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常见生物相容性实验汇总

细胞复苏

材料准备：

培养基、培养皿、70%

实验步骤：

1.2.3.4.

5.6.

小心打开冻存管，将细胞悬液转移到有培养基的15ml 离心管中。

7. 8.

1200rpm 离心3min ，弃上清，加入6ml 含10%FBS 的完全培养基，转移至新培养瓶（小瓶6ml

培养基，大瓶10ml 培养基）中，做好标记（细胞类型、传代数、培养基、复苏时间、复苏人），置于CO 2培养箱中37℃培养，培养24h 后视情况换液。 9.

10. 复苏后细胞生长状况正常后，进行常规培养，最好在第二次传代后冻存若干管细胞，不可只

取不存，在第三次传代后可用于细胞实验。

TIPS ：

b.解冻细胞必须迅速，防止细胞低温损伤，慢冻速融。

d.细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

细胞传代（TE消化法）

实验前准备事项：

热（可以省去）。

4.用75％酒精擦拭双手，

50ml离心管若干、15ml离心管若干、一次性吸管若干、培养皿等

实验步骤：

2.观察细胞生长状况后，取出实验所需物品，可在50ml离心管中配制40ml培养基

（4mlFBS+36ml -MEM）待用。

4.用一次性吸管从细胞单层吸出培养基，缓慢加入PBS或者不含血清的培养基没过细胞，摇晃

洗涤培养皿1~2次。

6.再吸出PBS或培养基，吸的越干净越好，6cm（10cm）培养皿中加入600?l（800??l）TE（胰

蛋白酶），以刚刚没过细胞为宜。（视细胞种类也可不洗涤直接加入TE消化液）

8.稍加摇匀，使TE消化液均匀覆盖皿内所有细胞，置37℃条件下温育1~3分钟。消化程度以

用肉眼观察当培养皿晃动时飘起单层细胞为准，可在显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度，视细胞不同而调节。

10.消化适度后，加入适量培养基2~3ml于培养皿中终止消化，沿四个方向吹洗培养皿，确保细

胞均从板上消化下来，最后全部转移到15ml离心管中。

11.

12.

3分钟。

13.

14.弃上清液，加入适量PBS

15.

b.消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，

消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

d.胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散，细胞从平板上脱落可以用枪头吹

打实现，但必须观察到细胞间已经分离。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强，针对不同细胞，建议初次消化时均在显微镜下观察细胞形态以确定消化程度。

使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks

液。EDTA可以螯合2价金属离子，故常用TE溶液。终止消化时，可用含有血清培养基或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用，利用培养基稀释也可以达到一定效果。

f.每次传代可以按1:3~1:10等比例进行，以ATCC数据建议和实际生长状况考虑，请协商好细

胞需要立即使用还是长期培养，合理保持培养箱中不同细胞的平板数量。

h.用一次性吸管吹匀细胞时，切勿产生大量气泡，在气泡破裂时产生的剪接力对活细胞有致命

威胁。建议吸管在吸取液体前尽量排空气体，缓慢松手以吸取更多液体，继而以合适的力度吹匀细胞。

细胞冻存

材料准备：

配好并放置冰箱预冷；

2、当10cm培养皿中的RBMSC细胞汇合到80%-90%时，用胰蛋白酶将细胞消化下来，1200rpm 离心，去上清；

3、加入PBS重悬细胞，以洗去残留的胰蛋白酶，1200rpm离心，去上清；

4、加入1ml细胞冻存液重悬后，将细胞重悬液放入冻存管中，冻存管必须将盖子盖紧，防止液氮侵入，并做好标记（细胞类型、培养代数、培养基、冻存时间、冻存人、编号）。按下列顺序梯度降温：室温→4℃（10~20min）→冰箱冷冻室-20℃（0.5~1.5h）→低温冰箱-80℃（过夜）→液氮罐-196℃（长期）（冰上转移）。

5、整理，做好冻存记录，在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录（细胞信息、具体冻存位置、管数等）。

TIPS：

b.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80-90%致密度。

d.细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前

细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的

细胞损伤。

j.℃

“危险温区”。

l.注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。

n.专用冻存塑料管，带有螺旋的平底塑料盖，并且可以耐受低温，注意冻存时拧紧。

细胞计数

材料准备：细胞计数器、Eppendorf管等

实验步骤：

2.制备细胞悬液，可稀释数倍以使每小格的细胞数可数。

4.取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

6.将悬液摇匀，用移液器吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一

小滴（不宜过多），让悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，不要使计数区两边平台沾上悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高，可用吸水纸吸去沟槽中流出的多余悬液。

8.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台

10.细胞计数时，计数区是由4个16

的4个大方格(A、B、C、D)

14.细胞计数板-计数公式：

计算公式：细胞数/ml=16小格内细胞总数×104×稀释倍数

SD幼鼠骨髓间充质干细胞提取

2.准备好已灭菌的手术器械和需要用到的离心管、培养皿等器材，于紫外照射30min灭

菌。

4.先将培养基配好，并在培养皿中加入PBS和10%FBSMedium。

6.将出生7-8天的SD幼鼠处死，喷酒精后放入超净台的培养皿中。

8.左手拿镊子将SD幼鼠后腿脚掌夹起，右手持剪刀沿着SD幼鼠后腿将皮剪开，且将

皮剪至股骨部分，要将皮剪开点，以免沾到毛发。找到股骨与身体相连的关节处剪断，取出后腿，并将脚掌与胫骨相连位置的皮剪掉，去除脚掌，余下部分放置于装有PBS 的培养皿中。

10.重新取新一套镊子与剪刀，用镊子将腿夹起，在胫骨与股骨关节相连处用剪刀剪断，

得到分离的胫骨与股骨。

11.

12.

剪断胫骨两端的关节，

处理与胫骨相同。

13.

18.第二天，去除上清液，PBS清洗两次（要沿壁加PBS，以免将贴壁不牢固的细胞吹起），

再加入10%FBSMedium培养。（由于刚提取的细胞中含有多种杂质，刚提取的细胞经过过夜培养后，细胞上清液浑浊属于正常现象，在提取后的两天内，细胞要每天换液，且换液时候加PBS和10%FBSMedium时候必须缓慢沿壁加入，以免将细胞吹起。）

19.

20.2天换液一次，等到细胞长满之后，对细胞进行传代，传至第三代即可进行冻存和做

实验用。

CCK-8

实验目的：考察合金改性前后对对细胞毒性的变化

细胞：小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1，大鼠骨髓间充质干细胞RBMSC

实验原理：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶还原生成高

度水溶性的橙黄色的甲臜产物（

颜色越浅。对于同样的细胞，

与细胞毒性成反比。使用酶标仪在

保存条件：4

孔板中，用PBS清洗两次，尽量减少清洗时间，再用培养基

（若材料为钛合金，可把75%灭菌后的材料放置于超净台，再用紫外照射一段时间后，将材料放置于24孔板中，用PBS清洗后，再用培养基进行清洗。）

4.取70%-80%对数生长期细胞，胰酶消化后，用PBS洗涤，用含10%胎牛血清?-MEM培养液

配成单个细胞悬液，计数，在材料上种细胞，密度为3*104/孔（可根据材料调整细胞密度），使细胞悬液均匀的铺满整个材料表面(先加入800?l培养基（含血清），观察是否浸没了样品，若不够再加一些。若有气泡，戳破。再以转圈的方式加入200?l细胞重悬液至材料表面，轻微震荡)，5%CO2培养箱中培养使细胞贴壁。每个材料4个复孔。（若材料为钛合金，则可将细胞悬液配成配制浓度为2×104个/mL的细胞悬液，分别注入已置入材料的无菌24孔板，每孔500μL。48孔板，每孔300?l。）

6.由于镁合金与CCK8会产生假阳性结果，所以在检测吸光度的时候，需要将细胞消化后再与

CCK8进行孵育：待细胞贴壁后，吸去培养基，加入新鲜培养基继续分别培养1,3,7天(每天需更换新鲜培养基)，弃培养基，PBS洗2次(PBS需吸干)，清洗后，将材料转移至别的空白孔中，每孔加入200?l胰酶消化1-2min后，在显微镜下观察control组的细胞是否消化下来，如没有消化下来，用枪吹打至细胞完全消化后，每孔加入500?l10%胎牛血清?-MEM培养液终止消化，1200rpm离心5min，弃上清，加入400??l10%CCK8的不含血清的培养基（10%CCK8溶液须提前配置好），避光培养4h，终止培养，于酶标仪450nm波长测定其吸光度。（其他材料：待细胞贴壁后，吸去培养基，加入新鲜培养基继续分别培养1,3,7天，弃培养基，PBS洗2次(PBS 需吸干)，清洗后，将材料转移至别的空白孔中，每孔加入400?l10%CCK8的不含血清的培养基（10%CCK8溶液须提前配置好），避光培养4h，终止培养，于酶标仪450nm和650nm波长测

定其吸光度。）

8.实验对照组：种3*104/孔细胞于PBS

洗2-3次(PBS需吸干)，

的吸光度。（若为镁合金的control

1ml培养基

②在材料上培养细胞时，需每天进行换液，防止镁合金腐蚀对细胞造成影响。

③当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误

差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。

④特别重要的是，在加入CCK8之前，必须把材料转移至其他空白孔中，以免贴壁在材料

外的细胞造成的实验误差。

材料浸提液CCK8的实验方案

1、对材料先进行封胶处理，封胶时底面只弄一次，尽量平整、薄。封胶完毕后，在干燥箱中存放3天，多余的胶用手术刀切掉，尽量使底部保持平整。在用于浸泡之前，用2000#砂纸对WE43再次进行打磨，以去除表面的氧化膜。

2、准备一个小烧杯，在烧杯中灭菌，材料正面向上，尽量避免碰到尖锐物。将材料于75%的乙醇中灭菌10min，再用PBS清洗3次，转移至24孔板中，加入培养基后在桌面来回动10-20s。

3、材料与a-MEM+双抗培养基在5%CO2，37℃条件下孵育3天（1ml/cm 2）。

4、提取上层液在4

清液（液体有挥发就补齐），4

5、细胞用?-MEM培养基

90?l+10?lFBS(10%)。进一步稀释成50%，25%，10%

??lFBS位对照组，每一样品设5个复孔。

7. 37℃培养1,3,7天，弃提取液，PBS洗2-3次，每孔加入100??l不含血清的10%CCK8培养4h，终止培养，于酶标仪450nm波长测定其吸光度。

8.空白对照：在空白孔中加入与实验组相同体积的10%CCK8溶液，避光培养4h，测定450nm的吸光度即为空白对照。

9.按细胞增值度法计算细胞相对增值率（Relativegrowthrate，RGR），并按表1的要求，将RGR 值转化成六级，评定材料毒性。

RGR(%)=(材料组吸光度-空白组吸光度)/(对照组吸光度-空白组吸光度)×100%

表1分级标准和评定结果

0级

1级

2级

3级

4级

5级

RGR(%)

≧100

75-99

50-74

25-49

1-24

评定结

果

合格

结合细

胞形态综

不

合格不合

格

不合

格

孔

用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

细胞CCK8实验结果参照下图：

如图所示，相同浓度浸提液与细胞共培养1天和3天后，100%WE43浸提液对细胞的毒性比

较大，细胞存活率分别为60%和40%左右，而钕元素等离子注入WE43100%浸提液与细胞共培养1天和3天后，细胞存活率分别为90%和100%左右，且在低浓度情况下钕元素等离子注入WE43能够促进细胞增殖，表明经过改性后的WE43具有良好的生物相容性。

Improvementofcorrosionresistanceandbiocompatibilityofrare-earthWE43magnesiumalloybyneodymiumse lf-ionimplantation,CorrosionScience94(2015)142–155.

细胞骨架和DAPI染色（细胞粘附测试）

定义：细胞骨架是由蛋白质丝搭建起的骨架网络结构,主要包括微管，微丝，中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化、物质运输、能量转换、信息传递、基因表达等都起到重要作用。

实验目的：比较材料表面改性前后早期细胞直接粘附的状态

细胞：小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1

原理：利用抗原-

2.准备一个小烧杯，将材料浸没在装有乙醇的小烧杯中灭菌10-15min。将材料放置24孔板中用

PBS震荡洗两次，培养基洗一次。材料放置孔板中部。

4.细胞以5*104/孔接种，使细胞悬液均匀的铺满整个材料表面，孵育5h。(先加入800?l培养基

（含血清），观察是否浸没了样品，若不够再加一些。若有气泡，戳破。再加入200??l细胞重悬液至材料表面，轻微震荡。)（若材料为钛合金，则可将细胞悬液配成配制浓度为2×104个/mL 的细胞悬液，分别注入已置入材料的无菌24孔板。）

6.细胞孵育5h后，弃去培养液，用PBS震荡清洗两次（24h时间点：加入新鲜培养基继续培养

24h后，弃上清，用PBS振荡清洗两次），3.7%甲醛（PBS中）在室温下固定5min，吸出固定

液，PBS清洗2次。

8.加入0.1%（体积比）TritonX-100（PBS中）破膜5-8min，弃去TritonX-100上清液，PBS洗3

次。

10.在暗室中，取5?l6.6?M罗丹明标记的鬼笔环肽用PBS稀释至200??l(终浓度为165nM，加入鬼

笔环肽（覆盖即可，用完可以回收利用），室温避光孵育40min，吸出染液，用PBS清洗洗3次。

11.

12.加入DAPI溶液室温下染色3-5min，弃去染液，用PBS洗3次，加入PBS，荧光显微镜观察，

观察：1.细胞骨架形态是否发生变化

2.肌动微丝是否出现增粗

3.细胞间连接是否增多

4.细胞形态：多角形变成梭形，伪足明显增多

注意：DAPI和鬼笔环肽具有剧毒性，在使用的时候应尽量小心，一定要带手套操作，避免将染料弄到皮肤上。

细胞骨架和DAPI荧光染色图片结果如下图：

如上图所示，在1h的时候，纯钛上的细胞基本上呈现球形状态没有铺展，而其他三种实验组，细胞有部分铺展在材料表面，且存在有丝分裂期的细胞。同时，在4h的时候，与纯钛相比，其他三种实验组均能够明显看到材料表面上的细胞明显铺展，且在Zn/Ag-PIII材料表面上细胞的微丝更明显，说明Zn/Ag-PIII材料表面更适合细胞生长。细胞在四种材料上培养24h后，均能发现细胞上的微丝结构，且细胞与细胞之间有明显的链接，表明Zn/Ag共注入钛合金能够增强合金对rBMSCs 细胞的初始粘附和伸展状态，同时表明材料对细胞是没有毒性的。

aterials35(2014)7699-7713,

SEM

14.准备一个小烧杯，将材料浸没在装有乙醇的小烧杯中灭菌10min。将材料放置24孔板中用PBS

震荡洗两次，培养基洗一次。材料放置孔板中部。

15.

16.细胞以5*104/孔接种，使细胞悬液均匀的铺满整个材料表面，孵育5h。(先加入800?l培养基

（含血清），观察是否浸没了样品，若不够再加一些。若有气泡，戳破。再加入200?l细胞重悬液至材料表面，轻微震荡。)

17.

18.固定：细胞孵育5h后，弃去培养液，用PBS震荡清洗两次，加入2.5%的戊二醛溶液（PBS

稀释）4℃固定1-2h。固定是利用化学试剂使细胞的细微结构或化学成分保持生前状态。19.

20.脱水：将双蒸水洗过3次的固定的样品依次放入30%乙醇中脱水30min，，50%乙醇中脱水30min，

70%乙醇中脱水30min，80%乙醇中脱水10min，90%乙醇中脱水10min，95%乙醇中脱水10min，100%的乙醇中脱水10min，100%的乙醇中脱水2-3次。

21.

22.干燥：采用冷冻干燥法，将脱水后的样品投入液氮中，使样品迅速冷冻，然后再把冷冻的样品

放入真空内，让样品中已结成冰的溶剂及水分在高真空下升华，即由固体直接变成气体，从而使样品得以干燥。由于升华过程不经液态，不存在表面张力的作用，因而样品的变形较小，干燥效果较好。但是由于冷冻干燥需要低温条件，且时间长（通常需要数小时或数十小时），样品也较容易冻伤或产生冰晶。

23.

24.样品的安放及粘贴：

25.

26.

面形成连续均匀的金属膜（20nm

配制成骨分化诱导液

1、

2、将50mgASAP溶解于10ml?-MEM配制成浓度为5mg/ml(100X)的储存液，用0.22?m滤头过滤

后于4℃保存,工作浓度为50?g/ml。

3、

4、将630mg?-glycerophosphate溶解于20ml?-MEM配成浓度为100mM(10X)的储存液，用0.22?m

滤头过滤后于4℃保存,工作浓度为10mM。

5、

6、将1.23mgDex 溶于1223?l 乙醇中，浓度为2.5*10-3M 。从2.5*10-3

M 储液中取10?l 稀释至2.5ml ，浓度为1*10??

M(100X),分装，-20℃保存，工作浓度为100nM 。

配制10%的氯代十六烷基吡啶

茜素红染色

虿

实验目的：了解各种合金促进细胞外基质的情况

肈

实验原理：茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，通过茜红素染色，可产生桔红色沉积（钙结

节）用以识别组织细胞的钙盐成分，钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一，钙结节是成骨分化晚期的标志。

材料数量：每种材料3个时间点（7day ，14day ，21day ），每个时间点4个平行样。

如上图所示，蓝色箭头指示的为钙结节。从图a可知，四种材料均能够促进rBMSCs细胞的成骨分化，经过等离子注入的材料对细胞的促成骨效果比纯钛强，且Zn/Ag-PIII材料对大鼠骨髓间充质干细胞的促成果效果更佳有效。从图b的吸光度可以看出结果和图a是一致的。

SynergisticeffectsofdualZn/Agionimplantationinosteogenicactivityandantibacterialabilityoftitanium,Biom aterials35(2014)7699-7713,

天狼星红染色

目的：考察Titaniumalloys

细胞：小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1

PBS洗涤，用含10%胎牛血清?-MEM培养液配成单个细胞悬液，计数，在材料上种细胞，密度为1*104/孔（24孔板）和5*103/孔（96孔板），使细胞悬液均匀的铺满整个材料表面，轻微震荡，5%CO2培养箱中培养使细胞贴壁。

每个材料4个复孔。

6.细胞贴壁生长至70%-80%后，吸去培养基，加入含有成骨诱导液的新鲜培养基

（50?g/mLVC,100nMdexamethasone,10mMβ-glycerophosphate）继续培养7,14，21天后（每三天需更换含成骨诱导液的新鲜培养基，在诱导后期，需每天对细胞进行换液，以保证能够提供足够的营养；同时，在诱导后期，对细胞进行换液一定要小心），弃培养基，PBS冲洗3次，4%多聚甲醛固定15min。

8.PBS洗3次，加入0.1%天狼星红置于37℃培养箱染色30min；(染料要没过材料)

10.弃天狼星红，PBS洗6次至无色。

11.

12.用正置显微镜拍照。

13.

14.每孔加入0.2MNaOH/methanol(1:1)溶解后取150ul裂解液加入96孔板内于540nm波长处测

OD值

iomaterials35(2014)7734-7749.

是一种常用的磷酸酶显色底物，在碱性条件下，

，呈黄色产物，可在405nm检测吸光度。产物黄色越深，吸光度越大，说明碱性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平，进而反应出材料是否有促成骨作用。

实验周期：7,14，21天

实验材料数量：每种材料三个时间点，每个时间点4个平行样。

实验步骤：

2.准备小烧杯，将材料放置于烧杯中，材料正面向上，尽量避免碰到尖锐物,先用无水乙

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA）结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA）核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问

初中生物实验知识点总结

实验1显微镜的使用目的要求： 1、识别显微镜各部分名称和作用 2、初步学会规范操作显微镜 3、尝试使用显微镜观察生物玻片标本。材料用具：显微镜、擦镜纸、纱布、载玻片、盖玻片 1、方法步骤：1取镜2放镜3安装目镜与物镜认识显微镜的构造 1、认识显微镜的各部分名称和作用。 2、仔细观察目镜和物镜的特点 3、转粗、细后观察镜筒位置变化 4、转动反光镜，辨别两面的区别5、观察遮光器上光圈的大小显微镜的使用： 1、对光A转粗升B转转换器低镜对准通光孔C转遮光器使最大光圈对准通光孔 D左眼注视目镜，转动反光镜知道看到一个明亮的视野 1、安放装片 2、观察A从侧面注视物镜2毫米处B左。缓缓上升C缓缓移动装片，注意物象移动方向 3、整理和存放 A实验结束后，先提升镜筒，取下装片。B用纱布将显微镜外表擦干净如果目镜和物镜弄湿或弄脏，用擦镜纸擦干净C最低竖立D原处讨论： 1、显微镜构造中各部分的功能是什么？ 2、使用显微镜观察装片的过程主要包括哪些步骤？ 3、在显微镜中观察到的物象与装片上的实物相比，在大小、形状等方面有什么不同？ 2、观察动植物细胞的结构目的要求1、学会制作临时装片，认识细胞的结构2、初步学会画细胞的结构材料用具：显微镜、稀碘液、生理盐水、清水、消毒牙签，镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片、洋葱方法步骤：根据下面提供的两组实验，分组（或自由选择）进行操作。实验结束后交流实验结果和体会 1、制作临时装片 2、观察细胞结构A观察视野内参照图找细胞及各部分结构B画图并标注名称讨论1、制作临时装片大致分为哪几个步骤？2、人口腔上皮细胞与洋葱表皮细胞的基本结构是什么？比较他们的异同。3。观察草履虫的生命活动目的要求：通过观察草履虫对刺激的反应，认识单细胞生物的生命活动材料用具：草履虫培养液，牛肉汁、食盐、载玻片、吸管、放大镜等方法步骤 1、在洁净的载玻片左侧A处滴一滴草履虫培养液，用肉眼和放大镜观察虫的活动 2、在载玻片右侧B处滴一滴牛肉汁，用吸管划通A、B形成连桥，用放大镜观察草履虫的运动方向 3、在牛肉汁外侧边缘放数粒食盐，用放大镜观察草履虫的运动方向。讨论：草履虫怎样运动？这些现象说明了什么问题？草履虫喜欢生活在有机物含量较多的稻田、水沟或水不大流动的池塘中，以细菌和单细胞藻类为食 4.观察水绵目的要求：通过显微镜观察水绵的结构材料用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、标本瓶、滴管、水绵等方法步骤 1、在载玻片的中央滴一滴清水，用镊子夹住少量的水绵放在水中，盖上盖玻片，制成临时装片。 2、将装片放在低倍镜下观察，注意观察每一条水绵的形态。 3、对照课本上的图片，一个水绵细胞的结构讨论： 1、水绵的生活环境是怎样的？ 2、水绵的结构特点是怎样的？ 3、影响实验观察效果的因素有哪些？ 5.观察植物的蒸腾现象目的要求 1、观察植物的蒸腾现象 2、了解植物散失水分的主要部位材料用具：有分枝的植物，透明塑料袋，细线等方法步骤 1、取一株生长健壮的绿色植物，选出三个枝叶相似的枝条，分别做以下处理：甲去掉全部叶片，乙去掉部分叶片，丙不做处理 2、用三个不透气的塑料袋分别罩上选出的枝条，用细线将袋口扎紧 3、将植株置于阳光下照射一段时间后，观察并记录塑料袋内的现象讨论：1、各塑料袋内的现象有什么不同？说明了什么问题？ 2、为什么要对三个枝条做不同的处理？

分子生物学实验指导(精)

分子生物学实验指导生物技术教学室编宁夏大学生命科学学院 2008年8月

实验一分子生物学实验技术多媒体演示 [目的要求] 通过多媒体试验录像进一步掌握分子生物学基本操作技术。 [教学方式] 多媒体光盘演示。 [实验内容] 基本的分子生物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术；质粒提取；转化；重组体的筛选；PCR技术等。

实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA [目的要求] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 [实验原理] 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50 kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭（Ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。琼脂糖凝胶有如下特点： (1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。 (2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。 (3) 电压低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。 (4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。 (5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。 (6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。

分子生物学实验室常用试剂的配制

一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解 2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解 3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用 0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于 9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加 32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解 78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解 7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解 40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至 5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（ 0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取 186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（ 6.8- 8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

分子生物学实验室常用仪器及使用方法

实验指导目录实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取－碱裂解法实验三琼脂糖凝胶电泳实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验六动物组织细胞基因组 DNA提取实验七 DNA的定量实验八 PCR基因扩增实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组实验十一动物组织细胞总RNA的提取实验一分子生物学实验室常用仪器及使用

事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。一、冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。 2. 操作程序（1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。（2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。（3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。（4）按控制面板的运转键，离心机开始运转。在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。（5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。（6）按控制面板上的停止键，数码管显示dedT，数秒钟后即显示闪烁的转速值，这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项（1）离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。

《分子生物学》实验指导(2015-2016)

《分子生物学》实验指导实验1 总DNA提取生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。 [实验目的] 学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。 [实验原理] 植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。CTAB 是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。纯的DNA样品A260/280≈1.8，纯的RNA样品A260/280≈2.0，并且1μg/ml DNA 溶液A260=0.020。 [实验器材] 1、高压灭菌锅 2、冰箱 3、恒温水浴锅 4、高速冷冻离心机 5、紫外分光光度计 6、剪刀 7、陶瓷研钵和杵子 8、磨口锥形瓶（50ml） 9、滴管10、细玻棒11、小烧杯（50ml）12、离心管（50ml）13、植物材料 [实验试剂] 1、3×CTAB buffer（pH8.0） 100mM Tris 25mM EDTA 1.5M NaCl 3% CTAB 2% β-巯基乙醇 2、TE缓冲液（pH8.0） 10mmol/L Tris·HCl 1mmol/L EDTA 3、氯仿-异戊醇混合液（24：1，V/V） 4、95％乙醇 5、液氮 [实验步骤] 1、称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，滤纸吸干水分。 2、将叶片剪成1cm长，置预冷的研钵中，倒入液氮，尽快研磨成粉末。 3、待液氮蒸发完后，加入15mL预热（60℃）的CTAB提取缓冲液，转入一磨口锥形瓶中，

学年初中生物实验教学工作总结

学年初中生物实验教学工作总结精品文档学年初中生物实验教学工作总结学年初中生物实验教学工作总结生物是一门以实验为基础的学科，开展好实验教学是学好生物的前提条件。生物实验具备培养学生观察和动手能力的功能，更有培养学生动脑、启迪思维、开发潜能的作用，为使今后实验教学顺利有效开展，七年级、八年级生物实验教学开展率按计划全部完成。现将本学年初中生物实验教学做如下总结: 一、尊重客观规律，坚持实事求是在平时的学生实验中，经常出现这种现象:当实验得不到正确结果时，学生常常是马虎应付，实验课堂一片混乱，铃声一响学生不欢而散;当老师催要实验报告时，他们就按课本上的理论知识填写实验报告;还有的学生在规定时间内完不成应该做的实验项目，就抄袭他人的实验结果，或凭猜测填写实验结论等等。这样就不能达到实验教学目标。可见，对生物实验教学，必须要加强理论学习，提高实验教学技能，势力严谨细致、认真科学的态度，要尊重客观规律，实事求是，实实在在地引导学生完成实验教学的任务，才能达到理想的目的。二、认真完成实验环节，注重操作引导在实验教学工作中，无论是实验员准备实验，教师演示 1 / 3 精品文档实验，或者指导学生实验，以及对待实验的严格态度等方面，处处，时时，事事都要体现教师的言传身教，只有教师教得扎实，学生才能学得牢固。因此，严格搞好实验课的备、教、导是上好实验课不可缺的基本环节。

1、备好实验课是上好实验课的首要条件教材中要求做的实验，无论简单也好复杂也好，都必须要备好课，写好切实可行的教案，并且在实验课之前要亲自动手做一遍，即预备实验。教师做了，才可能指导学生如何应对操作过程中每一个细节可能出现的问题，看到实验现象，学到真正的实验方法和科学知识，培养学生发现问题，解决问题的能力;若不备课，不亲自做实验，凭空想象，黑板上做实验，那就没有明显效果，更没说服力了。甚至会出现，全体学生实验失败等不该发生的现象。 2、注重实验引导知道学生实验时，既要面面具到，事无俱细进行引导，同时，又要注意切忌包办代替。从实验材料的选择，仪器的装配到操作步骤和技巧，既要科学规范，又要密切结合具体实际，在尊重学生主体地位的同时，充分发挥教师的引导作用，以保证现象清晰，结果正确。如做叶绿素的提取和分离的实验时，在不同的季节可以采用不同的材料。 3、注重实验结果的分析与小结要求学生，在填写实验报告时，要如实填写。实验失败 2 / 3 精品文档时，要如实地与学生一起分析失败原因，可课后补做。如果学生实验失败，我们就通过示范帮助学生掌握操作技能，取得成功，或帮助分析失败原因让学生重做，直至成功。不能听之任之，否则，就达不到实验课的目的。此外，对一些特殊的材料、仪器以及实验的目的和原理都要加以必要的说明，如选材原因、一起的功能等。

分子生物学实验中常用的抗生素配置及工作浓度

常用抗生素：备注：(摘自《分子克隆》第三版附录 2 ) ①以水为溶剂的抗生素贮存液应使用0.22 ym滤器过滤除菌； ②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌； ③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。氨苄青霉素( ampicillin )(100mg/ml ) 溶解1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水(最好是高压后的灭菌水)中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以25ug/ml? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素( carbenicil l in )( 5 0 m g/m l ) 溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以25ug/ml?50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林( methicillin )(100mg/ml ) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素( kanamycin)( 10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以10ug/ml?50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素( chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml 。分装

成小份于-20C贮存。常以12.5ug/ml?25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素( streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以10ug/ml?50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸( nalidixic acid )( 5mg/ml ) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素( tetracyyline)(10mg/ml ) 溶解100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20C贮存。常以10ug/mI?50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

分子生物学实验室常用有毒药品

分子生物学实验室有毒常用药品 1.溴化乙锭（：具有强诱变致癌性，使用时一定要戴一次性手套，注意操作规范，不要随便触摸别的物品。 2（焦碳酸二乙酯：闻起来香香甜甜的，可是害人不眨眼！一种强有力的蛋白质变性剂，而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子远离你，内压可导致溅泼.操作时戴合适的手套，穿工作服，并在化学通风橱里进行. 3（苯甲基磺酰氟：老板说是神经毒!!!是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂.它对呼吸道黏膜，眼睛和皮肤有非常大的破坏性.可因吸入，咽下或皮肤吸收而致命.戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用.在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼镜或皮肤，已污染的工作服丢弃掉. 4. 乙腈，易挥发易燃，是一种刺激物和化学窒息剂，通风橱中远离热、火。 5. 放线菌素D ,是一种致畸剂和致癌剂，通风橱中操作。 6鹅膏蕈毒环肽，具有强毒性,可能致命。 7亚甲双丙烯酰胺,有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。 8. 甲醇,有毒,能引起失明。 9. 乙酸（浓的：可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害，要戴手套和护目镜，最好在化学通风橱中操作。 10. 过硫酸酸铵:对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。操作时戴手套、护目镜。始终在通风橱中操作。

11. 氯化铯:可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。操作时戴手套和护目镜。 12:很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜,在通风橱中操作。13.甲醛:毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免一如其挥发的气雾。戴手套和护目镜。始终在通风橱中操作。远离热、火花及明火。 14 ,对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤。有一次不小心溅出一小滴在脸上，马上就红了，过一会儿感觉到疼，一周之后才好。如果溅上，马上用大量的水冲洗。大家在实验室里，接触到的化学试剂多半都有危害性，紫外灯，如果离心机不是很好的话的噪声污染，会导致手指需要震动，等等,所以每个人都应该注意保护自己，而不能因为图省事或者别的什么原因而放松对安全的注意。另外就是注意规范操作，搞微生物的尤其要注意，不要实验室感染。 15. 叠氮钠,有毒,阻断细胞色素电子运送系统 16. 氟化钠,有毒可致命,通风橱中操作 17. 放射性物质（同位素标记时，要戴手套,护目镜,穿工作服,最好买试剂盒（如果有商品化的 18巯基乙醇，可致命,对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害 19. 氨甲蝶呤,致癌和致畸

分子生物学实验心得体会

关于分子生物学实验的体会梁慧媛（生技01 级）不知不觉间，一年的时间就这样流逝了，与分子生物实验相伴，对我而言，的确不同寻常。并不仅仅是学习生物学实验技术和方法的宝贵经历，它意味着更多。首先是实验条件、实验过程、实验设计的完备性，从这里可以初步感受到生物学研究的科学性与严肃性，自己可以得到宝贵的机会，亲身体会生物学研究的苦辣酸甜。一直一直喜欢，得到正确实验结果时刻的畅快感，那是无法言明的欣慰感，一次身心彻底地放松，可以将所有一整天来积累的疲劳抛之身后，即使仅仅是小小的成功，也会让我们兴奋不已。在整理资料，将一年来保存的记录一遍一遍的翻看，重温其中的特别滋味，我，轻轻地笑了。我，喜欢这里，喜欢生物学。失误是常有的，经历过吃惊、后悔、无奈，检讨分析，最后重新开始。一波三折的记忆清晰的印在脑海中，这种深深的挫折感，再试一次的勇气，我会一生记取的。一年间，随着对生物学实验知识和技能的进一步学习，我更坚定了自己学习生物学的志向，感谢分子生物学实验的"试炼" 。分子生物学实验心得体会刘东强（生科01 级）分子生物学实验室本科生第一次接触到了真正培养实验能力的实验课，它不同于我们在大二开的植物、动物、微生物等实验课。在这些课上，主要以制备样品并观察样品的形态、结构特征为主，这是由于我们当时正值大二，专业知识还远不够。随着以后理论课学习的深入，我们开始了分子生物学实验的学习，这无疑对于深刻巩固我们理论课上学到的知识是有帮助的，也进一步加深了对原有知识的理解，如启动子的概念、类型、PCR的原理等。另外，在实验课中，我们掌握并学会如何运用分子生物学研究中的一些基本实验技术，如质粒的提取、总RNA 的制备、PCR 技术等。我们的实验动手能力通过亲身接触实验过程并亲自设计一些实验得到了提高，使我们不再象刚开始做分子生物学实验的时候照搬实验指导上的实验步骤，而是通过我们自己的思考，根据现有的实验条件，对原有的步骤作必要的改进。此外，通过这门实验课的学习，我们形成了严谨的态度，如有时得出的实验结果与理论不符，我们渐渐养成了仔细分析实验结果的习惯，查找在实验设计或操作过程中出现的问题，同时对理论知识认识得更清楚。总之，我认为，分子生物学实验课，是称得上实用、精彩、有意思的好实验，对于今后我的研究或工作很有价值刘佳凝（生技01 级）一学期的分子生物学实验对我来说很重要，同时通过一学期的实践让我给分子生物学有了较深入地体会： 1、很感谢由我系生化组老师们编写的这本实验指导。里面的实验原理与操作步骤都清晰易懂，有助于我

生化实验五大技术

生化实验五大技术一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意）透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类分子吸收法&原子吸收法:

可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球

初中生物实验教学总结

初中生物实验教学总结本学期生物实验室的各各方面工作都能顺利开展，现将这学期来的工作情况总结如下。一.实验室的管理工作： 1、制定实验教学计划和实验室建设发展建议 2、购置仪器、药品要先行申请，由主管领导审阅后报校长室审批后再购置，入库要验收，同时填写入库清单。仪器原则不外借，若借出要由主管教导或校长同意后才能，并要及时追回。 3、认真记录仪器使用.损毁.丢失情况并报学校有关部门核对备案。 4、及时做好实验仪器的验收.核对.入库工作。如实填写年度库存仪器登记表。 5、加强安全制度。药品、仪器橱要上锁，沙桶要定期检查、补充。实验室经常通风换气，设备保持经常运转。 6、仪器、药品存放制度。做到分类存放，定橱定位。分组实验所用仪器药品一律应实验员发放，实验结束，及时清洗、整理、归放。 7、科学管理.规范摆放.井井有条。 8、保持仪器整洁.完好。确保仪器的正常使用。 9、搞好室内外卫生。二.实验教学工作： 1、按照实验教学计划安排，及时开足开好试验课程。 2、积极和任课老师沟通交流，认真研究，确保实验教学的场地 . 器材和实验过程中学生人身安全.仪器安全。 3、根据实验通知单提前.充足准备仪器，确保教学需要。 4、协助教师进行实验演示，指导学生分组试验。

5、及时补充实验材料，教育学生勤俭节约并充分发挥其作用，禁止浪费。 6、不断改进实验方法和实验步骤，提高实验效果。 7、编排学生实验座次表，教育学生爱护仪器，损坏仪器要赔偿。 8、及时回收.清洗 .摆放教学仪器。 9、积极和任课教师做好实验课的分析总结，更好的提高教学质量。三、工作任务完成情况本人在开学初就制订出生物实验计划，推动了本期实验教学有序、有计划的进行。 1、严格实验准备制度，演示实验三天前，分组实验一周前交实验通知单到实验室，准备好实验后，老师先预做实验，以此保证实验顺利地进行。实验中损坏的仪器严格依照教学仪器赔偿制度实施处罚。 2、做到购物有登记，帐目清楚，帐物卡三对应工作。教学仪器的借用严格按照教学仪器借用制度实行登记，如期归还，追还等。 3、对显微镜等教学精密仪器，做到了定期检修、除尘、防锈、保养等工作。对标本类实施了定期检查、防蛀等加以妥善管理。有害、有毒的药品实行了专柜存放。 4、对新的实验仪器的性能、使用、操作方法做了充分了解，能熟炼地操作使用。而且积极参与了学生实验操作的指导工作，进一步锻炼了自己的动手能力，更好地配合了实验老师的教学工作。 5、按时完成了本期的实验任务，做到了实验室整洁、卫生。在新的一年里，要更进一步加强学习，使自己的管理工作更上一个台阶。

分子生物学常用实验指南

生命科学系 2011-2012学年度分子生物学实验（0801班）

2011-2012学年度分子生物学实验指导实验一大肠杆菌感受态细胞的制备 (3) 实验二质粒DNA的转化 (4) 实验三质粒DNA的提取 (5) 实验四琼脂糖凝胶电泳检测DNA (7) 实验五PCR基因扩增 (9) 实验六DNA重组 (10) 实验七蓝白斑筛选实验 (11) 实验八DNA酶切技术 (13)

实验一大肠杆菌感受态细胞的制备一、实验目的：掌握大肠杆菌感受态细胞的制备技术二、实验原理：感受态——细菌处在容易吸收外源DNA的状态。我们选用经过基因改造的生物工程菌株——大肠杆菌top10菌株为材料，在0℃、CaCl2低渗溶液处理，细胞壁破坏，细胞成为球型原生质体。因而具备了吸收外源DNA的能力。三、仪器：1.超净工作台 2.低温离心机 3.恒温摇床 4.紫外分光光度仪四、材料与试剂： 1.大肠杆菌top10菌株 2. 0.1mol/L CaCl2溶液500mL、 0.2mol/L CaCl2溶液50mL 3..LB液体及固体培养基 4.50%甘油500mL（灭菌）五、实验操作步骤： 1.从大肠杆菌top10菌株平板上挑取一个单菌落，接种于3mL LB液体培养基中， 37℃振荡（200r/min）培养过夜。 2.次日早上取0.4mL菌液转接到40mL LB液体培养基中，37℃震荡培养2～3h.(A600 应在0.4～0.5之间) 3.将菌液置冰浴中10min。（同时将0.1mol/L CaCl2溶液、50%甘油预冷） 4.取菌液1.5mL，4℃离心2min（3500r/min）.弃上清，再加菌液1.5mL，4℃再离心一次，弃上清，倒置以便使培养液流尽。 5.用冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液1mL悬浮细胞（轻轻涡旋使悬浮），立即置冰浴保温30min。 6.4℃离心2min（3500r/min），弃上清，加入100μL冰冷的0.2mol/L CaCl2溶液、 100μL50%甘油轻轻手摇悬浮，置冰浴上，接着进行质粒DNA转化，或-70℃保存。

初二生物实验考试总结

初二生物实验考试总结下面是小编为你整理初二生物实验考试总结，希望对你有帮助。篇一：初二生物实验考试总结一学期来，能够坚持落实科学发展观，以培养学生创新精神和实践能力为重点，以新课程改革为契机，自始自终热爱人民教育事业，认真贯彻国家的教育方针和政策，树立素质教育思想，积极投身教育改革，治学严谨，有强烈的事业心和责任感；严于律已、宽以待人。教育思想端正、关心、爱护全体学生，教书育人，具有良好的职业道德，认真执行课程标准和教学计划，积极完成本职工作。一、提高教学质量，关键是上好课。 1、为了上好课，我做了下面的工作：⑴课前准备：备好课。 ①认真钻研教材，了解教材的基本思想、基本概念；了解教材的结构，重点与难点，掌握知识的逻辑，能运用自如，知道应补充哪些资料，怎样才能教好。②了解学生原有的知识技能的质量，他们的兴趣、需要、方法、习惯，学习新知识可能会有哪些困难，采取相应的预防措施。③考虑教法，解决如何把已掌握的教材传授给学生，包括如何组织教材、如何安排每节课的活动。⑵课堂上的情况。组织好课堂教学，关注全体学生，注意信息反馈，调动学生的有意注意，使其保持相对稳定性，同时，激发学生的情感，使他们产生愉悦的心境，创造良好的课堂气氛，课堂语言简洁明了，克服了以前重复的毛病，课堂提问面向全体学生，注意引发学生学习生物的兴趣。

2、要提高教学质量，还要做好课后辅导工作。初中的学生爱动、好玩，缺乏自控能力，常在学习上不能按时完成作业，有的学生抄袭作业，针对这种问题，我着重抓好学生的思想教育，并使这一工作惯彻到对学生的学习指导中去，还要做好对学生学习的辅导和帮助工作，对调皮的学生我做到从友善开始，从赞美着手，所有的人都渴望得到别人的理解和尊重，所以，和学生交谈时，对他的处境、想法表示深刻的理解和尊重，学生对我也就慢慢的喜欢和尊重，也开始喜欢学习生物。 3、积极参与听课、评课。虚心向老教师学习教学方法，博采众长，以提高教学水平。随着课程改革的推进，对教师的素质要求更高，在今后的教育教学工作中，我将更严格要求自己，努力工作，发扬优点，改正缺点，开拓前进，为美好的明天奉献自己的力量。二、不断学习、更新理念 21世纪是生命科学的世纪，生物学知识日新月异，发展很快。在备课过程中，我在熟悉教材的基础上，不断查阅资料，不断更新教学理念，并在教学中实施。为了赶上时代步伐，我在复习大学教材内容的基础上，还经常上网查阅资料，了解现代生物学新成果、新观念。取别人之长、补自己之短。并注意创新，形成自己的教学风格和特色。三、成绩与反思在教学中，大部分的学生上课认真，学习积极，在考试中取得了较好的成绩，也掌握了一些学习生物的方法和生物实验技能。但有部分同学上课没有课本，不听课，不思考，不做作业；有些同学考试

分子生物学实验指导-3

北京化工大学分子生物学实验指导

实验一少量质粒DNA的制备一、实验目的（1）了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用。（2）掌握质粒DNA分离、纯化的原理。（3）学习碱裂解法分离质粒DNA的方法。二、实验原理质粒（plasmid）是一种双链的共价闭环状的DNA分子，它是染色体外能够稳定遗传得因子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主地进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。从细胞生存来看，没有质粒存在，基本上不妨碍细胞的存活，因此质粒是寄生性的复制子。根据质粒的这种特性，通常采用DNA体外重组技术和微生物转化等基因工程的技术和方法，使重组到质粒的某种基因（如干扰素基因）带进受体细胞（如具有一定特性的大肠杆菌细胞等）表达它的遗传性质，改变或修饰寄主细胞原有的代谢产物，或产生新的物质（如干扰素）。目前，质粒已广泛地用作基因工程中的DNA分子无性繁殖的运载体，同时它也是研究DNA结构与功能的较好模型。在细菌细胞中，质粒DNA通常为染色体DNA的2%左右，但是细菌质粒DNA的含量与其复制类型有关。质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制（stringent control）复制型和松弛控制型（relaxed control）复制型。严密控制复制型的质粒只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，质粒也不复制。每个细胞内只含1个或几个质粒分子（即有1个或几个拷贝）。松弛控制复制型的质粒在整个细胞周期中随时可以复制，当染色体复制已经停止时，该质粒仍然能够继续复制。该质粒在一个细胞内有许多拷贝，一般在20个以上，例如col E1 质粒（含有产生大肠杆菌素E1 基因）及其衍生质粒，在每个细胞内约有20多个拷贝。所有分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。目前应用于质体DNA的纯化或抽取的方法众多，例如碱溶裂法（alkaline lysis）、热裂解法（boiling method）、氯化铯（CsCl）纯化法，及市售柱层析套管法等。最常用的碱裂解法具效率高、价廉、简单易学等优点。其原理是利用碱处理质粒DNA及染色体DNA，使两者双股打开呈单股状态，再加酸中和，使单股回复为双股DNA，同时在急速中和反应中，染色体DNA因分子过于庞大以致于碱基匆忙配对，形成杂乱无序的巨大分子，对水的相对溶解度低而易被沉淀下来。相反，质粒DNA因分子小，两单股DNA恢复原碱基配对快而易溶于水中，所以只要经过离心，即可将染色体DNA与质体DNA分离。本实验所使用的pUC19含有β-lactamase基因，会产生peripasmic酶，进行蓝白斑筛选，抗氨苄青霉基因ampicillin (Amp)两种抗性筛选标记。碱裂解法：本实验是以alkaline lysis的方法进行，其原理是将大肠杆菌以NaOH及SDS分解，并使蛋白质及DNA变性，然后以酸中和。小分子质粒DNA在中和后可恢复原状，但大部

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