺取精做试管婴儿有风险吗
睾丸穿刺取精做试管婴儿有风险吗 近些年，社会发生了巨大的变化，生活节奏加快，人们根本不能停下自己的脚步，只能一直向前冲，他们在追求幸福的同时却丢掉了最大的幸福，追求到的是优越的物质生活，丢掉的却是一个完整的家。男性如少精、弱精、精子活动力差、死精、无精症等时刻不再困扰着男性，为了工作不但错过了最佳的治疗时机，还可能导致自己的终身不育。自试管婴儿助孕技术的出现，彻底打破了这一格局，使很多不孕不育的人们重新看到了对生命、对未来的希望。 试管婴儿技术是把精子和卵子取出体外，在人为的因素下使卵子受精，并在培养液中把受精卵培养至第五天，进行PGD/PGS的诊断、筛查，将不健康的胚胎(患有先天性遗传病、胚胎染色体异常)排查掉，只将健康的胚胎移植到女性子宫腔，继而着床、发育，足月分娩。所以，想要做试管婴儿必须得有优质的卵子和精子。 在试管婴儿治疗周期中，精子的获得一般通过手淫的方式就能完成，男性的一次排精能达到数千万条，理论上美国试管婴儿治疗周期中只要能找到一条健康的精子就能完成，所以在少精、弱精患者的精液中找到1~2条健康的精子完全是有可能的，并且不是很困难，只有无精症患者必须通过睾丸穿刺手术进行取精，在睾丸或曲精管中找寻健康的精子。 很多人可能会产生疑问：无精症患者就说明该男性不能产生精子，怎么可能在睾丸中找到精子呢?美国梦美(HRC)生殖医疗中心专家介绍说，无精症的判断标准是在男性的三次排精过程中找不到健康的精子，就会被定义为无精症患者。无精症患者又分为两类，一类为梗阻性无精症或称为假性无精症，意思是说睾丸能够产生精子，但是输精管被某种坏死组织、或其他原因堵塞，使精子无法正常排出体外，而形成了无精症的假象，此种情况不需要借精，一般情况下在男性睾丸中或曲精管里面都能找到健康精子的;另一类是因为睾丸生精功能障碍，不能产生精子造成的无精症，此种情况睾丸已经丧失了生产精子的功能，可以选择借精来完成试管婴儿手术，也可以通过美国梦美(HRC)生殖医疗中心的特色技术，取出精囊的1/1000培育出精子来，待时再完成试管婴儿治疗。那么，睾丸穿刺取精对男性有伤害吗?会不会有什么风险? 对阻塞性无精症、射精障碍的患者，进行附睾局部皮肤消毒，局部麻醉后，用穿刺用的针管和针头(极细)，将穿刺针经阴囊皮肤刺入附睾，抽吸附睾液，然后拔出穿刺针，结束后包扎穿刺部位，并及时找寻精子。如能正常找到健康的精子，则可以用穿刺出的精子进行卵胞浆内单精子注射治疗(第二代试管婴儿)获得自己宝宝。此种方法与最早期的切开法比较损伤小、痛苦小，不需要做缝合。美国梦美(HRC)生殖医疗中心的技术、设备先进，手术过程中并且有专门的麻醉师为患者做麻醉处理，并且有专门的仪器做相关的监控。患者在睾丸穿刺取精过程中，感觉不到一点疼痛，可随时回家休息，也不会有什么不适的感觉。 如果通过睾丸穿刺手术仍然不能获得健康的精子，美国梦美(HRC)生殖医疗中心的专家会根据患者的意愿决定借精或进行睾丸组织培养。美国梦美(HRC)生殖医疗专家说，一般情况下，对睾丸组织培养出精子的溶液、技术要求比较苛刻，建议选择正规、有资质的医院进行。如果选择没有资质的医院，此项治疗的失败率是非常高的，甚至都没有此项技术，费时、费力、费钱。 如果患者没有那么长的时间，想要通过一项最快捷、最方便的方式完成试管婴儿周期治疗，那就是“借精”，美国梦美(HRC)生殖医疗中心对精子的质量要求非常严格，会对捐精者的身高、学历、是否有不良记录、心理抗压能力、性取向等三十多个项目一一做出调查，试管婴儿的成功率是相当高的，所以患者根本不用担心其质量问题。