细菌学检验

细菌学检验重点

第一章细菌学实验的基本要求

1、实验室生物安全(Laboratory biosafety): 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。

2、生物安全防护基本要求

实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories）

–实验对象：致病的微生物及其毒素

–综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等

–确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。

实验室生物安全通用原则

?积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；

?主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放；

?尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。

3、实验室必须设有专职的生物安全负责人

实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。

生物安全等级

?生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。

–实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。

4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区

5、各级生物防护实验室特点

?一级生物安全防护实验室（BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。

?二级生物安全防护实验室（ BSL-2/P2 ）

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。

在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。

?三级生物安全防护实验室（BSL-3/P3）：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。

?四级生物安全防护实验室（ BSL-4/P4 ）：适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。

6、控制措施

?安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。

?所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。

7、生物安全柜（BSC）biosafety cabinet(概念、分级及特点)

?具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。

(净化排气)

?根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为I、Ⅱ、Ⅲ级3种类型。

?实验室应按要求分别配备I、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。

Ⅰ级生物安全柜：外部空气

?保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。

Ⅱ级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气

?既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染；

Ⅲ级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气

8、生物安全柜和超净工作台的区别

超净工作台：保护样品，不保护操作者和环境 生物安全柜：保护操作者、环境以及实验材料

正压、简单 负压、复杂

? 不能以净化工作台代替生物安全柜，反之则可以。 9、 标准的细菌等微生物操作要求

? 实验室负责人......工作人员洗手、工作区域不允许吃/喝/抽 ......戴护目镜或面罩、食物储存 ? 禁止口吸吸管、减少飞溅物/气溶胶、工作台表面的去污/灭活、废物去污后处理 10、注：高压蒸汽灭菌：负责消毒者不准离开消毒室。

制备培养基..... ? 无菌操作.、使用酒精灯、灭菌吸管......10倍递增稀释......无菌操作； 三三制：稀释三级，每一稀释度用三个平行平板；取供试液加注于平皿时，供试液须充分混匀。 培养基倾注于平皿：45℃±1℃、整个操作过程应在lh 内完成、无菌检验......

第二章、细菌学检验基本技术 临床样本的采集与送检 1、食品样本采集原则

根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。

? 随机采样→代表性 ? 无菌操作，防污染。（外源性污染、样本变质和细菌生长） ? 食物中毒时，采集可疑食物样本。 2、食品样本采集种类

? 大样、中样、小样。

– 大样：一整批样本。

– 中样：从样本各部分所取得的混合样本，一般为200g 。 – 小样：分析用，检样，25g 。

注：检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检 3、细菌的形态结构检查法

借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。

– 在细菌检验中极其重要，是细菌分类和鉴定不可缺少的组成部分。

? 样本中有无细菌及其大致的数量。

? 细菌的形态、大小、排列、结构和染色反应性。 ? 培养物是否为纯种。

样本 采样时间 采样方法

注意事项

血骨髓

发病早期、急性期或 症状典型时 成人10ml ，儿童3～5ml ；骨髓1～2ml 。 样本切勿冰箱存放；无菌操作； 废弃物高压灭菌。

尿液

晨起

中段尿

防杂菌污染，无菌操作。尽快送检，不得加防腐剂或消毒剂。 粪便 急性期

脓血、黏液的粪便；絮状物； 直肠拭子

无菌采样；新鲜；立即送检 。

痰 上呼吸道样

本

晨间 无限制 自然咳痰、支气管镜、 胃内采痰法等； 鼻咽拭子

漱口；

立即送检或4℃保存。

?普通光学显微镜（0.2μm ×1000＝0.2mm）细菌染色样本；弱光下用于不染色样本活菌的运动情况

?暗视野显微镜（0.04μm：50倍）不染色样本活菌的形态

?相差显微镜：活体细胞的外形和运动方式；细胞内部某些细微结构及这些结构的数量

4、不染色检查：主要用于观察细菌的动力

–有鞭毛的细菌为真正运动

–无鞭毛的细菌则为布朗运动(即分子运动)

染色检查

细菌染色→显微镜观察。

常用的细菌染料：人工合成带苯环的染料，色基+助色基

单纯染料：苏丹染料

酸性染料：伊红、酸性品红、刚果红等

碱性染料：美蓝、孔雀绿、甲紫和碱性复红等

复合染料：姬姆萨染料、瑞氏染料等

5、单染色法：用一种染料染色，使各种细菌均染成同一颜色。操作简单，易于使用。只能显示细菌的形态及大小。如用美蓝或稀释石炭酸复红等

6、复染色法：用两种以上染料染色细菌，显示细菌形态大小，鉴别细菌种类

–鉴别染色法:革兰染色法、抗酸染色法

–Grams染色操作步骤：初染、媒染、脱色、复染

–抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色。

经过加热和延长染色时间来促使抗酸菌着色。

步骤：初染、脱色、复染

7、负染色法：背景着色而细菌本身不着色。

?细菌荚膜常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)，背景呈黑色，菌体染成蓝色，荚膜不着色，包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。

?该法具有快速、经济、简便易行、高度反差、分辨率高的特点。

8、培养基的种类－－按物理性状分

?液体培养基：增菌、作生化试验等

?半固体培养基：观察细菌的动力、分类鉴定、保存菌种及噬菌体效价滴定等。琼脂用量为0.5%～1%

?固体培养基：主要用于分离培养；平板、斜面、高层及高层斜面；琼脂用量为1.5%～2%

9、培养基的种类－－按用途分

?基础培养基(basic medium)营养培养基(nutrient medium) 增菌培养基(enrichment medium)

?选择性培养基(selective medium) 鉴别培养基(differential medium)专用培养基(dedicated medium) 10、增菌培养基：多为液体。↑目的菌，↓杂菌。营养成分＋抑制物质

选择性增菌培养基；非选择性增菌培养基

?7.5%NaCl肉汤：金葡増菌

11、鉴别培养基：几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同，其菌落的生长特征(颜色、形状等)不同而被区

分开。＋某些特定的化学物质

?鉴别和区分不同细菌

12、制备培养基的一般程序

?○1调配溶化；○2矫正pH；○3过滤澄清；○4分装；○5灭菌；○6检定

13、平板划线接种法

?平板划线接种法是常用的细菌分离培养方法。

?使样本或培养物中混杂的多种细菌分开成长为单个菌落，并根据菌落的形态和特征，挑选所需的单个菌落，经移种获得纯种细菌。

?不同的细菌在平板上所形成的菌落有其固有的形态特征，可以作为细菌鉴定的依据之一。

14、平板划线方法

?分区划线接种法；曲线/连续划线接种法；棋盘格划线接种法；放射法；四格法；平板涂布接种法

15、分区划线接种法：多用于含菌数量较多样本的细菌分离

16、半固体培养基：可用于观察细菌动力和保存菌种。

17、菌落：细菌经一定时间培养后，在固体培养基表面所形成的，肉眼可见的物体(群落) 。

18、菌落特征

?菌落形状；大小：mm；表面性状；边缘情况；颜色；透明度；质地；粘度；乳化性......等

19、细菌在鉴定培养基上的特征

?溶血特征；卵黄；蛋白；色素；气味

?在血平板上的溶血特征

?α溶血：狭窄的草绿色的半透明区域

?β溶血：完全透明清楚的宽带

?γ溶血：看不到溶血带的溶血

?卵黄琼脂中的反应：检查细菌是否产生卵磷脂酶和脂酶

?卵磷脂酶：降解卵黄，菌落周围出现沉淀环

?脂酶：出现“珍珠包膜”

?蛋白水解作用：在菌落周围出现清晰的环。

?色素

水溶性色素溶在培养基中，使培养基着色。绿脓色素、荧光色素等；

脂溶性色素则使细菌菌落着色。金黄色葡萄球菌的金黄色菌落。

?气味

假单胞菌属细菌→葡萄汁气味；变形杆菌→巧克力烧焦的臭味；链球菌→地窖里的霉臭；

梭菌→粪臭、腐败味；产黑色素类杆菌属细菌→辛辣味

20、细菌的生化反应试验

不同的细菌－→不同的酶系统－→不同的新陈代谢产物－→产物不同的生化特性－→鉴别细菌的类别21、糖发酵试验结果判断

反应现象结果描述

酸性变色、有气泡分解××糖产酸、产气

酸性变色、无气泡分解××糖产酸、不产气

培养基不变色不分解××糖

22、甲基红(MR)试验：检查细菌发酵葡萄糖产生并保持稳定的酸性终末产物和克服体系缓冲作用的能力。–分解葡萄糖→丙酮酸→乳酸、乙酸、甲酸等→培养基的pH↓＜4.5＋甲基红指示剂→红色：阳性；

–分解葡萄糖→产酸少→培养基pH较高＋甲基红指示剂→黄色：阴性。

23、β-半乳糖苷酶试验：预测细菌发酵乳糖的能力。

?β-半乳糖苷酶：一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。

?发酵乳糖的大肠菌类能产生β-半乳糖苷酶-渗透酶(P)和β-半乳糖苷酶(G)

24、靛基质(吲哚)试验

?分解：蛋白胨中的色氨酸→吲哚

?吲哚＋二甲氨基苯甲醛→玫瑰吲哚(红色)

25、硫化氢试验

?分解：含硫氨基酸→H2S

?H2S＋铅或铁离子→黑色硫化物。

26、触酶试验

?过氧化氢酶又称触酶，可使细菌代谢过程中的过氧化氢分解为水和氧。

27、血浆凝固酶试验

?金黄色葡萄球菌可产生凝固酶,使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白,附着于细菌表面,产生凝固。

?玻片法：与细胞壁结合的凝固酶

?试管法：菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶

28、血清学鉴定serological identity：确定致病菌的种或型

?未知纯种细菌＋已知特异性抗体

?常用方法：玻片凝集试验、免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集

29、血清学诊断

?辅助诊断：抗原性较强的病原菌和病程较长的传染病。抗体有无及其抗体效价变化

–已知的细菌/特异性抗原＋特异抗体

?常用方法：试管凝集试验。

–直接凝集试验、显微镜凝集试验、沉淀试验、乳胶凝集试验、ELISA、免疫荧光试验等。

–急性期和恢复期双份血清样本，恢复期的抗体效价比急性期升高4倍或4倍以上。

30、细菌毒素的检测方法

?外毒素

–细菌外毒素的免疫血清(抗体)＋被检细菌培养物滤液(抗原)

–细菌外毒素(抗原) ＋被检患者血清

–动物试验

?内毒素

–家兔热原试验,鲎试验,免疫学方法、生物学方法、化学发光法、流式细胞术、高效液相色谱

31、鲎试验(limulus test，LT) ：定量及半定量检测细菌内毒素；

?血液中含有一种独特的有核变形红细胞，红细胞裂解物＋内毒素→凝胶

32、细菌数量的测定：物理计数法；生物计数法

物理计数法

细菌总数计数法：利用工具和仪器对样本中的细菌进行计数，其结果表示样本中的所有细菌

(活菌＋死菌)。

?Breed计数法：Direct microscopic count

?比浊管计数法：细菌悬液的浊度与菌数成正比

?分光光度计测定法：吸光度同细菌总数成正比

生物计数法

活菌计数法：利用各种培养方法检测样本中细菌的数目,计数培养基上生长的菌落数＝样本中活菌数。

?半定量计数法；倾注平板法；旋管计数法；滴液计数法；琼脂表面计数法；膜滤过计数法；

微菌落快速计数法；最可能数(MPN)的估计

33、L-型细菌检查 L forms bacterium：一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型。

–必须在高渗溶液中方能存活，并失去原有形态而变成圆球形或多形性。

–致病?

第四章、细菌的分型及其检验技术

1、细菌分型—“传统方法”

?仅进行病原的菌种鉴定是不够的，需要进一步的分型诊断。

血清学分型；生物化学分型；噬菌体分型；细菌素分型；耐药谱分型；质粒图谱分型;PCR技术；染色体酶切物脉冲场

凝胶电泳分型

2、噬菌体的作用具有高度特异性（种、型）

?一种噬菌体只能裂解一种或与该种相近的细菌，故可用于细菌的分类鉴定。

?用己知型噬菌体鉴定细菌，可对细菌进行分型。

3、毒性噬菌体：Virulent Phage：能在宿主菌细胞内复制、增殖，产生许多子代噬菌体，最终裂解细菌。

4、温和噬菌体：Temperate Phage：与宿主菌的染色体整合，随细菌DNA的复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产

生子代噬菌体。

5、噬菌斑(plaque)

?在液体培养基中，噬菌体可使浑浊的菌液变为澄清；

?在固体培养基上，噬菌体对宿主菌细胞的裂解作用可使菌落溶解，导致在带菌琼脂平板上产生空斑，易于观察，称噬菌斑(plaque)。

6、噬菌体的效价测定

?噬斑形成单位(pfu)的测定：若将噬菌体按一定倍数稀释，通过噬斑计数，可测定一定体积内的噬斑形成单位(plaque forming units, pfu)数目，即噬菌体的数目。

7、细菌素分型技术

?细菌素(bactericin)：某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质只对产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产生菌本身不敏感。

?细菌素是蛋白质，质粒控制，多处于抑制状态。

?细菌素的应用主要是细菌的分型和流行病学调查，是血清学分型的补充。

8、药敏试验(drug susceptibility test)

–在体外测定抗菌药物抑制或杀死细菌能力的试验。

–抗菌药物：具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。

9、药敏试验方法

?纸片法：测定抑菌环大小，其结果以敏感、中度敏感、中介度、耐药表示。

?稀释法：找出能抑制细菌生长的最小抑菌浓度(MIC)或最小杀菌浓度(MBC)表示。

?E试验(E-test)：

最小抑菌浓度 MIC：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度。

最小杀菌浓度 MBC：杀死99.9%（降低3个数量级）的供试微生物所需的最低药物浓度

10、纸片扩散法

?是国际上推荐使用的标准实验方法；细菌耐药谱分析中最常用的方法。

?原理：将含定量抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表面，培养后，形成一个透明抑菌环。

抑菌环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度，与MIC成反比。

?0.5麦氏比浊度=1×108cfu/ml

?结果判断：针对抑菌环直径测量值报告敏感、中介或耐药。

–敏感(S)：被测细菌所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈。

–中介(I)

–耐药(R)：被测细菌不能被常用剂量抗菌药物抑制,或具有特定耐药机理，临床治疗效果不佳。

11、肉汤稀释法

?原理：将药物按一定规律用M-H肉汤稀释成一系列浓度后，与一定量的细菌作用，经培养后定量测定其MIC，反映细菌的药物敏感性。

?校正0.5麦氏比浊标准，1∶200稀释（1∶10×1∶20）。（5×105 cfu/ml）

?结果判定：无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌MIC。

12、琼脂稀释法

?原理：将待测菌接种于含不同浓度药物的琼脂平板上，经培养后观察菌落的生长情况，以能抑制细胞生长的最

低药物浓度为该菌的MIC。

第五章、细菌的分类与命名P91

1、细菌分类等级

–种是细菌分类的基本单位，将生物学性基本相同的细菌群体归成一个菌种；

–性状相近、关系密切的若干菌种组成一个菌属；

2、细菌DNA中G＋C mol/%测定

?细菌DNA中G＋C mol%含量不同是细菌的一个重要遗传特征。

?单一菌种中许多不同菌株的G＋C mol%平均值极为接近或者是一致的。

3、细菌命名

?细菌的科学名称(学名)为生物双名式。

?属名＋种名(＋人名、地名)。斜体

–属名在前，名词，首字母大写

–种名在后，形容词，小写

?属名可用第一个字母代表

–M. tuberculosis(结核分枝杆菌)、S. typhi(伤寒沙门菌)

?常见的细菌也可用习惯通用俗名

–tuberculosis(结核杆菌)、typhoid bacillus(伤寒杆菌)

?泛指某一属细菌：属名＋sp (菌种species)

–Mycobacterium sp，Salmonella sp

?亚种的名称：属名＋种名＋亚种

–Klesbsiella penumoniae subspecies pneumoniae

?中文译名则种名在前，属名在后。

4、细菌分类系统：《伯杰氏鉴定细菌学手册》

第七章、消毒学试验技术

1、消毒学试验

?原理：将试验微生物暴露于消毒因子(物理、化学、生物学)，作用预定的时间之后，检查试验的微生物是否被杀灭或抑制。

?主要目的：检查一种消毒剂或消毒方法是否能达到杀灭或消除病原微生物的要求。

2、消毒 disinfection ：杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理。

灭菌：杀灭或清除传播媒介上一切微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的处理。

3、微生物学检验：中和试验、定性/量杀菌试验、病毒灭活试验、能量试验、现场试验等

4、消毒药械鉴定测试的项目

消毒剂消毒器械

理化性能检验有效成分含量；pH；金属腐蚀性杀菌因子强度或浓度；金属腐蚀性

微生物学检验微生物杀灭

模拟现场试验与现场试验实验室杀灭微生物模拟现场和现场试验

其他稳定性试验安全性试验(电器、毒理 )

5、菌片：用于测定各种消毒剂、消毒器械与方法对不同物品上微生物的杀灭作用。

6、残留消毒剂的去除方法：化学中和法（称中和剂法）、过滤冲洗法、稀释法等

?中和剂法：在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的中和剂中，将残留消毒

剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。

?中和剂：能及时中止消毒剂的杀微生物作用

本身及其与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。

7、中和试验

?操作方法

– 1.用PBS将指示菌制成5×105～5×106cfu/ml悬液。

– 2.将消毒剂用灭菌蒸馏水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知该消毒剂10min抑杀指示菌99.9％以上的最低有效浓度。

– 3. 取消毒剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等当量中和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度。

– 4. 中和剂选择试验时，先将消毒剂1.0mL与中和剂溶液9.0mL混合，制成中和产物溶液，再分组进行。

?试验分组

–消＋菌：消毒剂对试验菌有无杀灭或抑制能力。

–(消＋菌)＋中：残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否能恢复生长。

–中＋菌：中和剂是否抑菌。

–(消毒剂＋中和剂)＋菌液：中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。

–稀＋菌：菌数对照。

–稀＋中＋培养：阴性对照。

8、消毒剂定性消毒试验：测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。

?试验方法

–5×105～5×106cfu/mL的菌悬液。

–灭菌试管10，标号。每管：灭菌蒸馏水2.5mL，20±2℃水浴。＋消毒液2.5mL，倍比稀释，至第9管。第10管中不加消毒液作对照。

–加菌悬液2.5mL于各管中，混匀并记录各管加菌时间，使菌药混合液中含菌量均为105～106cfu/mL。

–各管分别于加菌后4个不同间隔时间，取0.5mL ＋ 4.5mL中和剂内，中和10min后，取出0.5mL加入4.5mL营养肉汤管内。

–将接种细菌的肉汤管放37℃培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。

试验重复5次。

?结果判定

?若肉汤管混浊，则表示有菌生长，记为阳性，以（+）表示。

?若培养至第7天，肉汤管澄清，则表示无菌生长，记为阴性，以（—）表示。

?对难以判定的肉汤管，取0．1mL接种于营养琼脂平板，用灭菌L棒涂匀，放37℃培养48h，观察菌落形态；并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。

?5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌。

9、消毒剂定量消毒试验：测定受消毒因子作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。

?用于对消毒剂杀灭效果的评价。

?原理：将一定量的细菌悬液或菌片(载体)，暴露于设计浓度的消毒液中，作用至规定时间后，取细菌与消毒液的混合物或取出载体，与中和剂反应，终止消毒剂的继续作用，并接种于营养琼脂平板，培养之后，计数菌落。

以存活的菌落数与最初加入的菌数比较，计算出杀灭率，或杀灭效果(germicidal effect，GE)。

10、悬液定量杀菌试验 -----活菌培养计数

?消毒液：浓度为待测浓度的1.25倍

?实验用菌悬液：(1×108～5×108)cfu/ml

?菌0.5ml＋干扰0.5ml ，混匀，20±1℃水浴5min，＋消毒液4.0m l，迅速混匀并立即计时。

?待菌药相互作用至预定时间，分别吸取0.5ml菌药混合液加于4.5ml经灭菌的中和剂中，振荡混匀。

11、定量杀菌试验的评价规定

?在产品说明书指定的最低浓度与最低作用时间，重复试验3次。

?在悬液定量杀灭试验中，各次的杀灭对数值均≥5.00，可判定为消毒合格。

12、破坏效果判定

?以S/N＜2.1作为HBsAg抗原性破坏合格标准。

–S是消毒因子作用后被检样品或阳性对照样品平均每分钟脉冲数（cpm）值或光密度（OD）值。

–N是试验中阴性对照样品平均cpm值或OD值。

细菌学检验各论一般性思考题：

?1、ⅹⅹⅹⅹ菌的培养特征如何？（增菌、选择性平板）

?2、ⅹⅹⅹⅹ菌的形态与染色有何特点。

?3、ⅹⅹⅹⅹ菌的生化特性有哪些？其中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是ⅹⅹⅹⅹ菌。

?4、ⅹⅹⅹⅹ菌的分型特点是什么？

?致病菌检测的一般思路？（肖老师某次课后在黑板上总结过，大家注意哦）

第十一章弧菌属

?弧菌属细菌分布广泛，尤以水中最多，致病菌主要有霍乱弧菌、副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒

§1 霍乱弧菌

目前，作为国际检疫传染病——霍乱的病原诊断，以检出O1群霍乱弧菌或O139群霍乱弧菌为准

1、生物学性状

①形态：Ｇ-，菌体弯曲或直的短杆菌，呈弧形或逗点状，单鞭毛在病人“米泔水”样便中，可呈头尾相接的鱼群样排列。作悬滴观察时，因细菌一端有鞭毛，呈穿梭样运动。在暗视野显微镜下观察，犹如夜空中的流星。无荚膜，有普通菌毛和性菌毛，O139群有多糖荚膜，不形成芽胞。

②培养特性

?营养要求不高，在普通培养基上生长良好，属兼性厌氧菌。

?生长温度：16～42℃/ 37℃

?pH：6.0～9.2 / 7.2～7.4 / 8.4～8.6 / 9.2

?碱性蛋白胨水：菌膜，液体混浊。

?固体琼脂培养基：无色、圆形、透明、光滑、湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐的菌落。

③抗原特性：O1群霍乱弧菌分类

④生化特性

靛基质和亚硝基靛基质反应(霍乱红反应)

?细菌分解色氨酸→吲哚+对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰色吲哚

霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，靛基质反应阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应

VP试验：细菌分解葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰+胍基→红色化合物

?埃尔托生物型：+ 古典生物型：--

溶血性

区分古典生物型与埃尔托生物型

霍乱弧菌溶血素溶血环备注

古典生物型----草绿色环

埃尔托生物型++，透明

2、细菌学检验

增菌：碱性蛋白胨水

分离：TCBS：硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂，发酵蔗糖。黄色，扁平状，直径2-3mm。

确证：

⑴初步鉴定：显微镜下涂片染色：G-；动力检查：+（制动试验）；氧化酶试验：+；氯化钠三糖铁试验：

?⑵生化确认：法国梅里埃ID32E鉴定试剂条

霍乱弧菌的快速诊断方法

?制动试验

急性病人的水样便→直接镜检：流星状动力的细菌。+O1群霍乱免疫血清→运动停止，凝集成块。

?免疫荧光菌球法

?SPA协同凝集试验

霍乱病原菌即古典生物型霍乱弧菌、埃尔托生物型霍乱弧菌流行株和O139群，不仅可引起个体严重腹泻性疾病，而且可引起该病的流行和大流行。

§2副溶血性弧菌

?是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。

?进食含有该菌的食物致可食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒。

神奈川现象（KP）:

KP阳性：绝大多数致病性副溶血性弧菌产生的耐热溶血毒素能使人或家兔的红细胞溶解。

?溶血反应是鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标。

第十三章与医学有关的其他细菌

§1 军团菌属

●营养要求特殊，常接种于复合培养基中，生长环境中必须含半胱氨酸和铁盐。

●需氧，2.5%～5%CO2能促进生长。

分离:各取0.1ml上述3种经处理样品，分别接种BCYE或GVPC平板。

BCYC：可溶性焦磷酸铁，L-半胱氨酸盐酸盐

鉴定：培养确证：BCYE生长/ BCYE-Cys不生长

●军团病主要是通过呼吸道吸入带菌飞沫、气溶胶而感染，多流行于夏秋季，为全身性疾患。

§2绿脓杆菌

●假单胞菌中同人类与动物疾病有重要关系的大约有10种：绿脓杆菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、葱头假单胞

菌、类鼻疽假单胞菌、嗜麦芽假单胞、腐败假单胞菌、斯氏假单胞菌、产碱假单胞菌、类产碱假单胞菌

2种水溶性色素：

①绿脓素，为蓝绿色的吩嗪类分合物，无荧光性，具有抗菌作用。绿脓素只有绿脓杆菌产生，故有诊断意义。

②荧光素，呈绿色。

1、增菌：1∶10样品稀释液10ml + 90ml SCDLP液体培养基

●SCDLP：用于疏水性化妆品样品处理及化妆品和一次性使用卫生用品增菌培养。

2、分离：乙酰胺培养基

3、绿脓菌素试验

●可疑菌落接种绿脓菌素测定用培养基

●氯仿提取→蓝色

●+盐酸→粉红色、紫红色→阳性(被检物中有绿脓菌素存在)

§3李斯特菌

●单核细胞增多性李斯特菌与人类关系较密切，是人和动物的致病菌。

●嗜冷菌：2～42℃(也有报道在0℃能缓慢生长)。“冰箱杀手”

与医学有关的其他细菌大家所出思考题汇总

绿脓杆菌的鉴定方法有：革兰染色、镜检，氧化酶试验，硝酸盐还原产气试验、

明胶液化试验、42℃生长试验

绿脓杆菌能产生两种水溶性色素：

1.李斯特菌穿刺SIM动力培养5d的培养特性：倒立伞状生长

2.李斯特菌生化反应中触酶试验：阳性

幽门螺杆菌

1. Hp与下列哪种疾病无关？D

A.十二指肠溃疡

B.胃炎

C.肝癌

D.肺炎

2. Hp的快速检测方法是下列哪种？C

A.氧化酶试验

B.触酶试验

C.尿素酶实验

D.硝酸盐还原实验

布鲁菌属

1以下不属于布鲁菌属的生物学特性的是:D

A革兰阴性杆菌 B严格需氧菌C硝酸盐还原实验阳性 D具有运动性

2布鲁菌的实验室常用培养基是_____或____.（肝浸液培养基、改良厚氏培养基）

气单胞菌属

1、气单胞菌属的选择性培养基、鉴别培养基分别是什么？（RS培养基、AHM培养基）

2、使用碱性蛋白胨水增菌的细菌有哪些？（霍乱弧菌、气单胞菌）

弯曲菌属

1.弯曲菌属中导致腹泻的最常见病源菌？空肠弯曲菌

2.弯曲菌属生化鉴定的三个试验？快速马尿酸钠试验、快速硫化氢试验、快速DNA酶水解试验

军团菌

1 在军团菌标本处理时，哪些平板可用来培养？ GVPC平板，巧克力平板，血琼脂平板

2 军团菌鉴定的试验及结果有哪些？

发酵试验（-）、氧化酶试验（+/-）触酶实验（+）、动力试验（+）、马尿酸水解试验（+）、明胶液化试验（+）为军团菌

第＋四章螺旋体属

螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、无鞭毛而能活泼运动的原核单细胞微生物。

与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体(非特异性抗体)，称为反应素。

钩体是唯一可用人工培养基培养的螺旋体

人是梅毒的唯一传染源，由于感染方式不同可分先天性梅毒和后天性梅毒。

1、暗视野显微镜检查梅毒螺旋体：是诊断梅毒螺旋体感染唯一快速、直接的方法，为诊断早期梅毒所必需。

2、非特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验：

梅毒螺旋体→抗原性心磷脂→反应素

反应素＋从牛心中提取的心磷脂→抗原抗体反应

抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇的乙醇溶液。

VDRL、USR、RPR

抗原微粒＋抗体(反应素)→粘附→肉眼可见的颗粒凝集和沉淀，即为(＋)；

可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。

3、RPR：

快速血浆反应素环状卡片试验

VDRL抗原＋活性炭颗粒→RPR抗原

试验在特制的白色纸卡上进行，在白色底板上出现黑色凝集颗粒或絮片为阳性反应

第15章立克次体

●我国发现的立克次体病主要有斑疹伤寒、恙虫病和Q热等。

1、立克次体是一类专性寄生于真核细胞内的G-原核生物，是介于细菌与病毒之间，而接近于细菌的一类原核生物。以

二分裂方式繁殖。

2、常用Gimenez或Giemsa法染色。

Gimenez染色：呈红色，背景为蓝色。Giemsa染色：呈紫红色，常显两端浓染。

除恙虫病立克次体多采用Giemsa法外，其他立克次体常用Gimenez法。

3、立克次体有两种主要抗原：

–群特异性抗原：与细胞壁表层的脂多糖成分有关，为可溶性抗原，耐热。

–种特异性抗原：与外膜蛋白有关，为颗粒性抗原，不耐热。

4、外斐(氏)反应

?原理：斑疹伤寒等立克次体的脂多糖(群特异性抗原)与变形杆菌某些菌株的菌体抗原具有共同的抗原成分。

?外斐氏反应：

–用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OX l9、OX2、OX k进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。

?变形杆菌凝集试验WFR，用以诊断流行性斑疹伤寒、恙虫病等急性传染病。

5、埃立克体：×鸡胚，×无生命培养基，∨体外细胞培养。

6、磺胺类药物不能抑制立克次体的生长

第16章衣原体Chlamydia

1、衣原体是一类具有独特生长发育周期、专性细胞内寄生、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。

2、衣原体具有独特的发育周期，可观察到两种不同的颗粒，即原体(EB)和始体(IB)。

–原体较小而致密，有胞壁，胞外稳定，是发育成熟的衣原体，具有感染性。Giemsa染色呈紫色，

Macchiavello染色呈红色。

–始体又称为网状体(RB)，较大而疏松，无胞壁，胞外不稳定，无感染性，是繁殖型。经Giemsa和Maechiavello 染色后均呈蓝色。

3、显微镜检查Giemsa染色：光镜下，原体呈紫红色，始体为嗜碱呈蓝色，查见包涵体有诊断价值。

第17章支原体Mycoplasma

1、无细胞壁、形态上呈高度多形性，可通过除菌滤器，在无生命的培养基中能生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。

革兰染色阴性，但不易着色，姬姆萨染色较好，结果呈淡紫色。

2、人工培养基培养：营养需求高于一般细菌。

–基础：牛心浸液

–提供胆固醇及其他长链脂肪酸：人或动物血清

–提供核苷前体和维生素等：10%的新鲜酵母浸液

3、典型的菌落呈“油煎蛋/荷包蛋”样，菌落大小0.1～1.0mm。

解脲脲原体的菌落最小，直径仅为10～40μm，须在低倍显微镜下观察，故原称为“T”株(tiny strain)。

4、病毒学研究中细胞培养常被支原体污染。

5、对青霉素、头孢等作用于细胞壁的抗生素不敏感，但对干扰蛋白质合成或作用于核蛋白体的抗生素如强力霉素、四

环素、红霉素、螺旋霉素、链霉素等敏感。

6、支原体无细胞壁，而细菌L型是细菌失去细胞壁所形成的细胞壁缺陷型，二者在许多生物学性状上相似。

支原体L型细菌

自然界中广泛存在自然界很少存在

绝大多数生长需胆固醇生长不一定需要胆固醇

遗传上与细菌无关，且无论在什么条件下也不能变成细菌遗传上与原菌相关，并可在诱导因素去除后回复为原菌菌落较小，0.1～0.3mm 菌落稍大，0.5～1.0mm

第8，9章病原性球菌

1.名词解释：

1）血浆凝固酶：使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类，分为结合凝固酶和游离凝固酶。

血浆凝固酶:是多数致病菌株能产生凝固酶，能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生,是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标

2）SPA：(Staphylococcal protein A,SPA)葡萄球菌A蛋白，存在于细胞壁的一种表面蛋白，为完全抗原，具属特异性。90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。

?本质为单链多肽，与肽聚糖形成共价键结合，SPA可与IgG1、IgG2、IgG4分子的Fc段发生非特异性结合，IgG的Fab段与特异性抗原结合，可用于协同凝集试验(coagglutination)用于抗原检测。

?SPA与IgG结合后复合物具有抗吞噬，促细胞分裂，超敏反应等多种生物学活性。

3）Optochin试验：奥普托欣试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。挑取待测定的菌落密集接种在血平板上，贴5μg/片的Optochin的纸片与平皿表面，35℃18h后，抑菌环直径＞15mm为肺炎球菌。

2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？

金黄色葡萄球菌-----致病菌

表皮葡萄球菌-----偶尔致病

腐生葡萄球菌-----一般不致病

3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？

1.产生脂溶性金黄色色素

2.血平板上菌落周围产生透明溶血环

3.发酵甘露醇

4.血浆凝固酶阳性

5.耐热核酸酶阳性

6.涂片镜检为革兰阳性葡萄状排列的球菌

7.G+Cmol%为30mol %—38mol %

4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？

在血平板上根据溶血现象分为甲、乙、丙三型。

α（甲）溶血性链球菌菌落周围有狭窄的草绿色溶血环-----多为条件致病菌，草绿色链球菌

β（乙）溶血性链球菌菌落周围有明显宽广的完全透明环-----致病性最强，溶血性链球菌

γ（丙）溶血性链球菌菌落周围无溶血环-----一般不致病，不溶血性链球菌，常存在于乳类及动物的粪便中。

5. 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？

脑膜炎球菌可发酵葡萄糖，麦芽糖产酸，淋球菌只分解葡萄糖产酸，还可用血清学试验加以鉴别。

比较内容脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌

生物学性状形态结构G－双球菌；有荚膜、菌毛(新) 同左

培养特性高营养、5%CO2露滴状、自溶酶高营养、5%CO2

生化反应分解葡萄糖、麦芽糖只分解葡萄糖

抗原与分类荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异Ag脂多糖Ag

核蛋白Ag

菌毛蛋白Ag ；脂多糖Ag ；

外膜蛋白Ag (PⅠ、PⅡ、PⅢ) 抵抗力冷、热、干燥、消毒剂均敏感同左

致病性致病物质荚膜、菌毛、内毒素荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1 所致疾病流行性脑脊膜炎淋病

防治原则荚膜多糖疫苗洁身自好

6. 葡萄球菌属的生物学特性?

1）形态染色与培养

革兰染色阳性，球形，呈葡萄状排列，无鞭毛，无芽孢

培养特点: 1.营养要求不高；2.需氧或兼性厌氧；3.最适生长温度28-38℃；4.某些菌株耐盐(10％NaCl )

菌落观察：在普通琼脂平板上，35℃孵育18-20h葡萄球菌均形成中等大小、圆形凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明菌落，并可产生不同的脂溶性色素，使菌落呈现不同的颜色，如金黄色葡萄球菌呈金黄色、表皮

葡萄球菌大多呈白色、腐生葡萄球菌大多呈柠檬色。

在血琼脂平板上，三种葡萄球菌的菌落特点与它们在普通琼脂平板上的菌落相同，但金黄色葡萄球菌菌

落周围有完全溶血环(β溶血)，而腐生葡萄球菌和大多数表皮葡萄球菌菌落周围无溶血环。

2）生化反应

?触酶试验阳性。

?致病株分解甘露醇。

?金黄色葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性。

?金葡菌血浆凝固酶阳性。

3）抗原构造

?葡萄球菌A蛋白(SPA)

?多糖抗原：具有群特异性，是存在于细胞壁上的一种半抗原。

?荚膜多糖

4）致病物质

?毒素：葡萄球菌溶血素，肠毒素，杀白细胞素，表皮剥脱毒素，毒性休克综合征毒素-1

?酶类：脂酶，触酶，凝固酶，葡激酶，耐热核酸酶，透明质酸酶

?超抗原

5）免疫性

人对金黄色葡萄球菌有一定的天然免疫力。当皮肤粘膜发生损伤或机体免疫力降低时才易引起感染。病后能获得一定的免疫力，但作用不强，一般认为不足以预防再次感染。

6）抵抗力

?耐干燥；对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌；

?对青霉素耐药株高达90%以上；

?耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌之一。

7. 简述葡萄球菌和链球菌的检验程序和检验方法。（重点掌握葡萄球菌）

葡萄球菌检验程序：

检验方法：

?直接涂片检查-----可作初步报告，革兰染色阳性，呈葡萄状排列的球菌，即可作初步报告。

?培养：

1.增菌培养——7.5%NaCl肉汤，胰酪大豆肉汤

2.分离培养——普通平板、血平板、Baird-Parker平板、高盐甘露醇平板、卵磷脂高盐平板等

金葡球菌鉴定培养基— S. aureus ID：灰绿色菌落为金葡球菌

法国科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基（CHROMagar? Staph aureus）：金黄色葡萄球菌：紫色；

其他：蓝色、无色。

链球菌检验程序

检验方法：

?脓汁、咽拭、痰液和渗出物可直接涂片检查。

?增菌培养接种肉浸液葡萄糖肉汤或匹克肉汤。

?分离培养接种血平板做需氧和厌氧培养，观察菌落形态。

鉴定试验

?β溶血者做杆菌肽敏感试验，敏感者为A群链球菌，耐药者做胆汁-七叶苷试验（阳性为黑色反应），阳性者为B 群链球菌，同时做CAMP试验也应为阳性；阴性者为A、B、C群以外的其他链球菌；

?α溶血者做Optochin试验，敏感者为肺炎链球菌，耐药者做胆汁-七叶苷试验，阴性者为草绿色链球菌；

?不溶血者做6.5%氯化钠试验，阴性者为其他链球菌。

?链激酶试验：取草酸钠血浆0.2ml，用生理盐水稀释，再加入链球菌培养物0.5ml和0.25%氯化钙溶液0.25ml混合，放37℃水浴，观察血浆凝固。从血浆凝固起记录溶化时间，溶化时间越短，链激酶越多。

?马尿酸钠水解试验： B群链球菌阳性。阳性产紫色或深紫色。

第十章肠科杆菌

1、简述肠道杆菌共同特点，怎样初步区别肠道致病菌与非致病菌？

肠杆菌科共同特性

相似的形态染色中等大小，G –杆菌，无芽胞，多数有动力，致病性菌株多有菌毛，具有质粒。

简单的培养条件

活泼的生化反应

抗原构造:包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原3种。O抗原和H抗原是分群和分型的依据。

抵抗力:不强，不耐干燥，对一般的化学消毒剂均敏感。

变异性:（1）S-R变异：新鲜分离的细菌菌落为光滑性，反复传代或保存过久，菌落变成粗糙型。

（2）H-O变异：鞭毛从有到无。

（3）质粒、转座子、结合子等的转移改变菌株遗传信息，如耐药菌株的出现。

乳糖发酵试验------初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌

●肠道致病菌------不发酵乳糖

●肠道非致病菌----发酵乳糖

2、何谓肥达试验？肥达试验结果判断须注意哪些要点？

肥达试验(Widal test):用已知伤寒沙门菌的O、H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌的H抗原(称为PA、PB)作为诊断菌液，与受检血清做试管或微孔板凝集试验，检测受检血清中有无相应的抗体及其效价的一种半定量试验。可辅助诊断肠热症

结果分析及临床意义：

1）正常值：首先应考虑当地人群的正常效价。

伤寒沙门菌O凝集价 >1：80，伤寒沙门菌H凝集价 > 1：160

甲型副伤寒H凝集价 >1：80，肖氏沙门菌H凝集价 >1：80

?或在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价增高4倍或以上具有诊断的参考价值。

2） O与H抗体的诊断意义：

?O抗体出现较早，为IgM，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。H抗体出现较晚，为IgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。

?① O、H凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大；

?②若两者均低，肠热症的可能性小；

?③若O不高H高，可能为疾病的晚期，是预防接种或非特异性反应；

?④若O高H不高，则可能为感染早期，或与其他沙门菌有交叉反应，或H-O变异的沙门菌引起的感染等，建议一周后复查，如一周后H也有升高，可证实为肠热症。

3）注意事项：

①确诊为伤寒的患者中约有10%肥达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤寒的确诊。其原因可能由于早期使

用抗生素治疗，患者免疫功能低下或与肥达反应诊断菌液等有关。

②采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同。发病第一周阳性率为50%，第二周为80%，第四周90%，恢复期凝

集价最高。以后逐渐下降以至转阴。临床上一般以双份血清（早期和恢复期）的凝集价有4倍增高作为新近感染的指标。

3、疑似伤寒病人在病程不同阶段应采取何种标本？

不同疾病、不同病程采集不同标本

?伤寒、副伤寒：第1、2周采血；第2、3周采粪、尿；全程可采骨髓。

?血清学检查：第二周起即可采血清。

?败血症：采血。

?肠炎：粪便、呕吐物、可疑食物

4、SS培养基中有哪些成分，各有何作用？

用途:用于志贺菌和沙门菌分离

成分（g/L）牛肉浸粉5；眎胨或多价蛋白胨5；乳糖10；胆盐8.5；枸橼酸钠8.5；硫代硫酸钠8.5；枸橼酸铁1；琼脂17.0；中性红水溶液0.025；煌绿水溶液0.33ml；蒸馏水1LpH7.0～7.1（25℃）

原理:SS琼脂为强选择性培养基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。?枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用与煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠埃希菌的生长；对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。

?硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，枸橼酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。

?中性红可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落

?琼脂是培养基的凝固剂

【观察结果】沙门菌其菌落呈无色半透明，产生H2S者菌落中心呈黑色，部分菌株如亚利桑那亚属Ⅲ有分解乳糖的菌落呈红色、中心黑色，志贺菌属的菌落呈无色透明。大肠埃希菌呈红色混浊。宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h 厚可以出现红色菌落。肠道致病菌的菌落均可达1.5mm以上。

5.名词解释：

1）KIA:克氏双糖铁琼脂,常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力，可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来以及区别肠道内的致病菌和大肠埃希菌。

KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10；指示剂为酚红，其在PH<6.8时变为黄色，而KIA的PH为

7.4(红色)，产少量的酸就可导致颜色变化。

2）MIU：动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验

【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个

培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。

【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU培养基，35ºC，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。

【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。

用途：生化培养基，用于细菌脲酶检测（GB、SN标准）

3）IMViC：用来测定菌的生理生化特征的4个实验. 主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查。I:吲哚试验；M:甲基红试验；V:V.P试验；C:柠檬酸实验

4）V-W变异:异：指沙门菌失去Vi抗原的变异。

?——初次分离得到的具有Vi抗原、O不凝集的沙门菌称为V型菌；

?——Vi抗原部分丧失，既可与O抗血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌；

?——Vi抗原完全消失，与O抗血清发生凝集而与Vi抗血清不凝集者称W型菌。

V-W变异的过程是V型菌经人工培养，逐渐丧失部分Vi抗原而称为VW型菌，进而成为W型菌

5）Vi抗原:由聚-N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸组成。不稳定，新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此抗原。Vi抗原存在于细菌表面，具有微荚膜功能，能抵抗吞噬细胞的杀伤和吞噬，并阻挡抗体、补体等

破坏菌体作用。测定Vi抗体有助于对伤寒带菌者的检出。

6）外斐反应：变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒立克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用OX19，OX2，OXk代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交叉凝集反应，此称外斐试验，

辅助诊断立克次体病

第十二章革兰阳性杆菌

1.名词解释：

1）串珠试验：接种待检菌于含有0.05-0.1IU/ml青霉素的普通营养琼脂培养基；37℃，6h后，炭疽杆菌可发生形态变化；镜下观察，抑菌和生长临界处，菌体膨隆相连似串珠状菌链，而类炭疽杆菌无此现象。

2）异染颗粒：常见于白喉棒状杆菌等，在细胞内呈颗粒状，主要成分为RNA及嗜碱性的多偏磷酸盐，用美蓝或奈瑟染色（Neisser stain）后，这些颗粒与菌体颜色不同，两端或一端可见着色较深的异染颗粒（metachromatic

granules）；异染颗粒有时仅位于菌体两端，常称为极体。

3）纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) PPD有两种，由人结核分枝杆菌来源的PPD-C和卡介苗制成的

BCG-PPD。目前主要用PPD，每0.1ml含5单位。

4）抗酸杆菌：(acid-fastbacilli)又称分歧菌。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有关。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。分歧杆菌种类较多，可分为结核分歧杆菌复合群、非结核分歧杆菌和麻风分歧杆

菌三类。一般不易着色，染色时需要加温或延长时间，着色后能抵抗酸酒精的脱色，故称抗酸杆菌。

5）结核菌（OT）素试验：用于诊断结核菌感染所致IV型超敏反应的皮肤试验。对诊断活动性结核病和测定机体细胞免疫功能有参考意义。机体受结核杆菌感染4～8周后，即可产生免疫变态反应。

6）卡介苗：即将有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油胆汁马铃薯培养基上长期培养传代，得到减毒菌株，可用于预防结核菌感染。

2．简述结核分枝杆菌的形态及培养特性

形态：结核分枝杆菌细长略弯，有时呈分枝状，大小约1～4mm×0.4mm，无芽胞、鞭毛和荚膜。

抗酸染色阳性：由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质，不易着色，一般不用革兰染色法染色。用齐—尼氏抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以5%石炭酸复红加温染色后能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，结核分枝杆菌被染成红色，而其他非抗酸菌及背景则被美篮复染呈蓝色。

此外，结核分枝杆菌在药物如异烟肼的影响下，亦可变为抗酸染色阴性。

菌落特征：表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒、结节或“花菜状”，乳白色或淡黄色，不透明

培养特性：

?专性需氧

?最适生长温度为37℃，低于30℃不生长。

?最适酸碱度为pH6.5～pH6.8

?营养要求高，生长缓慢，必须在含有血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。

常用罗-琴(Lowenstein-Jensen,L-J)固体培养基，内含蛋黄(含脂质生长因子，能刺激生长)、马铃薯、甘油(甘油对人型菌生长有促进作用。一定浓度对牛型及鼠型菌有抑制作用)、无机盐和孔雀绿(抑制杂菌，利于分离和长期保存)等。

?本菌生长缓慢，一般2-4周才能长出菌落。

3.简述结核菌素试验原理、结果判断及意义

?原理：结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应。它是抗原(结核菌或卡介苗)进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏，并大量分化增殖。当已致敏的机体再次遭受到抗原入侵时，致敏淋巴细胞就会与之结合，引起变态反应性炎症。表现在结核菌素注射部位形成硬结甚至发生水泡、坏死。结素试验阳性表明机体曾经受到结核菌感染或接种过卡介苗，也表示机体对结核菌有一定免疫力。

?方法：取两种PPD 5单位注入两前臂皮内，48～72小时后观察红肿直径

?结果：阴性：＜5mm；阳性：＞5mm；强阳性：≥15mm

结核菌素试验应用

?选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果?了解人群自然感染率

?作为婴幼儿结核病的辅助诊断?测定肿瘤患者的细胞免疫功能

4. 简述炭疽芽孢杆菌的抗原构造

?细菌性抗原：菌体多糖、荚膜抗原、芽孢抗原

?炭疽毒素：水肿因子、致死因子、保护性抗原三种蛋白质组成的外毒素复合物。

1 菌体多糖：由D-葡萄糖胺，D-半乳糖及乙酸组成，与毒力无关。能耐热、耐腐败。环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应），对炭疽病诊断有一定价值。不仅有抗原性，而且是多种植物凝集素受体。如大豆凝集素、相思豆凝集素等，故可用植物凝集素来鉴定菌。

2 荚膜: 非保护性抗原；有抗吞噬作用，与毒力有关，是重要的毒力因子和特异性抗原，有鉴别诊断价值。

3. 芽孢抗原: 芽孢外膜含有抗原决定簇，具有免疫性和血清学诊断价值

炭疽毒素：水肿因子（EF）、致死因子（LF）、保护性抗原（PA）EF 和LF的作用，都需PA的协同

临床细菌学检验的质量控制流程

临床细菌学检验的质量控制流程 1、质量的概念和质量保证 影响检验结果质量的因素很多,实验过程中,仪器、试剂和操作等均会引起试验结果的误差,衡量检验结果的质量常用准确度和精确度,或特异性和灵敏度。具体采用哪一种指标应根据实验的性质决定,目前临床细菌学检验的工作内容大致有3类,衡量起质量的技术指标不完全相同。 第一类是检出细菌的实验,包括标本直接涂片检查和细菌分离培养。现代的细菌感染,混合菌较常见,一份标本中,会有2种以上细菌存在。无论标本直接涂片还是分离培养,检验结果必须如实反映感染病灶中细菌的真实情况。这类实验的质量,应该用细菌检出率或细菌分离率来衡量。 第二类是鉴定细菌的实验。通过一系列生理生化及形态学、血清学的手段来鉴定病原菌。对分离到的病原菌都做出准确的鉴定,是反映细菌事工作质量的一个重要方面。 第三类是药敏实验。有稀释法和纸片法,前者是半定量的实验,可以用准确度和精密度来衡量,后者以敏感或耐药的形

式报告,属于定性的实验,但实验过程中测量抑菌环是定量的指标。也应以准确度和精确度衡量。 所以实验室人员必须清楚认识到以上这一点,在实验室的设计和管理方面就应该主动设置误差检测系统,实验中一旦出现误差及时发出警报,查明原因及时纠正。 2、室内质量控制 2.1在职人员 2.1.1须受过细菌学检验的专门基础教育以及相关的生物交全防护知识,并以细菌检验为专业,及时终结并积累工作经验。 2.1.2作人员必须具有严谨的工作态度,技术操作须完全遵守操作规程,并直接参与质量控制工作。 2.1.3工作人员应不断加强自身的业务学习,及时了解本领域的新进展,将所掌握的新知识应用到实际工作中。 2.1.4实验室管理人员应注意利用一切机会培养技术人员,积极参加国际、国内学术会议、专业培训班,获取新信息。因为细菌学检验,投资人员培训远比投资与仪器设备更重要。 2.2操作手册及参考书

细菌学检查

细菌学检查 非发酵菌 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌（P.Mallei）是鼻疽病的病原菌。可从患者血液、脓液、痰中分离到。 【临床意义】 对马、骡、驴的传染性很强，犬、猫、羊等都可被感染。可通过擦伤皮肤、直接接触 和吸入本菌而感染。人类感染较少见，但经常与病畜接触的人也可患鼻疽病。实验室感染 也可发生。 产碱假单胞菌 【临床意义】 为条件致病菌，可引起脓胸、眼部感染、脓肿等 恶臭假单胞菌 恶臭假单胞菌(P.Putida)为鱼类的一种病原菌，常可从腐败的鱼类中检出，偶尔可从 尿路感染患者的尿中及血库存血中分离出来。 非发酵菌 非发酵菌（Nonfermenters）大多是条件致病菌。包括十几个菌属的数十个种别，如 假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、莫拉氏菌属等。 由于非发酵菌有很多菌属，每个菌属又有多个种，因此对其必须先进行初步分群，即 先进行科、属的鉴别，然后再进行种间鉴别。 腐败假单胞菌 腐败假单胞菌（P.Putrefaciens）为腐物寄生菌，分布非常广泛，河水、污水、土壤、牛奶、鸡蛋等均有存在。可引起奶油、鱼、肉变质并产生H2S。 【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起人类中耳炎、创伤后溃疡、败血症、呼吸道感染，以及糖 尿病或体弱患者的皮肤化脓性溃疡。 假单胞菌属

假单胞菌属（Rseudomonas）分布很广，水、污水、土壤和空气中均存在。本属有几 十个菌种，临床较常见的有十种左右。代谢菌种为铜绿色假单胞菌。人类感染的非发酵菌，假单胞菌占70%～80%。主要是铜绿色假单胞菌（占55%～65%）。 类鼻疽假单胞菌 类鼻疽假单胞菌（P.Pseudomallei）可引起类疽病。 【临床意义】 为条件致病菌。人类接触污染的污水、土壤或通过直接接触（划破皮肤或擦伤）而进 入人体，也可从呼吸道、消化道进入人体而感染。但罕见人与人之间相互传染。 本菌可潜伏体内几年不发病，在多发地区这种隐性感染是很高的。败血性类鼻疽病如 不及时治疗进展迅速，且死亡率很高。 类产碱假单胞菌 类产碱假单胞菌（P.Pseudoalcaligenes）与产碱假单胞菌很相似，属于假单胞菌中 的产碱群。 【临床意义】 可引起肺炎、术后膝关节感染、脑膜炎和败血症。 嗜麦芽假单胞菌 嗜麦芽假单胞菌（P.Maltophilia）在自然界分布很广，自来水、河水、污水、牛奶 和冻鱼中均可存在，在正常人的咽喉、痰和粪便中可检出。 【临床意义】 本菌为条件致病菌，可引起大叶性肺炎、支气管肺炎、吸入性肺炎、心内膜炎、结膜炎、脑膜炎、伤口感染和败血症等。 斯氏假单胞菌 斯氏假单胞菌（P.Stutzeri）在水中及土壤中到处可见，在粪便、肥料、人类的呼吸道、泌尿道均可发现。 【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起呼吸道感染、中耳炎、关节炎、尿路感染及败血症。 铜绿假单胞菌

细菌学检验试题

细菌学检验一、名词解释 Imvic实验 Sop 基因突变 Sos显色实验 探针 芽孢 二、选择题 【A型题】 1．证明细菌具有鞭毛结构的常用方法是：E A．革兰染色法 B．抗酸染色法 C．普通琼脂培养法 D．液体培养法 E．半固体培养法 2．革兰染色法在临床上常用于： B A．鉴别细菌的血清型别 B．协助临床选择用药 C．诊断疾病 D．解释发病机制 E．判定细菌的免疫性

3．测量细菌的常用单位是：B A．mm B．μm C．nm D．pm E． 4．不属于细菌的基本结构的是：D A．细胞壁 B．细胞膜 C．细胞浆 D．细胞器 E．核质 5．细菌细胞壁的最主要成分是： B A．脂类 B．蛋白质 C．糖类 D．脂蛋白 E．***聚糖 6．不属于细胞基本结构的是： A A．鞭毛 B．中介体 C．细胞膜 D．核糖体 E．核质

7．青霉素抗菌作用的机理是： A A．干扰菌细胞壁的合成 B．破坏菌细胞壁上的磷壁酸 C．干扰菌细胞蛋白质的合成 D．破坏菌细胞膜的通透性 E．破坏菌细胞壁的多糖骨架 8．溶菌酶的杀菌机理是：E A．干扰菌细胞壁交联桥的合成 B．干扰二氨基庚二酸的活性 C．破坏聚糖骨架上四***侧链的连接D．干扰菌细胞核质的活性 E．破坏菌壁多糖骨架β-1、4键的连接9．关于L型细菌叙述错误的是：C A．由于细胞壁缺陷常呈多形态 B．染色体不易着色 C．无致病力 D．常规细菌学检查多呈阴性 E．除去诱导因素可回复成原来的细菌10．质粒是细胞的：A A．染色体以外DNA B．核质RNA C．储存高能的胞浆颗粒 D．胞浆中rRNA E．中介体

11．关于菌毛叙述错误的是：A A．是细菌的运动器官 B．分为普通菌毛和性菌毛 C．成分是蛋白质 D．普通菌毛与细菌的致病性有关 E．普通光学显微镜下不能看见 12．细菌的革兰染色性不同主要是因为：D A．形态不同 B．营养需要不同 C．生理功能不同 D．细菌细胞壁结构不同 E．致病性不同 13．细菌学形态学检查中最常用染色方法是： E A．抗酸性染色法 B．特殊染色法 C．暗视野墨汁染色法 D．美兰单染色法 E．革兰染色法 14．细菌的繁殖形式是：D A．接合 B．裂殖 C．胞子 D．二分裂 E．复制

《细菌学检验》教学大纲

《细菌学检验》教学大纲 （供卫生检验专业使用） 一、课程性质、目的和任务 细菌学检验是卫生检验专业重要的专业课程之一，是卫生检验课程体系的重要组成部分，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。通过学习，使学生掌握细菌学检验的基本技术和常见重要致病细菌及分子生物学技术。本课程通过课堂讲授、讨论、实验实习、自学等方式进行教学。要求学生掌握细菌的分离培养方法、血清学实验及分子生物学技术在细菌学检验中的应用；掌握常见重要致病细菌的生物学性状、检验方法和预防医学意义。为学生今后从事疾病预防控制、卫生监督、科学研究等方面的工作奠定必要的基础。 二、课程基本要求 本课程分为掌握、熟悉、了解三种层次要求；“掌握”的内容要求理解透彻，能在本学科和相关学科的学习工作中熟练、灵活运用其基本理论和基本技能；“熟悉”的内容要求能熟知其相关内容的概念及有关理论，并能适当应用；“了解”的内容要求对其中的概念和相关内容有所了解。 通过本课程的学习，使学生掌握细菌的分离培养方法、血清学实验及分子生物学技术在细菌学检验中的应用；掌握常见重要致病细菌的生物学性状、检验方法和预防医学意义。 考试内容中“掌握”的内容约70%，“熟悉、了解”的内容约25%，有5%左右的大纲外内容。 本大纲的配套使用教材是卫生部规划教材《细菌学检验》（张朝武主编，北京：人民卫生出版社，2006年）。 三、课程基本内容及学时分配 细菌学检验教学总时数为63学时，其中理论为27学时，实验为36学时。细菌学检验共分十七章，大体分为基本理论、基本技能和各论两个部分。第一部分从第一章到七章，主要内容为细菌学实验的基本要求、细菌学检验基本技术、细菌的分子生物学检测、细菌的分型及其检测技术、细菌的分类与命名、化学物质致突变性的微生物检测方法、消毒学试验技术；第二部分从八章到十七章，主要内容为革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、肠杆菌科、弧菌属、革兰氏阳性杆菌、与医学有关的其他细菌、螺旋体属、立克次体、衣原体和支原体等。 第一章细菌学实验的基本要求（2学时） 【掌握】 1．实验室生物安全级别； 2．实验室生物安全设备； 3．实验室内的质量控制。 【熟悉】 1．实验室生物安全管理；

微生物学检验题库及答案

微生物学检验题库及答案

《微生物学与检验》题库及答案 一.名词解释 1.医院感染 2.肥达反应 3.内基小体 4. 噬菌体： 5.血浆凝固酶 6.败血症 7.灭菌 8.药物敏感试验 9.外 - 斐氏试验 10.L 型细菌 11.菌群失调： 12.微生物 13.细菌 14.最小抑菌浓度 15.菌落 16.汹涌发酵 17.无菌操作 18.流感杆菌“卫星现象” 19.培养基 20.包涵体 21.正常菌群 22. 内毒素 23. 干扰现象： 24.菌血症 25菌丝： 二.填空题 1 L 型细菌是指（）。 2 杀灭物体上所有微生物的方法称为（）。 3 细菌 H-O 变异是指（）。 4 药敏试验所用标准培养基是，所用菌液相当于（）个细菌／ ml ，细菌接种采用（）划线接种法。 5 细菌致病因素包括（）、（）和（）。 6 细菌引起的全身感染包括（）、（）、（）和（）四种类型。 7 不染色标本检查主要用于观察细菌的（）。 8 影响革兰染色结果的关键步骤是（）。 9 有动力细菌在半固体培养基中的生长现象是穿刺接种线（），无动力细菌穿刺接种线（）。 10 糖发酵试验用于观察细菌分解糖是否产（）和（）。 11 靛基质试验的原理为，细菌产生的色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸而生成（），此代谢产物与加入的试剂反应，生成（）。 12 链球菌根据溶血现象分为（）、（）和（）三种类型。 13 葡萄球菌触酶试验结果为（）性，链球菌触酶试验结果为（）性。 14 呈现脐窝状菌落的球菌是（）。 15 抗 O 试验是测定病人血清中（）抗体效价的试验，用于风湿热等疾病的辅助诊断。 16 血平板上呈现草绿色溶血环的病原性球菌是（）和（）。 17 IMViC 试验包括（）、（）、（）和（）四项试验。 18 分解乳糖的细菌在肠道选择平板上呈现（）菌落，不分解乳糖则为（）菌落。 19 KIA 斜面红色表明，底层黄色、有气泡表明（）、（），有黑色沉淀表明（）试验阳性 20 霍乱弧菌生物型包括（）和（）。 21 AIDS 的传染源是（）和（），传播途径主要有（），（）和（）。 22 真菌菌落有（）、（）和（）三种。 23 病毒培养方法有（）、（）和（）。 24 病毒的基本结构由（）和（）组成，有些病毒还具有（）。 25 流感病毒根据抗原结构不同分（）、（）、（）三型，其中容易引起流感大流行的是其中的（）型。

结核病细菌学检验

结核病细菌学检验 一、目的和任务 结核病人的细菌学检查，是发现传染源的最主要途径和手段，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据，也是考核疗效、评价防治效果的可靠标准。因此，结核病细菌学检查是国家结核病控制规划(NTP)的重要组成部分，在结核病防治工作中起着不可缺少的重要作用。 二、实验室的职能 为落实国家结核病控制规划中对结核病传染源监控要求，应建立各级结核病细菌学实验室，明确其职能和工作围。 各级结核病细菌学参比实验室(简称参比实验室)，应明确为各自辖区的结核病控制工作服务的宗旨。 (一)国家结核病参比实验室 在卫生部结核病控制中心领导下，国家结核病参比实验室负责全国结核病细菌学工作的规划，实施等技术管理，并向中心报告工作。 国家结核病参比实验室，应保持适当数量和结构的人员编制：专业人员15～20人，其中高级专业技术职称3名以上，中级10名，初级7名。 参比实验室的职能： 1根据国家结核病控制规划的要求，规划全国结核病细菌学工作，制定实施措施，对全国结核病细菌学监控质量进行督导和评估。国家结核病参比实验室负有指导、协调、督导各省(市、自治区)参比实验室的工作。 2建立结核病细菌学实验技术标准化准则、操作规程及规章制度。推行WHO推荐的国际通用的结核病细菌学检查技术。 3建立可行的涂片镜检、分离培养、药物敏感性试验的质量控制标准和质量控制系统。 4承担非结核分支杆菌菌种的最后鉴定，和其它非常规分析手段的实施。 5建立结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床菌株库网。制定库网的管理、交流和资源提供办法。 6开展结核病细菌学等实验诊断新技术，新方法的基础研究，及其实际应用可行性评估。 7对我国结核病控制的实施性研究，提供细菌学服务。此外，对常规结核病细菌学检查方法进行实施性研究。 8培训省(市、自治区)或地、市参比室技术人员。 (二)省(市、自治区)参比实验室 省级参比实验室，是我国结核病控制规划细菌学监测中的重要环节。在省结核病防治所(科)的领导和国家结核病参比实验室的指导下，负责所在辖区结核病细菌学工作计划的制定和实施等技术管理。 省级参比实验室，应有5～10名专业人员，其中含中、高级专业技术职称人员2名以上。 省级参比实验室，至少具有50平方米以上的实验工作场所。具备开展检查项目的相应仪器

细菌学检查

非发酵菌 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌（P.Mallei）是鼻疽病的病原菌。可从患者血液、脓液、痰中分离到。 【临床意义】 对马、骡、驴的传染性很强，犬、猫、羊等都可被感染。可通过擦伤皮肤、直接接触和吸入本菌而感染。人类感染较少见，但经常与病畜接触的人也可患鼻疽病。实验室感染也可发生。 产碱假单胞菌 【临床意义】 为条件致病菌，可引起脓胸、眼部感染、脓肿等 恶臭假单胞菌 恶臭假单胞菌(P.Putida)为鱼类的一种病原菌，常可从腐败的鱼类中检出，偶尔可从尿路感染患者的尿中及血库存血中分离出来。 非发酵菌 非发酵菌（Nonfermenters）大多是条件致病菌。包括十几个菌属的数十个种别，如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、莫拉氏菌属等。 由于非发酵菌有很多菌属，每个菌属又有多个种，因此对其必须先进行初步分群，即先进行科、属的鉴别，然后再进行种间鉴别。 腐败假单胞菌 腐败假单胞菌（P.Putrefaciens）为腐物寄生菌，分布非常广泛，河水、污水、土壤、牛奶、鸡蛋等均有存在。可引起奶油、鱼、肉变质并产生H2S。

【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起人类中耳炎、创伤后溃疡、败血症、呼吸道感染，以及糖尿病或体弱患者的皮肤化脓性溃疡。 假单胞菌属 假单胞菌属（Rseudomonas）分布很广，水、污水、土壤和空气中均存在。本属有几十个菌种，临床较常见的有十种左右。代谢菌种为铜绿色假单胞菌。人类感染的非发酵菌，假单胞菌占70%～80%。主要是铜绿色假单胞菌（占55%～65%）。 类鼻疽假单胞菌 类鼻疽假单胞菌（P.Pseudomallei）可引起类疽病。 【临床意义】 为条件致病菌。人类接触污染的污水、土壤或通过直接接触（划破皮肤或擦伤）而进入人体，也可从呼吸道、消化道进入人体而感染。但罕见人与人之间相互传染。 本菌可潜伏体内几年不发病，在多发地区这种隐性感染是很高的。败血性类鼻疽病如不及时治疗进展迅速，且死亡率很高。 类产碱假单胞菌 类产碱假单胞菌（P.Pseudoalcaligenes）与产碱假单胞菌很相似，属于假单胞菌中的产碱群。 【临床意义】 可引起肺炎、术后膝关节感染、脑膜炎和败血症。

细菌学检验-总结

细菌学检验重点 （选择20个20分，填空52个26分，名词解释6个18分，简答6个24分，论述1个12分） 注：以下内容主要是老师的红字部分，可能看的过程有些吃力，大家结合课件和书本看哈，帮助理解，不过老师说过考点重点在红字部分的 第一章细菌学实验的基本要求 1、实验室生物安全(Laboratory biosafety): 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。 2、生物安全防护基本要求 实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories） –实验对象：致病的微生物及其毒素 –` –综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等 –确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。 实验室生物安全通用原则 ?积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物； ?主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放； ?尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。 3、实验室必须设有专职的生物安全负责人 实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。 * 生物安全等级 ?生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。 –实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。 4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区 5、各级生物防护实验室特点 ?一级生物安全防护实验室（BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。 ?二级生物安全防护实验室（BSL-2/P2 ） 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。 : 在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。 ?三级生物安全防护实验室（BSL-3/P3）：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。 ?四级生物安全防护实验室（BSL-4/P4 ）：适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。 6、控制措施 ?安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。 ?所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。 7、生物安全柜（BSC）biosafety cabinet(概念、分级及特点) ?具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。(净化排气) ?? ?根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为I、Ⅱ、Ⅲ级3种类型。 ?实验室应按要求分别配备I、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。 Ⅰ级生物安全柜：外部空气

细菌学检验考试复习重点 名词 简单

一、名词解释1．毒性噬菌体能在宿主细胞内复制、增值，产生许多子代噬菌体，最终裂解宿主细菌。2．温和噬菌体与宿主菌的染色体整合，随细菌DNA 的复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产生子代噬菌体。3．前噬菌体（百度百科）整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸称之为前噬菌体。整合在细菌基因组中的噬菌体基因组。4．溶原性细菌带有前噬菌体的细菌称为溶源性细菌。5．噬菌斑在固体培养基上，噬菌体对宿主菌细胞的裂解作用可使菌落溶解，导致在带菌琼脂平板上产生空斑，易于观察。6．L-型细菌是一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型。7．MIC 最低抑菌浓度稀释法所得到的某抗菌药物的抑制待测菌生长的最低浓度。8．链激酶试验9．血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变成为纤维蛋白，附着于细菌表面，产生凝固。10．肥达反应用已知伤寒沙门菌的O、H 抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌的H 抗原作为诊断菌液，与受检血清作试管或微孔板凝集试验，检测受试血清中有无相应的抗体及其效价的一种半定量试验。11．内毒素内毒素是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖（LPS）组分，只有当细菌死亡破裂或用人工方法裂解菌体后才释放。12 . 鲎试验鲎是一种海洋节肢动物，其血液中含有一种独特的有核变形红细胞。这种变形细胞的裂解物可与微量的细菌内毒素发生凝胶反应。因此，可用此反应定量和半定量检测细菌内毒素。13 . RTD 能产生次于融合性裂解的最高稀释度，既是该噬菌体的RTD。14 . 串珠试验将带测菌接种于含0.05~0.1IU/ml 青霉素的普通营养琼脂培养基37℃、6h 后，炭疽杆菌可发生形态变化，在高倍显微镜下检查，同时用不含青霉素的琼脂片培养物对照，阳性菌体膨隆相连似串珠，而类炭疽杆菌则无此现象。15 . 卡介苗BCG 将牛分枝杆菌经过13 年230 次传代培养而获得的减毒活疫菌株。16 . 外斐反应变形杆菌属的某些菌株（X19,X2.Xk）的菌体（O）抗原与斑疹伤寒立克次体（和恙虫病立克次体）有共同抗原，故可用这些变形杆菌抗原（OX19，OX2，Oxk）代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病。17 . S9 哺乳动物微粒酶系统，是体外致突变试验的代谢活化系统。18 . SOS 显色试验是一种利用微生物“SOS”修复能力检测致突变物、致癌物的方法。19 . Ascoli 热沉淀反应在病兽腐败脏器或包皮虽经长时间煮沸仍可与相应免疫血清发生环状沉淀反应。20 . 反应素人感染梅毒螺旋体后，除产生特异性抗体外，还产生一种反应素（脂质抗体）。21 . 非螺旋体抗原试验用于初筛梅毒螺旋体。22 . 支原体是一类无细胞壁、形态上呈高度多形性，可通过除菌滤器，在无生命的培养基中能生长繁殖的最小原核细胞型微生物。23 . 衣原体是一类具有独特生长发育周期、专性细胞内寄生、能通过细菌滤过器的原核细胞性微生物。 24 . 立克次体是一类微小杆状或球杆状、革兰阴性、除少数外仅能在宿主细胞内繁殖的原核细胞性微生物。25 . 病毒仅由核酸（DNA 或RNA）和蛋白质外壳构成的专营细胞内生存的寄生物。二、重点复习：1、简述食品卫生细菌学样品采样的原则、种类及特点。 21 样品采集原则：①具有代表性②防止样本受到外源性污染③防止细菌生长④食物中毒时应及时采集可疑食物样本采样种类：分大样、中样和小样。大样：一整批样本；中样：混合样本，200g；小样：分析用，检样，25g。2、简述药敏试验的目的及方法。K-B 法药敏试验的影响因素有哪些？73 目的：测定抗菌药物抑制或杀死细菌的能力。方法：纸片扩散法、稀释法、E-试验法、联合药敏试验、自动化检测法、分子生物学方法。目前常用的方法是纸片扩散法、稀释法，多用于需氧菌和碱性厌氧菌。因素：①培养基②琼脂浓度与厚度③PH 值④药物纸片的质量⑤操作因素⑥菌液浓度3、菌种保存的方法、特点及菌种保管的规章制度。防止菌种退化的主要措施有哪些？87— 90 保藏方法：一培养基保藏法：1 琼脂斜面保藏法二载体干燥保藏法三真空冷冻干燥保藏法四低温及超低温保藏法2 半固体穿刺法3 石蜡封存法防止菌种退化措施：①控制传代次数②用典型菌株和菌落传代③通过易感动物传代使菌种恢复原有特性④定期检查菌种性状4、细菌

临床医学检验技术(中级)-微生物和微生物学检验(B1型题)_0

临床医学检验技术（中级)-微生物和微生物学检验 (B1型题) 1、不会通过母婴途径传播的RNA病毒是 A.HAV B.HSV C.HCMV D.HIV E.HPV 2、通过性接触传播的RNA病毒是 A.HAV B.HSV C.HCMV D.HIV E.HPV 3、接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，新型隐球菌呈棕黑色菌落的是 A.芽管形成试验 B.厚壁孢子形成试验 C.酚氧化酶试验

D.尿素酶试验 E.毛发穿孔试验 4、假丝酵母菌属中仅白假丝酵母菌阳性的试验是 A.芽管形成试验 B.厚壁孢子形成试验 C.酚氧化酶试验 D.尿素酶试验 E.毛发穿孔试验 5、医院感染最重要的感染源为 A.患者 B.医院工作人员 C.探视者 D.陪同人员 E.未彻底消毒灭菌的血液制品 6、可作为共同传播媒介物引起医院感染的为 A.患者 B.医院工作人员 C.探视者 D.陪同人员

E.未彻底消毒灭菌的血液制品 7、不属于钝化酶的是 A.乙酰转移酶 B.核苷转移酶 C.磷酸转移酶 D.红霉素酶 E.CTX-M型酶 8、细菌对氯霉素的耐药机制为 A.乙酰转移酶 B.核苷转移酶 C.磷酸转移酶 D.红霉素酶 E.CTX-M型酶 9、具有高度变异性的肝炎病毒是 A.HAV B.HBV C.HCV D.HDV E.HEV

10、可形成包涵体的肝炎病毒是 A.HAV B.HBV C.HCV D.HDV E.HEV 11、耐碱不耐酸的细菌是 A.结核分枝杆菌 B.痢疾志贺菌 C.伤寒沙门菌 D.霍乱弧菌 E.脑膜炎奈瑟菌 12、细胞壁含脂类最高的细菌是 A.结核分枝杆菌 B.痢疾志贺菌 C.伤寒沙门菌 D.霍乱弧菌 E.脑膜炎奈瑟菌

食品卫生细菌学检验技术

锯取样品，也可以用无菌钻头钻取碎样品，放入无菌容器。注：固体样品或冷冻食品取样还应

注意检样目的，若需检验食品污染情况，可取表层样品；若需检验其品质情况，应再取深部样品。 （5）生产工序监测采样 车间用水：自来水样从车间各水龙头上采取冷却水，汤料从车间容器不同部位用100ml无菌注射器抽取。 车间台面、用具及加工人员手的卫生监测：用板孔5cm2无菌采样板及5支无菌擦拭25cm2面积。 车间空气采样：将5个直径90mm的普通营养琼脂平板分别置于车间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖上平板送检 3、 采样的标签：采样前或后应立即贴上标签，每件样品必须标记清楚，如品名、来源、 数量、采样地点、采样人及采样时间（年、月、日） 取样注意事项： （1）防止交叉污染或二次污染：取样人员的个人卫生控制；取样地点的环境控制，空气净化要达到要求；取样的器皿要求彻底消毒，避免直接与空气接触；取样的操作要规范、迅速（无菌操作）；减少样品存放的时间（保持样本原有的状态、易变质的样本要冷藏） (2)取样要有代表性：取样的数量标准；取样的方法 二、送检 采样后，在送检过程中，要尽可能保持检样原有的物理和微生物状态，不要因送检过程而引起微生物的减少或增多。 1、无菌方法采样后，所装样品的容器要无菌，装样后尽可能密封，以防止环境中的微 生物进一步污染； 2、进行微生物检验的样品，送达实验室要越快越好，一般不应超过3h。若路途遥远， 可将不需冷冻的样品，保持在1～5 ℃环境中送检，可采用冰桶等装置；若需保持在冷冻状态（如已冰冻的样品），则需将样品保存在泡沫塑料隔热箱内，箱内可置干冰，使温度维持在0℃以下，或采用其他冷藏设备； 3、送检样品不得加入任何防腐剂； 4、水产品因含水分较多，体内酶的活力较旺盛，易于变质。因此，采样后应在3h内送 检，在送检途中一般都应加冰保存； 5、对于某些易死亡病原菌检验的样品，在运送过程中可采用运送培养基。 6、检样标注适当的标记并填写微生物学检验特殊要求的送检申请单。其内容包括：样 品的描述，采样者的姓名，采样的日期、时间、地点，采样时的温度和湿度等

临床细菌学检验的质量控制

临床细菌学检验的质量控制 目的研究临床细菌学检验质量控制措施。方法本组抽取我院于2012年8月～2013年8月从各科室采集的4500例细菌标本进行临床实验。分析检验结果的准确性。结果经临床病理证实，临床细菌学检验质量优良为2412例，合格为1778例，不合格为310例，合格率为93.11%。结论规范管理程序，保证标本质量采集的质量，对提高临床细菌学检验的质量具有重要意义。 标签：样本采集；检验质量；细菌学 随着医疗技术的快速发展，细菌学检验逐渐成为临床医学中重要的组成部分。通过对入院患者进行标本采集、研究等，可为临床治疗提供依据。由于临床细菌学检验内容非常复杂，包括标本采集、运送、保存、药物过敏检验等多方面的内容，任一环节出错，都会对检查质量造成影响，因此我们必须格外注意各环节的操作标准。现对我院采集的4500例细菌标本的检验过程进行综合分析，得出如下结论。 1资料与方法 1.1一般资料本组抽取我院于2012年8月～2013年8月从各科室采集的细菌标本4500例，其中559例血液标本，678例粪便标本，894例尿液标本，686例脓液标本，759例生殖道分泌物，924例痰液标本。 1.2方法将采集的标本进行分类处理，对不同的标本进行临床细菌学检验，记录检验结果。 1.3临床评价标准参照医学微生物检验规范对本组实验进行综合评价。根据检验结果的准确性进行综合评价，以优良、合格、不合格作为评价等级。对不合格标本进行研究，分析其影响因素。 2结果 本组4500例标本，其中优良为2412例，合格为1778例，不合格为310例，合格率为93.11%。其中，以粪便标本和血液标本的检查合格率最高，见表1。本组310例不合格，不合格率为6.89%，其具体影响因素见表2。 3结论 随着医疗技术的进步，细菌学开始广泛的应用于临床诊断中，为临床治疗提供准确的依据。临床细菌学检验的过程主要包括细菌采集、运送、管理、检验等，在这一系列的过程中，往往会受到其他因素的干扰，影响检验质量。 3.1影响临床细菌学检验质量的因素

临床微生物学检验技术复习练习试题(一)

临床微生物学检验技术复习练习试题绪论 选择题 A 型题（只选一个最佳答案） 1.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据 A 单细胞，结构简单 B 原始核，细胞器不完善 C 二分裂方式繁殖 D 有细胞壁 E 对抗生素敏感 2.属于非细胞型微生物 A 细菌 B 病毒 C 衣原体 D 真菌 E 立克次体 3．第一架观察微生物的显微镜放大的倍数 A 200倍 B 266倍 C 500倍 D 366倍 E 1000倍 4．不属于原核细胞型微生物的是 A 螺旋体 B 衣原体 C 支原体 D 真菌 E 放线菌 5．首次使用固体培养基的科学家是 A 琴纳(Edward Jenner) B 巴斯德 (Louis Pasteur) C 伊凡诺夫斯基(Iwanovsky) D 列文胡克(Leewenhoek) E 郭霍(Robert Koch) 6．微生物特点描述哪项错误 A 形体小，结构简单 B 肉眼看不见的低等生物 C 分布广，种类多 D 繁殖快，代谢强 E 不易发生变异 B型题（每题只选一个最佳答案，备选答案可重复被选） A 法国的巴斯德

B 德国的郭霍 C 俄国的伊凡诺夫斯基 D 中国的汤飞凡 E 荷兰的列文胡克 1.最早观察到细菌 2.创用固体培养基分离细菌 3.病毒发现起重要贡献的是 4.狂犬病疫苗、炭疽病疫苗研制者 5．首先证实有机物发酵和腐败是由微生物引起 6．首先成功地分离出沙眼衣原体 7.结核杆菌、炭疽芽胞杆菌的发现者 X型题（选2个以上答案） 1.属于原核细胞型微生物 A 细菌 B 病毒 C 衣原体 D 真菌 E 立克次体 2．微生物与人类的关系 A 大多数微生物可导致人发病 B 微生物可以制造菌肥和杀死害虫，促进农作物生长 C 微生物可以产生多种抗生素 D 微生物可为基因工程提供必不可少的工具酶和载体系统 E 病原微生物可以引起人和动物发病 填空题 1．微生物的特点：； ； ； 。 2．原核细胞型微生物仅有原始核质，无 、； 缺乏，只有核糖体。

水质的细菌学检查

水质的细菌学检查 一、目的要求 (一)学习水质的细菌学检查法 (二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 二、基本原理 检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。 饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水肠菌群数不得超过3个。 三、实验材料 培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。 四、实验客 (一)采取水样 1、自来水：从学校各生活区取样。先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。 2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面 10—15厘米深层水样。水样采取后应立即检验，不得超过4小时。 (二）水中细菌总数测定 l、自来水： 稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱，培养24小时进行菌落计数。 制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备 培养基配方：附录二、常用培养基之一 培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒 水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数 细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数 2、池水、湖水或河水等。 稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。例如：取湖水稀释成10-1、10-2、10-3。每个稀释度作两个培养皿，并依上法倾入培养基制成平板，培养，计数。 菌落计数方法： （1）先计算同一稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不应采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一

《细菌学检验》教学大纲.

《细菌学检验》教学大纲 课程编码：10272046 课程名称：细菌学检验 英文名称：： bacteriological examination 开课学期： 学时/学分：40 / 2.5 课程类型：专业课 开课专业：卫生检验专业方向 选用教材：卫生微生物检验学（细菌学分册）四川科学技术出版社2003年8月第一版 主要参考书： 1、张文福主编. 医学消毒学.北京：军事医学科学出版社，2002 2、袁洽劻主编. 实用消毒灭菌技术.北京：化学工业出版社，2002 3、刘运德主编.微生物学检验（第二版）. 北京:人民卫生出版社.2004.33-36 4、[4]王秀茹主编.预防医学微生物学及检验技术.北京:人民卫生出版社.2002.67-76;925-935 5、张卓然主编。临床微生物学和微生物检验。北京：人民卫生出版社，第3版，2003 6、杨正时房海主编《人及动物病原细菌学》河北科学技术出版社2003.3第一版 7、洪秀华主编《临床微生物检验》科学技术文献出版社2005年2月第一版 8、斯崇文等主编《感染病学》人民卫生出版社2004年6月第一版 9、徐锡权主编《现代水传播病学》军事科学出版社2002年7月第一版 10、《消毒技术规范》，中华人民共和国卫生部， 2002年版 执笔人：赵书欣 一、课程性质、目的与任务 细菌学检验是卫生检验专业的专业课程，是在卫生微生物学的基础上深入的学习细菌学检验的理论和实验技术。细菌学检验即要遵循微生物学检验的基础理论和方法，又有其与病毒等其它微生物类群检验的不同之处。因此，通过这门课程的学习可使学生深入的了解细菌学检验的特点及掌握其专业知识和技能。 二、教学基本要求 1、全面掌握细菌学检验的基本理论，及思维方式； 2、全面了解细菌学检验的特点； 3、掌握必须的细菌学检验的技能； 4、注重培养学生的思维能力，采用理论与实践相结合，理论讲述与实验教学相结合的方法进行教学，培养和提高学生分析问题和解决问题的能力，使学生完成本门课程的学习任务之后，能够独立的设计并完成一些检验项目，比较全面的分析有关问题并提出解决办法。 三、各章节内容及学时分配 第一章细菌学实验的基本要求（1学时）

十水的卫生细菌学检验综合

实验十水的卫生细菌学检验（综合） a)水中大肠菌群数的测定 一、目的要求 学习大肠菌群数的检测原理和方法。 二、实验材料 1.样品：水样 2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。 3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等 三、基本原理 水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。 大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。 四、方法与步骤 1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。 取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。注意手指不得触及瓶口内部。在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。 2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存， 并不超过6h。 3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而 lml及lml以下接种量采用单料管。每一接种量接种3管，置于35~37℃培养24士2h。将产酸、产气的发酵管按下列程序继续进行检验。 4.在指示性培养基上分离培养：将产气的发酵管中的发酵液在EMB平板或远藤氏平板上 划线分离，置于35~37C培养18~24h。 5.革兰氏染色及镜检：于上述平板上长出的菌落中挑取1~2个大肠菌群可疑菌落进行镜检 和革兰氏染色。 6.复发酵试验：将上述镜检之菌落同时接种于乳糖发酵管，置于35~37C培养24土2h，观 察产气情况。 7.结果：凡是在乳糖胆盐发酵管产酸、产气，在指示性培养基上能生长的，革兰氏染色为 阴性的无芽孢杆菌，在复发酵管中产酸、产气的，即说明有大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阳性；有一项不符的，即说明无大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阴性。

常见微生物检验项目及临床意义

细菌培养与其它检验项目的临床意义 卫生部规定接受抗菌药物治疗的住院患者微生物检验样本送检率不低于30%（卫办医政发〔2011〕56号）。特介绍微生物检验项目，方便统计与分析点评。细菌检验为感染性疾病诊断和治疗提供依据： 目标性治疗：提高微生物的送检率与检出率，有利于诊断与使用抗菌药。 经验治疗：根据本地区病原菌类型时间、区域、耐药谱等使用抗菌药。 调整治疗方案针对性用药：获得准确病原菌和细菌药敏结果。 细菌培养的临床意义 细菌培养与其它检验项目不同，由于其样本采集易受杂菌的干扰和培养条件的限制，因而造成检测结果有时与临床不完全一致，故在分析细菌培养报告时应明白：细菌培养阴性不代表无细菌感染、细菌培养阳性不代表该菌一定是病原菌，应结合患者具体情况而定。 1、血液和骨髓培养 目前血液培养仍然是菌血症和败血症的细菌学检验的基本方法，并且广泛地应用于伤寒、副伤寒及其它细菌引起的败血症的诊断。菌血症系病原菌一时性或间断地由局部进入血流，但并不在血中繁殖，无明显血液感染临床征象。常可发生在病灶感染或牙齿感染，尤以拔牙、扁桃体切除及脊髓炎手术后等多见。败血症是指病原菌侵入血流，并在其中大量生长繁殖，造成身体的严重损害，引起显著的全身症状（如不规则高热与全身中毒等症状），它多继发于组织器官感染，尤其是当机体免疫功能低下、广谱抗生素和激素的应用及烧伤等。 单次的血培养结果，对临床无鉴别指导意义，应多次多部位采集血液进行培养，才可判定检出菌究竟是病原菌还是污染菌。 抽血时应特别注意皮肤消毒和培养瓶口的灭菌。 2、脑脊液培养 正常人的脑脊液是无菌的，故在脑脊液中检出细菌（排除操作中的污染）应视为病原菌。引起脑膜炎的细菌种类不同，化脓性脑膜炎病原菌多为脑膜炎奈瑟菌，除此之外尚有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌等。 3、尿液培养 尿液细菌培养对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值，对于尿道、前列腺以及内外生殖器的炎症也有一定价值。尿液中出现细菌通常称为菌尿症，如果尿液本身澄清但培养出细菌，一般为标本采集时未彻底消毒尿道口引起。如果细菌培养阳性同时伴有脓尿出现，则提示有尿路感染的可能（需指出轻度感染时可无脓尿出现）。泌尿系感染常见菌为大

智慧树知到《细菌学检验(山东联盟)》章节测试答案

智慧树知到《细菌学检验（山东联盟）》章 节测试答案 智慧树知到《细菌学检验(山东联盟)》章节测试答案 第一章 1、评价食品卫生质量，主要是检测国家标准所规定的食品卫生细菌学或微生物学指标 A:大肠菌群数、致病菌数 B:菌落总数、大肠菌群数、致病菌数和真菌、酵母菌总数 C:需测定放线菌数 D:仅测致病菌和真菌总数 答案: 菌落总数、大肠菌群数、致病菌数和真菌、酵母菌总数 2、自然疫源地被检测的主要病原体是( )、流行性出血热、( )、钩端螺旋体等( ) A:鼠疫流行性乙型脑炎 B:乙型肝炎流行性感冒 C:霍乱伤寒 D:炭疽病麻疹 答案: 鼠疫流行性乙型脑炎 3、关于细菌实验室生物安全通用原则，说法错误的是( ) A: 积极防止操作者在污染的环境中受到实验对象的侵染; B:防止生物危害从操作部位向周围环境释放;

C:尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。 D:可以允许闲杂人员随意出入操作区域 答案: 可以允许闲杂人员随意出入操作区域 4、细菌实验室生物安全控制中最重要的安全设备是 A:通风柜 B:无菌超净台 C:生物安全柜 D:紫外消毒装置 答案: 生物安全柜 5、液体培养基应清晰，若有混浊或沉淀，可能为其自身成分析出或细菌污染所致。( ) A:对 B:错 答案: 对 第二章 1、关于样本采集原则说法错误是 A:遵循无菌原则，样本应密封 B:病变早期采样;无需再使用抗菌药前采样。 C:选择正确的部位 D:多部位、多时间段采集 E:做好采样记录 答案: 病变早期采样;无需再使用抗菌药前采样。

2、关于增菌培养基说法正确的是( ) A:固体培养基多见 B:液体培养基多见 C:目的是提高检出率 D:可加入某些抑菌物质 E:对检出菌的数量没有影响 答案: 液体培养基多见,目的是提高检出率,可加入某些抑菌物质 3、暗视野显微镜可用于观察不染色标本活菌的形态和运动方式。 A:对 B:错 答案: 对 4、关于血浆凝固酶试验，说法错误的是( ) A:金黄色葡萄球菌的鉴定试验 B:有试管法和玻片法两种 C:有游离性和结合性两种类型 D:也适用于链球菌鉴定 E:玻片法属于凝集反应 答案: 也适用于链球菌鉴定 5、细菌L型即细菌细胞壁缺陷型，可在高深环境下存活。 A:对 B:错