VFA的测定方法及标准曲线
VFA的测定方法及标准曲线
VFA测定的方法
指标
检测方法
分析仪器
检测条件挥发性脂肪酸VFA，包含乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸液相色谱法高效液相色谱仪，HPLC （Agilent 1200, 安捷伦科技有限公司，美国）流动相：0.05%稀磷酸，流速0.7 mL min-1；
检测器：紫外检测器，波长=210 nm；
分析柱：Shodex RSpak KC-811 有机酸专用分析柱（6 μm, 8× 300 mm） + KC-G
保护住（10 μm, 6×50 mm），柱温箱恒定55℃；
进样：自动进样器进样，进样量 20 μL；
定量：基于峰面积的外标法。
样品处理：过0.45 μm水相滤膜后转移至棕色自动进样瓶。
注：乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸出峰时间分别为15.15、17.30、19.18、20.64、23.43、28.00min。
实验仪器
高效液相色谱仪（Agilent 1200,）
生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 马铃薯总糖含量测定 实验目的 1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法； 2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法； 3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法； 4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。 实验原理 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理 3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程； 2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理 先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。 实验操作 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 （1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用 （2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1） 按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。并记录A540nm处测得的各浓度及样品对应的OD值。 （3）葡萄糖标准曲线定制微机数据处理和回归方程（详见表2）及标准曲线的绘制见图1 2. 马铃薯总糖含量测定操作 （1）马铃薯淀粉的制备（此处略，学生实验报告需补充完整） （2）马铃薯淀粉水解待测液配制（2mg/mL）准确称取干燥恒重后的自制淀粉250mg，加入100mL 蒸馏水和2mL20%硫酸，在沸水浴中加热水解，直到水解彻底后，用20%氢氧化钠溶液中和，至pH = 6.8～7.0后，将反应液转入250mL 容量瓶中，补加蒸馏水定容至250mL，配制成浓度为2mg/mL的淀粉水解后，即总糖测定的样品液，冰箱保存备用。 （3）马铃薯淀粉水解待测液还原糖测定（操作方法详见表1）
标准曲线最小二乘法拟合与相关系数
标准曲线的最小二乘法拟合和相关系数 （合肥工业大学控释药物研究室 尹情胜） 1目的 用最小二乘法拟合一组变量（, i = 1-n ）之间的线性方程（y = ax+b ）,表示两 变量间的函数关系；（开创者：德国数学家高斯）个人收集整理勿做商业用途 一组数据（，，i = 1-n ）中，两变量之间的相关性用相关系数（R ）来表示。（开 创者：英国统计学家卡尔 皮尔逊）个人收集整理勿做商业用途 2最小二乘法原理 用最小二乘法拟合线性方程时，其目标是使拟合值（ 方和（Q ）最小。 n n Q=g （并-E （Yj —axj-b/ 整理勿做商业用途 3拟合方程的计算公式与推导 当Q 最小时，加 ％ ；得到式（2）、式（3）: n n n ai = + b￡xj 一 ￡xiyj = 0 1 = 1 [ = 1 i = 1 dQ db = 2 由式（3）和式（4），得出式（4）和式（5）: 忖）与实测值（）差值的平 式（ 1）个人收集 式（2） n n (aj^x.+nb- i = i j = i 整理勿做商业用途 式（3）个人收集
n n n ^Vi=a^\ + b^x i i = 1 i = 1 i = 1 理勿做商业用途 n n S y i = a E X i + nb i = 1 i = 1 收集整理勿做商业用途 个人收集整理勿做商业用途 截距b的计算公式为公式（5）,也即： I 11n i= 1 i = 1 式（4）个人收集整 式（5）个人 n 式（4）乘以门，式（5）乘以已1,两式相减并整理得斜率a： n n n i = 1 i = 1 i = 1 斜率(k = xy /xx , n* 积和-和积)式(6)截距 b =（y-x） / n,差平均差）式（7）
关于油藏的相渗曲线的以及含水饱和度曲线交点求法
关于油藏的相渗曲线的以及含水饱和度曲线交点求法 小熊维尼 在油藏的期末复习的时候，我就发现了这个问题，明明很正常的fw-Sw曲线，想当然的会以为直接对它求导，然后求得斜率相等的点就行了。但是往往事与愿违，往往给出的是点的数据，就是测井数据。那么我们怎么来精确地求得那个交点值呢，以下给出一种数值方法，希望对大家有用。 前期准备： 你必须得有mathematical，matlab或者maple，当然如果你对自己的计算能力有信心，那也行的。 步骤： 1，我们从Excel表格中读取数据（以下我以传姐的数据为例） 2，对导入的数据进行插值（三次艾米尔特插值的精度就可以了），画出插值函数，即： 这就是经过插值之后的fw-Sw曲线了，既然我们有了函数表达式，那么后面的步骤我相信很多人都明白了。 3，但是事情往往没这么简单，你可能会想：“对啊，我略懂mathematical或者matlab 我知道切点的斜率和切线的斜率相等，而且切线过（0.32,0）这个点，这个还不好求吗？不就是一个Solve命令嘛。”如果你真要这么想，我只能表示呵呵了。可以明确表示常规的解方程命令在这里都不起作用。原因是你的曲线是插值分段函数，虽然你看起来就像一条完整的曲线一样。 4，穷则思变，我们采用的是牛顿切线法或者割线法，这是一种线性收敛的计算方法，但是对于这道题的要求够了。在mathematical下命令是FindRoot，matlab我就不知道了（求教）。本质上牛顿切线法是一种迭代方法，也就是说必须给出迭代初始点 以上是mathematical下的FindRoot函数的调用格式，和普通解方程的格式一致，看看
实验一 还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg
食物中葡萄糖的测定
食物中葡萄糖的测定 葡萄糖氧化酶法 1.原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm 波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。 2.适用范围 适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食物样品和血液样品。检出量为0.02 mg。 3.仪器 722分光光度计。 4.试剂： 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）乙醇。 （2） 40% 三氯乙酸：称取40g 三氯乙酸，用水溶解并稀释至100ml。 （3） 2 mol/L NaOH 溶液：称取8g NaOH，用水溶解并稀释至100ml。 （4） 1 % 邻联甲苯胺溶液：称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中，倒入棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。 （5）乙酸缓冲液（pH 5.0）：称取14.28 g 乙酸钠（CH3COONa?3H2O）溶于水中，加入2.7 ml 冰乙酸，并调节pH 5.0，用水定容至1 L。 （6）葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶（Sigma 公司）用水溶解，使酶含量为100 U/ml。4 ℃冰箱保存一周。 （7）过氧化物酶溶液： 0.010 g 辣根过氧化物酶溶于10 ml 水中，4 ℃冰箱保存一周。（8）酶溶液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱可保存七周。 （9）酶空白液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱保存一周。（注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶） （10）葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品（纯度大于99%）于80 ℃干燥至恒量。精确称取0.050 g，用水移入100 ml 容量瓶中，定容至刻度线。相当于浓度为0.5 mg/ml。 5.操作步骤： 5.1样品处理： （1）固体样品：称取0.5～5g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50ml水后沸水浴15min。冷
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定 一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理： 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取： 精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。
分光光度计法测定糖
实验二总糖和还原糖的测定（二） ──3,5－二硝基水杨酸法 目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 试剂和器材 一、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。 6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 二、材料 藕粉，玉米淀粉。
三、器材 WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，15mm×180mm试管。 操作方法 一、葡萄糖标准曲线制作 取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg 0 1 0 0.2 1 0.8 0.4 2 0.4 0.6 0.8 3 0.6 0. 4 1.2 4 0.8 0.2 1.6 5 1 0 2 在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 二、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g藕粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 三、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g玉米淀粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 四、样品中含糖量的测定 取7支15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂：
葡萄糖标准曲线
1DNS DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。 2试剂制备 将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。 3标准曲线 分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。 4样品测定 样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。
pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 1 4.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 1 4.0 6.0 5.8 4.7 15.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L
标准葡萄糖DNS比色法测定.doc
标准准葡萄糖DNS比色法测定的方法 采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计进行比色测定。 1葡萄糖DNS比色法的测定原理 3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。 2测试药品 （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 3测试方法 （1）葡萄糖标准曲线制作 ①按下表制备9个试管。 ②向9支试管中分别加入DNS试剂0.5ml，充分混合。 ③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。 ④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。 ⑤向各管中分别加入4mL蒸馏水，充分混合。 ⑥以空白（1＃）管做对照，用分光光度计于540nm波长下分别测定各管溶液的OD值。 ⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。如果直线不通过零点则需重做。 标准葡萄糖曲线浓度的量取 Tab.2.2 Preparation on standard curve of glucose 试管编号标准葡萄糖溶液(mL) 蒸馏水(mL) 最终浓度(mg/mL) 1 0 0.5 0 2 0.05 0.45 0.1 3 0.1 0. 4 0.2 4 0.1 5 0.35 0.3 5 0.2 0.3 0.4 6 0.25 0.25 0.5 7 0.3 0.2 0.6
总糖实验报告范本
Record the situation and lessons learned, find out the existing problems and form future countermeasures. 姓名：___________________ 单位：___________________ 时间：___________________ 总糖实验报告
编号：FS-DY-20502 总糖实验报告 糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。 首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法
使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法 3、学习分光光度法测定的原理和方法 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基 的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用
标准曲线,拟合曲线与相关系数
相关系数、标准曲线与回归方程 相关系数（r）是衡量两个变量之间的相互关系的一个参数。两个变量之间的相互关系大体上可以分为3种，正相关、负相关和无关，如果细分还有完全正相关r=1和完全负相关r=-1。一般说来，相关系数r的绝对值大于0.8就可以认为两个变量有很强的相关性。 相关系数的求解方程很复杂【表达式如下】，很少有人专门笔算，用很多软件和带有统计功能的计算器都能计算。在大家熟悉的Excel里面就是函数“CORREL”。 从道理上说，首先求得两个变量相关系数，确定了两个变量之间的相互关系，在此之后才能能确定两个变量之间是一种什么关系，然后去建立回归方程，但是绝大多数计算时候并不需要一个这样的过程。比如液相中的样品浓度和响应值之间的关系很明显就是一种正先关，稀释倍数与响应值之间很明显就是一种负相关。这样做的确省事多了。 液相中常用的外标法所用的曲线常被称为是标准曲线，其实不是这样的。标准曲线（standard curve）是由标准品含量和其产生的响应值组成的坐标点连接而成的线，几乎不能画成直线。而外标法用的是拟合曲线（fit curve），是通过最小二乘法计算出来的，都是直线。 另外，标准曲线都会通过所有的标准点，而拟合曲线几乎不会通过任何一个标准点（如果你的保留足够多的有效数字）。标准曲线在标准点上是没有计算误差的，而把标准点的横坐标带入拟合曲线方程是很少能得到该点纵坐标，如果有幸计算值刚好等于纵坐标的值，也不要高兴太早，因为这种结果是由于有效数字保留近似而成的。 标准曲线没有拟合曲线方便，当时不是所有拟合出来的曲线都能用，必须要与标准曲线很吻合才能用，什么样的情况才算很吻合呢？这个就需要用到相关系数r了。一般药典规定液相方法的r的绝对值不得小于0.998，也就是r的平方不小于0.996。常用的Excel回归给出的是r的平方。 拟合曲线是一条标准的直线，是直线就会很容易得出他的方程，回归方程就是这条曲线的方程。方程一般有两个常数，离因变量近的是回归系数，加号或者减号后面的是截距。回归系数实在没有什么好说的，截距的问题多一些。对于有些试验来说截距似乎是非常正常的，截距大于零，可以理解为背景较参比高，截距小于零可以理解背景比参比低。但是对于液相来说就很难理解了，因为从理论上讲背景都是一样的，而且经过分离没有其他成分干扰。
实训二、葡萄糖标准曲线的绘(完)制
实训二、葡萄糖标准曲线的绘制 一、实训目的 1、了解DNS法测定还原糖的基本原理 2、通过DNS法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，用于后续纤维素酶酶活性的测定 3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。 二、实训原理 具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度OD值）与还原糖量（此处即为葡萄糖量）成正比关系。 三、实训方法 1、DNS溶液的配制 称取3，5－二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃，然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容到100ml），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g，苯酚 2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质全部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到1000ml，用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7d后可以使用，有效期为6个月。 （笔者注：在处理酸、碱和配制DNS试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，应及时用大量的清水冲洗） 2、 0.1％葡萄糖标准液 准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，保存于冰箱中备用。 3、葡萄糖标准曲线的绘制 取9支具塞刻度试管，分别按表1顺序加入各种试剂。 表 1 试剂加入顺序
还原糖和总糖的测定汇总
实验一还原糖和总糖的测定 姓名：李凯学号：5603115053 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。 还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，
所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。 三、实验材料和试剂 1、实验材料面粉 2、实验试剂 ①1mg/ml葡萄糖标准液 ②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂 ③碘-碘化钾溶液： ④酚酞指示剂： ⑤6M HCl和6M NaOH 四、实验器材 具塞玻璃刻度试管，50ml离心管，100ml烧杯，100ml 三角瓶，100ml容量瓶，移液管：1ml；2ml；10ml，恒温水浴锅，离心机，天平，分光光度计。 五、操作步骤 1、制作葡萄糖标准曲线 取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配
总糖实验报告范本
总糖实验报告范本 总糖实验样本报告 2021 糖在我们的日常生活中随处可见。我们吃的米饭、水果和小吃或多或少都含有一些糖。同时，糖也是我们维持身体运动的必需物质。没有它，就没有能源。这次我们去实验室探索糖的奥秘。在本实验中，我们将使用3，5-二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的糖含量。在本实验中，不仅要掌握还原糖和总糖测定的基本原理，还要学习比色法的操作方法和分光光度法测定的原理和方法。 首先我们来看看他们的判定方法。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖，单糖是还原糖，二糖和多糖不一定是还原糖，乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。植物样品中的单糖、二糖和多糖可以利用糖的不同溶解度进行提取。无还原性的单糖和多糖可以通过酸水解降解为可还原的单糖，然后分别计算样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量为基础)。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸等产物，而3，5-二硝基水杨酸被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色成正比。样品中还原糖和总糖的含量可通过分光光度计测量540纳米波长的光密度，检查标准曲线并计算得到。多糖水解成单糖时，需要加入一分子水才能破坏每个糖苷键，所以多糖含量要乘以0.9。 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2.学习比色测定还原糖的操作方法3。学习分光光度法测定的原理和方法 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指游离醛基或酮基
所有的糖和单糖都是还原糖，二糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。植物样品中的单糖、二糖和多糖可以利用糖的不同溶解度进行提取。无还原性的单糖和多糖可以通过酸水解降解为可还原的单糖，然后分别计算样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量为基础)。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸等产物，而3，5-二硝基水杨酸被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色成正比。样品中还原糖和总糖的含量可通过分光光度计测量540纳米波长的光密度，检查标准曲线并计算得到。多糖水解成单糖时，需要加入一分子水才能破坏每个糖苷键，所以多糖含量要乘以0.9。 第三，材料和仪器的准备。 实验材料：面粉。实验试剂 (1)1毫克/毫升葡萄糖标准溶液 准确称取100毫克80烘焙至恒重的分析纯葡萄糖，放入小烧杯中，加入少量蒸馏水溶解，转移至100毫升容量瓶中，用蒸馏水定容至100毫升，混合均匀，置于 4冰箱中备用。 (2) 3，5-二硝基水杨酸试剂 在含185克酒石酸钾钠的500毫升热水溶液中加入6.3克DNS和262毫升2M NaOH溶液，加入5克结晶苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加入蒸馏水 至1000毫升，保存在棕色瓶中备用。 (3)碘-碘化钾溶液：称取碘5克、碘化钾10克，溶于100毫升蒸馏水中。(4)酚酞指示剂：称取0.1g酚酞和d 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下具有吸收光的作用，物质对光的吸收是选择性的。不同的物质有各自的吸收光谱，所以当某种单色光通过溶液时，
计算相渗曲线的新方法_甲型水驱曲线法
计算相渗曲线的新方法———甲型水驱曲线法 阎静华1 许 寻1 杜永波2 (11中原油田分公司勘探开发科学研究院 21中原油田分公司采油二厂) 摘 要 应用甲型水驱特征曲线计算油水相对渗透率曲线,具有比乙型水驱特征曲线计算更稳定、结果更可靠的优点。因此,对初期未做室内相对渗透率曲线实验的油田(或区块)来说,用本文所介绍的方法可以拟合出一条实际相对渗透率曲线。 关键词 水驱特征曲线 相对渗透曲线 水油比 相对渗透率曲线资料是油藏工程和油藏数值模拟工程计算工作中的重要参数。在缺乏该资料的情况下,如何利用其他资料来求得该资料,并且保证求得资料的可靠性,具有很重要的实际意义。本文在文献[1]的基础上,对其中介绍的方法进行了改进,用甲型水驱特征曲线代替乙型水驱特征曲线,来拟合油水两相相渗曲线。对于多数油田来说,文献[1]所采用的水油比波动较大,求出的 a 、 b 值误差也较大;而甲型水驱特征曲线采用的 是累积油和累积水的概念,具有较强的稳定性。这种稳定性对于构造及井况较复杂的断块油藏来说尤其重要,它保证了计算结果的可靠性。 1 公式推导 Ξ 111 求a 、b 值 甲型水驱特征曲线为: lg Q w =a 1+b 1Q o (1)乙型水驱特征曲线为: lg R wo =a +bQ o (2)据文献[2]: a =a 1+lg (2.303 b 1) (3)因甲、乙型水驱特征曲线斜率相等,故 b =b 1 (4) 对于每一个时间段,都有一组累积产水量 Q w 和累积产油量Q o 与之对应,所以对应数个时 间段,就有数组Q w 和Q o 与之对应。将这数组Q w 和Q o 代入式(1),应用最小二乘法,可以求出a 1、 b 1的值,然后将其代入式(3)、(4)求出a 、b 值。 1.2 求A 、B 、C 、 K ro K rw 、S w 据文献[1],可得 A =e 21303 a - bN S wi 1-S wi (5) B = 2.33bN 1-S wi (6) C =ρw μo B o ρo μ w B w (7) K ro K rw =C A e -BS w (8) S w =1 B ln ( R wo A )(9) 1.3 求α、m 、n 据文献[1],依下式求α、m 、n 。 y =α+m x 1-nx 2(10)式中 y =lg K ro K rw (11) x 1=lg 1-S or -S w 1-S or -S wi (12) x 2=lg S w -S wi 1-S wi -S or (13) 通过二元一次回归可计算出、m 、n 。1.4 求K rw (S or )、K ro 、K rw 据文献[1],最大含水饱和度下的水相相对渗透率为: 8 32001年1月 断 块油气田 FAUL T -BLOCK OIL &GAS FIELD 第8卷第1期 Ξ 收稿日期 2000-05-15 第一作者简介 阎静华,女,1973年生,助理工程师, 1996年毕业于西南石油学院油藏工程专业,现在中原油田 分公司勘探开发科学研究院从事油田开发工作,地址(457001):河南省濮阳市,电话:(0393)4816074。
葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)
仅供科研版本号：180720 葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法) 【产品组成】 【保存条件】 4℃，避光,6个月 【产品概述】 葡萄糖(Glucose,Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。测定葡萄糖亦可通过邻甲苯胺法、苯胺法、联苯胺法等实现。 葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)检测原理是葡萄糖在加热的碱性环境中铜离子还原成氧化亚铜沉淀，后者使磷钼酸还原成钼蓝，其最高吸收峰为420nm颜色深浅与葡萄糖含量成正比，利用分光光度计通过已知浓度的葡萄糖制作标准曲线能够计算出未知样本的葡萄糖含量。本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 【使用方法】 1、样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，一般需要去除蛋白质(即为无蛋白血滤液)后再经检测。取抗凝血1ml，加入8ml蛋白酸化液，混匀，缓慢加入蛋白沉淀液，边加边摇匀，至出现暗红色蛋白质沉淀。静置10min，3000g离心5min，取上清液即为无蛋白血滤液，4℃保存备用。 ②组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。2500~3000g离心10min，取上清待用。 ③细胞样本： a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.wendangku.net/doc/a915587705.html,/ 第1页
葡萄糖标准曲线
葡萄糖标准曲线的制备： （1）葡萄糖标准液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品1g，溶解稀释后定容有于100ml容量瓶中，配成10mg/ml的标准贮备液，精密吸取贮备液1ml定容至100ml，配成0.1mg/ml的葡萄糖标准液。 （2）葡萄糖标准曲线的制定：精密移取葡萄糖标准液0.0ul、0.2ul、0.4ul、0.6ul、0.8ul、1.0ul、1.2ul、1.4ul于25 ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至2.0ml，再各加6%苯酚溶液1.5ml摇匀，迅速加入浓硫酸溶液5ml，振摇，放置10 min，置沸水浴中加热20min，取出冷却至室温，于490nm，以试剂空白为参比测定吸光值。 请教测定真菌多糖时，苯酚硫酸比色法测定的一条葡萄糖标准曲线，求一条葡萄糖标准曲线？ 1.标准样品溶液的配制:精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品100mg,置于100mL容量瓶中,加水适量使溶解,定容。精密吸取上述溶液10mL,定容至100mL容量瓶中,即得 100μg/mL的标准葡萄糖溶液。 2.标准曲线的制备：用移液管精密移取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL 的葡萄糖标准品溶液。分别置于10mL比色皿中,依次加水使成为2mL。另加1.0mL的5%的苯酚,摇匀,迅速滴加浓硫酸各5mL,摇匀,在室温显色20min,以空白校正零点,于490nm处检测其吸光度 苯酚硫酸比色法测葡萄糖标准溶液数据记录 项目 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 葡萄糖标准溶液体积 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 /ml 5%的苯酚溶液体积 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 /ml 去离子水体积/ml 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 浓硫酸体积/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 吸光度值0 0.036 0.147 0.165 0.286 0.341 0.404 0.491 0.566 0.641 这是我们测得的数据，但是多次不知道该如何正确的得出一条葡萄糖标准曲线，我们主要进行真菌多糖的测定时会用到，想请各位帮个忙！或者可以把你们做相关类似实验的数据进行比较，互相学习！
标准曲线制作
1 葡萄糖测定 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液 小烧杯取分析纯葡萄糖置于烘干箱中烘干至，于分析天平中准确称取80℃烘至恒重的分析纯 葡萄糖10mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，用蒸馏水定 容至10mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3g DNS （分析天平中称取于小烧杯）和262mL 2M NaOH 溶液（大量筒称取250ml+ 小量筒称取12ml），加到500mL（量杯量取）含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中（在微波 炉中加热1min溶解），再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 1．制作葡萄糖标准曲线 取7 支10mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水 和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 1mg/ml葡萄糖标准溶液蒸馏水 DNS 葡萄糖含量光密度值 管号（ml）（ml）（ml）（mg/ml）（OD540） 0 0 1 0.75 0 1 0.1 0.9 0.75 0.01 2 0.2 0.8 0.75 0.02 3 0.3 0.7 0.75 0.03 4 0.4 0.6 0.7 5 0.04 5 0.5 0.5 0.75 0.05 6 0.6 0.4 0.75 0.06 将各管摇匀，取试管架置于水浴锅中，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色（分光光度计预热20分钟）。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 发酵取样：1ml 样品+0.75mlDNS 沸水浴5min,冷却后，定容到10ml. 540nm测定 2 酒精度测定 称取优级纯无水乙醇0.1000g （取小烧杯置于分析天平中，去皮，以微量移液枪小心添 加至0.1000g）于100ml 容量瓶中（蒸馏水洗涤小烧杯导入容量瓶）, 加水至刻度。此溶液 每毫升相当于1.0mg 乙醇。 5 %重铬酸钾溶液: 称取5g 重铬酸钾(AR) 溶于50ml 水中, 加10ml 浓硫酸（用20ml量 筒量取，边加边用玻璃棒搅拌）, 放冷, 取100ml容量瓶，加水至100ml。 试剂均为分析纯, 水为蒸馏水。 分别取乙醇标准溶液（1mg/mL）0, 0.2，0.4，0.6, 0.8, 1.0mL于带刻度的10mL试管中，分别加入重铬酸钾1.0ml，用蒸馏水补足至5.0ml，在100 ℃水浴中加热10min (加塞防止乙 醇挥发), 取出用流水冷却5min ,充分反应，测吸光度。